L-Estratt taż-Żerriegħa ta' Phoenix Dactylifera L. Jesibixxi Effetti Antiossidanti U Jattenwa l-Melanoġenesi

Huey-Chun Huang1 , Shr-Shiuan Wang2, Tsang-Chi Tsai3, Wang-Ping Ko3 u Tsong-Min Chang2,*

Astratt:Sfond: Il-mod ta 'azzjoni tal-estratt taż-żerriegħa ta' Phoenix dactylifera fil-kura tal-ġilda qatt ma ġie esplorat. Metodi: P. dactylifera L. żrieragħ ġew estratti b'estrazzjoni ultrasonika. Il-karatteristiċi antiossidanti tal-estratt ġew determinati minn 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) u 2,2′-azino-di-(3-ethylbenzthiazoline sulfonic acid) (ABTS plus ) analiżi u metodi ta' scavenging. Ġew investigati wkoll il-kontenut fenoliku totali, il-kapaċità tat-tnaqqis, il-kelazzjoni tal-jone tal-ħadid (II), u l-kapaċitajiet ta 'scavenging ta' speċijiet reattivi ta 'ossiġnu intraċellulari (ROS). L-effetti ta 'l-estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. fuq il-melanoġenesi ġew evalwati spettrofotometrikament permezz ta 'assaġġ ta' attività ta 'tyrosinase tal-faqqiegħ, determinazzjoni ta' attività ta 'tyrosinase intraċellulari, u kontenut ta' melanin. Il-livelli ta 'espressjoni ta' proteini relatati mal-melanoġenesi ġew analizzati minn Western blotting. Riżultati: Ir-riżultati wrew li l-P.dactylifera L.L-estratt taż-żerriegħa eżerċita kapaċità antiossidant apparenti u naqas b'mod sinifikanti l-kontenut ta 'ROS intraċellulari f'konċentrazzjonijiet ta' {{0}}.245 u 0.49 (mg/mL). Barra minn hekk, l-estratt naqqas l-espressjoni tar-riċettur tal-melanocortin 1 (MC1R), il-fattur tat-traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmja (MITF), tyrosinase, proteina relatata mat-tyrosinase-1 (TRP1), u proteina relatata mat-tyrosinase-2 ( TRP2), u inibit il-melanoġenesi fiċ-ċelloli B16F10. Konklużjonijiet: Ir-riżultati tagħna wrew li l-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. attenwat il-melanoġenesi fiċ-ċelloli B16F10 billi rregola l-mogħdijiet tas-sinjalar tal-proteina kinase A (PKA). Għalhekk, l-estratt jista 'jintuża bħala tip ta' aġent li jbajdu l-ġilda fi prodotti għall-kura tal-ġilda.

Kliem ewlieni: Phoenix dactylifera;tyrosinase; melanin; ROS; PKA

cistanche pharma speċjalihuwa tip ta 'aġent li jbajdu l-ġilda.

1. Introduzzjoni

L-antiossidanti ġew applikati b'mod wiesa 'biex jipprevjenu jew jittrattaw disturbi relatati mal-istress ossidattiv fl-oqsma kożmetiċi u dermatoloġiċi. Matul l-aħħar ftit deċennji, l-antiossidanti ntużaw ukoll fl-industrija tal-kosmetiċi biex jipprevjenu jew idewmu t-tixjiħ tal-ġilda. Huwa rrappurtat li radikali ħielsa u speċi ta 'ossiġnu reattiv (ROS) huma assoċjati ma' diversi mard, bħax-xjuħija u mard relatat ma 'l-età [1]. Interessanti, il-ħsara radikali ħielsa fuq il-ġilda kkawżata mill-istress tal-irradjazzjoni UV u s-ROS għandhom rwol importanti fil-proċess tat-tixjiħ tal-ġilda [2,3]. L-antiossidanti huma rrappurtati li jinterferixxu mal-proċess ta 'ossidazzjoni billi jeliminaw ir-radikali ħielsa u ROS jew billi jikelataw metalli katalitiċi ta' ossidazzjoni [4]. Għalhekk, kien hemm żieda drammatika fin-numru ta 'applikazzjonijiet ta' antiossidanti jew supplimenti nutrizzjonali antiossidanti biex inaqqsu l-istress ossidattiv jew il-ħsara kkawżata mill-istress ossidattiv fil-ġisem [5,6]. Madankollu, xi antiossidanti kimiċi, inklużi askorbat tas-sodju, tert-butyl hydroxyanisole (BHA), erythorbate tas-sodju, u tert-butyl hydroxytoluene (BHT), intwerew li jippromwovu effetti karċinoġeniċi fuq is-saħħa tal-bniedem [7]. Għalhekk, it-tkabbir mgħaġġel ta 'studji dwar antiossidanti naturali derivati ​​mill-pjanti seħħ matul l-aħħar deċennji. Importanti, instab li żidiet fil-livell ta 'ROS jistgħu jaċċelleraw il-pigmentazzjoni tal-ġilda. Fost ir-ROS derivati ​​minn melanocytes u keratinocytes, l-ossidu nitriku, NO, jistimula s-sintesi tal-melanin billi jsaħħaħ il-livelli ta 'espressjoni tal-proteini ta' tyrosinase u proteina 1 relatata mat-tyrosinase (TRP1) [8,9]. L-effett ta 'ROS fuq il-produzzjoni tal-melanin ġie studjat bl-użu ta' diversi antiossidanti, bħal N-acetyl cysteine, biex jabolixxi l-azzjoni tal-ormon li jistimula -melanocyte-stimulating indott mill-UVB (-MSH) [10].

Il-melanin hija prodotta u mnixxija minn melanoċiti li huma mqassma fis-saff bażali tal-epidermide tal-ġilda [11]. L-ewwel żewġ passi tal-mogħdija tal-melanoġenesi fil-bnedmin huma l-idrossilazzjoni ta 'L-tyrosine għal 3-4-dihydroxy phenylalanine (L-DOPA) u l-ossidazzjoni ta' L-DOPA għal o-dopaquinone. Tyrosinase (EC 1.14.18.1) hija enzima li tillimita r-rata li tikkatalizza kemm l-ewwel żewġ reazzjonijiet matul il-melanoġenesi [12]. Il-melanina għandha rwol vitali fil-protezzjoni tal-ġilda kontra l-ħsara ultravjola (UV) tax-xemx u hija wkoll responsabbli għall-kulur tax-xagħar, il-ġilda u l-għajnejn. Ġie rrappurtat li diversi disturbi dermatoloġiċi, bħal spots tal-età, melasma, melanoderma post-infjammatorja, freckles, u siti ta 'ħsara aktinika, li jirriżultaw mill-akkumulazzjoni ta' livell eċċessiv ta 'melanin epidermali [13]. L-inibituri tas-sintesi tal-melanin ġew applikati dejjem aktar fi prodotti għall-kura tal-ġilda għat-trattament jew il-prevenzjoni ta 'disturbi iperpigmentati tal-ġilda [14,15]. Barra minn hekk, antiossidanti, bħal arbutin jew kojic acid [16], intużaw fit-trattament tal-iperpigmentazzjoni [17]. Riċentement, il-kożmetiċi li jbajdu l-ġilda ammontaw għal proporzjon kbir ta 'prodotti kożmetiċi. Mhux biss in-nisa b'ġilda skura, iżda wkoll dawk li qed jippruvaw ilaħħqu ma 'tikek skuri fuq il-ġilda tagħhom li jirriżultaw minn dawl UV, tqala, jew età akbar jagħmlu użu wiesa' minn dawn il-prodotti li jbajdu l-ġilda.

Melanogenesis hija regolata minn fatturi multipli. Pereżempju, proteina relatata mat-tyrosinase-1 (TRP1), fattur ta' traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmja (MITF), u proteina relatata mat-tyrosinase-2 (TRP2) ġew irrappurtati li jirregolaw il-produzzjoni ta' melanin [18–20 ]. Ir-riċettur tal-melanocortin 1 (MC1R) jidher ukoll b'mod prominenti fis-sintesi tal-melanin indotta minn -MSH [21]. Hemm diversi mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni involuti fil-produzzjoni tal-melanin. Fost il-mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni differenti li jirregolaw il-produzzjoni tal-melanin, l-attivazzjoni tal-proteina kinażi A (PKA) medjata minn AMP ċikliku (cAMP) għandha rwol kritiku fir-regolazzjoni tal-melanoġenesi [22]. Fil-mogħdija tas-sinjalar cAM-PKA, cAMP jinduċi l-attivazzjoni ta 'PKA [23], li hija segwita minn fosforilazzjoni ta' proteina li torbot l-element tar-rispons cAMP (CREB). CREB huwa fattur ta 'traskrizzjoni intraċellulari li jistimula l-espressjoni tal-ġene tal-fattur tal-mikroftalmja (MITF), li huwa importanti fil-melanoġenesi. MITF huwa fattur ta 'traskrizzjoni li jingħaqad mar-reġjuni promoturi tal-ġeni melanoġeniċi tyrosinase, TRP1, u TRP2, u jirregola l-espressjoni tagħhom [24,25]. Wara, il-kontenut ta 'melanin intraċellulari jiżdied [26]. Ġie rrappurtat li -MSH iżid il-livelli ta 'cAMP u ġeneralment jiġi applikat biex jattiva l-fosforilazzjoni ta' CREB u mbagħad itejjeb il-livelli tal-proteini MITF [27].

L-espressjoni tal-MITF hija regolata minn diversi mogħdijiet ta' sinjalazzjoni. c-Jun N-terminal kinase (JNK) u p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK) huma involuti fl-attivazzjoni tal-espressjoni MITF u l-espressjoni konsegwenti ta 'tyrosinase miżjuda. Sinjali ta 'attivazzjoni ta' kinażi li jirrispondu extraċellulari (ERK) iżidu wkoll il-fosforilazzjoni CREB u l-espressjoni sussegwenti MITF, li timmodula s-sintesi tal-melanin [28,29]. Għalhekk, diversi aġenti li jbajdu l-ġilda kienu rrappurtati li jinibixxu l-attività tat-traskrizzjoni tal-MITF billi naqqsu l-livelli tal-espressjoni tal-proteini ta 'tyrosinase, TRP1, u TRP2 permezz ta' downregulation tal-fosforilazzjoni MITF medjata minn p38MAPK. Barra minn hekk, il-mogħdija ERK ġiet deskritta li hija involuta fir-regolamentazzjoni tal-MITF matul il-melanoġenesi [30,31]. L-attivazzjoni ta 'ERK phosphorylates MITF, li twassal għal degradazzjoni ta' MITF, li tirriżulta fi tnaqqis tal-kontenut ta 'melanin [32,33].

L-istress ossidattiv jista 'jkun ir-riżultat jew ta' produzzjoni żejda ta 'ROS jew tnaqqis fid-difiża antiossidanti [1]. It-tfittxija għal u l-applikazzjonijiet ta 'antiossidanti naturali jibqgħu fil-fokus ta' bosta timijiet ta 'riċerka madwar id-dinja kollha. Riċentement, kien hemm interess dejjem jikber fir-riċerka u l-iżvilupp ta 'fitokimiċi, bħal antiossidanti naturali u komposti fenoliċi minn diversi sorsi naturali, li jistgħu jintużaw bħala nutraċewtiċi, kożmetiċi kontra t-tixjiħ, u prodotti mediċinali [34]. Phoenix dactylifera L. huwa wieħed mill-għelejjel ewlenin tal-frott prodotti fil-Lvant Nofsani u l-Afrika ta 'Fuq [35,36]. Studji preċedenti rrappurtaw li l-frott ta 'P. dactylifera L. juri attivitajiet antiossidanti, ta' tneħħija tar-radikali ħielsa, antimikrobiċi u anti-infjammatorji [37,38]. L-effetti funzjonali ta 'P. dactylifera L. mhumiex biss ristretti għall-frott infushom iżda wkoll għaż-żerriegħa tagħhom, li huma tip ta' prodott sekondarju tal-frott [39,40]. Minħabba l-proprjetajiet antiossidanti tiegħu, l-estratti taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. jistgħu jservu bħala sors ta' sustanzi antiossidanti li jaġixxu kontra l-istress ossidattiv [41-43]. Madankollu, saru ftit studji dwar l-applikazzjonijiet taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. għall-iżvilupp ta' prodotti kożmeċewtiċi. Dawn iż-żrieragħ ġeneralment jintremew bħala skart, iżda s-sinifikat tagħhom bħala ingredjent kożmetiku funzjonali huwa enfasizzat hawnhekk. Sal-lum, ma kien hemm l-ebda rapporti dwar il-mekkaniżmu ta 'azzjoni tal-estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. fil-qasam tal-kożmetiċi għall-kura tal-ġilda jew l-effetti tal-estratt taż-żerriegħa fuq il-produzzjoni tal-melanin. Il-fokus tal-istudju preżenti kien li jiddetermina l-potenzjal tal-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. bħala inibitur tal-melanoġenesi għall-industrija tal-kosmetiċi.

Il-mekkaniżmi sottostanti l-effetti inibitorji tal-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. fuq il-melanoġenesi għadhom ma ġewx investigati. L-għan tal-istudju attwali kien li jinvestiga l-karatteristiċi antiossidanti u l-mekkaniżmi potenzjali ta 'azzjoni tal-estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. fuq il-melanoġenesi billi jeżamina r-regolaturi tat-traskrizzjoni MITF u l-fosforilazzjoni tar-regolaturi tal-mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni MAPK u PKA.

cistanche friska

2. Materjali u Metodi

2.1. Kimiċi u Reaġenti

Ir-reaġenti kimiċi użati fl-istudju nxtraw minn Sigma-Aldrich Chemical Co. (St. Louis, MS, USA). L-antikorpi kienu minn Santa Cruz Biotech (Santa Cruz, CA, USA) u r-reaġent ECL kien minn Millipore (Billerica, MA, USA).

2.2. Preparazzjoni u Estrazzjoni ta 'P. dactylifera Estratt taż-Żerriegħa

Frott imnixxef ta' P. dactylifera L. inħasad f'2019 minn ħwienet tradizzjonali li jinsabu fil-Belt ta' Medina, l-Għarabja Sawdija. Iż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. ġew maħsula kompletament, esposti għad-dawl tax-xemx, imnixxfa bl-arja għal ġurnata waħda, u mbagħad imnixxfa f'80 ◦C għal 2 h f'forn. Iż-żrieragħ imnixxfa ġew polverizzati għal trab fin (#50 malji) b'mitħna impenjata (Retsch Ultra Centrifugal Mill and Sveving Machine, Tip ZM1, Haan, il-Ġermanja). It-trab inġabar fi flixkun tal-ħġieġ issiġillat u maħżun f'25 ◦C sakemm jintuża. Trab taż-żerriegħa P. dactylifera L. imnixxef pulverizzat (2 g) tqiegħed f'tazza ta 'estrazzjoni li fiha 10 mL ta' ilma distillat. Sussegwentement, l-estrazzjoni ultrasonika twettqet bil-mudell ULTRAsonikTM 57H (250 W, C, u A Sales Industrial Supplies, Yucaipa, CA, USA). Il-frekwenza tax-xogħol kienet 45 kHz għal 30 min. Wara l-estrazzjoni, il-kampjuni ġew ċentrifugati f'4500 rpm għal 50 min f'25 ◦C b'Eppendorf Centrifuge 5810 R (Hamburg, il-Ġermanja). Is-supernatanti ġew miġbura u ffiltrati b'filtru tan-najlon (daqs tal-pori: 0.45 μm) u l-filtrat kien ikkonċentrat għal 9.8 mg/mL.

2.3. Analiżi tal-Kromatografija Likwida Ultra-Performance (UPLC) tal-Estratt taż-Żerriegħa ta' P. dactylifera u l-Aċidu Feruliku

L-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera ġie analizzat bl-użu ta' klassi ACQUITY UPLC H b'ditekter ta 'array photodiode (Waters, Milford, MA, USA). Il-kolonna kienet kolonna ACQUITY UPLC BEH C18, 130 Å, 1.7 μm, 2.1 mm × 100 mm. Il-fażi mobbli A kienet 0.5 fil-mija aċidu aċetiku, u l-fażi mobbli B kienet aċetonitrile. Għall-punti tal-ħin 0 u 5 min, il-proporzjon perċentwali ta 'A/B kien 95/5; għal 20 min, il-proporzjon perċentwali ta 'A/B kien 5/95; għall-punti tal-ħin 21 u 25 min, il-proporzjon perċentwali ta 'A/B kien 95/5. L-aċidu feruliku (1 ppm) intuża bħala l-istandard pożittiv.

2.4. Assaġġ ta 'Attività ta' Tkessiħ tad-DPPH

F'dan l-assaġġ, il-vitamina Ċ ({{0}}.5 mg/mL) u BHA (0.1 mg/mL) intużaw bħala standards antiossidanti. L-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. f'diversi konċentrazzjonijiet (0.{0049, 0.0245, u 0.049 mg/mL) ġie miżjud ma' 2.9 mL ta' soluzzjoni DPPH (60 μM). Komponenti antiossidanti fl-estratt taż-żerriegħa jistgħu jagħtu l-idroġenu lil DPPH u jikkonvertu DPPH għall-forma mnaqqsa. It-tnaqqis li jirriżulta fl-assorbiment f'517 nm ġie rreġistrat bl-użu ta 'spettrofotometru UV-Vis [44].

2.5. ABTS flimkien ma 'Assaġġ tal-Kapaċità ta' Tkessiħ

L-ABTS flimkien mal-kapaċità ta' tkessiħ tal-estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. tqabbel ma' dawk tal-vitamina Ċ ({{0}}.9 mg/mL) u BHA ({{10}}. 9 mg/mL). Għal dan l-assaġġ, intuża ABTS plus. Il-katjoni ġiet prodotta l-ewwel billi tirreaġixxi s-soluzzjoni ta 'ABTS (7 mM) ma' persulfate tal-potassju (2.45 mM), u t-taħlita tħalliet toqgħod fid-dlam għal mill-inqas 6 sigħat qabel l-użu. L-assorbiment f'734 nm tkejjel 10 min wara t-taħlit ta' konċentrazzjonijiet differenti tal-estratt taż-żerriegħa (0.0098, 0.049, u 0.098 mg/mL) b'1 mL ta' ABTS flimkien ma' soluzzjoni [45].

2.6. Determinazzjoni tal-Kontenut Fenoliku Totali

Il-kontenut fenoliku totali ġie ddeterminat bl-użu tar-reaġent Folin–Ciocalteu [46], u l-aċidu galliku (2 ug/mL) ġie impjegat bħala standard pożittiv. Konċentrazzjonijiet differenti ta 'P. dactylifera L. estratt taż-żerriegħa (0.{0196, 0.{098, u 0.196 mg/mL) ġew ippreparati fi 80 fil-mija metanol; 100 μL ta 'estratt ġew trasferiti f'tubu tat-test u 0.5 mL ta' reaġent Folin–Ciocalteu (preċedentement dilwit 10-darbiet b'ilma dejonizzat) ġew miżjuda u mħallta. It-taħlita tħalliet toqgħod f'temperatura tal-kamra għal 5 min; Ġie miżjud 1.5 mL ta '20 fil-mija karbonat tas-sodju. Wara wieqaf f'temperatura tal-kamra għal sagħtejn, l-assorbanza nqrat f'760 nm bl-użu ta 'spettrofotometru UV-Vis.

2.7. Determinazzjoni tal-Kapaċità tat-Tnaqqis

Vitamina Ċ ({{0}}.008 mg/mL) jew BHA (4.8 mg/mL) ġew utilizzati bħala standards pożittivi f'dan l-assaġġ. Il-kapaċità tat-tnaqqis tal-estratt taż-żerriegħa ġiet iddeterminata skont il-metodu deskritt minn Oyaizu [47]. Diversi konċentrazzjonijiet ta' estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. (0.0{073, 0.036, 0.073 mg/mL) tħalltu ma' buffer tal-fosfat (2.5 mL, 0.2 M, pH 6.6 ) u ferricyanide tal-potassju [K3Fe (CN)6] (2.5 mL, 1 fil-mija w/v). It-taħlita ġiet inkubata f'50 ◦C għal 20 min. Aċidu trikloroaċetiku (2.5 mL, 10 fil-mija w/v) ġie miżjud mat-taħlita, li mbagħad ġiet ċentrifugata f'1000 × g għal 10 min. Is-saff ta 'fuq tas-soluzzjoni (2.5 mL) tħallat ma' ilma distillat (2.5 mL) u FeCl3 (0.5 mL, 0.1 fil-mija w/v), u tkejjel l-assorbiment f'700 nm.

2.8. Kejl tal-Ħadid (II) Ion Chelating Kapaċità

Għall-kejl tal-kapaċità ta' kelazzjoni Fe2 plus -ion tal-estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L., EDTA (0.02, 0.04, u 0.0} {10}}.08 mg/mL) intuża bħala standard pożittiv. Konċentrazzjonijiet differenti ta 'l-estratt taż-żerriegħa (0.0196, 0.098, u 0.196 mg/mL) ġew miżjuda ma' soluzzjoni FeCl2 (0.05 mL, 1 mM). It-taħlita ta 'reazzjoni kienet irreaġixxa b'ferrozine (0.1 mL, 1 mM), imbagħad it-taħlita ġiet kwantifikata għal 1 mL bil-metanol u inkubata f'25 ◦C għal 10 min. L-assorbenza tat-taħlita ta 'reazzjoni kienet imkejla f'562 nm [48].

2.9. Assaġġ tal-Vijabilità taċ-Ċelluli

L-assaġġ tal-vijabbiltà taċ-ċelluli sar bl-użu tal-metodu MTT [49]. Iċ-ċelloli ġew esposti għal diversi konċentrazzjonijiet ta' estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. (0.{049, 0.245, u 0.49 mg/mL) għal 24 siegħa f'37 ◦C u 5 fil-mija CO2 f'inkubatur umidifikat u s-soluzzjoni MTT ġiet miżjuda mal-bjar. Id-derivattiv li ma jinħallx ta 'MTT ġie solubilizzat b'etanol-DMSO (soluzzjoni ta' taħlita 1:1). L-assorbiment tal-bjar f'570 nm tkejjel bl-użu ta 'microplate reader. Iċ-ċelluli B16F10 (BCRC60031) inkisbu miċ-Ċentru ta 'Ġbir u Riċerka tal-Bijoriżorsi (BCRC), il-belt ta' Hsinchu, it-Tajwan. Iċ-ċelloli nżammu f'DMEM (Hyclone, Logan, UT, USA) supplimentati b'10 fil-mija serum bovin tal-fetu u 1 fil-mija antibijotiċi. Barra minn hekk, l-effett taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. fuq il-vijabbiltà taċ-ċelluli B16F10 ġie evalwat ukoll bil-metodu ta' analiżi ta 'esklużjoni ta' trypan blue. Wara t-trattament bl-estratt taż-żerriegħa, iċ-ċelloli ġew trypsinizzati u ċentrifugati biex jiġbru l-pellet. Il-pellet taċ-ċelluli ġie sospiż mill-ġdid fi 300 μL ta 'medja tal-kultura taċ-ċelluli DMEM. Alikwot żgħir ta 'sospensjoni taċ-ċelluli (20 μL) tħallat bil-mod ma' 10 μL trypan blue (4 fil-mija f'PBS). In-numru taċ-ċelluli kien magħdud (ċelluli mhux vijabbli kienu blu u ċelluli vijabbli mhux imtebba) bl-użu ta 'emoċitometru taħt il-mikroskopju.

2.10. Kejl tal-Attività Tyrosinase tal-faqqiegħ

Is-soluzzjoni tat-tyrosinase tal-faqqiegħ (10 μL, 200 unitajiet) ġiet miżjuda ma 'mikroplate ta' 96-tajjeb. It-taħlita ta' reazzjoni kien fiha 5 mM ta' L-DOPA maħlul f'salina buffered b'fosfat (PBS) (50 mM, pH 6.8), u estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. (0.049, 0.245) , u 0.49 mg/mL), aċidu kojic (200 mM; 0.03 mg/mL), jew arbutin (2 mM; 0.54 mg/mL). It-taħlita tal-assaġġ ġiet inkubata f'37 ◦C għal 30 min u l-assorbiment tad-dopachrome prodott tkejjel f'490 nm. Il-kejl tal-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ sar kif deskritt qabel [50].

2.11. Determinazzjoni tal-Kontenut ta' Melanin

Iċ-ċelloli B16F10 ġew ittrattati b'-MSH (100 nM) għal 24 siegħa u mbagħad ittrattati jew b'estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. (0.0245–0.147 mg/mL) jew arbutin (0.54 mg/mL) għal 24 siegħa addizzjonali. Wara t-trattament, il-gerbub taċ-ċelluli ġew solubilizzati f'soluzzjoni ta 'NaOH (1 N) f'60 ◦C għal 60 min. Il-kontenut tal-melanin ġie skopert f'405 nm, kif deskritt qabel minn Tsuboi [51].

Cistanche jinibixxi l-produzzjoni tal-melanin.

2.12. Kejl tal-Attività Intraċellulari tat-Tyrosinase

L-attività intraċellulari tat-tyrosinase ġiet iddeterminata kif deskritt qabel [52]. Iċ-ċelloli ġew ittrattati b'-MSH (100 nM) għal 24 siegħa u mbagħad b'estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. (0.0245–0.147 mg /mL) jew arbutin (0.54 mg/mL) għal 24 siegħa. Wara t-trattament, l-estratti taċ-ċelluli (100 μL) tħalltu ma 'soluzzjoni ta' L-DOPA ippreparata friska (0.1 fil-mija f'PBS) u inkubati f'37 ◦C, u l-assorbiment f'490 nm ġiet imkejla.

2.13. Western Blotting Esperiment

Iċ-ċelloli ġew ittrattati bl-estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. ({{0}}.0245, 0.0368, 0.{ {14}}49, u 0.147 mg/mL) jew arbutin (0.54 mg/mL) u mbagħad lysed f'PBS li fih nondiet P—40 (1 fil-mija), sodium deoxycholate (0.5 fil-mija), sodium dodecyl sulfat (SDS, 0.1 fil-mija), aprotinin (5 ug/mL), phenylmethylsulfonyl fluworide (100 ug/mL), pepstatin A (1 ug/mL), u EDTA (1 mM) f'4 ◦C għal 20 min. Lisati totali ġew ikkwantifikati bl-użu ta 'kit mikro BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Proteini (30 ug) ġew solvuti permezz ta 'elettroforesi tal-ġel SDS-polyacrylamide u ttrasferiti b'mod elettroforetiku għal membrana tal-fluworidu tal-polyvinylidene. Il-membrana ġiet imblukkata f'5 fil-mija ħalib mingħajr xaħam f'PBST (PBS b'0.05 fil-mija Tween-20) u inkubata f'4 ◦C matul il-lejl bl-antikorpi primarji li ġejjin dilwiti f'PBST: MITF Ab (1:1000), TRP1 Ab (1:6000), TRP2 Ab (1:1000), MC1R Ab (1:500), GAPDH Ab (1:1500), tyrosinase Ab (1:2000), p-p38 Ab (1:500), p38 Ab (1:500), p-JNK Ab (1:500), JNK Ab (1:500), p-ERK Ab (1:500), ERK Ab (1:500), p-CERB Ab (1: 500), u CERB Ab (1:200), kollha minn Santa Cruz Biotech (Dallas, TX, USA)). L-antikorpi marbuta ġew skoperti minn antikorp sekondarju konjugat bil-perossidasi tar-ravanell (Amersham Corp.) segwit minn sistema ta 'skoperta ECL (Amersham) skond l-istruzzjoni tal-manifattur.

2.14. Assaġġ tal-Inibitur tal-PKA

Iċ-ċelloli ġew ittrattati b'-MSH (100 nM) għal 24 siegħa segwiti b'żieda ta 'siegħa ta' 10 μM tar-regolatur PKA H89. Wara t-trattament, l-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L. (0.147 mg/mL) u H89 ġew miżjuda maċ-ċelloli u ġew inkubati għal 23 siegħa addizzjonali. Il-kontenut tal-melanin ġie determinat kif deskritt hawn fuq.

2.15. Analiżi Statistika

L-analiżi statistika twettqet bl-użu tat-test post hoc ta’ Tukey, li ntuża għat-tqabbil ta’ data mkejla, bl-użu tal-Pakkett Statistiku għax-Xjenzi Soċjali (SPSS) verżjoni 22.0 Softwer statistiku (SPSS Inc., Chicago, IL, L-ISTATI UNITI). * p < 0.05="" tqieset="" sinifikanti,="" **="" p="">< 0.01,="" ***="" p=""><>

3. Riżultati

3.1. Analiżi UPLC ta 'P. dactylifera L. Estratt taż-żerriegħa

Ir-riżultati tal-analiżi UPLC huma murija fil-Figura 1A, B. Il-Figura 1A turi l-quċċata koinċidenza tal-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. u l-aċidu feruliku f'330 nm. Il-Figura 1B turi spettri tal-iskanjar simili bejn 220 u 500 nm għall-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L. u l-aċidu feruliku.

3.2. Karatteristiċi Antiossidanti ta 'P. dactylifera L. Estratt taż-żerriegħa

L-attività antiossidanti tal-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. in vitro żvelat il-preżenza ta' potenzjal antiossidant. Fl-assaġġ DPPH, vitamina Ċ ({{0}}.05 mM; 0.53 mg/mL) u tert-butyl hydroxyanisole (BHA) (0 .1 mg/mL) intużaw bħala standards antiossidanti pożittivi. Il-kapaċità ta' tneħħija tad-DPPH tal-estratt kienet 49.97 ± 2.9 fil-mija, 81.36 ± 0.56 fil-mija, u 78.53 ± 3.83 fil-mija tal-kontroll għall-konċentrazzjonijiet tal-estratt ta' 0.0{{ 31}}49, 0.0245, u 0.049 (mg/mL), rispettivament. B'paragun, il-kapaċitajiet tat-tkessiħ tal-vitamina Ċ u BHA kienu 90.12 ± 0.31 fil-mija u 90.44 ± 0.49 fil-mija, rispettivament (Figura 2A).

Dan il-katjoni radikali ABTS huwa ta 'kulur blu u huwa reattiv lejn il-biċċa l-kbira tal-antiossidanti. Matul din ir-reazzjoni, il-katjoni radikali ABTS blu jiġi kkonvertit lura għall-forma newtrali bla kulur tiegħu. Ir-reazzjoni ġiet immonitorjata spettrofotometrikament. L-ABTS flimkien mal-kapaċità tat-tkessiħ tal-estratt kienet 5.69 ± 1.36 fil-mija, 18.81 ± 0.68 fil-mija, u 66.82 ± 8.51 fil-mija tal-kontroll f'konċentrazzjonijiet ta' 0.0{{16 }}98, 0.{{20}}49, u 0.098 mg/mL, rispettivament. B'kuntrast, l-ABTS flimkien ma 'kapaċitajiet ta' scavenging ta 'vitamina Ċ (0.9 mg/mL) u BHA (0.9 mg/mL) kienu 95.52 ± 0.12 fil-mija u 40.3 ± 0.83 fil-mija, rispettivament. Ir-riżultati fil-Figura 2B jindikaw li l-estratt taż-żerriegħa jneħħi ammont sinifikanti tal-ABTS flimkien ma 'radikali.

Biex jiġi ddeterminat il-kontenut fenoliku totali tal-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L., l-aċidu galliku (2 ug/mL) intuża bħala standard pożittiv. Ir-riżultati fil-Figura 2C jindikaw li l-kontenut fenoliku totali fi 0.0196, 0.{{20}}98, u 0. 196 (mg/mL) ta 'l-estratt kienu 33.43 ± 2.33 fil-mija, 117.22 ± 7.81 fil-mija, u 195.4 ± 10.91 fil-mija, rispettivament. L-ekwivalenti tal-aċidu galliku (GAE) tal-konċentrazzjonijiet imsemmija hawn fuq tal-estratti taż-żerriegħa kienu 0.068 ± 0.01, 0.365 ± 0.01, u 0.642 ± 0.03, rispettivament (Figura 2C).

3.3. Effetti Inibitorji ta 'P. dactylifera L. Estratt taż-Żerriegħa fuq Melanogenesis

Ir-riżultati murija fil-Figura 4A juru li 0.049 mg/mL ta' estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L.ma eżerċitax effett inibitorju fuq l-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ. Min-naħa l-oħra, il-perċentwali tal-inibizzjoni tal-enżimi kienu 8.34 ± 2.67 fil-mija u 33 ± 2.36 fil-mija tal-kontroll għall-0.245 u 0.49 mg/mLP. dactylifera L. trattamenti ta 'estratt taż-żerriegħa, rispettivament. Barra minn hekk, il-perċentwali ta' inibizzjoni ta' tyrosinase ta' kojic acid (200 μM; 0.{03 mg/mL) u arbutin (2 mM; 0.54 mg/mL) ) kienu 56.26 ± 5.06 fil-mija u 64.56 ± 2.88 fil-mija tal-kontroll, rispettivament (Figura 4A). Għalhekk, il-konċentrazzjonijiet ogħla ta 'P. dactylifera L. estratt taż-żerriegħa (0.245 u 0.49 mg/mL) jistgħu jirrappreżentaw livelli inibitorji ta' faqqiegħ tyrosinase.

Fil-Figura 4B, ir-riżultati indikaw li biss 0.147 mg/mL ta 'estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. jista 'jnaqqas b'mod sinifikanti l-kontenut ta' melanin fiċ-ċelloli tal-melanoma B16F10. Wara t-trattament, il-kontenut ta' melanin fiċ-ċelloli B16F10 kien 80.66 ± 5.43 fil-mija ta' dak tal-kontroll. Għall-istandard pożittiv, arbutin (0.54 mg/mL), il-kontenut ta 'melanin intraċellulari li jifdal kien 61.19 ± 8.17 fil-mija ta' dak tal-kontroll. Ir-riżultati indikaw li 0.147 mg/mL ta 'estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. wera effetti iżgħar minn arbutin. Il-valuri ta 'attività ta' tyrosinase intraċellulari li kien fadal kienu 85.1 ± 8.1 fil-mija u 73.7 ± 11.9 fil-mija għall-0.098 u 0.147 mg/mL ta 'estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L., rispettivament. L-attività tyrosinase intraċellulari li fadal kienet 64.3 ± 14.9 fil-mija tal-kontroll wara li ċ-ċelloli ġew ittrattati b'arbutin (Figura 4C). Ir-riżultati indikaw li konċentrazzjonijiet ogħla ta 'estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. xorta wrew effett inibitorju iżgħar fuq l-attività tyrosinase indotta minn -MSH fiċ-ċelloli B16F10 minn arbutin.

3.4. L-Estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. Inibixxi l-Livelli ta' Espressjoni ta' Proteini Involuti fil-Melaninogeneżi

Western blots intużaw biex jeżaminaw il-livelli ta 'espressjoni ta' proteini relatati mal-melanoġenesi fiċ-ċelloli B16F10 (Figura 5A). Ir-riżultati jindikaw li t-trattament b'diversi konċentrazzjonijiet ta 'estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. wassal għal livelli mnaqqsa ta 'MC1R, MITF, tyrosinase, TRP1, u TRP2. L-effetti inibitorji tal-estratt fuq l-espressjoni tal-proteini kienu evidenti f'konċentrazzjoni ta' {{10}}.147 mg/mL. Il-bidla darbiet fil-livell ta' espressjoni tal-proteini għal MC1R kienet 0.74 ± 0.02; għall-MITF kien {{20}}.51 ± 0.03; għal tyrosinase kien 0.54 ± 0.26; għal TRP-1 kien 0.57 ± 0.15; u għal TRP-2 kien 0.49 ± 0.1 (Figura 5B).

Il-livelli ta 'espressjoni ta' proteini ta 'sinjalazzjoni relatati mal-melanoġenesi ġew eżaminati bl-użu ta' Western blots (Figura 5C). Ir-riżultati jindikaw li 0.147 mg/mL tat-trattament tal-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L. apparentement wassal għal livelli mnaqqsa ta 'p-p38, p-JNK, p-ERK, u p-CREB. Il-bidla darbiet tal-livell tal-espressjoni tal-proteini għal p-p38 kienet 0.88 ± 0.15; għal p-JNK kien 0.68 ± 0.39; għal p-ERK kien 0.65 ± 0.23; u għal p-CREB kien 0.44 ± 0.07 (Figura 5D).

3.5. P. dactylifera L. L-Estratt taż-Żerriegħa Ma Taffettwax l-Espressjoni tal-Ġene tat-Tyrosinase, TRP1, TRP2, jew MITF

Il-livelli ta 'espressjoni tal-ġeni ta' proteini relatati mal-melanoġenesi, bħal tyrosinase, TRP1, TRP2, u MITF ġew eżaminati permezz ta 'reazzjoni kwantitattiva tal-katina tal-polimerażi f'ħin reali (RT-PCR). Il-livelli ta' espressjoni relattivi normalizzati ta' tyrosinase/GAPDH għal 0.0367, 0.049, u 0.147 mg/mL ta' P. It-trattamenti ta 'estratt taż-żerriegħa ta' dactylifera L. kienu 3.51 ± 0.52, 2.38 ± 0.24, u 1.64 ± 0.55, rispettivament. Għal TRP-1/GAPDH, il-livelli ta' espressjoni normalizzati relattivi għal 0.0367, 0.049, u {{4{{43} }}}.147 mg/mL ta 'P. dactylifera L. trattamenti ta' estratt taż-żerriegħa kienu 1.64 ± 0.2, 1.15 ± 0.02, u 0. 89 ± 0.07, rispettivament. Il-livelli ta' espressjoni normalizzati relattivi ta' TRP-2/GAPDH għal 0.{0367, 0.{049, u 0.147 mg /mL ta 'P. dactylifera L. estratt taż-żerriegħa kienu 1.08 ± 0.13, 0.85 ± 0.01, u 0.7 ± 0.05, rispettivament. Għal MITF/GAPDH, il-livelli relattivi ta 'espressjoni normalizzati għal 0.0367, 0.049, u 0.147 mg / mL ta' trattamenti ta 'estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. kienu 1.48 ± 0.19, 1.03 ± 0.02, u 0.74 ± 0.74 ± 0.05, rispettivament (Figura 0.05).

4. Diskussjoni

Ġie rrappurtat li l-melanoġenesi żżid l-istress ossidattiv ċellulari. Barra minn hekk, diversi antiossidanti, kenniesi ROS, kenniesi inibituri, u inibituri jistgħu jinibixxu s-sintesi tal-melanin medjata mill-UV [54]. Għalhekk, antiossidanti, kenniesi ROS, u inibituri tal-melanoġenesi ġew applikati dejjem aktar għall-kożmetiċi li jbajdu l-ġilda għall-prevenzjoni ta 'iperpigmentazzjoni tal-ġilda mhux mixtieqa [14]. Instab ukoll li l-istimulazzjoni ta 'metallothionein, antiossidant endoġenu jista' jrażżan il-melanoġenesi fil-melanoċiti [55]. Il-ġilda tal-bniedem hija spiss esposta għal sustanzi li jniġġsu ossidanti ambjentali jew dawl UV u hija mħassra minn fatturi ambjentali estrinsiċi. B'mod partikolari, l-irradjazzjoni UV ġiet irrappurtata li tinduċi l-ġenerazzjoni ta 'ROS fil-ġilda u tippromwovi l-perossidazzjoni tal-lipidi tal-membrana taċ-ċelluli [56]. Biex tikkontrobattu l-istress ossidattiv, il-ġilda hija mgħammra b'sistemi antiossidanti partikolari [57].

Biex tiġi elucidata l-attività antiossidanti tal-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L., DPPH u ABTS flimkien ma' attività ta 'scavenging radikali, kontenut fenoliku totali, kapaċità ta' tnaqqis, u kapaċità ta 'kelating tal-jone tal-metall tal-estratt ġew determinati kif deskritt qabel [47,48]. L-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L. eżerċita attivitajiet antiossidanti konsiderevoli fl-istudji analitiċi kollha msemmija hawn fuq. Ir-riżultati wrew il-potenzjal antiossidant tal-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. fuq firxiet differenti b'effiċjenzi distinti. L-attività tat-tkessiħ tad-DPPH tal-estratt taż-żerriegħa ġiet murija fil-Figura 2A kienet differenti minn dik ta 'ABTS flimkien ma' murija fil-Figura 2B, li seta 'irriżulta minn mekkaniżmi differenti tal-interazzjonijiet antiossidanti-radikali. Barra minn hekk, l-istojkjometrija tar-reazzjonijiet bejn il-komponenti antiossidanti fl-estratt taż-żerriegħa tista 'tvarja, li tirriżulta f'differenza fil-kapaċità ta' tneħħija tar-radikali ħielsa [58]. L-antiossidanti potenzjali fl-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L. jistgħu jikkonvertu kumpless Fe3 plus /ferricyanide għall-forma tal-ħadid, u l-kapaċità ta 'tnaqqis serviet bħala indikatur tal-attività antiossidanti tal-estratt taż-żerriegħa murija fil-Figura 2D. Instab li l-aċidu kojic [59] jaġixxi bħala inibitur tat-tyrosinase minħabba li l-aċidu kojic jaġixxi bħala kelatur tal-metall biex jikkelata l-joni tar-ram u jinibixxi dawk il-joni li jidħlu fis-sit attiv ta 'tyrosinase. Għalhekk, l-antiossidanti fl-estratt taż-żerriegħa jistgħu jiffurmaw kumplessi tal-metall li ma jinħallux ma 'jonji tal-ħadid u mbagħad jinibixxu l-interazzjoni bejn il-joni tal-metall u l-lipidi. Il-kapaċità ogħla ta 'chelating tal-jone tal-metall tal-estratt taż-żerriegħa indikat l-attività antiossidant potenzjali tagħha u l-effetti inibitorji possibbli fuq l-attività tat-tyrosinase (Figura 2E).

Il-prinċipju tal-assaġġ ta 'ROS intraċellulari huwa li DCFH-DA jinfirex permezz tal-membrana taċ-ċellula u huwa idrolizzat enżimatikament għal DCFH permezz ta' esterase; imbagħad DCFH jirreaġixxi ma 'ROS (bħal H2O2) biex jagħti DCF. Żidiet rapidi fid-DCF indikaw l-ossidazzjoni tad-DCFH minn radikali intraċellulari [60]. L-idea wara t-tiftix ta 'antiossidanti ġodda għal attivitajiet li jbajdu l-ġilda tinsab fl-ipoteżi li l-istress ossidattiv li jirriżulta mill-irradjazzjoni UV jista' jikkontribwixxi għall-istimulazzjoni tas-sintesi tal-melanin. L-irradjazzjoni UV ġiet irrappurtata li tipproduċi ROS fit-tessuti tal-ġilda li jistgħu jinduċu l-produzzjoni tal-melanin billi jattivaw tyrosinase [61]. Barra minn hekk, ġie rrappurtat li diversi aġenti li jbajdu l-ġilda jistgħu jinibixxu l-melanoġenesi billi jinteraġixxu ma 'jonji tar-ram fis-sit attiv ta' tyrosinase jew ma 'o-quinones biex jimblukkaw il-polimerizzazzjoni ta' intermedji fil-mogħdija sintetika tal-melanin [62]. Barra minn hekk, il-vitamina Ċ jew il-vitamina E jistgħu jnaqqsu l-ossidazzjoni tal-partiċelli tal-melanin pre-eżistenti. Għalhekk, dawn il-vitamini ġew applikati b'mod wiesa 'fi prodotti li jbajdu l-ġilda [63]. Interessanti, ir-riżultati tagħna wrew il-karatteristiċi antiossidanti tal-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L., li jindika li l-estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. jista 'jaġixxi bħala ingredjent li jbajdu l-ġilda fil-kożmetiċi.

L-assaġġ MTT huwa assaġġ kolorimetriku magħruf li jkejjel l-attività ta 'enzimi ossidorduttażi dipendenti fuq NADH/NADPH ċellulari li jnaqqsu l-MTT għal żebgħa formazan ta' kulur vjola. Dan l-assaġġ jista 'jiġi applikat biex jeżamina ċ-ċitotossiċità potenzjali ta' aġenti mediċinali u materjali tossiċi, peress li dawn l-aġenti jtejbu jew jinibixxu l-vijabbiltà taċ-ċelluli. Ir-riżultati murija fil-Figura 3A kienu skont dawk tal-assaġġ tal-esklużjoni tal-blu Trypan fil-Figura 3B, li jindika li l-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L. ma kellu l-ebda effett ċitotossiku fuq il-vijabbiltà taċ-ċelluli tal-melanoma B16F10.

Tirosinażi tal-faqqiegħ tintuża komunement bħala enzima fil-mira għall-iskrinjar ta 'inibituri potenzjali tal-melanoġenesi. L-ewwel instab li l-firxa tad-dożaġġ ({{0}}.049–0.49 mg/mL) tal-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. jista' jinibixxi l-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ. Ir-riżultati murija fil-Figura 4A jindikaw li l-estratt taż-żerriegħa wera impatti inibitorji aktar baxxi fuq l-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ mill-aċidu kojic. Tyrosinase għandu rwol ewlieni fl-ewwel żewġ passi tal-mogħdija tal-melanoġenesi. Biex jiġi eluċidat l-effett inibitorju veru tal-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. fuq il-produzzjoni tal-melanin, ġew determinati l-kontenut ta' melanin B16F10 u l-attività intraċellulari tat-tirosinażi. Ir-riżultati ppreżentati fil-Figura 4B jindikaw li konċentrazzjoni ogħla ta 'estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. eżerċitat effett inibitorju apparenti fuq il-formazzjoni tal-melanin. Id-dejta wriet li l-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. tassew jimblokka l-melanoġenesi fiċ-ċelloli tal-melanoma. Ma 'dan, ir-riżultati dehru fil-Figura 4C kienu skond ir-riżultati murija fil-Figura 4B. Fl-esperimenti ċellulari msemmija hawn fuq, -MSH intuża bħala induttur biex jistimula s-sintesi tal-melanin. -MSH ġie rrappurtat li jorbot ir-riċettur tal-melanocortin 1 (MC1R) u jattiva adenylate cyclase intraċellulari, li min-naħa tiegħu jikkatalizza ATP għal cAMP u jattiva PKA dipendenti fuq cAMP. Ir-riżultati fil-Figura 5A wrew li l-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L. inibixxa l-espressjoni ta 'MC1R, u b'hekk imblokka l-produzzjoni ta' melanin indotta minn upregulation intraċellulari tal-cAMP medjata minn -MSH. Barra minn hekk, il-mogħdija tas-sinjalar tal-PKA medjata minn cAMP kienet inattivata u l-melanoġenesi ġiet inibita. Biex tikkonferma l-inferenza, wettaqna l-esperimenti ta 'inibitur PKA, u d-dejta murija fil-Figura 4D indikat l-effett inibitorju ta' P. dactylifera L. estratt taż-żerriegħa (0.147 mg/mL) fuq il-melanoġenesi fiċ-ċelloli B16F10 ġie mrażżan minn H{{ 24}}trattament. H89 (N-[2-p-bromocinnamylamino-ethyl]-5-isoquinolinesulphonamide) huwa inibitur selettiv u qawwi tal-PKA. Ir-riżultati jindikaw li s-sinjalar PKA medjat minn cAMP kien affettwat mill-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L..

Tyrosinase, TRP1, u TRP2 huma t-tliet enzimi ewlenin li jirregolaw is-sintesi tal-melanin fiċ-ċelloli tal-mammiferi [64]. Barra minn hekk, MITF huwa r-regolatur traskrizzjoni maġġuri ta 'tyrosinase, TRP1, u TRP2, u huwa l-aktar regolatur importanti tal-pigmentazzjoni tal-melanocyte [65]. Ir-riżultati fil-Figura 5A jindikaw li l-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L. naqqas il-livelli ta 'espressjoni tal-proteini ta' dawn il-proteini relatati mal-melanoġenesi, inibixxi l-attività ta 'tyrosinase, u naqqas il-kontenut ta' melanin fiċ-ċelloli B16F10.

F'dan l-istudju, l-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. irażżan il-fosforilazzjoni CREB u l-attivazzjoni tal-PKA. Din id-dejta tissuġġerixxi li l-mogħdija cAMP-PKA tista 'tkun responsabbli għall-anti-melanogenesis indotta mill-estratt taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. (Figura 5C).

Il-MAPKs ġew irrappurtati li jimmodulaw il-melanoġenesi [66]. Il-familja MAPK tinkludi tliet tipi ta 'proteina kinażi, inkluż kinażi li jirrispondu extraċellulari (ERK), c-Jun N-terminal kinase (JNK), u p38 MAPK. Il-p38 MAPK jista 'jattiva l-proteina li torbot l-element tar-rispons cAMP (CREB u CREB jattiva l-espressjoni ta' MITF, li tikkontribwixxi b'mod pożittiv għas-sintesi tal-melanin [67]. Ir-riżultati fil-Figura 5C jipprovdu evidenza li l-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. jista' jinattiva CREB, JNK, u p38, min-naħa tagħhom jinibixxu l-espressjoni MITF (Figura 5A).Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-effett antimelanoġeniku indott mill-estratt taż-żerriegħa dactylifera L. jista 'jkun medjat minn downregulation tal-mogħdijiet PKA Barra minn hekk, l-irradjazzjoni tad-dawl UV ġiet irrappurtata li tilgħab jidhru b'mod prominenti fil-bidu ta 'diversi disturbi tal-ġilda, inkluż skalar, tikmix u iperpigmentazzjoni [68] Ir-riżultati ssuġġerew li P. dactylifera L. estratt taż-żerriegħa naqqas il-produzzjoni ta' melanin, li jista 'jiġi attribwit għat-tnaqqis ta' ROS intraċellulari.

Biex tevalwa l-effett tal-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. fuq il-produzzjoni taċ-ċelluli tal-melanin, iddeterminajna l-livelli ta' mRNA fiċ-ċelloli B16F10 ittrattati b'estratt taż-żerriegħa -MSH u P. dactylifera L.. Iċ-ċelloli ttrattati b'-MSH wrew livelli miżjuda ta' MITF, tyrosinase, TRP-1, u TRP-2, kif mistenni. Interessanti, ċelluli trattati bl-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L. urew tnaqqis fl-espressjoni tal-mRNA ta 'dawn il-ġeni relatati mal-melanoġenesi. Madankollu, l-ebda differenza statistikament sinifikanti ma kienet teżisti fost il-kolonni, li indika li l-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. ma jaffettwax il-livelli ta' espressjoni tal-ġeni ta 'MITF, tyrosinase, TRP1 u TRP2.

Dan huwa l-prodott tagħna.

Għal aktar informazzjoni, jekk jogħġbok ikklikkja hawn.

Ġie rrappurtat li l-aċidu fenoliku ewlieni misjub fiż-żerriegħa P. dactylifera L. huwa l-aċidu feruliku [69]. L-aċidu ferulic intwera li jinibixxi b'mod effettiv is-sintesi tal-melanin fiċ-ċelluli tal-melanoma B16 billi jinibixxi l-fosforilazzjoni indotta ta' casein kinase 2- ta 'tyrosinase b'mod dipendenti fuq id-doża [70]. Dawn ir-rapporti jappoġġjaw ir-riżultati tagħna murija fil-Figura 1-aċidu ferulic fl-estratt ta 'l-ilma taż-żerriegħa ta' P. dactylifera L. ikkontribwixxa għall-inibizzjoni tal-melanoġenesi fiċ-ċelloli B16F10. Ċertament, komponenti funzjonali oħra fl-estratt taż-żerriegħa għandhom jiġu investigati fil-futur qarib.

Ir-riżultati tagħna indikaw li l-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L. inibixxi l-melanoġenesi fiċ-ċelloli B16F10 billi rregola l-mogħdijiet ta' sinjalazzjoni PKA. Għalhekk, l-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L. jista 'jintuża bħala aġent effettiv li jbajdu l-ġilda.

5. Konklużjonijiet

Dan huwa l-ewwel rapport dwar il-mekkaniżmu ta 'azzjoni ta' P. dactylifera L. estratt ta 'l-ilma taż-żerriegħa fis-sintesi tal-melanin. L-istudju preżenti wera l-involviment tal-mogħdija cAMP/PKA/CREB fl-effett depigmentanti tal-estratt taż-żerriegħa ta 'P. dactylifera L.. Ir-riżultati tagħna indikaw li l-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L. inibixxi l-melanoġenesi fiċ-ċelloli B16F10 billi rregola l-mogħdijiet tas-sinjalar tal-PKA. Għalhekk, l-estratt taż-żerriegħa P. dactylifera L. jista 'jintuża bħala aġent antimelanogenesis dermatoloġiku ġdid u aġent effettiv li jbajdu l-ġilda.