Parti 1: Echinacoside Inibixxi r-Rilaxx tal-Glutamate Billi Jrażżan Ca2 dipendenti fuq il-Vultaġġ flimkien ma' Dħul U Protein Kinase C fit-Terminali tan-nervituri Ċerebrokortiċi tal-Firien

Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 u Su Jane Wang 3,*

Astratt:

Is-sistema glutamaterġika tista' tkun involuta fl-effetti ta' terapiji newroprotettanti.Echinacoside, phenylethanoid glycoside estratt mill-ħaxix mediċinali ĊiniżHerba Cistanche, għandu effetti newroprotettivi. Dan l-istudju investiga l-effetti taechinacosidefuq 4-rilaxx ta' glutamate evokat minn aminopiridina fit-terminali tan-nervituri ċerebrokortikali tal-firien (sinaptosomi). Echinacoside inibixxa r-rilaxx tal-glutamate evokat minn Ca2 plus -dipendenti, iżda mhux Ca2 plus -indipendenti, 4-aminopyridine-evokat b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni. Echinacoside naqqas ukoll iż-żieda evokata minn 4-aminopyridine fil-konċentrazzjoni ta' Ca2 plus ħielsa ċitoplasmika iżda ma biddilx il-potenzjal tal-membrana sinaptosomali. L-effett inibitorju ta' echinacoside fuq ir-rilaxx tal-glutamate evokat minn 4-aminopyridine ġie evitat b'o-conotoxin MVIIC, imblokkatur ta' spettru wiesa' tal-kanali Cav2.2 (tip N) u Cav2.1 (tip P/Q) , iżda ma kienx sensittiv għall-Ca2 intraċellulari flimkien ma' inibituri tar-rilaxx dantrolene u 7-kloro-5-({2-klorofenil)-1,5-diidro-4 ,1-benzodiazepine-2(3H)-one (CGP37157). Barra minn hekk, echinacoside naqqas il-fosforilazzjoni indotta minn 4-aminopyridine tal-proteina kinase C, u l-inibituri tal-proteina kinase C neħħew l-effett ta 'echinacoside fuq ir-rilaxx tal-glutamate. Skont dawn ir-riżultati, nissuġġerixxu li l-effett inibitorju ta 'echinacoside fuq ir-rilaxx tal-glutamate evokat huwa assoċjat ma' Ca2 dipendenti fuq il-vultaġġ imnaqqas flimkien ma 'dħul u soppressjoni sussegwenti tal-attività tal-proteina kinase C.

Kliem ewlieni:echinacoside; rilaxx tal-glutamat; terminali tan-nervituri ċerebrokortikali; kanali Ca2 plus dipendenti mill-vultaġġ; proteina kinażi C

1. Introduzzjoni

Echinacosidehuwa phenylethanoid glycoside ewlieni preżenti fiHerbaCistanche, mediċina tradizzjonali Ċiniża magħrufa użata biex tikkura l-minsi, l-impotenza u l-istitikezza kronika [1].Echinacosidejippossjedi diversi bijoattivitajiet bħal antiossidazzjoni, kontra l-infjammazzjoni, kontra l-kanċer, epatoprotezzjoni, u modulazzjoni immuni [2–4]. Notevolment, echinacoside għandu effetti newroprotettivi; pereżempju, jista 'jipproteġi kontra n-newrotossiċità kkaġunata minn stress ossidattiv jew newrotossini f'newroni kortikali tal-firien primarji, ċelloli SH-SY5Y tan-newroblastoma umana, u ċelluli feokromoċitoma (PC12) [5-8]. Barra minn hekk, echinacoside jnaqqas il-ħsara fil-moħħ u jtejjeb il-funzjoni konjittiva f'mudelli ta 'annimali tal-marda ta' Parkinson, marda ta 'Alzheimer, u okklużjoni ta' l-arterja ċerebrali tan-nofs [9-12]. Madankollu, il-mekkaniżmu li permezz tiegħuechinacosidejinduċi newroprotezzjoni mhux mifhum bis-sħiħ.

In-newroprotezzjoni hija proċess kumpless ta' preservazzjoni tal-istruttura u l-funzjoni newronali fuq insulti tossiċi. It-tnaqqis tal-eċitotossiċità tal-glutamate huwa meqjus bħala mekkaniżmu potenzjali involut fin-newroprotezzjoni tal-moħħ. Il-glutamat, newrotrasmettitur tal-aċidu amminiku eċċitatorju, għandu rwol kruċjali f'diversi funzjonijiet tal-moħħ [13]. Madankollu, l-attivazzjoni żejda tar-riċetturi tal-glutamate taħt konċentrazzjonijiet għoljin ta 'glutamate tikkawża Ca2 intraċellulari flimkien ma' tagħbija żejda, disfunzjoni mitokondrijali, produzzjoni ta 'radikali ħielsa u mewt newronali [14,15]. Dan il-proċess patoloġiku huwa implikat f'ħafna disturbi tal-moħħ inklużi iskemija ċerebrali, korriment trawmatiku fil-moħħ, epilessija u mard newrodeġenerattiv [16,17]. Għalhekk, inibituri li jimblukkaw it-trasmissjoni glutamaterġika patofiżjoloġika huma kkunsidrati mediċini newroprotettivi potenzjali. Eżempji notevoli ta 'dawn huma antagonisti tar-riċetturi tal-glutamate [18,19]; madankollu, provi kliniċi għal dawn il-mediċini fallew minħabba inqas effettività u effetti sekondarji mhux mixtieqa, jew saħansitra ċitotossiċi [20,21]. Minbarra l-imblokk dirett tar-riċettur tal-glutamate, l-inibizzjoni tar-rilaxx tal-glutamate tista 'tkun strateġija effettiva għan-newroprotezzjoni. Diversi newroprotettivi (eż., memantine u riluzole) jistgħu jnaqqsu r-rilaxx tal-glutamate fit-tessuti tal-moħħ tal-firien [22-24].

Meta wieħed iqis ir-rwol tal-glutamate fl-eċitotossiċità u l-profil newroprotettiv tal-echinacoside, l-istudju preżenti uża terminali tan-nervituri iżolati (synaptosomes) purifikati mill-kortiċi ċerebrali tal-firien biex jinvestiga l-effett tal-echinacoside fuq ir-rilaxx tal-glutamate u esplora aktar mekkaniżmi potenzjali. Il-preparazzjoni terminali tan-nervituri iżolati hija mudell stabbilit sew għall-istudju tar-regolazzjoni presinaptica tar-rilaxx tan-newrotrasmettitur minn mediċini fin-nuqqas ta 'xi effetti postsinaptiċi [25]. Billi użaw dan il-mudell, aħna evalwajna l-effett ta 'echinacoside fuq ir-rilaxx tal-glutamate, il-potenzjal tal-membrana, presinaptic Ca2 flimkien ma' influx, u l-attività tal-proteina kinase C. Skont ir-reviżjoni tagħna tal-letteratura, dan huwa l-ewwel rapport li jiddokumenta l-mekkaniżmu li permezz tiegħu echinacoside jinibixxi r-rilaxx endoġenu tal-glutamate fil-livell presinaptic.

2. Riżultati

2.1. EchinacosideJinibixxi 4-Rilaxx ta' Glutamate Evokat mill-Aminopyridine mit-Terminali tan-Nervituri Ċerebrokortiċi tal-Firien billi Tnaqqas l-Eżoċitożi Vesikulari

Il-Figura 1 turi l-effett dipendenti fuq il-konċentrazzjoni ta' echinacoside fuq ir-rilaxx ta' glutamate evokat minn 4-aminopyridine minn sinaptosomi ċerebrokortikali tal-firien purifikati. F'sinaptosomi inkubati b'1 mM CaCl2, 1 mM 4-aminopyridine evoka rilaxx ta' glutamate ta' 7.4 ± {{1{{20}}}}.1 nmol/mg/5 min, li tnaqqset b'1, 5, 10, 30, u 50 uM echinacoside għal 6.5 ± 0.2, 5.8 ± 0.3, 4.8 ± 0.2,

4.1 ± 0.1, jew 2.3 ± 0.4 nmol/mg/5 min, rispettivament (F(5,24)=67.1, p=0. 000). Il-valur IC50 għall-inibizzjoni medjata mill-echinacoside tar-rilaxx tal-glutamate evokat minn 4-aminopyridine, derivat minn kurva doża-rispons, kien 24 uM. Barra minn hekk, ir-rilaxx tal-glutamate evokat minn 1 mM 4-aminopyridine f'soluzzjoni extraċellulari Ca2 plus -free li fiha 300 uM ethylene glycol bis(-aminoethyl ether)-N,N,N/,N/-tetraacetic acid (EGTA) kien 2.1 0.2 nmol/mg/5 min (F(2,12)=310.65, p=0.000),

u dan il-komponent Ca2 plus -indipendenti tar-rilaxx tal-glutamate evokat minn 4-aminopyridine ma kienx affettwat minn 20 uM echinacoside (1.8 ± 0.2 nmol/mg/5 min; p {{1} 0}}.58; Figura 1). F'sinaptosomi ttrattati b'0.1 uM bafilomycin A1, inibitur tat-trasportatur vesikulari [26], ir-rilaxx ta' 4-aminopyridine evokat glutamate tnaqqas b'mod sinifikanti (2.2 ± 0.2 nmol/mg/ 5 min;F (2,12)=249.518, p=0.000). Fil-preżenza ta 'bafilomycin A1, 20 uM echinacoside naqas milli jinibixxi b'mod sinifikanti r-rilaxx ta' glutamate (2.1 ± 0.2 nmol/mg/5 min; p=0.94; Figura 1). B'kuntrast, 10 uM DL-threo-beta-benzyl-oxyaspartate (DL-TBOA, inibitur tat-teħid mill-ġdid tal-glutamate) [27], żied 4-aminopyridine-evoked glutamate rilaxx għal 11.8 ± 0.4 nmol/mg/5 min ( t(8)=-11.31, p=0.000). Anke fil-preżenza ta' DL-TBOA, 20 uM echinacoside inibit 4-aminopyridine-evoked glutamate rilaxx b'mod sinifikanti (7.7 ± 0.2 nmol/mg/5 min; F(2,12)=87.23, p.=0.000; Figura 1).

2.2 Echinacoside Inaqqas il-Cytosolic Ca2 flimkien mal-Konċentrazzjoni iżda Ma Jbiddilx il-Potenzjal tal-Membrana Sinaptosomali

Id-depolarizzazzjoni tas-sinaptosomi ikkawżata minn 1 mM 4-aminopyridine żiedet il-konċentrazzjoni ta' Ca2 flimkien (p=0.000; Tabella 1). L-applikazzjoni ta' 20 uM echinacoside ma affettwax b'mod sinifikanti l-konċentrazzjoni bażika ta' Ca2 plus (t(8)=0.06, p=0.95) iżda naqqset b'mod sinifikanti ż-żieda indotta minn 4-aminopyridine f' Ca2 flimkien mal-konċentrazzjoni (t(10)=6.16, p=0.000). Barra minn hekk, 1 mM 4-aminopyridine żdiedet fil-fluworexxenza ta' 3',3',3'-dipropylthiadicarbocyanine iodide [DiSC3(5)] (p=0.000). Iż-żieda ta' 20 uM echinacoside ma bidlitx il-potenzjal tal-membrana ta' mistrieħ (t(8)=0.976, p=0.36) jew bidlet b'mod sinifikanti ż-żieda medjata minn 4-aminopyridine f'DiSC3 (5) fluworexxenza (t(8)=-0.014, p=0.99; Tabella 1).

2.3 Ca2 mnaqqas flimkien ma' Influx permezz tal-Kanali Cav2.2 (Tip N) u Cav2.1 (Tip P/Q) Jistgħu jiġu Assoċjati mal-Inibizzjoni ta' 4-Rilaxx ta' Glutamate Evokat minn Aminopyridine minn Echinacoside

Il-Figura 2 turi li 2 uM o-conotoxin MVIIC, N- u P/Q-tip Ca2 plus blocker tal-kanali, naqqas ir-rilaxx tal-glutamate evokat minn 4-aminopyridine minn 7.4 ± {{10}}. 2 sa 2.0 ± 0.1 nmol/mg/5 min (t(9)=25.35, p=0.000). Fil-preżenza ta' o-conotoxin MVIIC, l-effett ta' 20 uM echinacoside fuq ir-rilaxx tal-glutamate evokat minn 4-aminopyridine ma kienx sinifikanti (1.8 2± flimkien ma' 0.2 nmol/mg/5 min; t(8)=1.06,p=0.32). Dantrolene (10 uM), inibitur tar-rilaxx ta 'Ca intraċellulari mill-endoplasmika

reticulum [28], rilaxx imnaqqas ta' 4-aminopyridine-evokat glutamate (5.6 ± 0.3 nmol/mg/5 min; F(2,14) {{10}}. 95, p=0.000). Madankollu, fil-preżenza ta 'dantrolene, 20 uM echinacoside xorta jista' jinibixxi r-rilaxx tal-glutamate b'mod sinifikanti (3.3 ± 0.2 nmol/mg/5 min; p=0.000). Riżultati simili ġew osservati bl-użu ta' 100 uM 7-kloro-5-(2-klorofeni)-1,5-dihydro-4,1-benzothiazepin -2(3H)-one (CGP37157), imblokkatur permeabbli mill-membrana ta 'skambju mitokondrijali Na plus /Ca2 plus. Fil-ħames preparazzjonijiet sinaptosomali eżaminati, 20 uM echinacoside flimkien ma' 100 uM CGP37157 naqqas 4-aminopyridine-evoked glutamate rilaxx bi 48.3 fil-mija ± 5.2 fil-mija (F(2,13) ​​= 136.79, p {{{{ 49}}.000), simili għall-inibizzjoni mill-echinacoside waħdu (46.2 fil-mija ± 2.3 fil-mija; p=0.89; Figura 2).

2.4 EchinacosideJinibixxi 4-Rilaxx ta' Glutamate Evokat mill-Aminopyridine permezz ta' Sinjali permezz ta' Protein Kinase C

Kif muri fil-Figura 3, 10 uM 2-[1-(3-dimetilaminopropil)indol-3-il]-3-(indol-3-il) maleimide (GF109203X), inibitur ġenerali tal-proteina kinażi Ċ [29], rilaxx imnaqqas ta' 4-aminopyridine-evoked glutamate (F(2,13) ​​= 19.46, p=0.{{17 }}). Fis-sinaptosomi trattati b'GF109203X, 20 uM echinacoside naqqas ir-rilaxx tal-glutamate evokat mill-aminopyridine b'5.5 fil-mija ± 1.8 fil-mija biss (p=0.89), inqas minn dak b'echinacoside waħdu (42.4 fil-mija ± 23. fil-mija ; p=0.000). Riżultati simili nkisbu b'5,6,7,13-tetraidro-13-metil-5-oxo-12H-indolo[2,3-a]pirrolo[3 ,4-c]carbazole-12-propanenitrile (Go6976), selettiv għal isoformi ta' proteina kinase C dipendenti fuq Ca2 plus ( , I, II, y) [29]. Fil-preżenza ta '3 uM Go6976, 20 uM echinacoside naqqas ir-rilaxx ta' glutamate bi 11.9 fil-mija ± 2.9 fil-mija (p=0.59), li jfisser tnaqqis sinifikanti meta mqabbel ma 'dak minn echinacoside waħdu (42.4 fil-mija 2.3 fil-mija; p {{{{ 65}}.000; Figura 3). B'kuntrast, 3 uM rottlerin, inibitur indipendenti ta' protein kinase C6 ta' Ca2 plus [30], ma biddilx b'mod sinifikanti r-rilaxx tal-glutamate evokat minn 4-aminopyridine (1 mM) (p=0.45). Madankollu, fil-preżenza ta 'rottlerin, 20 uM echinacoside effettivament ikkawża inibizzjoni medja ta' 37.1 fil-mija ± 5.6 fil-mija tar-rilaxx (F(2,13) ​​= 19.72, p=0.{{88 }}), simili għal dak minn echinacoside waħdu (p=0.41; Figura 3). Barra minn hekk, l-inibitur tal-protein kinase attivat minn mitoġenu 2-(2-amino-3-methoxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one) (PD98059 ) (50 uM) u l-inibitur tal-proteina kinase A N-[2-(p-bromocinnamylamino)ethyl]-5-isoquinolinesulfonamide (H89) (100 uM) naqqsu r-rilaxx tal-glutamat 4-evokat minn aminopiridina (p=0.000). Anke fil-preżenza ta 'PD98059 jew H89, 20 uM echinacoside effettivament naqqas ir-rilaxx (F(2,13) ​​= 52.3, p=0.000; Figura 3).

Il-Figura 4 turi li 1 mM 4-aminopyridine żiedet il-fosforilazzjoni tal-proteina kinase C fis-synaptosomes (t(4)=-6.871, p=0.002). Meta s-sinaptosomi ġew ittrattati minn qabel b'20 uM echinacoside għal 10 minuti qabel iż-żieda ta' 4-aminopyridine, 4-aminopyridine indotta fosforilazzjoni ta' protein kinase C naqset b'mod konsiderevoli (F(2,6)=29.202 , p=0.001).

2.5 Inibizzjoni Medjata mill-Echinacoside tar-Rilaxx tal-Glutamate Ma Tinvolvix Riċettur tal-Aċidu Gamma-Aminobutyric Tip A (GABAA)

Fil-Figura 5, l-effett ta 'echinacoside fuq 4-aminopyridine-evoked glutamate rilaxx fl-assenza jew il-preżenza ta' SR95531 (antagonist tar-riċettur GABAA) tqabbel. Barra minn hekk, 100 uM SR95531 ma biddilx b'mod sinifikanti r-rilaxx tal-glutamat evokat minn 4-aminopyridine (1 mM). Fis-sinaptosomi trattati b'SR95531-, l-applikazzjoni ta' 20 uM echinacoside rriżultat f'inibizzjoni ta' 43 fil-mija fuq ir-rilaxx tal-glutamate evokat minn 4-aminopyridine (F(2,12)=42.63, p { {18}}.000), li ma kienx differenti b'mod sinifikanti mill-inibizzjoni prodotta minn echinacoside waħdu (40 fil-mija; p=0.000). Riżultat simili nkiseb b'antagonist ieħor tar-riċettur GABAA, bicuculline (50 uM). Ir-rilaxx imkejjel fil-preżenza ta' bicuculline u echinacoside kien differenti b'mod sinifikanti minn dak miksub fil-preżenza ta' bicuculline waħdu (p=0.000).

3. Diskussjoni

F'dan l-istudju,echinacoside, kompost attiv f'HerbaCistanche, inibit ir-rilaxx tal-glutamate evokat minn 4-aminopyridine fit-terminali tan-nervituri tal-kortiċi ċerebrali tal-firien. Il-mekkaniżmi sottostanti possibbli għall-echinacosidel-inibizzjoni medjata tar-rilaxx tal-glutamate huma investigati aktar u diskussi hawn.

3.1 Mekkaniżmi Sottostanti Inibizzjoni tar-Rilaxx ta' Glutamate medjata minn Echinacoside

Ir-rilaxx tal-glutamat evokat minn 4-aminopyridine jinkludi żewġ komponenti: komponent li jiddependi fiżjoloġikament rilevanti fuq Ca2 plus -, li jiġi prodott permezz ta' eżoċitożi ta' vesikli sinaptiċi li fihom il-glutamate; u komponent Ca2 plus -indipendenti, li joriġina minn depolarizzazzjoni fit-tul li tikkawża ċaqliq medjat mill-potenzjal tal-membrana tat-trasportatur tal-glutamate fi stat fiss lejn id-direzzjoni 'l barra, u b'hekk jaffettwa l-effluss tal-glutamat ċitosolik [31]. Hawnhekk, aħna osservajna li l-echinacoside ma inibixxix b'mod sinifikanti r-rilaxx tal-glutamate evokat minn 4-aminopyridine fil-preżenza ta' mezz ħieles minn Ca2 plus (rilaxx indipendenti minn Ca2 plus). Barra minn hekk, l-inibizzjoni osservata medjata mill-echinacoside tar-rilaxx tal-glutamate evokat minn 4-aminopyridine ġiet evitata b'mod effettiv minn bafilomycin A1 (li tnaqqas il-kontenut tal-glutamate tal-vesikoli sinaptiċi), iżda mhux minn DL-TBOA (li jinibixxi b'mod mhux selettiv l-aċidu amminiku eċċitatorju kollu). sottotipi tat-trasportaturi). Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-echinacoside jaffettwa l-eżoċitożi dipendenti fuq Ca2 plus tar-rilaxx tal-glutamate mingħajr ma jaffettwa l-effluss ċitosoliku Ca2 plus -indipendenti tal-glutamate permezz tat-treġġigħ lura tat-trasportatur tal-glutamate tal-membrana tal-plażma terminali tan-nervituri. Fit-terminali sinaptiċi, l-inibizzjoni tal-kanal Na plus jew l-attivazzjoni tal-kanal K plus tistabbilizza l-eċitabbiltà tal-membrana u konsegwentement naqqset id-dħul evokat ta 'Ca2 plus u r-rilaxx tan-newrotrasmettitur [32,33]. Għalhekk, il-mekkaniżmu potenzjali sottostanti l-inibizzjoni tar-rilaxx tal-glutamate medjat minn echinacoside jinvolvi tnaqqis fl-eċitabilità sinaptosomali. Madankollu, din il-possibbiltà hija insostenibbli fuq il-bażi ta 'żewġ osservazzjonijiet: (1) 4-depolarizzazzjoni tal-potenzjal tal-membrana evokata mill-aminopyridine, imkejla biż-żebgħa sensittiva tal-potenzjal tal-membrana DiSC3(5) ma ġietx affettwata biż-żieda ta' echinacoside; u(2) echinacoside ma affettwax il-4-aminopyridine-evoked Ca2 plus -indipendenti glutamate release,komponent tar-rilaxx li jiddependi biss fuq il-potenzjal tal-membrana [31]. Jekk l-effett ma jkunx ikkawżat mis-soppressjoni tal-eċitabbiltà sinaptosomali, jista 'jiġi manifestat permezz ta' tnaqqis fl-attività ta 'Cav2.2 (tip N) u Cav2.1 (tip P/Q) Ca2 flimkien ma' kanali flimkien ma 'eżoċitożi tal-glutamate fil- terminali tan-nervituri [34-36]. Billi nużaw fura-2, aħna nuru li echinacoside inaqqas b'mod sinifikanti ż-żieda 4-evokata mill-aminopyridine fil-konċentrazzjoni ta' Ca2 flimkien. Barra minn hekk, id-dejta tagħna turi li l-effett inibitorju ta 'echinacoside fuq 4-aminopyridine-evoked glutamate rilaxx naqas minn 42.4 fil-mija 2.3 fil-mija għal 12.1 fil-mija 3.9 fil-mija wara espożizzjoni għal imblokkatur ta' Cav2.2 (N-tip) u Cav2 .1 (P/Q-tip) Ca2 plus kanali. Barra minn hekk, osservajna li echinacoside kompla jinibixxi b'mod sinifikanti r-rilaxx tal-glutamate evokat minn 4-aminopyridine fil-preżenza ta' inibituri ta' rilaxx intraċellulari ta' Ca2 plus. Dawn ir-riżultati jindikaw li s-soppressjoni simultanja ta 'Cav2.2 (tip N) u Cav2.1 (tip P/Q) Ca2 flimkien ma' attività tal-kanal hija l-mekkaniżmu potenzjalment sottostanti l-inibizzjoni tar-rilaxx tal-glutamate medjata minn echinacoside. Madankollu, l-attivazzjoni magħquda ta 'Cav2.2 (tip N) u Cav2.1 (tip P/Q) Ca2 flimkien ma' attività tal-kanal ma setgħetx timblokka l-azzjoni ta 'echinacoside kompletament. Għalhekk, tipi oħra mhux identifikati ta' kanali Ca2 plus jew mogħdijiet presinattiċi oħra jistgħu jkunu involuti fl-inibizzjoni. Pereżempju, ir-riċetturi GABAA huma preżenti fil-livell presinaptic, u l-attivazzjoni tagħhom intwera li tinibixxi l-influss ta' Ca2 flimkien ma' rilaxx u glutamate [37]. Fl-istudju preżenti, l-antagonisti tar-riċettur GABAA SR95531 u bicuculline ma imblukkawx l-inibizzjoni medjata minn echinacoside tar-rilaxx tal-glutamate, li jissuġġerixxi li r-riċetturi GABAA mhumiex involuti fit-tnaqqis tal-attività tal-kanal Ca2 plus dipendenti mill-vultaġġ u fl-inibizzjoni sussegwenti tar-rilaxx tal-glutamate. Id-dħul ta' Ca2 flimkien ma' kanali Ca2 plus li jiddependu mill-vultaġġ jattiva diversi protein kinases assoċjati ma' rilaxx ta' glutamate fit-terminali tan-nervituri inklużi protein kinase attivat minn mitoġenu, protein kinase C, u protein kinase A. Hawnhekk, aħna nuru li l-inibituri tal-proteina kinase C antagonizzaw b'mod effiċjenti l-echinacoside. -inibizzjoni medjata tar-rilaxx tal-glutamate; madankollu, l-inibitur tal-protein kinase attivat mill-mitoġenu PD98059 jew l-inibitur tal-proteina kinase A H89 ma kienx effettiv. Barra minn hekk, il-fosforilazzjoni 4-indotta mill-aminopiridina tal-proteina kinase C naqset fis-sinaptosomi wara trattament minn qabel b'echinacoside f'konċentrazzjoni effettiva biex tinibixxi r-rilaxx tal-glutamat. Għalhekk, il-mogħdija ta 'sinjalazzjoni tal-inibizzjoni tar-rilaxx tal-glutamate medjata minn echinacoside tista' tinvolvi proteina kinase C. Protein kinase C hija sistema ta 'sinjalazzjoni intraċellulari importanti li hija preżenti fil-livell presinaptic u għandha rwol kruċjali fl-eżoċitosi tan-newrotrasmettitur. Pereżempju, bosta proteini sinaptiċi involuti fit-traffikar jew ir-reklutaġġ u l-eżoċitożi tal-vesikula sinaptika, bħas-sottostrat C kinase myristoylated b'ħafna alanine, huma fosforilati minn protein kinase C [38,39]. Dan il-proċess ta 'fosforilazzjoni jista' jiżdied permezz ta 'dħul ta' Ca2 plus stimulat mid-depolarizzazzjoni, li jiffaċilita r-rilaxx tal-glutamate [40]. Għalhekk, nistgħu raġonevolment nispekulaw li l-effett inibitorju ta 'echinacoside fuq Ca2 flimkien ma' dħul osservat hawn jista 'jnaqqas l-attività ta' protein kinase C u konsegwentement ir-rilaxx tal-glutamate.

Pls ikklikkja hawn għall-Parti 2