Iżolament U Purifikazzjoni ta' Phenylethanoid Glycosides Minn Cistanche Deserticola Permezz ta' Kromatografija ta' Kontra-kurrent ta' Veloċità Għolja
Mar 04, 2022
Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com
Li a,b, Rong Tsao b,*, Raymond Yang b, Chunming Liu a, J. Christopher Young b, Honghui Zhu b
Astratt
Ħames phenylethanoid glycosides (PhGs), echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside u 20-acetylatteoside, ġew iżolati u purifikati minnCistanche deserticolagħall-ewwel darba permezz ta' kromatografija kontra-kurrent ta' veloċità għolja (HSCCC) bl-użu ta' żewġ sistemi bifażiċi, waħda li tikkonsisti f'etil aċetat-etanol-ilma (5:0.5:4.5, v/v/v) u oħra ta' aċetat etiliku–n-butanol–etanol-ilma ({{10}}.5:0.5:0.1:1, v/v/v/v). Total ta’ 28.5 mg ta’ echinacoside, 18.4 mg ta’ cistanoside A, 14.6 mg ta’ acteoside, 30.1 mg ta’ isoacteoside u 25.2 mg ta’ 20-acetylacteoside ġew ippurifikati minn 1412 mg tal-estratt n-butanol ta’ C. deserticola, kull wieħed f'aktar minn 92.5 fil-mija purità kif determinat mill-HPLC. L-istrutturi ġew identifikati bil-ħin ta 'żamma tagħhom, UV, LC–ESI-MS fil-modalità tal-jone negattiv, u kkonfermati minn esperimenti NMR. Il-mudell ta' frammentazzjoni LC–ESI-MSn karatteristiku tal-ħames komposti huwa diskuss, u nstab li huwa għodda speċifika ħafna u utli għall-identifikazzjoni strutturali ta' PhGs minn din l-impjant mediċinali importanti.
Kliem ewlieni:Cistanche deserticola; Feniletanojdi; Echinacoside; Cistanoside A; Acteoside; Isoacteoside; 20-Acetylatteoside; HSCCC; LC–ESI-MS; NMR
1. Introduzzjoni
Cistanche deserticola YC Mahija mediċina veġetali Ċiniża magħrufa sew u ġiet użata ħafna fi preparazzjonijiet tradizzjonali simili għall-ingredjenti tal-ikel funzjonali tal-lum jew supplimenti tal-ikel (Wong, Li, Cheng, & Chen, 2006). Il-kostitwenti bijoattivi ewlenin f'C. deserticola huma phenylethanoid glycosides (PhGs), inklużi echinacoside, acteoside, isoacteoside, 20-acetylacteoside, u cistanoside A (Kobayashi, Karasawa, & Miyase, 1984; Kobayashi et al., 1987). PhGs huma mqassma ħafna fir-renju tal-pjanti, u ġew studjati b'mod estensiv għall-funzjonijiet bijoloġiċi varji tagħhom bħal epatoprotective (Xiong et al., 1998), attività anti-inflammatorja, antinoċiċettiva (Schapoval et al., 1998), u attivitajiet antiossidanti ( Cheng, Wei, Guo, Ni, & Liu, 2005; He, Lau, Xu, Li, & Iżda, 2000; Li, Wang, & Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu, & Jia, 1993; Wang, Jiang, Wu, & Wang, 2001; Xiong, Kadota, Tani, & Namba, 1996), titjib tal-funzjoni sesswali (Xie & Wu, 1993; Zong, He, Wu, & Chen, 1996), u effett sedattiv (Lu, 1998). ).
Minħabba l-bijoattivitajiet sinifikanti t'hawn fuq, kwantitajiet kbar ta' komposti puri huma meħtieġa b'mod urġenti bħala standards ta' referenza u għal diversi studji in vitro u in vivo relatati mal-użu ta' mediċini tradizzjonali Ċiniżi. Metodi effettivi għall-iżolament, il-purifikazzjoni, u l-karatterizzazzjoni strutturali tal-PhGs, għalhekk isiru meħtieġa. Madankollu, xogħol bħal dan normalment jeħtieġ l-użu ta’ passi kromatografiċi multipli għat-tindif u l-iżolament tal-kampjun (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten, & Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin, & Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara, & Li, 1990; Shoyama, Matsumoto, & Nishioka, 1987), li normalment tirriżulta f'rati baxxi ta 'rkupru minħabba adsorbimenti irriversibbli ta' PhGs fuq l-appoġġ solidu waqt is-separazzjoni (Lei et al., 2001). B'kuntrast, il-kromatografija kontra-kurrent ta 'veloċità għolja (HSCCC) saret alternattiva effettiva għat-tekniki kromatografiċi konvenzjonali għas-separazzjoni ta' xi PhGs minn estratti tal-pjanti (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Lei et al. issepara b'suċċess acteoside u 20-acetylacteoside minnSalsa ta' cistanches(CA Mey.) G. Beck billi juża HSCCC (Lei et al., 2001). L-awturi ta 'dan id-dokument qabel irrappurtaw is-separazzjoni ta' acteoside u isoacteoside minn Plantago psyllium L. minn HSCCC (Li et al., 2005). Madankollu, l-ebda rapport ma ġie ppubblikat dwar is-separazzjoni u l-purifikazzjoni ta' PhGs multipli minn C. deserticola bl-użu ta' HSCCC. Minħabba n-nuqqas ta 'standards, metodi LC-MS ġew żviluppati u użati bħala għodda analitika qawwija għall-karatterizzazzjoni u l-identifikazzjoni rapida ta' xi PhGs fl-estratt tal-pjanti (Li et al., 2005; Wang et al., 2000).
F'dan id-dokument, nirrapportaw metodu HSCCC żviluppat għall-preparazzjoni ta 'echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside u 20-acetylatteoside minn C. deserticola. Il-karatterizzazzjoni u l-analiżi tal-ħames PhG separati twettqu bl-użu ta 'LC flimkien ma' spettrometrija tal-massa ESI in-line u esperimenti NMR. Il-ħin ta 'ritenzjoni, il-piż molekulari, u l-joni tal-frammenti karatteristiċi tal-ħames PhGs huma ppreżentati u diskussi f'dan id-dokument. L-istrutturi tal-ħames PhGs identifikati f'din l-investigazzjoni huma murija fil-Fig. 1.
Ingredjenti effettivi ta 'Cistanche deserticola
2. Sperimentali
2.1. Kimiċi u reaġenti
Acteoside inxtara minn Sigma–Aldrich (Oak- Ville, ON), echinacoside inxtara minn ChromaDex (Santa Ana, CA). Isoacteoside kien iżolat minn P. psyllium L. (Li et al., 2005). C. deserticola inxtara minn Beijing TongRenTang Medicinal Store (Ċina). Is-solventi kollha kienu ta' grad HPLC u mixtrija minn Caledon Laboratories Ltd. (Georgetown, ON).
2.2. Preparazzjoni tal-kampjun
C. deserticola (20 g) ġie estratt ħames darbiet f'temperatura tal-kamra għal 12-il siegħa kull wieħed b'100 mL ta' 80 fil-mija etanol milwiema. Kull darba li t-taħlita ta' estrazzjoni ġiet iffiltrata permezz ta' karta tal-filtru Whatman Nru.1 (Whatman International Ltd., Maidstone, l-Ingilterra). Il-filtrat magħqud kien ikkonċentrat għal 100 mL fil-vakwu f'<40 grad.="" is-soluzzjoni="" milwiema="" li="" tirriżulta="" tneħħiet="" ix-xaħam="" darbtejn,="" kull="" waħda="" b'100="" ml="" ta'="" hexane,="" u="" mbagħad="" estratta="" suċċessivament="" għal="" ħames="" darbiet,="" kull="" waħda="" b'100="" ml="" n-butanol.="" is-saffi="" ta="" 'n-butanol="" ġew="" magħquda="" u="" kkonċentrati="" sa="" nixfa="" fil-vakwu=""><40 grad,="" li="" taw="" 2.2="" g="" ta'="" estratt="" ta="" 'n-butanol.="" l-estratt="" inħażen="" fi="" -20="" grad="" qabel="" is-separazzjoni="">
2.3. Proċedura ta' separazzjoni HSCCC
L-HSCCC preparattiva twettqet f'Mudell CCC{{0}} kromatografija kontra-kurrent ta' veloċità għolja (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland USA). Dan l-apparat kellu tliet kolji preparattivi, konnessi f'serje (volum totali, 325 mL). Il-veloċità tar-rivoluzzjoni tal-apparat tista' tiġi rregolata bejn 0 u 2000 rpm. Is-sistema HSCCC kienet mgħammra b'pompa HPLC (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, USA), ditekter UV Mudell 450 (Alltech, USA), reġistratur tas-sodda ċatta Mudell L 120 E (Linseis Inc., Princeton Jct, USA), kollettur tal-frazzjonijiet (Advantec MFS Inc., USA) u valv ta' injezzjoni tal-kampjun b'loop tal-kampjun 10-mL.
Taħlita ta 'etil aċetat-etanol-ilma (5:0.5:4.5, v/v/v) tħawwad bil-qawwa f'lembut separatorju u ħalliet toqgħod u tissepara f'temperatura tal-kamra. Iż-żewġ fażijiet intużaw fl-HSCCC wara li laħqu l-ekwilibriju. Il-kolonna kollha kkoljata kienet l-ewwel mimlija bis-saff ta 'fuq, li jservi bħala l-fażi wieqfa. Is-saff t'isfel (fażi mobbli) imbagħad ġie ppumpjat fit-tarf tar-ras tal-kolonna b'rata ta 'fluss ta' 1.5 mL/min. Il-veloċità tar-rotazzjoni ġiet issettjata għal 1050 rpm. Kampjun (madwar 230 mg kull darba) maħlul fi 8 ml tat-taħlita ta’ ethyl acetate–etanol-ilma (5:0.5:4.5, v/v/v) ġie mgħobbi fil-valv ta’ injezzjoni wara li s-sistema laħqet idrodinamika ekwilibriju. Din is-sistema tas-solvent bifażika ntgħażlet abbażi tal-koeffiċjent tal-qsim (K), li kien 0.87, 1.11, u 1.32 għal acteoside, isoacteoside, u 20 acetylatteoside, rispettivament. Il-valur K kien il-proporzjon tal-konċentrazzjonijiet fis-saffi ta 'fuq u ta' isfel tal-istess kompost kif determinat mill-HPLC (Fig. 2). L-efwent mill-iżbokk tal-kolonna kien immonitorjat kontinwament b'ditekter UV f'254 nm u miġbur f'tubi tat-test b'kollettur tal-frazzjonijiet issettjat f'4 min għal kull tubu.
2.4. Kundizzjonijiet LC
auto-sampler statiku u detector ta 'array photodiode (DAD) intużaw għall-analiżi ta' PhGs fl-estratt ta 'n-butanol ta' C. deserticola u frazzjonijiet miġbura mis-separazzjoni HSCCC. Is-separazzjoni twettqet f'kolonna Phenomenex ODS-C18 (250 × 4.6 mm, 5 lm) b'kolonna ta 'lqugħ C18. Il-fażi mobbli binarja kienet tikkonsisti f'acetonitrile (solvent A) u ilma li fih 2 fil-mija aċidu aċetiku (solvent B). Is-solventi kollha ġew iffiltrati minn a
{{0}}.45 lm filter qabel l-użu. Ir-rata tal-fluss inżamm kostanti f'1.0 mL/min għal ħin totali ta' tħaddim ta' 25 min. Is-sistema tmexxiet bi programm gradjent: 0–20 min: 90 fil-mija B sa 60 fil-mija B; 20–22 min: 60 fil-mija B sa 0 fil-mija B; u 22– 25 min, 0 fil-mija B sa 90 fil-mija B. Il-volum tal-injezzjoni tal-kampjun kien 10 lL. Il-qċaċet ta 'interess ġew immonitorjati f'320 nm minn detector DAD.
2.5. Esperimenti LC–ESI-MS
L-esperimenti LC-MS twettqu bl-użu ta 'spettrometru tal-massa tan-nassa tal-jone Finnigan LCQ DECA (Thermo Finnigan, San Jose, CA, USA) mgħammar b'sors ta' jonizzazzjoni elettrospray (ESI). Il-kampjuni ġew analizzati fl-istess kundizzjoni kromatografika. Intuża mudell negattiv għall-ġbir tad-dejta. Il-gass għant u r-rati tal-fluss awżiljarju ġew stabbiliti għal 96 u 7 (unità arbitrarja), rispettivament. Il-vultaġġ kapillari kien issettjat għal 29 V u t-temperatura tiegħu kienet ikkontrollata fi 350 grad. Il-vultaġġ tal-lenti tad-dħul kien iffissat għal 40 V u l-amplitudni RF multipole ġiet issettjata għal 540 V. Il-vultaġġ tal-labra ESI kien ikkontrollat f'4.5 kV. L-offset tal-lenti tat-tubu kien 16 V, il-lenti multipole 1 offset kien 8.20 V u l-offset tal-lenti multipole 2 kien 10.5 V. Il-vultaġġ multiplikatur tal-elettroni kien issettjat għal 980 V għall-iskoperta tal-joni.
2.6. NMR għall-Identifikazzjoni
L-ispettri NMR ġew irreġistrati fuq spettrometru Bruker Avance-600 (Bruker BioSpin Ltd., Milton, Kanada). Il-komposti 2 u 5 biss (l-ebda standards disponibbli) kienu soġġetti għal esperimenti NMR. Il-kampjuni ġew maħlula f'CD3OD.
Ingredjenti attivi ta' cistanche: echinacoside u acteoside
3. Riżultati u diskussjoni
Separazzjoni HSCCC b'suċċess tiddependi fil-biċċa l-kbira fuq sistema ta 'solvent f'żewġ fażijiet xierqa li tipprovdi koeffiċjent ta' partizzjoni ideali (K) madwar 1 għall-kompost mixtieq. Sistema bifażika bħal din għandha wkoll tagħti żmien ta' soluzzjoni raġonevolment qasir (Chen, Games, & Jones, 2003; Foucault & Chevolot, 1998; Oka, Oka, & Ito, 1991). Fl-esperiment tagħna, għażilna erba 'serje ta' sistemi ta 'solventi skond is-solubilità tal-komposti fil-mira f'C. deserticola. HPLC intuża biex titkejjel il-konċentrazzjoni f'kull fażi, li minnha ġew ikkalkulati l-valuri K tal-komposti fil-mira. Żewġ sistemi, ethyl acetate–n-butanol–ethanol-water (4:0.6:0.6:5, v/v/v/v) u ethyl acetate–ilma (1:1, v/v), intużaw qabel fi HSCCC biex jissepara l-acteoside u 20-acetylatteoside minn
C. salsa, u acteoside u isoacteoside minn P. Psyllium,
rispettivament (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Għalkemm l-ewwel sistema kellha żmien ta' settlement relattivament qasir, kellha prestazzjoni fqira fis-separazzjoni tal-PhGs ta' C. deserticola, minħabba l-valuri K baxxi għall-komposti 1 u 2, u valuri K għolja għall-komposti 3-5. Il-valuri K kienu baxxi ħafna għall-komposti 1-4 fit-tieni sistema, iżda għoljin ħafna għall-kompost 5 (Tabella 1). Sistema modifikata li fiha ethyl acetate-ethanol-ilma (5:0.5:4.5, v/v/v), tat valur K ideali għall-komposti 3-5 f'0.87, 1.11, u 1.32, rispettivament, u rriżultat fis-separazzjoni tajba minn dawn it-tliet komposti (Fig. 3A u B). Din is-sistema, madankollu, prodotta
valur K żgħir wisq għall-komposti 1 u 2, li jikkawża li ż-żewġ komposti jikko-elute ħdejn il-faċċata tas-solvent (frazzjoni 1 f'Fig. 3A). Modifika oħra lis-sistema (ethyl acetate–n-butanol–ethanol-ilma (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/ v) elevat il-valuri K għall-kompost 1 u 2 għal 0.52 u 0.92, rispettivament, u wassal għal separazzjoni kompleta (Fig. 3C).Fig. 3A turi s-separazzjoni HSCCC ta 'a kampjun li fih 230 mg ta' l-estratt ta' n-butanol ta' C. deserticola bl-użu ta' aċetat ta' etil-etanol-ilma (5:0.5:4.5, v/v/v). Frazzjonijiet li ġew ikkonfermati permezz tal-HPLC biex ikun fihom biss il-komposti 3, 4, jew 5 ġew magħquda separatament, u dawk li fihom il-komposti 3 u 4 ġew miġbura, imnixxfa bil-friża, u reġgħu suġġetti għall-HSCCC għal aktar separazzjoni (Fig. 3B). Is-separazzjoni tal-HSCCC deskritta hawn fuq tat total ta' 14.6 mg, 30.1 mg, u 25.2 mg ta' komposti 3-5 minn 1412 mg estratt ta' n-butanol.Fig. 3C turi s-separazzjoni HSCCC ta' kampjun li fih komposti 1 u 2 (frazzjoni 1 fl-ewwel separazzjoni) bl-użu ta' aċetat etil-n-butanol-etanol-ilma (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/v). Total ta' 28.5 u 1 Inkisbu 8.4 mg ta' komposti 1 u 2. Il-puritajiet kromatografiċi tal-komposti mnixxfa bil-friża 1-5 kienu aktar minn 92.5 fil-mija, li ntużaw direttament għal analiżi LC-ESI-MS u NMR.
L-identifikazzjoni tentattiva tal-komposti 1, 3, u 4 inkisbet permezz ta 'ħinijiet ta' żamma kongruwenti u data spettrali UV ma 'dawk tal-echinacoside, acteoside u isoacteoside awtentiċi (Fig. 2). Il-komposti 2 u 5 ma kinux magħrufa, madankollu, l-ispettri UV tal-ħames komposti kollha kienu simili ħafna, u jindikaw karatteristiċi strutturali simili.
Biex tinvestiga aktar l-istrutturi ta 'dawn il-ħames komposti, esperimenti LC-ESI-MSn ġew attentati u r-riżultati huma murija fil-Fig. 4 u Tabella 2. Komposti relatati mal-qċaċet (1-5) fil-Fig. [MH]— f'm/z 785, 799, 623, 623, u 665, rispettivament, fil-mod negattiv. Il-joni dimeriċi [2M H]- ġew osservati wkoll għall-qċaċet 1-4 f'Fig. 2. Dawn ikkonfermaw li l-piżijiet molekulari tal-qċaċet 1-5 kienu 786, 800, 624, 624, u 666, rispettivament. Id-dejta LC–MSN (Tabella 2) ipprovdiet informazzjoni strutturali utli ħafna għall-ħames PhGs, bħat-telf newtrali ta’ proċedura Sperimentali: bejn wieħed u ieħor 1 mg ta’ kull kampjun kien miżun f’tubu tat-test ta’ 10 mL li fih 1 mL ta’ kull fażi. tas-sistema tas-solvent b'żewġ fażijiet ekwilibrata minn qabel ġiet miżjuda. It-tubu tat-test ġie mgħotti u mħawwad bil-qawwa għal 1 min, u jitħalla joqgħod sakemm jinfired kompletament. Alikwot ta' 100 lL ta' kull saff inħarġet u evaporat separatament sa nixfa fil-vakwu f'<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">
L-LC-ESI-MS tal-quċċata 1 hija murija fil-Fig. 4A. Il-jone molekulari deprotonated [MH]— f'm/z 785 b'abbundanza għolja u molekulari dimeriku deprotonated.jone [2M H]— f'm/z 1571 kien osservat fil-mod negattiv, li jissuġġerixxi piż molekulari ta '786, li kien l-istess bħal dak ta' echinacoside. Aktar investigazzjoni fl-esperiment LC-MS2 tal-jonji m/z 785 taw jone bint prinċipali f'm/z 623 (Fig. 4B) prodott direttament minn m/z 785 permezz ta' telf ta' frazzjoni caffeoyl jew frazzjoni hexose bħala [M 162 H]—. L-ispettru LC-MS3 ta 'm / z 623 esebit żewġ joni maġġuri f'm / z 477 u 461, u żewġ jonji minuri f'm / z 315 u 179 (Fig. 3C, Tabella 2). Id-differenzi tal-massa bejn m/z 623 u l-joni tal-frammenti m/z 477 u 461 kienu 146 u 162, rispettivament, li jikkorrispondu għat-telf ta 'unità rhamnose u porzjon ta' glukożju jew porzjon ta 'caffeoyl [M 162 H]—. Il-jonji m/z 623 tilfu wkoll frazzjoni caffeoyl u frazzjoni rhamnose biex jipproduċu l-joni m/z 315. Il-jone f'm/z 179 ġie prodott mill-qsim tal-parti caffeoyl, bil-ċarġ negattiv jibqa 'min-naħa tal-moety caffeoyl. L-esperiment LC–ESI-MSN fuq l-echinacoside awtentiku wera l-istess mudell ta 'frammentazzjoni. Peak 1 għalhekk ġie kkonfermat li huwa echinacoside.
Għall-quċċata 2, l-LC–ESI-MS wera m/z 799 bħala l-jone molekulari deprotonated [MH]— u m/z 1599 bħala l-jone dimeriku tiegħu, li jissuġġerixxi massa molekulari ta’ 800. Matul l-esperimenti MS2, l-m/z 799 joni ffurmaw tliet ibniet f'm/z 637, 623, u 475 (Tabella 1). Il-jone f'm/z 637 ġie prodott direttament mill-jone ġenitur ta 'm/z 799 għal darb'oħra minħabba t-telf newtrali tal-caffeoyl [M—162—H]— jew porzjon ta' glucose [M—162—H]—. Il-jone f'm/z 623 irriżulta mit-telf ta 'radikali CH2. Il-jone f'm/z 475 kien iffurmat mit-telf newtrali kemm tal-moety caffeoyl [M 162 H]— kif ukoll il-parti tal-glukożju mill-jone ġenitur. L-esperiment MS3 fuq m/z 637 ipproduċa tliet joni f'm/z 619, 491, u 475, li jikkorrispondu għat-telf ta 'ilma wieħed, unità rhamnose, u porzjon ta' glukożju, rispettivament. Il-jone bint m/z 623 ipproduċa m/z 461 u 315 fl-istudju MS3, li segwa l-istess mogħdijiet ta 'frammentazzjoni bħal echinacoside kif diskuss hawn fuq. Id-dejta LC– ESI-MSN appoġġat identifikazzjoni tentattiva għall-quċċata 2 bħala cistanoside A. Iż-żewġ qċaċet wrew l-istess [MH]—jon f'm/z 623 u dimer f'm/z 1247 fil-mod negattiv (Tabella 1), li jindikaw huma possibbilment isomeri bl-istess piż molekulari ta '
624, l-istess bħal acteoside u isoacteoside. L-ispettri MS2 tal-joni [MH]- wrew ukoll jone bint wieħed ta 'm/z 461, li indika t-telf tal-parti ta' caffeoyl mill-jone ġenitur m/z 623 (Tabella 1). Inkisbu spettri MS3 simili għaż-żewġ komposti. Għall-quċċata 3, l-ispettru MS3 tal-jone f'm/z 461 iffurmat tliet joni f'm/z 315, 161, u 135. L-m/z 315 huwa ffurmat wara li jitlef rhamnose kif diskuss qabel. Il-jone m/z 161 ġie prodott mill-qsim tal-parti ta' caffeoyl, segwit minn telf ieħor ta' ilma wieħed; il-ħlas baqa' min-naħa tal-moety caffeoyl. Il-jone f'm/z 135 [aglycone 18 H]— qamet mill-qsim tar-rabta glycosidic f'pożizzjoni C1 b'telf addizzjonali ta 'ilma wieħed, u ħalliet il-ħlas li jkun min-naħa tal-moety aglycone. L-ispettru MS3 tal-quċċata 4 segwa l-istess mogħdija ta 'frammentazzjoni bħall-quċċata 3 ħlief għall-jone nieqes f'm/z 135. Il-jone molekulari u l-mudelli ta' frammentazzjoni ta 'dawn iż-żewġ komposti huma konsistenti mad-dejta tal-letteratura dwar acteoside u isoacteoside (Wang et al ., 2000), għalkemm instab jone addizzjonali m/z 153 u data tal-Proton NMR ta 'cistanoside A u 20-acetylatteoside ġiet assenjata bħala [aglycone H]- minn Wang et al. (Wang et al., 2000). Dan il-jone seta 'kien instabbli u tilef l-ilma biex jagħti m/z 135 fl-esperiment tagħna. Ibbażat fuq id-dejta tal-MS u l-ħinijiet ta' żamma kongruwenti tal-qċaċet 3 u 4 mal-istandards, huma għalhekk identifikati bħala acteoside u isoacteoside, rispettivament.
Id-dejta LC–ESI-MS tal-quċċata 5 hija murija fit-Tabella 2. Jone molekulari deprotonat [MH]— (m/z 665) kien l-uniku jone misjub fil-mod negattiv, li jimplika massa molekulari ta' 666. Tliet joni bint ġew osservati f'm/z 623, 503, u 461 fl-esperiment MS2 (Tabella 2). Il-jonji bint f'm/z 623 u 503 ġew iffurmati direttament mill-jone ġenitur permezz ta 'telf ta' grupp COCH2 u frazzjoni caffeoyl, rispettivament. Il-jone f'm/z 461 ġie mit-telf kemm tal-caffeoyl kif ukoll tal-parti COCH2 [M 162 42 H]— mill-jone ġenitur. Fl-esperiment MS, m/z 623 ipproduċa m/z 461, u m/z 503 ta tliet joni f'm/z 485, 461, u 315. L-ispettru MS3 tal-jone bint m/z 461 ta żewġ joni f'443. u 315. Billi tqabbel il-mudell ta’ frammentazzjoni LC– MSN tal-quċċata 5 ma’ komposti oħra rrappurtati f’dan l-istudju u ma’ oħrajn irrappurtati (Li et al., 2005; Wang et al., 2000), aħna kkonkludejna li l-quċċata 5 kienet strutturalment relatata ħafna. biex acteoside bl-unika differenza tkun l-unità COCH3 fuq il-pożizzjoni R3. Għalhekk ingħatat identità tentattiva lill-quċċata 5 bħala 20-acetylatteoside (Fig. 1).
L-istrutturi taż-żewġ komposti identifikati b'mod tentattiv, il-quċċata 2 (bħala cistanoside A) u l-quċċata 5 (bħala 20-acetyl-acteoside) ġew ikkonfermati tal-istrutturi tagħhom b'1H NMR. Iċ-ċaqliq kimiċi u l-kostanti tal-akkoppjar tal-protoni kollha fil-komposti 2 u 5, kif muri fit-Tabella 3., imqabbla mad-dejta tal-NMR irrappurtata għal cistanoside A u 20-acetylatteoside, rispettivament (Kobayashi et al., 1984, 1987) . Esperimenti 2D NMR (korrelazzjoni COSY, ROESY u CH fuq medda twila) saru wkoll fl-istudju preżenti u komplew ikkonfermaw l-identifikazzjoni (dejta mhux murija).
Acteoside minn Cistanche deserticola
4. Konklużjonijiet
Fid-dokument preżenti, HSCCC intuża b'suċċess għall-iżolament u l-purifikazzjoni ta 'echinacoside, cistanoside A, acteoside, isoacteoside, u 20-acetylatteoside mill-estratt n-butanol ta' C. deserticola. Għalhekk huwa mezz ippruvat għas-separazzjoni semi-preparattiva ta 'bijoattivi. Sadanittant, l-istrutturi tal-ħames PhGs f'C. deserticola ġew investigati permezz ta' LC–ESI-MSN; instabu xi karatteristiċi karatteristiċi tal-PhGs, li ppermettewlna niddeterminaw il-gruppi funzjonali fl-istrutturi. Il-metodu LC-ESI-MSN huwa għalhekk għodda b'saħħitha għall-identifikazzjoni rapida tal-feniletanojdi u l-glikożidi tagħhom fl-estratti ta' C. deserticola, speċjalment meta ssostanzjati b'dejta NMR.
Rikonoxximent
L-awturi jixtiequ jirringrazzjaw lil Jun Gu taċ-Ċentru ta 'Reżonanza Manjetika Nukleari, Università ta' Guelph, Ontario, Kanada għall-assistenza tagħha fl-esperimenti NMR. Dan il-proġett kien parzjalment appoġġjat minn finanzjament mill-Provinċja ta 'Jilin, iċ-Ċina (Nru 20060904).
Referenzi
Chen, LJ, Games, DE, & Jones, J. (2003). Iżolament u identifikazzjoni ta' erba' kostitwenti flavonojdi miż-żerriegħa ta' Oroxylum Indicum permezz ta' kromatografija ta' veloċità għolja kontra l-kurrent. Ġurnal tal-Kromatografija A, 988, 95-105.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., Ni, W., & Liu, CZ (2005). Kulturi ta 'sospensjoni taċ-ċelluli Cistanche deserticola: bijo-sinteżi u attività antiossidanti tal-phenylethanoid glycosides. Bijokimika tal-Proċess, 40, 3119– 3124.
Foucault, AP, & Chevolot, L. (1998). Kromatografija kontra l-kurrent: strumentazzjoni, għażla tas-solvent, u xi applikazzjonijiet reċenti għall-purifikazzjoni tal-prodott naturali. Ġurnal tal-Kromatografija A, 808, 3–22.
Gross, G.-A., Lahloub, MF, Anklin, C., Schulten, H.-R., & Sticher, O. (1988). Teucrioside, phenylpropanoid glycoside minn Teucrium Chamaedrys. Phytochemistry, 27, 1459–1463.
Hu, ZD, Lau, KM, Xu, HX, Li, PC, & Iżda, PPH (2000). Attività antiossidanti ta 'phenylethanoid glycosides minn ċansijiet Brandisia. Ġurnal ta 'Ethnopharmacology, 71, 483–486.
Kobayashi, H., Karasawa, H., & Miyase, T. (1984). Studji dwar il-kostitwenti ta 'Cistanchis Herba. III. Iżolament u strutturi ta 'phenylpropanoid glycosides ġodda, Cistanoside A u B. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 32, 3009–3014.
Kobayashi, H., Oguchi, H., Takizawa, N., Miyase, T., Ueno, A., Usmanghani, K., et al. (1987). phenylethanoid glycosides ġodda minn Cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. FI. Bullettin Kimika u Farmaċewtika, 35, 3309–3314.
Lei, L., Yang, FQ, Zhang, TY, Tu, PF, Wu, LJ, & Ito, Y. (2001). Iżolament preparattiv u purifikazzjoni ta' acteoside u 2'-acetyl acteoside minn Cistanches salsa (CA Mey) G. Beck permezz ta' kromatografija kontra l-kurrent. Ġurnal tal-Kromatografija A, 912, 181–185.
Li, L., Tsao, R., Liu, ZQ, Liu, SY, Yang, R., Young, JC, et al. (2005). Iżolament u purifikazzjoni ta' acteoside u isoacteoside minn Plantago psyllium L. permezz ta' kromatografija ta' kontrokurrent b'veloċità għolja. Ġurnal tal-Kromatografija A, 1063, 161–169.
Li, LL, Wang, XW, & Wang, XF (1997). Perossidazzjoni antilipidi u azzjoni antiradikali ta 'glycosides f'herba Cistanches. China Journal of Chinese Materia Medica, 22, 364–367.
Li, J., Wang, PF, Zheng, RL, Liu, ZM, & Jia, ZJ (1993). Protezzjoni ta 'phenylpropanoid glycosides minn Pedicularis kontra l-emolisi ossidattiva in vitro. Planta Medica, 59, 315–317.
Lu, MC (1998). Studji dwar l-effett sedattiv ta 'Cistanche deserticola. Ġurnal ta 'Ethnopharmacology, 59, 161-165.
Nishimura, H., Sasaki, H., Inagaki, N., Chin, M., & Mitsuhashi, H. (1991). Disa' phenethyl alcohol glycosides minn Stachys szeboldzz. Phytochemistry, 30, 965–969.
Oka, F., Oka, H., & Ito, Y. (1991). Tfittxija sistematika għal sistemi xierqa ta' solventi f'żewġ fażijiet għall-kromatografija ta' kontra-kurrent b'veloċità għolja. Ġurnal tal-Kromatografija, 538, 99–108.
Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M., & Li, X. (1990). Komposti fenoliċi minn Plantago Asiatica. Phytochemistry, 29, 3627–3631.
Schapoval, EES, Winter de Vargas, MR, Chaves, CG, Bridi, R., Zuanazzi, JA, & Henriques, AT (1998). Attivitajiet antinfjammatorji u antinoċiċettivi ta' estratti u komposti iżolati minn Stachytarpheta cayennensis. Ġurnal ta 'Ethnopharmacology, 60, 53-59.
Shoyama, Y., Matsumoto, M., & Nishioka, I. (1987). Glikożidi fenoliċi minn għeruq morda ta 'Rehmannia glutinosa Var. Purpurea. Phyto Chemistry, 26, 983–986.
Wang, XW, Jiang, XY, Wu, LY, & Wang, XF (2001). Effett ta 'scavenging ta' glycosides ta 'Cistanche deserticola fuq radikali ħielsa u l-protezzjoni tiegħu kontra ħsara fid-DNA indotta mill-OH in vitro. Ġurnal tal-Farmakoloġija Ċiniża, 36, 29-31.
