Dissezzjoni ta' Rispons ta' Antikorpi Ta' Suġġetti Vaċċinati Gam-COVID-Vac Jissuġġerixxi Involviment Ta' Epitopi Barra RBD fin-Newtralizzazzjoni tas-SARS-CoV-2

Astratt: Miljuni ta’ nies tlaqqmu b’Gam-COVID-Vac iżda speċifiċitajiet fini ta’ antikorpi indotti ma ġewx studjati bis-sħiħ. Plażma minn 12-il suġġett konvalexxenti naïve u 10 mard tal-koronavirus 2019 (COVID-19) inkisbet qabel u wara żewġ tilqim b'Gam-COVID-Vac. Ir-reattività tal-antikorpi fil-kampjuni tal-plażma (n=44) ​​ġiet studjata fuq pannell ta’ proteini tal-koronavirus 2 (SARS-CoV-2) tas-sindromu respiratorju akut sever rikombinanti mitwija u mhux mitwija b’mikro-array u 46 peptide li jkopru l-ispike. proteina (S) u permezz ta’ immunoglobulina G (IgG) assay immunosorbent marbut ma’ enzimi (ELISA). Il-kapaċità ta 'antikorpi indotti minn Gam-COVID-Vac li jinibixxu t-twaħħil tad-dominju li jgħaqqad ir-riċettur (RBD) mal-enzima 2 li jikkonvertu l-angiotensin tar-riċettur tiegħu (ACE2) ġiet investigata f'assaġġ ta' interazzjoni molekulari (MIA). Il-kapaċità tan-newtralizzazzjoni tal-virus tal-antikorpi ġiet studjata bit-test tan-newtralizzazzjoni tal-virus pseudo-typed (pVNT) għal Wuhan-Hu-1 u Omicron. Sibna li t-tilqim Gam-COVID-Vac indotta żidiet sinifikanti ta’ IgG1 iżda mhux ta’ sottoklassijiet oħra ta’ IgG kontra S mitwija, subunità ta’ proteina ta’ spike 1 (S1), subunità ta’ proteina ta’ spike 2 (S2) u RBD b’mod komparabbli b’mod naïve u konvalexxenti. suġġetti. In-newtralizzazzjoni tal-virus kienet korrelata ħafna ma 'antikorpi indotti mit-tilqim speċifiċi għal RBD mitwija u peptide ġdid (jiġifieri, peptide 12). Peptide 12 kien jinsab qrib RBD fil-parti N-terminal ta 'S1 u jista' potenzjalment ikun involut fit-tranżizzjoni tal-konformazzjoni ta 'qabel għal wara l-fużjoni tal-proteina spike. Fil-qosor, it-tilqim Gam-COVID-Vac indotta antikorpi IgG1 speċifiċi għal S f'suġġetti naive u konvalexxenti b'mod komparabbli. Minbarra l-antikorpi speċifiċi għal RBD, l-antikorpi indotti kontra peptide qrib it-tarf N ta 'RBD kienu assoċjati wkoll man-newtralizzazzjoni tal-virus.

Kliem ewlieni: SARS-CoV-2; COVID-19; Gam-COVID-Vac; epitope; antikorp; newtralizzazzjoni tal-virus; assaġġ ta' interazzjoni molekulari; Omicron

cistanche suppliment benefiċċji-żieda l-immunità

Ikklikkja hawn biex tara l-prodotti Cistanche Enhance Immunity

【Staqsi għal aktar】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Introduzzjoni

Wara l-ewwel każijiet ta’ infezzjoni bis-Sindrome Respiratorju Akut Sever Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) fl-aħħar tal-2019 fi Wuhan, iċ-Ċina, il-marda ġdida tal-koronavirus (COVID-19) infirxet malajr madwar id-dinja u kiber f’pandemija globali [1–4]. L-iżvilupp mgħaġġel tal-vaċċini tal-COVID-19 u l-introduzzjoni ta' programmi globali ta' tilqim flimkien mad-dehra ta' varjanti inqas patoġeniċi ta' SARS-CoV-2 huma kkunsidrati bħala fatturi sinifikanti għat-tnaqqis tal-imwiet assoċjati mal-COVID-19- u s-severità tal-pandemija [1,5]. L-ewwel vaċċini li saru disponibbli kienu vaċċini ġenetiċi bbażati fuq trasferiment medjat minn adenovirus tal-kodifikazzjoni tal-ġene għall-proteina S tal-wiċċ SARS-CoV-2 [6–8]. Il-proteina SARS-CoV-2 S tikkonsisti mis-subunità S1 li fiha d-dominju li jgħaqqad ir-riċettur (RBD) li jeħel mar-riċettur ACE2 tagħha fuq ċelluli umani u s-subunità S2 li tiżgura t-twaħħil tal-virus mal-membrana taċ-ċellula ospitanti permezz ta’ qsim proteolitiku tal- peptide tal-fużjoni (FP) waqt l-infezzjoni tal-virus [9]. Il-ġene S użat għat-trasferiment tal-ġeni f'ċerti vaċċini bbażati fuq adenovirus (eż., Vaċċin COVID-19 Janssen) jista' jiġi modifikat biex jistabbilizza l-proteina u biex jinfluwenza l-qsim tagħha iżda dan mhuwiex il-każ għall-oħrajn [10]. Ċelloli tal-bniedem li huma infettati minn adenoviruses li fihom il-ġene ta’ kodifikazzjoni S jipproduċu ammont li jvarja ta’ l-antiġen S li jiġi rilaxxat u ppreżentat mill-kumpless ta’ istokompatibbiltà maġġuri (MHC) klassi II għal ċelluli T li jirriżultaw f’għajnuna taċ-ċelluli T CD4+ għall-produzzjoni ta' antikorpi speċifiċi għall-S. Il-proteina S espressa minn ċelluli trasfettati hija wkoll ippreżentata mill-MHC klassi I fuq il-wiċċ taċ-ċellula infettata u tixpruna l-attivazzjoni ta' ċelluli T CD8+ ċitotossiċi speċifiċi S, li jistgħu jirrikonoxxu ċelluli S li jipproduċu l-antiġenu u jeqirduhom. Il-prinċipju tat-tilqim, jiġifieri, l-introduzzjoni ta 'informazzjoni ġenetika ta' kodifikazzjoni S fiċ-ċelloli ospitanti u l-produzzjoni sussegwenti ta 'antiġen S miċ-ċelloli infettati, huwa simili għal vaċċini ta' aċidu ribonukleiku messaġġier (mRNA), għalkemm it-teknoloġija tat-trasferiment tal-ġeni hija differenti minn adenovirus. vaċċini bbażati fuq. Għalhekk, "vaċċini ġenetiċi" jimitaw sa ċertu punt infezzjoni naturali SARS-CoV-2. L-identifikazzjoni ta' epitopi rikonoxxuti minn antikorpi minn suġġetti mlaqqma involuti fin-newtralizzazzjoni tal-virus hija kruċjali mhux biss biex jinftiehem il-mekkaniżmu tal-azzjoni ta' vaċċini eżistenti iżda wkoll għall-iżvilupp ta' tilqim attiv raffinat u strateġiji ta' immunizzazzjoni passiva kontra COVID-19 [11 ,12]. Ħafna mill-vaċċini attwali huma ffukati fuq il-kisba ta' rispons ta' antikorpi speċifiċi għal S b'attenzjoni speċjali għar-rispons ta' antikorpi speċifiċi għal RBD minħabba li deher li l-antikorpi speċifiċi għal RBD huma korrelatati ma' attività newtralizzanti għolja kontra SARS-CoV-2 [ 13–15]. Madankollu, in-numru ta 'mutazzjonijiet miksuba minn kull varjant ġdid ta' tħassib (VOC), jindika l-importanza li jiġu identifikati epitopi kkonservati fost VOCs immirati minn antikorpi newtralizzanti li jinsabu mhux biss f'RBD iżda wkoll barra mill-RBD [16]. Fil-fatt, hemm studji li jindikaw il-preżenza ta 'epitopi newtralizzanti barra RBD, li huma rikonoxxuti minn antikorpi wara l-immunizzazzjoni [17-20]. Fl-2020 il-vaċċin ibbażat fuq il-vettor Gam-COVID-Vac, imsejjaħ ukoll Sputnik-V, sar disponibbli għall-użu fil-prattika klinika u bħalissa ġie approvat għall-użu f'aktar minn 70 pajjiż (https://sputnikvaccine.com/about-vaccine). / (aċċessat fis-17 ta’ Jannar 2023)). Skont ir-riżorsa Our World In Data (OWID), 79 miljun ruħ fir-Russja rċevew mill-inqas tiro waħda tat-tilqima, u 72 miljun huma mlaqqma għal kollox (https://ourworldindata.org/ covid-vaccinations?country= RUS (aċċessat fit-22 ta' Marzu 2022)). Gam-COVID-Vac jikkonsisti f'żewġ tipi ta' vaċċini, li huma bbażati fuq żewġ vettori differenti ta' adenovirus uman (hAd26 u hAd5) li jġorru l-forma nattiva tal-proteina S tar-razza Wuhan-Hu-1 SARS-CoV{{ 73}}. Sputnik-V jinkludi żewġ injezzjonijiet, waħda b'hAd26 u t-tieni b'hAd5 u dawl Sputnik, b'hAd26 biss. Iż-żewġ vettori tal-adenovirus differenti jintużaw għall-ewwel u t-tieni immunizzazzjoni biex titnaqqas il-possibbiltà li s-suġġetti mlaqqma jipproduċu immunità għall-immunità tal-proteina S kontra l-adenovirus. Fil-fatt, antikorpi speċifiċi għall-adenovirus jillimitaw l-effikaċja tat-tilqim booster permezz tan-newtralizzazzjoni tal-vettura tal-vettur tal-adenovirus. Għalhekk, fil-21 jum wara l-għoti tal-ewwel doża ta 'vaċċin b'rAd26, titwettaq kunsinna ripetuta tal-antiġen bil-vettur rAd5 [8,21]. Ftit studji investigaw sa ċertu punt risponsi ta' antikorpi speċifiċi għall-S- u l-RBD u l-attività ta' newtralizzazzjoni tal-virus fis-serum minn persuni vaċċinati Gam-COVID-Vac [10,22,23]. Żidiet ta’ antikorpi IgG speċifiċi għal RBD tliet xhur wara l-għoti ta’ Gam-COVID-Vac ġew irrappurtati u ġie muri li l-antikorpi jirreaġixxu ma’ varjanti ta’ tħassib Alpha, Beta, Delta u Omicron [24-26]. Gam-COVID-Vac tqabbel ukoll ma' diversi vaċċini liċenzjati oħra kontra SARS-CoV-2, li wrew newtralizzazzjoni għolja tal-virus u effettività għolja kontra mortalità relatata mal-COVID-19- għal Sputnik-V, għalkemm inferjorità żgħira għal xi vaċċini mRNA rigward in-newtralizzazzjoni tal-virus instab [24]. Fl-aħħarnett, intwera li l-immunizzazzjoni ta’ pazjenti b’Gam-COVID-Vac ikkurati b’terapija antiretrovirali antiretrovirali (HIV+) pożittivi għall-virus tal-immunodefiċjenza umana (HIV+) turi effikaċja epidemjoloġika kontra t-tip selvaġġ oriġinali u l-varjant Delta ta’ SARS-CoV{{ 113}} [27]. Madankollu, s'issa ma saret l-ebda analiżi dettaljata tar-rikonoxximent tal-epitopi minn antikorpi f'suġġetti vaċċinati Gam-COVID-Vac u hija meħtieġa dejta biex wieħed jifhem l-isotip tal-immunoglobulina u r-risponsi tas-sottoklassi IgG f'suġġetti vaċċinati Gam-COVID-Vac. Hawnhekk investigajna żewġ gruppi ta' suġġetti li kienu tlaqqmu b'Gam-COVID-Vac, wieħed li kellu infezzjoni preċedenti minn SARS-CoV-2, u grupp ieħor ta' suġġetti naïve għal SARS-CoV-2. Aħna wettaqna analiżi metikoluża tal-ispeċifiċità tal-epitopi tal-antikorpi indotti bl-użu ta' proteini mitwija u mhux mitwija derivati ​​minn SARS-CoV-2-mikro-arrayed u peptidi li jkopru l-proteina S kompluta, inkluż RBD. Barra minn hekk, ġew analizzati r-risponsi tas-sottoklassi IgG. L-istudju tagħna jiżvela li s-suġġetti vaċċinati Gam-COVID-Vac jimmontaw antikorpi speċifiċi għall-RBD li kapaċi jimblukkaw l-interazzjoni RBD-ACE2. Interessanti, sibna li n-newtralizzazzjoni tal-virus kienet assoċjata wkoll ma 'antikorpi diretti kontra peptide barra RBD, li jista' jkun involut fit-tranżizzjoni tal-konformazzjoni preto-post-fużjoni tal-proteina spike.

cistanche tubulosa-titjib tas-sistema immuni

2. Riżultati

2.1. Suġġetti Imlaqqma-Gam-COVID-Vac Inkludu Suġġetti COVID-19 Naïve u Konvalexxenti

Is-suġġetti konvalexxenti kienu infettati mir-razza Wuhan-Hu-1 skont id-dejta tal-prevalenza u tas-sekwenza tagħha miksuba fiż-żmien tal-infezzjoni fir-reġjun ta 'Moska. Is-suġġetti naïve ma kellhom l-ebda sintomi ta’ COVID-19 u ma kellhomx antikorpi speċifiċi għal SARS-CoV-2-fil-ħin tar-reklutaġġ. Is-suġġetti tal-istudju kienu jinkludu 15-il mara u 7 irġiel b'età medjana ta' 60 (jiġifieri, 25–70 sena) (Tabella 1).

Tabella 1. Karatteristiċi demografiċi, kliniċi u seroloġiċi tas-suġġetti.

Inkiseb kampjun tal-plażma minn kull wieħed mis-suġġetti fil-punt tal-ħin 0 (jiġifieri, linja bażi) (Figura 1A), imbagħad kull suġġett ġie mlaqqam bi Sputnik-V b'intervall ta' madwar 21 jum bejn l-ewwel u t-tieni. injezzjoni (punti tal-ħin 1 u 2). Fil-punt tal-ħin 3 inġabar it-tieni kampjun tal-plażma biex jiġu ddeterminati r-risponsi tal-antikorpi indotti mill-vaċċin (Figura 1A). Is-suġġetti ġew osservati għal 120 jum addizzjonali. Fil-jum 110 wara t-tilqim finali suġġett wieħed (jiġifieri, suġġett 22) kellu COVID-19 filwaqt li l-oħrajn ma żviluppaw l-ebda sintomi ta' COVID-19 (Tabella 1).

Figura 1. Disinn tal-istudju u risponsi speċifiċi tal-antikorpi SARS-CoV-2- qabel u wara t-tilqim bi Sputnik-V. (A) Disinn tal-istudju. Inkisbu kampjuni tal-plażma minn suġġetti COVID-19-naïve (n=12) u konvalexxenti (n=10) fil-punt tal-ħin 0 (linja bażi), imbagħad is-suġġetti rċevew żewġ Sputnik-V tilqim fil-punti tal-ħin 1 u 2, rispettivament u kampjun tal-plażma nkiseb fil-punt tal-ħin 3 (jiġifieri, jum 80–85 wara l-ewwel tilqim). (B) Livelli ta' antikorpi IgG speċifiċi għan-nukleokapsid (assi y: ISU) f'suġġetti naïve u konvalexxenti (assi x) fil-linja bażi. Il-linja orizzontali tindika l-cut-off għall-pożittività. (C) Livelli ta' antikorpi IgG (assi y: ISU) speċifiċi għal RBD, S, S1, u S2 f'suġġetti fil-punt tal-ħin 0 u 3 (assi x). (D) Mix-xellug għal-lemin IgG1 , IgG2 , IgG3 , u livelli ta 'antikorpi IgG4 (assi y: valuri ta' densità ottika OD) għal S (parti ta 'fuq) u RBD (parti t'isfel) f'punti ta' ħin 0 u 3 ( assi-x). Differenzi sinifikanti bejn il-gruppi kif determinat mit-test Wilcoxon huma indikati: ** p < 0.01, *** p < 0.001, **** p < 0.0001, ns—mhux sinifikanti.

2.2. It-tilqim Gam-COVID-Vac Induċi Rispons IgG Wiesgħa għal S Inkluż S1, RBD, u S2

cistanche suppliment benefiċċji-żieda l-immunità

Aħna wettaqna analiżi dettaljata tar-risponsi tal-antikorpi lejn panel kbir ta’ proteini u peptidi SARS-CoV-2 mitwija u mhux mitwija b’mikroarray li jkopru l-proteina S f’kampjuni tal-plażma minn suġġetti SARS-CoV-2-naïve u konvalexxenti wara kors sħiħ ta' tilqim b'Gam-COVID-Vac (Figura 1A, B; Tabella 1). Meta tqabbel kampjuni tal-plażma mill-punt tal-ħin 0 u l-punt tal-ħin 3 wara t-tilqim, instabet induzzjoni sinifikanti ta 'risponsi IgG kontra RBD, S, S1 u S2 mitwija iżda mhux mitwija (Figura 1C). Tliet xhur wara t-tilqim is-suġġetti wrew żieda ta' 21-darbiet ta' antikorpi IgG speċifiċi għall-RBD (p <0.{{20}}001) u {0. 18}}żieda ta 'darbiet ta' antikorpi IgG speċifiċi għal S (jiġifieri, punt ta 'żmien 0: medjan 0.291, punt ta' ħin 3: medjan 5.778) (p <0.0001), rispettivament. L-antikorpi IgG għal S1 żdiedu 3.7-darbiet (p=0.0023) u l-antikorpi IgG għal S2 żdiedu 2.8-darbiet (p=0.0094) (Figura 1C ). It-tilqim b'Gam-COVID-Vac indotta prinċipalment risponsi IgG għal S, S1, u RBD mitwija b'mod komparabbli f'suġġetti naïve u konvalexxenti (Figuri 1C, S2 u S3), li jindika li jista' jintuża biex isaħħaħ SARS-CoV-2- risponsi speċifiċi ta' antikorpi wkoll f'suġġetti konvalexxenti. Ġew osservati spinti sinifikanti ta' antikorpi IgG għal RBD, S, u S1 f'suġġetti naïve u konvalexxenti (Figura S2) u ma kien hemm l-ebda differenzi sinifikanti fir-rigward tal-livelli ta' IgG għal RBD, S, S1, u S2 f'suġġetti naïve u konvalexxenti fil-punt tal-ħin 3 (Figura S3).

2.3. It-tilqim Gam-COVID-Vac Induċi Prinċipalment Rispons tas-Subklassi IgG1 għal S u RBD

Ġie rrappurtat li l-immunoterapija speċifika għall-allerġeni (AIT) tinduċi prinċipalment risponsi speċifiċi għall-allerġeni IgG1 u IgG4 li huma differenti mhux biss fir-rigward tal-funzjonijiet effettur tagħhom (IgG1 jista’ jimmedja ċ-ċitotossiċità ċellulari dipendenti fuq l-antikorpi (ADCC) u l-attivazzjoni tal-kompliment filwaqt li IgG4 m’għandux dawn. funzjonijiet effettur) iżda wkoll rigward il-kinetika tagħhom (IgG1: bidu rapidu u tnaqqis bikri: IgG4: bidu bil-mod iżda livelli sostnuti) [28-30]. Għalhekk investigajna s-sottoklassi IgG (jiġifieri, IgG1–IgG4) risponsi għal S u RBD f'suġġetti mlaqqma Sputnik-V. Figura 1D turi li t-tilqim indotta kważi esklussivament rispons tas-sottoklassi IgG1 għal S u RBD. Żidiet sinifikanti ta 'livelli ta' IgG1 speċifiċi għal S u RBD (p=0.0002 u p=0.0071, rispettivament) instabu wara t-tilqim. Madankollu, ma setgħu jiġu skoperti l-ebda risponsi rilevanti tas-sottoklassi IgG2, IgG3, jew IgG4 speċifiċi għal S u RBD (Figura 1D).

2.4. Induzzjoni ta' Antikorpi li jinnewtralizzaw il-Virus u Antikorpi li jinibixxu l-Interazzjoni RBD-ACE2 permezz tat-tilqim Gam-COVID-Vac

Għall-iskoperta ta 'antikorpi li jinnewtralizzaw il-virus, użajna test pVNT, fejn partiċelli bħal virus kienu psewdo-tipjati b'S-protein mir-razza oriġinali Wuhan-Hu-1 u l-VOC Omicron deskritt reċentement. Antikorpi b'attività newtralizzanti għar-razza Wuhan Hu-1 instabu fit-22 suġġett kollha ħlief wieħed (jiġifieri, is-suġġett 22) (Figura 2A, Tabella 2) filwaqt li titri ta' antikorpi newtralizzanti għal Omicron kienu sinifikament aktar baxxi (Figura 2B) u misjuba biss fi 17 minn 20 suġġett (Figura 2A, Tabella 2). Ma nstabet l-ebda newtralizzazzjoni rilevanti għas-suġġetti 6, 7, 10, 11, 15 (Figura 2A, Tabella 2). It-titri tan-newtralizzazzjoni tal-virus għal Omicron kienu 25 darba inqas milli għal WT (medjan 141.9 u 5.7 għal Wuhan-Hu-1 u Omicron, rispettivament) (Figura 2B).

Figura 2. Attività newtralizzanti tal-virus fil-plażma 3 xhur wara t-tilqim Sputnik-V u assoċjazzjoni ma 'risponsi ta' antikorpi IgG għal RBD u peptidi derivati ​​minn S. (A) In-newtralizzazzjoni tal-virus (ID50) (assi y) kontra r-razza Wuhan-hu-1 (aħdar) u Omicron (oranġjo) inkisbet bil-plażma minn naïve (blu) u konvalexxenti (aħmar) suġġetti (x-assi). (B) Tqabbil tan-newtralizzazzjoni tal-virus (assi y: ID50 miksub għall-plażma mis-suġġetti ttestjati, il-vireg jirrappreżentaw medjani b'firxa interkwartili (IQR) Wuhan Hu-1 (aħdar) u Omicron (oranġjo) . Il-linja orizzontali tirrappreżenta riżultati miksuba bil-plażma minn suġġett ta 'kontroll b'saħħtu u mhux infettat (kontroll b'saħħtu, HC).Differenzi sinifikanti bejn ir-razez ġew determinati mit-test Mann–Whitney: **** p < 0. {{30}}001. (C) Lokalizzazzjoni ta' RBD u peptidi korrelatati man-newtralizzazzjoni tal-virus fi skema ta' S (S1, S2). (D) Korrelazzjonijiet bejn it-titri tan-newtralizzazzjoni tal-virus għal Wuhan-Hu{{19 }} (WT) jew Omicron (assi y) u livelli ta' IgG speċifiċi għal RBD u peptidi derivati ​​minn spike 12, 32, u 46A (assi x: ISU). Simboli blu u ħomor jindikaw suġġetti naïve u konvalexxenti, rispettivament. Asterisks indika korrelazzjonijiet sinifikanti skont it-test Spearman mhux parametriku, * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001 **** p < 0.0001, ns=mhux sinifikanti.

Tabella 2. Tqabbil ta' livelli ta' IgG speċifiċi għal S, S1, S2, u RBD imkejla b'mikro-array b'inibizzjonijiet ta' rbit ta' RBD ma' ACE2 u tittri ta' newtralizzazzjoni tal-virus (Wuhan-Hu-1, Omicron) determinati għall-plażma mill- suġġetti investigati. L-immappjar tas-sħana sar għal kull parametru separatament bl-użu ta 'Excel. L-ogħla livell kien ikkunsidrat aħmar skur u l-inqas kien abjad.

Il-fatt, li fis-suġġetti kollha ħlief wieħed (jiġifieri, is-suġġett 22) l-antikorpi newtralizzanti tal-virus żdiedu wara t-tilqim jindika li ġew indotti mit-tilqim (Tabella 2). Is-suġġett 21 diġà wera imblukkar għoli tal-interazzjoni RBD-ACE2 fl-MIA u newtralizzazzjoni għolja tal-virus fil-linja bażi (Tabella 2). Notevolment, kampjuni tal-plażma minn suġġetti konvalexxenti mlaqqma Gam-COVID-Vac li kellhom mard moderat (#1, 2, 17, 18, 21) kellhom titri ta’ newtralizzazzjoni tal-virus ogħla minn dawk minn suġġetti konvalexxenti li kellhom mard ħafif (#22) jew l-ebda sintomi (#4, 5, 7, 9) (Tabelli 1 u 2). Madankollu, sejba ewlenija kienet li l-inibizzjoni tar-rabta ta 'RBD ma' ACE2 u n-newtralizzazzjoni tal-virus mhux dejjem kienu assoċjati. Inibizzjoni ta' aktar minn 25% tat-twaħħil ta' RBD Wuhan Hu-1 ma' ACE2 seħħet biss għal 6 suġġetti li kienu wrew ukoll inibizzjoni fit-test tan-newtralizzazzjoni tal-virus minħabba t-tilqim (jiġifieri, suġġetti 1, 2, 3, 17, 18). , u 19) (Tabella 2). Interessanti, attività newtralizzanti tal-virus (50% doża infettiva (ID50) > 100) ġiet osservata għal 6 suġġetti għalkemm ma wrew l-ebda inibizzjoni jew inibizzjoni fqira ta 'rbit RBD ma' ACE2 (Tabella 2: Suġġetti 6, 10, 12, 13, 16, 20) .

2.5. In-newtralizzazzjoni tal-virus f'Suġġetti Imlaqqma-Gam-COVID-Vac hija Korrelata bil-qawwi ma' Risposti IgG għal RBD u għall-Peptide Derivat S-12

Kif indikat qabel, plażma minn diversi suġġetti vaċċinati Gam-COVID-Vac (eż., f'suġġetti 6, 10, 12, 13, 16, 20; Tabella 2) wriet attività newtralizzanti tal-virus iżda ma inibixxix l-interazzjoni RBD-ACE2. Għalhekk analizzajna r-reattività tal-antikorpi IgG għall-peptidi li jkopru l-proteina S permezz ta' analiżi taċ-ċippa bbażata fuq mikro-array [13] (Figura S4 u Figura 2C) u risponsi IgG speċifiċi għall-peptidi korrelati man-newtralizzazzjoni tal-virus tal-Wuhan-Hu{{19} } razza u Omicron (Figura 2D). Ir-reazzjonijiet IgG għal tliet peptidi (jiġifieri, peptidi 12, 32, 46A) bħal risponsi IgG għal RBD mitwija kkorrelataw b'mod sinifikanti man-newtralizzazzjoni tar-razza Wuhan-Hu-1 (Figura 2C, D). Peptide 12 spikka minħabba li r-risponsi tal-antikorpi għal peptide mhux mitwija 12 (Figura S1), iżda mhux għal peptidi mhux mitwija 32 u 46A kienu msaħħa b'mod sinifikanti minn Gam-COVID Vac f'suġġetti naive (Figura 3A) u wkoll korrelatati b'mod sinifikanti man-newtralizzazzjoni ta 'Omicron (Figura 2D). ). L-ebda spinta sinifikanti ma ġiet osservata għal suġġetti konvalexxenti għal peptidi 12, 32, jew 46A (Figura 3A). Is-sekwenza tal-peptide 12 hija kkonservata ħafna fost ir-razez tas-SARS-CoV-2 (Figura 4) u tgħix f'S1 qrib it-tarf N ta 'RBD u għalhekk tindika reġjun li jista' jkun rilevanti għat-tranżizzjoni tal-pre- għall-konformazzjoni ta 'wara l-fużjoni tal-proteina S (Figura 3B).

Figura 3. Livelli medjani ta' antikorpi IgG (assi y: ISU) għal peptidi derivati ​​minn S (P12, P32, P46A) f'suġġetti naïve u konvalexxenti mlaqqma f'punti ta' ħin 0 u 3 (assi x) (A) . Differenzi sinifikanti bejn il-gruppi kif determinat mit-test ta' Wilcoxon huma indikati: * p < 0.05, ns=mhux sinifikanti. (F) (B) Figura 3. Livelli medjani ta' antikorpi IgG (assi y: ISU) għal peptidi derivati ​​minn S (P12, P32, P46A) f'suġġetti naïve u konvalexxenti mlaqqma f'punti ta' ħin 0 u 3 (x -assi) (A). Differenzi sinifikanti bejn il-gruppi kif determinat bit-test ta' Wilcoxon huma indikati: * p < 0.05, ns=mhux sinifikanti. (B) Viżwalizzazzjoni tal-peptidi 12, 32, u 46A fir-rappreżentazzjoni tal-wiċċ tat-trimer tal-proteina spike SARS-CoV-2 (vista tal-ġenb, konformazzjoni ta 'qabel il-fużjoni) iġġenerat b'PyMOL. Il-peptide 12 huwa enfasizzat fil-mudell S-trimer bl-aħmar, il-peptide 32 bil-blu, u 46A bl-oranġjo. Il-karboidrati huma murija bil-griż ċar.

Figura 4. Allinjament tas-sekwenza tal-proteini ta 'Wuhan-Hu-1 (fuq) u Omicron (taħt) ta' SARS-CoV-2 S-protein. RBD huwa kkulurit fl-isfar ċar u l-peptidi 12, 22, 25, 32, 33, 46A u 47 huma ssottolinjati. Is-sekwenza tal-proteina S ta' Wuhan tikkorrispondi ma' iżolat WA1 (Nr. ta' adeżjoni tal-GeneBank: BCN86353.1), Sekwenza ta' proteina S Omicron Omicron hija clade GRA, nisel B.1.1.529 BA.1 ibbażat fuq id-database GISAID ( https://www.gisaid.org/ (aċċessat fil-15 ta’ Marzu 2022)). Is-sostituzzjonijiet tal-aċidi amminiċi huma kkodifikati bil-kulur skont il-proprjetajiet tal-idropatija u tal-iċċarġjar tagħhom (roża=idrofobiku, aħdar=newtrali, blu ċar=bażiku idrofiliku, u aħmar ċar=aċiduż idrofiliku).

3. Diskussjoni

Il-vaċċin ibbażat fuq il-vettur Gam-COVID-Vac imsejjaħ ukoll Sputnik-V, kien wieħed mill-ewwel vaċċini SARS-CoV-2 li sar disponibbli għall-użu fil-prattika klinika. Madankollu, hija disponibbli relattivament ftit informazzjoni dwar l-ispeċifiċitajiet fini tar-risponsi tal-antikorpi f'suġġetti li ġew imlaqqma bil-COVID-19. F'dan l-istudju, għamilna analiżi dettaljata tar-risponsi ta' l-antikorpi lejn proteini u peptidi SARS-CoV-2 mitwija u mhux mitwija b'firxa mikro li jkopru l-proteina S f'kampjuni tal-plażma minn suġġetti SARS CoV-2-naïve u konvalexxenti wara kors sħiħ ta’ tilqim ma’ Gam COVID-Vac. Gam-COVID-Vac indotta prinċipalment IgG1 iżda l-ebda rispons ieħor tas-sottoklassi IgG għal S, S1, S2, u RBD mitwija b'mod komparabbli f'suġġetti naïve u konvalexxenti, li jindika li jista 'jintuża biex jagħti spinta lil SARS-CoV-2- risponsi speċifiċi ta' antikorpi wkoll f'suġġetti konvalexxenti. Bħal vaċċini ġenetiċi oħra, ir-rispons tal-antikorpi indott minn Gam-COVID-Vac kien jirrisjedi prinċipalment fis-subklassi IgG1 li għandha half-life iqsar meta mqabbla ma’ rispons tas-sottoklassi IgG4 li huwa aktar sostenibbli. Pereżempju, risponsi speċifiċi ta 'sottoklassi IgG4 huma assoċjati ma' protezzjoni fit-tul waqt immunoterapija speċifika għall-allerġeni filwaqt li risponsi speċifiċi IgG1 jinbnew malajr iżda jisparixxu wara ftit xhur [28-30]. Għaldaqstant, se jkunu meħtieġa injezzjonijiet ta' booster frekwenti ta' Gam-COVID-Vac u vaċċini ġenetiċi oħra biex iżommu r-risponsi ta' antikorpi newtralizzanti f'livell għoli. It-tilqim b'Gam-COVID-Vac jinduċi rispons ta' antikorpi li jimita fil-biċċa l-kbira dak misjub wara infezzjoni naturali bis-SARS-CoV-2 [13]. Barra minn hekk, ir-risponsi tal-antikorpi wara infezzjoni naturali jappartjenu prinċipalment għas-subklassi IgG1 u huma diretti kontra S, S1, S2 u RBD mitwija [13]. Is-sejba l-ġdida u interessanti tal-istudju tagħna kienet li l-plażma minn diversi suġġetti vaċċinati Gam-COVID-Vac (eż., fis-suġġetti 6, 10, 12, 13, 16, 20; Tabella 2) wriet attività newtralizzanti tal-virus iżda ma inibixxix il- Interazzjoni RBD-ACE2. Għalhekk analizzajna r-reattività tal-antikorpi IgG għall-peptidi li jkopru l-proteina S kompluta permezz ta' analiżi taċ-ċippa bbażata fuq mikro-array [13] (Figuri 2D u S4) u risponsi IgG speċifiċi għall-peptidi korrelati man-newtralizzazzjoni tal-virus tal-Wuhan-Hu{{62} } razza u Omicron BA.1 (Figura 2D). Risposti IgG għal tliet peptidi (jiġifieri, peptidi 12, 32, 46A) bħal risponsi IgG għal RBD ikkorrelataw b'mod sinifikanti man-newtralizzazzjoni tar-razza Wuhan-Hu-1 (Figura 2C, D). Madankollu, il-peptide 12 kien uniku minħabba li r-risponsi tal-antikorpi biss għall-peptide 12, iżda mhux għall-peptidi 32 u 46A kienu msaħħa b'mod sinifikanti bit-tilqim (Figura 3A) u wkoll korrelatati b'mod sinifikanti man-newtralizzazzjoni ta 'Omicron (Figura 2D). Il-kobor tal-ispinta kkaġunata mill-vaċċin tar-risponsi IgG għal peptide 12 kienet modesta iżda sinifikanti f'suġġetti naïve u pjuttost komparabbli mat-tisħiħ tal-antikorpi IgG diretti lejn S u S1. Madankollu, l-antikorpi IgG kontra l-peptide mhux mitwi iżolat (Figura S1) jistgħu jirrappreżentaw biss porzjon ta 'antikorpi diretti kontra l-peptide 12 fil-proteina mitwija. Barra minn hekk, mhux biss il-livelli iżda wkoll l-avidità tal-antikorpi huma importanti. Is-sekwenza tal-peptidi 12 hija kkonservata ħafna fost ir-razza Wuhan-Hu-1 u BA.1 Omicron VOC (Figura 4) u hija derivata minn reġjun li jista’ jkun rilevanti għat-tranżizzjoni tal-pre għall-post-fużjoni konformazzjoni tal-proteina S (Figura 3B). Barra minn hekk, it-tqabbil ta 'varjanti mutanti ġodda ta' Omicron (BA.1, BA.2, BA.4/5, BA.2.12.1, BA.2.75, BQ.1), juri li peptide 12 (284-313 aa. ) jibqa' mhux mibdul f'termini ta' sekwenza ta' aċidi amminiċi, b'kuntrast ma', pereżempju, peptide 32 (https://covariants.org/shared-mutations, (aċċessat fit-28 ta' Novembru 2022)). Notevolment, ġew deskritti antikorpi monoklonali b'kapaċità li jinnewtralizza l-virus li jimmiraw lejn ir-reġjun tad-dominju N-terminal (NTD) li minnu l-peptide 12 huwa parti [31], u ġie rrappurtat li wkoll vaċċini oħra jistgħu jinduċu rispons tal-antikorpi dirett kontra dan ir-reġjun. [18-20,32], li jindika li r-reġjun definit mill-peptide 12 jista 'jkun importanti biex jinduċi antikorpi newtralizzanti. Wieħed għalhekk jista' jassumi li l-antikorpi indotti mit-tilqim Gam-COVID-Vac jistgħu jinnewtralizzaw SARS-CoV-2 b'żewġ mekkaniżmi, wieħed sempliċement billi jinibixxi l-interazzjoni RBD-ACE2 u ieħor billi jimmira r-reġjun li fih il-peptide 12 tal-S- proteina li tista' tkun involuta f'bidliet strutturali (jiġifieri, transizzjoni tal-pre-fużjoni fil-konformazzjoni tal-fużjoni ta' S). L-istudju tagħna għandu limitazzjonijiet. Pereżempju, użajna assaġġ tan-newtralizzazzjoni bbażat fuq lentiviruses psewdo-typed iżda dawn l-analiżi huma użati b'mod wiesa 'u affidabbli [33]. Hija wkoll limitazzjoni tal-istudju tagħna li l-peptidi fuq il-mikro-array tagħna ġew żviluppati u għalhekk setgħu identifikaw biss frazzjoni ta 'antikorpi newtralizzanti li rrikonoxxew il-peptidi mhux mitwija filwaqt li frazzjoni saħansitra akbar ta' antikorpi setgħet ġiet marbuta ma' epitopi konformazzjonali fl-identifikati. reġjun. Barra minn hekk, hija limitazzjoni tal-istudju tagħna li analizzajna biss numru żgħir ta 'suġġetti. Madankollu, l-istudju tagħna jindika b'mod ċar li antikorpi b'ispeċifiċità ta 'epitopi differenti jistgħu jikkontribwixxu għall-effett protettiv tat-tilqim Gam COVID-Vac. Barra minn hekk, l-istudju juri rispons għal peptide potenzjalment konservat li jista 'jintuża biex jinħolqu antikorpi newtralizzanti b'mod wiesa'.

cistanche suppliment benefiċċji-kif tissaħħaħ is-sistema immuni

4. Materjali u Metodi

4.1. Studju Popolazzjoni u Dikjarazzjoni Etika

Suġġetti b'saħħithom bi (n {{0}}) jew mingħajr (n=12) infezzjonijiet preċedenti ta' SARS-CoV-2 ġew irreġistrati fl-istudju f'Diċembru 2020 fl-Istitut Nazzjonali taċ-Ċentru tar-Riċerka ta' Immunoloġija tal-Aġenzija Federali Bijoloġika Medika tar-Russja (Numru tal-Etika: #12-1, 29 ta' Diċembru 2020). Il-parteċipanti kollha pprovdew kunsens infurmat bil-miktub. Infezzjoni preċedenti ta' SARS-CoV-2 kienet ikkonfermata jew minn test PCR pożittiv preċedenti u sintomi ta' COVID-19 jew bil-preżenza ta' antikorpi speċifiċi tas-SARS-CoV-2- diretti lejn antiġen nukleokapsid u/jew RBD u/jew S antiġen kif deskritt [13]. Is-suġġetti kollha ġew immunizzati ġol-muskoli b'żewġ dożi ta 'Sputnik-V (Gam-COVID-Vac, Biocard, Moska, ir-Russja) f'intervall ta' tliet ġimgħat. Kampjuni tad-demm inkisbu ġurnata qabel l-ewwel tilqim (T0, Figura 1A) u 80 sa 85 jum wara l-ewwel tilqim (T3, Figura 1A).

4.2. Sejbien ta' SARS-CoV-2-Resposti ta' Antikorpi Speċifiċi

Ir-rispons ta 'l-immunoglobulina ta' suġġetti konvalexxenti naïve u COVID{{0}} ġie vvalutat f'kampjuni tal-plażma qabel u wara l-immunizzazzjoni bi Sputnik-V (Figura 1A). IgG speċifiku għal panel komprensiv ta' proteini SARS-CoV-2 u 46 peptide (25–30 mers) li jkopru l-proteina S tkejjel f'kampjuni tal-plażma dilwit 1: 50 permezz tat-teknoloġija microarray-chip kif qabel deskritt [13]. Is-sekwenzi ta' aċidi amminiċi, in-numru ta' aċidi amminiċi, u l-piż molekulari għall-peptidi sintetiċi kollha fuq iċ-ċippa mikro-arrayed huma ppreżentati fit-Tabella 3. Għal peptidi 12 u 32 u RBD espressi f'Escherichia coli (E. coli) (miftuħa) u fil-Bniedem Embryonic Kidney 293 (HEK293) ċelluli (mitwija) spettri dichroism ċirkolari (CD) huma pprovduti (Figura S1). Il-peptidi 12 u 32 ma żvelaw l-ebda struttura sekondarja speċifika kif determinat minn dichroism ċirkolari (CD) kif muri fil-Figura S1. Fid-dettall, slides tal-ħġieġ li fihom mikroarrays imdawra b'qafas Epoxy (Paul Marienfeld GmbH & Co. KG, Lauda-Königshofen, il-Ġermanja) ġew attivati ​​b'polimeru organiku kumpless reattiv għall-amina, MCP-2 (Lucidant Polymers, Sunnyvale, CA , USA) sabiex jiġi ffaċilitat it-twaħħil ta 'proteini u peptidi. L-antiġeni/peptidi tas-SARS-CoV-2 ġew osservati bl-użu ta' konċentrazzjoni ta' 0.5–1 mg/mL fi (75 mM Na2HPO4, pH=8.4) fi tliet kopji bl-użu ta' SciFlexArrayer S12 (Scienion AG, Berlin, il-Ġermanja) [13]. L-espressjoni u l-purifikazzjoni tal-proteini u s-sinteżi tal-peptidi huma deskritti fi [13]. Ir-reattività tal-antikorpi IgG għal antiġeni mikro-arrayed tkejlet billi l-ewwel ħaslu l-mikroarrays għal 5 min b'salina buffered bil-fosfat b'0.5% Tween 20 (PBST) u tnixxifhom permezz ta' ċentrifugazzjoni bl-użu ta' ċentrifuga Sigma 2-7 u MTP-11113 rotor (it-tnejn Sigma Laborzentrifugen GmbH, Osterode am Harz, il-Ġermanja). Imbagħad 35 µL alikwoti ta 'kampjuni ta' plażma dilwit 1:50 (dilwent tal-kampjun, Thermofisher, Waltham, MA, USA) ġew miżjuda u inkubati għal 2 sigħat f'22 ◦C. Wara pass ieħor tal-ħasil, ġew applikati 30 µL ta’ antikorpi sekondarji (DyLight 550 (Pierce, Rockford, IL, USA) ittikkettati kontra l-bniedem IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA, USA)) u ġew inkubati għal 30 min f’22 ◦ C RT. Iċ-ċipep imbagħad ġew maħsula, imnixxfa, u sussegwentement skennjati bl-użu ta 'laser scanner konfokali (Tecan, Männedorf, l-Isvizzera). Analiżi ta 'l-immaġini saret permezz ta' softwer ta 'akkwist u analiżi ta' immaġini MAPIX microarray (Innopsys, Carbonne, Franza) u l-konverżjoni ta 'unitajiet ta' fluworexxenza mkejla għal unitajiet standardizzati ISAC (ISU) saret kif deskritt [13]. Livelli speċifiċi ta' antikorpi huma espressi f'unitajiet standardizzati ISAC (ISU). Ir-risponsi tal-antikorpi IgG1–4 speċifiċi S u RBD ġew imkejla f'kampjuni tal-plażma (1:50 dilwit) f'duplikati permezz ta' ELISA kif deskritt qabel [13] b'varjazzjoni ta'<5% for their average values.

Tabella 3. Peptidi sintetiċi derivati ​​mill-proteini tas-SARS-CoV-2 spike §.

4.3. Dichroism Ċirkolari tal-UV Imbiegħed (CD) Spectra

Għall-peptidi, P12 u P32 kif ukoll RBD espressi f'ċelloli E. coli u HEK293 CD analiżi saret bl-użu ta 'spettropolarimetru Jasco J-180 (Japan Spectroscopic Co., Tokyo, Japan) deskritt qabel [34]. L-ispettri CD ta' peptidi u proteini (Figura S1) ġew imkejla f'konċentrazzjoni ta' 0.1 mg/mL f'10 mM NaH2PO4 (pH 8.0), li ntużat biex tidentifika l-antiġeni.

4.4. Assaġġ tan-Newtralizzazzjoni tal-Virus Ibbażat fuq Psewdo-Virus (PVT)

L-attività tan-newtralizzazzjoni tal-virus fil-kampjuni tal-plażma ġiet iddeterminata b'assaġġ tan-newtralizzazzjoni tal-virus ibbażat fuq il-psewdo-virus kif deskritt qabel [35]. Biex tipproduċi partiċelli li jixbħu lill-virus ta' spike SARS-CoV-2 (VLPs), iċ-ċelloli HEK293T ġew ko-trasfettati bi 3 plasmidi: plasmid tal-ippakkjar lentivirali pCMV∆8.2R (Addgene, Teddington, UK), pUCHR-GFP, u a Plasmid pCAGGS-S∆19 li jikkodifika l-proteina spike SARS-CoV-2 tat-tip selvaġġ (identiċi għall-iżolati ta’ referenza Wuhan-Hu{-1 u WA1) jew plasmid pCAGGS-S∆19-Om kodifikazzjoni tal-proteina tal-ispike SARS-CoV-2 Omicron (rigal tip minn Andrey Gorchakov, Laboratorju tal-Immunġenetika, Istitut tal-Bijoloġija Molekulari u Ċellulari, Fergħa Siberjana tal-Akkademja Russa tax-Xjenzi, Novosibirsk, ir-Russja). Qabel l-użu f'pVNT, il-VLPs ġew ttitrati billi tillimita d-dilwizzjoni u inkubati għal 4 ijiem b'ċelluli HEK293T trasfettati b'hACE2-. Doża ta' partiċelli virali li tat 50% ċelluli pożittivi għall-proteina fluworexxenti ħadra (GFP) ġiet magħżula għall-użu fit-test. Għal pVNT, il-kampjuni kollha tal-plażma ġew inattivati ​​bis-sħana għal 30 min f'56 ◦C qabel l-użu. Fir-4 jum, iċ-ċelloli ta 'wara l-infezzjoni ġew sospiżi mill-ġdid, u l-perċentwali ta' ċelloli pożittivi għall-GFP tkejjel permezz ta 'ċitometrija tal-fluss. Il-valuri ID50 ġew ikkalkulati bl-użu ta 'kurva sigma (software GraphPad Prism 9.2.0, Sigmoidal, 4PL), rikostruwit bil-perċentwali ta' newtralizzazzjoni fil-konċentrazzjonijiet differenti fil-plażma indikati.

4.5. Assaġġ ta' Interazzjoni Molekulari (MIA)

Biex tiskopri l-kapaċità ta' kampjuni tal-plażma ta' suġġetti COVID{{0}} konvalexxenti jew naïve (Tabella 1), qabel u wara l-immunizzazzjoni Sputnik-V, biex jinibixxu l-irbit ta' 5{0 ng/mL ta' RBD-hu-1 għar-riċettur ACE2 sar assaġġ ta' interazzjoni molekulari (MIA) kif deskritt [13,36-39]. Dan l-assaġġ jista 'jkejjel l-inibizzjoni ta' RBD ittikkettat għal ACE2 marbut mal-pjanċa ELISA minn antikorpi jew inibizzjoni komposta oħra tal-interazzjoni RBD-ACE2 [38]. Fil-qosor, ACE-2 rikombinanti (GenScript, Piscataway, NJ, USA) ġie miksi (2 µg/mL) matul il-lejl fuq pjanċi NUNC Maxisorb 96 well (Thermofisher). Minn hemm 'il quddiem, saru tliet ċikli tal-ħasil b'buffer tal-ħasil u mbagħad il-pjanċi ġew imblukkati għal 3 sigħat f'RT b'buffer tal-imblukkar. Kampjuni tas-serum ġew dilwiti 1:2 f'PBS, 0.05% Tween 20, 1% BSA, u pre-inkubati għal 2 sigħat b'50 ng His-tagged RBD rikombinanti (GenScript). Imbagħad il-kampjuni tas-serum inkubati minn qabel ġew miżjuda mal-pjanċi li kien fihom ACE-2 għal 3 sigħat u l-pjanċi ġew maħsula u inkubati matul il-lejl b'1:1000 antikorp monoklonali tal-ġurdien kontra t-tikketta tiegħu (Dianova, Hamburg, il-Ġermanja) . Wara 3 passi tal-ħasil, 1: 1000 antikorp IgG1 kontra l-ġurdien dilwit marbut mal-HRP (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) ġie miżjud għal 2 sigħat u s-sejbien saret b'ABTS. Il-valuri medja tad-densità ottika (OD) li jikkorrispondu għal RBD marbut tkejlu f'405 nm u 492 nm (referenza) f'qarrej TECAN Infinite F5 ELISA bis-softwer integrat i-control 2.0 (Tecan Group Ltd., Männedorf, l-Isvizzera). Il-kontroll tal-buffer (overlay mingħajr RBD) ġie mnaqqas minn kull riżultat. Id-determinazzjonijiet saru f'duplikati u r-riżultati huma murija bħala valuri medji b'varjazzjoni ta'<5%.

cistanche suppliment benefiċċji-kif tissaħħaħ is-sistema immuni

4.6. Viżwalizzazzjoni ta 'Peptidi fl-Istruttura tal-Proteina Spike

Ir-rappreżentazzjoni tal-wiċċ tal-proteina spike SARS-CoV-2 ġiet iġġenerata f'PyMOL (PyMOL Molecular Graphics System, Verżjoni 2.5.0a0, Schrödinger, LLC, New York, NY, USA) ibbażata fuq l-entrata PDB 6XR8.

4.7. Analiżi Statistika

Analiżi statistika saret bl-użu ta' GraphPad Prism (verżjoni 9.2.0 GraphPad Software, La Jolla California). It-test Wilcoxon (Figuri 1C, D, u 3A), it-test Mann-Whitney (Figuri 2B u S3), u t-test Friedman (Figura S2) intużaw għal tqabbil bejn żewġ gruppi jew multipli. p < 0.05 tqieset statistikament sinifikanti. Il-korrelazzjoni bejn iż-żewġ gruppi ġiet iddeterminata mit-test tal-grad Spearman (Figura 2D). Twettqet rigressjoni mhux lineari normalizzata bl-użu ta 'softwer GraphPad Prism (Sigmoidal 4PL). Id-dejta hija ppreżentata bħala medjan ± IQR. L-asterisks jindikaw differenzi sinifikanti bejn il-gruppi, * p < 0.05, ** p < 0.01, *** p < 0.001, **** p < 0.0001, ns—mhux sinifikanti.

5. Konklużjonijiet

Fil-qosor, l-istudju tagħna huwa l-ewwel wieħed li jistudja fil-fond l-epitope u l-ispeċifiċità tas-sottoklassi IgG ta 'antikorpi indotti minn Gam-COVID-Vac u li jiżvela mekkaniżmi differenti ta' newtralizzazzjoni tal-virus indotta minn Gam-COVID-Vac minn antikorpi. B'mod partikolari, ksibna evidenza li antikorpi diretti lejn peptide (jiġifieri, peptide 12) li jinsab qrib iżda barra minn RBD fil-parti N-terminal ta 'S1 huma assoċjati man-newtralizzazzjoni tal-virus. L-attività potenzjali ta' newtralizzazzjoni tal-virus ta' antikorpi speċifiċi tal-peptidi 12- tista' tkun dovuta għall-kapaċità tagħhom li jinterferixxu mat-tranżizzjoni tal-konformazzjoni ta' qabel għal dik ta' wara l-fużjoni tal-proteina spike. Nissuġġerixxu li tiġi kkunsidrata l-inklużjoni tar-reġjun definit minn peptide 12 f'forma immunoġenika f'vaċċini biex jinduċi antikorpi kontra din iż-żona tal-epitopi u biex jiġu ttestjati antikorpi indotti minn tali vaċċini għan-newtralizzazzjoni tal-virus. Fil-każ li n-newtralizzazzjoni tal-virus tal-vaċċini tista' tissaħħaħ, l-inklużjoni ta' epitopi ta' peptide immunoġeniku 12 tista' ttejjeb l-effikaċja tal-vaċċini COVID-19. Barra minn hekk, wieħed jista' jikkunsidra li jiżviluppa antikorpi kontra l-epitopi definit ta' peptide 12- għal immunizzazzjoni passiva. Minħabba li l-epitopi 12-definit tal-peptide huwa kkonservat f'varjanti magħrufa bħalissa ta' SARS-CoV-2, vaċċini u antikorpi diretti lejn peptide 12 Mejju jipproteġi inkroċjat kontra varjanti ta' SARS-CoV-2. Aħna għalhekk nipprovdu għarfien ġdid li jista' jkun ta' għajnuna għall-iżvilupp ta' strateġiji ġodda ta' tilqim attivi u passivi għall-COVID-19.

Referenzi

1. Rodriguez-Coira, J.; Sokolowska, M. SARS-CoV-2 vaċċini kandidati—Kompożizzjoni, mekkaniżmi ta 'azzjoni u stadji ta' żvilupp kliniku. Allerġija 2021, 76, 1922–1924. [CrossRef] [PubMed]

2. Sharma, A.; Ahmad, FI; Lal, SK COVID-19: Reviżjoni dwar l-Evoluzzjoni, it-Trażmissjoni, l-Individwazzjoni, il-Kontroll u l-Prevenzjoni tal-Mard Ġdid tal-Coronavirus. Viruses 2021, 13, 202. [CrossRef] [PubMed]

3. Arshad, B.; Iqbal, T.; Bhatti, KP Reviżjoni-Insights fi strateġiji terapewtiċi Off-Label kontra infezzjoni ħafifa u severa COVID-19. Pak. J. Pharm. Sci. 2021, 34, 1469–1484. [CrossRef] [PubMed]

4. Zaman, W.; Saqib, S.; Ullah, F. COVID-19: Approċċi filoġenetiċi jistgħu jgħinu biex jinstabu riżorsi għal kura naturali. Phytother. Res. 2020, 34, 2783–2785. [CrossRef]

5. Rubio-Casillas, A.; Redwan, EM; Uversky, VN SARS-CoV-2 Virulenza Intermittenti bħala Riżultat ta' Għażla Naturali. COVID 2022, 2, 1089–1101. [CrossRef]

6. Logunov, DY; Dolzhikova, IV; Zubkova, OV Sigurtà u immunoġeniċità ta' vaċċin eterologu ta' prime-boost COVID-19 ibbażat fuq rAd26 u rAd5 f'żewġ formulazzjonijiet: Żewġ studji ta' fażi 1/2 miftuħa, mhux randomised mir-Russja. Lancet 2020, 396, 887–897, Korrezzjoni f'Lancet 2021, 397, 98. [CrossRef]

7. Folegatti, PM; Ewer, KJ; Aley, PK Sigurtà u immunoġeniċità tal-vaċċin ChAdOx1 nCoV-19 kontra SARS-CoV-2: Rapport preliminari ta' fażi 1/2, prova kkontrollata randomised single-blind. Lancet 2020, 396, 467–478, Korrezzjoni f'Lancet 2020, 396, 1884. [CrossRef]

8. Logunov, DY; Dolzhikova, IV; Shcheblyakov, DV Sigurtà u effikaċja ta' vaċċin eterologu ta' prime-boost COVID-19 ibbażat fuq rAd26 u rAd5: Analiżi interim ta' prova ta' fażi 3 kkontrollata b'mod każwali fir-Russja. Lancet 2021, 397, 671–681, Korrezzjoni f'Lancet 2021, 397, 670. [CrossRef]

9. Jackson, CB; Farzan, M.; Chen, B.; Choe, H. Mekkaniżmi tad-dħul tas-SARS-CoV-2 fiċ-ċelloli. Nat. Dun Mol. Cell Biol. 2022, 23, 3–20. [CrossRef]

10. Heinz, FX; Stiasny, K. Karatteristiċi distintivi tal-vaċċini attwali tal-COVID-19: Magħruf u mhux magħruf dwar il-preżentazzjoni tal-antiġeni u l-modi ta' azzjoni. Vaċċini NPJ 2021, 6, 104. [CrossRef]

11. Lim, HX; Masomian, M.; Khalid, K.; Kumar, AU; MacAry, PA; Poh, CL Identifikazzjoni ta 'Epitopi taċ-Ċellola B għall-Ħarsien ta' Antikorpi Newtralizzanti kontra s-SARS-CoV-2 Spike Protein permezz tal-Bijoinformatika u l-Immirar ta' Antikorpi Monoklonali. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 4341. [CrossRef]

12. Moroy, G.; Tuffery, P. Strateġiji Ibbażati fuq Peptidi Kontra SARS-CoV -2 Attakk: Perspettiva Aġġornata In Silico. Quddiem. Droga. Discov. 2022, 2, 899477. [CrossRef]

13. Gattinger, P.; Niespodziana, K.; Stiasny, K. In-newtralizzazzjoni tas-SARS-CoV-2 teħtieġ antikorpi kontra epitopi tad-dominju tal-irbit tar-riċetturi konformazzjonali. Allerġija 2022, 77, 230–242. [CrossRef]

14. Niu, L.; Wittrock, KN; Clabaugh, GC A Pajsaġġ Strutturali ta 'Antikorpi Newtralizzanti Kontra SARS-CoV-2 Dominju tal-Irbit tar-Riċetturi. Quddiem. Immunol. 2021, 12, 647934. [CrossRef]

15. Shan, S.; Mok, CK; Zhang, S. Antikorp Nnewtralizzanti Bniedem Potenti u Protettiv Kontra Varjanti ta' SARS-CoV-2. Quddiem. Immunol. 2021, 12, 766821. [CrossRef]

16. Bajpai, P.; Singh, V.; Chandele, A. Antikorpi li jinnewtralizzaw b'mod wiesa 'għal SARS-CoV-2 Jipprovdu għarfien ġdid dwar in-newtralizzazzjoni ta' varjanti u koronavirus uman ieħor. Quddiem. Ċellula. Infetta. Microbiol. 2022, 12, 928279. [CrossRef]

17. Vishwakarma, P.; Yadav, N.; Rizvi, ZA Sindromu Respiratorju Akut Sever Coronavirus 2 Epitopi Ġodda Ibbażati fuq Proteina Spike Induċu Rispons Immuni qawwija in vivo u Inibixxu r-Replikazzjoni Viral in Vitro. Quddiem. Immunol. 2021, 12, 613045. [CrossRef]

18. Garrett, ME; Galloway, JG; Wolf, C. Karatterizzazzjoni komprensiva tar-risponsi tal-antikorpi għal SARS-CoV-2 Spike proteina ssib epitopi addizzjonali indotti mill-vaċċin lil hinn minn dawk għal infezzjoni ħafifa. eLife 2022, 11, e73490. [CrossRef]

19. Peng, M.; Dou, X.; Zhang, X. Epitopi antiġeniċi protettivi żvelati minn immunofirem wara tliet dożi ta 'vaċċin inattivat SARS-CoV-2. Quddiem. Immunol. 2022, 13, 938378. [CrossRef]

20. Polvere, I.; Parrella, A.; Zerillo, L. Diversità ta' Rispons Immuni Umorali għal Vaċċini Differenti dwar il-COVID-19: Implikazzjonijiet għall-Politika "Green Pass". Quddiem. Immunol. 2022, 13, 833085. [CrossRef]

21. Tukhvatulin, AI; Dolzhikova, IV; Shcheblyakov, DV Prova ta' fażi 1/2 miftuħa, mhux randomizzata dwar is-sigurtà, it-tollerabilità u l-immunoġeniċità tal-vaċċin b'doża waħda "Sputnik Light" għall-prevenzjoni tal-infezzjoni tal-koronavirus f'adulti b'saħħithom. Lancet Reg. Saħħa Eur. 2021, 11, 100241. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, S.; Olszevicki, S.; Salazar, M. Effettività tal-ewwel komponent ta 'Gam-COVID-Vac (Sputnik V) fuq it-tnaqqis ta' infezzjonijiet ikkonfermati SARS-CoV-2, dħul fl-isptar u mortalità f'pazjenti ta 'età 60-79: Studju retrospettiv ta' koorti fl-Arġentina. EClinicalMedicine 2021, 40, 101126. [CrossRef] [PubMed]

23. Gushchin, VA; Dolzhikova, IV; Shchetinin, AM Attività Newtralizzanti ta' Sera minn Nies Imlaqqma V-Sputnik kontra Varjanti ta' Tħassib (VOC: B.1.1.7, B.1.351, P.1, B.1.617.2, B.1.617.3) u Moska SARS Endemika -CoV-2 Varjanti. Vaċċini 2021, 9, 779. [CrossRef] [PubMed]

24. Voko, Z.; Bewsa, Z.; Surjan, G. L-effettività nazzjonali ta 'ħames vaċċini SARS-CoV-2 fl-Ungerija - l-istudju HUN-VE. Clin. Microbiol. Infetta. 2022, 28, 398–404. [CrossRef] [PubMed]

25. Jeewandara, C.; Fernando, S.; Pushpakumara, PD Reazzjonijiet immuni wara l-ewwel doża ta' Sputnik V (Gam-COVID-Vac). Sci. Rep 2022, 12, 1727. [CrossRef]

26. Ikegame, S.; Siddiquey, MNA; Mdendla, CT Attività newtralizzanti tas-serum tal-vaċċin Sputnik V kontra varjanti tas-SARS-CoV-2. Nat. Komun. 2021, 12, 4598. [CrossRef]

27. Gushchin, VA; Tsyganova, EV; Ogarkova, DA Sputnik V protezzjoni minn COVID-19 f'nies li jgħixu bl-HIV taħt terapija antiretrovirali. EClinicalMedicine 2022, 46, 101360. [CrossRef]

28. Shamji, MH; Valenta, R.; Jardetzky, T. Ir-rwol ta 'IgE, IgG, u IgA speċifiċi għall-allerġeni f'mard allerġiku. Allerġija 2021, 76, 3627–3641. [CrossRef]

29. Eckl-Dorna, J.; Weber, M.; Stanek, V. Sentejn ta 'trattament bil-vaċċin ta' allerġija għall-polline tal-ħaxix rikombinanti BM32 jinduċi rispons IgG4 speċifiku għall-allerġen li dejjem jiżdied. EBioMedicine 2019, 50, 421–432. [CrossRef]

30. Shamji, MH; Kappen, JH; Akdis, M. Biomarkers għall-monitoraġġ tal-effikaċja klinika tal-immunoterapija tal-allerġeni għal rhinoconjunctivitis allerġika u ażżma allerġika: Dokument ta 'Pożizzjoni EAACI. Allerġija 2017, 72, 1156–1173. [CrossRef]

31. Tortorici, MA; Beltramello, M.; Lempp, FA Antikorpi umani ultrapotenti jipproteġu kontra l-isfida tas-SARS-CoV-2 permezz ta' mekkaniżmi multipli. Science 2020, 370, 950–957. [CrossRef]

32. Cia, G.; Pucci, F.; Rooman, M. Analiżi ta 'l-Attività Newtralizzanti ta' Antikorpi li jimmiraw Konformazzjonijiet tal-proteini Spike SARS-CoV -2 Miftuħa jew Magħluqa. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 2078. [CrossRef]

33. Meng, B.; Datir, R.; Choi, J. SARS-CoV-2 spike N-terminal domain jimmodula TMPRSS2-dħul virali dipendenti u fusoġeniċità. Cell Rep. 2022, 40, 111220. [CrossRef]

34. Resch, Y.; Weghofer, M.; Seiberler, S. Karatterizzazzjoni molekulari ta 'Der p 10: Marker dijanjostiku għal sensitizzazzjoni wiesgħa fl-allerġija tad-dud tat-trab tad-dar. Clin. Exp. Allerġija 2011, 41, 1468–1477. [CrossRef]

35. Byazrova, M.; Yusubalieva, G.; Spiridonova, A. Disinn ta' ċirkolazzjoni ta' SARS-CoV-2-sekrezzjoni ta' antikorpi speċifiċi u ġenerazzjoni taċ-ċelluli B tal-memorja f'pazjenti b'COVID akut-19. Clin. Transl. Immunol. 2021, 10, e1245. [CrossRef]

36. Gattinger, P.; Borochova, K.; Dorofeeva, Y. Antikorpi fis-serum ta' pazjenti konvalexxenti wara COVID-19 ħafif mhux dejjem jipprevjenu t-twaħħil tar-riċettur tal-virus. Allerġija 2021, 76, 878–883. [CrossRef]

37. Gattinger, P.; Tulaeva, I.; Borochova, K. Omicron: Varjant ta' SARS-CoV-2 ta' tħassib reali. Allerġija 2022, 77, 1616–1620. [CrossRef]

38. Gattinger, P.; Ohradanova-Repic, A.; Valenta, R. Importanza, Applikazzjonijiet u Karatteristiċi ta' Assays Measuring SARS-CoV-2 Newtraliizing Antibodies. Int. J. Mol. Sci. 2023, 24, 5352. [CrossRef]

39. Gattinger, P.; Kratzer, B.; Tulaeva, I.; Niespodziana, K.; Ohradanova-Repic, A.; Gebetsberger, L.; Borochova, K.; Garner-Spitzer, E.; Trapin, D.; Hofer, G.; et al. Vaċċin ibbażat fuq proteina tal-fużjoni tad-dominju li torbot ir-riċettur mitwi-PreS bil-potenzjal li jinduċi immunità sterilizzanti għal varjanti ta' SARS-CoV-2. Allerġija 2022, 77, 2431–2445. [CrossRef]