Il-Metodi ta 'Sejbien Ta' Ċirkolazzjoni Exosomal PD-L1

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Għad hemm nuqqas ta 'metodi aċċettati u mainstream għall-iskoperta ta' PD-L1 exosomal li jiċċirkola. Metodi tradizzjonali ta 'skoperta ta' exosome bħal assay immunosorbent marbut ma 'enżimi (ELISA) u analiżi tal-fluss jistgħu jintużaw biex jinstabu PD-L1 f'eżosomi li jiċċirkolaw, u ELISA bħalissa hija l-aktar metodu użat komunement. Il-metodu ELISA jista 'jiskopri kwantitattivament il-kontenut ta' PD-L1 f'eżosomi li jiċċirkolaw u huwa faċli biex topera. Ċitometrija tal-fluss tista 'tintuża biex tiskopri b'mod kwantitattiv PD-L1 exosomal li jiċċirkola f'kampjuni kbar, iżda teħtieġ tagħmir ta' sejbien għoli. Bir-riċerka fil-fond dwar l-eżosomi, il-metodi ta 'skoperta ta' proteini exosomal u aċidi nuklejċi huma wkoll arrikkit u żviluppati, u xi metodi ġodda ġew introdotti fil-qasam ta 'skoperta PD-L1 f'eżosomi li jiċċirkolaw (Figura).

Sejbien ta'jiċċirkolaweżosomaliPD-L1

1. PCR diġitali

Minħabba l-ammont żgħir ta 'aċidu nuklejku li jinsab fl-eżosomi, huwa diffiċli għall-metodi ta' sejbien konvenzjonali li jiskopru b'mod preċiż in-numri tal-kopja tal-ġeni tagħhom. It-teknoloġija PCR diġitali hija metodu ta 'skoperta ta' aċidu nuklejku b'sensittività estremament għolja u kwantifikazzjoni assoluta. Is-sensittività tagħha tista 'tilħaq il-livell ta' molekula waħda ta 'aċidu nuklejku, għalhekk għandha vantaġġi fl-iskoperta tal-kontenut ta' aċidu nuklejku ta 'exosomes. Ir-riċerkaturi użaw teknoloġija PCR diġitali biex janalizzaw b'mod preċiż kwantitattiv in-numru tal-kopja tal-mRNA PD-L1 f'eżosomi tal-plażma ta' pazjenti b'melanoma u kanċer tal-pulmun taċ-ċelluli mhux żgħar u żvelaw ir-relazzjoni bejn in-numru tal-kopja tal-mRNA PD-L1 exosomal tal-plażma u Korrelazzjoni anti-PD1 bejn l-effetti tat-trattament. L-introduzzjoni tat-teknoloġija PCR diġitali tejbet b'mod sinifikanti l-abbiltà ta 'skoperta ta' mRNA exosomal PD-L1, li hija ta 'sinifikat kbir għar-riċerka ta' PD-L1 exosomal. Madankollu, jista 'jkun hemm inkonsistenzi bejn il-kontenut ta' mRNA exosomal PD-L1 u l-espressjoni tal-proteina PD-L1. Għalhekk, l-iskoperta ta 'mRNA exosomal PD-L1 waħdu jista' jkollha ċerti difetti, li jeħtieġu aktar riċerka u kjarifika.

Cistanche tad-deżert kontra l-kanċer tibbenefika minn estratt ta 'cistanche

2. ELISA

ELISA huwa metodu ta 'analiżi immunoloġika tradizzjonali, li ħafna drabi jintuża biex jinstabu proteini molekulari żgħar fil-plażma jew fil-medja tal-kultura. Għandu sensittività għolja u jista 'jiġi analizzat b'mod kwantitattiv. ELISA tista 'tintuża wkoll biex tiskopri proteina PD-L1 exosomal u tista' tikseb skoperta kwantitattiva ta 'lottijiet kbar ta' kampjuni. Il-kit ta 'skoperta tal-proteini PD-L1 ibbażat fuq il-prinċipju tal-metodu ELISA ġie applikat ukoll għall-iskoperta kwantitattiva tal-proteina PD-L1 exosomal tal-plażma. Chen et al. bena sistema ta 'skoperta ta' proteina PD-L1 exosomal ibbażata fuq il-prinċipju ta 'ELISA, li kienet użata għall-iskoperta ta' proteina PD-L1 exosomal derivata minn mezz ta 'kultura taċ-ċelluli jew plażma. Il-medda ta' skoperta lineari kienet {{10}}.2-12.0 ng/mL. ELISA huwa metodu tajjeb għall-iskoperta tal-proteina PD-L1 exosomal, li hija faċli biex tikxef b'mod kwantitattiv u għandha ripetibbiltà tajba. Madankollu, minħabba l-preżenza ta 'proteina PD-L1 ħielsa fil-plażma, se tinterferixxi mal-eżattezza tagħha. Għalhekk, dan il-metodu jiskopri ċ-ċirkolazzjoni. Is-sensittività u l-ispeċifiċità tal-proteina exosomal PD-L1 għad iridu jiġu esplorati aktar.

Herba cistanche għerq: kontra l-kanċer

3. Metodu ta 'analiżi tal-fluss

Iċ-ċitometrija tal-fluss ħafna drabi tintuża biex ittajpja u tgħodd ċelluli jew partiċelli bijoloġiċi oħra sospiżi f'likwidu, għalhekk dan il-metodu ġie introdott ukoll fis-sejbien u l-għadd tal-exosome. THEODORAKIS et al. l-ewwel uża l-kromatografija biex inizjalment tissepara l-eżosomi fil-plażma ta' pazjenti bil-kanċer tar-ras u l-għonq u mbagħad uża analiżi tal-fluss biex tiskopri u tgħodd l-eżosomi pożittivi tal-PD-L1-. L-espressjoni tal-proteina PD-L1 kienet espressa bħala intensità tal-fluworexxenza. Ir-riżultati juru li l-metodu għandu riproduċibbiltà tajba fl-iskoperta tal-proteina PD-L1 eżosomali, u l-varjazzjoni intra-individwali tagħha hija ta '7 fil-mija meta jsiru testijiet paralleli multipli fuq kampjun ta' pazjent wieħed. Fl-istess ħin, sabiex jivverifikaw l-eżattezza tal-metodu, ir-riċerkaturi użaw analiżi tal-fluworexxenza konfokali bħala l-metodu ta 'referenza għall-iskoperta tal-proteina exosomal PD-L1. Tliet kampjuni ġew ittestjati b'mod parallel, u r-riżultati ġew imqabbla, u nstab li r-riżultati taċ-ċitometrija tal-fluss u l-analiżi tal-fluworexxenza konfokali kienu konsistenti ħafna, li jindika li ċ-ċitometrija tal-fluss kienet metodu preċiż għall-analiżi kwantitattiva tal-PD-L1 exosomal. Barra minn hekk, LUX et al. skopra wkoll b'suċċess l-espressjoni ta 'proteini exosomal PD-L1 u c-Met fis-serum ta' pazjenti bil-kanċer tal-frixa permezz ta 'ċitometrija tal-fluss, iżda l-prestazzjoni tal-metodu ta' skoperta jeħtieġ li tiġi studjata aktar. Fil-preżent, ġew imnedija wkoll analizzaturi tal-fluss użati b'mod speċjali għall-iskoperta tal-exosome, bħall-analizzatur tan-nano-fluss ultra-sensittiv Apogee, li huwa aktar adattat għall-iskoperta tal-proteini exosome minn analizzaturi tal-fluss tradizzjonali.

Il-benefiċċju tas-suppliment ta 'l-estratt ta' cistanche tubulosa: kontra t-tumur u l-kanċer

4. Teknoloġija Raman Scattering Mtejba bil-wiċċ

It-tifrix Raman imtejjeb fil-wiċċ (SERS) huwa teknika ta 'spettroskopija tal-marki tas-swaba' sensittiva ħafna li ntużat ħafna f'oqsma bijomediċi. Fil-preżent, l-istudjużi użaw it-teknoloġija SERS biex jiskopru proteina PD-L1 exosomal. Ir-riċerkaturi l-ewwel użaw żibeġ manjetiċi modifikati TiO2- biex jassorbu exosomes b'mod mhux speċifiku fil-plażma, u mbagħad użaw sondi SERS marbuta ma 'antikorpi PD-L1 biex jimmodifikaw nanopartiċelli tad-deheb, u mbagħad inkubaw il-kampjuni ta' exosomes b'nanopartiċelli tad-deheb. Jifforma struttura kumplessa ta 'nanopartiċelli żibeġ-eżosomi-deheb manjetiku, u finalment juża kamp manjetiku biex jarrikkixxi u jissepara l-kumpless, u mbagħad poġġi fuq spettrometru Raman konfokali tal-laser għall-iskoperta, sabiex tirrealizza l-iskoperta ta' exosomes pożittivi PD-L1 . Sejbien tal-kontenut tal-ġisem. Dan il-metodu għandu sensittività għolja ta 'skoperta, u l-inqas limitu ta' sejbien tiegħu jista 'jilħaq 1 PD-L1 flimkien ma' exosome / μL plażma. Barra minn hekk, ir-riċerkaturi użaw dan il-metodu biex jikxfu grupp ta 'kampjuni b'konċentrazzjonijiet differenti. Ir-riżultati wrew li l-intensità SERS kienet relatata b'mod lineari mal-logaritmu tal-konċentrazzjoni ta 'kampjuni exosome, li jindika li l-metodu ta' skoperta għandu stabbiltà tajba u jista 'jintuża direttament fil-plażma. Issib exosomes mingħajr pass addizzjonali ta 'iżolament ta' exosomes. Fil-preżent, hemm ftit studji dwar l-applikazzjoni diretta tat-teknoloġija SERS għall-iskoperta ta 'proteina PD-L1 exosomal, iżda twettqet ir-riċerka dwar l-applikazzjoni tat-teknoloġija SERS għall-iskoperta ta' exosomes oħra, li għandha wkoll referenza importanti għall-iskoperta tal-valur tal-proteina exosomal PD-L1.

Sitwazzjoni tat-tkabbir tad-desertliving cistanche

5. Metodu HOLMES-ExoPD-L1

Il-metodu HOLMES-ExoPD-L1 huwa metodu ġdid ta 'skoperta tal-proteina exosomal PD-L1. F'dan il-metodu, ġie ddisinjat aptamer MJ5C ġdid li jimmira għall-proteina PD-L1, li jista 'jorbot b'mod effiċjenti l-proteina PD-L1 fuq il-membrana tal-exosome u ma jiġix imfixkel mill-glikosilazzjoni tal-proteina PD-L1. F'dan il-metodu, l-aptamer u l-eżosomi MJ5C ittikkettjati b'mod fluworexxenti ġew l-ewwel ko-inkubati f'kapillari rqiq biex jorbtu ma 'xulxin, u l-laser infra-aħmar kien iffukat fil-kapillari rqiq biex jifforma gradjent ta' temperatura fuq skala mikron. Ir-rati tat-termoforesi tal-aptamer MJ5C ħieles u l-kumplessi tal-aptamer MJ5C exosomal kienu differenti b'mod sinifikanti, u t-tnaqqis termoforetiku tal-aptamer ħieles kien aktar mgħaġġel minn dak tal-kumpless exosome-aptamer. separati. Għalhekk, taħt l-azzjoni tad-dawl ta 'eċitazzjoni, il-kontenut ta' proteina PD-L1 exosomal jista 'jiġi determinat billi tiġi identifikata l-intensità tal-fluworexxenza ta' aptamers ittikkettjati b'mod fluworexxenti. Il-metodu għandu sensittività għolja u limitu ta 'skoperta ta' 17.6 pg/mL. Barra minn hekk, għandu wkoll il-vantaġġi ta 'inqas volum tal-kampjun u ħin qasir ta' skoperta. Huwa metodu oriġinali ħafna għall-iskoperta ta 'proteina exosomal PD-L1, li huwa importanti ħafna għall-iżvilupp ta' ġodda Il-metodu ta 'skoperta ta' proteina exosomal PD-L1 għandu valur illuminanti.

Kontra t-tumur: suppliment ta' cistanche

Exosomal PD-L1 għandu prospetti wiesgħa ta 'applikazzjoni fil-qasam tal-immunoterapija tat-tumur malinn u sar wieħed mill-hotspots fil-qasam tar-riċerka exosomal. Meta mqabbel mal-iskoperta tal-espressjoni tat-tessut PD-L1, is-sejbien ta 'PD-L1 exosomal li jiċċirkola huwa aktar faċli biex jinkisbu kampjuni u twettaq skoperta f'ħin reali, filwaqt li tiġi evitata l-problema tal-eteroġeneità tat-tessuti kkawżata minn kampjunar patoloġiku; PD-L1 exosomal iwassal ukoll għal immunità tat-tumur. Hija kawża importanti ta 'ħarba u hija relatata mal-progressjoni ta' tumuri malinni, u tista 'ssir indikatur importanti għall-valutazzjoni tal-mard u t-tbassir tal-pronjosi. Barra minn hekk, il-livelli eżosomali PD-L1 fil-plażma huma wkoll mistennija li jintużaw biex jiġu skrinjati pazjenti adattati għall-immunoterapija anti-PD-L1 u jbassru r-rispons tagħhom għat-trattament. Madankollu, għad hemm nuqqas ta 'metodi rikonoxxuti u effettivi għall-iskoperta ta' exosomes li jiċċirkolaw PD-L1. Huwa meħtieġ li jiġi stabbilit exosome li jiċċirkola ideali b'separazzjoni sempliċi jew mingħajr separazzjoni, inqas domanda għall-kampjun, sensittività għolja, ripetibbiltà tajba, u sinjali ta 'skoperta inqas suxxettibbli. Metodu għall-iskoperta ta 'PD-L1 in vivo. Il-metodu ta 'sejbien li jiċċirkola PD-L1 exosomali għadu jeħtieġ aktar riċerka fil-fond, iżda huwa maħsub li bl-iżvilupp u l-applikazzjoni ta' metodi ġodda ta 'skoperta fil-futur, PD-L1 exosomal li jiċċirkola se jkunu jistgħu jiggwidaw aħjar l-immunoterapija anti-PD1. u jintużaw fid-dijanjosi u t-trattament ta 'tumuri malinni. għandhom rwol aktar importanti.