Evalwazzjoni tat-trasport intestinali ta' estratt b'ħafna phenylethanoid Glycoside minn Cistanche Deserticola madwar il-Mudell ta' Monosaff taċ-Ċelloli Caco-2

Introduzzjoni

Il-linja taċ-ċelluli Caco-2, li ġiet derivata minn adenokarċinomi tal-kolon tal-bniedem, tesibixxi karatteristiċi li jixbħu l-enteroċiti. Taħt kundizzjonijiet normali, iċ-ċelloli Caco-2 jiddifferenzjaw b'mod spontanju minn ċelloli maturi u jiffurmaw monosaffi intatti. Iċ-ċelloli maġenb jaderixxu permezz ta 'junctions stretti ffurmati fin-naħa apikali tal-monosaff, li jistgħu jiddiskriminaw b'mod passivu ttrasportat b'mod attiv drogi tul is-saff epiteljali. Minħabba x-xebh morfoloġiku u bijokimiku ma 'enteroċiti normali, il-monosaffi taċ-ċelluli Caco-2 iservu bħala mudell in vitro aċċettat tajjeb għall-istudju tal-potenzjal ta' assorbiment intestinali u l-karatteristiċi tat-trasport tad-drogi.

B'kuntrast mal-kimiċi, l-estratti tal-pjanti (PE) huma taħlitiet li l-attività bijoloġika tagħhom u l-kostitwenti attivi ħafna drabi mhumiex identifikati sew. Barra minn hekk, il-proprjetajiet tat-trasport intestinali tal-PE, għall-kuntrarju tal-proprjetajiet tal-kostitwenti tiegħu, huma relatati mill-qrib mal-użu kliniku. Il-kejl tal-fluss għal kampjun tat-test tul monosaff taċ-ċelluli Caco-2 komunement jinvolvi metodi kimiċi, bħal HPLC, LC/MS, eċċ. Għalkemm dawn il-metodi huma għodda qawwija, huma kumplessi, jieħdu ħafna ħin, jiswew ħafna flus, u kultant jeħtieġu tagħmir sofistikat. Aktar importanti minn hekk, la komponent wieħed u lanqas minoritarju ma jista' jirrifletti l-PE kollu kemm hu. Għalhekk, jeħtieġ li jiġi stabbilit approċċ ġdid indipendenti mid-determinazzjoni tal-kostitwenti biex jiġu identifikati u evalwati l-karatteristiċi tat-trasport tal-PE.

Cistanche deserticola YC Ma (CD), pjanta holoparasitic, hija mediċina tradizzjonali Ċiniża komuni użata prinċipalment biex tikkura defiċjenza tal-kliewi, dgħjufija tal-ġisem, u stitikezza, u dawn l-użi ġew irreġistrati uffiċjalment fil-Farmakopea Ċiniża.Phenylethanoid glycosides (PhGs), inklużi echinacoside (EC), acteoside (AC), u isoacteoside (IS), eċċ., Huma klassi ta 'komposti polifenoliċi. Huma kkunsidrati bħala wieħed mill-kostitwenti bijoattivi ewlenin tal-ispeċi Cistanche. Studji farmakoloġiċi wrew li l-bijoattività tal-PhGs hija diversa u tinkludi effetti anti-ossidattivi, kontra l-għeja, epatoprotettivi, immunomodulatorji, anti-infjammatorji u newroprotettivi. Madankollu, il-karatteristiċi tat-trasport intestinali tal-PhGs ma ġewx investigati. F'dan l-istudju, esplorajna l-permeabilità intestinali ta 'estratt b'ħafna PhG (PRE) minn CD bħala sistema integrata u l-permeabilità ta' tliet PhGs ewlenin (AC, IS, u EC) f'ċelluli Caco-2 differenzjati. Ir-riżultati tagħna indikaw li PRE huwa primarjament trasportat permezz ta 'diffużjoni passiva assorbit ħażin 'l isfel gradjent ta' konċentrazzjoni mingħajr effluss, li jipprovdi l-bażi farmakokinetika għall-applikazzjoni klinika ta 'PhGs f'CD.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI GĦAT-TITJIB TAL-FUNZJONI SESSWALI PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Materjali u metodi

Materjali

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS, and EC (>98%) inxtraw minn Must Biotechnology Co. (Chengdu, iċ-Ċina). Dulbecco's modifikat Eagle's medium (DMEM), serum bovin fetali (FBS), u aċidi amminiċi mhux essenzjali (NEAA) ġew prodotti minn Gibco BRL (Grand Island, NY, USA). 6-tajjeb pjanċi TranswellTM (daħħal iż-żona tat-tkabbir tal-membrana 4.67 cm2) inkisbu minn Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, USA). Il-kollaġen tad-denb tal-firien inkiseb minn Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Ir-reaġenti u l-kimiċi kollha għall-analiżi HPLC kienu ta 'grad analitiku.

Preparazzjoni ta' PRE minn CD

Il-materjal CD imnixxef bl-arja kien trab u estratt permezz ta 'perkolazzjoni b'70% etanol. Il-frazzjoni b'ħafna PhG ġiet ippreparata kif deskritt qabel u estratta bl-alkoħol n-butil saturat fl-ilma. Il-likur estratt kien ikkonċentrat u mnixxef taħt pressjoni mnaqqsa. L-ispettrofotometrija tar-reżina makroporuża-UV imkejjel kontenut ta 'PhG ta' 78.4%. Il-kampjun finali rrappreżenta rendiment ta '1.75% ta' materja prima bil-piż xott. Il-kampjun miksub inħażen f'-20 grad sa aktar użu.

Determinazzjoni ta' AC, IS, u EC mill-HPLC

Intużat sistema Shimadzu HPLC mgħammra b'softwer ta 'soluzzjoni LC biex jiġu analizzati l-kontenuti ta' AC, IS, u EC fi PRE. Intużat kolonna Intersil C18 b'fażi inversa (4.6 mm × 25 0 mm, 5 μm) u nżammet f'temperatura tal-kamra. Il-fażijiet mobbli kienu acetonitrile u ilma li fihom 0.1% aċidu fosforiku (v/v) b'eluzzjoni gradjent (Tabella 1) b'rata ta 'fluss ta' 1.0 ml/min. Id-ditekter tal-ispettrofotometru tal-UV kien issettjat għal 334 nm. Biex niddeterminaw b'mod preċiż il-fluss ta 'AC u IS, żviluppajna metodu ġdid ta' sejbien tal-fluworexxenza HPLC (HPLC-FLD). Wara analiżi strutturali u skanjar tal-wavelength tal-fluworexxenza (dejta mhux murija), ksibna l-aħjar kundizzjonijiet ta 'skoperta tal-fluworexxenza għal AC (Eż.: 338 nm, Em: 448 nm) u IS (Ex: 320 nm, Em: 434 nm).

Il-metodu analitiku HPLC ġie vvalidat bl-użu tal-karatteristiċi ta 'prestazzjoni li ġejjin: stabbiltà, linearità, sensittività, preċiżjoni (varjabilità ta' bejn u bejn jum), u preċiżjoni. L-analiti fil-buffer tat-trasport inħażnu f'25 grad fid-dlam għal 24 siegħa, u l-istabbiltà tagħhom ġiet imkejla. L-analiti kienu stabbli ħafna fil-preżenza tal-vitamina Ċ (0.4%) minħabba li l-valuri tad-devjazzjoni standard relattiva (RSD) fl-oqsma tal-ogħla livell kienu < 3.5%. L-ekwazzjoni ta' rigressjoni lineari, il-koeffiċjent ta' korrelazzjoni, il-firxa ta' linearità, LOD, u LOQ għal AC, IS, u EC huma murija fit-Tabella 2. Il-LODs (18–30 nM) u LOQs (60–100 nM) valuri juru li l-metodi HPLC-FLD u HPLC-UV huma sensittivi ħafna. Il-valuri RSD li jesprimu l-preċiżjoni tal-metodu kienu kollha < 2% għall-varjabilità intra- u bejn il-ġurnata, li jindika preċiżjoni tajba. Għall-evalwazzjoni tal-irkupru, AC, IS, u EC ġew miżjuda mal-buffer tat-trasport biex jagħtu tliet livelli ta 'konċentrazzjoni (għoli, medji u baxxi). Il-valuri ta 'rkupru tal-metodu għall-analiti huma miġbura fil-qosor fit-Tabella 3. L-irkupri medji varjaw minn 90.0% sa 96.4%, li jindika preċiżjoni tajba. Bħala konklużjoni, il-metodi HPLC stabbiliti huma sodisfaċenti rigward il-linearità, is-sensittività, il-preċiżjoni, u l-eżattezza għall-kwantifikazzjoni ta 'AC, IS, u EC fil-buffer tat-trasport.

Determinazzjoni ta' PRE b'sistema ta' bioassay

Il-bijoassaġġ (kapaċità totali anti-ossidativa) kienet ibbażata fuq l-assaġġ FRAP (ferric reducing/antioxidant power) li ddeskrivejna qabel [16] u vvalidajna f'termini ta 'linearità u preċiżjoni (varjabilità ta' bejn u bejn ġurnata). Il-linearità tal-metodu tal-bijoassaġġ ġiet iddeterminata abbażi tal-kurvi tal-kalibrazzjoni. Il-firxa ta' konċentrazzjoni ta' linearità kienet 0.0625 - 40 ug/ml (y=0.0258x+0.0968, R2=0.996). Il-preċiżjoni tal-metodu ta' bijoassaġġ stabbilit ġiet iddeterminata f'termini tal-varjabbiltà intra-u inter-day għal analiżi ta' PRE (10.0 ug/ml). Ir-ripetibbiltà fil-ġurnata tal-metodu ġiet iddeterminata abbażi ta' ħames determinazzjonijiet konsekuttivi fl-istess jum. Ir-ripetibbiltà ta' bejn il-jiem tkejlet abbażi ta' ħames determinazzjonijiet konsekuttivi fuq tlett ijiem differenti. Il-valuri RSD għall-preċiżjoni tal-metodu kienu 1.014% u 4.72% għall-varjabbiltà intra- u inter-day, rispettivament, li jindika preċiżjoni tajba. Għalhekk, il-metodu ta' bijoassaġġ stabbilit huwa sodisfaċenti rigward il-linearità, il-preċiżjoni u l-eżattezza għall-kwantifikazzjoni ta' PRE f'buffer tat-trasport.

Kultura taċ-ċelluli

Ċelloli Caco {{0}} ġew ikkultivati ​​f'37 grad u 95% umdità relattiva f'atmosfera li kien fiha 5% CO2 u medju li jikkonsisti f'DMEM, 10% FBS, 1% NEAA, 1% L-glutamina, peniċillina (100 U/ml), u streptomycin (100 ug/ml). Il-medju kien mibdul kull jum ieħor matul it-tkabbir taċ-ċelluli u d-divrenzjar. Iċ-ċelloli tkabbru fi fliexken tal-plastik 75-cm2 u nħasdu kull 3-5 ijiem b'0.05% EDTA-trypsin. Għall-esperimenti tat-trasport, iċ-ċelloli ġew miżrugħa f'densità ta '1 × 105 ċelluli/cm2 fuq inserzjonijiet Transwell miksija bil-kollaġen. Madwar 21 jum wara ż-żrigħ, il-monosaffi ntużaw għall-esperimenti tat-trasport. L-integrità tagħhom ġiet iddeterminata billi tkejjel ir-reżistenza elettrika trans-epiteljali (TEER) madwar il-monosaffi b'EVOM mgħammar b'ENDOHM-SNAP (World Precision Instruments, Inc., USA). Il-valuri TEER tal-monosaff taċ-ċelluli Caco-2 meħtieġa jaqbżu l-500 O∙cm2.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI GĦAL SERħan il-moħħ U LAXATTIVA PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Esperimenti tat-trasport

Il-monosaff inħasel b'buffer tat-trasport (P-buffer li fih 10 mM HEPES, 1 mM sodium pyruvate, 10 mM glukosju, 3 mM CaCl2, u 145 mM NaCl, pH 7.4) u mbagħad inkubat minn qabel għal 20 min. f'37 grad. Wara li tneħħi l-buffer tat-trasport, ġie miżjud buffer tat-trasport frisk li fih kampjuni tat-test mal-kamra apikali (AP) (1.5 ml) fi studji direzzjonali AP għal basolaterali (BL) jew il-kamra BL (2.5 ml) fi studji direzzjonali BL għal AP. Għal analiżi AC, IS, u EC bl-użu ta 'HPLC, tneħħa alikwott (300 ul) minn kull kamra tar-riċevitur f'intervalli ta' ħin differenti (30, 60, 90, u 120 min). Il-kamra tar-riċevitur ġiet mimlija bl-istess volum ta 'buffer tat-trasport frisk imsaħħan minn qabel (37 grad ) wara kull teħid ta' kampjuni. Il-kampjuni miġbura ġew maħżuna f'-20 grad għal aktar użu. Għad-determinazzjoni PRE bl-użu ta' bioassay, ittieħdu biss il-kampjuni f'120 min. Minħabba l-instabbiltà ta' PRE, AC, IS, u EC, 0.4% (w/v) vitamina Ċ ġiet miżjuda biex tistabbilizza l-kampjuni biex jiddeterminaw il-kontenut AC, IS, u EC mill-HPLC, u l-kampjuni għall-bijoassaġġ PRE kienu analiżi immedjatament wara li jittieħed kampjun. Il-valur tal-koeffiċjent tal-permeabilità apparenti (Papp jew 'Papp) ta' kull kampjun ġie kkalkulat.

Analiżi tad-dejta

Il-valuri Papp fid-direzzjonijiet AP BL jew BLAP ta' AC, IS, u EC ġew ikkalkulati abbażi tal-ekwazzjoni li ġejja: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0), fejn Papp huwa l-koeffiċjent tal-permeabilità apparenti (cm/s) determinat mill-HPLC. (4Q/4t) hija r-rata tad-dehra tal-kompost tat-test (AC, IS, jew EC) fuq in-naħa tar-riċevitur (μmol/s); A hija l-erja tal-wiċċ tal-inserzjoni (cm2); C0 hija l-konċentrazzjoni inizjali tal-kompost tat-test fuq in-naħa tad-donatur (μmol/ml). Speċifikament, l-unità tal-massa "ug" intużat minflok "μmol" meta ġew ikkalkulati l-valuri 'Papp. Id-dejta hija espressa bħala l-mezzi ± SD.

Riżultati

Kompożizzjoni ta 'AC, IS, u EC fi PRE minn CD....

Minħabba li AC, IS, u EC huma meqjusa bħala l-bijoattivi ewleninPhGs tal-ispeċi Cistanche, analiznajna l-kontenut tagħhom fi PRE permezz tal-HPLC-UV. Il-kromatogramma rappreżentattiva tidher fil-Fig. 1. L-identifikazzjoni ta 'dawn il-kostitwenti kienet ibbażata fuq it-tqabbil tal-ħinijiet ta' żamma u l-ispettru UV ma 'dawk ta' standards awtentiċi f'tul ta 'mewġ ta' 334 nm. Il-kontenuti ta 'AC, IS, u EC fi PRE kienu 26.60%, 1.84%, u 32.83%, rispettivament. Għalhekk, dawn it-tliet komposti jammontaw għal 61.27% tal-PRE; barra minn hekk, ir-riżultati ta 'hawn fuq jindikaw li l-kontenut ta' PhG fi PRE huwa 78.4%. Għalhekk, AC, IS, u EC jammontaw għal madwar 80% tal-PhGs fi PRE.

Kapaċità totali ta 'anti-ossidazzjoni ta' PRE, AC, IS, u EC

Studji tal-attività anti-ossidativa tal-PhGsminn CD ġew irrappurtati, u AC, IS, u EC jammontaw għal madwar 80% tal-PhGs fi PRE. Għalhekk, il-kapaċitajiet totali ta 'anti-ossidazzjoni ta' PRE, AC, IS, u EC ġew ttestjati u espressi bl-użu tal-valuri FRAP (× 10-6 mmol). Kif muri fil-Fig. 2, meta l-valur FRAP kien 8 × 10–6 mmol, il-konċentrazzjonijiet finali ta 'PR, AC, IS, u EC kienu 6.20 ug/ml, 3.14 ug/ml, 22.92 ug/ml, u 4.89 ug. /ml, rispettivament, li jindika li l-kapaċità anti-ossidativa totali ta 'dawn l-erba' kampjuni kklassifikati kif ġej: AC > EC > PRE > IS. Il-bijoattività ta' PRE hija attribwita lill-gruppi ta' ingredjenti attivi tagħha (AIG). Għal madwar 60% ta' PRE, AC u EC wrew attività anti-ossidativa totali aktar b'saħħitha minn PRE u IS. Minħabba li IS (1.84%) tikkostitwixxi frazzjoni żgħira ħafna ta 'PR, komponenti oħra, bħall-IS antiossidant dgħajjef, huma wkoll attivi b'mod ċar fi PRE. B'mod sorprendenti, l-attività anti-ossidativa totali kienet differenti kważi 7-darbiet bejn AC u l-isomer IS tagħha, li tindika li mhux biss in-numru ta 'gruppi idroksil fenoliċi iżda wkoll il-pożizzjoni ta' gruppi idroksil fenoliċi fil-molekula affettwat l-effett anti-ossidattiv. .

Validazzjoni tal-monosaffi tal-Caco-2

Biex tiġi vvalidata s-sistema ta' monosaff taċ-ċelluli Caco-2, il-valuri Papp ta' propranolol (markatur trasportat tajjeb) u isfar Lucifer (markatur trasportat ħażin) mill-AP sal-BL madwar il-monosaffi Caco-2 kienu determinati bħala 1.51 × 10-5 ċm/s u 2.8 × 10-7 ċm/s, rispettivament, u dawn il-valuri qablu ma 'dawk ippubblikati f'rapporti preċedenti. L-assaġġ tal-attività tal-fosfatażi alkalina kkonferma wkoll li l-monosaffi taċ-ċelluli Caco-2 kienu kwalitattivament komparabbli mal-epitelju intestinali ż-żgħir.

Il-permeabilità ta 'AC, IS, u EC

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 ċm/s), filwaqt li dawk ta’ mediċini assorbiti ħażin kienu baxxi (< 1.0 × 10–6 cm/s) [3]. As shown in Table 4, the Papp values of AC, IS, and EC were nearly on the order of 10–7 cm/s, indicating that these compounds were poorly permeable. Furthermore, efflux or active transport was not observed because the ratios of Papp BL to AP / Papp AP to BL for AC, IS, and EC were between 0.90 ~ 1.55, and the criterion of net efflux proposed by the FDA Guidance is a ratio less than 2. Based on the kinetic curves presented in Fig. 3, the bidirectional transport percentages of AC, IS, and EC at 200 μM increased linearly with time. The transport rate (TR) values of the three compounds increased linearly in both directions between approximately 100 and 300 μM (Fig. 4). These results indicate that the main transport mechanism of AC, IS, and EC is also passive diffusion. 

Il-permeabilità tal-PR

Ir-riżultati ta 'hawn fuq jindikaw li l-kapaċità anti-ossidativa totali ta' PRE hija mill-inqas dovuta għal 61.27% ta 'AIG minn PRE. Għalhekk, aħna evalwajna t-TR ta 'PR ibbażata fuq il-kurva tiegħu ta' konċentrazzjoni-effett tal-kapaċità totali ta 'anti-ossidazzjoni u kkalkula l-'valuri Papp biex jirriflettu l-karatteristiċi tat-trasport ta' PRE. Il-valuri 'Papp ta' PRE għal AP!BL u BL!AP kienu (2.16 ± 0.26) × 10–7 ċm/s u (3.13 ± 0.29) × 10–7 ċm/ s, rispettivament, li jindika li dan il-kompost kien permeabbli ħażin. Barra minn hekk, l-effluss jew it-trasport attiv ma kienx evidenti minħabba li l-proporzjon ta' 'Papp BL għal AP / 'Papp AP għal BL għal PRE kien ta' 1.45. Barra minn hekk, it-TR bidirezzjonali ta 'PR żdied b'mod lineari bejn madwar 300 u 900 ug / ml (Fig. 5). In-nuqqas ta 'preferenza direzzjonali tar-riżultati jissuġġerixxi li t-tixrid passiv huwa l-mekkaniżmu ewlieni tat-trasport ta' PRE.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI GĦAT-TITJIB TAL-IMMUNITÀ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Diskussjoni

Meta mqabbel ma 'prodotti tad-droga purifikati ħafna, PE huwa ġeneralment taħlitiet li jikkonsistu f'mijiet ta' kostitwenti bi proprjetajiet fiżjokimiċi differenti ħafna. Għalhekk, PE jeżerċita azzjoni sinerġistika sistematika, multitarget, u multikanal minħabba l-AIG kumpless tagħhom [21], li jfixkel l-analiżi tal-karatteristiċi tat-trasport tal-PE. Biex jevalwaw il-proprjetajiet tat-trasport tal-PE b'mod aktar xjentifika, xi riċerkaturi identifikaw komponenti multipli, aktar milli komponent wieħed, fil-PE [22-24]. Madankollu, numru limitat ta' kostitwenti ma jistgħux jirriflettu l-PE kollu kemm hu. Madankollu, id-determinazzjoni tal-komponenti kollha fil-PE hija impossibbli. Barra minn hekk, jekk komponenti diversi fil-PE juru karatteristiċi tat-trasport kompletament differenti, il-karatteristiċi tat-trasport olistiku tal-PE jkunu diffiċli biex jiġu identifikati.

Fis-snin 90, intużaw sistemi ta’ bijoassaġġ biex jevalwaw it-TR ta’ aġenti antimikrobiċi [25]. Sal-2005, Eguchi u l-kollegi tiegħu [26] kienu evalwaw l-attività anti-ossidativa tal-estratt tal-karrotta billi użaw midja BL minn ċelluli Caco-2 differenzjati; dan l-approċċ huwa aktar xieraq biex jirrifletti sitwazzjonijiet in vivo.

Ibbażat fuq rapport preċedenti dwar l-attività tal-PhGs u r-riżultati tagħna (Fig. 2), it-TR ta 'AIG fi PRE jista' jiġi evalwat billi tiġi ddeterminata l-kapaċità anti-ossidativa totali tal-mezz fil-kamra tar-riċevitur. Wara l-esperimenti tat-trasport, sibna li t-TR ta’ PRE kien simili fiż-żewġ direzzjonijiet, u dan it-trasport kien mhux saturat u assorbit ħażin ('Papp < ​​1.0 × 10–6 ċm/s), u ma kienx jindika effluss, li jissuġġerixxi li diffużjoni passiva 'l isfel gradjent ta' konċentrazzjoni huwa l-mekkaniżmu tat-trasport ewlieni ta 'PRE (Fig. 5). Barra minn hekk, il-karatteristiċi tat-trasport ta 'PR huma konsistenti ma' dawk ta 'AC, IS u EC, il-komponenti effettivi li juru attività anti-ossidativa fi PRE (Fig. 4 u Tabella 4). Dan ir-riżultat kien mistenni u indika li s-sistema preżenti ta' bijoassaġġ hija xierqa u affidabbli għall-evalwazzjoni tal-karatteristiċi tat-trasport ta' AIG fi PRE f'ċelloli Caco-2 differenzjati.

B'kuntrast mal-valur Papp kanoniku, li huwa komunement użat biex jirrifletti t-trasport ta 'kompost wieħed, il-'valur Papp miksub mit-TR ibbażat fuq il-kurva tal-effett tal-konċentrazzjoni jista' mhux biss jirrifletti l-komponenti li jippenetraw monosaffi bi struttura intatta iżda jinvolvu wkoll fatturi oħra relatati mal-attività fil-mira, bħall-metaboliti tal-komponenti, prodotti degradati kimikament, u anke xi ċitokini mnixxija miċ-ċelloli Caco-2 bi tweġiba għal stimulazzjoni li tista' taffettwa l-bijoattività fil-mira. Għalhekk, il-multifattur imsemmi hawn fuq, aktar milli l-komponenti intatti trasportati biss, jiddetermina l-'valur Papp. Għalhekk, 'Papp jista' jikkorrelata b'mod aktar qawwi ma' sitwazzjonijiet in vivo mill-valur kanoniku Papp. F'dan l-istudju, aħna ċċaraw in-natura mxerrda b'mod passiv u assorbita ħażin tal-PR ibbażata fuq il-'valur Papp tagħha, u din in-natura tista 'tkun relatata mad-dożaġġ għoli u l-perjodu twil ta' trattament kliniku ta 'CD. Madankollu, dawn is-sejbiet se jipprovdu gwida aktar sistematika għall-kliniċi fl-applikazzjoni tas-CD meta jkunu ġew identifikati biss il-karatteristiċi tat-trasport tal-biċċa l-kbira tal-AIG fis-CD, mhux biss il-PhGs.

Madankollu, l-oġġett ta' bijoattività magħżul għandu jkun sensittiv biżżejjed biex jiġi skopert fil-medju tal-kamra tar-riċevitur, li tippreżenta sfida għall-istabbiliment ta' sistema ta' bijoassaġġ biex tevalwa l-karatteristiċi tat-trasport tal-PE. Barra minn hekk, il-bijoattività għandha tiddependi wkoll fuq kemm jista' jkun komponenti. Fl-istudju tagħna, l-assaġġ tal-kapaċità anti-ossidativa totali kien aktar xieraq minn diversi metodi oħra (S1 Fig.). Iżda anke hekk, l-assaġġ tagħna jista 'jsib biss it-TR ta' PRE f'120 min.

B'mod kollettiv, l-istudju preżenti stabbilixxa sistema ġdida ta' bijoassaġġ biex tevalwa l-permeabilità intestinali ta' PRE f'ċelloli Caco-2 differenzjati. Ir-riżultati miksuba wrew li diffużjoni passiva assorbit ħażin 'l isfel gradjent ta' konċentrazzjoni mingħajr effluss huwa l-mekkaniżmu ta 'trasport ewlieni ta' PRE (Fig. 5), li jipprovdi l-bażi farmakokinetika għall-applikazzjoni klinika ta 'PhGs f'CD. L-użu ta' sistema ġdida ta' bijoassaġġ biex jiġi evalwat it-TR u b'hekk jiġu kkalkulati l-'valuri Papp biex tiġi vvalutata l-proprjetà tat-trasport intestinali ta' AIG f'PEs huwa fattibbli. Dan l-approċċ jista' jkun adattat ukoll għal PE ieħor minħabba bijoattività xierqa.

CISTANCHE TUBULOSA NATURALI GĦAT-TITJIB TAL-FUNZJONI SESSWALI PHGS75% ECH 30% ACT 12%