L-Effetti Kontra x-Xjuħija Ta' Ludwigia Octovalvis Fuq Drosophila Melanogaster U Ġrieden SAMP8 Parti 1

AstrattAħna investigajna l-effetti kontra t-tixjiħ ta 'Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Raven (Onagraceae), huwa estratt li huwa kkunsmat b'mod wiesa' bħala xarba tajba għas-saħħa f'diversi pajjiżi. Bl-użu tad-dubbiena tal-frott, Drosophila melanogaster, bħala organiżmu mudell, aħna wrejna li l-estratt ta 'L. octovalvis (LOE) estenda b'mod sinifikanti l-ħajja tat-titjir fuq dieta għolja, iżda mhux baxxa, ta' kaloriji, li jindika li LOE jista 'jirregola l-ħajja permezz ta' restrizzjoni tad-dieta ( mogħdija relatata mad-DR). LOE attenwa wkoll it-tnaqqis konjittiv relatat mal-età kemm fid-dubbien kif ukoll fil-ġurdien 8 (SAMP8) suxxettibbli għas-senescence-accelerated-prone, mingħajr ma kkawża ebda kompromess negattiv dixxernibbli, inkluż il-konsum tal-ilma, it-teħid tal-ikel, il-fekondità jew l-attività bil-mutur spontanja. LOE kien fih livelli għoljin ta 'polifenoli u flavonoids, li jippossjedu attività qawwija ta' scavenging radikali DPPH u ntwera li jnaqqas il-ħsara ossidattiva kkaġunata mill-paraquat u l-letalità fid-dubbien. L-analiżi tal-kromatografija tal-gass–spettrometrija tal-massa (GC-MS) identifikaw 17-il molekula magħrufa, li minnhom -sitosterol u squalene kienu l-aktar tnejn abbundanti. Aħna wrejna wkoll li -sitosterol jista 'jestendi l-ħajja, x'aktarx permezz tal-attivazzjoni tal-proteina kinase attivata bl-AMP (AMPK) fil-ġisem tax-xaħam tad-dubbien adulti. Id-dejta tagħna tissuġġerixxi li LOE huwa intervent qawwi kontra t-tixjiħ bil-potenzjal għat-trattament ta 'disturbi relatati mal-età.

Glycoside ta 'cistanche jista' wkoll iżid l-attività ta 'SOD fit-tessuti tal-qalb u tal-fwied, u jnaqqas b'mod sinifikanti l-kontenut ta' lipofuscin u MDA f'kull tessut, li jneħħi b'mod effettiv diversi radikali reattivi tal-ossiġnu (OH-, H₂O₂, eċċ.) u jipproteġi kontra ħsara fid-DNA kkawżata. minn OH-radikali. Cistanche phenylethanoid glycosides għandhom kapaċità qawwija ta 'scavenging ta' radikali ħielsa, kapaċità ta 'tnaqqis ogħla minn vitamina C, itejbu l-attività ta' SOD fis-sospensjoni ta 'l-isperma, inaqqsu l-kontenut ta' MDA, u għandhom ċertu effett protettiv fuq il-funzjoni tal-membrana ta 'l-isperma. Cistanche polysaccharides jistgħu jtejbu l-attività ta 'SOD u GSH-Px fl-eritroċiti u tessuti tal-pulmun ta' ġrieden senescent sperimentali kkawżati minn D-galactose, kif ukoll inaqqsu l-kontenut ta 'MDA u kollaġen fil-pulmun u fil-plażma, u jżidu l-kontenut ta' elastin, għandhom effett tajjeb għat-tħaffir fuq DPPH, itawwal iż-żmien ta 'ipoksja fil-ġrieden senescent, itejjeb l-attività ta' SOD fis-serum, u jdewwem id-deġenerazzjoni fiżjoloġika tal-pulmun fi ġrieden senescent b'mod sperimentali B'deġenerazzjoni morfoloġika ċellulari, esperimenti wrew li Cistanche għandu l-abbiltà antiossidant tajba u għandu l-potenzjal li jkun mediċina biex jipprevjeni u jikkura mard tal-ġilda li qed tixjieħ. Fl-istess ħin, echinacoside f'Cistanche għandu kapaċità sinifikanti li jneħħi r-radikali ħielsa DPPH u jista 'jneħħi speċijiet ta' ossiġnu reattiv, jipprevjeni d-degradazzjoni tal-kollaġen indotta minn radikali ħielsa, u għandu wkoll effett tajjeb ta 'tiswija fuq il-ħsara ta' l-anjoni radikali ħielsa tat-timina.

Ikklikkja fuq cistanches herba

【Għal aktar informazzjoni:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Kliem ewlieniLudwigia octovalvis. Restrizzjoni tad-dieta. It-tul tal-ħajja. AMPK

Introduzzjoni

Il-fehim tat-tixjiħ huwa sfida ewlenija ta' żmienna, minħabba x-xejriet demografiċi u l-piżijiet imbassra ta' soċjetà anzjani. Studji li jinvestigaw mard relatat mal-età bħal mard newrodeġenerattiv, kanċers, u mard kardjovaskulari diġà taw għarfien sinifikanti fis-senescenza umana. Ir-restrizzjoni tad-dieta (DR), bit-tnaqqis tal-konsum tal-kaloriji mingħajr malnutrizzjoni jew alterazzjoni fil-bilanċ tal-komponenti tad-dieta, hija magħrufa li hija l-aktar intervent effettiv biex tittawwal il-ħajja b'saħħitha madwar l-ispeċi, minn ħmira sa dubbien sa mammiferi (Lin et al. 2000; Wood et al 2004; Bonkowski et al 2006; Wu et al 2013). F'annimali gerriema, DR jista 'jżid b'mod sinifikanti l-ħajja fi ġrieden normali u ġrieden ta' ħajja qasira 8 (SAMP8) suxxettibbli għas-senescence-aċċelerata (Weindruch and Walford 1982; Choi and Kim 2000; Simons et al. 2013). Fid-dubbien, tista 'tiġi osservata wkoll estensjoni tal-ħajja impressjonanti (Zheng et al. 2005; Soh et al. 2013). Għalkemm studji fil-primati (xadina rhesus) għadhom ma ġġenerawx riżultati definittivi rigward l-effett tad-DR fuq il-mortalità, huwa ċar li DR fix-xadini jipproduċi effetti fiżjoloġiċi ta’ benefiċċju simili għal dawk osservati f’annimali gerriema u dubbien (Colman et al. 2009; Mattison et. al. 2012). Intwera li l-estensjoni tal-ħajja mid-DR x'aktarx hija medjata permezz ta' diversi mogħdijiet ġenetiċi li jinvolvu sensing ta' nutrijenti u metaboliżmu, bħall-insulina/IGF, sirtuini (Sir), SKN-1, mira ta' rapamycin, u proteina kinase attivata bl-AMP (AMPK) mogħdijiet (Lin et al. 2000; Kaeberlein et al. 2005; Bishop and Guarente 2007; Alcedo and Kenyon 2004; Stenesen et al. 2013). Jidher li Sir2/Sirt1 (Lin et al. 2004) u AMPK (Xiao et al. 2011) jistgħu jiġu attivati ​​permezz ta 'żieda fil-proporzjonijiet AMP/ATP, ADP/ATP, jew NAD/NADH, li jirriflettu stat ta' enerġija ċellulari aktar baxx. Dawn, min-naħa tagħhom, jinduċu serje ta 'avvenimenti ta' sinjalazzjoni downstream li jittrasformaw l-istat metaboliku taċ-ċelloli mill-konsum tal-enerġija għall-ħażna u l-ġenerazzjoni tal-enerġija.

Minħabba l-limiti prattiċi għall-bnedmin fil-prattika tad-DR fil-ħajja ta 'kuljum ta' kuljum, l-iżvilupp tal-mimetiċi DR ħareġ bħala qasam eċċitanti għar-riċerka kontra t-tixjiħ. Supplimenti tad-dieta li fihom komposti nutraċewtiċi jew estratti tal-pjanti jistgħu jkunu kapaċi jipprovdu interventi sikuri u effettivi biex itawlu ħajja b'saħħitha. Estratti tal-frott minn nuċiprisk u tuffieħ, kif ukoll estratti veġetali minn Rhodiola rosea u Curcuma longa, diġà ntwerew li jestendu l-ħajja fid-dubbien tal-frott, permezz tat-tnaqqis tal-ħsara ossidattiva (Boyd et al. 2011; Peng et al. 2011; Schriner et al 2009; Lee et al 2010; Schriner et al 2013). Il-komponenti ewlenin identifikati f'dawn l-impjanti li jippromwovu s-saħħa bħala kandidati probabbli għall-effetti li jestendu l-ħajja huma polifenoli, li għandhom il-potenzjal li jaġixxu bħala kenniesa tar-radikali ħielsa jew chelators tal-metall attivi redox (Galleano et al. 2010). Resveratrol, kompost polifenoliku misjub fil-biċċa l-kbira fil-ġilda ta 'għeneb aħmar, huwa l-aħjar eżempju magħruf ta' din il-klassi ta 'molekuli u ntwera li jestendi l-ħajja ta' speċi daqshekk evoluzzjonarjament imbiegħda bħal Saccharomyces cerevisiae, Caenorhabditis elegans, Drosophila melanogaster u Nothobranchius. furzeri (Howitz et al. 2003; Wood et al. 2004; Valenzano et al. 2006). Għalkemm il-proprjetajiet anti-ossidattivi tar-resveratrol intwerew, l-akkumulazzjoni ta 'evidenza tissuġġerixxi li dan il-kompost jista' jaġixxi wkoll bħala attivatur qawwi għal diversi ġeni assoċjati mal-lonġevità, inklużi Sir2 / Sirt1 imsemmija hawn fuq (Hubbard et al. 2013).

Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Raven (Onagraceae) għandha distribuzzjoni wiesgħa f'żoni tropikali ta 'ħafna pajjiżi madwar id-dinja. Għalkemm il-kompożizzjoni kimika sħiħa ta 'L. octovalvis ma ġietx deskritta bis-sħiħ, dan l-impjant għandu storja twila ta' użu bħala mediċina tal-ħxejjex għat-trattament ta 'diversi kundizzjonijiet, inklużi edema, nefrite u pressjoni baxxa. Popolazzjonijiet kbar fl-Asja jikkunsmaw L. octovalvis estratt (LOE) bħala xarba tajba għas-saħħa kuljum. Evalwazzjoni tossikoloġika fil-ġrieden issuġġeriet li t-trattament LOE kroniku jista 'jipprovdi proprjetajiet immunoregolatorji, epatoprotettivi u kardjovaskulari protettivi, mingħajr effetti sekondarji osservabbli (Kadum Yakob et al. 2012). Barra minn hekk, LOE ġie rrappurtat li għandu attivitajiet anti-batteriċi u kontra l-kanċer (Chen et al. 1989; Chang et al. 2004). F'dan l-istudju, investigajna l-effetti kontra t-tixjiħ ta 'LOE, billi nużaw kemm dubbien tal-frott kif ukoll ġrieden SAMP8 bħala organiżmi mudell. Is-sejbiet tagħna jissuġġerixxu li LOE jista 'jiżviluppa bħala intervent kontra t-tixjiħ.

Metodi

Preparazzjoni LOE

Pjanti sħaħ ta 'L. octovalvis kienu ġeneralment miġbura matul l-istaġun tas-sajf, u pjanti mnixxfa nkisbu mill-Istazzjon tat-Titjib Agrikolu lokali u Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd fit-Tajwan. Il-kontroll tal-kwalità għal L. octovalvis ġie mmonitorjat minn Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd. u kampjun ta' vawċer (Nru 034) ġie depożitat fl-erbarju ta' Hsiehyu Biotech Company Ltd. ml ta' 95 fil-mija etanol matul il-lejl f'4 gradi u mbagħad estratt darbtejn f'55 grad għal 30 min. Is-supernatant ġie ċentrifugat (fi 8,000xg għal 5 min) u ffiltrat (TOYO Nru. 1) biex jitneħħa d-debris. LOE inkiseb wara proċess ta' dekompressjoni.

Kromatografija tal-gass-spettrometrija tal-massa (GC-MS)

Analiżi GC-MS ta’ LOE saret bl-użu ta’ kromatografu tal-gass HP- 6890 u detector selettiv tal-massa HP-5973 (MSD, Agilent Technologies), mgħammar b’kolonna ta’ kromatografija tal-gass kapillari HP-5MS (12.5 m×0.2 mm ID, 0.33 μm ħxuna tal-film) (J&W Xjentifiku). Il-volum tal-injezzjoni kien 2 ul fil-modalità splitless, u t-temperatura tad-dħul kienet 290 grad. Elju kien użat bħala l-gass trasportatur (rata ta 'fluss ta' 0.6 ml/min), u t-temperatura tal-forn kienet ipprogrammata kif ġej: temperatura inizjali: 35 grad, miżjuda b'5 gradi /min sa 90 grad, imbagħad b'10 grad /min sa 200 grad , u finalment b'20 grad /min sa 290 grad , fejn inżammet għal 8 min. L-analiżi saret fil-modalità EI, b'vultaġġ ta 'jonizzazzjoni ffissat għal 70 eV. L-akkwist tal-iskannjar (m/z 45-550) ta' MSD sar bis-softwer HP Chemistation.

2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) attività ta' tneħħija radikali u kontenut totali ta' polifenoli u flavonoids

L-attività ta 'scavenging radikali DPPH ġiet imkejla bl-użu ta' metodu modifikat deskritt qabel (Brand-Williams et al. 1995). Fil-qosor, 100 ul ta' konċentrazzjonijiet differenti ta' LOE, aċidu askorbiku, resveratrol, squalene, jew - sitosterol (Sigma) ġew miżjuda ma' 200 ul ta' 100 μM DPPH fi 96-microwell plates biex jintlaħqu l-konċentrazzjonijiet finali ta' 0, 1, 5, 10, u 50 ug/ml. It-taħlita ta' reazzjoni ġiet inkubata fid-dlam f'temperatura tal-kamra għal 30 min. Tnaqqis fl-assorbiment kien imkejjel f'520 nm f'qarrej tal-mikroplate (AccuReader 965). Il-kostitwenti fenoliċi totali tal-LOE ġew determinati bir-reaġent Folin–Ciocalteu, bl-użu tal-aċidu galliku bħala standard (Slinkard u Singleton 1977). Il-kontenut kollu tal-flavonojdi tkejjel b'assaġġ kolorimetriku tal-klorur tal-aluminju, bir-rutin użat bħala standard (Shih et al. 2010).

Kultura taċ-ċelluli u Western blot analiżi

Iċ-ċelluli ta 'Drosophila Schneider (S2) tkabbru f'25 grad fil-mezz ta' Drosophila ta 'Schneider (Invitrogen), supplimentat b'10 fil-mija ta' serum bovin fetali inattivat bis-sħana (Gibco). Iċ-ċelloli ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'LOE u -sitosterol (Sigma) taħt kundizzjonijiet ta' tkabbir normali (1 × medju, bħal hawn fuq) jew taħt kundizzjonijiet DR (0.5 × medju, dilwizzjoni 1: 1 tal-medja 1 × f'salina buffered fosfat ( PBS)) għal 12-il siegħa. Livelli ta 'proteini ta' fosfor-AMPK u -tubulina (antikorpi minn Cell Signaling Technology) ġew analizzati minn Western blot kif deskritt qabel (Wang et al. 2005).

Dubbien u analiżi tal-ħajja

Canton-S (CS), w1118, is-sewwieq tal-GeneSwitch tal-ġisem tax-xaħam S106 (Bloomington Stock Center #8151), u l-istokks UASAMPK.RNAi (Bloomington Stock Center #32371) inġabru fuq ikel standard sukrożju/ħmira/qamħirrum. . Verġni S106 ġew qasmu ma 'irġiel UASAMPK.RNAi f'esperimenti ta' knockdown AMPK. Għall-analiżi tal-ħajja, dubbien li kienu ngħalaq fi żmien 48 siegħa (madwar 100 raġel u 100 mara) ġew trasferiti għal 1-l gaġġa tal-popolazzjoni u miżmuma f'inkubatur umidifikat u kkontrollat ​​bit-temperatura b'12-h mixgħula/ ċiklu tad-dawl mitfi f'25 grad (Wang et al. 2009). Ikel frisk kien ipprovdut kull jum ieħor, u n-numru u s-sess tad-dubbien mejta ġew ikkalkulati. Ikel b'ħafna kaloriji u b'kaloriji baxxi kien fih 15 jew 5 fil-mija kemm tad-destrożju kif ukoll tal-ħmira, rispettivament. Żewġ fil-mija agar u 0.23 fil-mija Tegosept (Apex) ġew miżjuda mal-ikel kollu. Konċentrazzjonijiet differenti ta 'LOE, squalene, -sitosterol, RU486 (Mifepristone, Sigma), jew kontroll tal-vettura ġew miżjuda mal-ikel deskritt f'kull esperiment.

Għalf, fekondità, u attività bil-mutur spontanja tad-dubbien

Dubbien ta’ għaxart ijiem miżmuma fuq ikel b’ħafna kaloriji li kien fih konċentrazzjonijiet differenti ta’ LOE ġew trasferiti għal kunjetti friski tal-istess ikel, biż-żieda ta’ 0.5 fil-mija FD&C nru. 1 żebgħa blu tal-ikel. Wara 24 siegħa, 10 dubbien ġew omoġenizzati f'tubu wieħed li fih il-PBS, u l-ammont ta 'żebgħa inġerita ġie determinat minn spettrofotometru għall-assorbiment taż-żebgħa f'625 nm. Il-fekondità tan-nisa kienet determinata bl-għadd ta 'kuljum ta' bajd prodott minn tliet pari ta 'tgħammir. Id-dubbien ġew mgħoddija kuljum għal kunjetti ġodda li kien fihom ikel xieraq, u n-numru ta 'bajd imqiegħed kien magħdud u rreġistrat għall-ewwel 20 jum tal-ħajja adulta. Għall-monitoraġġ tal-livelli tal-attività, kunjetti tal-ħġieġ li fihom fly maskili wieħed fuq is-sors tal-ikel xieraq tqiegħdu f'kmamar ta 'reġistrazzjoni tal-lokomoturi li għandhom ċrieki ċirkolari ta' sorsi ta 'dawl infra-aħmar; waqfiet tar-raġġi huma rreġistrati bħala attività (TriKinetics). Id-dejta ġiet irreġistrata kull 20 s fuq perjodu ta' 72-siegħa. Monitors tal-attività kienu miżmuma fl-inkubatur deskritt hawn fuq.

Memorja għal żmien qasir assoċjattiva li tinxtamm Pavlovjan tad-dubbien

Dubbien f'etajiet differenti ġew imħarrġa b'espożizzjoni għal electroshock (70 V) li kien imqabbel ma 'riħa waħda għal 60 s. Sussegwentement, id-dubbien ġew esposti għat-tieni riħa mingħajr elettroshock għal 60 s. Id-dubbien tħallew jistrieħu għal 45 s u mbagħad ġew soġġetti għal test T-maze għal 2 min, li fihom kienu meħtieġa jagħżlu bejn iż-żewġ irwejjaħ. L-irwejjaħ użati kienu methyl cyclohexanol (1:1,000 dilwizzjoni f'żejt minerali) u jew octanol (1.5:1,000 dilwizzjoni f'żejt minerali). Għall-esperimenti kollha, twettqu mill-inqas ħames sessjonijiet għal kull wieħed mill-parir riħa-electroshock. Id-dejta kollha ngħatat medja, u hija murija bħala perċentwal tal-indiċi tal-memorja għal kull grupp. L-indiċi tal-prestazzjoni ġie kkalkulat billi tnaqqas in-numru ta 'dubbien li daħlu fid-driegħ li fih ir-riħa kienet imqabbla ma' l-elettroshock min-numru li jidħol fid-driegħ oppost, fejn ir-riħa ma kinitx imqabbda ma 'l-elettroxokk, u diviż bin-numru totali ta' dubbien.

Stress ossidattiv indott mill-parakwat u determinazzjoni ta' 4-idrossi-2-nominali (HNE)

Dubbien ta’ għaxart ijiem miżmuma fuq ikel b’ħafna kaloriji li kien fih konċentrazzjonijiet differenti ta’ LOE ġew trasferiti għal kunjetti b’karta tal-filtru mxarrba f’soluzzjoni ta’ 0 jew 20 mM paraquat u 6 fil-mija destrożju. In-numru ta 'dubbien mejta kien magħdud kull 3 sa 4 sigħat. Fi 12-il siegħa, inġabru wħud mid-dubbien ittrattati bil-paraquat, u HNE tkejjel mill-OxiSelect™ HNE Adduct ELISA Kit (Cell Biolabs), wara l-protokoll ipprovdut mill-manifattur.

Annimali

Il-protokolli sperimentali kollha segwew ir-regolamenti lokali tal-etika tal-annimali. Ġrieden SAMP8 ġew imrobbija u miżmuma fis-Sistema Modulari tal-Gaġeġ tal-Annimali® (Disinn Alternattiv), u l-ikel tagħhom ġie sterilizzat permezz ta 'irradjazzjoni gamma. Il-kamra kellha ċiklu ta' 12-siegħa mixgħul/mitfi, bil-fażi mudlama tibda fit-8 pm Għall-ġrieden, LOE ġie miżjud mal-ilma tax-xorb f'konċentrazzjonijiet finali ta' 0, 50, u 100 ug/ ml. It-teħid tal-ikel, il-konsum tal-ilma, u l-bidla fil-piż tal-ġisem ġew immonitorjati regolarment.

Preparazzjoni tal-RNA, sinteżi tal-cDNA, u reazzjoni kwantitattiva tal-katina tal-polimerażi (qPCR)

L-RNA totali ġie ppreparat minn mill-inqas 30 dubbien bl-użu tal-RNeasy Mini Kit (Qiagen). L-RNA ġie ttrattat b'DNase u kkonvertit għal cDNA bl-użu ta 'oligo-d(T)15 (Invitrogen) u SuperScript III reverse transcriptase (Invitrogen) kif deskritt qabel (Chou et al. 2013). Ir-reazzjonijiet qPCR saru bl-użu ta 'StepOnePlus Real-Time PCR Systems (Applied Biosystems), SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems), u primers speċifiċi għall-ġene kienu CAAG AGCTATCTGCTCGACTTCAA u CACATTTCGA AAAACTCCATGGT għal AMPK- , u GACGAAAT CAAGGCTAGGGAGTCGTCAG u GACGAAAT CAAGGCTAGGGAGTCGTCAG u GACCTGATCAGGGAGTCGAT. Twettqet reazzjoni PCR f'żewġ stadji b'denaturazzjoni f'95 grad għal 15 s, ittemprar, u estensjoni magħquda f'60 grad għal 1 min f'total ta '40 ċiklu. Il-livell ta' espressjoni ta' mRNA ta' kull ġene fil-mira meta mqabbel ma' GAPDH ġie kkwantifikat permezz ta' tnaqqis: Cttarget - CtGAPDH=ΔCt. Differenza ta 'ċiklu wieħed ta' PCR hija ekwivalenti għal bidla doppja fil-livell ta 'espressjoni ta' mRNA. L-uniċità tal-amplicons ġiet ikkonfermata bl-użu ta 'kurvi ta' dissoċjazzjoni.

Rikonoxximent ta 'oġġett ġdid, labirint-T elevata, u testijiet fuq il-post miftuħ

Għat-test tar-rikonoxximent tal-oġġett ġdid, il-ġrieden l-ewwel ġew abitwati għal kaxxa miftuħa (50 cm × 25 cm × 50 cm) għal 10 minuti kuljum għal jumejn konsekuttivi, mingħajr ebda oġġett preżenti. Fit-tielet jum, il-ġrieden tpoġġew fil-kaxxa għal 2 min, u mbagħad ġew ippreżentati żewġ oġġetti simili lil kull ġurdien. Il-ħin imqatta' biex jesplora kull oġġett ġie rreġistrat matul il-perjodu ta' 5-min sussegwenti (definit bħala s-sessjoni ta' taħriġ). Il-ġrieden imbagħad ġew ritornati fil-gaġġa tad-dar tagħhom. Sigħat waħda, sagħtejn jew tlieta wara, l-istess annimali ġew ittestjati mill-ġdid għal 5 minuti fil-kaxxa b'oġġett familjari u ġdid (definit bħala s-sessjoni tat-test tal-memorja). L-indiċi tad-diskriminazzjoni tal-oġġett ġie kkalkolat billi naqqas il-ħin imqatta’ biex jesplora oġġett familjari mill-ħin imqatta’ biex jesplora oġġett ġdid u jiġi diviż bil-ħin totali mqatta’ biex jesploraw iż-żewġ oġġetti.

Il-labirint tat-T elevat ġie modifikat minn studji preċedenti (Cruz-Morales et al. 2008; De-Mello and Carobrez 2002; Maia et al. 2010; Santos et al. 2006; Takahashi et al. 2005). Din kienet tikkonsisti f’driegħ wieħed magħluq b’ħitan għoljin 15 ċm, perpendikolari għal żewġ dirgħajn miftuħa opposti. It-tliet dirgħajn kellhom dimensjonijiet ugwali (30 ċm × 5 ċm), u l-apparat kollu kien elevat 50 ċm 'il fuq mill-art. Fil-ġurnata tat-taħriġ, kull ġurdien tqiegħed fit-tarf distali tad-driegħ magħluq, iħares lejn l-intersezzjoni tal-armi, u tħalla jesplora d-driegħ magħluq. Il-prova ntemmet meta l-ġurdien jew daħal fid-dirgħajn miftuħa (l-erba’ saqajn kollha kienu fiż-żona tad-driegħ miftuħ) jew baqa’ fid-driegħ magħluq għal 300 s. In-numru ta 'provi meħtieġa biex jintlaħaq il-kriterju ta' evitar intuża biex tiġi vvalutata l-kapaċità ta 'tagħlim tal-ġrieden matul is-sessjonijiet ta' taħriġ. Erbgħa u għoxrin siegħa wara s-sessjonijiet ta 'taħriġ, il-ġrieden ġew esposti mill-ġdid għad-driegħ magħluq, u l-ħin li baqgħu fid-driegħ magħluq ġie rreġistrat bħala valutazzjoni taż-żamma tal-memorja.

It-test tal-post miftuħ sar f'kaxxa miftuħa (50 cm × 25 cm × 50 cm). Kull ġurdien tqiegħed fiċ-ċentru tal-qasam miftuħ u tħalla jesplora liberament l-apparat għal siegħa. Id-direzzjoni u l-veloċità tal-ivvjaġġar ta 'kull ġurdien ġew irreġistrati permezz ta' osservazzjoni awtomatizzata (Strumenti Dijanjostiċi u ta 'Riċerka).

Riżultati

L-estensjoni tal-ħajja indotta minn LOE hija assoċjata ma 'DR

Biex nittestjaw jekk LOE għandux effett kontra t-tixjiħ in vivo, l-ewwel eżaminajna l-ħajja tad-dubbien CS imrobbija fuq ikel li fih konċentrazzjonijiet differenti ta 'LOE. Id-dubbien maskili CS fuq ikel b'ħafna kaloriji kellhom ħajja medja ta '41.5 jum, u ż-żieda ta' 50, 100, u 1,000 ug/ml ta 'LOE mal-ikel tad-dubbien estendiet il-ħajja tad-dubbien maskili bi 8.9, 16.1, u 9.6 fil-mija, rispettivament (Fig. 1a u Tabella 1). Id-dubbien CS femminili fuq ikel b'ħafna kaloriji kellhom ħajja medja ta '32.2 jum biss, qasir meta mqabbla mal-kontropartijiet maskili tagħhom. Madankollu, LOE indotta estensjoni tal-ħajja saħansitra akbar fid-dubbien CS femminili, fejn 100 ug/ml ta’ LOE kellhom l-akbar effett (estensjoni ta’ 24.2 fil-mija; Fig. 1b u Tabella 1), u 100 ug/ml LOE estendiet ukoll il-ħajja kemm fl-irġiel kif ukoll dubbien femminili w1118, li jissuġġerixxu li l-ħajja estiża LOE mhix limitata għall-isfond ġenetiku CS (Fig. 1c, d u Tabella 1).

Peress li DR huwa intervent dokumentat tajjeb għall-estensjoni tal-ħajja, ridna nittestjaw jekk l-effetti tal-lonġevità tal-LOE humiex se jinbidlu minn DR. Dubbien CS maskili u femminili mkabbra fuq ikel b'kaloriji baxxi wrew żidiet fil-mija ta '17.8 u 49.4 fil-ħajja medja, rispettivament, meta mqabbla ma' dubbien CS imrobbija fuq ikel b'kaloriji għoljin (Fig. 1e, f u Tabella 1). LOE, madankollu, ma induċiex estensjoni tal-ħajja 'l fuq minn dik li diġà dehru għal dubbien ta' kontroll fuq ikel b'kaloriji baxxi (Fig. 1e, f u Tabella 1), li tissuġġerixxi relazzjoni bejn LOE u estensjoni tal-ħajja indotta mid-DR, li timplika li dawn l-interventi jistgħu jaġixxu, għall-inqas parzjalment, permezz tal-istess mogħdijiet.

Trattament kroniku LOE ma jinduċix kompromessi negattivi

Peress li l-estensjoni tal-ħajja indotta mill-LOE hija potenzjalment akkoppjata mal-mogħdija DR, aħna eżaminajna jekk LOE jistax jnaqqas il-konsum tal-ikel tad-dubbien u jirriżulta fi status bħal DR. Aħna mmonitorjajna l-konsum tal-ikel tad-dubbien bl-użu ta 'sistema standard li żżid żebgħa mal-ikel tagħhom (Wang et al. 2009). Bħala medja, id-dubbien CS femminili belgħu ħafna aktar ikel meta mqabbla ma 'rġiel imqabbla ma' l-età, iżda ma ġiet osservata l-ebda differenza fit-teħid ta 'ikel bejn il-kontroll u d-dubbien ittrattati b'LOE għal kull sess (Fig. 2a).

Minbarra t-tnaqqis tal-konsum tal-ikel, interventi li jestendu l-ħajja jistgħu jinvolvu kompromessi negattivi, bħal tnaqqis fil-fertilità u attività fiżika (Flatt et al. 2008; Wang et al. 2009; Sohal and Buchan 1981). Sibna li d-dubbien CS ittrattati b'LOE ma wrew l-ebda differenza fil-produzzjoni tal-bajd għall-ewwel 20 jum tal-ħajja adulta (Fig. 2b). Kemm id-dubbien CS ikkurati b'LOE kif ukoll dawk ta' kontroll urew ukoll ritmu ċirkadjan normali u attività bil-mutur spontanju (Fig. 2c), kif innutat qabel (Wang et al. 2009).

LOE jnaqqas id-defiċits tal-memorja relatati mal-età fid-dubbien tal-frott u l-ġrieden SAMP8

It-tnaqqis funzjonali tan-newroni huwa karatteristika komuni tal-proċess tat-tixjiħ. Aħna eżaminajna l-memorja funzjonali tad-dubbien, bl-użu ta 'test tal-memorja ta' żmien qasir assoċjattiva tax-xamm Pavlovjan. CS dubbien fuq ikel b'ħafna kaloriji wera tnaqqis konjittiv gradwali fl-ewwel 20 jum tal-ħajja adulta (Fig. 3a). Dan it-tnaqqis fil-memorja kien attenwat minn DR, b'differenza statistikament sinifikanti li dehret sa jum 20 (Fig. 3a, b). LOE naqqas ukoll it-tnaqqis fil-memorja relatat mal-età b'mod dipendenti fuq id-doża, b'dubbien fuq 100 ug / ml LOE laħqu livell ta 'plateau simili għal dak li deher għal dubbien DR (Fig. 3b).

Aħna investigajna aktar l-effett pro-konjittiv ta’ LOE fil-ġrieden SAMP8, li huma magħrufa li jiżviluppaw bidu bikri ta’ defiċits fit-tagħlim u l-memorja u wrew li huma mudell adattat għall-istudju tal-mekkaniżmi fundamentali tal-marda ta’ Alzheimer (Flood and Morley 1992, 1993). ; Chan et al 2006; Takeda 2009). Fit-testijiet ta 'rikonoxximent tal-oġġett ġdid, 3-ġrieden SAMP8 ta' xahar wrew memorja ta 'rikonoxximent sostnut sa 3 sigħat wara s-sessjoni ta' taħriġ, u qattgħu aktar ħin fuq l-oġġett ġdid meta mqabbel mal-oġġett familjari (Fig. 3c, d). Din iż-żamma tal-memorja, madankollu, ma ġietx osservata fil-ġrieden SAMP8 ta' 8-xhur (Fig. 3c, d). Iż-żieda ta 'LOE (100 ug / ml) ma' l-ilma tax-xorb għal 5 xhur (li jibdew minn 3 xhur) tejbet b'mod sinifikanti ż-żamma tal-memorja ta 'rikonoxximent ta' ġrieden SAMP8, anke fi 3 h wara s-sessjoni ta 'taħriġ (Fig. 3d). Is-supplimentazzjoni ta 'l-ilma ta' 50 ug / ml ta 'LOE kellha inqas effetti ta' benefiċċju, iżda kienet kapaċi ttejjeb iż-żamma tal-memorja sa 2 h (Fig. 3d).

Fit-testijiet tal-labirint-T elevati, il-gruppi kollha ta 'ġrieden kienu jeħtieġu numri simili ta' provi ta 'taħriġ biex jilħqu l-kriterju ta' evitar, li jissuġġerixxi li l-ġrieden kollha kellhom abbiltajiet ta 'tagħlim simili (Fig. 3e). Fit-testijiet tal-irkupru tal-memorja 24-h, ġrieden SAMP8 ta' 8-xahar biss, iżda mhux 3-xahar, urew defiċit sinifikanti fiż-żamma tal-memorja (Fig. 3f). Dan id-defiċit ta' memorja tal-biża' relatat mal-età fil-ġrieden SAMP8 jista' wkoll jiġi salvat b'supplimentazzjoni LOE ta' 5-xahar fl-ilma tax-xorb (Fig. 3f). L-effetti pro-konjittivi ta 'LOE osservati hawn fuq ma jistgħux jiġu attribwiti għal xi bidla fl-attività ġenerali tal-mutur tal-ġrieden, peress li l-ebda differenza fil-veloċità tal-ivvjaġġar jew id-distanza ma ġiet osservata fit-testijiet fuq il-post miftuħ (Fig. 3g u data mhux murija). Ġrieden SAMP8 li rċevew trattament LOE 5-xahar ma wrew l-ebda effett fuq it-teħid tal-ikel jew il-konsum tal-ilma u l-ebda bidla fil-piż tal-ġisem (Fig. 3h–j).

【Għal aktar informazzjoni:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】