Kif Cistanche Jipprevjeni l-Mard tal-Fwied

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Astratt

Biex tirriċerka l-karatterizzazzjonijiet preliminari, l-attività antiossidant u epatoprotective tal-polisakkaridi minnCistanche deserticola (CDPs), tliet frazzjonijiet tal-polisakkaridi, CDP-A, CDP-B, u CDP-C, inkisbu permezz ta 'filtrazzjoni tal-membrana suċċessivament (mikrofiltrazzjoni, ultrafiltrazzjoni u nanofiltrazzjoni). Piżijiet molekulari, kompożizzjonijiet ta 'monosaccharide, puritajiet, u spettri IR tat-tliet frazzjonijiet ġew analizzati. Ir-riżultati wrew li CDP-C kien fih proporzjon ogħla ta 'aċidu galacturonic (GalUA) minn CDP-B u CDP-A. Ġew analizzati wkoll attivitajiet antiossidanti u r-riżultati wrew li CDP-C kellu l-ogħla attività. Għalhekk, l-attività epatoprotettiva ta 'CDP-C ġiet studjata aktar. Ir-riċerka in vitro, CDP-C ippromwova l-vijabbiltà taċ-ċelloli HepG2. Riċerka in vivo, CDP-C tjiebet l-alterazzjonijiet indotti mill-alkoħol, inklużi indiċi seroloġiċi (alanine transaminase, acid phosphatase, -glutamyl transpeptidase, u triglyceride) u indikaturi epatiċi (superoxide dismutase, malondialdehyde, glutathione S-transferase, u triglyceride) fil-mudell. annimali. L-isteatożi mikrovesikulari prominenti u n-nekrożi ħafifa fl-istopatoloġija epatika ta 'annimali mudell ġew attenwati wkoll bl-amministrazzjoni ta' CDP-C. Dawn is-sejbiet indikaw li CDP-C kellu attività epatoprotettiva kontra ħsara kronika tal-fwied indotta mill-alkoħol. Il-mekkaniżmu sottostanti jista 'jkun li CDP-C jista' jnaqqas il-kontenut ta 'MDA u TG, u jimmodula l-attivitajiet tal-enzima relattiva. Din il-proprjetà tista' tassoċja ma' GalUA f'CDP-C.

Keyword: Cistanche deserticola; Polisakkaridi; Karatterizzazzjonijiet preliminari; Antiossidant; Attività epatoprotettiva.

cistanchebienfaitsdeserticola

1. Introduzzjoni

Cistanche huwa holoparasite perenni u huwa distribwit prinċipalment fir-reġjun tad-deżert tal-majjistral taċ-Ċina [1, 2]. Iz-zokk tal-ispeċi Cistanche (Orobanchaceae) ġie rreġistrat għall-ewwel darba fil-Materia Medica Ċiniża ta 'Shen Nong. Cistanche ilha tintuża bħala mediċina tal-ħxejjex tradizzjonali għat-trattamenti ta 'defiċjenza tal-kliewi, impotenza, stitikezza senile, uġigħ u dgħjufija tal-qadd u l-irkopptejn, u defiċjenza tad-demm [3, 4]. Riċerki farmakoloġiċi wrew li Cistanche għandu attività anti-infjammatorja [5, 6], attività kontra l-osteoporożi [7, 8], effett sedattiv [9], attività kontra l-għeja [10], effett newroprotettiv [11]. Barra minn hekk, polisakkaridi minn Cistanche deserticola (CDPs) għandhom effetti anti-ipergliċemiċi u ipolipidemiċi [12], attività immunoloġika [13], u effett ta 'proliferazzjoni fuq limfoċiti [14].

L-alkoħol, xarba kkunsmata mad-dinja kollha, u l-addittiv tal-ikel ikkawżaw kważi 2.5 miljun mewt kull sena fid-dinja [15, 16]. Dawn l-imwiet huma prinċipalment relatati ma 'mard tal-fwied ikkawżat mill-abbuż tal-alkoħol [17, 18]. Il-marda tal-fwied ikkawżata mill-alkoħol hija progressjoni kronika kumplessa f'diversi stadji, li normalment tiżviluppa minn steatożi alkoħolika għal epatite alkoħolika u finalment għal ċirrożi alkoħolika [19]. Għalhekk, l-identifikazzjoni ta 'prodotti naturali attivi għal dawk il-konsumaturi tal-alkoħol biex jipprevjenu jew inaqqsu l-progressjoni tal-korriment alkoħoliku tal-fwied fl-istadju bikri hija strateġija ta' ġestjoni ta 'benefiċċju.

Cistanche deserticola YC Ma u Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight huma żewġ speċi mediċinali rreġistrati fil-Farmakopea Ċiniża [3]. Ħafna karti spjegaw l-attivitajiet epatoprotettivi ta 'C. tubulosa [20-24] u C. deserticola [25, 26]. Iżda dawn ir-riċerki epatoprotettivi dejjem immiraw lejn korriment akut tal-fwied indott minn tetrachloride tal-karbonju (CCl4) jew D-galactosamine u lipopolysaccharide, iżda mhux imħasseb dwar il-ħsara kronika tal-fwied relatata mal-abbuż tal-alkoħol. Barra minn hekk, dawn ir-rapporti kienu ffukati prinċipalment fuq il-mekkaniżmu tal-phenylethanoid glycosides (PhGs) aktar milli s-CDPs. Għalhekk, fl-istudju preżenti, ġew investigati l-karatterizzazzjonijiet preliminari tas-CDPs u l-attivitajiet antiossidanti tagħhom (in vitro). Barra minn hekk, il-mudell ta 'ħsara fil-fwied ta' ġrieden ICR indotti minn inbid abjad ta 'spirtu ġie stabbilit biex jeżamina l-attività epatoprotettiva ta' CDPs kontra ħsara kronika fil-fwied indotta mill-alkoħol.

cistanche u tongkat ali herba estratt

2. Materjali u metodi

2.1. Materjali

Iz-zkuk ta' C. deserticola inġabru minn Alashan League, Inner Mongolia taċ-Ċina,u identifikati mill-Prof. Xiaodong Wang (Diviżjoni tal-Inġinerija tal-Bijoraffinerija, Istitut tal-Inġinerija tal-Proċess, Akkademja Ċiniża tax-Xjenzi, Beijing, PR Ċina).

Dimethyl sulfoxide (DMSO), 2, 2-azino-bis (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS), 3-(4, 5-dimethylthiazol{ {8}}yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT), u 1, 1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH) inxtraw minn Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, l-Istati Uniti). Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) u serum bovin tal-fetu (FBS) inxtraw minn Invitrogen, Inc. Er Guo-tou spirtu abjad inxtara minn Beijing Red Star Co., LTD. Bicyclol inxtara minn Beijing Union Pharmaceutical Factory. Soluzzjonijiet milwiema ġew ippreparati b'ilma ultra-pur minn sistema ta 'purifikazzjoni tal-ilma Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, USA). Ir-reaġenti l-oħra kollha kienu ta' grad analitiku.

2.2. Estrazzjoni CDPs u filtrazzjoni frazzjonali

Is-CDP mhux raffinati ġew ippreparati skont il-metodu rrappurtat qabel tal-grupp tagħna [27] b'modifika żgħira. Fil-qosor, it-trab (40 malji) ta 'C. deserticola (50 kg) ġie estratt ultrasonikament (40 kHz u 6 kW) b'1000 L ta' soluzzjoni akwea ta 'etanol (50 fil-mija, v/v) f'60 ◦C għal 120 min. Il-polisakkaridi ġew separati mill-estratt b'reżina makroporuża (HPD 300). Is-soluzzjoni tal-polisakkarid kienet ikkonċentrata taħt pressjoni mnaqqsa, deproteinizzata bl-użu tal-metodu ta 'Sevag [28], u l-prodott imnixxef bil-friża kien imsejjaħ CDPs mhux raffinat.

Imbagħad 5 0 g tas-CDPs mhux raffinati ġew maħlula f'2.5 L ilma ultrapur u suċċessivament separati bil-mikrofiltrazzjoni, ultrafiltrazzjoni u nanofiltrazzjoni (il-qtugħ tal-piż molekulari nominali kien 300 kDa, 10 kDa, u 200 Da. Membrana effettiva żona kienet 0.625 m2). Is-soluzzjoni miżmuma ta 'mikrofiltrazzjoni kienet lajofilizzata u msejħa CDP-A. Soluzzjoni permeated ta 'mikrofiltrazzjoni ġiet iffiltrata b'ultra-filtrazzjoni, filwaqt li s-soluzzjoni miżmuma ġiet lajofilizzata u msemmija CDP-B. Soluzzjoni permeata ta 'ultra-filtrazzjoni ġiet iffiltrata b'nanofiltrazzjoni, is-soluzzjoni miżmuma ġiet lajofilizzata u msemmija bħala CDP-C.

2.3. Karatterizzazzjonijiet preliminari ta' CDPs

Id-daqsijiet molekulari ta 'CDPs ġew evalwati skond il-metodu rrappurtat qabel ta'il-grupp tagħna [29]. Kompożizzjonijiet monosaccharide ġew analizzati bl-użu tal-metodu deskritt minn P. Zhang et al [30]. Il-puritajiet ġew determinati skont il-metodu tal-aċidu fenol-sulfuriku [31]. Il-kontenut tal-proteini ġew determinati bl-użu tal-metodu msemmi minn Bradford u Maja Kozarski [32, 33]. L-ispettri FT-IR ta 'CDPs inqabdu bi Spettrometru ta' Fourier Transform-Infrared (FT/IR-660 Plus, JASCO) fil-medda ta '400 ~ 4000 ċm-1.

2.4. Attivitajiet antiossidanti

L-effetti ta 'scavenging tas-CDPs fuq ir-radikali hydroxyl, superoxide anion, DPPH, u ABTS ġew evalwati skont il-metodi deskritti minn Sun [34], Wang [35], Yap [36], u Fatiha [37], rispettivament.

disfunzjoni erettili cistanchegħalkliewi

2.5. Attività epatoprotettiva ta' CDP-C in vitro

Fuq il-bażi tar-riżultati tal-assaġġ antiossidant, CDP-C intgħażel biex tistudja l-attività epatoprotettiva. Iċ-ċelloli HepG2 (mixtrija miċ-Ċentru taċ-Ċina għall-Ġbir tal-Kultura tat-Tip, Beijing, iċ-Ċina) ġew ikkultivati ​​f'DMEM li kien fih FBS inattivat bis-sħana (10 fil-mija), streptomycin (0.1 ug/mL), peniċillina (100 IU/mL), u aċidu amminiku mhux essenzjali. Iċ-ċelloli ġew inkubati f'atmosfera umidifikata ta' 5 fil-mija CO2 f'37 grad, maħsuda fil-fażi ta' tkabbir esponenzjali, miżrugħa fi 96-pjanċi bir-bir (4 × 104 ċelluli għal kull bir, 100 μL), u inkubati għal 24 siegħa. Iċ-ċelloli tal-grupp negattiv ġew ittrattati bl-alkoħol (il-konċentrazzjoni finali kienet 3.5 fil-mija, v/v) filwaqt li l-grupp naive ġie ttrattat bl-ilma. Ċelloli tal-grupp pożittiv ġew ittrattati bl-alkoħol u bicyclol (il-konċentrazzjoni finali kienet 200ug/mL). Iċ-ċelloli tal-erba 'gruppi tat-test ġew ittrattati bl-alkoħol u CDP-C (il-konċentrazzjoni finali ta' CDP-C kienet 0.11, 0.3333, 1.00, u 3.00 mg/mL). Iċ-ċelloli kollha ġew ikkultivati ​​għal 48 siegħa oħra.

Il-vijabbiltà taċ-ċelloli HepG2 ġiet iddeterminata bil-metodu ta 'assaġġ MTT imsemmi minn J. Tong et al [38] b'modifika żgħira. Fil-qosor, MTT (5 mg/mL, 20 μL kull bir) ġie miżjud fil-pjanċi tal-bir biż-żerriegħa taċ-ċelluli 96-, u ċ-ċelloli ġew inkubati għal 4 sigħat. Is-soluzzjonijiet tneħħew u DMSO (150 μL/bir) ġie miżjud. L-assorbiment ta' kull bir tkejjel f'492 nm bl-użu ta' 96-well plate reader (Thermo Scientific, l-Amerika). Il-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet ikkalkulata bl-użu tal-formula li ġejja:

Vijabbiltà taċ-ċelluli ( fil-mija )=(Kampjun- Ablank) ×100/ (A naive- Ablank)

Fejn A kampjun kien l-assorbiment tal-grupp sperimentali; A naive kienet l-assorbiment tal-grupp ta 'kontroll mingħajr kampjun; Bjank kien l-assorbiment tal-medium tal-kultura mingħajr ebda kampjun u ċellola miżrugħa.

2.6. Attività epatoprotettiva ta' CDP-C in vivo

2.6.1. Annimali

Ġrieden adulti nisa ICR (22-25 g, mixtrija mill-Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd. In-numru tal-liċenzja tal-annimali kien 11400700128) ġew utilizzati. L-annimali kienu miżmuma f'kamra kkontrollata mill-ambjent b'għalf u ilma ad libitum (l-umdità relattiva kienet 40-60 fil-mija, 22-26 grad), il-ventilazzjoni ta' l-arja kienet 12-18 darbiet fis-siegħa, u l-kundizzjoni ta' irradjazzjoni ħafifa kien ċiklu ta' dawl/dlam ta' 12-il siegħa ta' 150-300 lux. Il-ġrieden ġew akklimatizzati għall-kundizzjonijiet tal-kamra tal-annimali għal 7 ijiem qabel l-esperimenti. Il-proċeduri kollha li jinvolvu l-annimali matul l-esperimenti twettqu f'konformità stretta mar-regoli għall-Użu ta 'Annimali tal-Laboratorju kif adottati u promulgati mill-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa tal-Istati Uniti.

2.6.2. Disinn sperimentali

Ġrieden ICR kienu maqsuma b'mod każwali f'sitt gruppi (grupp naive, grupp ta 'kontroll negattiv, grupp ta' kontroll pożittiv, u tliet grupp tat-test) b'10 annimali f'kull grupp. Il-grupp naive ġie amministrat oralment b'ilma distillat. Il-grupp ta 'kontroll negattiv ingħata oralment bl-alkoħol (Er Guo-tou spirtu abjad, 56 fil-mija, 6 mL / kg). Il-grupp ta' kontroll pożittiv ingħata oralment b'bicyclol (300 mg/kg) u 5 sigħat wara bl-alkoħol. Tliet gruppi tat-test ingħataw oralment b'CDP-C f'doża ta '200, 600, 1800 mg/kg, u 5 sigħat wara bl-alkoħol. Il-ġrieden kollha ngħataw għal 31 jum konsekuttiv.

2.6.3. Determinazzjoni ta' indiċi seroloġiċi

Madwar 4 sigħat wara l-aħħar trattament alkoħoliku, id-demm inġabar mis-sokit tal-għajnejn u ġie ċentrifugat fi 3000 g għal 15-il minuta. Wara li s-serum ġie sseparat, l-attivitajiet tal-enżimi ta 'alanine transaminase (ALT), acid phosphatase (ACP), -glutamyl transpeptidase (-GTP), u trigliċeridi (TG) ġew determinati bl-użu ta' kits dijanjostiċi.
2.6.4. Determinazzjoni ta' indikaturi epatiċi

Wara l-ġbir tad-demm, il-ġrieden kollha ġew eżegwiti. Il-fwied ta 'kull ġurdien tneħħa immedjatament, maħsul b'salina fiżjoloġika. Biċċa tessut epatiku ġiet separata mil-lobu tax-xellug. Imbagħad it-tessut kien ikkapuljat u omoġenizzat b'soluzzjoni milwiema tal-klorur tal-potassju (1.15 fil-mija, w/v) f'omoġenizzatur tal-ħġieġ (Potter Elvehjem Teflon) għal 60 sekonda biex jagħmel omoġenat tal-fwied (10 fil-mija w/v). L-attivitajiet ta 'enżimi ta' superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA), glutathione S-transferase (GST) kif ukoll kontenut ta 'trigliċeridi (TG) ġew imkejla bl-użu tal-kits dijanjostiċi.

2.6.5. Studji istopatoloġiċi

Il-parti residwa tal-fwied ġiet iffissata fl-iffissant ta 'Bouin għal 24 siegħa, wara d-deidratazzjoni bl-użu ta' soluzzjoni akwea ta 'etanol (50-100 fil-mija, v/v), it-tessut tal-fwied ġie mnaddaf fil-xylene u inkorporat fil-paraffin. Sezzjonijiet tal-fwied (5 mm) kienu mtebbgħin bl-alum ematossilin u eosin (HE). Stampi ta' sezzjonijiet tal-fwied u bidliet istopatoloġiċi nqabdu minn mikroskopju tad-dawl (Nikon-DS-L1-5M).

2.7. Analiżi statistika

Id-dejta kienet espressa bħala mezzi ± żball standard tal-medja (SEM) minn tlieta (analiżi tal-kompożizzjoni kimika u analiżi antiossidanti), ħamsa (vijabbiltà taċ-ċelluli), jew għaxar (riċerka in vivo) esperimenti indipendenti. Is-sinifikati statistiċi tad-differenzi bejn il-gruppi ġew analizzati b'analiżi tal-varjanza f'direzzjoni waħda (ANOVA) segwit minn test ta' firxa multipla ta' Student-Newman-Keuls bl-użu ta' softwer SPSS 19.0. Fl-analiżi kollha, p<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3. Riżultati u diskussjoni

3.1. Karatterizzazzjonijiet ta' CDPs

Kif muri fil-Fig. 1A, is-CDP-A fih żewġ gruppi, il-piżijiet molekulari huma 4000 kDa u 3946 kDa. Il-piżijiet molekulari ta 'CDP-B u CDP-C huma 2400 kDa u 1300 kDa, Il-kompożizzjonijiet monosaccharide huma murija fil-Fig. 1B. CDP-A, CDP-B, u CDP-C fihom sitt monosaccharides essenzjali bi proporzjonijiet differenti, inklużi mannose (Man), rhamnose (Rha), aċidu galacturonic (GalUA), glukożju (Glc), galactose (Gal), u arabinożju ( Ara). Minbarra sitt monosaccharides imsemmija hawn fuq, xylose (Xyl) jidher ukoll f'CDP-C. Barra minn hekk, CDP-C fih proporzjon akbar ta 'GalUA miż-żewġ frazzjonijiet l-oħra.

Il-puritajiet u l-kontenut ta 'proteini ta' CDPs huma esebiti fit-Tabella 1. Tabella 1 turi li CDP-A għandu l-ogħla purità, li hija 75.57 fil-mija, filwaqt li l-puritajiet ta 'CDP-B u CDP-C huma 74.72 fil-mija u 68.92 fil-mija, rispettivament. Il-kontenut ta 'proteini ta' CDP-A, CDP-B, u CDP-C huma 1.27 fil-mija, 1.24 fil-mija, u 1.05 fil-mija, rispettivament.

Tabella 1.Puritajiet u kontenut ta' proteini ta' CDPs. Id-dejta hija l-mezzi ± SEM ta' tliet repliki.

L-ispettri FT-IR tal-karboidrati jintużaw biex jiddeterminaw il-karatteristiċi strutturali tagħhom u huma tipikament użati għall-analiżi kwalitattiva ta 'gruppi funzjonali organiċi, speċjalment għal OH, CO, u C=O [39]. L-ispettri FT-IR ta 'CDPs huma murija fil-Fig. 1C. Kull spettru juri quċċata ta 'tiġbid qawwi u wiesa' madwar 3293 cm-1 għal vibrazzjoni ta 'tiġbid OH kif ukoll quċċata ta' assorbiment dgħajjef f'2939 cm-1 għal vibrazzjoni ta 'tiġbid CH. Il-faxxa ta' assorbiment f'1650 cm−1 hija kkawżata minn vibrazzjoni ta' tiġbid asimmetrika C=O. Il-medda wiesgħa ta 'assorbiment f'1418cm-1 tattribwixxi għall-vibrazzjoni deformanti tar-rabta CH. Kull polysaccharide partikolari għandu faxxa speċifika fir-reġjun 1000-1200 cm-1, li hija ddominata minn vibrazzjoni taċ-ċirku koinċidiet ma 'vibrazzjoni ta' tiġbid ta 'gruppi tal-ġenb (C-OH) u l-vibrazzjoni tal-faxxa glikosidika (COC). L-assorbiment f'1036 ċm-1 jindika forma ta 'zokkor ta' pyranose. Assorbenza fi kważi 829 cm-1 tissuġġerixxi r-rabta ta '-glycosides fl-istruttura molekulari ta' CDPs. Kif muri fil-Fig. 1 C, il-medda ta 'assorbiment ta' CDP-C f'1650 cm-1 hija aktar b'saħħitha minn CDP-A u CDP-B, li jfisser li l-kontenut ta 'C=O f'CDP-C huwa aktar minn dawk fis-CDP-A u CDP-B. Dan ir-riżultat huwa konsistenti mar-riżultati ta 'Fig. 1 A, li jiżvela l-proporzjon ta' GalUA f'CDP-C huwa akbar minn dawk f'CDP-A u CDP-B.

3.2. Attivitajiet antiossidanti ta' CDPs

3.2.1. Assaġġ radikali hydroxyl

Fost l-ispeċi reattivi ta 'l-ossiġnu, ir-radikal hydroxyl huwa l-aktar wieħed reattiv u jinduċi ħsara severa lill-bijomolekuli li jmissu magħhom [40]. Għar-radikali hydroxyl, hemm żewġ tipi ta 'mekkaniżmi ta' antiossidazzjoni: wieħed qed ineħħi r-radikali idroksil diġà ġġenerat, u ieħor qed jissopprimi l-ġenerazzjoni ta 'radikali hydroxyl. Għal dan tal-aħħar, ir-radikali idroksil huwa ġġenerat mir-reazzjoni tal-kumpless Fe (II) mal-perossidu tal-idroġenu. L-attivitajiet antiossidanti tas-CDPs jistgħu jilligaw mal-joni tal-metall, li ma jirreaġixxux ma 'H2O2 u jipproduċu hydroxyl radical iżda jikkelaw ma' CDPs u jiffurmaw il-kumpless tal-metall. Il-kumpless tal-metall ma jistax jirreaġixxi aktar ma 'H2O2 biex jagħti radikali idroksil [41-43]. Għalhekk, is-CDPs juru l-effetti ta ' scavenging radical hydroxyl.

Fig. 2 A turi l-kapaċitajiet ta 'scavenging ta' CDPs fuq hydroxyl radical b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni. Ir-rata ta' tneħħija ta' CDP-A, CDP-B, u CDP-C hija 29.56 fil-mija, 33.44 fil-mija u 38.22 fil-mija, rispettivament. CDP-C juri attività ogħla ta ' scavenging radical hydroxyl. Meta wieħed iqis li CDP-C fih proporzjon ogħla ta' GalUA minn CDP-A u CDP-B, l-antiossidanti ta' CDPs jistgħu jirrelataw mhux biss mal-proprjetà tal-ligating tal-joni tal-metall, iżda wkoll mal-kontenut ta' GalUA, Ara, u Gal [{{15 }}].

3.2.2. Assaġġ radikali anjoni superossidu

Ir-radikali tal-anjoni superossidu huwa speċi tossika li hija ġġenerata minn bosta reazzjonijiet bijoloġiċi u fotokimiċi u b'hekk tinduċi ħsara fit-tessuti [47]. Għalkemm l-anjoni superossidu huwa ossidant relattivament dgħajjef, għandu rwol importanti fil-formazzjoni ta 'speċi ossidattivi reattivi aktar b'saħħithom, bħal ossiġnu singlet u radical hydroxyl [48]. Fig. 2 B turi r-relazzjoni bejn il-konċentrazzjonijiet u l-kapaċitajiet ta 'scavenging ta' CDPs fuq radikali anjoniċi superossidi. Hekk kif il-konċentrazzjoni tiżdied, CDP-C jesibixxi kapaċità ta 'keħni ogħla minn CDP-B u CDP-A.

3.2.3. Assaġġ radikali DPPH

DPPH, wieħed mill-komposti stabbli ċċentrati fuq in-nitroġenu li jippossjedu radikali ħielsa mill-protoni b'assorbiment karatteristiku f'517nm, jonqos b'mod sinifikanti fuq l-espożizzjoni għal kenniesi radikali tal-protoni, għalhekk, huwa użat ħafna biex jistma l-attivitajiet ta 'scavenging ta' radikali ħielsa ta 'antiossidanti. Huwa aċċettat sew li r-radikali ħielsa tad-DPPH miġbura mill-antiossidanti huwa dovut għall-abbiltajiet tagħhom li jagħtu l-idroġenu. L-antiossidanti jittrasferixxu jew elettroni jew atomi tal-idroġenu għar-radikali DPPH u ffurmaw DPPH-H, li hija formazzjoni mhux radikali [49].

Ġew ittestjati l-effetti totali ta 'scavenging ta' DPPH tal-kampjuni kollha u r-riżultati huma murija f'Fig. 2 C. L-abbiltajiet ta 'scavenging ta' CDPs fuq DPPH radikali juru b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni. Hekk kif il-konċentrazzjoni tiżdied minn 1.0 għal 5.0 mg/mL, l-abbiltajiet ta' scavenging ta' CDP-C jiżdiedu minn 52.5 fil-mija għal 58.7 fil-mija, ogħla minn CDP-B (minn 34.2 fil-mija għal 56.8). fil-mija) u CDP-A (minn 12.5 fil-mija għal 52.8 fil-mija). L-effett ta 'scavenging DPPH ta' CDP-C jista 'jkun assoċjat mal-gruppi tal-karbonil f'GalUA.

3.2.4. Assaġġ radikali ABTS

L-assaġġ radikali ABTS spiss jintuża għall-kejl tal-qawwa antiossidant totali ta' antiossidant qawwi tal-kampjuni tat-test [50]. L-effetti ta 'scavenging ABTS tal-kampjuni kollha huma murija f'Fig. 2 D. L-abbiltajiet ta 'scavenging ta' CDPs fuq radikali ABTS juru b'mod dipendenti mid-doża. L-IC50 ta 'CDP-A, CDP-B u CDP-C huma madwar 4.0 mg/mL, 2.5 mg/mL u 1.2 mg/mL, rispettivament. Ir-riżultati jindikaw li s-CDPs jippossjedu attività ta' scavenging ABTS.

Fil-qosor, l-attività antiossidant ta 'CDP-C kienet ogħla minn CDP-A u CDP-B. Irrapporta li xi attivitajiet farmakoloġiċi tal-polisakkaridi kienu relatati mal-GalUA[51]. F'dan l-esperiment, il-proporzjon ta 'GalUA f'CDP-C kien akbar minn dawk f'CDP-A u CDP-B, is-CDP-C intgħażel biex jinvestiga l-effett epatoprotettiv kontra mard kroniku tal-fwied indott mill-alkoħol.

3.3. L-effetti ta' CDP-C fuq il-vijabbiltà taċ-ċelluli HepG2

Il-kejl tal-vijabbiltà taċ-ċelluli huwa mod komuni biex tiġi vvalutata l-effikaċja tad-drogi naturali [52]. Ibbażat fuq ir-riżultati li CDP-C kellu l-ogħla attività antiossidant, ġew evalwati l-effetti ta 'CDP-C fuq il-vijabbiltà taċ-ċelluli HepG2. Ir-riżultati huma murija fil-Fig. 3. Trattament alkoħoliku indott tnaqqis notevoli tal-vijabbiltà taċ-ċelluli HepG2. Iżda CDP-C jista 'jtejjeb notevolment ir-rati ta' sopravivenza meta mqabbel mal-grupp negattiv. Kif muri fil-Fig. 3, il-vijabbiltà taċ-ċelluli ma turix b'mod preċiż dipendenti fuq il-konċentrazzjoni ma 'CDP-C. B'kuntrast, meta l-konċentrazzjoni ta' CDP-C tilħaq 3.00 mg/mL, il-vijabbiltà taċ-ċelluli HepG2 tonqos b'mod drammatiku. Ir-raġuni għat-tnaqqis fil-vijabbiltà taċ-ċelluli tista 'tkun li konċentrazzjoni baxxa ta' CDP-C kienet ta 'għajnuna għas-sopravivenza taċ-ċelloli HepG2. Madankollu, meta l-konċentrazzjoni tal-polisakkaridi fil-medju tal-kultura kienet għolja biżżejjed biex tbiddel il-mikroambjent taċ-ċelloli, il-vijabbiltà taċ-ċelluli HepG2 ġiet inibita.

3.4. Effetti farmakoloġiċi ta' CDP-C

3.4.1. L-effetti ta' CDP-C fuq indiċi seroloġiċi

L-abbuż mill-alkoħol jattribwixxi għal kważi 4 fil-mija tar-rati kollha tal-imwiet, li saret problema soċjali serja fid-dinja. Fil-ġisem tal-bniedem, l-alkoħol jiġi metabolizzat fil-fwied wara li jiġi assorbit mill-mukoża gastrika u intestinali ż-żgħira [53-55]. Il-mard alkoħoliku tal-fwied normalment iseħħ wara snin ta’ abbuż mill-alkoħol [56]. Kundizzjonijiet patoloġiċi komunement bħal fwied xaħmi, epatite, fibrożi, u ċirrożi [57], jew saħansitra mard tal-kanċer bħal karċinoma epatoċellulari u kanċer tal-kolon [58], huma osservati f'disturbi tal-fwied marbuta mal-alkoħol. Għalhekk, l-alkoħol huwa epatossiku tipiku u huwa użat ħafna bħala induttur ta 'korriment fil-fwied fir-riċerka xjentifika [59]. Meta wieħed iqis li l-mard tal-fwied ikkawżat mill-alkoħol huwa spiss ikkawżat minn xorb alkoħoliku u addittivi tal-ikel aktar milli etanol industrijali, għalhekk l-ispirtu abjad Er Guo-tou intuża biex jistabbilixxi mudell ta 'korriment fil-fwied fil-ġrieden ICR f'dan l-istudju. Bicyclol huwa aġent komuni użat biex jikkura korriment kronika tal-fwied, għalhekk intuża biex jistabbilixxi mudell ta 'kontroll pożittiv.

Iċ-ċelloli tal-fwied fihom konċentrazzjonijiet ogħla ta 'ALT fiċ-ċitoplasma u l-mitokondrija. Minħabba diversi ħsarat fiċ-ċelluli tal-fwied, it-tnixxija ta 'cytosol se tikkawża inkrement ta' ALT fis-serum. Għalhekk il-promozzjoni ta 'ALT hija l-indikatur ta' tnixxija ċellulari u disturbi funzjonali tal-fwied [60]. Għalhekk il-livell ta' ALT fis-serum huwa ġeneralment stabbilit bħala l-indikatur biex tiġi evalwata s-saħħa tal-fwied [61]. Għal raġunijiet simili, -GTP, ACP, u TG jintużaw ukoll bħala indikaturi biex tiġi vvalutata l-kundizzjoni tas-saħħa tal-fwied [62].

Fl-istudju preżenti, l-attività epatoprotettiva ta 'CDP-C ġiet ivvalutata bid-determinazzjoni tal-livelli ta' ALT, ACP, -GTP, u TG. Ir-riżultati huma murija fil-Fig. 4 A, B, C, u D. Erba 'indikaturi tas-serum promossi drastikament minn trattament alkoħoliku fil-grupp negattiv. Iżda CDP-C jista' jnaqqas dawn l-alterazzjonijiet indotti minn amministrazzjoni alkoħolika. Madankollu, mhux l-indiċi seroloġiċi kollha juru b'mod dipendenti mid-doża ma' CDP-C. Fil-Fig. 4 A u B, CDP-C f'konċentrazzjoni baxxa għandu effett sinifikanti fuq ir-restawr ta 'ALT u ACP, iżda l-effett ta' CDP-C fl-ogħla konċentrazzjoni ma kienx sinifikanti. Fil-fatt, ħafna prodotti naturali huma ta 'benefiċċju għas-saħħa f'dożi baxxi, iżda ta' ħsara għas-saħħa f'dożi għoljin [60]. Ir-raġuni tista 'tkun li l-inġestjoni eċċessiva ta' polisakkaridi se taffettwa l-metaboliżmu normali ta 'organiżmi, hekk kifli jaffettwa ħażin is-saħħa tal-ġisem. Madankollu, il-mekkaniżmu dettaljat jeħtieġ li jiġi riċerkat aktar.

3.4.2. L-effetti ta' CDP-C fuq indikaturi epatiċi

Organiżmi soġġetti għal stress ossidattiv normalment evolvew mekkaniżmu ta 'difiża antiossidant, u SOD hija sistema antiossidant tipika bbażata fuq l-enżimi [63]. SOD jikkatalizza d-dismutazzjoni tal-anjoni superossidu f'O2 u H2O2 [64]. GST, proteina solubbli li tinsab fiċ-ċitosol, għandha wkoll rwol importanti fid-ditossifikazzjoni tal-fwied. Għar-raġunijiet imsemmija hawn fuq, SOD u GST isiru l-indikaturi fl-epatotossiċità indotta mill-alkoħol. MDA u TG fil-fwied jintużaw ukoll bħala indikaturi tal-epatotossiċità [65].

Fl-istudju preżenti, l-effetti ta 'CDP-C fuq il-funzjoni tal-fwied huma murija fil-Fig. 5. Stampa A, B, C, u D juru l-effetti ta' CDP-C fuq SOD, MDA, GST, u TG, rispettivament. Dawn l-erba 'stampi juru li l-ġrieden ittrattati bl-alkoħol jonqsu b'mod notevoli l-livelli ta' SOD u GST, u jżidu l-livelli ta 'MDA u TG, iżda CDP-C jista' evidenti jnaqqas din l-alterazzjoni. Simili għall-fenomeni deskritti fit-taqsima 3.4.1, l-indikaturi epatiċi lanqas ma kinux b'mod dipendenti mid-doża mas-CDP-C. Ir-raġuni għal dan tista' tkun simili għall-mekkaniżmu illustrat fit-taqsima 3.4.1. Studji preċedenti rrappurtaw li l-effetti tal-polisakkaridi fuq SOD u catalase jistgħu jkunu assoċjati mal-induzzjoni ta 'espressjonijiet tal-ġeni ta' SOD u catalase [66]. Madankollu, għadhom meħtieġa aktar studji biex jiċċaraw il-mekkaniżmu epatoprotettiv ta 'CDP-C u r-relazzjoni bejn l-istruttura u l-funzjoni tiegħu.

3.5. Effetti istopatoloġiċi ta' CDP-C fuq ġrieden indotti mill-alkoħol

Fuq il-bażi tal-osservazzjonijiet istopatoloġiċi fuq is-sezzjonijiet tal-fwied, il-grupp naive wera arkitettura ċellulari normali b'ċelluli epatiċi distinti u l-ebda anormalitajiet istoloġiċi (Fig. 6 A). B'paragun, l-amministrazzjoni alkoħolika kkawżat ħsara serja fil-fwied fil-ġrieden tal-grupp negattiv. Is-sezzjonijiet tal-fwied wrew depożizzjoni ta 'xaħam tal-epatoċiti, nekrożi u nefħa tal-epatoċiti, formazzjoni ta' vakuole fiċ-ċelloli, u l-konfini ċellulari wkoll sparixxew (Fig. 6 B). Is-sezzjonijiet tal-fwied tal-ġrieden amministrati b'bicyclol (Fig. 6 C), b'dożi li jvarjaw ta 'CDP-C (Fig. 6 DF) urew evidentement restawr ta' dawk id-distorsjonijiet li dehru fil-grupp ta 'kontroll negattiv. Dawn ir-riżultati vvalidaw li l-alkoħol indotta ċertu punt ta 'distorsjoni fl-epatoċiti tal-grupp ta' kontroll negattiv. Madankollu, CDP-C irrestawra dawn il-bidliet.

Huwa aċċettat sew li l-effett epatoprotettiv tal-polisakkaridi huwa assoċjat mal-attività antiossidant tagħhom [67, 68]. Il-kontenut għoli ta 'aċidu uroniku ġie ppruvat li huwa ta' benefiċċju għall-effetti antiossidanti tal-polisakkaridi [44, 45]. Il-polisakkaridi sinjuri f'Gal u Ara kienu wkoll ġew ivverifikati li għandhom effetti antiossidanti ogħla [46]. Madankollu, huwa diffiċli għal polisakkaridi molekulari kbar li jidħlu fiċ-ċelloli epiteljali intestinali direttament. Għas-CDP-C (b'piż molekulari ta '1300kDa), mhuwiex faċli li tidħol fil-ġisem direttament u jkollha r-rwol epatoprotettiv. Rapporti ppubblikati wrew li l-piżijiet molekulari tal-polisakkaridi naqsu wara diġestjoni gastrika u intestinali [69]. Għalhekk, aħna assumejna li CDP-C jista 'jiġi degradat f'polisakkaridi b'piż molekulari baxx u assorbit minn ċelluli epiteljali intestinali. It-truf tat-tnaqqis tal-polisakkaridi jistgħu jiżdiedu minħabba t-tkissir ta 'bonds glycosidic [69, 70]. Skont il-kompożizzjoni ta 'monosaccharide ta' CDP-C, dawk il-polisakkaridi degradati b'piż molekulari baxx għandu jkun fihom GalUA, Ara u Gal. Għalhekk dawn il-polisakkaridi ta 'piż molekulari baxx, li għandhom truf li jnaqqsu u fihom GalUA, Ara, u Gal, jista' jkollhom ir-rwol ta 'protezzjoni tal-fwied fil-ġisem. Madankollu, il-mekkaniżmu dettaljat jeħtieġ li jiġi riċerkat aktar.

4. Konklużjonijiet

Skont l-analiżi tal-kompożizzjoni tal-monosaccharide u l-ispettri FT-IR, it-tliet frazzjonijiet kollha ta 'CDP kien fihom Man, Rha, GalUA, Glc, Gal, u Ara. CDP-C kien fih proporzjon kbir ta' GalUA. CDP-C kellu l-ogħla attività antiossidanti. Ir-riżultati tar-riċerka kemm in vitro kif ukoll Vivo wrew li CDP-C kellu attività epatoprotettiva kontra ħsara kronika tal-fwied indotta mill-alkoħol. Il-mekkaniżmu sottostanti kien relatat mal-modulazzjoni tal-attivitajiet relattivi tal-enzimi, it-tnaqqis tal-MDA u t-TG fil-fwied. L-attività fiżjoloġika ta' CDP-C tista' tassoċja ma' GalUA. Dawn is-sejbiet jipprovdu għarfien ġdid dwar il-miri farmakoloġiċi ta 'C. deserticola fil-prevenzjoni tal-mard alkoħoliku tal-fwied.

Cistanche herbajipproteġi l-fwieduitejjeb l-immunità.

Għal aktar informazzjoni, jekk jogħġbok ikklikkja hawn.