Rispons Sostnut Ċitotossiku taċ-Ċelloli Mononukleari tad-Demm Periferali minn Individwi mhux imlaqqma Ammessi fl-ICU Minħabba COVID Kritiku-19 Huwa Essenzjali biex jiġi evitat Riżultat Fatali

Astratt: L-għan ewlieni ta 'dan l-istudju kien li tiddetermina l-influwenza tal-attività ċitotossika taċ-ċelloli mononukleari tad-demm periferali (PBMCs) fuq ir-riżultat ta' individwi mhux imlaqqma b'COVID kritiku-19 ammessi fl-ICU. Kampjuni tad-demm minn 23 individwu nġabru mad-dħul u mbagħad kull ġimagħtejn għal 13-il ġimgħa sal-mewt (grupp Exitus) (n=13) jew ħruġ (grupp ta 'Sopravivenza) (n=10). Aħna ma sibniex differenzi sinifikanti bejn il-gruppi f'dejta soċjodemografika, klinika jew bijokimika li jistgħu jinfluwenzaw ir-riżultat fatali. Madankollu, iċ-ċitotossiċità ċellulari diretta tal-PBMCs minn individwi tal-grupp Exitus kontra ċelluli Vero E6 infettati b'SARS-CoV-2-psewdotipizzati tnaqqset b'mod sinifikanti mad-dħul (-2.69-darbiet; p=0. 0234) u wara 4 ġimgħat fl-ICU (-5.{15}}darbiet; p=0.0290), meta mqabbla ma 'individwi li baqgħu ħajjin, u ma tjiebx waqt l-isptar. In vitro, it-trattament b'IL-15 ta' dawn iċ-ċelluli ma rrestawratx iċ-ċitotossiċità effettiva fl-ebda punt sal-eżitu fatali, u ġiet osservata espressjoni akbar ta' markaturi ta' eżawriment immuni f'NKT, CD4+, u CD 8+ Ċelloli T. Madankollu, it-trattament IL-15 ta' PBMCs minn individwi tal-grupp tas-Sopravivenza żied b'mod sinifikanti ċ-ċitotossiċità f'Ġimgħa 4 (6.18-darbiet; p=0.0303). Konsegwentement, trattamenti immunomodulatorji li jistgħu jegħlbu l-eżawriment immuni u jinduċu attività ċitotossika sostnuta u effiċjenti jistgħu jkunu essenzjali għas-sopravivenza waqt l-isptar minħabba COVID-19 kritiku.

Kliem ewlieni: SARS-CoV-2; COVID-19; rispons immuni; rispons ċitotossiku; IL-15

cistanche tubulosa-titjib tas-sistema immuni

1. Introduzzjoni

F'Diċembru 2019 instabu bosta każijiet ta' pnewmonja virali atipika relatati ma' tifqigħa f'suq tal-frott tal-baħar fil-Belt ta' Wuhan (Provinċja ta' Hubei, iċ-Ċina). mifruxa madwar id-dinja u kkawża l-pandemija tal-marda tal-koronavirus 2019 (COVID-19) [1]. Minn dakinhar 'l hawn, madwar 626 miljun każ ta' COVID-19 u 6.5 miljun mewt assoċjata ġew irrappurtati madwar id-dinja (aġġornat f'Ottubru 2022) [2]. Fatturi ta' riskju u komorbiditajiet differenti jistgħu jinfluwenzaw il-progressjoni tal-COVID-19 fost l-individwi, li affettwa t-tqabbil tad-dejta klinika bejn il-pajjiżi milquta mill-bidu tal-pandemija [3]. Madankollu, ġie ddeterminat li l-manifestazzjonijiet kliniċi tal-COVID-19 jistgħu jvarjaw minn infezzjoni mingħajr sintomi għal sindromu ta’ distress respiratorju akut (ARDS) [4]. Fost il-fatturi ta’ riskju differenti li kienu assoċjati ma’ probabbiltà ogħla li tiżviluppa forma severa ta’ COVID-19 hemm ix-xjuħija, is-sess maskili, u komorbiditajiet preċedenti bħad-dijabete, pressjoni għolja, u/jew obeżità [5,6]. COVID sever u kritiku-19 ġie assoċjat ukoll maċ-ċitopenja, l-aktar ta’ limfoċiti CD4+ T, kif ukoll ma’ eżawriment eċċessiv taċ-ċelluli naturali killer (NK) u CD8+ T, li jirriżulta fi stat immunokompromess li ma jistax ineħħi l-infezzjoni, minbarra l-iżvilupp ta 'kumplikazzjonijiet serji bħal maltempata ta' cytokine u avvenimenti trombotiċi [7]. Il-kawża ewlenija għall-iżvilupp ta’ forma severa tal-marda u l-mewt f’pazjenti b’COVID-19 ġiet ikkunsidrata bħala rispons infjammatorju eċċessiv li jista’ jippromwovi l-iżvilupp ta’ xokk u/jew iperċitokinemija b’disfunzjoni multiorganika [4]. Dan is-sindromu huwa magħruf bħala maltempata taċ-ċitokini [8], u huwa simili għall-marda hemophagocytic lymphohistiocytosis (sHLH), li tikkonsisti fi stat ta 'iperinfjammazzjoni attivata minn infezzjoni virali [9,10]. Jista' jkun relatat mal-fatt li s-SARS-CoV-2 juża r-riċettur tal-enzima 2 li jikkonvertu l-anġjotensin (ACE2) biex jinfetta ċ-ċelloli fil-mira. L-irbit ta' SARS-CoV-2 mar-riċettur ACE2, li huwa espress b'mod wiesa' minn ċelloli ta' tessuti differenti [11], iwassal għal żieda fl-angiotensin II, li jattiva l-fattur nukleari-κB (NF-κB). L-attivazzjoni ta 'dan il-fattur ta' traskrizzjoni essenzjali tistimula l-espressjoni ta 'ċitokini proinfjammatorji, chemokines, u molekuli ta' adeżjoni [12]. Minkejja dan ir-rispons infjammatorju eċċessiv, jidher li huwa ineffettiv li titnaddaf l-infezzjoni u, minħabba l-attivazzjoni taċ-ċelluli T, jista 'jispiċċa f'apoptożi [13]. Din il-maltempata taċ-ċitokini tista' tkun responsabbli għal-limfopenja [12,14] u wkoll tnaqqis fil-livelli ta' ċelluli NK u CD8+ T b'fenotip eżawrit u espressjoni akbar ta' riċetturi inibitorji bħal NKG2A fiċ-ċelloli NK u PD{{47} }} fiċ-ċelluli CD8+ T [15,16]. Barra minn hekk, l-espressjoni ta’ markaturi ta’ degranulazzjoni bħal CD107a ġeneralment titnaqqas fuq il-wiċċ ta’ dawn iċ-ċelloli [15], u dan juri l-eżistenza ta’ indeboliment fil-kapaċità li jiġu eliminati ċelloli infettati f’individwi b’COVID sever u kritiku-19 [17 ]. Minkejja r-rispons globali rapidu biex jiġu żviluppati u amministrati vaċċini effettivi, l-emerġenza ta 'varjanti ġodda li jistgħu jaħarbu mir-rispons immuni kkaġunat mill-vaċċin irriżulta fi tnaqqis rapidu fil-protezzjoni kontra mard sintomatiku [18]. Konsegwentement, huwa meħtieġ li titkompla r-riċerka għal terapiji effiċjenti kontra l-COVID-19. Diversi trattamenti ġew ittestjati biex itejbu l-istatus ta 'individwi rikoverati l-isptar minħabba mard sever u kritiku, iżda l-ebda wieħed ma ġie ppruvat li għadu speċifiku biex jelimina ċ-ċelloli infettati jew inaqqsu r-rata ta' infezzjoni [15,19]. Għalhekk, trattament ta 'appoġġ bħal terapija ta' ossiġnu u fluwidu għadu fost l-aktar strateġiji importanti applikati għall-ġestjoni ta 'dawn l-individwi [2,4,16,20]. Trattamenti mhux speċifiċi bħal kortikosterojdi kienu wkoll ta 'benefiċċju biex jikkontrollaw u jnaqqsu r-rispons infjammatorju eċċessiv [21,22]. Riċentement, diversi mediċini ġew awtorizzati mill-FDA għat-trattament ta' individwi b'COVID ħafif għal moderat-19, bħal molnupiravir, nirmatrelvir, u ritonavir, iżda biss f'każ ta' emerġenza għal dawk l-individwi b'riskju għoli għall-progress għal mard sever [23-26]. Molnupiravir juri attività antivirali ta’ spettru wiesa’ minħabba l-kapaċità tiegħu li jinduċi mutaġenesi tal-RNA bl-interferenza ma’ diversi RNA polymerases virali dipendenti fuq l-RNA (RdRp), inkluż l-RdRp użat minn SARS-CoV-2 għar-replikazzjoni u t-traskrizzjoni tiegħu. Ġenoma RNA [27]. Il-kombinazzjoni ta' nirmatrelvir u ritonavir intweriet ukoll li kapaċi twaqqaf it-tixrid tal-infezzjoni f'mudelli tal-annimali billi tinibixxi l-protease virali prinċipali 3CLpro tas-SARS-CoV-2- 2 [28]. Madankollu, dawn il-mediċini antivirali jeħtieġ li jiġu amministrati flimkien ma 'miżuri oħra bħal vaċċini sabiex tiskatta rispons immuni ċitotossiku qawwi li kapaċi jelimina ċ-ċelloli infettati. Il-biċċa l-kbira taċ-ċelloli b'attività ċitotossika, bħal CD8+ limfoċiti T u ċelluli NK u NKT, jeħtieġu l-preżenza ta' interleukin-15 (IL{-15) għall-funzjoni tagħhom u r-regolazzjoni omeostatika [29]. IL-15 jippremja ċ-ċelluli CD{8+ T għall-attivazzjoni tagħhom minn antiġeni speċifiċi u jtejjeb ukoll iċ-ċitotossiċità u l-proliferazzjoni taċ-ċelluli NK. Għalhekk, IL-15 jista' jtejjeb ir-risponsi immuni ċellulari kemm innati kif ukoll adattivi kontra ċ-ċelloli infettati [22,25]. IL-15 jipprevjeni wkoll iċ-ċelluli NK u T mill-apoptożi billi jirregola fatturi anti-apoptotiċi bħal Bcl-2 u jirregola fatturi pro-apoptotiċi bħal GSK{-3 [26], u b'hekk tiġi evitata ċ-ċitopenja. Għaldaqstant, IL-15 ġie propost bħala ċitokina immunomodulatorja ġdida fl-immunoterapija tal-kanċer u tqieset bħala aġġuvant fir-reġimi tal-vaċċin [26,30]. Provi kliniċi ta' Fażi 1 b'infużjoni umana bolus iv IL-15 (rhIL{-15) jew IL{-15 superagonist N-803 urew li din iċ-ċitokina tista' twassal għal espansjoni u/jew attivazzjoni sinifikanti ta' CD4+, CD{8+, u NK effector cells in vivo, u għalhekk, ġie applikat għall-kura tal-kanċer jew infezzjonijiet virali bħall-HIV [31–35]. Għalhekk, l-użu ta' aġenti immunomodulatorji bħal IL-15 li jistgħu jirrestawraw l-attività ċitotossika f'individwi rikoverati l-isptar minħabba COVID kritiku-19 jista' jkun utli biex jgħin biex jitneħħa l-virus mill-organiżmu. F'dan l-istudju osservazzjonali, lonġitudinali, aħna kkaratterizzajna l-evoluzzjoni tar-rispons immuni ċitotossiku kontra SARS-CoV-2 f'ċelluli mononukleari tad-demm periferali (PBMCs) iżolati minn individwi dijanjostikati b'COVID-19 li ġew ammessi għall-intensiva unità tal-kura (ICU) minħabba kumplikazzjonijiet severi, kif ukoll l-influwenza ta 'dan ir-rispons fuq ir-riżultat finali meta mqabbel ma' fatturi ta 'riskju essenzjali oħra. Aħna evalwajna wkoll il-kapaċità ta' dawn iċ-ċelloli li jirrispondu għat-trattament b'IL-15 u jtejbu r-rispons antivirali ċitotossiku tagħhom. Ir-riżultati miksuba f'dan l-istudju jistgħu jikkontribwixxu għal fehim aħjar tar-rwol tar-rispons ċitotossiku fir-riżultat fatali ta' COVID-19 u biex javvanzaw lejn l-iżvilupp ta' trattamenti immunomodulatorji effettivi li jippromwovu t-tneħħija virali.

cistanche tubulosa-titjib tas-sistema immuni

Ikklikkja hawn biex tara l-prodotti Cistanche Enhance Immunity

【Staqsi għal aktar】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2. Materjali u Metodi

2.1. Suġġetti ta' Studju

Għal dan l-istudju ġew reklutati tlieta u għoxrin individwu b'COVID-19 kritiku li ddaħħlu fl-ICU tal-Isptar Universitario Ramón y Cajal (Madrid, Spanja) minn Ottubru 2020 sa April 2021. Dan il-perjodu kopra kemm it-tieni u t-tielet mewġ pandemiku tal-COVID-19 fi Spanja (minn Ġunju sa Diċembru 2020 u minn Diċembru 2020 sa Marzu 2021, rispettivament). Il-parteċipanti ġew ingaġġati b'mod każwali meta ddaħħlu l-isptar skont il-kriterji li ġejjin: awtorizzazzjoni ta' kunsens informat bil-miktub jew orali tax-xhieda biex jipparteċipaw fl-istudju, rikoverati fl-ICU minħabba COVID kritiku-19, SARS-CoV pożittiv-2 Assaġġ RT-qPCR fi smear nażofarinġi mwettaq fid-dħul fl-isptar skont protokolli validati interni, li għandhom aktar minn 18-il sena, u mhux imlaqqma kontra SARS-CoV-2 fil-ħin tal-infezzjoni. Kampjuni tad-demm periferali u dejta klinika nġabru kull ġimgħatejn għal total ta '13-il ġimgħa, u kampjuni tad-demm ġew ipproċessati u krijopreservati sal-mument tal-analiżi. Dan il-perjodu ġie kkalkulat b'kunsiderazzjoni li t-tul tal-waqfa fl-isptar fi Spanja matul l-ewwel mewġ pandemiku kien stmat għal 35 jum bħala medja [36], għalhekk nistgħu nwettqu mill-inqas żewġ rawnds kompluti ta 'reklutaġġ u segwitu. Wara 13-il ġimgħa, il-parteċipanti ġew maqsuma f'żewġ gruppi skont ir-riżultat finali: riżultat fatali (n=13), minn issa 'l quddiem Exitus; jew ħruġ mill-isptar (n=10), minn issa 'l quddiem Sopravivenza.

2.2. Dikjarazzjoni Etika

L-individwi li pparteċipaw f'dan l-istudju ġew reklutati mill-Isptar Universitario Ramón y Cajal (Madrid, Spanja). Kollha kemm huma taw kunsens infurmat bil-miktub biex jipparteċipaw fl-istudju jew raw kunsens orali b'kunsens bil-miktub minn rappreżentant biex jevitaw li jimmaniġġjaw dokumenti kkontaminati. L-Atti attwali Spanjoli u Ewropej dwar il-Protezzjoni tad-Dejta żguraw il-kunfidenzjalità u l-anonimità tal-parteċipanti kollha. Il-Protokoll għal dan l-istudju (CEI PI 32_2020-v2) ġie ppreparat skont id-Dikjarazzjoni ta' Ħelsinki u preċedentement rivedut u approvat mill-Kumitati tal-Etika tal-Instituto de Salud Carlos III (IRB IORG0006384) u l-isptar parteċipanti.

2.3. Ċelloli

Ħames millilitri ta 'demm sħiħ inġabru f'tubi EDTA Vacutainer (Becton Dickinson, Madrid, Spanja) u immedjatament ipproċessati biex iżolati PMBCs u plażma minn Ficoll-Hypaque (Pharmacia Corporation, North Peapack, NJ, USA) ċentrifugazzjoni gradjent densità, u mbagħad kienu krijopreservat sal-analiżi. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli wara t-tidwib ġiet evalwata b'mikroskopija ottika u ċitometrija tal-fluss. Il-linja taċ-ċelluli Vero E6 (kliewi tax-xadina aħdar Afrikan) (ECACC 85020206) ġiet ġentilment ipprovduta minn Dr Antonio Alcami (CBM Severo Ochoa, Madrid, Spanja), u dawn iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​f'DMEM supplimentat b'10% FCS, 2 mM L- glutamina, u 100 unità/mL peniċillina u streptomycin (Lonza, Basel, l-Isvizzera).

benefiċċji cistanche għall-irġiel isaħħu s-sistema immuni

2.4. Assaġġ ta' Infezzjoni Psewdotipizzat SARS-CoV-2

L-attività ċitotossika kontra SARS-CoV-2 tal-PBMCs mill-parteċipanti ġiet analizzata bl-użu ta' ċelluli Vero E6 infettati minn virus pNL4-3∆env_SARS CoV-2-S b'ċiklu wieħed psewdotipizzat. ∆19(G614)_Ren. Dan il-virus jikkodifika SARS-CoV-2 spike glycoprotein b'mutazzjoni D614G fi ħdan il-ġenoma tal-HIV-1, kif ukoll il-ġene Renilla luciferase ġġenerat kif deskritt qabel [37,38]. Varjanti ta' SARS-CoV-2 li fihom il-mutazzjoni D614G fil-proteina spike (S) bdew jiċċirkolaw kmieni fil-pandemija u saru dominanti malajr f'ħafna reġjuni [39,40]. Fil-qosor, saff ta' Vero E6 kien infettat b'pNL4-3∆env_ SARS-CoV-2-S∆19(G614)_Ren (100 ng p24 Gag/bir ) għal 48 siegħa. Imbagħad iċ-ċelloli ġew maħsula u kkultivati ​​flimkien għal siegħa b'PBMCs mill-parteċipanti (proporzjon 1: 1), ittrattati qabel jew le b'IL-15 (13 ng/mL) għal 48 siegħa. Id-doża ta' IL-15 użata għal dan l-istudju ntgħażlet, b'kont meħud tad-doża deskritta qabel li tikkawża l-ogħla effett fuq il-proliferazzjoni NK (10–25 ng/mL) [41] u wkoll l-espansjoni preferenzjali tal-memorja ċitotossika Ċelloli T CD8+ (Inqas minn jew ugwali għal 5 ng/mL) [42]. L-attività ċitotossika tal-PBMCs fuq il-monosaff ta 'Vero E6 ġiet iddeterminata wara t-tneħħija tas-supernatant biċ-ċelloli f'sospensjoni u d-dissoċjazzjoni taċ-ċelloli Vero E6 mill-pjanċa b'soluzzjoni ta' tripsin-EDTA (Sigma Aldrich-Merck, Darmstadt, il-Ġermanja) u kwantifikazzjoni sussegwenti ta 'attività ta' caspase-3 fiċ-ċelluli maqlugħa permezz ta 'luminexxenza bl-użu tas-sistema ta' Analiżi Caspase-Glo 3/7 (Promega, Madison, WI, USA). Sabiex jiġi ddeterminat liema popolazzjonijiet ta 'ċelluli ċitotossiċi kienu responsabbli għal din l-attività, inġabru PBMCs mis-supernatant u mbagħad ġew analizzati permezz ta' ċitometrija tal-fluss.

2.5. Analiżi taċ-Ċitometrija tal-Fluss

Għat-tbajja tal-markaturi tal-fenotipi tal-wiċċ taċ-ċelluli, intużaw l-antikorpi konjugati li ġejjin: CD{{0}}PE, CD8-APC-H7, CD56-FITC, u CD1{{24 }}7a-PE-Cy7, mixtrija minn BD Biosciences (San Jose, CA, USA). Għat-tbajja' ta' markaturi ta' eżawriment, intużaw l-antikorpi konjugati li ġejjin: CD3-BV510, CD8-APC-H7, CD56-FITC, u PD1-BV650, mixtrija minn BD Biosciences, kif ukoll CD4-PE, mixtrija minn Immunostep SL (Salamanca, Spanja) u TIGIT-AlexaFluor700 mixtrija minn Thermo Fisher (Waltham, MA, USA). Il-kampjuni ġew akkwistati bl-użu taċ-ċitometru tal-fluss BD LSRFortessa X-20 mas-software FACS Diva v 6.0 (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, USA) u mbagħad ġew analizzati bl-użu tas-softwer FlowJo v10.0.7 (Tree Star Inc., Ashland, OR , L-ISTATI UNITI).

2.6. Sejbien ta' SARS-CoV-2 RNAemia

L-RNA totali ġie estratt minn kampjuni tal-plażma bl-użu tal-QIAamp MinElute Virus Kit (Qiagen Iberia, Madrid, Spanja) f'estrattur awtomatizzat QIAcube (Qiagen, Hilden, il-Ġermanja). L-iskoperta ta' SARS-CoV-2 RNA saret permezz ta' analiżi RT-qPCR b'miri fil-ġeni tal-envelope (E) u nukleokapsid (N), kif deskritt qabel [43], li hija parti mill-Gwida Interim tas-Saħħa Dinjija Organizzazzjoni (WHO) għall-ittestjar dijanjostiku tas-SARS-CoV- 2 [44]. Il-kampjuni tqiesu pożittivi għall-analiżi meta l-valur taċ-ċiklu ta’ kwantifikazzjoni (Cq) kien taħt il-45 ċiklu.

benefiċċji cistanche għall-irġiel isaħħu s-sistema immuni

2.7. Analiżi Statistika

L-analiżi u l-grafika statistiċi kollha saru bl-użu tas-softwer GraphPad Prism verżjoni 8.4.3 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Il-paraguni tal-grupp saru bl-użu tat-test U Mann–Whitney, it-test tal-grad iffirmat tal-pari ta' Wilcoxon, l-ANOVA f'direzzjoni waħda, u t-test tal-paraguni multipli ta' Tukey. It-test eżatt ta' Fisher intuża biex jevalwa d-differenzi fil-karatteristiċi kliniċi bejn iż-żewġ gruppi. Valuri ta' p < 0.{{10}}5 (b'żewġ denbu) tqiesu statistikament sinifikanti. Il-medja u d-devjazzjoni standard intużaw biex tiġi kkalkulata l-istatistika d ta 'Cohen bl-użu ta' kalkulatur tad-daqs tal-effett Excel [45]. Daqs tal-effett ta' 0.2, 0.5, 0.8, jew Akbar minn jew ugwali għal 1.2 kien indikazzjoni ta' daqsijiet tal-effett żgħar, medji, kbar u kbar ħafna, rispettivament [46].

3. Riżultati

3.1. Karatteristiċi tal-Parteċipanti

Dan l-istudju osservazzjonali u lonġitudinali inkluda 23 pazjent iddijanjostikati b'COVID-19 li ddaħħlu fl-ICU minħabba kumplikazzjonijiet severi. Inġabru kampjuni tad-demm kull ġimagħtejn għal total ta' 13-il ġimgħa jew sal-eżitu finali. L-ebda wieħed mill-parteċipanti f'dan l-istudju ma kien irrappurtat li kien imlaqqam kontra COVID-19 fil-ħin tal-infezzjoni u l-isptar. Il-karatteristiċi soċjodemografiċi u kliniċi ewlenin tal-parteċipanti kollha huma miġbura fil-qosor fit-Tabella 1.

Tabella 1. Dejta demografika u klinika tal-parteċipanti kollha mill-grupp Exitus u l-grupp tas-Sopravivenza li ġew reklutati għal dan l-istudju.

L-età medjana tal-grupp Exitus kienet 65.0 sena (IQR 62.0–69.0), filwaqt li l-età medjana tal-grupp tas-Sopravivenza kienet 63.{{7} } snin (IQR 59.0–68.5). Il-biċċa l-kbira tal-parteċipanti (73.9%) kienu irġiel, u 65.2% kellhom mill-inqas komorbidità waħda. Il-komorbiditajiet ewlenin kienu dislipidemija (52.2%), pressjoni għolja (39.1%), u dijabete mellitus (26.1%). Ħafna mill-pazjenti rċevew kortikojdi (82.6%), antibijotiċi (82.6%), u antikoagulanti (82.6%) bħala kura standard. Irċevew ukoll trattamenti oħra bħal tocilizumab (17.4%) u remdesivir (8.7%). L-aktar sinjali u sintomi komuni kienu pnewmonja (100%), sogħla u expectorazzjoni (87.0%), dispnea (87.0%), u deni (87.0%). Matul iż-żjara tagħhom fl-ICU, 12-il pazjent (92.3%) mill-grupp Exitus u 10 pazjenti (100%) mill-grupp tas-Sopravivenza kienu jeħtieġu ventilazzjoni mekkanika invażiva. Ma sibniex differenzi sinifikanti bejn iż-żewġ gruppi fid-dejta soċjodemografika u klinika. Aħna analizzajna wkoll id-dejta tal-bijokimika tad-demm fil-linja bażi (l-ewwel kampjun) bejn iż-żewġ gruppi, u lanqas ma sibna differenzi sinifikanti bejn il-gruppi. Informazzjoni aktar dettaljata dwar id-dejta klinika, l-isptar, u d-dejta tal-bijokimika tad-demm ta 'kull parteċipant tidher fit-Tabelli Supplimentari S1 u S2.

3.2. Tul tal-Isptar u l-ICU

It-tul medjan tal-waqfa fl-isptar kien 59.0 (IQR 36.0–100.0) jum fil-grupp Exitus u 73. 0 (IQR 44.5–90.{{20}}) jiem fil-grupp tas-Sopravivenza (Figura 1A). It-tul medjan tal-waqfa fl-ICU kien ta' 49.0 (IQR 25.5–82.0) jum fil-grupp Exitus u 44.0 (IQR 25.0–66.5) jum fil-grupp tas-Sopravivenza (Figura 1B). Ma nstabu l-ebda differenzi sinifikanti f'dawn il-parametri bejn iż-żewġ gruppi.

Figura 1. Tul taż-żjara fl-isptar u fl-ICU. It-tul tal-waqfa fl-isptar (A) u fl-ICU (B) (jiem) f'individwi b'COVID kritiku-19 li kienu maqsuma f'żewġ gruppi skont ir-riżultat finali: riżultat fatali, grupp Exitus (tikek mimlija); jew l-irkupru u l-ħruġ mill-isptar, Grupp ta 'sopravivenza (tikek vojta). Kull tikka tikkorrispondi għal individwu wieħed, u linji vertikali jirrappreżentaw il-medja ± żball standard tal-medja (SEM). Is-sinifikat statistiku bejn il-gruppi ġie kkalkulat bl-użu tat-test U Mann–Whitney.

3.3. Livelli ta' Limfoċiti tad-Demm Periferali

Individwi mill-grupp Exitus wrew limfopenja (<1000 cells/mm3 ) only at the time of hospitalization (t = 0), but at Week 2, all participants showed levels of lymphocytes above the threshold for lymphopenia (Figure 2). Lymphocyte count was 1.54 (p = 0.0318; Cohen's d = 1.00)- and 1.71 (p = 0.0030; Cohen's d = 3.17)-fold higher in patients from the Survival group in comparison with the Exitus group at baseline and after 4 weeks of hospitalization, respectively. Although both groups showed an increase in the levels of lymphocytes in peripheral blood during hospitalization, they remained on average 1.54-fold higher in individuals of the Survival group in comparison with the participants of the Exitus group for at least 10 weeks. In the Survival group, the lymphocyte counts steadily increased until Week 6 of hospitalization and then decreased until Week 10.

Figura 2. L-għadd tal-limfoċiti tad-demm periferali waqt l-isptar minħabba COVID-19 kritiku. L-għadd tal-limfoċiti (ċelluli/mm3 ) ġie determinat kull ġimgħatejn għal total ta '13-il ġimgħa jew sal-eżitu finali f'kampjuni tad-demm mill-parteċipanti tal-gruppi Exitus (tikek mimlija) u Sopravivenza (tikek vojta). Il-limitu għal-limfopenja huwa muri f'1000 ċellula/mm3 b'linja bit-tikek. Kull tikka tikkorrispondi mal-medja tad-data, u l-linji vertikali jirrappreżentaw SEM. Is-sinifikat statistiku bejn il-gruppi ġie kkalkulat bl-użu tat-test U Mann–Whitney, u fi ħdan il-gruppi, intuża t-test U Wilcoxon.

3.4. PBMCs Attività Ċitotossika kontra Ċelloli Vero E6 Infettati b'SARS-CoV Psewdotipat-2

Aħna evalwajna l-attività ċitotossika tal-PBMCs tal-pazjenti rikoverati l-isptar fil-kampjuni lonġitudinali billi kkwantifikajna l-attivazzjoni tal-caspase-3 f'monosaff ta 'ċelluli Vero E6 infettati b'SARS-CoV psewdotipat-2 wara ko-kultura għal siegħa ( proporzjon 1:1). Il-kapaċità ċitotossika tal-PBMCs iżolati minn individwi tal-grupp Exitus ma nbidlitx b'mod sinifikanti matul l-isptar, u baqgħet baxxa b'mod kostanti sal-eżitu fatali (Figura 3). Din l-attività ċitotossika ma żdiedetx b'mod sinifikanti meta dawn iċ-ċelloli ġew stimulati b'IL-15 għal 48 siegħa. Fil-grupp tas-Sopravivenza, l-attività ċitotossika tal-PBMCs żdiedet 2.69-darbiet (p=0.0234; Cohen's d=1.12) fil-kampjun bażali (t {{17} }) meta mqabbel mal-grupp Exitus, u żdied b'mod kostanti sas-sitt Ġimgħa ta' dħul fl-isptar. Din iż-żieda wriet sinifikat statistiku fit-tqabbil bejn il-gruppi f'Ġimgħa 4 (5.58-darbiet; p=0.0290; Cohen's d=1.28). Minn Ġimgħa 6 'l quddiem, l-attività ċitotossika naqset fil-grupp ta' Sopravivenza sal-ħruġ mill-isptar, li kien skont it-tħassir tal-għadd tal-limfoċiti fl-istess ġimgħa ta 'dħul fl-isptar (ara Figura 2). It-trattament b'IL-15 żdied bi 2.30-darbiet bħala medja l-attività ċitotossika ta' PBMCs ta' individwi mill-grupp ta' Sopravivenza fil-kampjuni kollha matul is-segwitu. Wara 4 ġimgħat ta' rikoverar fl-isptar, l-attività ċitotossika kkaġunata mill-IL żdiedet b'6.{35}}darbiet (p=0.0303; Cohen's d=1.05) fil-PBMCs tal- individwi mill-grupp Survival.

Figura 3. Ċitotossiċità ċellulari diretta ta 'PBMCs iżolati minn pazjenti rikoverati fl-isptar b'COVID kritiku-19. Il-kapaċità ċitotossika tal-PBMCs minn individwi tal-gruppi Exitus (tikek mimlija) u Sopravivenza (tikek vojta) ġiet imkejla billi tiġi kkwantifikata l-attività ta' caspase-3 f'monosaff ta' ċelluli Vero E6 infettati b'SARS-CoV psewdotipat-2 wara ko-kultura (1:1) għal siegħa f'kundizzjonijiet bażali (linji griżi) jew wara trattament b'IL-15 għal 48 siegħa (linji suwed). Kull tikka tikkorrispondi mal-medja tad-data, u l-linji vertikali jirrappreżentaw SEM. Is-sinifikat statistiku bejn il-gruppi ġie kkalkulat bl-użu tat-test U Mann–Whitney, u fi ħdan il-gruppi, intuża t-test U Wilcoxon.

3.5. Livelli ta 'Ċelloli NK u NKT

Il-livelli ta' ċelloli b'fenotipi ċitotossiċi ġew analizzati fil-PBMCs li ġew ko-kultivati ​​ma' ċelloli Vero E6 infettati b'SARS-CoV psewdotipat-2. Aħna ma sibniex differenzi sinifikanti bejn il-livelli ta 'ċelloli b'fenotip NK (CD3-CD{56+) bejn iż-żewġ gruppi ta' individwi, anke wara trattament b'IL-15 (Figura 4A). L-espressjoni tal-markatur tad-degranulation CD107a fuq il-wiċċ ta 'dawn iċ-ċelloli baqgħet mhux mibdula fl-individwi mill-grupp Exitus. Għalkemm din l-espressjoni żdiedet b'mod stabbli minn Ġimgħa 4 sal-ħruġ mill-isptar fil-grupp tas-Sopravivenza, din id-differenza ma kisbitx sinifikat statistiku fil-paragun mal-grupp Exitus (Figura 4B). It-trattament b'IL-15 ma mmodifikax b'mod sinifikanti l-espressjoni ta' CD107a f'dawn iċ-ċelloli. Mill-Ġimgħa 4, PBMCs minn individwi taż-żewġ gruppi wrew żieda fil-livelli ta 'ċelluli b'fenotip NKT (CD3+CD{56+) li kienet 4.17-darbiet ogħla fil-PBMCs minn l-individwi tal-grupp Exitus f'Ġimgħa 6, għalkemm din id-differenza ma kisbitx sinifikat (p=0.0571; Cohen's d=3.15) (Figura 5A). Din iż-żieda kienet kemmxejn ogħla meta ċ-ċelloli ġew ittrattati b'IL-15 fiż-żewġ gruppi, għalkemm id-dejta lanqas ma laħqet sinifikat statistiku (Figura 5A). L-espressjoni ta 'CD107a ma nbidlitx b'mod sinifikanti bejn iż-żewġ gruppi jew wara t-trattament b'IL-15 (Figura 5B).

Figura 4. Livelli ta' ċelluli NK f'PBMCs minn individwi rikoverati fl-isptar b'COVID kritiku-19. (A) Livelli totali ta 'ċelluli NK (CD3-CD{56+) u (B) espressjoni tal-markatur tad-degranulation CD107a f'dawn iċ-ċelloli ġew evalwati f'PBMCs f'kundizzjonijiet bażali (linji griżi) jew wara trattament b' IL-15 għal 48 siegħa (linji suwed) wara ko-kultura (1:1) b'ċelluli Vero E6 infettati b'SARS-CoV psewdotipat-2 għal siegħa. Kull tikka tikkorrispondi mal-medja tad-data, u l-linji vertikali jirrappreżentaw SEM. Is-sinifikat statistiku bejn il-gruppi ġie kkalkulat bl-użu tat-test U Mann–Whitney, u fi ħdan il-gruppi, intuża t-test U Wilcoxon.

Figura 5. Livelli ta' ċelloli NKT f'PBMCs minn individwi rikoverati fl-isptar b'COVID kritiku-19. Livelli totali ta' ċelluli NKT (CD3+CD{56+) (A) u l-espressjoni tal-markatur tad-degranulation CD107a f'dawn iċ-ċelloli (B) ġew evalwati f'kundizzjonijiet bażali (linji griżi) jew wara trattament b'IL{ {5}} għal 48 siegħa (linji suwed) wara ko-kultura (1:1) għal siegħa b'ċelluli Vero E6 infettati b'SARS-CoV psewdotipat-2. Kull tikka tikkorrispondi mal-medja tad-data, u l-linji vertikali jirrappreżentaw SEM. Is-sinifikat statistiku bejn il-gruppi ġie kkalkulat bl-użu tat-test U Mann–Whitney, u fi ħdan il-gruppi, intuża t-test U Wilcoxon.

3.6. Livelli ta' Ċelloli T CD8+

L-għadd ta' CD8 ġie mtejjeb 2.07-darbiet (p=0.0409; Cohen's d=0.94) fil-kampjun bażali (t=0) tal-grupp Exitus meta mqabbel mal-grupp tas-Sopravivenza, u dawn il-livelli baqgħu stabbli sal-eżitu fatali (Figura 6A). IL-15 ma pproduċiex effett ta' benefiċċju sinifikanti fuq il-livelli ta' din il-popolazzjoni taċ-ċelluli. Fil-grupp tas-Sopravivenza, iċ-ċelluli CD8+ T tnaqqsu medja ta' 1.51-darbiet meta mqabbla mal-grupp Exitus (Figura 6A). L-espressjoni ta' CD107a naqset 1.53-darbiet (p=0.0313) f'Ġimgħa 4 f'ċelluli CD8+ T mill-individwi tal-grupp Exitus, u baqgħet mhux mibdula sal-fatali riżultat. It-trattament b'IL-15 wera benefiċċju żgħir fl-espressjoni ta 'dan il-markatur ta' degranulazzjoni, iżda din id-differenza ma kinitx sinifikanti (Figura 6B). Fil-grupp ta' Sopravivenza, kien hemm ukoll tnaqqis fl-espressjoni ta' CD107a fiċ-ċelluli CD8+ T f'Ġimgħa 4, u mbagħad kien hemm żieda 'l quddiem, iżda ma nkiseb l-ebda sinifikat qabel jew wara t-trattament b'IL{{26} }} (Figura 6B).

Figura 6. Livelli ta' ċelluli CD8+ T f'PBMCs minn individwi rikoverati fl-isptar b'COVID-19 kritiku. (A) Livelli totali ta 'ċelluli CD8+ T (CD{3+CD{{8+) u (B) espressjoni tal-markatur tad-degranulazzjoni CD107a f'dawn iċ-ċelloli ġew evalwati f'PBMCs f'kundizzjonijiet bażali (griż linji) jew wara trattament b'IL-15 għal 48 siegħa (linji suwed) wara ko-kultura (1:1) b'ċelluli Vero E6 infettati b'SARS-CoV psewdotipat-2 għal siegħa. Kull tikka tikkorrispondi mal-medja tad-data, u l-linji vertikali jirrappreżentaw SEM. Is-sinifikat statistiku bejn il-gruppi ġie kkalkulat bl-użu tat-test U Mann–Whitney, u fi ħdan il-gruppi, intuża t-test U Wilcoxon.

3.7. Livelli ta' Markers ta' Eżawriment

Il-livelli ta' espressjoni tal-markaturi tal-eżawriment immuni PD-1 (Proteina tal-mewt taċ-ċelluli programmata) u TIGIT (immunoreceptor taċ-ċelluli T b'dominji Ig u ITIM) ġew analizzati permezz ta' ċitometrija tal-fluss fiċ-ċelluli CD4+ T u ċelluli ċitotossiċi minn il-parteċipanti kollha. Ġew analizzati kampjuni miksuba fiż-żmien tad-dħul fl-isptar (t=0) sas-6 Ġimgħa ta' dħul fl-isptar, minħabba n-nuqqas ta' kampjuni disponibbli wara dan iż-żmien. Ċelloli CD4+ u CD8+ T minn individwi tal-grupp Exitus wrew livelli ta' PD-1 li żdiedu b'mod sinifikanti b'1.72 (p=0.0095; d {{ ta' Cohen 11}}.87)- u 2.92-darbiet (p=0.0317; Cohen's d=2.07) wara 4 ġimgħat ta' dħul fl-isptar, rispettivament, meta mqabbla ma' individwi mill- Grupp ta 'sopravivenza (Figura 7A, B, graffs tax-xellug). Fiċ-ċelloli NKT, il-livelli ta' TIGIT żdiedu b'mod sinifikanti mill-ħin tad-dħul fl-isptar sa 6 ġimgħat ta' dħul fl-isptar f'individwi mill-grupp Exitus, u dawn il-livelli żdiedu 1.76-darbiet (p=0.0357 ;Cohen's d=0.33) wara ġimgħatejn ta' rikoverar fl-isptar, meta mqabbla mal-grupp ta' Sopravivenza (Figura 7C, graff tal-lemin).

Ma ġew osservati l-ebda differenzi sinifikanti bejn il-gruppi fil-livelli ta 'espressjoni ta' dawn il-markaturi ta 'eżawriment fiċ-ċelloli NK (Figura 7D).

Figura 7. Livelli ta' espressjoni ta' markaturi ta' eżawriment fil-PBMCs minn individwi rikoverati fl-isptar b'COVID kritiku-19. Livelli ta' espressjoni ta' PD-1 u TIGIT fiċ-ċelluli CD4+ T (A), ċelluli CD8+ T (B), ċelluli NKT (C), u ċelluli NK (D). Kull tikka tikkorrispondi mal-medja tad-data, u l-linji vertikali jirrappreżentaw SEM. Is-sinifikat statistiku bejn il-gruppi ġie kkalkulat bl-użu tat-test U Mann–Whitney, u fi ħdan il-gruppi, intużat ANOVA.

3.8. Kwantifikazzjoni ta' SARS-CoV-2 RNAemia fil-Plażma

Il-preżenza ta’ RNA minn SARS-CoV-2 ġiet analizzata fil-plażma tal-individwi kollha fil-kampjun bażali (t=0), u ma nkisbu l-ebda riżultati pożittivi fi kwalunkwe parteċipant, b’valuri Cq taħt il-limitu ta 'skoperta pożittiva ta' 45 ċiklu.

4. Diskussjoni

L-infezzjoni tas-SARS-CoV-2 tista’ tikkawża diversi preżentazzjonijiet kliniċi ta’ COVID-19 li jvarjaw minn infezzjoni mingħajr sintomi għal mard sever, kritiku, jew saħansitra fatali [4]. Għalkemm it-tilqim ġenerali tal-popolazzjoni naqqas ħafna l-forom severi tal-marda, l-emerġenza ta’ varjanti ġodda ta’ SARS-CoV-2 qed iżid in-numru ta’ individwi li jiżviluppaw COVID-19 kritiku u jeħtieġ li jiġu rikoverat l-isptar minħabba infezzjonijiet innovattivi [47,48]. Għalhekk, għadha prijorità li jiġu żviluppati strateġiji preventivi u terapewtiċi li jistgħu jevitaw l-iżvilupp ta' forom kritiċi ta' COVID-19 u riżultati fatali f'pazjenti rikoverati l-isptar. Ġie deskritt li anzjani b'komorbiditajiet jippreżentaw riskju ogħla li jiżviluppaw COVID sever u kritiku{{1{{30}}}} [49]. Fi Spanja, l-iktar tbassir indipendenti sinifikanti tal-mewt minħabba COVID-19 huma rġiel ta’ aktar minn 50 sena b’komorbiditajiet assoċjati bħal pressjoni għolja u dijabete [36]. Fl-istudju tagħna, ħafna mill-parteċipanti taż-żewġ gruppi ppreżentaw dawn il-karatteristiċi, mingħajr differenzi sinifikanti bejniethom f'dejta soċjodemografika, klinika jew bijokimika li tista 'tinfluwenza s-severità tal-marda jew ir-riżultat fatali. Fil-fatt, iż-żewġ gruppi wrew livelli miżjuda ta’ parametri bijokimiċi li ġew assoċjati ma’ riskju ogħla ta’ riżultat fqir ta’ COVID-19, bħal proteina C-reattiva (CRP) u lactate dehydrogenase (LDH) [50–56 ]. Min-naħa l-oħra, għalkemm ġie rrappurtat li individwi b'COVID-19 sever jista 'jkollhom SARS-CoV-2 RNAnemija [54], li kienet relatata ma' riskju akbar ta 'mortalità [55], ħadd mill-parteċipanti fl-istudju tagħna ma ppreżenta RNA li jista 'jinxtara fis-serum, għalhekk ma stajnax nistabbilixxu korrelazzjoni bejn viremja li tista' tinkixef u riżultat fatali. Fl-aħħarnett, COVID-19 juri tul ogħla ta' żjara fl-isptar u rata ta' mortalità meta mqabbla ma' mard infettiv ieħor li jeħtieġ dħul fl-ICU, bħal pnewmonja akkwiżita fil-komunità (CAP) jew sepsis [56], u kien stmat f'35 jiem bħala medja għal dawk l-individwi li ddaħħlu l-isptar fi Spanja matul l-ewwel mewġ pandemiku [36]. Fl-istudju tagħna, it-tul medjan tal-waqfa fl-isptar kien simili bejn iż-żewġ gruppi Exitus u Survival (59.0 u 73.0 jum, rispettivament), u 50% tal-parteċipanti kollha qagħdu aktar minn 40 jum fl-ICU. Għalhekk, fatturi differenzjali oħra għandhom jiġu kkunsidrati biex jispjegaw ir-riżultat fatali fil-grupp Exitus u l-irkupru fil-grupp tas-Sopravivenza.

Benefiċċji ta' cistanche tubulosa-ssaħħaħ is-sistema immuni

Il-limfopenja hija kkunsidrata wkoll bħala fattur ta' riskju għas-severità tal-marda li kienet relatata ma' tul itwal ta' żjara fl-isptar [57]. Fl-istudju tagħna, 73.9% tal-parteċipanti kemm tal-gruppi Exitus kif ukoll ta 'Survival wrew għadd baxx ta' limfoċiti. Madankollu, il-livell ta 'limfoċiti totali kien ogħla bħala medja fil-parteċipanti tal-grupp ta' Sopravivenza, meta mqabbel mal-grupp Exitus. Dan skont l-osservazzjoni preċedenti li dawk l-individwi li mietu minħabba l-COVID-19 jiżviluppaw limfopenija aktar severa maż-żmien meta mqabbla ma’ dawk li jgħixu [58] u li dawn il-limfoċiti normalment juru fenotip eżawrit, li jirriżulta f’ immunodefiċjenza gradwali [15,16]. Minħabba li rispons antivirali ċitotossiku effettiv huwa essenzjali għall-kontroll ta' infezzjonijiet virali, inkluż SARS-CoV-2 [17], ir-rikostituzzjoni immuni hija kruċjali għall-irkupru minn COVID-19. L-aċċelerazzjoni ta’ din ir-rikostituzzjoni immuni tiddependi ħafna fuq l-espansjoni periferali omeostatika tal-limfoċiti, li tista’ tkun strateġija tajba biex ittejjeb ir-riżultat ta’ individwi ddaħħlu l-isptar minħabba COVID sever-19 [58]. IL-15 hija ċitokina meħtieġa għall-funzjoni u l-omeostasi taċ-ċelluli CD8+ T, NK, u ċelluli NKT [29], u ġiet proposta bħala trattament immunomodulatorju ġdid għal diversi mard bħall-kanċer u infezzjoni bl-HIV [26,30,35,59]. Għalhekk, f'dan l-istudju, aħna evalwajna jekk it-trattament in vitro b'IL-15 jistax itejjeb ir-rispons ċitotossiku f'PBMCs ta' individwi rikoverati fl-isptar b'COVID sever u kritiku-19 hekk kif l-infezzjoni mxiet 'il quddiem, sabiex tiddetermina l-validità tagħha bħala kandidat biex tistimula r-rikostituzzjoni immuni matul COVID-19. Bid-doża ttestjata, osservajna żieda ġenerali fir-rispons ċitotossiku kontra ċelloli fil-mira infettati b'SARS-CoV psewdotipat-2 fil-PBMCs ta' dawk l-individwi li baqgħu ħajjin wara COVID-19 wara medja ta' 44 jum ta' dħul fl-isptar fi l-ICU. Dan ir-rispons ċitotossiku żdied b'mod effettiv 2.3-darbiet bħala medja mal-kura b'IL-15 fil-kampjuni kollha miġbura matul is-segwitu, b'Ġimgħa 6 ta' dħul fl-isptar tkun il-punt ta' svolta li minnu jgħoddu kemm il-limfoċiti. u l-attività ċitotossika bdiet tonqos sal-ħruġ mill-isptar. Minkejja li jaqsmu karatteristiċi soċjodemografiċi, kliniċi u bijokimiċi simili u kienu rikoverati l-isptar għal kważi l-istess ammont ta’ żmien (59 jum b’kollox, li minnhom 49 jum kienu fl-ICU), il-grupp ta’ individwi li ma baqgħux ħajjin minn COVID{{34} } wrew PBMCs li ma rrispondewx fil-preżenza taċ-ċelloli fil-mira infettati, anke meta ġew stimulati b'IL-15. Il-livelli totali ta 'limfoċiti kienu ogħla mil-limitu ta' limfopenja fl-individwi minn dan il-grupp mit-tieni Ġimgħa ta 'l-isptar. Madankollu, dawn il-livelli ma żdiedux b'mod sinifikanti matul iż-żmien ta' l-isptar, u ma nstab l-ebda rispons antivirali effettiv, anke fil-preżenza ta' IL-15 fid-doża ttestjata. In-nuqqas ta' rispons għal IL-15 ġie deskritt għal infezzjonijiet kroniċi oħra bħall-virus tal-immunodefiċjenza umana (HIV), il-virus tal-epatite Ċ (HCV), il-virus tal-epatite B (HBV), u l-virus T limfotropiku uman (HTLV), fejn l-eżawriment immuni jista' jaffettwa l-espressjoni tar-riċettur speċifiku ta' IL-15, CD122, fiċ-ċelluli CD{8+ T [60], li jagħmilhom ma jirrispondux għal dan l-istimolu omeostatiku. L-eżawriment immuni li huwa karatteristiku ta' COVID-19 mhux biss ġie osservat fiċ-ċelluli CD{8+ T iżda wkoll f'tipi oħra ta' ċelluli ċitotossiċi bħal ċelluli NK u NKT [15,16]. Għalhekk, in-nuqqas ta' rispons għal IL-15 fil-PBMCs mill-grupp Exitus jista' jkun relatat ma' żieda fl-eżawriment immuni li ma setgħetx tingħeleb permezz ta' kura b'IL-15 waħedha fid-doża ttestjata. Dan ġie osservat ukoll fi provi kliniċi ta' Fażi I fejn il-monoterapija b'IL-15 kienet ineffettiva minkejja l-espansjoni kbira taċ-ċelloli ċitotossiċi [31,32]. Konsegwentement, trattamenti kostimulattivi oħra jkunu meħtieġa biex jinduċu rispons effettiv f'dawn l-individwi, bħal inibituri tal-punti ta 'kontroll immunoloġiċi jew antikorpi monoklonali li jimmiraw iċ-ċelloli infettati, biex itejbu ċ-ċitotossiċità ċellulari dipendenti mill-antikorpi (ADCC).

Aħna ddeterminajna wkoll it-tipi ta 'ċelluli li kienu prinċipalment involuti fl-iżvilupp ta' dan ir-rispons ċitotossiku mtejjeb fil-grupp ta 'individwi li baqgħu ħajjin COVID-19. Intwera li l-preżenza ta’ ċelluli CD8+ T funzjonali hija essenzjali biex tipproteġi mudelli ta’ annimali mill-iżvilupp ta’ COVID-19 sever [61,62]. Barra minn hekk, in-nuqqas ta’ rispons ċitotossiku effettiv medjat minn CD8-inħatar bħala fattur essenzjali għaż-żieda fis-suxxettibilità tal-anzjani biex jiżviluppaw COVID sever jew kritiku-19 [63]. B'mod sorprendenti, il-livelli taċ-ċelluli CD8+ T kienu 2.07-darbiet (p=0.0409) ogħla fil-grupp Exitus fil-ħin tal-isptar (t=0) , u baqgħu msaħħa sal-eżitu fatali, meta mqabbla mal-grupp tas-Sopravivenza. Għalkemm l-individwi mill-grupp Exitus wrew għadd ta 'limfoċiti ftit 'il fuq mil-limitu ta' limfopenja, dawn il-livelli baqgħu kważi l-istess matul iż-żmien li ddaħħlu l-isptar. Barra minn hekk, ġie deskritt li l-limfopenja tista' twassal għal mudell ta' soppressjoni u attivazzjoni koeżistenti li fihom hemm telf periferali ta' ċelluli T fl-istess ħin mal-proliferazzjoni intensa tal-grupp taċ-ċelluli CD8+ T [64,65]. Dan għandu jgħodd għal-livelli kemmxejn miżjuda ta' ċelluli CD8+ T osservati fil-PBMCs tal-parteċipanti mill-grupp Exitus minn Ġimgħa 6 ta' dħul fl-isptar 'il quddiem, minkejja li l-livelli totali ta' limfoċiti jibqgħu mhux mibdula u 'l fuq mil-limitu ta' limfopenja, jindika wkoll tnaqqis potenzjali taċ-ċelluli CD4+ T. Madankollu, dawn iċ-ċelluli CD8+ T urew attività ċitotossika baxxa, kif ġie determinat mill-espressjoni baxxa tal-markatur tad-degranulazzjoni CD107a fuq il-wiċċ taċ-ċellula, filwaqt li l-espressjoni ta’ dan il-markatur żdiedet fiċ-ċelluli CD8+ T minn il-parteċipanti tal-grupp tas-Sopravivenza minn Ġimgħa 4 'il quddiem. L-espressjoni ta’ CD107a hija meqjusa bħala bijomarkatur biex tevalwa l-kapaċità ċitotossika [66], u ġiet deskritta li titnaqqas fil-wiċċ taċ-ċelloli iżolati minn individwi b’COVID-19, meta mqabbla ma’ donaturi b’saħħithom u mhux infettati [15 ].

Għalhekk, l-espressjoni miżjuda ta 'CD107a fuq il-wiċċ taċ-ċelluli CD8+ T tista' tal-inqas tispjega parzjalment il-kontribut ta 'dawn iċ-ċelloli għall-attività ċitotossika msaħħa osservata fil-PBMCs tal-parteċipanti mill-grupp tas-Sopravivenza. Barra minn hekk, osservajna żieda fl-espressjoni tal-markatur tal-eżawriment PD-1 kemm fiċ-ċelluli T CD4+ kif ukoll CD8+ minn individwi tal-grupp Exitus, li jistgħu wkoll jikkontribwixxu għat-tnaqqis ċitotossiku. attività u rispons għal IL-15 ta' dawn iċ-ċelloli. Popolazzjonijiet oħra taċ-ċelluli jistgħu jkunu involuti fl-attività ċitotossika kontra ċ-ċelloli infettati b'SARS-CoV-2-psewdotipizzati, bħal ċelloli NK u NKT. Kif jiġri b'infezzjonijiet akuti severi oħra, iċ-ċelluli NK jistgħu jiġu reklutati fis-sit tal-infezzjoni bis-SARS-CoV-2 [67], li jispjega n-numri mnaqqsa ta 'ċelluli NK li jiċċirkolaw li kienu osservati fil-parteċipanti kollha. Barra minn hekk, il-maltempata taċ-ċitokini li tiġi żviluppata waqt COVID sever u kritiku-19 tista’ tirriżulta fi stat disfunzjonali taċ-ċelloli NK li jesprimi livelli għoljin ta’ riċetturi ta’ checkpoint inibitorji bħal NKG2A jew PD-1 [68]. Fl-istudju tagħna, il-livelli ta 'ċelluli NK kienu simili bejn iż-żewġ gruppi sa Ġimgħa 6, li fiha l-parteċipanti tal-grupp ta' Sopravivenza wrew żieda progressiva sal-ħruġ mill-isptar. Dan ikkorrelata ma' espressjoni akbar ta 'CD107a, li ġiet assoċjata fiċ-ċelloli NK ma' sekrezzjoni msaħħa ta 'ċitokini u liżi mtejba taċ-ċelloli fil-mira [7,69], għalkemm il-perċentwal ta' ċelloli NK li jesprimu markaturi ta 'attivazzjoni bħal CD107a ġie deskritt li huwa inqas f'individwi b'COVID-19 meta mqabbla ma' kontrolli b'saħħithom [70]. Bil-maqlub, għalkemm il-livelli taċ-ċelluli NKT ġew imtejba ħafna fil-grupp tas-Sopravivenza minn Ġimgħa 6 'il quddiem, l-espressjoni ta' CD107a baqgħet kważi l-istess, filwaqt li wrew livelli mtejba tal-markatur tal-eżawriment TIGIT fuq il-wiċċ taċ-ċelluli li żdiedu b'mod kostanti sa Ġimgħa 6 ta 'l-isptar. . Waħda mill-aktar limitazzjonijiet importanti tal-istudju tagħna kienet id-daqs imnaqqas tal-kampjun. Madankollu, inkiseb sinifikat statistiku bejn il-gruppi f'diversi parametri essenzjali li wrew ukoll kobor tal-effett kbir jew kbir ħafna meta ġew ikkalkulati d-differenzi miġbura bejn il-gruppi.

cistanche tubulosa-titjib tas-sistema immuni

5. Konklużjonijiet

Bħala konklużjoni, l-aktar kontribut importanti ta’ dan l-istudju għall-ġlieda kontra l-immunopatoloġija kkawżata minn infezzjoni SARS-CoV-2 hija l-konferma li l-kapaċità antivirali indebolita tal-PBMCs dehret li kienet fattur kritiku fil-progressjoni għal COVID{{ fatali. {2}}, anke fuq fatturi soċjodemografiċi, kliniċi u bijokimiċi oħra. Għalhekk, l-użu ta' trattamenti immunomodulatorji li jistgħu jtejbu ċ-ċitotossiċità jista' jikkontribwixxi għal riżultat pożittiv waqt l-isptar minħabba COVID-19 kritiku. Iż-żieda fl-attività ċitotossika medjata minn IL-15 f'individwi mill-grupp ta' Sopravivenza x'aktarx ma tiddependix fuq livelli miżjuda ta' ċelluli ċitotossiċi iżda fuq l-immunokompetenza ta' dawn iċ-ċelloli biex jirrispondu għal stimulu bħal dan. Għalhekk, il-monitoraġġ tal-espressjoni tal-markaturi tal-eżawriment u r-rispons għal stimuli omeostatiċi bħal IL-15 ta’ dawn il-popolazzjonijiet taċ-ċelluli f’individwi rikoverati fl-isptar jistgħu jkunu utli bħala markatur ta’ tbassir ta’ riżultat fatali sabiex jinbdew miżuri addizzjonali biex jipprevjenu dan. Konsegwentement, dan l-istudju ta’ osservazzjoni huwa prova ta’ kunċett li l-użu ta’ IL-15 f’individwi rikoverati bil-COVID-19 jista’ jtejjeb ir-rispons immuni antivirali, għalkemm dan l-istimolu waħdu ma jkunx effettiv f’dawk l-individwi li ma jirrispondux. ċelluli minħabba eżawriment immuni jew mogħdija ta' sinjalazzjoni IL-15R indebolita, li hija essenzjali fil-prevenzjoni tal-eżawriment [71], anke meta juru għadd ta' limfoċiti 'l fuq mil-limitu ta' limfopenja. Aktar studji b'popolazzjoni akbar huma meħtieġa biex jevalwaw kombinazzjonijiet ta' dożi dejjem jiżdiedu ta' IL-15 ma' aġenti immunomodulatorji oħra bħal inibituri tal-punti ta' kontroll immuni jew antikorpi monoklonali li jimmiraw lejn iċ-ċelloli infettati biex jgħinu biex jirrestawraw u jtejbu r-rispons antivirali waqt forom kritiċi ta' COVID -19.

Referenzi

1. Atzrodt, CL; Maknojia, I.; McCarthy, RDP; Oldfield, TM; Po, J.; Ta, KTL; Stepp, HE; Clements, TP Gwida għall-COVID-19: Pandemija globali kkawżata mill-koronavirus ġdid SARS-CoV-2. FEBS J. 2020, 287, 3633–3650. [CrossRef] [PubMed]

2. Dashboard tal-Koronavirus tal-WHO (COVID-19). Disponibbli onlajn: https://covid19.who.int/ (aċċessat fit-18 ta’ Ottubru 2022).

3. Capalbo, C.; Aceti, A.; Simmaco, M.; Bonfini, R.; Rocco, M.; Ricci, A.; Napoli, C.; Rocco, M.; Alfonsi, V.; Teggi, A.; et al. Il-fażi esponenzjali tal-pandemija tal-COVID-19 fl-Italja ċentrali: Mogħdija ta' kura integrata. Int. J. Environ. Res. 2020, 17, 3792. [CrossRef] [PubMed]

4. Huang, C.; Wang, Y.; Li, X.; Ren, L.; Zhao, J.; Hu, Y.; Zhang, L.; Fan, G.; Xu, J.; Gu, X.; et al. Karatteristiċi kliniċi ta 'pazjenti infettati bil-koronavirus ġdid tal-2019 fi Wuhan, iċ-Ċina. Lancet 2020, 395, 497–506. [CrossRef] [PubMed]

5. Haybar, H.; Kazemnia, K.; Rahim, F. Mard kroniku sottostanti u infezzjoni mill-COVID-19: Reviżjoni mill-aktar avvanzata. Jundishapur J. Dis kronika. Care 2020, 9, e103452. [CrossRef] 6. Hamed, SM; Elkhatib, WF; Khairalla, AS; Noreddin, AM Id-dinamika globali tal-kladi tas-SARS-CoV-2 u r-relazzjoni tagħhom mal-epidemjoloġija tal-COVID-19. Sci. Rep 2021, 11, 8435. [CrossRef]

7. Erdinc, B.; Sahni, S.; Gotlieb, V. Manifestazzjonijiet ematoloġiċi u kumplikazzjonijiet tal-COVID-19. Adv. Clin. Exp. Med. 2021, 30, 101–107. [CrossRef]

8. Hu, B.; Huang, S.; Yin, L. Il-maltemp taċ-ċitokini u l-COVID-19. J. Med. Virol. 2021, 93, 250–256. [CrossRef]

9. Ramos-Casals, M.; Brito-Zerón, P.; López-Guillermo, A.; Khamashta, MA; Bosch, X. Sindromu emofagoċitiku tal-adulti. Lancet 2014, 383, 1503–1516. [CrossRef]

10. Mehta, P.; McAuley, DF; Kannella, M.; Sanchez, E.; Tattersall, RS; Manson, JJ; f'isem il-HLH Across Specialty Collaboration, ir-Renju Unit. Madwar l-Ispeċjalità. COVID-19: Ikkunsidra sindromi tal-maltemp taċ-ċitokini u immunosoppressjoni. Lancet 2020, 395, 1033–1034. [CrossRef]

11. Li, M.-Y.; Li, L.; Zhang, Y.; Wang, X.-S. Espressjoni tal-ġene tar-riċettur taċ-ċelluli SARS-CoV-2 ACE2 f'varjetà wiesgħa ta' tessuti umani. Infetta. Dis. Faqar 2020, 9, 45. [CrossRef]

12. Jiang, Y.; Rubin, L.; Peng, T.; Liu, L.; Xing, X.; Lazarovici, P.; Zheng, W. Storm Cytokine fil-COVID-19: Minn infezzjoni virali għal risponsi immuni, dijanjosi u terapija. Int. J. Biol. Sci. 2022, 18, 459–472. [CrossRef] [PubMed]

13. Zhan, Y.; Carrington, EM; Zhang, Y.; Heinzel, S.; Lew, AM Ħajja u mewt ta 'ċelluli T attivati: Kif huma differenti minn ċelluli T naïve? Quddiem. Immunol. 2017, 8, 1809. [CrossRef] [PubMed]

14. Huang, I.; Pranata, R. Limfopenja fil-marda severa tal-koronavirus-2019 (COVID-19): Reviżjoni sistematika u meta-analiżi. J. Kura Intensiva 2020, 8, 36. [CrossRef] [PubMed]

15. Zheng, M.; Gao, Y.; Wang, G.; Kanzunetta, G.; Liu, S.; Sun, D.; Xu, Y.; Tian, ​​Z. Eżawriment funzjonali ta' limfoċiti antivirali f'pazjenti COVID-19. Ċellula. Mol. Immunol. 2020, 17, 533–535. [CrossRef]

16. Rha, M.-S.; Jeong, HW; Ko, J.-H.; Choi, SJ; Seo, I.-H.; Lee, JS; Sa, M.; Kim, AR; Joo, E.-J.; Ahn, JY; et al. Ċelloli T PD-1-li jesprimu SARS-CoV-2-CD8+ speċifiċi mhumiex eżawriti, iżda jiffunzjonaw f'pazjenti b'COVID-19. Immunità 2021, 54, 44–52. [CrossRef]

17. Vigón, L.; Fuertes, D.; García-Pérez, J.; Torres, M.; Rodríguez-Mora, S.; Mateos, E.; Corona, M.; Saez-Marín, AJ; Malo, R.; Navarro, C.; et al. Rispons Ċitotossiku Indebolit f'PBMCs minn Pazjenti b'COVID-19 Ammessi fl-ICU: Bijomarkaturi biex Tbassar is-Severità tal-Mard. Quddiem. Immunol. 2021, 12, 665329. [CrossRef]

18. MIN. Dikjarazzjoni Interim dwar Konsiderazzjonijiet ta' Teħid ta' Deċiżjonijiet għall-Użu ta' Vaċċini COVID-19 Aġġornati Varjanti. Disponibbli onlajn: https://www.who.int/news/item/17-06-2022-interim-statement-on-decision-making-considerations-for-the-use-of variant-updated-covid{{15} }vaċċini (aċċessat fil-15 ta’ Awwissu 2022).

19. Mishra, SK; Tripathi, T. Aġġornament ta' sena dwar il-pandemija tal-COVID-19: Fejn ninsabu? Acta Trop. 2021, 214, 105778. [CrossRef] 20. Li, X.; Geng, M.; Peng, Y.; Meng, L.; Lu, S. Patoġenesi immuni molekulari u dijanjosi ta 'COVID-19. J. Pharm. Anal. 2020, 10, 102–108. [CrossRef]

21. Grupp TRC. Dexamethasone f'pazjenti rikoverati l-isptar b'COVID-19. N. Engl. J. Med. 2021, 384, 693–704. [CrossRef]

22. Zhou, X.; Yu, J.; Cheng, X.; Zhao, B.; Manyam, GC; Zhang, L.; Schluns, K.; Li, P.; Wang, J.; Ħad, S.-C. Id-deubiquitinase Otub1 tikkontrolla l-attivazzjoni taċ-ċelluli CD8+ T u ċ-ċelloli NK billi tirregola l-priming medjat minn IL-15-. Nat. Immunol. 2019, 20, 879–889. [CrossRef]

23. Parums, DV Stat attwali ta' trattamenti orali ta' mediċini antivirali għal infezzjoni SARS-CoV-2 f'pazjenti mhux rikoverati fl-isptar. Med. Sci. Monit. 2022, 28, e935952-1. [CrossRef] [PubMed]

24. Couzin-Frankel, J. Pilloli antivirali jistgħu jibdlu l-kors tal-pandemija. Em. Assoc. Adv. Sci. 2021, 12, 799–800. [CrossRef] [PubMed]

25. Muntasell, A.; Ochoa, MC; Cordeiro, L.; Berraondo, P.; de Cerio, AL-D.; Cabo, M.; López-Botet, M.; Melero, I. Timmira ta' punti ta' kontroll taċ-ċelluli NK għall-immunoterapija tal-kanċer. Curr. Opinja. Immunol. 2017, 45, 73–81. [CrossRef] [PubMed]

26. Patidar, M.; Yadav, N.; Dalai, SK Interleukin 15: Ċitokin ewlieni għall-immunoterapija. Fattur tat-Tkabbir taċ-Ċitokini Rev 2016, 31, 49–59. [CrossRef]

27. Kabinger, F.; Stiller, C.; Schmitzová, J.; Dienemann, C.; Kokic, G.; Hillen, HS; Höbartner, C.; Cramer, P. Mekkaniżmu tal-mutaġenesi tas-SARS-CoV-2 indotta minn molnupiravir. Nat. Struttura. Mol. Biol. 2021, 28, 740–746. [CrossRef] [PubMed]

28. Mdendla, Y.-P.; Lee, J.-C.; Chiu, C.-W.; Lee, C.-C.; Tsai, P.-J.; Hsu, I.-L.; Ko, W.-C. Terapija orali ta' Nirmatrelvir/Ritonavir għal COVID-19: The Dawn in the Dark? Antibijotiċi 2022, 11, 220. [CrossRef]

29. Guo, Y.; Luan, L.; Patil, NK; Sherwood, ER Immunobiology tal-kumpless IL-15/IL-15R bħala aġent antitumorali u antivirali. Fattur tat-Tkabbir taċ-Ċitokini Rev 2017, 38, 10–21. [CrossRef]

30. Zhang, S.; Zhao, J.; Bai, X.; Handley, M.; Shan, F. Effetti bijoloġiċi ta' IL-15 fuq iċ-ċelloli immuni u l-potenzjal tiegħu għat-trattament tal-kanċer. Int. Immunofarmakol. 2021, 91, 107318. [CrossRef]

31. Waldmann, TA; Dubois, S.; Miljkovic, MD; Conlon, KC IL-15 fl-Immunoterapija Kombinata tal-Kanċer. Quddiem. Immunol. 2020, 11, 868. [CrossRef]

32. Dubois, SP; Miljkovic, MD; Fleisher, TA; Pittaluga, S.; Hsu-Albert, J.; Bryant, BR; Petrus, MN; Perera, LP; Müller, JR; Shih, JH; et al. IL-15 ta' kors qasir mogħti bħala infużjoni kontinwa wassal għal espansjoni massiva ta' ċelluli NK effettivi: Implikazzjonijiet għal terapija kombinata b'antikorpi kontra t-tumur. J. Immunother. Kanċer 2021, 9, e002193. [CrossRef]

33. Conlon, KC; Potter, EL; Pittaluga, S.; Lee, C.-CR; Miljkovic, MD; Fleisher, TA; Dubois, S.; Bryant, BR; Petrus, M.; Perera, LP; et al. IL15 permezz ta' Infużjoni Kontinwa Ġol-vini lil Pazjenti Adulti b'Tumuri Solidi f'Subsett Drammatiku ta' Ċelluli NK Indott minn Prova ta' Fażi I. Clin. Cancer Res. 2019, 25, 4945–4954. [CrossRef]

34. Romee, R.; Cooley, S.; Berrien-Elliott, MM; Westervelt, P.; Verneris, MR; Wagner, JE; Weisdorf, DJ; Blazar, BR; Ustun, C.; DeFor, TE; et al. L-ewwel studju kliniku tal-fażi 1 fil-bniedem tal-kumpless ta' superagonist IL-15 ALT-803 biex jikkura rikaduta wara t-trapjant. Demm Am. J. Hematol. 2018, 131, 2515–2527. [CrossRef] [PubMed]

35. Miller, JS; Davis, ZB; Helgeson, E.; Reilly, C.; Thorkelson, A.; Anderson, J.; Lima, NS; Jorstad, S.; Hart, GT; Lee, JH; et al. Sigurtà u Impatt viroloġiku tal-IL-15 superagonist N-803 f'nies li jgħixu bl-HIV: Prova ta' fażi 1. Nat. Med. 2022, 28, 392–400. [CrossRef] [PubMed]

36. Berenguer, J.; Ryan, P.; Rodríguez-Baño, J.; Jarrín, I.; Carratalà, J.; Pachón, J.; Yllescas, M.; Arriba, JR; Muñoz, EA; Gil Divasson, P.; et al. Karatteristiċi u tbassir tal-mewt fost 4035 pazjent konsekuttivament rikoverati fl-isptar b'COVID-19 fi Spanja. Clin. Microbiol. Infetta. 2020, 26, 1525–1536. [CrossRef]

37. Garcia-Perez, J.; Sanchez-Palomino, S.; Perez-Olmeda, M.; Fernandez, B.; Alcami, J. Strateġija ġdida bbażata fuq viruses rikombinanti bħala għodda għall-valutazzjoni tas-suxxettibilità tad-droga tal-virus tal-immunodefiċjenza umana tat-tip 1. J. Med. Virol. 2007, 79, 127–137. [CrossRef] [PubMed]

38. Ou, X.; Liu, Y.; Lei, X.; Li, P.; Mi, D.; Ren, L.; Guo, L.; Guo, R.; Chen, T.; Hu, J.; et al. Karatterizzazzjoni ta' spike glycoprotein ta' SARS-CoV-2 mad-dħul tal-virus u r-reattività inkroċjata immuni tagħha mas-SARS-CoV. Nat. Komun. 2020, 11, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

39. Volz, E.; Għolja, V.; McCrone, JT; Prezz, A.; Jorgensen, D.; O'Toole, Á.; Southgate, J.; Johnson, R.; Jackson, B.; Nascimento, FF; et al. Evalwazzjoni tal-effetti tal-mutazzjoni spike tas-SARS-CoV-2 D614G fuq it-trasmissibbiltà u l-patoġeniċità. Ċellula 2021, 184, 64–75. [CrossRef]

40. Korber, B.; Fischer, WM; Gnanakaran, S.; Yoon, H.; Theiler, J.; Abfalterer, W.; Hengartner, N.; Giorgi, EE; Bhattacharya, T.; Foley, B.; et al. It-traċċar tal-bidliet fiż-żieda ta' SARS-CoV-2: Evidenza li D614G iżid l-infettività tal-virus COVID-19. Ċellula 2020, 182, 812–827. [CrossRef]

41. Nandagopal, N.; Ali, AK; Komal, AK; Lee, S.-H. Ir-rwol kritiku tal-mogħdija IL-15–PI3K–mTOR fil-funzjonijiet effettur taċ-ċelluli naturali killer. Quddiem. Immunol. 2014, 5, 187. [CrossRef]

42. Rosenthal, R.; Groeper, C.; Bracci, L.; Adamina, M.; Feder-Mengus, C.; Zajac, P.; Iezzi, G.; Bolli, M.; Weber, WP; Frey, DM; et al. Reazzjoni differenzjali għal IL-2, IL{-7, u IL-15 Ċitokini Komuni tal-Katina tar-Riċetturi minn Demm Periferali Naive jew Memory Cytotoxic CD8+ Ċelloli T minn Donaturi b'saħħithom u speċifiċi għall-antiġenu Pazjenti Melanoma. J. Immunother. 2009, 32, 252–261. [CrossRef]

43. Corman, VM; Landt, O.; Kaiser, M.; Molenkamp, ​​R.; Meijer, A.; Chu, DKW; Bleicker, T.; Brünink, S.; Schneider, J.; Schmidt, ML; et al. Sejbien ta' koronavirus ġdid tal-2019 (2019-nCoV) permezz ta' RT-PCR f'ħin reali. Eurosurveillance 2020, 25, 2000045. [CrossRef] [PubMed]

44. MIN. Ittestjar Dijanjostiku għal SARS-CoV-2: Gwida Interim, 11 ta' Settembru 2020; Organizzazzjoni Dinjija tas-Saħħa: Ġinevra, l-Isvizzera, 2020.

45. Becker, LA Daqs tal-Effett (ES); Università ta 'Colorado Colorado Springs: Colorado Springs, CO, USA, 2000.

46. ​​Cohen, J. Analiżi tal-Qawwa Statistika għax-Xjenzi tal-Imġieba; Routledge: Abingdon, UK, 1988. [CrossRef]

47. Moreno-Perez, O.; Ribes, I.; Boix, V.; Martinez-García, M.; Otero-Rodriguez, S.; Reus, S.; Sánchez-Martínez, R.; Ramos, JM; Chico-Sánchez, P.; Merino, E. Pazjenti rikoverati fl-isptar b'COVID innovattiv-19: Karatteristiċi kliniċi u tbassir ta' riżultat fqir. Int. J. Infetta. Dis. 2022, 118, 89–94. [CrossRef] [PubMed]

48. Lee, CM; Lee, E.; Park, WB; Choe, PG; Kanzunetta, K.-H.; Kim, ES; Park, S.-W. Infezzjoni ta' Breakthrough COVID-19 matul il-Perjodu Dominanti tal-Varjant Delta: Hija Meħtieġa Kura Individwalizzata Ibbażata fuq l-Istatus tat-Tilqim. J. Korean Med. Sci. 2022, 37, e252. [CrossRef] [PubMed]

49. Ejaz, H.; Alsrhani, A.; Zafar, A.; Javed, H.; Junaid, K.; Abdalla, AE; Abosalif, KO; Ahmed, Z.; Younas, S. COVID-19 u komorbiditajiet: Impatt ta' ħsara fuq pazjenti infettati. J. Infetta. Saħħa Pubblika 2020, 13, 1833–1839. [CrossRef] [PubMed]

50. Azevedo, RB; Botelho, BG; de Hollanda, JVG; Ferreira, LVL; de Andrade, LZJ; Oei, SSML; Mello, TDS; Muxfeldt, ES COVID-19 u s-sistema kardjovaskulari: Reviżjoni komprensiva. J. Hum. Ipertens. 2021, 35, 4–11. [CrossRef]

51. Zhang, JJ; Lee, KS; Ang, LW; Leo, YS; Żgħażagħ, BE Fatturi ta' riskju għal mard sever u effikaċja tat-trattament f'pazjenti infettati b'COVID-19: Reviżjoni sistematika, meta-analiżi, u analiżi ta' meta-rigressjoni. Clin. Infetta. Dis. 2020, 71, 2199–2206. [CrossRef]

52. Kermali, M.; Khalsa, RK; Pillai, K.; Ismail, Z.; Harky, A. Ir-rwol tal-bijomarkaturi fid-dijanjosi tal-COVID-19–Reviżjoni sistematika. Ħajja Sci. 2020, 254, 117788. [CrossRef]

53. Malik, P.; Patel, U.; Mehta, D.; Patel, N.; Kelkar, R.; Akrmah, M.; Gabrilove, JL; Xkejjer, H. Biomarkers u riżultati ta' dħul fl-isptar COVID-19: Reviżjoni sistematika u meta-analiżi. BMJ Evid. Ibbażat Med. 2021, 26, 107–108. [CrossRef]

54. Li, Y.; Schneider, AM; Mehta, A.; Sade-Feldman, M.; Kays, KR; Gentili, M.; Charland, NC; Gonye, ​​AL; Gushterova, I.; Khanna, ĦK; et al. Il-viremja tas-SARS-CoV-2 hija assoċjata ma' mogħdijiet proteomiċi distinti u tbassar ir-riżultati tal-COVID-19. J. Clin. Investig. 2021, 131, e148635. [CrossRef]

55. Rodríguez-Serrano, DA; Roy-Vallejo, E.; Cruz, NDZ; Ramírez, AM; Rodríguez-García, SC; Arevalillo-Fernández, N.; Galván-Román, JM; García-Rodrigo, LF; Vega-Piris, L.; Llano, MC; et al. Is-sejbien ta' SARS-CoV-2 RNA fis-serum huwa assoċjat ma' riskju akbar ta' mortalità f'pazjenti COVID-19 rikoverati fl-isptar. Sci. Rep 2021, 11, 13134. [CrossRef]

56. Serafim, RB; Póvoa, P.; Souza-Dantas, V.; Kalil, AC; Salluh, JI Kors kliniku u riżultati ta' pazjenti morda b'mod kritiku b'infezzjoni COVID-19: Reviżjoni sistematika. Clin. Microbiol. Infetta. 2021, 27, 47–54. [CrossRef] [PubMed]

57. Liu, X.; Zhou, H.; Zhou, Y.; Wu, X.; Zhao, Y.; Lu, Y.; Tan, W.; Yuan, M.; Ding, X.; Zou, J.; et al. Fatturi ta' riskju assoċjati mas-severità tal-marda u t-tul taż-żjara fl-isptar f'pazjenti COVID-19. J. Infetta. 2020, 81, e95–e97. [CrossRef]

58. Luo, XH; Zhu, Y.; Mao, J.; Du, immunobijoloġija taċ-ċelluli T RC u maltempata taċ-ċitokini tal-COVID-19. Scand. J. Immunol. 2021, 93, e12989. [CrossRef] [PubMed]

59. Harwood, O.; O'Connor, S. Potenzjal terapewtiku ta' IL-15 u N-803 fl-infezzjoni bl-HIV/SIV. Viruses 2021, 13, 1750. [CrossRef] [PubMed]

60. Shin, H.; Wherry, disfunzjoni taċ-ċelluli T EJ CD8 waqt infezzjoni virali kronika. Curr. Opinja. Immunol. 2007, 19, 408–415. [CrossRef]

61. McMahan, K.; Yu, J.; Mercado, NB; Loos, C.; Tostanoski, LH; Chandrashekar, A.; Liu, J.; Peter, L.; Atyeo, C.; Zhu, A.; et al. Korrelati tal-protezzjoni kontra SARS-CoV-2 fil-makaki rhesus. Natura 2021, 590, 630–634. [CrossRef]

62. Zhuang, Z.; Lai, X.; Sun, J.; Chen, Z.; Zhang, Z.; Dai, J.; Liu, D.; Li, Y.; Li, F.; Wang, Y.; et al. Immappjar u rwol tar-rispons taċ-ċelluli T fi ġrieden infettati bis-SARS-CoV-2. J. Exp. Med. 2021, 218, e20202187. [CrossRef]

63. Westmeier, J.; Paniskaki, K.; Karaköse, Z.; Werner, T.; Sutter, K.; Dolff, S.; Overbeck, M.; Limmer, A.; Liu, J.; Zheng, X.; et al. Indeboliment tar-rispons taċ-ċelluli CD8+ T ċitotossiċi f'pazjenti anzjani COVID-19. MBio 2020, 11, e02243-20. [CrossRef]

64. Laing, AG; Lorenc, A.; del Barrio, IDM; Das, A.; Ħut, M.; Monin, L.; Muñoz-Ruiz, M.; McKenzie, DR; Hayday, TS; Francos Quijorna, I.; et al. Firma immuni dinamika tal-COVID-19 tinkludi assoċjazzjonijiet bi pronjosi ħażina. Nat. Med. 2020, 26, 1623–1635. [CrossRef]

65. Kuri-Cervantes, L.; Pampena, MB; Meng, W.; Rosenfeld, AM; Ittner, CAG; Weisman, AR; Agyekum, RS; Mathew, D.; Baxter, AE; Vella, LA; et al. Immappjar komprensiv ta' perturbazzjonijiet immuni assoċjati ma' COVID sever-19. Sci. Immunol. 2020, 5, eabd7114. [CrossRef]

66. Aktas, E.; Kucuksezer, UC; Bilgic, S.; Erten, G.; Deniz, G. Relazzjoni bejn l-espressjoni CD107a u l-attività ċitotossika. Ċellula. Immunol. 2009, 254, 149–154. [CrossRef]

67. Björkström, NK; Strunz, B.; Ljunggren, H.-G. Ċelloli qattiel naturali fl-immunità antivirali. Nat. Dun Immunol. 2022, 22, 112–123. [CrossRef] [PubMed]

68. Bi, J. Disfunzjoni taċ-ċelluli NK f'pazjenti b'COVID-19. Ċellula. Mol. Immunol. 2022, 19, 127–129. [CrossRef] [PubMed]

69. Alter, G.; Malenfant, JM; Altfeld, M. CD107a bħala markatur funzjonali għall-identifikazzjoni ta 'attività taċ-ċelluli killer naturali. J. Immunol. Metodi 2004, 294, 15–22. [CrossRef] [PubMed]

70. Gustine, JN; Jones, D. Immunopatology of Hyperinflammation in COVID-19. Em. J. Clin. Pathol. 2021, 191, 4–17. [CrossRef] [PubMed]

71. Hu, C.; Zhou, Y.; Li, Z.; Farooq, MA; Ajmal, I.; Zhang, H.; Zhang, L.; Tao, L.; Yao, J.; Du, B.; et al. Il-ko-espressjoni ta' IL-7 ittejjeb it-terapija taċ-ċelluli CAR T ibbażata fuq NKG2D fuq il-kanċer tal-prostata billi ttejjeb l-espansjoni u tinibixxi l-apoptożi u l-eżawriment. Cancers 2020, 12, 1969. [CrossRef]