Effetti Antiossidanti U Li jbajdu l-Ġilda Ta' Parti mill-Ajru ta' Euphorbia Supina Raf. Estratt

Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Sa-Haeng Kang1, Yong-Deok Jeon2, Ji-Yoon Cha1, Sung-Woo Hwang1, Hoon-Yeon Lee1, Min Park1, Bo-Ri Lee1, Min-Kyoung Shin2, Su-Jeong Kim3, Sang-Min Shin3, Dae- Ki Kim4, Jong-Sik Jin2* u Young-Mi Lee1

Astratt

Sfond: Euphorbia supina(ES) intuża ħafna fil-mediċina folkloristika minħabba l-proprjetajiet antibatteriċi, emostatiċi u anti-infjammatorji tiegħu. L-għan ta 'dan l-istudju kien li jevalwa l-effetti antiossidanti u li jbajdu l-ġilda ta' estratt ta 'l-etanol ta' 70 fil-mija ta 'ES.

Metodi:Il-partijiet tal-ajru tal-ESpjanti ġew estratti b'70 fil-mija etanol. Il-vijabbiltà taċ-ċelloli B16F10 ġiet evalwata b'assaġġ MTT biex jiġu ddeterminati d-dożi mhux tossiċi għal aktar esperimenti. Il-tyrosinaseu l-attivitajiet tat-tyrosinase ċellulari mbagħad ġew imkejla bl-użu ta 'assaġġ ta' enzima-sottostrat. Barra minn hekk, l-espressjoni ta 'proteini relatati mat-tibjid ġiet imkejla bl-użu tal-western blot.

Riżultati:L-attività anti-ossidanti tal-kampjuni ES żdiedet b'mod dipendenti mid-doża, kif ikkonfermat mill-attivitajiet tagħhom ta' tneħħija radikali fil-2,2-diphenyl-1-1-picrylhydrazyl u 2,2-azino-bis-( 3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonicacid) assays. Il-ESestratt imnaqqas b'mod sinifikantityrosinaseattività u l-kontenut tal-melanin b'mod li jiddependi mid-doża. Barra minn hekk, naqas l-espressjoni tal-proteina indotta mill-ormon li jistimula l-melanoċiti (MSH) oftyrosinase u l-fattur tat-traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmja (MITF).

Konklużjonijiet:Ir-riżultati tagħna jindikaw li l-ESestratt attenwat-MSH-sinteżi tal-melanin stimulata billi timmodulatyrosinaseu l-espressjoni tal-MITF. Għalhekk, l-estratt ES jista 'jkun aġent terapewtiku promettenti biex jittratta l-iperpigmentazzjoni u bħala ingredjent għall-kożmetiċi li jbajdu l-ġilda.

Kliem ewlieni: Euphorbia supina(ES), DPPH, Melanogenesis,Tyrosinase, MITF,-MSH

Cistanche huwa inibitur naturali tat-tyrosinase

Sfond

Melanin huwa pigment ewlieni li jikkontrolla l-ġilda u l-kulur tax-xagħar. Huwa kompost ta 'piż molekulari għoli mqassam b'mod wiesa' fl-annimali u l-pjanti [1]. Melanin jipproteġi l-ġilda mir-radjazzjoni ultravjola. Madankollu, meta prodott f'eċċess, il-pigment jakkumula fil-ġilda biex jiffurmaw tikek u freckles, u dawn il-leżjonijiet jistgħu jikkawżaw kanċer tal-ġilda [2]. Għalhekk, biex tevita eċċess ta 'pigmentazzjoni tal-ġilda, huwa meħtieġ li tinibixxi l-produzzjoni ta' melanin [3]. Melanoċiti, li jinsabu fis-saff bażali tal-epidermide u kkontrollati minntyrosinase, jipproduċumelanin permezz tal-melanogenesis u fihom enzimi bħal proteina relatata mat-tyrosinase-1 (TRP-1) u dopachrometautomerase (DCT) [4]. Tyrosinase jikkatalizza l-formazzjoni ta' 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) quinone minn DOPA, u l-formazzjoni ta' melanin minn DOPA quinone permezz ta' awtossidazzjoni u reazzjonijiet enżimatiċi [5]. Għalhekk, il-produzzjoni tal-melanin hija relatata mal-espressjoni tat-tyrosinase u l-attivazzjoni tat-TRP-1. Għalhekk, investigajna jekkEuphorbia supina(ES) jistgħu jinfluwenzaw ir-relazzjoni bejn tyrosinase u melanin.

Tyrosinasel-attività hija importanti fi studji dwar l-ibajda tal-ġilda [6]. Diversi kimiċi u estratti tal-pjanti, bħal aċidu askojic, arbutin, vitamina Ċ, u hydroquinone, huma użati fil-kożmetiċi li jbajdu l-ġilda. Madankollu, l-użu tagħhom kien limitat minħabba l-effetti sekondarji tagħhom bħal kulur, riħa, u ċitotossiċità [7]. Għalhekk, studji reċenti huma ffokati fuq l-iżvilupp ta 'aġenti li jbajdu l-ġilda minn prodotti naturali bla periklu għall-ġilda.

F'dan l-istudju,ESintuża biex jiżviluppa kompost sikur b'effetti antiossidanti u li jbajdu l-ġilda. ES hija pjanta erbaċej annwali u tintuża ħafna fil-formulazzjonijiet tradizzjonali tal-ħxejjex. Huwa distribwit b'mod wiesa 'f'reġjuni moderati u tropikali bħall-Korea, iċ-Ċina u l-Ġappun. Huwa użat fil-mediċina folkloristika kontra diversi disturbi infjammatorji [8, 9]. Ġew irrappurtati studji ffukati fuq il-komponenti tal-ES bħal tannini [10, 11], sustanzi fenoliċi u flavonoids [12, 13], u terpenojdi [14, 15]. Barra minn hekk, l-effett anti-kanċer in vitro metastasi tal-kanċer tas-sider [16], u l-attività antiossidanti ta 'taħlitiet fenoliċi ta' ES ġiet irrappurtata [17].Madankollu, l-attivitajiet antiossidanti in vitro f'2,2-diphenyl{{13 }}picrylhydrazyl (DPPH) u 2,2′-azino-bis-3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) assays, u l-effetti li jbajdu l-ġilda ta 'estratti ES fuq melanomacells ma ġewx mifhuma. Għalhekk, l-għan ta 'dan l-istudju kien li jiddetermina l-effetti antiossidanti u li jbajdu l-ġilda ta' ES in vitro u jikkonferma l-effikaċja tiegħu bħala aġent ġdid li jbajdu l-ġilda.

Metodi

Preparazzjoni tal-estratt ES

ESġiet ipprovduta mill-kumpanija farmaċewtika Wonkwang (Iksan, Jeonbuk, Korea). Il-partijiet ta 'l-ajru (zokk u weraq) ta' ES (250 g) ġew mgħollija b'70 fil-mija etanol f'70 grad għal 2 sigħat. Wara l-filtrazzjoni, ir-residwu reġa' ġie mgħolli darbtejn kif deskritt hawn fuq. Il-filtrati kkombinati ġew evaporati f'45 grad u lajofilizzati biex jiksbu l-estratt mhux raffinat b'rendiment ta '60 g (24 fil-mija). L-estratt kien maħżun 4 gradi qabel l-esperimenti. Ġie depożitat kampjun ta' vawċer (JUHES-1660) ​​fid-Dipartiment tar-Riżorsi tal-Mediċina Orjentali, l-Università Nazzjonali ta' Chonbuk (Iksan, Korea).

estratt ta' cistanche

Kultura taċ-ċelluli

Iċ-ċelloli tal-melanoma murina B16F10 (CRL-6475) inxtraw mill-American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, VA, USA). Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​fil-Medju ta' l-Ajkla Modifikat (DMEM) ta'Dulbecco li kien fih 2 mM glutamina, supplimentat b'10 fil-mija serum tal-fetu bovin (FBS), 100 unità/mL ta' peniċillina, u 100 ug/mL ta' streptomycin fi flasks tal-kultura f'inkubatur tas-CO2 b' atmosfera umidifikata ta '5 fil-mija CO2 fl-arja f'37 grad. L-esperimenti kollha saru fi tliet kopji u ġew ripetuti tliet darbiet biex tiġi żgurata r-riproduċibilità.

Assaġġ tal-vijabbiltà taċ-ċelluli

Biex tevalwa s-sigurtà tal-ESestratt, saret analiżi MTT biex tiġi ddeterminata l-vijabbiltà taċ-ċelluli wara t-trattament bl-estratt. Dan il-metodu kien ibbażat fuq it-tnaqqis ta' 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) għal formazan bymitokondrial enzymes ( oxidoreductase ċellulari dipendenti fuq NAD(P)H) f'ċelloli vijabbli [18]. Fil-qosor, ċelluli B16F10 (1 × 104 ċelluli/bir) ġew inkubati b'diversi konċentrazzjonijiet ta 'estratt ES (8, 40, 200 ug/mL) f'mikroplate 96-bir għal 24 siegħa. Imbagħad, is-soluzzjoni MTT (500 ug/mL) ġiet miżjuda ma 'kull bir u l-pjanċa ġiet inkubata fi 37 grad għal 8 sigħat. Il-kristalli ta 'formazan prodotti minn ċelluli ħajjin ġew maħlula f'600 μL ta' DMSO. L-assorbiment ta 'kull bir tkejjel f'540 nm fuq qarrej tal-mikroplate Versa Max (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA).

Attivitajiet antiossidanti

L-attività ta 'scavenging radikali DPPH ġiet evalwata skond il-metodu deskritt f'[19] b'modifiki minuri. Il-konċentrazzjoni varji (8, 40, 200 ug/mL) taESestratt jew 20 ug/mL ta' aċidu askorbiku (użat bħala kontroll pożittiv) f'500 μL ġew miżjuda ma' 1 mL ta' soluzzjoni DPPH 0.1 mM. Ir-reazzjoni tħalla tipproċedi għal 30 minuta fid-dlam f'temperatura tal-kamra (RT) wara l-vortex. L-assorbiment tkejjel f'517 nm fuq qarrej tal-mikroplate VersaMax. Aħna wettaqna esperiment biex nikkonfermaw sa liema punt tnaqqsu r-radikali bl-effett tad-donazzjoni tal-elettroni fir-rigward tal-attività ta' tneħħija radikali ABTS[20]. Wara l-formazzjoni radikali, ġiet miżjuda soluzzjoni ta '7.4 mMABTS u 2.6 mM persulfate tal-potassju u t-taħlita li tirriżulta tħalla tirreaġixxi għal 12-il siegħa atRT; Soluzzjoni ABTS ġiet imkejla u wriet assorbiment ta '0.70 ± 0.03 (medja ± SD) imkejla bl-użu ta' amicroplate reader. L-estratt ES (100 μL) ġie miżjud ma '900 μL ta' soluzzjoni ABTS u tħalla jirreaġixxi għal 10 min f'RT. L-assorbiment tat-taħlita ta 'soluzzjoni ta' 200 μL ġiet imkejla f'732 nm bl-użu ta 'qarrej tal-mikroplate.

Kejl tal-kontenut tal-melanin

Il-kontenut ta 'melanin tkejjel wara li żied modifiki minuri għall-protokoll deskritt qabel [21]. Iċ-ċelluli tal-melanoma B16F10 ġew miżrugħa f'1 × 105 ċelluli/wellin 3 mL ta' medju fi 6-pjanċi ta' kultura sew u inkubati matul il-lejl biex iċ-ċelloli jaderixxu. Iċ-ċelloli ġew esposti għal diversi konċentrazzjonijiet (8, 40, 200 ug/mL) tal-ESestratt jew 10 mM arbutin għal 72 siegħa fil-preżenza jew in-nuqqas ta '100 nM ta' -melanocyte-stimulatinghormone (-MSH; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA).Fi tmiem it-trattament, iċ-ċelloli ġew maħsula bil-PBS (pH 7.2) u lysed bi 300 μL ta '1 M NaOH li jkun fih 10 fil-mija DMSO għal 2 sigħat fi 80 grad. L-assorbiment ta 'taħlita ta' 200 μL ġiet imkejla f'400 nm bl-użu ta 'qarrej ta' microplate.

Determinazzjoni ta 'attività tyrosinase ċellulari

Ċellularityrosinasel-attività kienet imkejla skond il-metodu deskritt qabel minn Lee et al. [22] b'xi modifiki. Pjanċi ta 'sitt bir li fihom 2 mL ta' DMEM ġew miżrugħa b'ċelluli tal-melanoma B16F10 f'densità ta '1 × 105 ċelluli/bir. Kull bir kien separat f'6 gruppi differenti kif ġej; Vettura: mhux trattament, Kontroll: 100 nM ta' -MSH, ESEE 8: -MSH u estratt ES (8 ug/mL), ESEE 40: -MSH u estratt ES (40 ug/mL), ESEE200: -MSH u ES estratt (200 ug/mL), Arbutin:-MSHu arbutin (10 mM). Il-pjanċi ġew inkubati matul il-lejl f'inkubatur umidifikat f'37 grad b'atmosfera ta '5 fil-mija CO2 biex jippermettu li ċ-ċelloli jaderixxu. Iċ-ċelloli ġew imbagħad esposti għal 100 nM ta' -MSH għal 48 siegħa u mbagħad ġew ittrattati b'dożi dejjem jiżdiedu tal-ESestratt jew arbutin għal 24 siegħa. Iċ-ċelloli ġew maħsula b'PBS (pH 6.8) u ġew sospiżi mill-ġdid f'liżi buffer. Sussegwentement, iċ-ċelloli nkisru bl-iffriżar u t-tidwib, u l-lisat ġie ċċarat b'ċentrifugazzjoni f'16,000 g għal 20 min. Il-kontenut tal-proteina tal-lisat ġie determinat bl-użu ta' BCA Protein AssayKit (Thermo Scientific, Vantaa, Finland). Wara l-kwantifikazzjoni tal-livelli tal-proteina, il-konċentrazzjonijiet ġew aġġustati b'tali mod li l-kampjuni kollha kien fihom l-istess ammont ta 'proteina (20 ug). Dawn il-lysates imbagħad ġew miżjuda mal-bjar ta '96-pjanċa tal-bir li kien fih 2.5 mM L-DOPA f'0.1 M phosphate buffer (pH 6.8). Wara l-inkubazzjoni f'37 grad għal siegħa, l-assorbenza tal-lisati differenti kienet imkejla f'475 nm bl-użu ta' spettrofotometru.Tyrosinasel-attività fil-proteina ġiet ikkalkulata bil-formula li ġejja:

Attività Tyrosinase ( fil - mija )=（ODs-ODb）/ Kontroll * 100

ODs: valur ta' assorbiment tal-kampjun

ODb : valur tal-assorbiment tal-vettura

Attività tyrosinase tal-faqqiegħ

L-DOPA intuża bħala s-sottostrat għall-kejl tal-faqqiegħtyrosinaseattività. Il-buffer ta' reazzjoni (total ta' 3 mL) użat fl-esperiment kien fih 2.8 mL ta'0.5 mM L-DOPA f'50 mM Na2HPO4-NaH2PO4 buffer (pH 6.8) u 100 μL ta' konċentrazzjonijiet differenti ta'ES.Soluzzjoni milwiema ta 'faqqiegħ tyrosinase (100 μL) ġiet miżjuda mal-buffer imħallat. Is-soluzzjoni (200 μL) ġiet evalwata immedjatament għaż-żieda lineari fl-assorbiment ottiku f'475 nm bl-użu ta 'qarrej tal-mikroplate.

Analiżi Western blot

Iċ-ċelloli tal-melanoma B16F10 (1 × 106 ċelluli/bir) ġew kultivati ​​f'platti ta' 60-mm2. Imbagħad, iċ-ċelloli ġew ittrattati b'diversi konċentrazzjonijiet (8, 40, 200 ug/mL) ta'ESestratt u 10 mM ta' arbutin għal 24 siegħa. Iċ-ċelloli mbagħad ġew analizzati f'buffer li kien fih 50 mM Tris-HCl b'pH 7.4, 2 mM EGTA, 1 mM phenylmethyl-sulfonylfluoride, 10 mM -glycerophosphate, 10 mM -mercaptoethanol, 1 mM perċentwali tas-sodju deossidoliku u ortholic. melħ tas-sodju aċiduż. Il-lysates (25 ug) ġew solvedby 10 fil-mija SDS-polyacrylamide ġel elettroforesi u trasferiti elettroforetikament għal membrani polyvinylidene fluworidu u mblukkati matul il-lejl b'5 fil-mija ħalib xkumat inTBST buffer (20 mM Tris-HCl pH 7.4, 100 mM NaCl Tween, u 01 fil-mija. 20) f'4 gradi. Wara li l-membrani ġew maħsula fil-buffer TBST, ġew inkubati għal 3 sigħat b'antikorp primarju ta'tyrosinase, MITF, u -actin (proporzjon 1:1000).Wara l-inkubazzjoni b'antikorp sekondarju (proporzjon 1:1000) għal siegħa f'RT, il-kumplessi proteina-antikorp ġew viżwalizzati b'ECL Western blotting Luminol Reagent(Santa Cruz Biotech, CA , USA), u misjuba bl-użu tal-analizzatur tal-immaġni Fluorchem E (Cell Biosciences, CA, USA).

Analiżi GC-MS

Il-kampjun ta 'l-estratt ta' l-etanol ġie mnixxef bi speedvacuum u derivatizzat b'N, O-bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide (BSTFA) (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA). Analiżi GC-MS saret bl-użu ta' kromatografu tal-gass QP2{010akkoppjat ma' spettrometru tal-massa (Shimadzu) f'vultaġġ ta' jonizzazzjoni ta' 70 eV. GCanalysis twettqet f'modalità ta 'programmazzjoni tat-temperatura b'kolonna Restek (0.25 mm, 30 m; XTI-5). It-temperatura inizjali tal-kolonna ġiet issettjata f'70 grad għal 3 min, żdiedet b'mod lineari f'10 grad /min sa 300 grad, u mbagħad miżmuma għal 5 min. It-temperatura tal-port ta 'l-injezzjoni kienet 280 grad, u l-interface GC/MS wasmaintained f'290 grad. Ir-rata tal-fluss tal-gass trasportatur tal-elju kienet 1.0 mL/min.

Analiżi statistika

Id-dejta għas-sintesi tal-melanin, iċ-ċitotossiċità, utyrosinaseanaliżi tal-attività ġew evalwati statistikament mill-ANOVA, segwit mit-test ta 'Dunnett. Id-dejta hija ppreżentata bħala medja ± SD. Valur AP < 0.05="" indikat="" sinifikat="">

Riżultati

Effett tal-estratt ES fuq il-vijabbiltà taċ-ċelluli B16F10

L-assaġġ MTT intuża biex jiġi vvalutat l-effett tal-ESEstratt ta 'l-etanol ta' 70 fil-mija fuq il-vijabbiltà taċ-ċelloli tal-melanoma B16F10. Iċ-ċelloli ġew ittrattati b'diversi konċentrazzjonijiet tal-estratt (8, 40, 200 ug / mL) għal 24 siegħa, u mbagħad sar l-assaġġ MTT. Ir-riżultati huma espressi bħala perċentwali tal-vijabbiltà relattiva għall-kontroll. L-estratt tal-ES kellu effett mhux ċitotossiku fuq il-proliferazzjoni taċ-ċelluli B16F10 (Fig. 1). Madankollu, f'konċentrazzjoni ta' 1000 ug/mL, ġiet osservata ċitotossiċità ċara fiċ-ċelluli B16F10 (dejta mhux murija).

Kapaċitajiet antiossidanti tal-estratt ES

L-analiżi DPPH u ABTS intużaw biex titkejjel l-attività antiossidanti tal-estratt ES. Biex titkejjel l-attività ta 'scavenging radikali theDPPH tal-estratt ES, intużaw konċentrazzjonijiet varji tal-estratt ES (8, 40, 200 ug/mL). L-attività ta ' scavenging radikali DPPH tal-ESestratt żdied b'mod dipendenti fuq id-doża. Aċidu askorbiku użat bħala kontroll pożittiv u wera aktar minn 5 0 fil-mija attività ta ' scavenging radikali DPPH (Fig. 2a). TheABTS flimkien ma 'attività ta' scavenging radikali ta '8 u 40 ug/mL ta' estratt ta 'ES kien ukoll għoli b'mod sinifikanti, li jippreżenta riżultat simili għall-grupp ta' kontroll pożittiv. L-estratt ES wera 93.05 ± 0.6 fil-mija attività f'200 ug/mL, li kien kważi l-istess bħal dak ta 'aċidu askorbiku (Fig. 2b).

Effett tal-estratt ES fuq l-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ, il-kontenut tal-melanin B16F10, u l-attività tat-tyrosinase intraċellulari

Biex jitkejjel l-effett inibitorju tal-ESestratt fuq l-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ, sar l-assay ta 'inibizzjoni tat-tyrosinase. Ir-riżultati indikaw li l-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ kienet inibita mill-ESextract f'konċentrazzjonijiet għoljin.Tyrosinasel-attività kienet 88.35 ± 1.28 fil-mija, 7{{10}}.81 ± 2.52 fil-mija, u 45.43 ± 0.48 fil-mija wara trattament bi 8, 4{0, u 200 ug /mL tal-estratt ES, rispettivament (Fig. 3a). Biex teżamina l-anti-melanogenicactivity tal-estratt ES, l-effett inibitorju tal-ESextract fuq il-melanin ġie evalwat fiċ-ċelloli B16F10. Iċ-ċelloli B16F10 ġew ittrattati bl-estratt ES fi 8, 40, u 200 ug/mL jew b'arbutin f'10 mm, u stimulati b'-MSH (10 nM) għal 48 siegħa. L-estratt ES ippreżenta effett inibitorju sinifikanti fuq is-sintesi tal-melanin dipendenti mid-doża. Il-kontenut tal-melanin kien rappreżentat bħala persentaġġ tal-vettura. Il-kontenut ta 'melanin kien 146.17 ± 0.07 fil-mija, 110 ± 0.1 fil-mija, u 76.95 ± 0.39 fil-mija wara t-trattament bi 8, 40, u 200 ug / mL tal-estratt ES, rispettivament (Fig. 3b). Meta ċ-ċelloli B16F10 ġew ittrattati bil-kontroll pożittiv arbutin (10 mM), il-kontenut ta 'melanin intraċellulari kien 84.82 ± 1.28 fil-mija. Biex tiddetermina l-mekkaniżmu sottostanti l-effett inibitorju tal-ESextract fuq il-melanoġenesi, ivvalutajna l-attività intracellulartyrosinase fiċ-ċelloli tal-melanoma B16F10. Għalhekk, grupp ieħor ta 'ċelluli B16F10 ġie ttrattat b'diversi konċentrazzjonijiet tal-estratt ES (8, 40, 200 ug/mL) jew arbutin (10 mM) u stimulat b'-MSH(10 nM) għal 48 siegħa. L-estratt ES inibit b'mod sinifikanti -MSH indotttyrosinaseattività b'mod dipendenti mid-doża (Fig. 3c).

Effett inibitorju tal-estratt ES fuq tomelanogenesis relatata mal-proteini fiċ-ċelloli B16F10

Biex tinvestiga jekkESjistgħu jinfluwenzaw l-espressjoni melanogenicprotein, western blotting kien performedusing l-lysate ta ' ċelluli melanoma B16F10 ittrattati withES u stimulati ma -MSH (10 mM). Il-livelli ta 'espressjoni ta' Tyrosinaseand MITF ġew evalwati minn westernblot (Fig. 4). Aħna kkonfermajna dantyrosinaseu MITFexpression żdiedet b'mod sinifikanti meta ċ-ċelloli kienu stimulati bi-MSH. L-estratt ES kien kapaċi jrażżan l-espressjoni ta 'tirosinase u MITF stimulata minn -MSHin b'mod dipendenti fuq id-doża.

Kompożizzjoni kimika ta' ES

Il-kompożizzjoni kimika tal-ESestratt ġie analizzat minn GC-MS (Fig. 5). Il-ħinijiet ta 'żamma ta' aċidi gallicand protocatechuic, tnejn mill-komponenti ewlenin tal-estratt ES, kienu 19.810 u 18.290 min, rispettivament. Iż-żewġ komposti ġew skoperti b'suċċess fl-estratt ES.

estratt ta 'cistanche: ġilda ta' benefiċċju

Diskussjoni

F'dan l-istudju, aħna evalwajna jekk il-ESestratt wera effett li jbajdu l-ġilda billi irażżan il-produzzjoni tal-melanin fiċ-ċelloli tal-melanoma B16F10. L-estrazzjoni ES inibita l-attività tal-enzima tyrosinase, naqas il-kontenut ta 'melanin, u wriet effett antiossidant. Il-produzzjoni tal-melanina tista' tiġi stimulata bl-UV jew-MSH.Il--MSH jorbot MC1R u jattiva s-sinjalingprotein adenylate cyclase biex iżżid il-produzzjoni ċikliku ta 'AMP(cAMP) [23]. Il-proteina li torbot l-element li tirreaġixxi għall-cAMP (CREB) hija attivata kontinwament mill-protein kinase A (PKA), u l-attivazzjoni minn CREB iżżid l-espressjoni tal-proteina MITF u tippromwovi l-espressjoni ta’tyrosinase[24]. Wara li jistimulaw iċ-ċelluli B16F10 b'-MSH biex jinduċu melanoġenesi, l-effett li jbajdu l-ES ġie kkonfermat minn melaninkwantifikazzjoni. Il-kontenut ta 'melanin instab li jiġi mrażżan b'mod dipendenti fuq id-doża, u fl-ogħla konċentrazzjoni (200 ug/mL) użata fl-esperiment, ġiet osservata soppressjoni ta' aktar minn 50 fil-mija tal-kontenut ta 'melanin meta mqabbla mal-grupp ta' trattament -MSH biss.

ES intuża f'formulazzjonijiet veġetali tradizzjonali. Jappartjeni għall-familja Euphorbiaceae u huwa tradizzjonalment użat fl-Asja tal-Lvant għal skopijiet mediċinali. ES fih bosta sustanzi bijoloġikament attivi inklużi tannini, terpenojdi, u polifenoli [25].DPPH huwa radikali ħieles relattivament stabbli. L-assaġġ DPPH huwa użat ħafna biex titkejjel l-attività antiossidant tal-pjanti, indikata minn tnaqqis fil-kulur deeppurple tas-soluzzjoni billi jnaqqas l-aġenti bħal aċidu askorbiku, tocopherol, polyhydroxy aromaticcompounds, u amini aromatiċi [26]. Barra minn hekk, l-attività ta’ scavenging radikali ABTS hija aktar utli mill-attività ta’ scavenging radikali DPPH fir-rigward tal-kejl ta’ antiossidanti li jagħtu l-idroġenu, antiossidanti li jkissru l-katina, u kapaċità antiossidanti ta’ sustanzi idrofiliċi u idrofobiċi [27]. Studji rrappurtaw l-attività antiossidanti ta 'ES. Madankollu, l-effett tiegħu li jbajdu l-ġilda ma ġiex evalwat s'issa. Għalhekk, f'dan l-istudju, ikkonfermajna l-effett li jbajdu l-ġilda ta 'ES(Fig. 2). Aħna vverifikajna l-influwenza tagħha fuqtyrosinaseattività, li tiddetermina r-rata inizjali ta 'melanoġenesi (Fig. 3). Bħala enzima li tippromwovi l-produzzjoni tal-melanin, tyrosinaseis użat ħafna bħala kompost fil-mira biex jidentifika inibituri ġodda li jistgħu jrażżnu l-formazzjoni tal-melanin [28]. Biex tinvestiga l-mekkaniżmu li bih l-ES jinibixxi l-melanogenesis, iddeterminajna jekk l-estratt ES jistax jinibixxi l-attività tat-tyrosinase direttament [29] . Għal dan l-assay, l-arbutin intuża bħala l-kontroll pożittiv. Aħna osservajna effett li jbajdu l-ġilda, li kien notevolment ogħla minn dak ta 'arbutin (10 mM). L-estratt ES naqqas b'mod sinifikanti l-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ wara 24 siegħa ta 'trattament u inibixxa l-attività taċ-ċellularisinase. Għalhekk, aħna kkonfermajna li l-ESextract juri effett antiossidant eċċellenti kif ukoll attività li jbajdu l-ġilda.

Tyrosinasehija l-enzima ewlenija involuta fil-melanoġenesi [30]. Il-fatturi tat-traskrizzjoni tal-MITF huma regolaturi importanti fl-iżvilupp u d-divrenzjar tal-melanoċiti [31]. Is-soppressjoni ta 'tyrosinase u MITFexpression mill-estratt ES żdiedet b'mod dipendenti fuq l-adose. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu liESirażżan il-fattur ta 'traskrizzjoni MITF, u b'hekk jinibixxi l-espressjoni ta' tyrosinase.

Kien hemm żieda fl-interess f'diversi prodotti naturali b'effetti li jbajdu l-ġilda u jtejbu t-tikmix bħala materjali bażi għall-ikel u l-kożmetiċi. L-użu ta 'prodotti li fihom ingredjenti b'diversi proprjetajiet li jipproteġu l-ġilda, bħal kontra t-tikmix, moisturizing, jbajdu, u kontra l-infjammazzjoni, żdied fis-suq globali tas-sbuħija [32]. F'dan l-istudju, sibna li l-ESextract kellu effetti antiossidanti qawwija, inhibitedtyrosinase, u espressjoni regolata ta 'proteina relatata mat-tibjid. L-attivitajiet jistgħu jiġu attribwiti għal gallicacid u protocatechuic acid misjuba fl-estratt ES[33, 34]. Għalhekk, ES jidher li għandu l-potenzjal li jintuża għall-iżvilupp ta 'kożmetiċi naturali għall-bajd tal-ġilda għal tnaqqis effettiv jew prevenzjoni ta' pigmentazzjoni eċċessiva tal-melanin fil-ġilda.

effetti ta' cistanche: jinibixxutyrosinaseattività biex tibjid il-ġilda

Konklużjonijiet

Fil-konklużjoni,ESestratt regolattyrosinaseattivitajiet u espressjoni tal-proteina MITF fiċ-ċelloli B16F10. L-ESextract wera attivitajiet antiossidanti f'DPPH u ABTSassays. Dan l-istudju jipprovdi evidenza sperimentali li l-ES jista 'jkun aġent terapewtiku utli għat-trattament tal-mard tal-ġilda.

Cistanche jinibixxi l-attività tyrosinase