Metodu HPTLC ta' Fażi Maqluba Sensittiva ħafna u ekoloġikament Sostenibbli għad-Determinazzjoni ta' Hydroquinone fi Kremi Kummerċjali li jbajdu

Kuntatt:ali.ma@wecistanche.com

Mohammed H. Alqarni 1, Prawez Alam 1, Faiyaz Shakeel 2, Ahmed I. Foudah 1 u Sultan Alshehri 2,*

Astratt: Hydroquinone(HDQ) huwa aġent depigmentanti naturali, li huwa komunement użat fil-preparazzjonijiet għat-toning tal-ġilda. Is-sigurtà u l-ħdura tal-metodi analitiċi tal-kwantifikazzjoni HDQ ma kinux ikkunsidrati fil-letteratura preċedenti. Għalhekk, ġie stabbilit assaġġ ibbażat fuq il-kromatografija ta’ saff irqiq ta’ prestazzjoni għolja b’fażi inversa sensittiva ħafna u ekoloġikament iktar ekoloġika għall-istima HDQ f’erba’ kummercjali differenti.jbajdukremi (CWCs). It-taħlita binarja etanol-ilma (60:4{0, v·v−1) ġiet utilizzata bħala s-sistema tas-solvent aħdar. L-istima ta' HDQ saret f'291 nm. L-assaġġ preżenti bbażat fuq RP-HPTLC kien lineari fil-medda 20–2400 ng band-1. Il-metodu analitiku preżenti kien sensittiv ħafna bbażat fuq id-dejta tal-kxif u l-kwantifikazzjoni. Il-parametri ta 'validazzjoni l-oħra, bħall-eżattezza, il-preċiżjoni, u r-robustezza, kienu wkoll adattati għad-determinazzjoni ta' HDQ. Il-kwantitajiet massimi ta' HDQ inkisbu f'CWC A (1.23 fil-mija w·w−1) segwit minn CWC C (0.81 fil-mija w·w−1), CWC D (0.43 fil-mija w·w−1), u CWC B (0.37 fil-mija w· w−1). Il-punteġġ analyticalGREEnness (AGREE) għall-metodu analitiku preżenti kien stmat bħala 0.91, li jindika l-karatteristiċi ekoloġiċi eċċellenti tal-assaġġ RP-HPTLC preżenti. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-metodu analitiku preżenti huwa sensittiv ħafna u ekoloġikament sostenibbli għall-kwantifikazzjoni tal-HDQ fil-formulazzjonijiet kummerċjali tiegħu.

Kliem ewlieni:naqbel;idroquinone; RP-HPTLC ekoloġikament sostenibbli; validazzjoni

Estratt ta' Cistanchejista 'jneħħi radikali ħielsa u jipprevjeni l-akkumulazzjoni ta' tyrosinase.

Ikklikkja biexEffetti Cistanche għal jbajdu

1. Introduzzjoni

Hydroquinone(HDQ) huwa kompost naturali, li huwa preżenti f'diversi formulazzjonijiet kummerċjali għat-toning tal-ġilda għat-trattament tal-melasma (marda kkawżata mill-akkumulazzjoni żejda ta 'melanin fil-ġilda tal-bniedem) [1,2]. Huwa aġent depigmentanti qawwi u jintuża bħala alternattiva għal tyrosinase [3]. Huwa wieħed mill-aġenti l-aktar użati komunement fit-trattament tal-iperpigmentazzjoni tal-ġilda tal-bniedem [4,5]. Il-konċentrazzjoni effettiva ta' HDQ f'formulazzjonijiet kummerċjali għat-toning tal-ġilda tvarja minn 1.5 sa 2.0 fil-mija w·w−1[6]. Il-konċentrazzjoni għolja ta 'HDQ ('il fuq minn 5 fil-mija w·w-1) tikkawża irritazzjoni lokali u lewkoderma għall-ġilda tal-bniedem [5,6]. Minħabba l-effetti sekondarji kontroversjali tiegħu, ħafna pajjiżi pprojbixxew HDQ bħala ajbajduaġent f'formulazzjonijiet topiċi [7]. Madankollu, bosta investigazzjonijiet kliniċi ssuġġerew diversi effetti protettivi ta 'HDQfil-ġestjoni ta 'disturbi iperpigmentari tal-ġilda differenti bħal melasma, freckles, lentigines, eċċ. [8,9]. Billi tikkunsidra kemm il-benefiċċji kif ukoll ir-riskji ta 'HDQ, hija meħtieġa l-analiżi kwantitattiva tagħha f'formulazzjonijiet kummerċjali differenti għat-toning tal-ġilda.

Assaġġi farmaċewtiċi differenti huma utilizzati għall-kwantifikazzjoni ta' HDQ jew waħdu jew flimkien ma' oħrajn.jbajduaġenti fi kremi li jbajdu fis-suq (CWCs). Varjetà ta 'assaġġi bbażati fuq l-ispettrometrija ultra-vjola (UV) ġiet iddokumentata għall-analiżi kwantitattiva ta' HDQ fi prodotti li jbajdu kummerċjali (CWPs) u preparazzjonijiet farmaċewtiċi [10-13]. Ġew dokumentati firxa wiesgħa ta 'assaġġi bbażati fuq kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja (HPLC) għad-determinazzjoni ta 'HDQ flimkien mal-eteri tagħha f'varjetà ta' CWCs u CWPs [14-23]. Ġew stabbiliti wkoll diversi metodi voltametriċi għad-determinazzjoni simultanja ta 'HDQ u d-derivattivi ta' l-etere tiegħu f'CWPs [24-29]. Xi assays analitiċi oħra bħal fluss elettrokimiku ta' injezzjoni [30], kromatografija elettrokinetika miċellari [31], elettrokromatografija kapillari [32], u analiżi bbażati fuq nanokomposti [33] ġew stabbiliti wkoll għall-HDQanaliżi flimkien mad-derivattivi etere tagħha u oħrajnjbajduaġenti fis-CWPs. Xi nanosensuri bbażati fuq elettrokimiċi ġew irrappurtati wkoll għall-analiżi HDQ [34,35]. Metodu wieħed ibbażat fuq il-kromatografija ta 'saff irqiq ta' prestazzjoni għolja ta 'fażi normali (HPTLC) ġie applikat ukoll għall-analiżi kwalitattiva u kwantitattiva ta' HDQ f'CWCs mill-grupp ta 'riċerka tagħna [1].

Wara analiżi eżawrjenti tal-esejs irrappurtati dwar l-analiżi HDQ, ġie osservat li s-sigurtà u s-sostenibbiltà ekoloġika tal-metodi farmaċewtiċi fil-letteratura ma ġewx evalwati jew ikkunsidrati għall-evalwazzjoni. Barra minn hekk, l-assaġġi bbażati fuq l-HPTLC (RP-HPTLC) ekoloġikament sostenibbli b'fażi inversa għadhom ma ġewx utilizzati għall-istima ta'HDQfis-CWCs tagħha. Assaġġi bbażati fuq HPTLC ekoloġikament sostenibbli/aħdar joffru bosta vantaġġi bħas-sempliċità, l-ekonomija, l-ispiża baxxa tal-operat, il-ħin qasir tal-analiżi, l-analiżi parallela ta’ kampjuni multipli, iċ-ċarezza tal-kxif, u t-tnaqqis fit-tossiċità ambjentali fuq l-HPLC u metodi analitiċi oħra [36-39]. Għalhekk, metodu RP-HPTLC għad-determinazzjoni ta 'HDQ intgħażel għal dan l-istudju. Jintużaw approċċi differenti għall-valutazzjoni tal-profil tal-ħdura tal-analiżi farmaċewtiċi [38-43]. Madankollu, l-approċċ metriku tal-GREenness analitiku (AGREE) biss japplika t-12-il prinċipju tal-kimika analitika ekoloġika (GAC) għall-valutazzjoni tal-ħdura [42].

L-approċċ metriku AGREE ġie applikat għall-evalwazzjoni tal-ħdura tal-metodu preżentiRP-HPTLC [42]. Għalhekk, ix-xogħol preżenti sar biex jiġi żviluppat metodu RP-HPTLC sensittiv ħafna u aħdar/ekoloġikament sostenibbli għall-istima ta'HDQf'erba' CWCs differenti. Il-profil tal-ħdura tal-metodu preżenti RP-HPTLC ġie miksub minn AGREE: The Analytical Greenness Calculator. L-assaġġ analitiku preżenti għall-analiżi HDQ ġie vvalidat skont il-linji gwida tal-Kunsill Internazzjonali għall-Armonizzazzjoni (ICH) Q2 (R1) [44].

2. Materjali u Metodi

2.1. Materjali

L-istandard ta 'referenza ta' HDQ (purità: 99 fil-mija) ġie akkwistat minn Fluka Chemica (Darmstadt, il-Ġermanja). Metanol ta 'grad HPLC (MeOH) u etanol (EtOH) ġew akkwistati minn Alfa Aesar (Tewksbury, MA, USA). Ilma ta 'grad HPLC (H2O) inġabar minn sistema ta' purifikatur tal-ilma Milli-Q (E-Merck, Darmstadt, il-Ġermanja). Solventi u reaġenti oħra użati kienu ta' grad analitiku. Erba' CWCs differenti ta' HDQ inkisbu minn suq farmaċewtiku f'Al-Kharj, l-Għarabja Sawdija, fix-xahar ta' Ġunju 2021. Is-CWCs ta'HDQinħażen f'post frisk u mudlam f'22 ◦C qabel il-bidu ta 'l-esperimenti. Is-CWCs ġew maħżuna għal madwar xahar qabel il-bidu ta' l-esperimenti.

2.2. Kromatografija

Il-kwantifikazzjoni tad-densitometrija RP-HPTLC ta 'HDQ fl-istandard ta' referenza tagħha u erba 'CWCs differenti twettqet bl-użu ta' strument HPTLC (CAMAG, Muttenz, l-Isvizzera). L-analiżi kwantitattiva ta 'HDQ twettqet fuq pjanċi 10 × 20 cm2 b'lura tal-ħġieġ miksija minn qabel bi pjanċi RP silica gel 60 F254S (E-Merck, Darmstadt, Ġermanja). bl-użu ta' applicatur automaticsampler 4 (ATS4) (CAMAG, Ġinevra, l-Isvizzera). L-applikatur tal-kampjun kien mgħammar b'siringa tal-mikrolitru CAMAG (Hamilton, Bonaduz, l-Isvizzera). Ir-rata ta' applikazzjoni għall-analiżi kwantitattiva ta'HDQinżamm kostanti f'15 0 nL s-1. Il-pjanċi ġew żviluppati f'kamra ta 'żvilupp awtomatiku 2 (CAMAG, Muttenz, l-Isvizzera) f'distanza ta' 80 mm. Is-sistema tas-solvent aħdar għall-analiżi HDQ kienet EtOHH2O (60:40, v·v−1). Il-kamra tal-iżvilupp kienet saturata qabel bil-fwar tal-fażi mobbli għal 30 min f'22 ◦C. L-HDQ ġie skopert f'291 nm. Id-dimensjonijiet tal-qasma kienu 4 × 0.45 mm2 u r-rata tal-iskannjar kienet 20 mm s-1. Kull esperiment sar fi tliet kopji. Is-softwer użat għall-ipproċessar tad-dejta kien WinCATs (v. 1.4.3.6336,CAMAG, Muttenz, l-Isvizzera).

2.3. Kurva tal-Kalibrazzjoni HDQ u Preparazzjoni ta' Kampjuni ta' Kontroll tal-Kwalità

Il-kwantità speċifikata ta 'HDQ (10 mg) ġiet imqassma f'100 mL ta' sistemi ta 'solvent aħdar EtOH-H2O(60:40, v·v-1) biex tinkiseb is-soluzzjoni tal-istokk bil-konċentrazzjoni ta' 100 µg mL-1. Il-volumi differenti ta 'soluzzjonijiet tal-ħażniet ġew dilwiti aktar bl-użu ta' sistemi EtOH-H2O (60:40, v·v-1) biex jinkisbu konċentrazzjonijiet HDQ fil-medda 20-2400 ng band-1. Is-soluzzjonijiet miksuba ta 'HDQli kien fihom konċentrazzjonijiet differenti kienu spotted fuq pjanċi HPTLC. L-erja tal-quċċata tal-HPTLC għal HDQ inkisbet għal kull soluzzjoni HDQ bl-użu tal-assaġġ farmaċewtiku preżenti. Il-kurva tal-kalibrazzjoni tal-HDQ ġiet ġenerata billi tpinġi l-konċentrazzjonijiet tal-HDQ mal-erja HPTLC tagħha. Barra minn hekk, tliet kampjuni ta 'kontroll tal-kwalità differenti (QC), bħal QC baxx (LQC; 20 ng band-1), QC tan-nofs (MQC; 600 ng band-1), u kampjuni ta' QC għoli (HQC; 2400 ng band-1) , inkisbu separatament sabiex jiġu ddeterminati parametri ta' validazzjoni differenti għall-assaġġ farmaċewtiku preżenti.

2.4. Ipproċessar tal-Kampjun għal Determinazzjoni HDQ f'CWCs

L-HDQ ġie estratt minn erba' CWCs differenti billi adottat il-proċedura rrappurtata fil-letteratura [1]. L-ammonti miżunin b'mod preċiż (5.0 g) ta' erba' CWCs differenti, inklużi A, B, C, u D, ġew trasferiti għall-lembut ta' separazzjoni separatament. Kull CWC tħawwad fil-lembut ta 'separazzjoni b'MeOH (3 × 70 mL) għal perjodu ta' 30 min f'22 ◦C. L-estratti ta 'MeOH minn kull CWC ġew magħquda u evaporati separatament għal nixfa taħt pressjoni mnaqqsa bl-użu ta' evaporatur bil-vakwu rotanti. Ir-residwi miksuba ġew rikostitwiti b'10 mL ta 'MeOH u maħżuna fi friġġ sa aktar evalwazzjoni. Il-kampjuni miksuba ġew soġġetti għal analiżi HDQ bl-użu tal-metodu analitiku preżenti f'291 nm.

2.5. Parametri ta' Validazzjoni

L-assaġġ RP-HPTLC preżenti għall-analiżi HDQ ġie vvalidat għal parametri ta' validazzjoni differenti billi ssegwi l-linji gwida ICH-Q2 (R1) [44]. Il-HDQil-linearità ġiet evalwata billi tpinġi l-konċentrazzjonijiet HDQ mal-erja tal-quċċata mkejla tagħha. Il-linearità HDQ ġiet evalwata fi 11-il kampjun QC differenti ta '20, 40, 60, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 1200, u 2400 ng band-1 għall-assaġġ farmaċewtiku preżenti. Il-parametri tal-effiċjenza tas-sistema għall-metodu analitiku preżenti ġew evalwati f'termini tal-fattur ta 'ritardazzjoni (Rf), fattur ta' asimetrija (As), u n-numru ta 'pjanċi teoretiċi għal kull metru (N m-1). L-Rf, As, u N m-1 inkisbu f'MCQ (600 ng band-1), kif irrappurtat qabel fil-letteratura [45].

L-eżattezza għall-metodu RP-HPTLC preżenti ġiet iddeterminata bħala l-irkupru perċentwali. Il-perċentwal ta 'rkupru nkiseb f'LQC (20 ng band-1), MQC (600 ng band-1), u HQC (2400 ng band-1) għal il-metodu analitiku preżenti.

Il-preċiżjoni għall-metodu analitiku preżenti ġiet evalwata bħala preċiżjoni intra/interday. Il-preċiżjoni intraday ġiet iddeterminata mill-analiżi tal-HDQ f'LQC, MQC, andHQC fl-istess jum għall-assaġġ analitiku preżenti. Il-preċiżjoni interday ġiet iddeterminata mill-analiżi tal-HDQ f'LQC, MQC, u HQC fi tlett ijiem differenti għall-assaġġ analitiku tal-preżentazzjoni [44]. Kull preċiżjoni kienet imkejla sitt darbiet (n=6).

Ir-robustezza ġiet evalwata billi ġew introdotti xi bidliet żgħar fis-sistemi tas-solventi ħodor għall-metodu RP-HPTLC preżenti. Għall-evalwazzjoni tar-robustezza, is-sistema oriġinali tas-solvent EtOH H2O (60:40, v·v−1) inbidlet għal EtOH-H2O (62:38, v·v−1) u EtOHH2O (58:42, v·v−1) ) sistemi tas-solventi, u r-rispons speċifiku HPTLC u l-valuri Rf ġew irreġistrati u interpretati [44].

Is-sensittività għall-metodu analitiku preżenti ġiet evalwata bħala limiti ta' detezzjoni (LOD) u kwantifikazzjoni (LOQ) bl-użu ta' metodu ta' devjazzjoni standard. Il-LOD u l-LOQ ofHDQ għall-metodu analitiku preżenti ġew ikkalkulati, kif irrappurtat fil-letteratura [44,45].

L-ogħla purità/speċifiċità ġiet evalwata billi tqabbel il-valuri Rf u l-UVspectra ta' HDQ f'CWCs A, B, C, u D ma' dik ta' HDQ standard għall-assaġġ farmaċewtiku preżenti.

2.6. Analiżi Kwantitattiva ta' HDQ f'CWCs

Il-kampjuni miksuba tas-CWC A, B, C, u D ġew innutati fuq pjanċi HPTLC, u r-risponsi tagħhom TLC ġew innutati. Iż-żona tal-quċċata għalHDQfis-CWCs ġiet irreġistrata. Il-kontenut HDQ fis-CWCs ġew ikkalkulati bl-użu tal-kurva tal-kalibrazzjoni tal-HDQ għall-metodu presentanalitiku.

2.7. Evalwazzjoni tal-Ħdura

Il-karatteristiċi tal-ħdura għall-metodu analitiku preżenti nkisbu bl-użu tal-approċċ metriku AGREE [42]. Il-punteġġi AGREE (0.0–1.0) tal-metodu analitiku preżenti ġew irreġistrati bl-użu ta' AGREE: The Analytical Greenness Calculator (verżjoni0.5, Università ta' Gdansk tat-Teknoloġija, Gdansk, il-Polonja, 2020).

3. Riżultati u Diskussjoni

3.1. Żvilupp tal-Metodu

Ibbażat fuq metodi analitiċi tal-letteratura, instab li l-metodu ekoloġikament sostenibbli kapaċi/aħdar RP-HPTLC għall-analiżi tal-HDQ fil-kożmetiċi kummerċjali huwa nieqes. Għalhekk, l-istudju preżenti sar biex jiżviluppa l-veloċi, sensittiv ħafna, u ekoloġikament sostenibbli. Metodu RP-HPTLC għall-analiżi HDQ f'CWCs.

Għall-analiżi RP-HPTLC ta 'HDQ, proporzjonijiet differenti ta' EtOH u H2O, inklużi EtOH-H2O (50:50, v·v−1), EtOH-H2O (60:40, v·v−1), EtOH-H2O (70:30, v·v-1), EtOH H2O (80:20, v·v-1), u EtOH-H2O (90:10, v·v-1), ġew evalwati bħala l-kombinazzjonijiet tas-solvent aħdar għall- żvilupp ta 'faxxa affidabbli għall-analiżi HDQ. It-taħlitiet tas-solventi ġew żviluppati taħt kundizzjonijiet ta 'saturazzjoni tal-kamra. Mid-dejta rreġistrata, ġie nnotat li EtOH-H2O (50:50, v·v−1), EtOH-H2O (70:30, v·v−1), EtOH-H2O (80:20, v·v−1). 1), u EtOH-H2O (90:10, v·v−1) taħlitiet ta’ solventi ħodor offrew kromatogramma fqira ta’HDQb'valur As mhux aċċettabbli (As {{0}}.29). Madankollu, il-kombinazzjoni tas-solvent aħdar EtOH-H2O (60:40, v·v−1) kienet wriet li toffri kromatogramma riżolta tajjeb ta' HDQ atRf=0.83 ± 0.02 b'valur As aċċettabbli (As {{ 12}}.03) (Figura 1). Għalhekk, l-EtOH H2O (60:40, v·v-1) ġie ottimizzat bħala t-taħlitiet ta 'solvent aħdar għall-analiżi HDQ fil-CWCs. Il-meded spettrali UV għall-metodu RP-HPTLC preżenti ġew irreġistrati b'mod densitometriku, u r-rispons massimu HPTLC instab f'291 nm għall-metodu RP-HPTLC preżenti. Għalhekk, l-analiżi sħiħa ta 'HDQ saret f'291 nm.

3.2. Parametri ta' Validazzjoni

L-assaġġ farmaċewtiku preżenti għall-kwantifikazzjoni HDQ ġie vvalidat għal firxa ta 'linearità, parametri ta' effiċjenza tas-sistema, preċiżjoni, preċiżjoni, robustezza, sensittività, u l-ogħla purità/speċifiċità billi ssegwi r-rakkomandazzjonijiet ICH [44]. Ir-riżultati għall-analiżi tar-rigressjoni tal-inqas kwadri tal-kurva tal-kalibrazzjoni tal-HDQ għall-metodu preżenti RP-HPTLC huma ppreżentati fit-Tabella 1.HDQkurva ta 'kalibrazzjoni kienet lineari fil-medda ta' medda ta '20–2400 ng b'koeffiċjent ta' determinazzjoni ta '0.9997 għall-metodu analitiku preżenti. din id-dejta ssuġġeriet linearità tajba bejn il-konċentrazzjoni HDQ u r-rispons tagħha.

Il-parametri tal-effiċjenza tas-sistema tal-metodu farmaċewtiku preżenti ġew studjati f'MQC (600 ng band-1), u r-riżultati huma inklużi fit-Tabella 2. Il-valuri Rf, As, u N m−1 għal il-metodu analitiku preżenti kienu mbassra bħala 0.83 ± 0.02, 1.03 ± 0.03, and4987 ± 2.87, rispettivament. Dawn ir-riżultati indikaw li l-metodu analitiku preżenti kien affidabbli għall-analiżi HDQ fis-CWCs.

Ir-riżultati għall-analiżi tal-eżattezza għall-metodu analitiku preżenti huma elenkati fit-Tabella 3. L-irkupru perċentwali ta 'HDQ għall-metodu RP-HPTLC preżenti ġie determinat bħala 101.80 fil-mija, 98.16 fil-mija, u 99.38 fil-mija f'LQC, MQC, u HQC, rispettivament . Il-valuri għoljin tal-perċentwali ta' rkupru indikaw l-eżattezza tal-metodu RP-HPTLC preżenti għall-analiżi HDQ fis-CWCs.

Il-preċiżjoni ġiet iddeterminata bħala l-perċentwali tal-koeffiċjent tal-varjazzjoni (perċentwali CV), u r-riżultati huma murija fit-Tabella 4. Il-perċentwali CVs tal-HDQ għall-metodu analitiku preżenti kienu mbassra bħala 0.91, 0. 59, u 0.26 fil-mija f'LQC, MQC, u HQC, rispettivament, għall-intradayprecision. Is-CVs perċentwali ta' HDQ għall-metodu preżenti RP-HPTLC kienu mbassra bħala 0.98,{{10}}.69, u 0.32 fil-mija f'LQC, MQC u HQC, rispettivament, għall- preċiżjoni interday. Il-valuri baxxi tal-perċentwali CV indikaw il-preċiżjoni tal-metodu RP-HPTLC preżenti għall-analiżi HDQ f'CWCs.

Ir-riżultati tal-analiżi tar-robustezza għall-metodu analitiku preżenti huma murija fit-Tabella 5. Is-CVs perċentwali għall-analiżi tar-robustezza kienu mbassra bħala 0.59–0.66 fil-mija għall-metodu presentanalitiku. Il-valuri Rf ta' HDQ instabu fil-medda 0.82–0.84 għall-metodu presentanalitiku. Il-bidliet dojoq fil-valuri Rf ta 'HDQ u CVs perċentwali aktar baxxi wrew ir-robustezza tal-metodu analitiku preżenti għall-kwantifikazzjoni HDQ f'CWCs.

Is-sensittività għall-metodu analitiku preżenti ġiet irreġistrata bħala "LOD u LOQ", u l-valuri fiżiċi tagħhom huma murija fit-Tabella 1. Il-"LOD u LOQ" għall-metodu presentanalitiku kienu mbassra bħala 6.91 ± 0.23 u 2. 0.73 ± 0.68 ng band-1, rispettivament,forHDQkwantifikazzjoni. Dawn il-valuri fiżiċi ta' "LOD u LOQ" għall-metodu analitiku preżenti indikaw is-sensittività għall-analiżi HDQ f'CWCs.

L-ogħla purità/speċifiċità għall-metodu analitiku preżenti ġiet evalwata billi tqabbel l-ispettri UV overlaid ta 'HDQ f'erba' CWCs differenti ma 'dawk ta' standardHDQ. L-ispettri UV overlaid ta 'HDQ standard u HDQ f'erba' CWCs differenti huma murija fil-Figura 2. L-ogħla rispons kromatografiku għal HDQ f'HDQ standard u CWCs studjati kien osservat f'291 nm għall-metodu analitiku preżenti. L-ispettri identiċi tal-UV, il-valuri Rf, u t-tul tal-mewġ tal-HDQ f'HDQ standard u CWCs indikaw l-ogħla purità/speċifiċità għall-metodu analitiku preżenti.

3.3. Analiżi tal-Kontenut HDQ f'CWCs

L-applikabbiltà tal-assaġġ analitiku preżenti ġiet ivverifikata fl-istima kwantitattiva tal-HDQ fis-CWCs. Il-kromatogramma ta'HDQminn CWCs ġiet identifikata billi tqabbel il-post TLC tagħha f'Rf {{0}}.83 ± 0.02 ma' dawk ta' HDQ standard għall-metodu analitiku preżenti. Il-kromatogrammi ta' HDQ f'CWCs A u B għall-assaġġ analitiku preżenti huma miġbura fil-qosor fil-Figura 3. Il-kromatogrammi HPTLC ta' HDQ f'CWCs kienu identiċi għal dawk ta' HDQ pur. Xi qċaċet żejda dehru wkoll fil-kromatogrammi tas-CWCs, li jistgħu jkunu assoċjati ma' eċċipjenti differenti preżenti fis-CWCs. Il-metodu HPTLC ekoloġikament sostenibbli kien selettiv għall-analiżi HDQ f'Rf=0.83 mingħajr interferenza mill-ingredjenti l-oħra tas-CWCs. Il-valur Rf (0.83) ta' HDQ f'CWCs instab li kien identiku ma' dak ta' HDQ standard ({{20}}.83), li jindika li ma kien hemm l-ebda interazzjoni bejn HDQ u Ingredjenti tas-CWC. Għalhekk, ma kien hemm l-ebda influwenza tal-ingredjenti tal-formulazzjoni fuq il-kwalità tal-kromatogramma HDQ, LOD, u l-effiċjenza tal-metodu HPTLC preżenti tal-analiżi HDQ. Il-preżenza ta 'qċaċet żejda fil-kromatogrammi ta' CWCs indikat li l-metodu preżenti RP-HPTLC kien affidabbli għall-istima HDQ fil-preżenza ta 'ingredjenti ta' formulazzjoni. Il-kontenut HDQ ta 'CWCswere determinati mill-kurva tal-kalibrazzjoni ta' HDQ, u r-riżultati huma inklużi fit-Tabella 6. It-Tabella 6 tiġbor fil-qosor ukoll l-ammont ittikkettat ta 'HDQ u l-ingredjenti tal-formulazzjoni tiegħu. Il-kontenut HDQ kien l-ogħla f'CWC A (1.23 fil-mija w·w−1) segwit minn CWC C (0.81 fil-mija w·w−1),CWC D (0.43 fil-mija w·w) −1), u CWC B (0.37 fil-mija w·w−1). Il-kontenut irreġistrat ta 'HDQ kienu ħafna aktar baxxi mill-ammont ittikkettat (2.00 fil-mija w·w−1) ta' HDQ f'CWCs studjati. Il-kontenut HDQ f'żewġ CWCs differenti (A u B) ġew irreġistrati bħala 0.69 fil-mija w·w-1 u 0.34 fil-mija w·w-1, rispettivament, bl-użu tal-metodu HPTLC ta 'fażi normali fil-letteratura [1]. Il-kontenut irrappurtat ta 'HDQ kien ukoll ħafna aktar baxx mill-ammont ittikkettat (2.00 fil-mija w·w−1) ta' HDQ fil-letteratura [1]. Diversi CWCs jew CWPs huma kkummerċjalizzati taħt il-pretensjoni li huma kollha naturali. Madankollu, huwa komuni li ssib xi kimiċi sintetiċi bħala adulteranti bl-istess effetti misjuba f'dawn CWCs jew CWPs bħala frodi. L-ammont ta' HDQ irreġistrat f'dan ix-xogħol u dawk irreġistrati fil-letteratura indikaw li s-CWCs studjati għandhom ammont baxx ta' HDQ u ma kinux jaqblu mal-pretensjonijiet tat-tikketta [1]. Għalhekk, huwa mistenni li s-CWCs studjati fihom xi kimiċi sintetiċi bħala adulteranti. B'mod ġenerali, l-assaġġ analitiku preżenti jista 'jintuża għall-analiżi HDQ fi preparazzjonijiet kosmetiċi u farmaċewtiċi.

3.4. Valutazzjoni tal-Ħdura

Jintużaw metodi differenti għall-evalwazzjoni tal-ħdura tal-assaġġi farmaċewtiċi [38-43]. Madankollu, l-approċċ AGREE biss juża t-12-il prinċipju tal-GAC għall-evalwazzjoni tal-ħdura [42]. Għalhekk, il-profil tal-ħdura tal-metodu analitiku preżenti nkiseb bl-użu tal-Kalkolatur AGREE. Il-punteġġ AGREE imbassar li juża 12-il prinċipju differenti ta' GAC għall-assaġġ analitiku preżenti huwa ppreżentat fil-Figura 4. Il-punteġġ AGREE għal prinċipji differenti ta' GAC ġie rreġistrat kif ġej: Trattament tal-kampjun: 0.61 Pożizzjonament ta' apparat analitiku: 1.{{ 9}}Passi għall-preparazzjoni tal-kampjun: 1.00Grad ta' awtomazzjoni: 0.80Derivatizzazzjoni: 1.00Ammont ta' skart: 1.{{17} }Trattament tal-analiżi: 1.00Konsum tal-enerġija: 1.00Trattament tal-kampjun: 0.51Sors tar-reaġent: 1.00Tossiċità tas-solventi: 1.00 Sigurtà tal-operatur: 1.00

Il-punteġġ ġenerali AGREE għall-metodu analitiku preżenti ġie rreġistrat bħala 0.91, li jindika l-metodu analitiku aħdar eċċellenti għalHDQkwantifikazzjoni.

4. Konklużjoni

Il-metodu RP-HPTLC-densitometrija ġie żviluppat għall-analiżi HDQ f'erba 'CWCs differenti ta' HDQ. L-assaġġ RP-HPTLC preżenti ġie vvalidat għal parametri ta' validazzjoni differenti. Il-metodu analitiku preżenti kien sensittiv ħafna, rapidu, u ekoloġikament sostenibbli għalHDQanaliżi. Il-punteġġ AGREE għall-metodu analitiku preżenti issuġġerixxa assaġġ analitiku eċċellenti għall-kwantifikazzjoni HDQ. Il-preżenti RIl-metodu P-HPTLC kien adattat għall-analiżi HDQ f'erba' CWCs differenti. Dawn ir-riżultati indikaw li l-assaġġ analitiku preżenti jista 'jiġi applikat għall-analiżi HDQ fi preparazzjonijiet kożmetiċi u farmaċewtiċi differenti.