Trattament Għal Ġebel fil-Kliewi: G. Fruticosus
Mar 22, 2022
Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
PARTI Ⅰ: Evalwazzjonijiet tal-effikaċja kurattiva tal-estratti tas-solventi ta' G. fruticosus f'firien irġiel Wistar nefrolitijatiċi indotti b'mod sperimentali
Tilahun Alelign, Tesfaye Sisay Tessema, Asfaw Debella u Beyene Petros
Sfond
Urolitijażi(ġebelfl-apparat urinarju) jaffettwa madwar 12 fil-mija tal-popolazzjoni dinjija f'xi stadju f'ħajjithom [1]. Studji oħra rrappurtaw li l-prevalenza dinjija taġebel fil-kliewitvarja bejn 2 sa 20 fil-mija [2, 3]. Urolithiasis taffettwa l-etajiet, is-sess u r-razez kollha[4,5], iżda sseħħ aktar ta’ spiss fl-irġiel milli fin-nisa bejn l-età ta’ 20 sa 49 sena [6]. Il-patoġenesi ta'ġebel fil-kliewigħadu mhux mifhum kompletament [7] u t-trattament tiegħu jibqa' sfida, għalkemm hemm modalitajiet ta' trattament moderni inkluż l-ESWL[8]. Is-sekwenza ta 'avvenimenti li jikkawżawġebelformazzjoni tinkludi nukleazzjoni, tkabbir, aggregazzjoni, u żamma ta 'kristalli fil-kliewi [9, 10].
Ġebla renaliformazzjoni teħtieġ żamma persistenti tal-kristalli fil-kliewiwara t-tlestija tal-proċess tal-kristallizzazzjoni[11, 12]. L-interazzjoni tal-kristalli COM ma 'wiċċ ta' ċelluli epiteljali renali hija avveniment ta 'bidu kritiku fin-nefrolitiasi [13]. L-interazzjonijiet taċ-ċelloli tal-kristall jirriżultaw fil-moviment tal-kristalli min-naħa basolaterali taċ-ċelloli sal-membrana tal-kantina [14]. Studju fuq mudelli ta 'annimali żvela wkoll li l-amministrazzjoni ta' konċentrazzjonijiet għolja ta 'kristalli CaOx jew joni ossalat tidher li hija tossika, li tikkawża ħsara fiċ-ċelluli tubulari tal-kliewi [7]. L-espożizzjoni għal livelli ogħla ta’ kristalli ta’ ossalat jew CaOx jinduċi korriment taċ-ċelluli epiteljali, li huwa fattur predisponenti għall-epiteljali sussegwenti.ġebelformazzjoni [15, 16].
Żbilanċ bejnurinarjaġebelinibituri u promoturi ġie ssuġġerit li jkun il-kawża ta 'ġebelformazzjoni [17]. Il-promoturi jiffaċilitawġebelformazzjoni [18], iżda l-inibituri jnaqqsu l-bidu tas-supersaturation, in-nukleazzjoni, it-tkabbir tal-kristalli, u r-rata ta 'aggregazzjoni [17]. Madankollu, l-inibituri jaħdmu bl-istess mod għal kulħadd; għalhekk, xi nies jiffurmaw ġebel; filwaqt li oħrajn le [19]. Fost rikorrentiġebelformaturi, l-eskrezzjoni tal-oxalate urinarja kienet ogħla, filwaqt li l-eskrezzjoni taċ-ċitrat kienet aktar baxxa Studju indika wkoll li l-oxalate jista’ jiffaċilita r-riassorbiment tal-klorur, tas-sodju u tal-ilma fit-tubuli prossimali u jattiva mogħdijiet multipli ta’ sinjalazzjoni fiċ-ċelloli epiteljali renali [20].
Minkejja titjib konsiderevoli fit-terapija medika bħall-utilità tal-lithotripsy extracorporeal shock wave (ESWL), m'hemm l-ebda mediċina sodisfaċenti biex tikkura l-kalkoli renali [21]. It-trattament ESWL huwa assoċjat ma 'ħsara renali akuta minħabba l-effett trawmatiku tal-mewġa ta' Xokk, u infezzjonijiet wara t-trattament [22]. Jirriżulta wkoll f'inkompletiġebeltneħħija, u ma jistgħux jevitaw ġoddaġebelformazzjonijiet [23], jewġebelrikorrenzi ħafna drabi sa 60 fil-mija [24,25]. Wara l-ewwel episodju ta’ aġebel, ir-rata ta' rikorrenza hija aktar minn 50 fil-mija fi żmien 10-snin [26,27]. Għalhekk,ġebel fil-kliewirikorrenza hija riskju kbir, li huwa meqjus bħala sfida klinika mhux milħuqa fil-qasam tal-uroloġija [28].Ġebelpazjenti li jiffurmaw huma suxxettibbli għar-rikorrenzi tiegħu wara l-ewwel terapija kirurġika [29]. Anke jekk il-kompożizzjonijiet kimiċi ta’ aġebeljinfluwenzaw l-għażla ta 'intervent [30], kirurġija miftuħa tibqa' l-pedament tat-trattament [31]. Xi pjanti mediċinali studjati s'issa kontra l-urolitiasi huma indikati fit-Tabella 1
Fl-Etjopja, ħafna mill-pazjenti jiddependu fuq pjanti mediċinali tradizzjonali bħala terapija alternattiva għal diversi mard inkluż urolitiasi. Pjanti mediċinali huma affordabbli, aċċessibbli, effettivi, b'inqas effetti sekondarji, u huma kompatibbli aħjar mal-ġisem tal-bniedem [41], meta mqabbla ma 'mediċini konvenzjonali [42].Fl-istudju preżenti,G. fruticosus(L.) ġew magħżula biex jeżaminaw l-effetti tagħhom fuq urolitiasi indotta b'mod sperimentali. Sar stħarriġ bir-reqqa tal-letteratura biex jiġi aċċertat li l-ebda waħda mill-partijiet tal-pjanti mediċinali magħżula ma ġiet studjata s'issa dwar attivitajiet anti-urolitijatiċi. Sal-lum, hemm ukoll evidenza xjentifika insuffiċjenti rrappurtata dwar l-attività antihero-litjatika ta 'din l-impjant mediċinali. Għalhekk, l-għan tal-istudju kien li jevalwa l-effikaċja kurattiva tal-pjanti mediċinali fil-firien maskili nefrolitijatiċi indotti b'mod sperimentali.
Tabella 1 Pjanti mediċinali li għandhom effetti anti-urolitijatiċi fi studji preċedenti
materjali u metodi
Identifikazzjoni u ġbir ta' materjal ta' pjanti mediċinaliGomphocarpusfruticosus(G. fruticosus) weraq inġabru matul iż-żminijiet tal-fjoritura jew tal-frott tiegħu. Il-G.fruticosus(L)Ait.f, magħrufa bħala Tifriena (isem lokali), inġabret f'Bole Bulbula madwar"93 Mazoria"Addis Ababa matul Ottubru 2018.G. fruticosusL.Ait.f(Asclepiadaceae)(irrapportat minn informatur ewlieni) kien iddikjarat għat-trattament tal-urolitiasi. Il-kampjuni tal-pjanti ġew sottomessi lill-Herbarium Nazzjonali, Dipartiment tal-Bijoloġija tal-Pjanti u Ġestjoni tal-Bijodiversità, Università ta 'Addis Ababa (AAU) għall-awtentikazzjoni tassonomika (TA238), u ngħata n-numru tal-ġbir korrispondenti. Il-kampjuni ġew depożitati fil-Herbarium Nazzjonali tal-AAU għal referenzi futuri.
Preparazzjoni tal-estratt mhux raffinat
Il-materjali tal-pjanti ġew imnaddfa sewwa bl-ilma tal-vit biex jitneħħew il-kontaminanti u mnixxfa f'barrakka f'temperatura tal-kamra minn ġimgħatejn sa 3 ġimgħat fil-laboratorju tax-Xjenzi Bijomediċi, AAU. Il-partijiet tal-pjanti mnixxfa kienu trab fin bl-użu ta 'grinder tal-kċina (mehrież u lida, ta' daqs madwar 9 in.in dijametru). It-trabijiet tpoġġew permezz ta 'għarbiel ta' daqsijiet ta 'malji 3 sabiex jiffiltraw materja solida grossa.
L-estratti ġew ippreparati bl-użu ta 'proċedura simili għal dik li spiss tintuża minn healers jew pazjenti tradizzjonali, b'xi modifiki żgħar. It-trab tal-pjanti kienu mxarrba f'ilma distillat, li tqiegħed fuq shaker għal 72h. It-taħlita ġiet iffiltrata permezz tal-qoton/garża, imbagħad permezz tal-karta tal-filtru Whatman numru 1 (daqs tal-pori: 1l μm) biex jitneħħew partiċelli solidi fini tal-pjanti jew kostitwenti li ma jinħallux. L-estratti sħaħ ġew ikkonċentrati għan-nixfa permezz ta 'magna lajofilizzatur billi tneħħi l-ilma mħallat. taħt pressjoni mnaqqsa. Imbagħad, il-konċentrati semi-solidi jitferra 'fi pjanċi petri tal-ħġieġ u jitħallew jinxef kompletament f'banju ta' l-ilma aġġustat għal grad 45. L-estratti mnixxfa finali ġew miġbura u maħżuna fi fliexken sterili ttikkettjati mgħottija b'tapp issikkat u miżmuma f' il-friża fuq-20 grad sakemm jintuża fl-esperimenti.
Preparazzjonijiet ta' estrazzjonijiet suċċessivi b'solventi
Gomphocarpus fruticosusestratt omm (akweju) kien maqsum b'solventi ta 'polarità dejjem tiżdied minn solventi mhux polari għal polari li jiżguraw li firxa ta' polarità usa 'ta' komposti tista 'tiġi estratta. L-estrazzjoni suċċessiva nbdiet b'mod sekwenzjali bl-etere tal-pitrolju, segwit minn kloroform, aċetat etiliku, butanol u ilma, li fihom dawn is-solventi tneħħew u kkonċentrati taħt evaporatur b'vakwu li jdur. Il-materjali tal-pjanti maċerati f'ilma distillat ġew lajofilizzati taħt il-freeze dryer biex jinkisbu r-residwi tat-trab. L-estratti mnixxfa ġew mgħottija sewwa b'tapp u maħżuna fi fliexken tal-ħġieġ u miżmuma fi friġġ fi -20 grad Ċ sakemm jintużaw għall-esperiment.
benefiċċju cistanche deserticola: kura tal-mard tal-kliewi
Kimiċi u reaġenti/drogi standard
Il-kimiċi u r-reaġenti jew il-kits użati kienu gradi analitiċi mixtrija minn diversi sorsi. L-akkwist ta 'etere tal-pitrolju, kloroform, aċetat etiliku, butanol u etanol kienu minn Wisteam PLC (Addis Ababa, Etjopja), fosfat diidroġenu tal-potassju (anidru), fosfat tas-sodju (pur pur extra dibasiku anidru), buffer Tris-HCl (CaHuNO), u klorur tas-sodju (NaCl) inxtraw mill-Micron International Trading House PLC(Addis Ababa Ethiopia). Bl-istess mod, isoflurane, u formaldehyde inxtraw minn Neway Chemicals PLC(Addis Ababa, Ethiopia).Ethylene glycol (EG) u ammonju chloride(NH, Cl) inxtraw minn Pharma PLC (Addis Ababa, Etjopja). Tubi EDTA, tubi separaturi tas-serum, tubi kapillari, u xfafar kirurġiċi nxtraw minn Micro Pharma PLC (Addis Ababa, Etjopja). Barra minn hekk, kits għal testijiet tal-funzjoni tal-fwied u tal-kliewi nxtraw minn Roshi PLC (Londra, l-Ingilterra). Il-kits tal-assaġġ kolorimetriku tal-oxalate (aċidu ossaliku) u l-assaġġ kolorimetriku/fluorometriku taċ-ċitrat mixtrija minn kits BioVision Incorporated kienu (Milpitas, USA). It-trab taċ-ċitrat tal-potassju nkiseb mill-Isptar ta 'Riferiment tal-Iljun Iswed (Addis Ababa, l-Etjopja). Cystone (formulazzjoni polyherbal) inxtara minn Mumbi, l-Indja. Aċidu askorbiku, li nxtara minn Micron International Trading House PLC (Addis Ababa, Etjopja).
Solubilizzazzjoni tal-estratt tal-pjanti u l-mediċini standard L-estratti tat-test/drogi ta 'konċentrazzjonijiet differenti ġew maħlula bl-użu ta' vetturi xierqa, li kienu ilma distillat u 3 fil-mija Tween 80.L-estratti kollha tal-pjanti u ċ-ċitrat tal-potassju ġew maħlula f'ilma distillat f' konċentrazzjonijiet differenti. Il-proċedura użata biex jinħall Cystone kienet simili għall-metodi ta 'Pha-tak u Hendre [43] u Garimella et al. [44] b'xi modifiki. Il-pilloli Cystone kienu trab bl-użu ta 'Mehrież u Pestle (daqs: 0.23m), u maħlul (sospiż) f'ilma distillat (900ul） u 100 ul ta' 3 fil-mija Tween 80 (jiġifieri, 750 mg/ml). Imbagħad, inżammu għal 3h biex jinħall, ċentrifugati f'1000rpm għal 5 min, u ffiltrati permezz ta 'karta tal-filtru tad-daqs tal-pori ta' 0.22 mm. Is-supernatant ċar inġabar u ntuża għan-nukleazzjoni tal-ossalat tal-kalċju, u testijiet ta 'aggregazzjoni. Estratti nġabru permezz ta' tubi Falcon ( 45 ml), issikka l-arja u maħżuna fil-friġġ sal-użu sperimentali.L-estratti tat-test u d-drogi standard ġew ippreparati kuljum u ftit qabel l-amministrazzjonijiet tal-ittestjar f’doża ta’ 200 mg/kg ta’ estratti, 750mg/kg ta’ Cystone, u 2.5g/kg ta 'ċitrat tal-potassju.Il-volum tad-dożaġġ tas-sustanza tat-test kien 2ml/100g ta' piż tal-ġisem.Ilma dejonizzat kien użat biex jipprepara l-estratti/drogi kollha u dawn kienu ppreparati kuljum qabel l-amministrazzjonijiet tat-test.
Investigazzjonijiet farmakoloġiċi urolitijatiċi in vivo
Annimali fil-mira: Intużaw firien irġiel adulti b'saħħithom albini Wistar tal-istess grupp ta' età bejn 8 sa 10 ġimgħat u li jiżnu (220-280g), mixtrija mill-Istitut tas-Saħħa Pubblika Etjopjana (EPHI), u jitrabbew fil-Bijomediku. Laboratorju tal-annimali tax-Xjenzi, AAU. L-esperiment sar fil-Laboratorju tax-Xjenzi Bijomediċi tal-AAU u l-EPHI, skont linji gwida standard aċċettati internazzjonalment għall-użu tal-annimali fir-riċerka xjentifika. Qabel ma beda l-esperiment, il-firien ġew akklimatizzati għal kundizzjonijiet standard tal-laboratorju (6 firien għal kull gaġeġ tal-polypropylene) għal 7 ijiem. Inżammu taħt ambjent ikkontrollat ta 'temperatura (27±2 gradi), umdità relattiva (55±5 fil-mija), u dawl (ċikli ta' 12-il siegħa dawl/dlam). Dawn il-firien ġew mitmugħa b'gerbub regolari (dieta standard) u ppermettew ilma tax-xorb b'xejn (ad libitum) għal 28 jum.
benefiċċju cistanche deserticola: kura tal-mard tal-kliewi
Induzzjoni tal-urolitiasi
Ġebel fil-kliewiġew indotti bl-użu ta 'ethylene glycol (EG) flimkien ma' ammonju chloride (NHCl) amministrat fl-ilma tax-xorb tal-far. F'dan il-mudell ta' hyperoxaluria, 1 fil-mija (w/v) NHACl ingħata b'0.75 fil-mija (v/v)EG għall-ewwel 5 ijiem biex titħaffef il-litjażi, wara dan il-provvista tal-ilma nqalbet għal {{4 }}.75 fil-mija EG waħdu għall-25 jum li ġejjin [45-47]. L-espożizzjoni ta' dawn il-livelli ta' doża kienet tollerabbli biżżejjed fi studji fuq l-annimali [48]. Amministrazzjonijiet EG jirriżultaw f'iperossalurija, li mbagħad twassal għal depożizzjoni ta 'CaOx fil-kliewi [49]. Il-firien sperimentali assenjati bħalaġebelgruppi kurattivi kienu qed jirċievuġebeljinduċi trattament għal 28 jum.
Effetti kurattivi ta 'urolitiasi
Fit-trattament kurattiv (dissoluzzjoni), total ta' 54 firien maskili Wistar al-bino ġew maqsuma b'mod każwali f'9 gruppi li kienu jinkludu 6 individwi għal kull grupp b'piżijiet tal-ġisem li jaqblu. Fi trattament kurattiv, il-marda ġiet indotta minn qabel minn jum sa 14. Imbagħad, kull wieħed mill-estratti/drogi ingħata mill-ħalq mill-jum 15 sa 28 fl-istess ħin ma 'protokolli ta' induzzjoni tal-mard (EG) biex jiddeterminaw effetti kurattivi [50, 51] . Fl-aħħar tat-28 jum, il-firien ġew sagrifikati għal studji bijokimiċi u istopatoloġiċi. Id-disinn sperimentali ġew assenjati bħala Grupp I (kontroll normali), Grupp II (kontroll Lithia-tic), Grupp I (K-Cit), Grupp IV (Cystone), Grupp V (G. fruticosusEstratt tal-PET), Grupp VI (G.fruti-costs Chl. estratt), Grupp VI(G. fruticosusEtOAc estratt), Grupp VIII (estratt G.fruticosus BuOH), u Grupp IX (G. fruticosusaq. frazzjoni). Investigaturi oħra ntużaw ukoll ċitrat tal-potassju (2.5g/kg) bħala kontroll pożittiv [52, 53]. Il-volum tad-dożaġġ kien 2ml/100g tal-piż tal-ġisem. Il-grupp ta 'kontroll irċieva ilma distillat darba kuljum matul l-esperiment. Fl-aħħar tat-28 jum, il-firien ġew sagrifikati għal studji bijokimiċi u istopatoloġiċi.
Ġbir tal-awrina u analiżi mikroskopika
Awrina, serum, u profili istoloġiċi huma indikaturi taġebelformazzjoni kif ukoll rikorrenzi. L-abbundanza u l-morfoloġija tal-kristalli tal-kalċju ossalat iffurmati taħt in vivoġebelinduzzjonijiet ġew eżaminati bl-użu ta 'mikroskopju tad-dawl (Wagtech Thatcham Berkshire RG194QD, ir-Renju Unit, ingrandiment 40x). Il-firien tpoġġew f'gaġeġ metaboliċi separati u ġew soġġetti għal ġbir ta 'awrina ta' 24 siegħa fit-28 jum għal test kurattiv [50]. Fl-analiżi tal-kristallurja, madwar 3 ml tal-kampjuni tal-awrina friska miġbura tpoġġew f'tubu tal-ħġieġ u ċentrifugati f'3000rpm għal 10 min biex jitneħħew id-debris, u s-supernatanti ġew mormija. Dawn is-sedimenti tal-awrina ntużaw biex jiddeterminaw il-formazzjoni tal-kristall CaOx. Madwar 10 ul tas-sedimenti vortexed tpoġġew fuq slide tal-ħġieġ tal-mikroskopju (mgħottija bi coverslip), u eżaminati għall-kristalli CaOx meta wieħed iqis in-numru u d-daqs tagħhom taħt mikroskopju tad-dawl (40x). Il-kristalli ffurmati minn kimiċi fl-awrina ġew eżaminati bir-reqqa minn artifacts oħra tal-awrina. Ir-ritratti ta' osservazzjonijiet mikroskopiċi ttieħdu bl-użu ta' kamera diġitali (Sony Cyber-shot DSC-W180 10.1MP bi zoom ottiku 3x, New Jersey, USA) immuntat manwalment fuqha.
Analiżi bijokimika tal-awrina
Fl-aħħar tal-perjodi ta 'trattament rispettivi, l-annimali kienu miżmuma individwalment f'gaġeġ metaboliċi, u nġabru kampjuni tal-awrina ta' 24 siegħa (aċidifikata u mhux aċidifikata). L-awrina ġiet aċidifikata b'1ml ta' 6N HCL (aċidu idrokloriku) u maħżuna f'4 gradi għal 5 ijiem. Imbagħad, dawn ġew ċentrifugati fi 3000 rpm għal 10 min (REMI, R24), u s-supernatant ta 'l-awrina aċidifikata intuża biex jistma l-eskrezzjonijiet bħall-kontenut ta' ossalat, kalċju, manjesju u fosfat. F'kontenuti ta 'kampjuni ta' awrina mhux aċidifikata bħal ċitrat, kreatinina u aċidu uriku, u konċentrazzjonijiet totali ta 'proteini ġew analizzati bl-użu ta' kits dijanjostiċi disponibbli kummerċjalment mill-analizzatur tal-kimika klinika Awtomatizzata. Kemm il-konċentrazzjonijiet ta 'oxalate kif ukoll taċ-ċitrat ġew analizzati bl-użu ta' spettrofotometru b'ħafna biċċiet (qarrej ELISA) skont il-manwal ipprovdut mal-kits. Għall-iskop ta' kwantifikazzjoni, ġiet ippreparata kurva ta' kalibrazzjoni bl-użu ta' kits Oxalate u Citrate bħala standard.
Ġbir u analiżi tas-serum
Wara t-tmiem tal-perjodu sperimentali (jum 28), il-firien ġew anestetizzati bl-użu ta' Isoflurane u nġabru kampjuni tad-demm ta' 3 ml mill-vina retro-orbitali permezz ta' titqib kapil-lari. Is-serum ġie separat wara ċentrifugazzjoni f'3000rpm, 20 grad għal 15-il minuta. Is-serum miġbur ġie investigat għal parametri bijokimiċi bħall-krejatinina, nitroġenu urea fid-demm, aċidu uriku, urea, kalċju, manjesju, u fosfat minn Clinical Chemistry Auto-analyzer (analizzatur Cobas 6000, il-Ġermanja) bil-kits dijanjostiċi rispettivi. Il-konċentrazzjonijiet ta' oxalate u ċitrat determinati b'ħafna tajjeb bl-użu ta' 1 kienu spettrofotometru (qarrej ELISA) skont il-manwal ipprovdut mal-kits. Għall-iskop ta' kwantifikazzjoni, ġiet ippreparata kurva ta' kalibrazzjoni bl-użu ta' kits Oxalate u Citrate bħala standard.
benefiċċju cistanche deserticola: anti-infjammazzjoni
Analiżi omoġenata tal-kliewi
Fl-aħħar tal-perjodu sperimentali (jum 28), il-firien ġew sagrifikati taħt anestesija Isoflurane, segwita minn dislokazzjoni ċervikali. Imbagħad, l-addome nfetaħ u ż-żewġ kliewi nġabru minn kull far. Il-kliewi iżolati tneħħew bir-reqqa u tnaddfu (maħsula/laħlaħ) minn tessuti estranji b'soluzzjoni salina fiżjoloġika kiesħa fis-silġ (0.15 M NaCl). Il-kliewi tax-xellug minn kull annimal ġew ippreservati f'formalina newtrali buffered ta' 10 fil-mija u ntużaw għal studji istoloġiċi. Il-kliewi tal-lemin ġew imqatta 'f'żewġ nofsijiet indaqs bl-użu ta' xafra, u nofshom imnixxfa fi 80 grad f'forn ta 'arja sħuna. Il-metodu użat kien simili għal Ashok et al. [35] b'xi modifiki, li fihom piż fiss ta' 200 mg (29 fil-mija) tal-piż medju totali tal-kliewi (0.67 g) kien imsaħħan aktar separatament f'10 ml ta' aċidu idrokloriku 1N (1 fil-mija HCl), li tqiegħed f' banju ta 'l-ilma jagħli ta' 100 grad C għal 30 min. Imbagħad, ġie mqatta 'b'mod fin f'biċċiet bl-użu ta' xafra, ġġarraf bil-lida u mehrież, u omoġenizzat aktar għal 10 minuti bl-użu ta 'Ultra-Sonicator. L-omoġenat ġie ċentrifugat fi 3000 rpm għal 15-il minuta, u s-supernatant inġabar bl-użu ta 'Cryotubes ittikkettati. Fl-aħħarnett, is-supernatanti ntużaw għal stimi tal-kontenut ta 'kalċju, ossalat u fosfat b'kits bijokimiċi disponibbli kummerċjalment (BioVision PLC, USA), skont il-protokoll tal-manifattur [54,55].
Eżamijiet istopatoloġiċi
Saru eżamijiet istopatoloġiċi għat-tessuti tal-kliewi tal-firien sperimentali. Il-firien kollha ġew sagrifikati b'mod uman bl-użu tal-anestesija Isoflurane fl-aħħar tat-28 jum (studji kurattivi tal-urolitiasi). Il-biċċiet tat-tessut ittieħdu mill-kliewi u ġew analizzati għal potenzjali kurattivi urolitijatiċi ta 'estratti tal-pjanti. It-tessuti ġew iffissati b'soluzzjoni ta 'formalin newtrali buffered 10 fil-mija, u sussegwentement inkorporati fix-xama' tal-paraffin. Is-sezzjonijiet (5 μm ħoxnin) inqatgħu bl-użu ta' Rotary Microtome 4060E (Ġermanja), immuntati fuq slides tal-ħġieġ, u mtebbgħin b'Hematoxylin u Eosin biex jiġu studjati l-bidliet istopatoloġiċi[34]. L-oqsma kollha tal-morfoloġija tat-tessut ġew eżaminati taħt mikroskopju tad-dawl (ingrandiment 100x) (Wagtech Thatcham, Berkshire, RG19 4QD, ir-Renju Unit), u l-fotomikrografi nqabdu permezz ta' Kamera diġitali immuntata manwalment (Sony Cyber-shot DSC-W180 10.1MP bi Zoom ottiku 3x, New Jersey, USA) għal aktar referenzi.
Depożizzjonijiet tal-kristall tal-ossalat tal-kalċju
Fil-kliewi, id-depożizzjonijiet tal-kristall ġew determinati bl-użu ta 'assaġġi semi-kwantitattivi, li huwa metodu ta' punteġġ mikroskopiku [46,56]. Intuża l-mikrometru filar tal-mikroskopju (0.1 mm)eyepiece(10x, Wide field ta 23.3 mm, Olympus Optics OSM 212422, magħmul fil-Ġappun). Jiġifieri, id-depożiti tal-kristall fit-tessuti tal-kliewi ġew magħduda bl-użu ta 'mikroskopju tad-dawl. Il-gradi ta' severità tad-depożiti tal-kristall ġew assenjati bħala 0=<1 crystal(no="" crystal="" deposition),1="1-10,2=11-30," 3="31-50," 4="51-75" and="" 5="">75 għadd tal-kristall, billi jittieħdu l-valuri medji [46].
Fl-għadd tad-depożiti tal-kristall CaOx, sezzjoni sagittali ta 'kull kampjun renali kienet maqsuma f'erba' reġjuni ta 'daqs ugwali b'żewġ linji virtwali, u qari ta' medja ta '4 kampijiet mikroskopiċi ġew irrappurtati [57,58].Qasam ta' 100x imbagħad ġie b'mod każwali magħżula minn kull reġjun u depożiti ta 'CaOx ġew magħduda. L-immaġni ta 'wieħed mill-erba' reġjuni taħt mikroskopju tad-dawl inqabdet b'mod każwali [58] bl-użu ta 'kamera diġitali immuntata manwalment fuq il-Mikroskopju.
Analiżi statistika
Id-dejta ġiet analizzata bl-użu ta 'Graph Pad Prism verżjoni 6 Software (Graph Pad Software, San Diego, CA, USA). Analiżi one-way ta 'varjanza (ANOVA) segwita minn paraguni tat-test ta' Dunnett post-hoc saret meta meħtieġ biex jitqabbel bejn gruppi ttrattati u mhux ittrattati. Il-valuri tad-dejta ġew espressi bħala medja ± devjazzjoni standard (SD). Valuri ta' P<0.05 was="" considered="" statistically="">
benefiċċju cistanche deserticola: kura tal-mard tal-kliewi