Effetti Antiossidanti, Anti-Melanogenic U Kontra t-Tikmix Ta Phellinus Vaninii

Kuntatt: ali.ma@wecistanche.com

1. Introduzzjoni

Radikali ħielsau speċi ta' ossiġnu reattiv (ROS) huma ġeneralment speċi kimiċi instabbli u reattivi ħafna. Dawn huma prinċipalment derivati ​​minn mogħdijiet metaboliċi enżimatiċi u mhux enżimatiċi fiċ-ċelloli tal-ġisem tal-bniedem permezz tas-sistema tat-trasport tal-elettroni mitokondrijali ta 'respirazzjoni, fagoċitożi, sintesi ta' prostalandin, u s-sistema tar-retikulu endoplasmiku [1]. Madankollu, radikali ħielsa u ROS huma wkoll iġġenerati minn espożizzjoni għal sorsi eżoġeni, inklużi metalli tqal, duħħan tat-tabakk, kimiċi, u sustanzi li jniġġsu industrijali [2]. Ġie rrappurtat li jikkawżaw diversi mard, bħax-xjuħija, mard kardjovaskulari, disturbi respiratorji, dijabete mellitus, rewmatiżmu, u mard tal-fwied [3].

Xanthine oxidase (XO) jikkatalizza l-ossidazzjoni ta 'hypoxanthine għal xanthine u aktar jikkonverti xanthine għal aċidu uriku. Il-gotta hija kkaratterizzata minn konċentrazzjoni elevata ta’ aċidu uriku (iperuriċemija) fid-demm li twassal għal depożitu ta’ kristalli ta’ aċidu uriku fil-ġogi li jikkawżaw infjammazzjoni bl-uġigħ u 5-30 fil-mija tal-popolazzjoni dinjija tbati minn gotta, li hija meqjusa li ikun fattur ta' riskju importanti għas-saħħa tal-bniedem [4,5]. Għat-trattament tal-gotta, inibituri XO li jbaxxu l-konċentrazzjoni tal-aċidu uriku fil-plażma huma ġeneralment impjegati [6]. Għalkemm allopurinol, inibitur XO, intuża għat-trattament tal-gotta, inibitur XO ġdid, febuxostat, ġie żviluppat reċentement. Madankollu, il-mediċina għandha ħafna effetti sekondarji, inklużi epatite, nefropatija, u reazzjonijiet allerġiċi [7]. Għalhekk, it-tfittxija għal inibituri XO ġodda b'attività terapewtika tajba u effetti sekondarji aktar baxxi kompliet.

Tyrosinase hija enzima ossidattiva li tillimita r-rata li fiha r-ram komunement preżenti fil-pjanti, mikro-organiżmi u annimali. Tyrosinase huwa involut fil-mogħdijiet sintetiċi tal-melanin bl-idrossilazzjoni ta' L-tyrosine għal 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) u l-konverżjoni ta' DOPA għal dopaquinone [8]. Il-melanina hija prodotta mill-melanoċiti tal-melanosomi u għandha rwol importanti fid-difiża tal-epidermide mill-effetti ta 'ħsara tar-radjazzjoni ultravjola (UV) mid-dawl tax-xemx. L-iperpigmentazzjoni tal-ġilda li tirriżulta minn żieda fl-attività tal-enzimi sintetiċi tal-melanin b'espożizzjoni eċċessiva għar-radjazzjoni UV tista 'tikkawża disturbi dermatoloġiċi, inklużi melasma, vitiligo u lentigo [9,10]. Riċentement, l-inibituri tat-tyrosinase saru importanti għall-prevenzjoni ta 'problemi ta' pigmentazzjoni u disturbi mediċi oħra relatati mal-melanin. Peress li ħafna nisa jippreferu jħaffu l-irqajja tal-ġilda skura tagħhom, l-industriji mediċi u kosmetiċi ffukaw fuq inibituri tat-tyrosinase biex jittrattaw l-iperpigmentazzjoni tal-ġilda [11]. Biex jittrattaw dawn il-problemi, komposti organiċi li joriġinaw minn mikro-organiżmi u pjanti, bħal kojic acid, arbutin, azelaic acid, gentisic acid, u oħrajn ġew żviluppati bħala aġenti li jbajdu l-ġilda [12]. L-effikaċja tal-komposti li jbajdu hija determinata mill-inibizzjoni tat-tyrosinase f'sistemi ħielsa minn ċelluli jew mill-inibizzjoni tat-tyrosinase ċellulari u sorsi ġodda ta 'inibituri tat-tyrosine minn pjanti u mikro-organiżmi qed jiġu skrinjati kontinwament [13].

It-tixjiħ tal-ġilda huwa proċess bijoloġikament inevitabbli ta 'organiżmi ħajjin u instigat minn fatturi kemm intrinsiċi kif ukoll estrinsiċi. It-tixjiħ intrinsiku tal-ġilda, imsejjaħ ukoll tixjiħ dipendenti fuq l-età jew tixjiħ kronoloġiku, huwa kkawżat minn fatturi fiżjoloġiċi interni tal-ġisem, filwaqt li tixjiħ estrinsiku huwa kkawżat minn ħafna fatturi esterni, inkluż l-espożizzjoni tal-ġilda għar-radjazzjoni UV, tipjip tas-sigaretti, tniġġis tal-arja. , eċċ Dawn il-fatturi jistgħu jikkawżaw t-tikmix, pigmentazzjoni, u bidliet fil-ħxuna tal-ġilda [14]. Il-ġilda hija t-tessut artab ta 'barra jikkonsisti f'tessut epidermali, dermali u taħt il-ġilda. Il-parti l-aktar ta' barra tal-ġilda hija matriċi extraċellulari (ECM) u tikkonsisti minn kollaġen u elastina [15]. Il-kollaġen jipprovdi elastiċità, saħħa u flessibilità tal-ġilda. Iżomm ukoll il-qafas strutturali tal-ġilda u għandu rwol ċentrali fiż-żamma tal-funzjonijiet ċellulari normali fil-morfoġenesi tal-ġilda [16]. Elastin hija proteina ewlenija preżenti fit-tessut konnettiv tal-ECM u tipprovdi elastiċità lill-ġilda. Collagenase, endopeptidase dipendenti fuq iż-żingu, huwa kapaċi jiddegrada l-komponenti tal-ECM, speċifikament, il-collagen tat-tip 1. Elastase, enzima protease, tkisser l-elastin, u l-collagen, u tiddetermina l-proprjetajiet mekkaniċi u strutturali tat-tessut konnettiv tal-ECM [17]. Għalhekk, huwa mixtieq li jiġu żviluppati inibituri farmakoloġiċi biex jipprevjenu t-tixjiħ tal-ġilda, bħal sagging u t-tikmix tal-ġilda.

Il-faqqiegħ ilu jintuża bħala sorsi ta’ ikel tajjeb u mediċina folkloristika tradizzjonali għal eluf ta’ snin f’ħafna pajjiżi differenti. Il-korpi tal-frott tagħhom fihom metaboliti bijoloġikament attivi b'valur mediċinali għoli, inklużi b-glucans, polysaccharides, polyphenols, flavonoids, terpenoids, u komposti organiċi oħra, li jipprovdu stimulazzjoni immuni, antitumorali, anti-ipergliċemiċi, anti-iper- attivitajiet kolesterolemiċi, epatoprotettivi, u inibitorji tal-infjammazzjoni [18-20].

Phellinus vaninii, komunement magħruf bħala 'sanghuang', jappartjeni għal Basidiomycota, Aphyllophorales, Hymenochaetacae u huwa mqassam fl-Asja tal-Lvant u r-Russja [21]. Diversi speċi ta 'faqqiegħ li jappartjenu għall-ġeneru Phellinus, inklużi Ph. baumi, Ph. gilvus, Ph. linteus, Ph. mer- rillii, u Ph. pini, ġew studjati għall-antiossidant mediċinali potenzjali tagħhom, kontra d-dijabete, kontra l-iperlipidem, attivitajiet anti-mikrobiċi, u antitumorali [22,23].

Għalkemm Ph. vaninii sar disponibbli fil-Korea, hemm biss ftit rapporti dwar l-effetti mediċinali tiegħu [24]. Għalhekk, l-iskop ta 'dan l-istudju kien li jevalwa l-effetti antiossidanti, anti-xanthine oxidase, anti-melanogenic u kontra t-tikmix tal-metanol u l-estratti tal-ilma sħun tal-korpi tal-frott Ph. vaninii.

2. Materjali u metodi

2.1. Kimiċi u reaġenti

Butylated hydroxytoluene (BHT), 1,1-diphenyl-2- picryl-hydrazy (DPPH), dimethyl sulfoxide, (DMSO) xanthine oxidase, tyrosinase, L-3,4-dihydroxypheny -lalanine (DOPA), xanthine oxidase, allopurinol, kojic acid, arbutin, collagenase, and porcine pancre- atic elastase nxtraw minn Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA), u l-kimiċi u solventi l-oħra kollha użati għal l-esperimenti ta 'studju kienu ta' grad analitiku.

2.2. Estratt tal-faqqiegħ

Il-korpi tal-frott ta 'Ph. vaninii nkisbu mill-Istitut tar-Riċerka tal-Faqqiegħ tal-Istitut tat-Teknoloġija Agrikola Gyeonggi fil-Korea. Il-korpi tal-frott kienu mnixxfa bl-arja (45 grad għal 48 h) u polverizzati fin. Biex tipprepara l-estratt tal-metanol (ME), 20g tat-trab f'400mL ta' 80 fil-mija metanol inżammu f'orbital shaker (125 rpm) għal 24 siegħa f'25 grad. Is-soluzzjoni ġiet iffiltrata minn karta tal-filtru. Biex tikseb l-estratt tal-ilma sħun (HE), l-istess ammont tat-trab ġie mgħolli għal 3 sigħat b'400mL ta 'ilma distillat dejonizzat u ffiltrat minn karta tal-filtru. Imbagħad, ir-residwu li kien fadal ġie estratt b'400mL ta' 80 fil-mija metanol jew ilma sħun darbtejn, kif deskritt hawn fuq, rispettivament. Imbagħad, l-estratti kkombinati ġew evaporati sa nixfa f'40 grad, u l-ilma li kien fadal tneħħa bi freeze-drier.

Estratt ta' Cistanche

2.3. Kontenut totali ta 'fenoli u flavonoids

Il-kontenut fenoliku totali ta 'ME u HE ġie determinat bl-użu ta' modifika żgħira tal-assaġġ Folin-Ciocalteu [25]. Alikwot ta' 1 mL ta' ME u HE ġie miżjud ma' 1 mL ta' soluzzjoni ta' 10 fil-mija Folin-Ciocalteu. Is-soluzzjoni kienet vortexed u ħalliet għal 3min f'25 grad. Imbagħad, 3 mL ta '2 fil-mija karbonat tas-sodjuIs-soluzzjoni (Na2CO3) ġiet miżjuda u miżmuma għal 2h f'25 C. L-assorbenza tkejlet bi spettrometru f'760nm. Il-kontenut fenoliku totali kien espress bħala mg ekwivalenti ta' aċidu galliku (GAE).

Il-kontenut totali ta' flavonojdi kien imkejjel b'assaġġ kolorimetriku tal-klorur tal-aluminju (AlCl3) kemmxejn modifikat [26]. Alikwot (1 mL) ta' ME u HE ġie maħlul f'1 mL ilma dejonizzat. Din is-soluzzjoni (1 mL) ġiet miżjuda ma' 3.0 mL ta' 95 fil-mija alkoħol, 0.2 mL ta' 10 fil-mija klorur tal-aluminju, 0.2mL ta' aċetat tal-potassju (1M), u 5.6mL ta 'ilma dejonizzat. Imbagħad, it-taħlita ta 'reazzjoni ġiet inkubata f'25 grad għal 40min, u l-assorbenza ġiet imkejla bi spettrometru f'415 nm. Il-kontenut totali ta 'flavonoid kien espress bħala ekwivalenti ta' mg quercetin (QE).

2.4. Assaġġ tal-vijabbiltà taċ-ċelluli

2.4.1. Kultura taċ-ċelluli

Il-linja taċ-ċelluli tal-melanoma murina B16-F10 inkisbet mill-Korean Cell Line Bank tal-Korean Cell Line Research Foundation, Seoul, Korea. Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​f'Dulbecco's Modified Eagle's Media (DMEM) supplimentati b'10 fil-mija tas-serum bovin tal-fetu inattivat bis-sħana (FBS), u 1 fil-mija penicillin-streptomycin f'37 grad f'inkubatur umidifikat b'5 fil-mija CO2 atmosferiku.

2.4.2. Vijabilità taċ-ċelluli

L-effett ta' ME u HE fuq il-vijabbiltà taċ-ċelluli taċ-ċelloli B{{0}}F10 kien stmat permezz ta' analiżi MTT [27]. Iċ-ċelloli (5 104) ġew ikkultivati ​​fi 24-platt bir-bir u inkubati għal 24 siegħa f'37 grad. Imbagħad, iċ-ċelloli ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet varji ta 'ME u HE (25-750mg/mL) u inkubati għal 48h. Imbagħad, kull bir ġie supplimentat b'200 mL ta 'soluzzjoni MTT (0.5mg/mL) u inkubat għal 4h fid-dlam. Il-kristalli tal-formazan ikkuluriti li rriżultaw ġew solubilizzati f'200mL ta' DMSO u l-assorbenza tkejlet b'microplate reader f'570 nm.

2.5. Assaġġ antiossidant

2.5.1. Attività ta' tneħħija tad-DPPH

L-effett ta 'scavenging radikali ta' ME u HE mill-korpi tal-frott Ph. vaninii ġie determinat bl-użu tal-assaġġ DPPH [28] b'modifiki minuri. Fil-qosor, 1mL ta' konċentrazzjonijiet differenti ta' ME u HE (0.125–2.0mg/mL) tħallat ma' I mL ta' DPPH (0.1 mM) fil-metanol. It-taħlita tħawwad u tinżamm għal 30 minuta f'25 grad. L-assorbanza kienet imkejla bi spettrofotometru f'517nm. L-effett ta’ tneħħija radikali DPPH ġie kkalkulat bl-użu tal-formula li ġejja:

Perċentwal ta' attività ta' tneħħija radikali DPPH=[ (Absc—Abss) / Absc ] × 100,

fejn Absc jirrappreżenta l-assorbiment tal-kontroll tal-vettura u Abss jirrappreżenta l-assorbiment tal-kampjun. BHT intuża bħala standard ta' referenza.

2.5.2. Inibizzjoni tal-perossidazzjoni tal-lipidi

L-attività inibitorja tal-perossidazzjoni tal-lipidi ta 'ME u HE mill-korpi tal-frott Ph. vaninii ġiet evalwata bl-użu ta' metodu deskritt qabel [29] b'modifika minuri. Fil-qosor, 250mL ta' omoġenat tal-isfar tal-bajd (10 fil-mija f'ilma distillat), 5{0mL ta' kull ME u HE, u 200mL ta' ilma distillat ġew miżjuda ma' test tube . Ħamsa u għoxrin millilitru ta 'FeSO4 (0.07 M) ġew miżjuda u inkubati għal 30 min f'25 C. Imbagħad, 750 mL ta' 20 fil-mija aċidu aċetiku (pH 3.5) u 750 mL ta '0.8 fil-mija thiobarbituric acid (TB) f'1.1 fil-mija sodium dodecyl sulfat (SDS) b'25 mL ta' 20 fil-mija tri-chloroacetic acid (TCA) ġew miżjuda u t-taħlita ġiet vortexed u inkubata f'banju ta' l-ilma għal 60min f'100 C. Wara li tkessaħ għal 25 C, 3.0mL ta' 1- butanol ġie miżjud ma 'kull tubu u ġew ċentrifugati għal 10min fi 3000rpm. L-assorbiment tas-soluzzjoni kienet imkejla bi spettrofotometru f'532 nm. L-effett inibitorju tal-perossidazzjoni tal-lipidi ġie kkalkulat bl-użu tal-formula li ġejja:

Inibizzjoni tal-perossidazzjoni tal-lipidi ( fil-mija )=[(Absc – Abss)/Absc] × 100,

fejn Absc jirrappreżenta l-assorbiment tal-kontroll tal-vettura u Abss jirrappreżenta l-assorbiment tal-kampjun tat-test. BHT intuża bħala standard ta' referenza.

2.5.3. Attività tat-tkessiħ tar-radikali idroksil

L-effett ta' tneħħija tar-radikali hydroxyl ta' ME u HE mill-korpi tal-frott ta' Ph. vaninii tkejjel bl-użu ta' metodu ppubblikat [30] b'modifikazzjonijiet minuri. Fil-qosor, 0.5mL ta' konċentrazzjoni differenti ta' ME u HE (0.125–2.0mg/mL) ġew inkubati f'soluzzjoni li kien fiha 10{ {34}}mL ta' 2.8mM 2-deoxyribose f'buffer tal-fosfat (10mM, pH 7.4), 200mL ta' FeCl3 (200 microM)-EDTA (1.04 microM) (1:1 v/v), 100 mL ta 'H2O2 (1.0 mM), u 100 mL ta' aċidu askorbiku (1.0mM). L-ammont ta' degradazzjoni ta' deoxyribose tkejjel wara ż-żieda ta' 1.0mL ta' 1 fil-mija TBA, segwit minn inkubazzjoni f'100 C għal 20 min. L-assorbanza kienet imkejla fuq spettro-fotometru f'532nm. L-effett inibitorju tat-tneħħija tar-radikali hydroxyl ġie kkalkulat bl-użu tal-formula li ġejja:

Tneħħija radikali idroksil ( fil - mija )=[(Absc – Abss) / Absc] × 100

fejn Absc jirrappreżenta l-assorbiment tal-kontroll tal-vettura u Abss jirrappreżenta l-assorbiment tal-kampjun tat-test. BHT intuża bħala standard ta' referenza.

2.6. Xanthine oxidase inibizzjoni

L-attività inibitorja ta 'xanthine oxidase (XO) ta' ME u HE mill-korpi tal-frott ta 'Ph. vaninii ġiet imkejla bl-użu ta' xanthine bħala s-sottostrat b'metodu ppubblikat b'modifiki minuri [31]. Alikwot ta' 1mL ta' konċentrazzjonijiet varji ta' ME u HE (0.5–8.0 mg/mL) ġie miżjud ma' 2.9 mL ta' buffer tal-fosfat (pH 7.5) u 0 .1mL ta' soluzzjoni ta' enżima xanthine oxidase (0.1 unità/mL f'phosphate buffer pH 7.5) u inkubata minn qabel f'25 C għal 15-il minuta. Imbagħad, ir-reazzjoni nbdiet biż-żieda ta' 2mL tas-soluzzjoni tas-sottostrat (150mM xanthine fil-buffer). It-taħlita ġiet inkubata għal 30 min f'25 C u r-reazzjoni ġiet mitmuma biż-żieda ta '1 mL 1 N HCl. L-assorbanza kienet imkejla bi spettrofotometru f'290nm. Allopurinol intuża bħala standard ta' referenza. L-inibizzjoni ta' Xanthine oxidase ġiet ikkalkulata bl-użu tal-formula li ġejja:

Xanthine oxidase Inibizzjoni( fil-mija )=[(A–B)–(C–D) / (A–B) ] × 100,

fejn A hija l-attività ta' l-enżima mingħajr l-estratt, B hija l-kontroll ta' A mingħajr l-estratt u l-enżima; C hija l-attività tal-estratt b'XO, D hija l-attività tal-estratt mingħajr XO.

2.7. Effetti anti-melanoġeniċi

2.7.1. Inibizzjoni in vitro ta' tyrosinase

L-attività inibitorja tat-tyrosinase tal-estratti tal-faqqiegħ ġiet iddeterminata bl-użu ta 'metodu ppubblikat [32] b'modifika żgħira. Fil-qosor, it-taħlitiet ta' reazzjoni ġew ippreparati biż-żieda ta' 40mL ta' tyrosinase (31 unità/mL) sa 40 mL ta' konċentrazzjonijiet differenti ta' ME u HE (0. 125-2.0mg/mL), 40mL ta '1.5mM L-tyrosine, u 80mL ta' buffer tal-fosfat 0.1M (pH 6.8). Imbagħad, it-taħlita ġiet inkubata għal 10 min f'temperatura ta '37 C. L-assorbiment tkejjel b'qarrej tal-mikroplate f'475nm. L-inibizzjoni tat-tyrosinase ġiet ikkalkulata bl-użu tal-formula li ġejja:

Inibizzjoni ta' tyrosinase ( fil-mija )=[(Absc – Abss) / Absc] × 100,

fejn Absc jirrappreżenta l-assorbiment tal-kontroll tal-vettura u Abss jirrappreżenta l-assorbiment tal-kampjun tat-test. BHT intuża bħala standard ta' referenza.

Cistanche huwa inibitur tat-tyrosinase.

2.7.2. Inibizzjoni in vitro ta' l-awto-ossidazzjoni tad-DOPA

L-attività inibitorja tal-awto-ossidazzjoni tal-L-DOPA tal-estratti tal-faqqiegħ ġiet iddeterminata bl-użu ta 'metodu kemmxejn modifikat [33]. Fil-qosor, it-taħlitiet ta' reazzjoni ġew ippreparati biż-żieda ta' 40mL tyrosinase (31 unità/mL) sa 4{{1{0}} mL ta' konċentrazzjonijiet differenti ta' ME u HE (0.125– 2.0 mg/mL), u inkubat minn qabel għal 10 min f'37 C. Imbagħad, ir-reazzjoni nbdiet biż-żieda ta '40mL ta' 2.5mM soluzzjoni L-DOPA (f'buffer tal-fosfat) u 80mL ta 'buffer tal-fosfat (0.1M, pH). 6.8) u inkubat għal 10 min f'37 C fid-dlam. L-assorbiment tkejjel b'qarrej tal-mikroplate f'475nm. Il-perċentwal tal-inibizzjoni tal-awto-ossidazzjoni tal-L-DOPA ġie kkalkulat bl-użu tal-formula li ġejja:

Inibizzjoni tal-awto-ossidazzjoni tad-DOPA ( fil-mija )=[(Absc – Abss)/Absc] × 100,

fejn Absc jirrappreżenta l-assorbiment tal-kontroll tal-vettura u Abss jirrappreżenta l-assorbiment tal-kampjun tat-test. L-aċidu Kojic intuża bħala standard ta' referenza.

2.7.3. Attività ċellulari tyrosinase

L-attività ċellulari ta' tyrosinase fiċ-ċelloli B{{0}}F10 tkejlet bl-użu ta' modifika żgħira ta' metodu ppubblikat [34]. Iċ-ċelloli (5 105 ċelluli/bir) kienu kkultivati ​​fi 96-pjanċi bir-bir. Wara t-trattament b'diversi konċentrazzjonijiet ta' kampjuni (25-500mg/mL) għal 24 siegħa, iċ-ċelluli tal-melanoma ġew maħsula b'PBS, u lysed b'0.1 M phosphate buffer (pH 6.8) li fih 1 fil-mija Triton X -100. Iċ-ċelloli nżammu fuq is-silġ għal 10min u l-lysates ġew ċentrifugati f'10,000 g għal 10min. Imbagħad, il-kontenut tal-proteina fis-supernatant ġie determinat bil-metodu Braford, bl-albumina tas-serum bovin (BSA) bħala standard. Biex titkejjel l-attività tyrosinase, 100mL ta 'soluzzjoni ta' lisat taċ-ċelluli u 100 mL ta '2.5 mM L-DOPA (fl-istess buffer tal-fosfat) u ġew miżjuda ma' kull bir ta 'pjanċa ta' 96-bir. Wara l-inkubazzjoni f'37 C għal siegħa, l-assorbanza ġiet imkejla f'475nm bl-użu ta 'qarrej tal-mikroplate. L-attività tat-tyrosinase ċellulari ġiet ikkalkulata bl-użu tal-formula li ġejja:

Attività ċellulari tyrosinase ( fil-mija )=(Abss/Absc) × 100,

fejn Abss jirrappreżenta l-assorbiment tal-kampjun u Absc jirrappreżenta l-assorbiment tal-kontroll. Arbutin intuża bħala standard ta 'referenza.

2.7.4. Sintesi tal-melanin ċellulari

Il-kejl tal-kontenut tal-melanin fiċ-ċelluli tal-melanoma B{{0}}F10 ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti tal-estratti tal-faqqiegħ sar permezz tal-metodu ppubblikat minn Hosoi et al. [35]. Iċ-ċelloli (4 × 104 ċelluli/bir) ġew ikkultivati ​​fi 96-platt bir-riżerva f'DMEM. Wara 24 siegħa ta 'inkubazzjoni, iċ-ċelloli ġew ittrattati b'ME u HE (25-500 mg/mL) għal 72 siegħa li fihom 0.4 mM ormon li jistimula l-melanocyte (MSH). Iċ-ċelloli ġew maħsuda biż-żieda ta '300mL ta' Triton 100 (1 fil-mija, PBS), ċentrifugati għal 5 min fi 3000 rpm, u s-supernatant tneħħa. Imbagħad, 100mL ta '1N NaOH u 200mL ta' DMSO (10 fil-mija) ġew miżjuda mal-gerbub taċ-ċelluli u miżmuma għal siegħa f'60 C. L-assorbiment tas-soluzzjoni tkejjel bl-użu ta 'microplate reader f'405 nm. Ġie determinat l-effett ta 'ME u HE fuq is-sintesi tal-melanin. Arbutin intuża bħala standard ta 'referenza.

Cistanche jinibixxi l-melanin.

2.8. Effetti kontra t-tikmix

2.8.1. Inibizzjoni tal-elastasi

L-effett inibitorju elastase ta 'ME u HE ġie vvalutat b'metodi rrappurtati qabel [36]. Elastase tal-frixa tal-ħnieżer (PE–EC. 3.4.21.36) ġiet maħlula f'ilma sterili biex tagħmel soluzzjoni stokk ta '3.33mg/mL. Is-sottostrat, N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (AAAPVN), ġie maħlul f'0.2M Tris-HCl buffer (pH 8.0). Ir-reazzjoni twettqet f'96-mikroplate tal-bir. Kull kontenut tajjeb ta' 120mL ta' 0.2M Tris-HCl buffer, 5{0mL ta' estratt tal-faqqiegħ (0.125–2.0 mg/mL) fi Tris-HCl buffer, 30 mL ta 'PE, u 50 mL ta' 1.6 mM AAAPVN. L-estratt tat-test kien inkubat minn qabel f'25 C għal 15-il minuta qabel iż-żieda tas-sottostrat. L-assorbiment tkejjel b'qarrej tal-mikroplate f'402nm. Il-perċentwali ta' inibizzjoni ta' esterase ġiet ikkalkulata kif ġej:

Inibizzjoni ta' esterase ( fil-mija )=[(Absc – Abss)/Absc] × 100,

fejn Absc jirrappreżenta l-assorbiment tal-kontroll tal-vettura u Abss jirrappreżenta l-assorbiment tal-kampjun tat-test. L-EGCG intuża bħala standard ta' referenza, filwaqt li l-ilma distillat intuża bħala kontroll negattiv.

2.8.2. Inibizzjoni tal-collagenase

L-effett inibitorju tal-collagenase ta 'ME u HE mill-korpi tal-frott Ph. vaninii ġie investigat bl-użu ta' metodi rrappurtati qabel [37] b'xi modifiki. Collagenase minn Clostridium histoly- ticum (ChC–EC.3.4.23.3) ġie solubilizzat f'5 0 mM ta '1.44 U/mL Tricine buffer (pH 7.8). Is-sottostrat, 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg trifluoroacetate melħ (PZ-peptide), ġie maħlul f'2.5 mM Tricine buffer. Ħamsa u għoxrin mikrolitru ta’ estratti tal-faqqiegħ (0.125 sa 2.0 mg/mL) ġew inkubati b’20mL ta’ enzima f’155mL ta’ buffer għal 15-il minuta f’37 C qabel iż-żieda ta’ 50 mL ta’ PZ-peptide biex jinbeda l- reazzjoni għal 60min f'37 C. Ir-reazzjoni twaqqfet biż-żieda ta '1 mL ta' aċidu ċitriku (3 fil-mija). Imbagħad, ġew miżjuda 5 mL ta 'aċetat etiliku u s-soluzzjoni tħawwad bil-qawwa u tħalliet toqgħod għal 10 min. L-assorbiment tas-supernatant tkejjel f'320nm bl-użu ta 'microplate reader. EGCG intuża bħala standard ta' referenza. L-inibizzjoni tal-collagenase ġiet ikkalkulata bl-użu tal-formula li ġejja:

Inibizzjoni tal-collagenase (perċentwali)=[(Absc – Abss)/Absc] × 100,

fejn Absc jirrappreżenta l-assorbiment tal-kontroll tal-vettura u Abss jirrappreżenta l-assorbiment tal-kampjun tat-test. EGCG intuża bħala standard ta' referenza.

2.9. Analiżi statistika

Id-dejta kollha ġiet espressa bħala mezzi ± standard devi- tions (SD) u SPSS V.13 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) intuża għall-analiżi statistika. One-way analiżi tal-varjanza segwita minn Duncan firxa multipla testijiet intużaw biex iqabblu l-mezzi fost il-gruppi. Differenzi bejn il-mezzi fil-5 fil-mija (p<.05) level="" were="" considered="" statistically="">

3. Riżultati u diskussjoni

3.1. Kontenut totali ta' fenoliċi u flavonoids

Il-kontenut fenoliċi u flavonojdi totali ta 'ME u HE huma ppreżentati fit-Tabella 1. Ir-riżultati wrew li l-kontenuti fenoliċi u flavonoid totali ta' ME kienu 31.67 mg GAE/g u 6.83 mg QE/g, rispettivament, filwaqt li dawk għal HE kienu 16.33mg GAE/g u 4.50mg QE/g, rispettivament. Vamanu u Nita [38] irrappurtaw li l-kontenut fenoliku totali ta 'metanol u estratti ta' ilma sħun mill-korpi tal-frott ta 'Boletus edulis kienu 18.96 mg GAE/g u kienu 17.22 mg GAE/g, rispettivament, filwaqt li l-kontenut flavonoid ta' estratt tal-metanol minn Boletus aestivalis u l-korpi tal-frott Leccinum carpini kien 1.53mg CE/g u 1.48mg CE/g, rispettivament [39]. Ir-riżultati tagħna jissuġġerixxu li l-kontenut totali fenoliku u flavonoid tal-estratti tal-faqqiegħ kien ogħla minn dawk tal-faqqiegħ imsemmija hawn fuq, u seta’ kkontribwixxa għat-titjib tal-anti-xanthine oxidase relatat mal-antiossidant, anti-melanogenic u kontra l-ġilda. -attivitajiet tat-tikmix.

3.2. Vijabilità taċ-ċelluli

Biex jiġi ddeterminat jekk l-estratti mill-korpi tal-frott Ph. vaninii wrewx effett ċitotossiku fuq ċelluli tal-melanoma murina B16- F10, iċ-ċelloli ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'ME u HE għal 72 siegħa, u l-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet iddeterminata minn MTT assaġġ. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli taċ-ċelluli ttrattati ME u HE varjat minn 99.74 sa 85.33 fil-mija u 100.67 sa 88.33 fil-mija f'50 sa 750mg/mL, rispettivament (Figura 1). Il-vijabilità taċ-ċelluli naqsu maż-żieda fil-konċentrazzjonijiet tal-estratti tal-faqqiegħ. Peress li l-vijabbiltajiet taċ-ċelloli ttrattati b'500mg/mL ME u HE kienu aktar minn 90.33 fil-mija u 91 fil-mija, rispettivament, u l-valuri IC50 ta 'ME u HE kienu 4,410 mg/mL u 5,385 mg/mL, rispettivament, l-ME u l-HE ma kinux ċitotossiċi għaċ-ċelloli tal-melanoma B16-F10 fil-konċentrazzjonijiet ittestjati. Għalhekk, twettqu l-attivitajiet tas-sinteżi tat-tyrosinase u tal-melanin ċellulari taċ-ċelloli tal-melanoma B16-F10 ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti tal-estratti tal-faqqiegħ.

3.3. Attività antiossidanti

3.3.1. Effett ta ' scavenging radikali DPPH

L-effetti ta 'scavenging radikali ta' DPPH ta 'ME u HE mill-korpi tal-frott ta' Ph. vaninii żdiedu biż-żieda fil-konċentrazzjonijiet ta 'estratt. L-attivitajiet ta' tneħħija radikali ta' ME u HE f'{{0}}.125–2.0 mg/ mL varjaw minn 75.83 fil-mija għal 95.17 fil-mija, u 73.33 fil-mija għal 94.33 fil-mija, rispettivament, u BHT , il-kontroll pożittiv, wera attività tajba ta' scavenging (96.19-96.97 fil-mija) (Figura 2(A)). Għalkemm l-attività ta' tneħħija tad-DPPH ta' ME u HE kienet inqas minn BHT f'konċentrazzjonijiet li jvarjaw minn 0.125 sa 0.5 mg/mL, il-perċentwal ta' inibizzjoni osservat f'ME u HE f'1.{{ 24}}–2.0 mg/mL kien statistikament insinifikanti meta mqabbel ma' BHT. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-estratti tal-metanol u tal-misħun kellhom attivitajiet tajbin ta’ tkessiħ radikali fil-konċentrazzjonijiet ogħla ttestjati.

L-attivitajiet ta' tneħħija tad-DPPH tal-estratt tal-metanol mill-korpi tal-frott tal-Pleurotus pulmonarius ġew irrappurtati li jvarjaw minn 25.67 fil-mija sa 92.73 fil-mija f'0.125 sa 2.0mg/mL [40] . Mau et al. [41] sabet li l-effetti ta ' scavenging radikali ta ' l-estratti tal-metanol minn Tricholoma giganteum, Grifola frondosa, u faqqiegħ Hericium erinaceus varjaw minn 63.2 fil-mija għal 67.8 fil-mija f'konċentrazzjoni 6.4mg/mL. Għalhekk, ir-riżultati sperimentali tagħna jissuġġerixxu li l-attività tat-tkessiħ tad-DPPH ta 'ME u HE (0.125–2.0 mg/mL) minn Ph. vaninii frott korpi jistgħu jipprovdu difiża adegwata minn radikali ħielsa u korrimenti ROS.

Figura 2.Attivitajiet antiossidanti ta 'metanol u estratti ta' ilma sħun minn korpi tal-frott ta 'Phellinus vaninii.

3.3.2. Inibizzjoni tal-perossidazzjoni tal-lipidi

L-attività inibitorja tal-perossidazzjoni tal-lipidi ta' ME u HE mill-korpi tal-frott ta' P. vaninii varret minn 44.99 sa 66.08 fil-mija u minn 41.26 sa 64.00 fil-mija f'{{1{{16} }}}.125-2.0mg/mL, rispettivament (Figura 2(B)), li jindika li konċentrazzjonijiet dejjem jiżdiedu ta 'estratti ta' faqqiegħ żiedu l-inibizzjoni tal-perossidazzjoni tal-lipidi. Madankollu, l-effett inibitorju tal-perossidazzjoni tal-lipidi tal-BHT kien 90.30 fil-mija f'2.0mg/mL, li kien sinifikament ogħla (p<.001) than="" those="" of="" me="" and="" he.="" the="" ic50="" values="" of="" me="" against="" lipid="" peroxidation="" from="" wild="" and="" cultivated="" mushrooms="" including="" pleurotus="" ostreatus,="" termitomyces="" robustus,="" pleurotus="" sajor-caju,="" and="" auricularia="" auricula="" were="" 0.15,="" 0.43,="" 0.75,="" and="" 1.51mg/ml,="" respectively="" [42].="" the="" inhibi-="" tory="" effects="" of="" hot="" water="" extracts="" on="" lipid="" peroxida-="" tion="" of="" 14="" different="" edible="" and="" medicinal="" mushroom="" species="" collected="" from="" malaysia="" ranged="" from="" 33.33%="" to="" 57.18%="" at="" the="" concentration="" of="" 10="" mg/ml="" [43].="" in="" this="" study,="" the="" lipid="" peroxidation="" inhibitory="" activity="" of="" me="" and="" he="" from="" ph.="" vaninii="" ranged="" from="" 65.87%="" to="" 78%="" at="" 2.0mg/ml="" and="" their="" ic50="" values="" were="" 0.19="" mg/ml="" and="" 0.17="" mg/ml,="" respectively.="" these="" results="" suggest="" that="" me="" and="" he="" from="" ph.="" vaninii="" fruiting="" bodies="" possessed="" good="" inhibitory="" activity="" toward="" lipid="" peroxidation="" compared="" to="" the="" mushrooms="" described="" above.="" therefore,="" p.="" vaninii="" fruiting="" bodies="" could="" be="" a="" valuable="" antioxidant="">

3.3.3. Hydroxyl effett kennies radikali

L-effetti ta' tneħħija tar-radikali idroksil ta' ME u HE minn Ph. vaninii varjaw minn 75.60 sa 98.19 fil-mija u 65.21 sa 97.55 fil-mija f'0.125 sa 2.0 mg/mL konċentrazzjoni trazzjonijiet, rispettivament, filwaqt li dawk tal-BHT varjaw minn 79.89 sa 92.66 fil-mija (Figura 2(C)). Madankollu, il-valuri IC50 ta' ME u HE minn Ph. vaninii kienu 0.115 mg/mL u 0.119, rispettivament, filwaqt li l-IC5{{4{{46} }}} il-valur ta 'BHT kien 0.111mg/mL, li jindika li l-effetti ta' scavenging radical hydroxyl ta 'ME u HE kienu ftit inqas minn dak ta' BHT. Għalhekk, ME u HE minn Ph. vaninii kellhom attivitajiet ta ' scavenging radical hydroxyl relattivament tajbin u komparabbli fil-konċentrazzjonijiet ittestjati. L-attivitajiet ogħla ta' tneħħija tar-radikali tal-hydroxyl misjuba f'ME u HE f'dan l-esperiment indikaw li l-estratti effettivament ipprevjenu d-dekompożizzjoni ta' 2-deoxyribose billi jneħħu r-radikali tal-hydroxyl fis-soluzzjoni tat-test. L-estratt tal-metanol mill-korpi tal-frott ta 'Pleurotus pulmonarius ġie rrappurtat li għandu effett ta' scavenging radical hydroxyl ta '95.13 fil-mija f'2.0mg/mL [40], li kien inqas minn dawk ta' ME (98.18 fil-mija) u HE (97.55 fil-mija) minn Ph. vaninii fil-konċentrazzjoni ttestjata. L-effett tat-tneħħija tal-idroksil tal-estratt tal-metanol mill-korpi tal-frott tal-faqqiegħ Hypsizigus ulmarius ġie rrappurtat li huwa 76.67 fil-mija f'1.0mg/mL [44], filwaqt li dawk ta 'ME u HE kienu 83.00 fil-mija u 77.17 fil-mija f' 0.25 mg/mL. Meħuda flimkien, ir-riżultati tagħna jissuġġerixxu li l-effett ta 'scavenging radical hydroxyl ta' ME u HE minn Ph. vaninii kienu aħjar minn dawk ta 'l-estratti tal-faqqiegħ imsemmija hawn fuq. Għalhekk, ME u HE minn Ph. vaninii huma kenniesi qawwija ta 'hydroxyl radical li jistgħu jintużaw biex jipprevjenu problemi relatati ma' ROS.

3.4. Xanthine oxidase inibizzjoni

L-attivitajiet inibitorji ta 'xanthine oxidase ta' ME u HE minn Ph. vaninii żdiedu b'konċentrazzjonijiet dejjem jiżdiedu. L-inibizzjoni ta' xanthine oxidase ta' ME u HE f'{{0}}.5 sa 8.0mg/mL varjat minn 61.15 fil-mija sa 88.99 fil-mija, u 34.13 fil-mija sa 84.56 fil-mija, rispettivament. Madankollu, allopurinol, l-istandard ta 'referenza, wera attivitajiet inibitorji eċċellenti ta' XO ta '89.73 sa 97.23 fil-mija fl-istess konċentrazzjonijiet ittestjati (Figura 3). Għalkemm ME u HE urew attivitajiet inibitorji moderati ta 'XO f'konċentrazzjonijiet aktar baxxi, l-estratti tal-faqqiegħ inibixxu b'mod sinifikanti XO f'konċentrazzjonijiet ogħla. L-inibizzjoni XO mill-estratti tal-metanol u l-ilma sħun mill-korpi tal-frott Ph. gilvus ġew irrappurtati li jvarjaw minn 28.60 fil-mija għal 86.20 fil-mija u minn 36.53 fil-mija għal 97.07 fil-mija f'0.5 sa 8.0mg / mL, rispettivament [45], li jindika li l-effett inibitorju ta 'ME u HE lejn XO kienu komparabbli ma' dawk ta 'Ph. gilvus.

Flavonoids, klassi ta 'komposti polifenoliċi, huma l-metaboliti sekondarji l-aktar komuni ta' pjanti u fungi, u ġew irrappurtati li għandhom attività inibitorja ta 'xanthine oxidase [46]. Għalhekk, konċentrazzjonijiet fenoliċi u flavonoid ogħla misjuba fl-ME u l-HE setgħu kkontribwew għall-inibizzjoni ta 'xanthine oxidase.

3.5. Effett li jbajdu l-ġilda

3.5.1. Inibizzjoni ta' tyrosinase in vitro

L-attivitajiet inibitorji tat-tyrosinase ta 'ME u HE mill-korpi tal-frott ta' Ph. vaninii varjaw minn 55.83 fil-mija għal 96.16 fil-mija u minn 30.29 fil-mija għal 92.74 fil-mija f'0.125-2.{{. 17}} mg/mL, rispettivament (Figura 4(A)), u żdied b'konċentrazzjonijiet dejjem jiżdiedu. Madankollu, l-aċidu kojic, l-istandard ta 'referenza, wera attivitajiet inibitorji ta' tyrosinase eċċellenti bejn 98.74 u 99.61 fil-mija fi {{2{{30}}}}.125-2.0mg/mL. Ir-riżultati jissuġġerixxu li l-ME wera effett tajjeb, filwaqt li HE wera effett moderat, fil-konċentrazzjonijiet ittestjati. Alam et al. [47] irrapporta li l-inibizzjoni tat-tyrosinase minn metanol u estratti ta 'ilma sħun mill-korpi tal-frott ta' P. salmoneostramineus varjaw minn 20.90 fil-mija għal 63.29 fil-mija u minn 15.25 fil-mija għal 49.25 fil-mija f'0.125-1.0mg/mL, rispettivament, li jindika li l-inibitorju attivitajiet ta 'Ph. vaninii fuq tyrosinase kienu ogħla minn dawk tal-korpi tal-frott ta' P. salmoneostramineus.

Il-komposti fenoliċi huma komposti tal-aċidu aromatiku li fihom ċrieki fenoliċi u aċidu karbosiliku. Flavonoids huma grupp ta 'komposti polifenoliċi. Jinstabu f'ħafna speċi ta' pjanti u faqqiegħ. Il-polifenoli huma meqjusa bħala sottostrati għal tyrosinase u huma l-akbar grupp ta 'inibituri ta' tyrosinase. Diversi polifenoli ġew irrappurtati li jinibixxu tyrosinase billi jorbtu mas-sit attiv tal-enzima tyrosinase, li jirriżulta f'inattivazzjoni irriversibbli tal-enzima b'interazzjoni simili għal substrat [48]. Xi flavonoids wrew ukoll effett inibitorju fuq tyrosinase permezz ta 'kelazzjoni tal-joni tar-ram fit-tyrosinase [49].

Għalhekk, l-effett inibitorju ta 'ME u HE lejn tyrosinase jista' jkun dovut għall-komposti polifenoliċi u flavonoids preżenti fl-estratti tal-faqqiegħ. L-effett antiossidant ta 'ME u HE jista' wkoll jikkontribwixxi għall-inibizzjoni ta 'attività ta' tyrosinase.

3.5.2. Inibizzjoni tal-awto-ossidazzjoni tad-DOPA

L-DOPA huwa wieħed mill-prekursuri tal-melanin matul il-melanoġenesi. L-DOPA hija sintetizzata minn L-tyrosina minn tyrosinase hydroxylase. Tyrosinase jista 'wkoll jikkonverti L-DOPA għal dopaquinone, li eventwalment iwassal għal melanin. L-attivitajiet inibitorji tal-awto-ossidazzjoni in vitro, L-DOPA ta 'P. vaninii huma miġbura fil-qosor fil-Figura 4(B). L-inibizzjoni tal-awto-ossidazzjoni tal-L-DOPA minn ME u HE varjat minn 38.25 fil-mija sa 78.46 fil-mija u minn 29.68 fil-mija sa 44.77 fil-mija f'0.125 sa 2.0mg/mL, rispettivament , billi l-aċidu kojic wera attivitajiet inibitorji eċċellenti ta 'L-DOPA ta' 86.14 sa 98.72 fil-mija fil-konċentrazzjoni ttestjata. Ir-riżultati wrew li ME u HE inibixxu moderatament l-awto-ossidazzjoni ta' L-DOPA. Madankollu, ME u HE wrew attività inqas inibitorja fuq l-awto-ossidazzjoni ta 'L-DOPA meta L-DOPA intuża bħala sottostrat milli meta L-tyrosinase intuża bħala sottostrat ta' tyrosinase. Peress li tyrosinase juża żewġ siti ta 'rbit differenti għal tyro- sine hydroxylase u L-DOPA oxidase, ir-riżultati sperimentali tagħna jissuġġerixxu li l-effettività selettiva ta' tyrosinase fuq iż-żewġ sottostrati differenti matul il-melanoġenesi.

3.5.3. Attività ċellulari tyrosinase

L-attività intraċellulari tat-tirosinażi ġiet iddeterminata wara t-trattament taċ-ċelloli b'konċentrazzjonijiet li jvarjaw ta 'ME u HE mill-korpi tal-frott ta' Ph. vaninii. L-effett ta 'ME u HE fuq l-attività ta' tyrosinase taċ-ċelluli tal-melanoma B10-F10 varja minn 96.94 fil-mija għal 61.14 fil-mija u minn 98.12 fil-mija għal 84.16 fil-mija f'25-500 ug/ mL, rispettivament, filwaqt li arbutin wera attivitajiet ta 'tyrosinase ta' 98.52 sa 58.12 fil-mija fil-konċentrazzjoni ttestjata (Figura 5(A)), li jindika li l-inibizzjoni tat-tyrosinase ta 'arbutin kienet ogħla minn dawk ta' ME u HE. Ir-riżultati wrew ukoll li l-attività tyrosinase ta 'ME kienet ogħla minn dik ta' HE u li konċentrazzjonijiet dejjem jiżdiedu ta 'ME u HE irriżultaw f'attività intraċellulari tyrosinase mnaqqsa. Għalkemm l-effetti inibitorji tat-tyrosinase in vitro ta' ME u HE f'500 ug/mL kienu 84.39 fil-mija u 45.64 fil-mija, rispettivament, l-inibizzjoni ċellulari tat-tyrosinase fiċ-ċelluli tal-melanoma B16-F10 kienu 38.86 fil-mija u 15.24 fil-mija, rispettivament fl-istess konċentrazzjoni ttestjata, li jindika li l-fatturi tal-estratt tal-faqqiegħ responsabbli għall-inibizzjoni tat-tyrosinase ma kinux kapaċi jippenetraw iċ-ċelloli b'mod effettiv. Huang et al. [50] irrapporta li l-attività ċellulari tyrosinase tal-estratt tal-metanol minn korpi tal-frott ta 'Agaricus brasiliensis kienu 95.75 fil-mija -67.12 fil-mija f'100-500 ug/mL f'ċelluli B16-F10 melanoma, li jissuġġerixxi li l-attività ċellulari tyrosinase ta 'Ph. vaninii kienu ftit ogħla minn dak ta' A. brasiliensis fl-istess konċentrazzjoni ttestjata.

Biex jiġi vvalutat jekk it-tnaqqis fl-attività intraċellulari tat-tirosinażi u t-tnaqqis fil-produzzjoni tal-melanin osservati fiċ-ċelloli tal-melanoma B16-F10 kinux dovuti għal ċitotossiċità tal-estratti tal-faqqiegħ, sar assaġġ MTT. Fl-assaġġ MTT, ċelluli tal-melanoma B16-F10 ittrattati b'ME u HE urew vijabilità taċ-ċelluli ta' 105 fil-mija sa 90.33 fil-mija, u 107 fil-mija sa 91 fil-mija f'50-500 mg/mL, rispettivament, li jindika li l-estratti tal-faqqiegħ ma kinux tossiċi għaċ-ċelluli tal-melanoma B16-F10 fil-konċentrazzjonijiet ittestjati (Figura 1).

3.5.4. Attività tas-sintesi tal-melanin

Biex jiġi kkonfermat jekk l-attivitajiet inibitorji tat-tyrosinase ċellulari tajbin misjuba fl-esperiment preċedenti kinux relatati mal-inibizzjoni tas-sintesi tal-melanin fiċ-ċelluli tal-melanoma B16-F1{0, il-produzzjoni tal-melanin miċ-ċelloli tal-melanoma ġiet investigata aktar. Is-sintesi tal-melanin taċ-ċelluli tal-melanoma B16-F1{0 ittrattati b'ME u HE varjat minn 71.18 fil-mija għal 27.61 fil-mija u minn 78.54 fil-mija għal 50.53 fil-mija, rispettivament, f'25-500 mg/mL, filwaqt li s-sinteżi tal-melanin minn arbu- tin varjaw minn 73.50 fil-mija għal 35.16 fil-mija fil-konċentrazzjoni ttestjata (Figura 5(B)). Ir-riżultati tal-istudju jissuġġerixxu li l-inibizzjoni tas-sintesi tal-melanin mill-arbutin kienet ogħla minn dik tal-HE iżda inqas minn dik tal-ME. Konċentrazzjonijiet miżjuda tal-estratti tal-faqqiegħ irriżultaw f'sintesi mnaqqsa tal-melanin fiċ-ċelloli tal-melanoma B16-F10. Ir-riżultati ssuġġerew li l-inibizzjoni tas-sinteżi tal-melanin fiċ-ċelluli tal-melanoma B16-F10 minn ME kienet ogħla b'mod sinifikanti minn dik tal-arbutin, filwaqt li l-inibizzjoni tal-produzzjoni tal-melanin minn HE kienet inqas b'mod sinifikanti minn dik tal-arbutin. Cha u Kim [51] wrew li l-estratt iffermentat ta' Cordyceps militaris wera 66-47 fil-mija attività sintetika tal-melanin f'1.0-3.0 mg/mL fiċ-ċelloli tal-melanoma B16-F10, li jissuġġerixxi li l-attività inibitorja tas-sintesi tal-melanin ta 'estratti tal-ġisem tal-frott ta' Ph. vaninii kienu ogħla minn dak ta 'estratt iffermentat ta' Cordyceps militaris. Għalhekk, ir-riżultati tal-istudju wrew li l-estratti tal-faqqiegħ mhux biss inibixxu l-attività tyrosinase in vitro u l-awto-ossidazzjoni tal-L-DOPA iżda wkoll naqqsu l-attività tyrosinase u l-produzzjoni tal-melanin fiċ-ċelloli tal-melanoma B16- F10. Meħuda flimkien, is-sejbiet tagħna jissuġġerixxu li ME u HE mill-korpi tal-frott Ph. vaninii jistgħu jitqiesu bħala sorsi potenzjali ġodda anti-melanoġeniċi ta 'protezzjoni kontra l-pigmentazzjoni tal-ġilda mir-radjazzjoni ultravjola tad-dawl tax-xemx.

3.6. Attività kontra t-tikmix tal-ġilda

3.6.1. Inibizzjoni tal-elastasi

Elastase, protease, hija responsabbli għat-tkissir tal-elastin li jinsab fl-ECM.

Elastases jistgħu jaqsmu l-elastin, kif ukoll substrati oħra, bħal kollaġen, fibronectin u proteini ECM. Madankollu, taħt kundizzjonijiet naturali, l-attività elastase hija essenzjali għad-degradazzjoni ta 'proteini barranin wara ferita [52]. Biex tittardja t-tixjiħ tal-ġilda, bħal tikmix, sagging, u freckles, huwa meħtieġ li tiġi evitata d-degradazzjoni tal-proteini relatati mal-ECM u b'hekk tipproteġi t-telf tal-elastiċità tal-ġilda. Ir-rata inibitorja esterase ta 'ME u HE mill-korpi tal-frott ta' Ph. vaninii varjat minn 37.23 fil-mija għal 71.24 fil-mija u minn 28.99 fil-mija għal 64.65 fil-mija f'0.125-2.0 mg/ mL, rispettivament, billi EGCG wera inibizzjonijiet ta 'esterase ta' 17.93 sa 45.31 fil-mija fil-konċentrazzjoni ttestjata (Figura 6(A)). Ir-rata ta 'inibizzjoni ta' elastase ta 'ME u HE tista' titqies eċċellenti meta mqabbla ma 'EGCG. Kim et al. [53] irrapporta li l-estratt tal-miċelja ta’ Tricholoma matsu- take wera li l-attività inibitorja ta’ elastase b’81.4 fil-mija f’100mg/mL, li jindika li l-effetti inibitorji ta’ ME u HE minn Ph. vaninii fuq elastase kienu aktar baxxi minn dak ta 'T. matsutake estratt. Choi u Lee [54] wrew l-inibizzjoni tal-elastasi mill-metanol u l-estratti tal-ilma sħun mill-korpi tal-frott tal-Coriolus versi- kulur varjaw minn 21.5 fil-mija sa 35.47 fil-mija u minn 17.57 fil-mija sa 25.86 fil-mija f'1.0 sa 3.0mg/mL , rispettivament, li jissuġġerixxi li l-inibizzjoni elastase ta 'ME u HE kienu ogħla minn dawk ta' korpi tal-frott C. versi- color. Ir-riżultati jissuġġerixxu li l-estratti tal-faqqiegħ għandhom potenzjal kontra t-tikmix biex jipprevjenu l-elastin u l-collagen mid-degradazzjoni.

3.6.2. Inibizzjoni tal-collagenase

Collagenases huma metalloproteinases kapaċi li jaqtgħu diversi molekuli misjuba fiċ-ċelloli u l-ECM, bħal collagen, elastin, fibronectin, gelatin, u laminin. Il-collagenase użata f'dan l-esperiment, il-collagenase batterjali (Clostridium histolyticum, ChC), tiddegrada wkoll l-ECM [55]. Għalhekk, il-collagenase batterjali ntużat biex tittestja l-attività kontra l-collagenase tal-estratti tal-faqqiegħ. L-attivitajiet inibitorji tal-collagenase ta' ME u HE mill-korpi tal-frott ta' Ph. vaninii varjaw minn 41.04 fil-mija għal 63.02 fil-mija u minn 26.40 fil-mija għal 47.33 fil-mija fi 0.125-2.0 mg/ mL, rispettivament (Figura 6(B)), filwaqt li EGCG inibixxa collagenase 17.93 sa 45.31 fil-mija fil-konċentrazzjoni ttestjata. Ir-riżultati jissuġġerixxu li ME kien inibitur eċċellenti, filwaqt li HE żvela effetti inibitorji moderati fil-konċentrazzjonijiet ittestjati. Cheon et al. [56] irrapporta li l-inibizzjoni tal-collagenase mill-etanol u l-estratti tal-ilma sħun mill-korpi tal-frott ta 'Pellinus linteus varjaw minn 3.4 fil-mija għal 6.8 fil-mija u minn 33.4 fil-mija għal 89.6 fil-mija f'0.05-1.0 mg/mL, rispettivament, li jindika li l-inibizzjoni tal-collagenase minn ME minn Ph. vaninii kien ogħla minn dak mill-estratt tal-ilma sħun tal-korpi tal-frott Ph. linteus Peress li ME u HE wrew inibizzjoni tajba tal-collagenase, l-estratti jistgħu jipproteġu l-ECM u l-kollaġen mid-degradazzjoni kkawżata minn photo-aging. Għalkemm il-biċċa l-kbira ta' l-attivitajiet inibitorji ta' elastase u collagenase intwerew fil-pjanti, inklużi tè abjad, tè aħdar, qoxra taċ-ċawsli, u frott tal-ginkgo [57,58], dan huwa l-ewwel rapport ta 'attivitajiet inibitorji ta' elastase u collagenase mill-estratti tal-ġisem tal-frott. minn Ph. vaninii, u jista 'jirrappreżenta sors ġdid ta' aġent kontra t-tikmix.

Bħala konklużjoni, l-estratti tal-ġisem tal-frott minn Ph. vaninii urew attivitajiet antiossidanti tajbin, anti-xanthine oxidase, tyrosinase, sintesi ta 'melanin, elastase, u collagenase. L-attivitajiet inibitorji tas-sintesi ta 'xanthine oxidase, tyrosinase u melanin jistgħu jintużaw għal sorsi naturali biex jikkontrollaw il-gotta u l-aġenti tal-pigmentazzjoni tal-ġilda, u l-inibizzjoni ta' elastase u collagenase jistgħu jkunu sorsi tajbin għat-trattament ta 'disturbi relatati mat-tikmix tal-ġilda. Aktar riċerka hija meħtieġa biex tiddetermina l-fatturi li jipprovdu l-anti-xanthine oxidase, anti-tyrosinase, u attivitajiet kontra t-tikmix fl-estratti mill-korpi tal-frott Ph. vaninii.

Cistanche huwa ingredjent li jbajdu l-ġilda.

Għal aktar informazzjoni, jekk jogħġbok ikklikkja l-istampa.