L-Estratt ta' Herba Cistanche Isaħħaħ il-Ġenerazzjoni Mitokondrijali ta' ATP fil-Qlub tal-Firien U Ċelloli H9c2

Kuntatt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Hoi Yan Leung & Kam Ming Ko

Biex tikkwota dan l-artikolu: Hoi Yan Leung & Kam Ming Ko (2008) Herba Cistanche Extract Enhances Mitochondrial ATP Generation in Rat Hearts and H9c2 Cells, Pharmaceutical Biology, 46:6, 418-424, DOI: 10.1080/1388020088020

Astratt

Biex tinvestiga l-bażi farmakoloġika tal-azzjoni "Yang-invigorating" ta 'Herbal Cistanche [il-pjanta sħiħa mnixxfa ta' Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae)], fil-mediċina Ċiniża, l-effetti tal-estratt tal-metanol ta 'Herba Cistanche fuq il-kapaċità ta' ġenerazzjoni ta 'ATP mitokondrijali kienu eżaminati bl-użu ta' mudell tal-qalb tal-firien ex vivo u assaġġ taċ-ċelluli H9c2 in situ. It-trattament bl-estratt ta 'Herba Cistanche żied il-kapaċità tal-ġenerazzjoni tal-ATP mitokondrijali mijokardijaku b'mod dipendenti mid-doża fil-firien, kif evalwat permezz ta' kejl in vitro. L-istimulazzjoni tal-kapaċità tal-ġenerazzjoni tal-ATP kienet assoċjata ma 'titjib parallel fit-trasport tal-elettroni mitokondrijali appoġġjat minn pyruvate iżda mhux succinate. Il-kura b'Herba Cistanche żiedet ukoll l-attivitajiet tal-kumpless mitokondrijali mijokardijaku I u l-kumpless III, bil-firxa ta 'stimulazzjoni fuq l-attività tal-kumpless I tkun akbar. It-trattament b'Herba Cistanche ipproduċa żieda dipendenti fuq id-doża u l-ħin fil-kapaċità tal-ġenerazzjoni tal-ATP mitokondrijali fiċ-ċelloli H9c2. Ir-riżultati jindikaw li t-trattament ta 'Herba Cistanche jista' jżid il-ġenerazzjoni ta 'ATP mitokondrijali fil-qlub tal-firien ex vivo u ċelloli H9c2 in situ, possibbilment permezz tat-titjib tal-fosforilazzjoni ossidattiva.

Kliem ewlieni:ATP, Cistanche deserticola, ċelluli H9c2, qalb, mitokondrija.

Cistanche deserticola YC Ma

Introduzzjoni

"Invigoration Yang", li tinkorpora t-titjib ġeneralizzat tal-funzjoni tal-ġisem fil-mediċina Ċiniża, tinvolvi l-użu tal-enerġija fit-tmexxija ta 'diversi proċessi bijokimiċi. F'dan ir-rigward, l-ATP, li hija l-munita universali ta 'l-enerġija biex talimenta l-funzjoni ċellulari, hija prinċipalment iġġenerata permezz ta' fosforilazzjoni ossidattiva fil-mitokondrija. Aħna postula li l-ħxejjex aromatiċi "Jang invigorating" għandhom il-kapaċità li jżidu l-kapaċità tal-ġenerazzjoni tal-ATP mitokondrijali (Ko et al., 2004). Dan huwa sostnut mis-sejba reċenti tagħna li l-ħxejjex aromatiċi Ċiniżi ta 'tonifikazzjoni "Yang-invigorating" iżda mhux "Yin-nutriment" jistgħu jtejbu l-kapaċità tal-ġenerazzjoni tal-ATP mijokardijaku fil-qlub tal-ġrieden ex vivo (Ko et al., 2006). Herba Cistanche, il-pjanta parassitika sħiħa mnixxfa (eskluża l-fjura) ta 'Cistanche deserticola YC Ma (Orobanchaceae), hija kklassifikata bħala ħaxixa tonifikanti 'Yang-invigorating' fil-mediċina tradizzjonali Ċiniża (Chen, 1998), u tidher bħala l-aktar popolari ingredjent f'numru ta' formulazzjonijiet ta' privattivi Ċiniżi użati għall-invigoration Yang'. Fiċ-Ċina u l-Ġappun, Herba Cistanche tintuża ħafna għat-trattament ta 'għadd ta' sintomi ta 'defiċjenza Yang. Studji farmakoloġiċi indikaw li Herba Cistanche jista' jneħħi r-radikali ħielsa (Xiong et al., 1996), jipproduċi effetti sedattivi (Lu, 1998), antiaging (Lee et al., 1990), effetti antinoċiċettivi u anti-infjammatorji (Lin et al., 2002). ), u jtejbu l-funzjoni immuni (Wu et al., 2005). L-ingredjent attiv ewlieni ta 'Herba Cistanche huwa phenylethanoid glycosides (Ouyang et al., 2003), li nstabu li għandhom proprjetajiet antibatteriċi, kontra l-istress, u antiossidattivi (Xiong et al., 1998), kif ukoll effetti anti-apoptotiċi fuq kultivati. newroni (Tian & Pu, 2005). Fl-istudju attwali, sabiex tiġi investigata l-bażi farmakoloġika ta 'l-azzjoni Yang-invigorating ta' Herba Cistanche, ġew eżaminati l-effetti tat-trattament ta 'Herba Cistanche fuq il-kapaċità ta' ġenerazzjoni ta 'ATP fil-mitokondrija iżolati minn qlub tal-firien ex vivo u kardjomijoċiti H9c2 kkultivati ​​in situ. Biex tesplora l-mekkaniżmu bijokimiku sottostanti l-azzjoni li ttejjeb il-ġenerazzjoni tal-ATP, l-effetti tat-trattament ta 'Herba Cistanche fuq it-trasport tal-elettroni mitokondrijali u attivitajiet kumplessi I-IV ġew eżaminati wkoll fil-qlub tal-firien.

Estratt ta' Cistanche deserticola

Materjali u metodi

Sustanzi kimiċi, kultura taċ-ċelluli, u materjali veġetali ATP, ADP, u 3-[4,5-dimethylthiozol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide ( MTT) inxtraw minn Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Soluzzjoni Luciferase (ATPlite) inkisbet minn PerkinElmer (Boston, MA, USA). Dulbecco's modifikat Eagle's medium (DMEM) u serum bovin fetali (FBS) inxtraw minn GIBCO BRL Life Technologies (Grand Island, NY, USA). Il-linja taċ-ċelluli H9c2 inxtrat minn ATTC (Rockville, MD, USA). Herba Cistanche ġie fornut minn negozjant tal-ħxejjex lokali (Lee Hoong Kee). Il-ħwawar ġiet awtentikata mill-fornitur, u kampjun ta 'vawċer (HKUSTY00301) ġie depożitat fid-Dipartiment tal-Bijokimika, l-Università tax-Xjenza u t-Teknoloġija ta' Ħong Kong (HKUST).

Estrazzjoni tal-ħxejjex

Herba Cistanche (100 g) inqatgħet f'biċċiet żgħar u mbagħad ġiet estratta bit-tisħin taħt rifluss fi 300 mL metanol

f'65◦C għal 2 h. Il-proċedura ġiet ripetuta darbtejn. L-estratt miġbur kien imnixxef billi s-solvent jiġi evaporat taħt pressjoni mnaqqsa, u l-estratt tal-metanol ta 'Herba Cistanche inkiseb b'rendiment ta' 39 fil-mija (w/w). Analiżi kimika indikat li l-estratt tal-metanol ta' Herba Cistanche kien fih saponini totali, flavonoids totali, lignans totali, u polysaccharides f'konċentrazzjonijiet ta' 1.62 fil-mija (w/w), 0.08 fil-mija, 0.15 fil-mija, u 75.6 fil-mija, rispettivament.

Kura tal-annimali

Firien irġiel adulti Sprague-Dawley (8–10 ġimgħat; 250–300g) inżammu taħt ċiklu ta’ skur/dawl ta’ 12-siegħa f’kamra kkontrollata bl-arja/umdità f’madwar 22◦C u ppermettew ikel u ilma ad libitum fil-Faċilitajiet għall-Kura tal-Annimali

fi HKUST. Protokolli sperimentali ġew approvati mill-Kumitat tal-Prattika tar-Riċerka f'HKUST.

Trattament tad-droga

L-annimali kienu maqsuma b'mod każwali fi gruppi, b'ħames sa sitt annimali f'kull wieħed. Fil-gruppi ta 'trattament, il-firien ġew amministrati intragastrikament bl-estratt tal-metanol ta' Herba Cistanche (maħlul/sospiż fl-ilma) f'dożi dejjem jiżdiedu ({{0}}.031–0.5 g/kg) għal 3 ijiem. L-annimali tal-kontroll irċevew ilma biss. Erbgħa u għoxrin siegħa wara l-aħħar dożaġġ, il-qalb inkisbet minn annimali anestetizzati b'fenobarbital u ġiet soġġetta għal analiżi bijokimika.

Preparazzjoni ta' frazzjonijiet mitokondrijali u kejl tal-kapaċità ta' ġenerazzjoni ta' ATP (ATP-GC) ex vivo

Kampjuni tat-tessut ventrikulari tax-xellug tal-qalb tneħħew u laħlaħ b'buffer isotoniku kiesaħ bis-silġ (0.32 M sukrożju, 1 mM EDTA, 50 mM Tris/HCl, pH 7.4). Il-frazzjonijiet mitokondrijali tal-qalb ġew ippreparati permezz ta' ċentrifugazzjoni differenzjali f'buffer iso- tonic f'4◦C. Ġie ppreparat omoġenat kardijaku ta '10 fil-mija (w/v) billi ġie omoġenizzat it-tessut ventrikulari ikkapuljat b'omoġenizzatur tal-ħġieġ tat-Teflon f'4000 rpm għal 20-30 puplesiji kompluti. L-omoġenat ġie ċentrifugat f'600 g għal 10 min biex jitneħħew nuklei u debris taċ-ċelluli. Is-supernatant imbagħad ġie ċentrifugat fi 8000 g għal 30 min biex jissedimenta l-mitokondrija (Evan, 1992). Il-gerbub ġew sospiżi mill-ġdid f'1 mL tal-buffer iżotoniku u rikostitwiti l-frazzjonijiet mitokondrijali. L-ATP-GC mitokondrijali ta 'annimali mhux ittrattati tkejjel bil-metodu ta' Leung et al. (2005).

Kejl tat-trasport tal-elettroni mitokondrijali

Il-kejl tat-trasport tal-elettroni f'mitokondrija iżolata, li huwa bbażat fuq it-tnaqqis tal-MTT, sar kif deskritt minn Cohen et al. (1997). Il-mitokondrija ġew ippreparati f'konċentrazzjoni ta' proteina ta' 1 mg/mL b'buffer ta' inkubazzjoni (250 mM sukrożju, 50 mM HEPES, 10 mM KH2PO4, 2 mM MgCl2, 1 mM EGTA, pH 7.4) . Alikwot (40 µL) tal-mitokondrija tħallat ma' 100 µL kull wieħed ta' 15 mM pyruvate jew 0.5 mM succinate u 0.42 mg/mL MTT. It-taħlita ta 'reazzjoni ġiet inkubata f'37◦C għal 10 min bi tħawwad ġentili. Wara l-inkubazzjoni, it-taħlita ta 'reazzjoni ġiet mitmuma biż-żieda ta' 100 µL lysis buffer (10 fil-mija, w/v, sodium dodecyl sulfate, u 45 fil-mija dimethylformamide, aġġustat għal pH 4.7 b'aċidu aċetiku glaċjali). Wara wieqfa għal 5 min, il-qari tal-assorbiment tat-taħlita ta 'reazzjoni ttieħed b'qarrej tal-pjanċa tal-mikrotiter (Bio-Rad, Hercules, CA, USA) u rrapportat bħala d-differenza bejn 570 nm u 630 nm. Id-dejta ġiet espressa bħala perċentwal tal-valur medju tal-grupp ta' kontroll (jiġifieri, Herba Cistanche-mhux trattat).

Kultura taċ-ċelluli

Iċ-ċelloli H9c2, linja taċ-ċelluli permanenti derivata minn mijoblasti kardijaċi (Hescheler et al., 1991), ġew ikkultivati ​​bħala monosaffi f'DMEM supplimentat b'10 fil-mija (v/v) FBS. Il-medju kien fih glukożju (4.5 g/L) u glutamina (4.5 mM), supplimentati b'NaHCO3 (17 mM), peniċillina (100 IU/mL), u streptomycin (100 µg/mL). Iċ-ċelloli kollha tkabbru taħt atmosfera ta '5 fil-mija (v/v) CO2 fl-arja f'37◦C. Il-medju kien mibdul b'medju frisk kull jumejn jew 3 ijiem. Ħażniet ta' ċelluli tkabbar f'kunjett ta' kultura ta' 75 cm2 u nqasam qabel il-konfluwenza bi proporzjon ta' subkultivazzjoni ta' 1:10. Għall-assaġġ ATP-GC, iċ-ċelluli H9c2 ġew miżrugħa b'densità ta' 2.5 104 ċelluli/bir ġo pjanċa 24-bir. Wara t-twaħħil taċ-ċelluli, l-estratt ta 'Herba Cistanche (imdewweb f'salina buffered bil-fosfat; PBS) ġie applikat fil-medju, u ċ-ċelloli ġew inkubati għal perjodi dejjem jiżdiedu (2-16 h) ta' żmien. Iċ-ċelloli ta' kontroll (mhux ittrattati) ingħataw il-PBS biss.

Kejl ta' ATP-GC in situ

Wara l-perjodi ta' inkubazzjoni indikati bl-estratt ta' Herba Cistanche f'konċentrazzjonijiet dejjem jiżdiedu (5{{10}}–300 µg/mL), sar l-assaġġ ATP-GC. Il-medju ġie aspirat u ċ-ċelloli ġew ittrattati b'digitonin (50 µg/mL) f'buffer ta' inkubazzjoni (120 mM KCl, 5 mM KH2PO4, 2 mM EGTA, 10 mM HEPES, 0.1 mM MgCl2, 0.5 fil-mija BSA, pH 7.4) għal 7.4. min f'37◦C. Wara l-aspirazzjoni tad-digitonin, glutamate (5 mM), malate (5 mM) u ADP (60µM) ġew miżjuda maċ-ċelloli għall-ġenerazzjoni ta 'ATP mitokondrijali, li kienet immonitorjata f'intervalli ta' ħin dejjem jiżdiedu li jvarjaw minn 0 sa 15 min. Ir-reazzjoni ġiet mitmuma biż-żieda ta '60 µL ta' aċidu perkloriku (30 fil-mija, w/v), u t-taħlitiet ta 'reazzjoni ġew imbagħad ċentrifugati f'600g għal 10 min f'4◦C. Alikwot (120 µL) tas-supernatant tħallat ma' 90 µL ta' 1.4 M KHCO3 għan-newtralizzazzjoni. It-taħlitiet reġgħu ġew ċentrifugati f'600 g f'4◦C, u s-supernatanti ġew imkejla għall-kontenut ta 'ATP kif deskritt qabel. L-ATP-GC taċ-ċelloli mhux ittrattati ġie stmat billi kkalkola l-erja taħt il-kurva tal-graff (AUC1) li plottja ATP iġġenerat (nmol/mg proteina) kontra l-ħin (0-15 min) u espress f'unitajiet arbitrarji. Għal ċelloli ttrattati b'Herba Cistanche, valuri AUC1 ta 'ħinijiet ta' inkubazzjoni li qed jiżdiedu (3, 5, 7, 10, u 15 min) ġew normalizzati għal valur medju ta 'kontroll rispettiv minn kampjuni mhux ittrattati u espressi bħala kontroll perċentwali. Imbagħad, iż-żona taħt il-kurva (AUC2) tal-grafika li tpinġi l-valuri ta 'kontroll perċentwali kontra l-ħin ta' inkubazzjoni (3-15 min) ġiet ikkalkulata u espressa f'unitajiet arbitrarji. Id-dejta tal-gruppi ttrattati b'Herba Cistanche ġiet espressa bħala persentaġġ tal-kontroll mill-ekwazzjoni:

[AUC2(HerbaCistanche − trattat)/AUC2(mhux trattat)]×100 fil-mija .

Kejl ta' attivitajiet kumplessi I–IV u citrate synthase

L-attivitajiet tal-kumpless I-III tal-katina tat-trasport tal-elettroni mitokondrijali (ETC) tkejlu b'metodi spettrofotometriċi bl-użu ta' substrati speċifiċi għal kumplessi (NADH għall-kumpless I, succinate għall-kumpless II, u decylubiquinol għall-kumpless III) kif deskritt (Grad & Lemire, 2004; Hsu et al., 2005; Mark et al., 2001). L-attività tal-Kumpless IV tkejjel bl-użu ta' kit ta' analiżi ta' cytochrome c oxidase minn Sigma. L-attività mitokondrijali taċ-ċitrat synthase kienet imkejla bil-metodu ta 'Srere (1969).

Assaġġ tal-proteini

Konċentrazzjonijiet tal-proteini ta 'frazzjonijiet mitokondrijali u lisati taċ-ċelluli ġew determinati bl-użu ta' kit ta 'assaġġ tal-proteini BioRad bl-użu ta' albumina tas-serum bovin bħala standard ({{0}}.038–0.600 mg/mL).

Analiżi statistika

Id-dejta kollha ġiet espressa bħala l-iżball standard medju tal-medja (SEM). Ġew analizzati b'analiżi tal-varjanza f'direzzjoni waħda (ANOVA). Saru paraguni multipli post hoc bl-LSD. valuri P<0.05 were="" regarded="" as="" statistically="">

Riżultati

Effetti tat-trattament b'Herba Cistanche fuq ATP-GC mitokondrijali mijokardijaku fil-firien

Kif muri fil-Figura 1, it-trattament bl-estratt ta’ Herba Cistanche f’dożi sa 0.5 g/kg żied l-ATP-GC mitokondrijali mijokardijaku b’mod dipendenti mid-doża fil-firien, bil-grad ta’ stimulazzjoni jkun ta’ 89 fil-mija f'doża ta' 0.5 g/kg.

Effetti tat-trattament ta 'Herba Cistanche fuq it-trasport tal-elettroni mitokondrijali fil-qlub tal-firien

Il-firxa tat-trasport tal-elettroni fil-mitokondrija iżolata tkejjel billi ssorveljat it-tnaqqis tal-MTT. Is-sottostrat użat għall-assaġġ kien jew piruvat jew succinate. Kif muri fil-Figura 2a, it-trattament ta 'Herba Cistanche b'mod dipendenti fuq id-doża żied il-firxa tat-trasport tal-elettroni mitokondrijali appoġġjat minn piruvat fil-qlub tal-firien, bl-aħjar stimulazzjoni osservata f'dożi ta' 0.5 g/kg. Madankollu, l-ebda tibdil sinifikanti fil-firxa tat-trasport tal-elettroni mitokondrijali appoġġjat minn succinate ma nstab fil-qlub tal-firien ittrattati b'Herba Cistanche (Fig. 2b).

Effetti tat-trattament ta 'Herba Cistanche fuq attivitajiet kumplessi respiratorji mitokondrijali fil-qlub tal-firien

Kif muri fil-Figura 3, it-trattament ta 'Herba Cistanche fl-aħjar doża ta' 0.5 g/kg żied b'mod sinifikanti l-attivitajiet tal-kumpless I (34 fil-mija) u tal-kumpless III (22 fil-mija) fil-qlub tal-firien. L-attività ta 'citrate synthase, enzima ewlenija għaċ-ċiklu ta' l-aċidu tricarboxylic, ma kinitx affettwata mit-trattament ta 'Herba Cistanche (Fig. 3). L-analiżi Western blot indikat li l-livelli tal-proteini tal-kumpless I u III ma ġewx affettwati mit-trattament b'Herba Cistanche (dejta mhux murija).

Kors taż-żmien tal-bidliet indotti minn Herba Cistanche fl-ATP-GC mitokondrijali fiċ-ċelloli H9c2

Bidliet fl-ATP-GC ġew eżaminati f'ċelluli trattati b'Herba Cistanche (50 u 150 µg/mL) wara 2 sa 16-il siegħa ta' inkubazzjoni. Kif muri fil-Figura 4, it-trattament ta 'Herba Cistanche żied l-ATP-GC b'mod dipendenti fuq il-ħin u bifażiku fiċ-ċelloli H9c2, bl-istimulazzjoni massima (44 fil-mija u 89 fil-mija, rispettivament) osservabbli wara 8 h inkubazzjoni għaż-żewġ konċentrazzjonijiet tad-droga. L-ATP-GC imbagħad irritorna għal valuri ta 'kontroll mhux ittrattati meta l-ħin ta' inkubazzjoni kien estiż għal 16-il siegħa. Bidu aktar kmieni ta 'stimulazzjoni seħħet meta ċ-ċelloli ġew ittrattati b'konċentrazzjoni ogħla (150 µg/mL) ta' estratt ta 'Herba Cistanche.

Konċentrazzjoni-dipendenza ta 'Herba

Żieda indotta minn Cistanche fl-ATP-GC fiċ-ċelloli H9c2

Iċ-ċelloli H9c2 ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet dejjem jiżdiedu (50– 300 µg/mL) ta 'estratt ta' Herba Cistanche għal 4 sigħat. Figura 5 turi li t-trattament ta 'Herba Cistanche żied l-ATP-GC b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni, bl-istimulazzjoni massima (82 fil-mija) osservabbli fil-konċentrazzjoni ta' 300 µg/mL.

Żieda ta 'estratt ta' Cistanche fil-produzzjoni ta 'ATP

Diskussjoni

Ir-regolazzjoni 'l fuq ta' l-attivitajiet ċellulari għat-titjib tal-funzjoni tal-ġisem bħall-kontrazzjoni tal-muskoli u r-risponsi immuni permezz ta 'invigoration Yang teħtieġ iż-żieda fil-konsum ta' ATP, li min-naħa tiegħu huwa appoġġjat minn fosforilazzjoni ossidattiva mitokondrijali. Fl-istudju attwali, it-trattament ta 'Herba Cistanche instab li jżid b'mod dipendenti fuq id-doża l-kapaċità tal-ġenerazzjoni ta' ATP mitokondrijali ex vivo fil-qlub tal-firien. Din l-osservazzjoni hija konsistenti mas-sejba preċedenti tagħna li fost il-ħwawar tonifying Ċiniżi li jqawwu Yang, it-trattament ta 'Herba Cistanche ipproduċa firxa relattivament akbar ta' stimulazzjoni fuq il-ġenerazzjoni ta 'ATP mitokondrijali fil-qlub tal-ġrieden (Ko et al., 2006). It-titjib tal-ġenerazzjoni tal-ATP mitokondrijali kien parallel biż-żieda fit-trasport tal-elettroni mitokondrijali mmexxi minn pyruvate iżda mhux succinate, kif evalwat mit-tnaqqis tal-MTT. Riżultati miksuba mill-kejl kinetiku tal-kumpless mitokondrijali I–IV indikaw li l-attivitajiet taż-żewġ kumplessi I u III żdiedu fil-qlub ittrattati b'Herba Cistanche, bil-firxa ta 'stimulazzjoni fuq l-attività tal-kumpless I tkun akbar minn dik tal-kumpless III. Peress li l-attività ta 'citrate synthase, enzima ewlenija taċ-ċiklu ta' l-aċidu tricarboxylic, ma ġietx affettwata, it-titjib tal-kapaċità ta 'ġenerazzjoni ta' ATP mitokondrijali bit-trattament ta 'Herba Cistanche jista' jiġi attribwit prinċipalment għall-istimulazzjoni ta 'attivitajiet kumplessi I u/jew III. Ħafna mir-rekwiżiti tal-ATP tal-qalb huma sodisfatti mill-mitokondrija, li jiddependu kważi kompletament fuq l-ossidazzjoni marbuta mal-kumpless I (NADH) tal-aċidu xaħmi u l-glukożju (Stanley et al., 1997; Taegtmeyer, 1998). Il-Kumpless I, li juri attività aktar baxxa minn kumplessi respiratorji oħra, huwa meqjus bħala fattur importanti fir-regolamentazzjoni tal-fosforilazzjoni ossidattiva. Għalhekk, l-istimulazzjoni jew l-inibizzjoni tal-attività kumplessa I jista 'jkollha impatt kbir fuq l-enerġija tal-qalb. Għalkemm l-analiżi Western blot ma żvelat l-ebda tibdil fil-livell tal-proteini ta’ dawn iż-żewġ kumplessi (dejta mhux murija), iż-żieda fl-attività tal-enżimi tista’ tirriżulta mill-bidliet fl-istatus tal-proteini thiol u/jew l-ambjent tal-lipidi (Davey et al., 1998; Paradies). et al., 2004).

Estratt ta' Herba Cistanchejista 'jipproduċi l-effett li jsaħħaħ il-ġenerazzjoni ta' ATP f'ċelloli H9c2 ikkultivati ​​in situ. Il-bidu relattivament bikri tal-azzjoni stimulatorja prodotta mit-trattament b'Herba Cistanche, partikolarment f'doża għolja, huwa konsistenti mal-osservazzjoni mill-istudji ex vivo li indikaw li s-sintesi tal-proteini kumplessi I u III mhux probabbli involuta fit-titjib tal-ġenerazzjoni tal-ATP. azzjoni. Id-dimostrazzjoni tat-titjib indott minn Herba Cistanche fil-kondizzjoni in situ tal-ġenerazzjoni tal-ATP tappoġġja l-idea li ż-żieda fil-kapaċità tal-ġenerazzjoni tal-ATP mitokondrijali, kif evalwata permezz ta 'kejl ex vivo, tista' sempliċement tirrifletti effett parallel prodott mit-trattament tad-droga in vivo kundizzjoni. Il-kejl tal-ġenerazzjoni ta 'ATP f'mitokondrija iżolati u ċelloli kkultivati ​​bl-użu ta' malat u glutamate bħala sottostrati huwa miżura indiretta ta 'respirazzjoni mitokondrijali tal-istat 3 (Chen et al., 2003). Bl-użu tal-istess analiżi tal-ATP bijoluminixxenti, ir-rata tal-ġenerazzjoni tal-ATP mitokondrijali f'diversi tessuti ta' firien mhux ittrattati, kif irrappurtat aktar kmieni fil-laboratorju tagħna (Leung et al., 2005), kienu fi qbil tajjeb mad-dejta ppubblikata reċentement (Drew & Leeuwenburgh, 2003). ). Il-kapaċità ta' ġenerazzjoni ta' ATP ġiet stmata b'integrazzjoni f'żewġ stadji ta' bidliet dipendenti fuq il-ħin fil-livell ta' ATP kemm f'assaġġi ex vivo kif ukoll in situ. L-effett stimulatorju osservat indott mid-droga kien għalhekk eżaltat għall-fini ta 'paragun. It-titjib tal-kapaċità ta 'ġenerazzjoni ta' ATP permezz ta 'trattament ta' Herba Cistanche fil-mitokondrija tal-qalb tal-firien ex vivo kien parallel bl-istimulazzjoni tal-ġenerazzjoni ta 'ATP fiċ-ċelloli H9c2 in situ. Minħabba l-preżenza ta 'attività li ttejjeb il-ġenerazzjoni ta' ATP fil-ħwawar tonifikaturi Ċiniżi li jsaħħu l-Yang, inkluż Herba Cistanche, fil-qlub tal-ġurdien ex vivo (Ko et al., 2006), ir-riżultati jissuġġerixxu li l-kejl tal-kapaċità ta 'ġenerazzjoni ta' ATP fiċ-ċelloli H9c2 f' situ jista' jintuża bħala test farmakoloġiku għall-ħxejjex aromatiċi tat-tonifikazzjoni Ċiniżi li jqawwu Yang jew formula tal-ħxejjex.

Bħala konklużjoni, it-trattament bl-estratt ta 'Herba Cistanche jista' jtejjeb il-kapaċità tal-ġenerazzjoni tal-ATP mitokondrijali fil-qlub tal-firien ex vivo u fiċ-ċelloli H9c2 in situ. Is-sejbiet jappoġġaw il- postulazzjoni tagħna li l-bażi farmakoloġika ta 'yang-invigoration tinvolvi t-titjib tal-funzjonijiet tal-ġisem permezz tal-istimulazzjoni tal-produzzjoni tal-ATP mitokondrijali.

L-estratt ta 'Herba Cistanche itejjeb il-kapaċità tal-ġenerazzjoni tal-ATP mitokondrijali

Referenzi

Chen P (1998): Ħwawar Toniċi. Serje TCM Avvanzata. Beijing, iċ-Ċina, Science Press, pp. 233–320.

Chen Q, Vazquez EJ, Moghaddas S, Hoppel CL, Lesnefsky EJ (2003): Produzzjoni ta 'speċi ta' ossiġnu reattiv mill-mitokondrija: rwol ċentrali tal-kumpless III. J Biol Chem 278: 36027– 36031.

Cohen G, Farooqui R, Kesler N (1997): Marda ta 'Parkinson: Rabta ġdida bejn monoamine oxidase u fluss ta' elettroni mitokondrijali. Proc Natl Acad Sci USA 94: 4890–4894.

Davey GP, Peuchen S, Clark JB (1998): Limiti tal-enerġija fil-mitokondrija tal-moħħ. Involviment potenzjali fin-newrodeġenerazzjoni. J Biol Chem 273: 12753–12757.

Drew B, Leeuwenburgh C (2003): Metodu għall-kejl tal-produzzjoni ta 'ATP f'mitokondrija iżolata: produzzjoni ta' ATP fil-mitokondrija tal-moħħ u tal-fwied ta 'firien Fischer-344 b'restrizzjoni ta' età u kaloriji. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 285: R1259–R1267.

Evan WH (1992): Iżolament u karatterizzazzjoni ta 'membrani u organelli taċ-ċelluli. Fi: Rickwood D, ed. Ċentrifugazzjoni Preparattiva: Approċċ Prattiku. New York, Oxford University Press, pp. 223–270.

Grad LI, Lemire BD (2004): Mutazzjonijiet tal-kumpless mitokondrijali I f'Caenorhabditis elegans jipproduċu defiċjenza ta' cytochrome c oxidase, stress ossidattiv, u aċidożi lattika li tirrispondi għall-vitamina. Human Mol Genetics 13: 303–314.

Hescheler J, Meyer R, Plant S, Krautwurst D, Rosenthal W, Schultz G (1991): Karatterizzazzjoni morfoloġika, bijokimika u elettrofiżjoloġika ta 'linja ta' ċellula klonali (H9c2) minn qalb tal-firien.Circ Res 69: 1476-1486.

Hsu M, Srinivas B, Kumar J, Subramanian R, Andersen J (2005): It-tnaqqis tal-glutathione li jirriżulta f'inibizzjoni selettiva tal-kumpless mitokondrijali I f'ċelloli dopaminerġiċi huwa permezz ta 'mogħdija medjata minn NO li ma tinvolvix peroxynitrite: Implikazzjonijiet għall-marda ta' Parkinson. J Neurochem 92: 1091– 1103.

Ko KM, Leon TYY, Mak DHF, Chiu PY, Du Y, Poon MKT (2006): Azzjoni farmakoloġika karatteristika ta 'ħwawar tonifikaturi Ċiniżi "Yang-invigorating": Titjib tal-kapaċità tal-ġenerazzjoni tal-ATP mijokardijaku. Phytomedicine 13: 636– 642.

Ko KM, Mak DH, Chiu PY, Poon MKT (2004): Bażi farmakoloġika ta ''Yang-invigoration' fil-mediċina Ċiniża. Xejriet Pharmacol Sci 25: 3–6.

Lee CJ, Chuan S, Lee SL (1990): Studju dwar l-effett kontra t-tixjiħ ta 'Cistanche deserticola Ma. Shanghai J Trad Chin Med 11: 22–23.

Lei L, Song ZH, Tu PF, Li YZ, Wu LJ, Chen FK (2001): Ir-regolazzjoni metabolika ta 'phenylethanoid glycosides minn Herba cistanches fil gastrointestinali tal-klieb. Yao Xue Xue Bao 36: 432– 435

Leung HY, Chiu PY, Poon MKT, Ko KM (2005): Formula tal-ħxejjex Ċiniża li tissaħħaħ Yang ittejjeb il-kapaċità funzjonali mitokondrijali u l-kapaċità antiossidant f'diversi tessuti ta 'firien irġiel u nisa. Rejuven Res 8: 238–247.

Lin LW, Hsieh MT, Tsai FH, Wang WH, Wu CR (2002): Attività antinoċiċettiva u anti-infjammatorja kkawżata minn Cistanche deserticola f'annimali gerriema. J Ethnopharmacol 83: 177– 182.

Lu MC (1998): Studji dwar l-effett sedattiv ta 'Cistanche deserticola. J Ethnopharmacol 59: 161–165.

Mark A, Birch M, Douglass MT (2001): Assaġġi tal-attività kumplessa respiratorja mitokondrijali fil-mitokondrija iżolati minn ċelloli u tessuti umani. Meth Cell Biol 65: 97–117.

Ouyang J, Wang X, Zhao B, Yuan X, Wang Y (2003): Effetti ta 'elementi ta' art rari fuq it-tkabbir ta 'ċelluli Cistanche deserticola u l-produzzjoni ta' glikożidi phenylethanoid. J Biotech 102: 129–134.

Paradies G, Petrosillo G, Pistolese M, Di Venosa N, Federici A, Ruggiero FM (2004): Tnaqqis fl-attività tal-kumpless mitokondrijali I f'qalb iskemika/riperfusa tal-far: Involviment ta 'speċi ta' ossiġnu reattiv u kardjolipin. Circ Res 94: 53– 59.

Srere PA (1969): Citrate synthase. Ċiklu ta 'aċidu ċitriku. Meth Enzymol 13: 3–11.

Stanley WC, Lopaschuk GD, Hall JL, McCormack JG (1997): Regolament tal-metaboliżmu tal-karboidrati mijokardijaċi taħt kundizzjonijiet normali u iskemiċi. Potenzjal għal interventi farmakoloġiċi. Cardiovasc Res 33: 243–257.

Taegtmeyer H (1998): Metaboliżmu tas-sottostrat tal-enerġija bħala mira għall-farmakoterapija fil-muskolu tal-qalb iskemiku u riperfuż. Qalb Metab 1: 5–9.

Tian XF, Pu XP (2005): Phenylethanoid glycosides minn Cistanches salsa jinibixxi l-apoptosi indotta minn jone tal-1-metil-4- phenylpyridinium fin-newroni. J Ethnopharmacol 97: 59–63.

Wu XM, Gao XM, Tsim KW, Tu PF (2005): Arabinogalactan iżolat miż-zkuk ta 'Cistanche deserticola jinduċi l-proliferazzjoni ta' limfoċiti kkultivati. Int J Biol Macromol 37: 278–282.

Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, Kadota S (1998): Attività epatoprotettiva ta 'phenylethanoids minn Cistanche deserticola. Planta Med 64: 120– 125.

Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T (1996): Effetti antiossidanti ta 'phenylethanoids minn Cistanche deserticola. Biol Pharm Bull 19: 1580–1585.