Ottimizzazzjoni tal-Proċess ta 'Estrazzjoni ta' Flavonoids f'Panax notoginseng Stem Leaf u Studju ta 'Attività Antiossidanti u l-Effetti Tagħha fuq Iċ-Ċelloli B16 melanoma tal-Mouse melanoma

Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Chun-Yan Dai 1,2,3,4,†, Peng-Fei Liu 1,2,3,4,†, Pei-Ran Liao 1,2,3,4, Yuan Qu 1,2,3,4 ID , Cheng-Xiao Wang 1,2,3,4, Ye Yang 1,2,3,4,* u Xiu-Ming Cui 1,2,3,4,*

Astratti:Il-Panax notoginseng(P. notoginseng) weraq taz-zokk huwa għani fihflavonoids. Madankollu, minħabba nuqqas ta 'riċerka dwar il-proċess ta' estrazzjoni flavonoid u l-iżvilupp funzjonali ta 'P. notoginseng weraq taz-zokk, dawn il-partijiet jintremew bħala skart agrikolu. Għalhekk, f'dan l-istudju, għandna l-intenzjoni li ittejjeb il-proċess ta 'estrazzjoni u tiżviluppa l-funzjonijiet li jbajdu l-ġilda tal-weraq taz-zokk P. notoginseng Estratti. Il-proċess ta 'estrazzjoni taz-zokk u l-weraq ta' P. notoginseng flavonoid (SLPF) huwa ottimizzat ibbażat fuq id-disinn Box-Behnken (BBD) u l-metodoloġija tal-wiċċ tar-rispons (RSM). L-aqwa il-kundizzjonijiet ta' estrazzjoni tal-SLPF huma kif ġej: il-ħin tal-estrazzjoni, il-konċentrazzjoni tal-etanol, il-kontenut tas-sodium dodecyl sulfate (SDS), u l-proporzjon tal-materjal likwidu (v/w, li huma 52 min, 48.7%, 1.9%, u 20:1, rispettivament. Taħt l-aħjar kundizzjonijiet ta 'estrazzjoni, il-MEDJA TOTALI SLPF il-kontenut huwa 2.10%. Il-antiossidantattività u kontra d-depożizzjoni ta' melanin ta' ċelluli B16 ta' ġurdien ta'P. notoginsengestratti tal-weraq taz-zokk huma studjati. Ir-riżultati jindikaw li l-valuri EC50 tat-tnaqqis attività, attivitajiet ta 'scavenging radikali ħieles ta' 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), is-superoxide kapaċità ta' tneħħija ta' anjoni, u ħielsa mill-aċidu 2,2-ażino-bis-3-etilbenzthiazoline-6-sulphonic acid (ABTS) il-kapaċità ta' tneħħija radikali hija 7.212, 2.893, 2.949, u 0.855 mg/mL, rispettivament. L-estratti tal-valuri IC50 tas-sintesi ta' tyrosinase u melanin huma 0.045 u 0.046 mg/mL, rispettivament. Għalhekk, il- teknoloġija ottimali tal-ipproċessar għall-SLPF miksuba f'dan l-istudju mhux biss iżżid l-utilizzazzjoni tagħha ir-rata iżda tnaqqas ukoll l-ispejjeż materjali. L-estratti mill-werqa taz-zokk P. notoginseng jistgħu jiġu żviluppati bħala ikel jew prodotti tas-sbuħija.

Kliem ewlieni: antiossidant; flavonoids; ċelluli B16 melanoma tal-ġrieden; Panax notoginseng; Surfactant

Cistanche huwa anti-ossidant.

1. Introduzzjoni

Panax notoginseng(P. notoginseng) (Burk.) F. H. Chen hija pjanta perenni li tappartjeni għall- Araliaceae. Għandu għeruq taħt l-art li huma mnixxfa għall-użu bħala mediċina u ġew inklużi fil-farmakopea Ċiniża. Il-werqa taz-zokk P. notoginseng għandha valur mediċinali simili bħall-għerq. Huwa irrappurtat fil-Pents'ao Kang Mu li l-werqa taz-zokk hija adattata għat-trattament ta' ksur, tbenġil, u dmija. Studji moderni kkonfermaw ukoll li l-werqa taz-zokk P. notoginseng għandha mediċina valur simili għal dak ta' l-għerq għas-sistema tad-demm, is-sistema kardjovaskulari, is-sistema nervuża, u s-sistema metabolika [1]. Prodotti komuni magħmula mill-werqa taz-zokk P. notoginseng jinkludu Qiye Shen'an Pian, Jiang Zhi Ling kapsuli, u Qiye Shen'a kapsuli.

Għalkemm il-werqa taz-zokk ta 'P. notoginseng ġiet iċċertifikata uffiċjalment bħala ikel minħabba l-għoli tagħha valuri mediċinali nutrittivi u għoljin (DBS 53/024-2017) [2], ftit li xejn attenzjoni ffukat fuq il-promozzjoni dawn il-partijiet tal-pjanti għall-ikel. Statistika preliminari wriet li l-produzzjoni annwali tal-weraq taz-zokk ta 'P. notoginseng huwa 1500 tunnellata u 5% biss ta' dan l-ammont huwa utilizzat [3]. Għalhekk, l-inkoraġġiment tal- l-iżvilupp tar-riżorsi tal-weraq taz-zokk ta 'P. notoginseng jista' jżid ħafna d-dħul ta 'P. notoginsengil-produtturi u jnaqqsu t-tniġġis ambjentali, u b'hekk iżidu l-benefiċċji soċjoekonomiċi.

L-ingredjenti attivi l-aktar effettivi estratti mill-weraq taz-zokk ta 'P. notoginseng huma l- saponini totali u glikosidi flavonoid, li jammontaw għal 4-6% u 0.54–2.49%, rispettivament [4]. Il-flavonoids huma importanti minħabba l-attivitajiet farmakoloġiċi definiti sew tagħhom, li jinkluduantiossidant, attivitajiet protettivi tal-fwied, u kontra t-tumur [5]. L-organiċi l-aktar użati komunement is-solventi għall-estrazzjoni tal-flavonojdi huma l-etanol u l-metanol [6]. Pereżempju, Uysal et al. [7] komponenti li fihom il-flavonoid estratti b'suċċess mill-Cotoneaster integerrimus bl-użu tal-metanol. Wang et al. [8] uża 70% etanol biex jiġi estrattflavonoidsmill-weraq ta' acer truncatum. L-estrazzjoni ir-rata kienet ogħla, u l-estratt kien aktar faċli biex jikkonċentra u jinxef. Huwa kkunsidrat li l-etanol l-estrazzjoni hija metodu ta' estrazzjoni aħjar. Fil-preżent, Zhang et al. biss [4,9] estratt SLPF minn metodu ta 'ilma alkali microwave u metodu ta' immersjoni sħuna. Madankollu, il-metodu ultrasoniku jista 'jagħmel l-estratt ikompli xokk, jikkontribwixxi għad-diffużjoni tas-sapun, iqassar il-ħin ta' estrazzjoni ħafna, u ittejjeb ir-rata ta' estrazzjoni tal-flavonoids totali u l-użu ta' materja prima, li hija relattivament ġdida il-metodu għall-estrazzjoni tal-flavonoid [6]. Għalhekk, l-estrazzjoni effiċjenti tal-SLPF u r-riċerka dwar il- l-użu tal-prodott għall-kożmetiċi u l-kura tas-saħħa huma ta' sinifikat kbir għal aktar żvilupp ta' din l-industrija.

Is-surfactants jintużaw ħafna bħala awżiljarju fl-estrazzjoni ta' komponenti attivi; iżidu l- effiċjenza ta 'estrazzjoni, qassar il-ħin ta' estrazzjoni, u żid is-solubilità tal-insolubbli fl-ilma attiv li ma jinħallx ingredjenti fl-ilma. Barra minn hekk, l-applikazzjoni ta' surfactants tnaqqas l-użu ta' solventi organiċi u l-ispiża tagħhom, ittejjeb il-komponenti fil-mira matul il-proċess ta 'estrazzjoni, u ttejjeb il-purità ta' l-ingredjenti attivi. Ħafna mis-surfactants użati għall-estrazzjoni mhumiex tossiċi. Dodecyl tas-sodju sulfate (SDS), Triton X-100, Tween-20, Tween-80, u Span-20 huma surfactants użati komunement li jistgħu iżżid b'mod sinifikanti r-rata ta' estrazzjoni ta'flavonoids[10–13]. Il-metodoloġija tal-wiċċ ta 'rispons (RSM) intużat ħafna għall-ottimizzazzjoni tal-proċess, u l- Kaxxa-Disinn Behnken (BBD) huwa mudell statistiku wieħed tal-metodi tad-disinn tal-wiċċ tar-rispons. Il-BBD jirrappreżenta disinn kwadratiku indipendenti li ma fihx elementerjali inkorporat jew frazzjonali disinn fatturili. Meta mqabbel ma 'metodi oħra ta' disinn, il-BBD huwa faċli biex tiddisinja u tanalizza statistikament; għalhekk, jintuża ħafna fl-ottimizzazzjoni tal-proċess ta 'estrazzjoni tal-flavonoids [14]. Pereżempju, il-varjabbli tal-estrazzjoni assistiti mill-majkrowejv ġew ottimizzati bl-użu tal-RSM għall-aħjar rkupri tal-kontenut totali ta' flavonoid [15]. Barra minn hekk, xi riċerkaturi kisbu teknoloġija aħjar kundizzjoni biex jiġu estratti l-flavones totali minn Flos Populi [16] u ż-żrieragħ tas-sativum Coriandrum [17] bl-użu ta' BBD tal-RSM.

Preċedentement, il-metodi ta'estrazzjoni tal-flavonoid ġew irrappurtati [18], iżda s'issa, l-estrazzjoni il-proċess ta' SLPF għadu ma ġiex iffurmat. F'dan l-istudju, il-proċess ta 'estrazzjoni assistit bl-ultrasound ta' SLPF ġie ottimizzat bl-użu tal-BBD biex jiddetermina l-kontenut tat-totalflavonoidsbħala indiċi għal l-ewwel darba. Il-varjabbli indipendenti, jiġifieri, tip ta' surfactant, dożaġġ, proporzjon ta' materjal likwidu (v/w, il-ħin tal-estrazzjoni, u konċentrazzjoni tal-etanol, huma stabbiliti bħala fatturi uniċi. Għalhekk, l-objettivi tal- ix-xogħol preżenti kien (i) biex jottimizza l-proċess ta 'estrazzjoni assistit bl-ultrasound ta' flavonoids totali; (ii) għal jevalwaw il-antiossidantl-attività tal-estratti; (iii) li jevalwa l-effett tal-estratti fuq l-attività taċ-ċelloli B16; (iv) li tesplora l-fattibbiltà tal-applikazzjoni tal-SLPF fil-kożmetiċi, il-prodotti tal-kura tas-saħħa, u l-industrija farmaċewtika; (v) li jipprovdu referenza għall-iżvilupp ta'P. notoginsengZokk prodotti ta' estratt tal-weraq u jnaqqsu r-rimi ta' skart agrikolu fl-ambjent.

cistanche antiossidanti

2. Riżultati u Diskussjoni

2.1. L-Effett tat-Tipi ta' Surfactant fuq l-Effiċjenza ta' l-Estrazzjoni ta' SLPF

Minbarra l-grupp ta' kontroll (CK) (ilma minflok surfactants), tipi differenti ta' surfactants (1.5%) intużaw fi gruppi oħra billi żammew proporzjon ta' materjal likwidu (v/w ta' 15:1 u bl-użu ta' 40% konċentrazzjoni ta' l-etanol. Il-kontenut totali ta' flavonoid ġie ddeterminat wara estrazzjoni ultrasonika fi 80 ◦C għal 40 min; ir-riżultati huma murija fil-Figura 1. Wieħed jista' jara li s-surfactants tejbu l-estrazzjoni l-effiċjenza tal-SLPF, u l-ogħla kontenut ġie estratt mill-SDS. Il-kontenut SLPF bl-użu ta 'SDS żdied bi 12.8% meta mqabbel mal-CK. Għalhekk, SDS intuża fl-esperimenti sussegwenti.

2.2. Esperimenti b'Fattur Uniku

Ir-riżultat wera li l-effiċjenza tal-estrazzjoni ta' SLPF żdiedet biż-żieda fil- il-ħin tal-estrazzjoni; fi proporzjon ta' materjal likwidu (v/w) ta' 15:1, il-konċentrazzjoni tal-etanol kienet ta' 40% u l-SDS il-kontenut kien ta' 1.5% (Figura 2A). Ir-rendiment tal-kontenut ta' SLPF naqas meta ż-żmien tal-estrazzjoni kien itwal minn 40 min. Il-kontenut ta ' SLPF żdied meta l- konċentrazzjoni ta ' l- etanol żdiedet minn 30% għal 50% iżda naqset gradwalment meta l- konċentrazzjoni ta ' l- etanol kienet ogħla minn 50%. L-ogħla ir-rendiment tal-kontenut slPF kien ta' 23.1% għal ħin ta' estrazzjoni ta' 40 minuta, proporzjon ta' materjal likwidu (v/w) ta' 15:1, u kontenut SDS ta' 1.5% (Figura 2B). Meta l-ħin tal-estrazzjoni kien 40 min, il-materjal likwidu il-proporzjon (v/w) kien 15:1, u l-konċentrazzjoni tal-etanol kienet ta' 40%, il-kontenut ta' SLPF kompla jiżdied bil-kontenut SDS minn 0.5% sa 2%. Meta l-kontenut SDS żdied minn 0.5% għal 2%, il- Il- kontenut ta ' SLPF żdied b' 10% (Figura 2C). Il-kontenut totali ta 'flavonoid kien l-ogħla meta l- il-proporzjon tal-materjal likwidu (v/w) kien 20:1, il-ħin tal-estrazzjoni kien 40 min, il-konċentrazzjoni tal-etanol kienet 40%, u l-kontenut SDS kien 1.5% (Figura 2D). Il-kontenut ta' SLPF kien 1.5 darbiet ogħla minn dak meta ntuża l-proporzjon tal-materjal likwidu (v/w) ta' 5:1 u tnaqqas meta l-proporzjon tal-materjal likwidu kien akbar mill-20:1. Għalhekk, għall-esperimenti sussegwenti tal-BBD, il-ħin tal-estrazzjoni li jvarja minn 40 sa 60 min, konċentrazzjonijiet ta 'ethanol li jvarjaw minn 40% sa 60%, kontenut SDS li jvarja minn 1.5% sa 2.5%, u l- intuża l-proporzjon tal-materjal likwidu (v/w).

2.3. Fitting u Ottimizzazzjoni Mudell ta 'SLPF

2.3.1. Fitting tal-Mudell

Il-matriċi ddisinjata, ir-riżultati tal-analiżi tal-varjanza, u l-adegwatezza u l-idoneità tal- il-mudelli huma murija fit-Tabella 1. Twettqet analiżi ta' rigressjoni multipla bl-użu tad-Disinn-Espert Softwer. Ir-relazzjoni bejn il-varjabbli tar-rispons (il-kontenut ta' SLPF) u l- il-varjabbli kienu espressi bl-ekwazzjoni polinomjali tat-tieni ordni li ġejja:

Y = −30.678 + 0.487A + 0.304B + 4.596C + 0.853D − 0.001AB − 0.020AC − 0.005AD + 0.010BC – 0.001BD − 0.076CD − 0.003A2 − 0.002B2 - 0.683C2 − 0.010D2 (1)

fejn Y huwa l-kontenut SLPF; A, B, C, u D jirrappreżentaw il-ħin ta' estrazzjoni, il-konċentrazzjoni tal-etanol, il-kontenut tal-SDS, u l-proporzjon tal-materjal likwidu, rispettivament.

2.3.2. Analiżi tas-Superfiċje ta' Reazzjoni

L-analiżi residwa tal-mudell ta 'ottimizzazzjoni tal-wiċċ tar-rispons saret bl-użu ta' grafika għodda ta 'analiżi. Huwa importanti li tiġi ttestjata l-uniformità tal-varjanza tal-iżball tal-mudell. Jekk ir-riżultati juru qagħda tajba mal-valuri mbassra, il-kurva mwaħħla tal-valuri sperimentali u previsti huwa lineari. Barra minn hekk, huwa importanti li jiġi evalwat jekk id-distribuzzjoni tar-residwi hijiex normali meta id-determinazzjoni tal-preċiżjoni tal-mudell. Meta r-residwi jkollhom distribuzzjoni normali, il-kurva mwaħħla tal- ir-residwi huma lineari [19]. Barra minn hekk, jekk il-valuri ta' tbassir tar-residwi jkollhom distribuzzjoni każwali, l-omoġeneità tal-varjanza residwa hija konsistenti mar-rekwiżiti ta' ottimizzazzjoni [20]. F'dan l-istudju, il-mudell kwadratiku kellu l-aħjar tajjeb għad-dejta (R 2 il-valur ta' 0.9818) (Figura 3A) [21]. Barra minn hekk, il-plott tal-probabbiltà normali tar-residwi (il-Figura 3B) u l-qatgħa tar-residwi kontra r-rispons previst (il-Figura 3C) intużaw biex tiġi vvalidata l-adegwatezza tal-mudell. Id-dejta wera li l-punti fil-plott normali ffurmaw linja dritta (Figura 3B). Dan indika li l- id-dejta ma wriet l-ebda devjazzjoni min-normalità. Barra minn hekk, il-biċċa art tar-residwi kontra l-previst ir-rispons wera distribuzzjoni każwali, li indikat li l-mudell kien adegwat u ma jiksru s-suppożizzjoni ta' indipendenza jew varjanza kostanti (Il-Figura 3C) [22].

Ir-riżultati wrew li proporzjon għoli tal-varjanza totali kien spjegat mill-quadratic mudell ta' rigressjoni (R 2 ta' 0.982), li tindika li l-mudell huwa adattat għall-ottimizzazzjoni ta' l-estrazzjoni parametri [23]. Ir-R 2 Adj ta '0.964 kien relattivament qrib ir-R 2 Pred ta ' 0.902, li jikkorrobora li l-mudell huwa sinifikanti [14]. Il-valur tal-proporzjon tas-sinjal għall-ħoss (RSN) kien 24.553, li kien ferm ogħla minn 4. Ir-riżultat indika li dan il-mudell jista 'jintuża għall-ispazju tad-disinn. Barra minn hekk, il-koeffiċjent ta' il-varjazzjoni (CV) kienet baxxa (2.657 %), li tindika li l-mudell iffittja d-dejta sperimentali b'mod sodisfaċenti u jista 'jintuża biex ibassar ir-riżultat fil-firxa tad-dejta. Il-koeffiċjenti ta' rigressjoni huma elenkati fit-Tabella 2. Fil-mudell SLPF, A, B, C, AB, AC, AD, BC, CD, A2 B2 , C2 , u D2 kienu sinifikanti differenti (p< 0.05),="" but="" d="" and="" bd="" were="" not="" significantly="" different="" (p="">0.05).

Graff tal-wiċċ 3D (Figura 4A1–D1) tal-kontenut totali tal-flavonoid u l-kurva tal-kontorn (Il-Figura 4A2–D2) taż-żewġ varjabbli ttestjati ġew iġġenerati mill-mudell finali biex jiddeskrivu l- interazzjonijiet bejn il-varjabbli indipendenti u l-parametri tal-proċess ottimali. Kull graff tlesta bil-kundizzjoni li l-fatturi l-oħra nżammu fil-livelli żero rispettivi tagħhom kull wieħed ħin [24]. Jekk il-plott tal-kontorn għandu forma ċirkolari, l-interazzjonijiet bejn il-fatturi korrispondenti huma negliġibbli. Il-forma ellittika tal-plott tal-kontorn tindika li l-interazzjonijiet bejn il- il-varjabbli jikkontribwixxu għall-kontenut tat-totalflavonoidsf'livell sinifikanti [25]. Abbażi tad-dejta murija fit-Tabella 2 u l-Figura 4, fil-mudell SLPF, il-klassifikazzjoni tal-interazzjoni l-effett bejn il-varjabbli indipendenti minn għoli sa baxx kien CD–AD–AB–AC. L-effetti ta ' C (il-kontenut SDS) u D (il-proporzjon tal-materjal likwidu (v/w)) fuq il-kontenut slPF intwerew bħala 3D plott u plott tal-kontorn assoċjat. Il-forma ellittika tal-plott tal-kontorn uriet (p< 0.0001)="" correlation="" between="" c="" and="" d,="" which="" contributed="" to="" the="" different="" slpf="" contents="" (table="" 2;="" figure="" 4d1,="" d2).="" the="" slpf="" contents="" increased="" (2.13%)="" when="" the="" sds="" content="" was="" increased="" from="" 1.5%="" to="" 2.0%="" and="" the="" liquid="" material="" ratio="" (v/w)="" was="" increased="" from="" 15:1="" to="" 20:1="" (figure="" 4d1,="" d2).="" it="" is="" important="" that="" the="" extraction="" process="" is="" economical="" and="" feasible="" and="" the="" modeling="" approach="" facilitates="" the="" reduction="" in="" the="" cost="" and="" time="" during="" future="" mass="">

estratt ta 'cistanche antiossidant

2.3.3. Validazzjoni tal-Mudell

Biex jiġi vvalidat il-mudell propost, intgħażlu diversi kundizzjonijiet ta' reazzjoni fil-medda ta' il-varjabbli (Tabella 3). Il-parametri tal-proċess ottimali biex jinkiseb kontenut ta 'flavonoid totali għoli miksuba bl-Ekwazzjoni (1) kienu ħin ta 'estrazzjoni ta' 51.84 min, konċentrazzjoni ta 'etanol ta' 48.68%, SDS kontenut ta' 1.88%, u proporzjon ta' materjal likwidu (v/w) ta' 19.81:1; dan irriżulta f'kontenut totali ta' flavonoid ta' 2.13%. L-eżattezza tal-mudell ġiet ikkonfermata fuq il-bażi ta' tliet assaġġi taħt l-aħjar kondizzjonijiet. Il-kontenut medju totali ta 'flavonoid kien 2.10%, li ma wera l-ebda differenza sinifikanti mill-valur previst. Dan indika li l-valur sperimentali kien qrib ħafna tal-valur previst, li wera li r-riżultati kienu raġonevoli u affidabbli; il-mudell tal-Ekwazzjoni (1) ġie kkunsidrat li tkun sodisfaċenti u preċiża biex tbassar il-kontenut SLPF. Dan l-approċċ mhux biss itejjeb l-effiċjenza ta' l-estrazzjoni iżda żżid ukoll ir-rata ta' utilizzazzjoni tal-P.notoginsengweraq taz-zokk.

2.4. Attivitajiet antiossidanti tal-Estratti tal-Weraq taz-Zokk P. notoginseng

Il-kapaċità mnaqqsa tal-estratti tal-weraq taz-zokk P. notoginseng hija relatata b'mod pożittiv mal-attività antiossidanti; għalhekk, jista' jintuża bħala indiċi ta' evalwazzjoni importanti ta' attività antiossidanti [26]. Il-kapaċitajiet ta' tnaqqis tal-estratti u tal-aċidu askorbiku żdiedu bil-konċentrazzjoni u wera korrelazzjoni pożittiva sinifikanti mal-konċentrazzjoni (Il-Figura 5A). Il-KE50 tal- estratti u aċidu askorbiku kienu 7.212 u 0.0287 mg/mL, rispettivament. Dawn ir-riżultati ssuġġerew liP. notoginsengl-estratti huma donatur effettiv tal-elettroni li kapaċi jirreaġixxi ma ' radikali ħielsa biex jikkonverti fi prodotti aktar stabbli. Ir-radikali DPPH hija radikali ħielsa relattivament stabbli u tista 'taċċetta elettroni jew atomi tal-idroġenu biex jiffurmaw molekuli stabbli. Radikali idrossili għandhom l-ogħla kapaċità ta 'ossidazzjoni u jistgħu jagħmlu ħsara molekuli bijoloġiċi. Għalhekk, ir-radikali DPPH u hydroxyl intużaw ħafna bħala indiċi ta' evalwazzjoni tal-attività antiossidanti [27]. L-attivitajiet ta 'scavenging radikali DPPH żdiedu mal- konċentrazzjoni ta' l-estratti u l-aċidu askorbiku, u kollha wrew korrelazzjoni pożittiva sinifikanti mal-konċentrazzjoni. Il-valuri EC50 ta' l-estratti u l-aċidu askorbiku kienu 2.893 u 0.0938 mg/mL, rispettivament (Figura 5B). L-attivitajiet ta 'scavenging radikali hydroxyl kellhom xejra simili bħad-DPPH radikali għat-trattamenti ta' l-estratti jew ta' l-aċidu askorbiku, u l-valuri EC50 ta' l-estratti u l-aċidu askorbiku kien ta' 1.514 u 0.0902 mg/mL, rispettivament (Figura 5C). Dawn ir-riżultati indikaw li l- P. estratti notoginseng għandhom kapaċità għolja biex ineħħu DPPH jew radikali hydroxyl.

Anjoni tas-superossidju tista' twassal għall-okkorrenza ta' perossidi fil-membrana tal-plażma [28]. Għalhekk il-ħila li tneħħi l-anjoni tas-superossida hija estremament importanti għal antiossidant. F'dan l-istudju, ir-rata ta' scavenging ta' anjoni superossida żdiedet bil-konċentrazzjoni ta' l-estratti u l-askorbiku l-aċidu, u r-rata ta' tneħħija kienet ukoll korrelatata mal-konċentrazzjoni (Il-Figura 5D). Il-valuri EC50 ta' l-estratti u l-aċidu askorbiku kienu 2.949 u 0.140 mg/mL, rispettivament, u l-ogħla rati ta' tneħħija kienu 94.90% u 93.73%, rispettivament. Barra minn hekk, il-antiossidantl-attività tal-estratti hija ġeneralment riflessa fl-abbiltà li jitneħħa ABTS+ radikali ħielsa [29]. L-effett ta' kenn tal-estratti u l-aċidu askorbiku fuq l-ABTS+ Ħielsa ir-radikali żdiedu mal-konċentrazzjoni (Figura 5E), u kien hemm korrelazzjoni pożittiva bejn ir-rata ta' kenn u l-konċentrazzjoni ta' l-estratti jew l-aċidu askorbiku. Il-valuri EC50 tal- P. estratti ta 'notoginseng u l-aċidu askorbiku kienu 0.855 u 0.205 mg / mL, rispettivament.

Ħafna mill-istudji sabu liflavonoidsjippossjedu t-tajjebantiossidantProprjetajiet. Ir-riżultati ta' Farombi et al. [30] urew li estratt taż-żrieragħ garcinia kola wera effett ta 'scavenging ta' 57% fuq superossida f'konċentrazzjoni ta' 1 mg/mL, effett ta' scavenging ta' 85% fuq il-perossidu tal-idroġenu f'effett ta' konċentrazzjoni ta' 1.5 mg/mL, u effett ta' 89% ta' kontra d-diċel fuq DPPH f'konċentrazzjoni ta' 2 mg/mL. Srisawat et al. [31] urew l-attivitajiet ta' scavenging radikali tal-anjoni tas-superoxide tal-estratti tar-ross Valuri EC50 fil-medda ta' 0.6–5 mg/mL, li kienu simili għar-riżultati ta' dan l-istudju. B'mod ġenerali, dan ir-riċerka indikat ukoll li l-P. notoginsengl-estratti tal-weraq taz-zokk għandhom attività qawwija kontra l-ossidant.

2.5. L-Effett tal-Estratti fuq l-Attività taċ-Ċelloli B16

Is-sigurtà tal-P. notoginsengl-estratti tal-weraq taz-zokk huma estremament importanti fl-investigazzjoni ta' vijabbiltà taċ- ċelluli, attività ta ' tyrosinase ċellulari, u livelli ta ' melanin fiċ- ċelloli melanoma B16. Ir-riżultati wrew li l-vijabbiltà taċ-ċellola kienet ta' madwar 85 % f'konċentrazzjoni ta' 0.032 mg/mL u li l-valur IC50 tal- il-vijabbiltà taċ-ċelloli kienet ta' 0.405 mg/mL (Figura 6A). L-estratti tal-weraq taz-zokk P. notoginseng ma kinux speċjalment ċitotossiku għaċ-ċelloli B16. Għalhekk, konċentrazzjonijiet ta ' l-estratt inqas minn 0.032 mg/mL intużaw biex iwettqu l-esperimenti sussegwenti. Tyrosinase huwa enzima melanoġenika regolatorja li tillimita r- rata li hija involuta fil- melanin mogħdija ta' sinteżi [32]. Ir-riżultati indikaw li l-estratti naqqsu b'mod sinifikanti t-tyrosinase l-attività u l-produzzjoni tal-melanin fiċ-ċelloli tal-ġrieden b'mod dipendenti fuq id-doża (il-Figura 6B). Hemm kienu korrelazzjonijiet pożittivi bejn il-kontenut estratt u l-proporzjon ta' inibizzjoni tat-tyrosinase jew is-sinteżi tal-melanin (R 2 = 0.9162 u R 2 = 0.9118). Il-valuri IC50 tal-proporzjon ta' inibizzjoni tal- is-sintesi ta' tyrosinase u melanin kienu ta' 0.045 mg/mL u 0.046 mg/mL, rispettivament (Figura 6B). Melanin għandu rwol deċiżiv fil-kulur tal-ġilda. Il-formazzjoni tal-melanin hija regolata mit-tyrosinase, li hija enzima ewlenija li tillimita r-rata li hija rregolata minn radikali ħielsa. Studji dettaljati wrew Liflavonoidshuma inibituri pjuttost qawwija, u jistgħu jinibixxu direttament it- tyrosinase u jaġixxu fuq il- parti distali tal-mogħdija ossidattiva tal-melanogenesis [33]. Ir-riżultati tagħna indikaw li l-werqa taz-zokk P. notoginseng estratti esibiti prestazzjoni tajba fit-tnaqqis tal-attività tat-tyrosinase u l-produzzjoni tal-melanin. Huwa evidenti li P. notoginseng estratti tal-weraq taz-zokk jista 'jkollhom prospetti kbar bħala ikel tas-saħħa u kosmetiċi prodott minħabba l-prestazzjoni eċċellenti tiegħu f'depożizzjoni kontra l-pigment.

3. Materjali u Metodi

3.1. Materjali tal-Pjanti

Weraq taz-zokk frisk ta'P. notoginsenginxtara miċ-ċentru tal-kummerċ internazzjonali ta 'P. notoginseng, Wenshang, provinċja ta 'Yunnan, f'Ottubru 2017, u mbagħad maħsul f'ilma distillat, u ilma tal-wiċċ tneħħa. Il-werqa taz-zokk friska ta 'P. notoginseng kienet imnixxfa għal piż kostanti f'60 ◦C, u kienet imbagħad trab għal aktar użu.

benefiċċju tal-estratt taċ-cistanche:depożizzjoni kontra l-pigment

3.2. Kimiċi u Reaġenti

Na2HPO4, NaH2PO4, TCA (aċidu trikloroaċetiku), FeCl3, FeSO4, aċidu askorbiku, pirogallol, H2O2 inkisbu minn Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Shanghai, iċ-Ċina) DPPH (2,2-diphenyl1-picrylhydrazyl), ABTS, α-MSH, L-DOPA u MTT inxtraw minn Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA), PBS (Industriji Bijoloġiċi, Beit-Haemek, Iżrael), L-Ajkla Modifed ta 'Dulbecco Il-kultura medja (DMEM) u s-serum tal-bovini tal-fetu (FBS; Gibco, NY, l-Istati Uniti, u t-trypsin inkisbu minn Industriji Bijoloġiċi, Iżrael. DMSO u Triton X-100 inkisbu minn MP Biomedicals u Amresco fl-Istati Uniti, rispettivament. Ir-reaġenti l-oħra kollha kienu ta' grad analitiku. L-ilma ultrapure kien miksub mis-sistema Millipore (Bedford, MA, l-Istati Uniti).

3.3. Ottimizzazzjoni tal-Għażla tal-Kundizzjoni tal-Estrazzjoni

Estrazzjoni assistita bl-ultrasound tat-totalflavonoidsmill-P. notoginsengil-weraq taz-zokk kien ottimizzat mill-RSM. Il-kontenut ta 'SLPF ġie stabbilit bħala l-indiċi biex jiġġudika l-kundizzjoni ta' estrazzjoni. Skond għat-teknoloġija tal-estrazzjoni, is-surfactants, il-ħin tal-estrazzjoni, il-konċentrazzjoni tal-etanol, l-SDS il-kontenut u l-proporzjon tal-materjal likwidu huma fatturi ewlenin. L-ogħla valuri fl-esperimenti kienu l- valuri ċentrali ottimali għall-kontenut SLPF. Imbagħad, intużaw biex jistudjaw l-aħjar proċess ta 'estrazzjoni teknoloġija ta ' SLPF bil- metodu ta ' RSM. It- trattament b' fattur wieħed kien kif ġej: Il-werqa taz-zokk P. notoginseng kienet (1) estratta bl-użu ta 'surfactants differenti (Tabella 4), ultrasound estrazzjoni għal 40 minuta billi jinżamm il-proporzjon tal-materjal likwidu (15:1, v/w), u 40% etanol konċentrazzjoni; (2) estratt mill-ultrasound għal 10, 20, 30, 40, 50 u 60 min meta l-proporzjon tal-materjal likwidu kien 15:1 (v/w), il-konċentrazzjoni tal-etanol kienet 40%, u l-kontenut tal-SDS kien 1.5%; (3) estratt bi 30, 40, 50, 60, 70, 80 u 90% etanol għal 40 min meta l-proporzjon tal-materjal likwidu kien f'15:1 (v/w), u l-kontenut tal-SDS kien 1.5%; (4) estratt b'0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 u 3% SDS għal 40 min meta l-proporzjon tal-materjal likwidu kien 15:1, u l-kontenut tal-etanol kien 40%; (5) estratti bi proporzjonijiet differenti ta' materjal likwidu (5:1, 10:1, 15:1, 20:1, 25:1 u 30:1; v/w) għal 40 minuta billi tinżamm il- il- konċentrazzjoni ta ' l- etanol kienet ta ' 40%, u l- kontenut ta ' SDS kien ta ' 1. Imbagħad, il-kontenut ta 'SLPF fi l-estratti kienu determinati.

3.4. Disinn Sperimentali tal-RSM

Ibbażat fuq l-analiżi tar-riżultati ta 'esperimenti b'fattur wieħed, il-kundizzjoni ta' estrazzjoni SLPF minnP. notoginsengil-werqa taz-zokk ġiet żviluppata u ottimizzata bl-użu ta 'tliet livelli, BBD b'erba' fatturi, flimkien bl-RSM (Software Disinn-Espert, verżjoni bi prova 8.1.0; Stat-Ease Inc., Minneapolis, MN, l-Istati Uniti). Kull varjabbli indipendenti ġie kkodifikat fi tliet livelli bejn -1 u +1, fejn il-ħin (A); il-konċentrazzjoni ta' l-etanol (B); il-kontenut SDS (C); u l-proporzjon tal-materjal likwidu (D) inbidel fi il-firxiet murija fit-Tabella 5. Il-kontenut SLPF kien il-varjabbli tar-rispons. Għall-kalkoli statistiċi, ekwazzjoni kwadratika tat-tieni ordni ntużat kif ġej: [34].

Y = β0 + 4 ∑ i=1 βiXi + 4 ∑ i=1 βiiX 2 i + 3 ∑ i=1 . 4 ∑ j=i+1 βijXiXj + 4 ∑ i=1 βiiiX 3 i (2)

fejn Y huwa r-rispons previst, β0 huwa koeffiċjent ta' interċettazzjoni, βi huwa t-termini lineari, βii huwa l- termini, βij huma t-termini ta 'interazzjoni, u Xi u Xj jirrappreżentaw il-livelli kkodifikati ta' varjabbli indipendenti

3.5. Assaġġ Totali tal-Flavonoid

Il-kontenut tat-totalflavonoidskien determinat abbażi ta' metodu stabbilit b'xi wħud modifikazzjonijiet, u rutin intgħażel bħala l-istandard ta' referenza [35]. Ir-rutin imnixxef kien miżun 10 mg b'mod preċiż, maħlul b'20 mL etanol, u trasferit f'kunjett volumetriku ta' 100 mL iż-żieda tal-ilma mal-iskala. Serje ta 'soluzzjonijiet standard ta' rutin fil-medda ta '0.0-6.0 mL kienu preċiżament trasferiti għal garafini volumetriċi ta' 25 mL. Imbagħad, ġie miżjud 1 mL ta '5% NaNO2; wara 6 min, 1.0 mL ta ' 10% Al(NO3)3 ġie miżjud u s-soluzzjoni nżammet għal 6 min f'temperatura tal-kamra; 10 mL ta '4% NaOH ġie miżjud mal-fliexken volumetriċi. Din is-soluzzjoni mbagħad ġiet dilwita b'soluzzjoni ta' ilma għal 25 mL u miżmum għal 15 min f'temperatura tal-kamra. L-assorbenza kontra kampjun vojt mingħajr ir-rutin (A) tkejlet fil-wavelength ta' 510 nm bl-użu ta' spettrofotometru UV-2600 (Shanghai Yuanxi Instruments Co. Ltd., Shanghai, iċ-Ċina) biex tikseb ir-rispons lineari (A = 4.6971B - 0.0072, R 2 = 0.9992). B kien il-kontenut totali ta' flavonoids (mg) fil-wavelength ta' 510 nm. Alikwot ta' 0.1 mL tal-kampjuni ġie dilwit bil-metanol għal 50 mL u mbagħad ġie ddeterminat il-konċentrazzjoni ta' flavonoids totali fl-ispettrofotometru. Il-kontenut totali ta' flavonoid ġie kkalkulat skont il- l-ekwazzjoni li ġejja: y = m × V M × 100% (3)

3.6. Analiżi Statistika

Id-dejta kollha tal-esperimenti ġiet ipproċessata bis-softwer Microsoft Excel 2010 u l-kurvi kienu mgħammra bl-Oriġini 8.0. L- analiżi statistika saret bl- użu ta ' SPSS 19.

4. Konklużjonijiet

Estrazzjoni assistita bl-ultrasound tejbet l-effiċjenza ta 'estrazzjoni b'kolloxflavonoids. L-aħjar kundizzjonijiet ta 'estrazzjoni ta' SLPF kienu: ħin ta 'estrazzjoni assistit bl-ultrasound ta' 52 minuta, konċentrazzjoni ta' etanol ta' 48.7%, kontenut ta' SDS ta' surfactant ta' 1.9%, u proporzjon ta' materjal likwidu (v/w tat-20:1; dan irriżulta f'kontenut ta 'SLPF ta' 2.10%. Kien irrakkomandat li l-produtturi aġġustaw dawn dejta għall-estrazzjoni ta' SLPF ibbażata fuq il-kundizzjonijiet speċifiċi biex jinkisbu fuq skala kbira u effiċjenti Produzzjoni. Il-P. notoginsengestratti tal-weraq taz-zokk esebiti b'saħħithomantiossidantattività u indotti tnaqqis fis- sintesi ta ' melanin billi tinibixxi l- attività ta ' tyrosinase. Ir-riżultati tagħna jippromwovu l-użu ta ' P. notoginseng estratti tal-weraq taz-zokk għall-preparazzjonijiet kosmetiċi u l-ikel huwa aġent li jbajdu l-ġilda.

anti-ossidant: cistanche etract