Studju Mekkanistiku Ta Xorb Xian Fang Huo Ming Ibbażat fuq Cistanche fit-Trattament tal-Prostatite Kronika: Farmakoloġija tan-Netwerk Integrata U Validazzjoni Sperimentali Immirata L-Mogħdija PI3K/Akt/NF-κB
Oct 27, 2025
2. Metodi
2.1 Farmakoloġija tan-Netwerk u Analiżi ta' Docking Molekulari
2.1.1 Identifikazzjoni ta' Komponenti Attivi u Miri tal-Mard
Bl-użu tad-database TCMSP, komposti attivi fix-Xorb Xian Fang Huo Ming Drink (XFHY) ibbażat fuq Cistanche ġew skrinjati bi kriterji ADME: bijodisponibilità orali (OB) akbar minn jew ugwali għal 30% u tixbiha tad-droga (DL) akbar minn jew ugwali għal 0.18. Miri potenzjali ta 'dawn il-komposti ġew identifikati bl-użu ta' SwissTargetPrediction (probabbiltà akbar minn jew ugwali għal 0.1). Inbena netwerk "ħwawar-kompost-mira" bl-użu ta' Cytoscape 3.9.1, u l-aqwa ħames komposti ġew identifikati bbażati fuq iċ-ċentralità tal-grad. Fl-istess ħin, il-miri tal-mard relatati ma 'CP/CPPS inġabru minn GeneCards, OMIM, u DisGeNET bl-użu ta' kliem prinċipali bħal "prostatite kronika" u "prostatite."
Supplimenti ta' Estratt ta' Cistanche għas-Saħħa tal-Prostata u tal-Kliewi PhGs75% Ech 30% Att 12%
2.1.2 Identifikazzjoni tal-Miri tal-Intersezzjoni
L-intersezzjoni bejn il-miri komposti XFHY u l-miri tal-mard CP/CPPS ġiet determinata bl-użu ta 'softwer Venny 2.1 biex tiġġenera dijagramma Venn, li tidentifika miri terapewtiċi potenzjali ewlenin.
2.1.3 Kostruzzjoni tan-Netwerk tal-PPI
Il-miri tal-intersezzjoni ġew importati fid-database STRING (speċi: Homo sapiens; punteġġ tal-interazzjoni > 0.9). In-netwerk tal-interazzjoni proteina-proteina (PPI) li rriżulta ġie importat f'Cytoscape, u l-miri ewlenin ġew identifikati bl-użu ta 'CytoHubba ibbażati fuq parametri tat-topoloġija tan-netwerk bħal grad, bejn, u qrubija.
2.1.4 Kostruzzjoni tan-Netwerk "Ħxejjex–Kompost–Target–Pathway".
Bl-użu ta 'Cytoscape 3.9.1, inbena mudell ta' netwerk biex jivviżwalizza r-relazzjoni bejn XFHY, il-komposti attivi tiegħu, il-miri, u l-mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni. Il-parametri tan-netwerk ġew analizzati biex jiġu determinati n-nodi ewlenin.
2.1.5 Analiżi ta' Arrikkiment GO u KEGG
Il-miri ta 'l-intersezzjoni ttellgħu fid-database DAVID għall-analiżi ta' arrikkiment tal-passaġġi tal-Enċiklopedija ta 'Ġeni u Ġenomi (KEGG) ta' Kyoto Ontology (GO) (P <0.05). Ir-riżultati ġew viżwalizzati permezz ta' għodod tal-bijoinformatika.
2.1.6 Docking Molekulari
L-aqwa ħames komposti (eż., quercetin, kaempferol) intużaw bħala ligands, u l-aqwa għaxar miri ewlenin min-netwerk PPI bħala riċetturi. L-istrutturi tal-proteini nkisbu mill-Protein Data Bank (PDB), ipproċessati minn qabel bl-użu ta 'AutoDockTools 1.5.6 (inklużi deidrazzjoni, idroġenazzjoni, u żieda ta' ċarġ), u kkonvertiti f'format PDBQT. L-istrutturi tal-ligand fil-format MOL2 inkisbu minn TCMSP u ġew konvertiti bl-istess mod. L-irbit molekulari sar bl-użu ta 'AutoDock, u l-affinitajiet tal-irbit ġew viżwalizzati bl-użu ta' GraphPad Prism 8.
2.2 Esperiment tal-Annimali
2.2.1 Stabbiliment tal-Mudell
Intuża metodu ta 'induzzjoni kimika biex jimmudella CP/CPPS. Il-firien ġew anestetizzati bi 3% pentobarbital sodium (50 mg/kg). Saret inċiżjoni tal-linja tan-nofs fl-addome t'isfel, u 80 μL ta '3% λ-carrageenan ġew injettati f'kull lobu laterali tal-prostata (total 160 μL). Il-firien imħaddma b'mod falz irċevew injezzjonijiet tal-melħ. Il-kura ta' wara l-operazzjoni kienet tinkludi applikazzjoni topika ta' antibijotiċi. Fis-7 jum, is-suċċess tal-immudellar ġie kkonfermat permezz ta 'eżami gross u istoloġiku tal-prostata (edema, konġestjoni, deġenerazzjoni epiteljali, u infiltrazzjoni infjammatorja).
2.2.2 Raggruppament u Trattament
Sebgħin far maskili SD ġew maqsuma b'mod każwali f'seba' gruppi (n=10):
Kontroll normali
Operazzjoni simulata
Kontroll tal-mudell
Gruppi XFHY b'doża baxxa, medja u għolja
Grupp tamsulosin
Id-dożi ġew ikkalkulati abbażi ta' doża ekwivalenti umana (7.29 g/kg/jum). XFHY ingħata permezz ta' gavage orali f'0.3645 g/mL (baxx) u 1.458 g/mL (għoli). Tamsulosin ingħata f'0.0018 mg/kg. It-trattamenti kollha damu 28 jum, li bdew 8 ijiem wara l-immudellar.
2.2.3 Evalwazzjoni Istopatoloġika
Il-lobi tax-xellug tal-prostata ġew iffissati f'4% paraformaldehyde, inkorporati fil-paraffin, sezzjoni, u mtebbgħin b'ematoxylin-eosin. Bidliet istoloġiċi ġew evalwati taħt mikroskopija tad-dawl.
2.2.4 ELISA għal Markers Infjammatorji
Id-demm miġbur permezz tal-aorta addominali ġie ċentrifugat, u l-livelli tas-serum ta' TNF- , IL-1 , u COX-2 ġew imkejla bl-użu ta' kits ELISA skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur.
2.2.5 qRT-PCR għall-Espressjoni tal-Ġene
L-RNA totali ġie estratt mit-tessut tal-prostata u traskritt b'lura f'cDNA. PCR f'ħin reali twettqet bl-użu ta' primers speċifiċi għal PI3K, Akt, u NF-κB p65. GAPDH intuża bħala kontroll intern. L-espressjoni relattiva ġiet ikkalkulata bl-użu tal-metodu 2^-ΔΔCt.
2.2.6 Western Blot għall-Espressjoni tal-Proteina
Proteina ġiet estratta minn tessut tal-prostata iffriżat bl-użu ta 'buffer RIPA. Wara l-kwantifikazzjoni, il-proteini ġew separati b'SDS-PAGE, trasferiti għal membrani PVDF, u sondati b'antikorpi primarji kontra PI3K, p-PI3K, Akt, p-Akt (Ser473/Thr308), NF-κB p65, u p-NF-κB p65. Intużaw antikorpi sekondarji konjugati bl-HRP u skoperta ECL. L-intensitajiet tal-banda ġew ikkwantifikati bl-użu ta 'ImageJ.
2.2.7 Analiżi Statistika
L-esperimenti kollha saru fi tliet kopji. Id-dejta ġiet analizzata bl-użu ta' GraphPad Prism 8 u espressa bħala medja ± devjazzjoni standard. ANOVA f'direzzjoni waħda segwita minn LSD jew test ta 'Dunnett intuża għal paraguni ta' gruppi multipli. P <0.05 kien ikkunsidrat statistikament sinifikanti.
3. Riżultati
3.1 Farmakoloġija tan-Netwerk u Docking Molekulari
Intersezzjoni Kompost – Mira:912-il mira kompost u 2,197 mira tal-mard taw 374 mira koinċidenti.
Il-Komposti ta' Fuq Identifikati:Quercetin, kaempferol, pelargonidin, naringenin, u byakangelicol-kollha b'effetti anti-infjammatorji u antiossidanti magħrufa.
Analiżi PPI:Il-miri ewlenin kienu jinkludu TP53, AKT1, EGFR, TNF, IL6, STAT3, BCL2, CASP3, CCND1, u NFKB1.
Arrikkiment GO u KEGG:Mogħdijiet arrikkit kienu jinkludu PI3K/Akt, MAPK, RAS, u proċessi bijoloġiċi relatati mal-infjammazzjoni.
Docking Molekulari:Ġew osservati affinitajiet qawwija ta' rbit bejn miri ewlenin u komposti ewlenin (enerġija li torbot Inqas minn jew ugwali għal -5.0 kcal/mol), li tissuġġerixxi bijoattività għolja.
3.2 Validazzjoni Sperimentali
3.2.1 HE Tbajja
Il-firien tal-grupp tal-mudelli wrew deġenerazzjoni epiteljali glandulari, edema stromali, u infiltrazzjoni infjammatorja estensiva. Gruppi kkurati b'XFHY wrew infjammazzjoni mnaqqsa, speċjalment fi gruppi ta' doża medja u għolja.
3.2.2 Livelli ta' Marker Infjammatorji
Meta mqabbel mal-grupp mudell, XFHY naqqas b'mod sinifikanti l-livelli tas-serum TNF-, IL-1, u COX-2 (P <0.01), li jindika effikaċja anti-infjammatorja.
3.2.3 Espressjoni tal-Ġene (qPCR)
XFHY naqqas b'mod sinifikanti l-livelli ta 'mRNA ta' PI3K, Akt, u NF-κB p65 b'mod dipendenti mid-doża. Akt u p65 mnaqqsa b'doża baxxa biss; gruppi ta' doża medja u għolja wrew soppressjoni usa'.
3.2.4 Espressjoni tal-proteina (Western Blot)
Livelli ta 'fosforilazzjoni ta' PI3K, Akt (Ser473, Thr308), u NF-κB p65 kienu elevati b'mod sinifikanti fil-grupp mudell u mnaqqsa fil-firien ittrattati b'XFHY, speċjalment f'dożi medji u għoljin.
4. Diskussjoni
Filwaqt li jibni fuq l-esperjenza klinika, dan l-istudju jikkonferma danXFHY ibbażat fuq Cistanchegħandu effett anti-infjammatorju notevoli fuq CP/CPPS. Il-farmakoloġija tan-netwerk identifikat komposti attivi ewlenin, speċjalmentquercetin, bi proprjetajiet anti-infjammatorji u antiossidanti ppruvati. L-analiżi tal-PPI enfasizzat miri bħalTNF, IL6, uAKT1, li huma ċentrali għall-infjammazzjoni fil-prostatite.
L-analiżi KEGG issuġġeriet l-involviment tal-PI3K/Akt/NF-κBmogħdija ta 'sinjalazzjoni rikonoxxuta b'mod wiesa' fl-infjammazzjoni u r-regolamentazzjoni immuni. XFHY jista 'jeżerċita effetti terapewtiċi billi jinibixxi din il-mogħdija, u b'hekk inaqqas l-espressjoni ta' ċitokini pro-infjammatorji.
Barra minn hekk, il-fosforilazzjoni doppja ta 'Akt (Ser473 u Thr308) tidher li hija kritika għall-attivazzjoni ta' NF-κB. XFHY inibixxi l-fosforilazzjoni fiż-żewġ siti, li jissuġġerixxi l-inibizzjoni tas-sinjalar NF-κB permezz ta 'soppressjoni Akt upstream.
Konklużjoni
XFHY jista' jtaffi CP/CPPS billi jimblokka l-mogħdija PI3K/Akt/NF-κB, u jnaqqas l-espressjoni ta'IL-1 , TNF-, uCOX-2, u mitigazzjoni tar-risponsi infjammatorji fit-tessut tal-prostata. L-involviment tal-mogħdija, partikolarment il-fosforilazzjoni ta 'Akt f'Ser473 u Thr308, jipprovdi spjegazzjoni mekkanistika potenzjali għall-effikaċja ta' XFHY. Hija meħtieġa aktar riċerka biex tikkonferma jekk PI3K/Akt/NF-κB hijiex il-mogħdija definittiva li permezz tagħha XFHY jeżerċita l-azzjoni terapewtika tiegħu.
Kunflitt ta' Interess:
L-awturi ma jiddikjaraw l-ebda kunflitt ta' interess.
Let me know jekk inti tixtieq aastratt grafiku, tabella fil-qosor, jewPreżentazzjoni bil-PowerPointibbażat fuq dan l-istudju!
