Effetti Ta' Sargassum Thunbergii Estratt Fuq Tibjid tal-Ġilda U Kontra t-Tikmix Permezz ta' Inibizzjoni Ta' TRP-1 U MMPs

Kuntatt: ali.ma@wecistanche.com

Da-Hye Gam 1, Jae-Hyun Park 1, Ji-Woo Hong 1, Seong-Jin Jeon 1, Jun-Hee Kim 1 u Jin-Woo Kim 1,2,*

Astratt: Sargassu thunbergiiġie tradizzjonalment użat bħala materjal li jittiekel u mediċinali pajjiżi inorjentali. Madankollu, il-jbajdu l-ġildaukontra t-tikmixl-effetti ta' S. thunbergii għadhom ma ġewx investigati. Dan l-istudju sar biex jiġu stabbiliti l-aħjar kundizzjonijiet ta 'estrazzjoni għall-produzzjoni ta' komposti bijoattivi b'attività antiossidanti kif ukoll effetti li jbajdu l-ġilda u kontra t-tikmix bl-użu ta 'estrazzjoni assistita bl-ultrasound (UAE) f'S. thunbergii. Il-ħin tal-estrazzjoni (5.30~18.7 min), it-temperatura tal-estrazzjoni (22.4~79.6 ◦C), u l-konċentrazzjoni tal-etanol (0.0~99.5 fil-mija), li huma l-varjabbli ewlenin ta' l-UAE, ġew ottimizzati bl-użu ta 'disinn kompost ċentrali. L-ekwazzjonijiet ta' kwadratikregressjoni ġew derivati ​​bbażati fuq data sperimentali u wrew koeffiċjent ta' determinazzjoni għoli (R2 > 0.85), li juri l-adegwatezza għall-previżjoni. L-aħjar kundizzjoni UAE biex timmassimizza l-varjabbli dipendenti kollha, inkluża l-attività ta’ tneħħija radikali (RSA), attività inibitorja ta’ tyrosinase (TIA) u attività inibitorja ta’ collagenase (CIA), ġiet identifikata bħala ħin ta’ estrazzjoni ta’ 12.0 min, temperatura ta’ estrazzjoni ta’ 65.2 ◦C, u etanol ta' 53.5 fil-mija. Taħt dawn il-kundizzjonijiet, l-RSA, TIA, u CIA ta 'S. thunbergii estratt kienu 86.5 fil-mija, 88.3 fil-mija, u 91.4 fil-mija, rispettivament. Aħna kkonfermajna wkoll l-estratt ta' S. thunbergii kellu effetti inibitorji fuq l-espressjoni tal-mRNA ta' proteina relatata mat-tyrosinase-1, matrix metalloproteinase-1, u matrix metalloproteinase-9, li huma l-ġeni ewlenin tas-sintesi tal-melanin u l-idroliżi tal-collagen . L-ispettrometrija tal-massa tal-kromatografija likwida-tandem ġiet użata biex tidentifika l-komposti fenoliċi ewlenin fl-estratt ta’ S. thunbergii, u l-aċidu caffeic ġie identifikat bħala quċċata ewlenija, li turi li l-ingredjenti ta’ valur miżjud għoli b’jbajdu l-ġildaukontra t-tikmixeffetti jistgħu jiġu prodotti minn S. thunbergii u użati għall-iżvilupp ta 'materjali kożmetiċi.

Kliem ewlieni: S. thunbergii; ottimizzazzjoni;jbajdu l-ġilda; kontra t-tikmix; TRP-1; MMP-1; MMP-9

Ikklikkja għall-benefiċċji ta 'estratt ta' cistanche għat-tibjid tal-ġilda

1. Introduzzjoni

Il-melanogenesis hija proċess fiżjoloġiku li jwassal għas-sintesi tal-pigmenti tal-melanin [1]. Il-melanin huwa pigment iswed jew kannella mnixxi mill-melanoċiti preżenti fis-saff bażali tal-epidermide u jiddetermina l-ġilda, l-għajnejn u l-kulur tax-xagħar [2].Madankollu, ġenerazzjoni eċċessiva ta 'pigmenti tal-melanin tista' twassal għal mard relatat mal-iperpigmentazzjoni, bħal malinn. melanomi [3]. Tyrosinase, l-enzima ewlenija fil-mogħdija tal-bijosintesi ta' themelanin, tippromwovi l-idrossilazzjoni ta' L-tyrosine għal L-DOPA (L-3,4-dihydroxyphenylalanine) u mbagħad tippromwovi l-ossidazzjoni ta' L-DOPA għal dopachrome u dopaquinone, li jissintetizza l-melanin permezz tal-proċess ta' awto-ossidazzjoni minn proteini relatati mat-tyrosinase (TRP-1 u 2) permezz ta' diversi stadji [4–6]. Sal-lum, metodi ta 'inibizzjoni tal-formazzjoni tal-melanin billi jimpedixxu proteini relatati mat-tyrosinase intużaw ħafna fl-industrija tal-kożmetiċi għall-iżvilupp ta' aġenti li jbajdu l-ġilda [7,8]. Madankollu, aċidu kojic, aċidu azelaic, u hydroquinone, użati konvenzjonalmentjbajdu l-ġildaingredjenti, ġew irrappurtati li jinduċu allerġiji kif ukoll li jikkawżaw tossiċità fil-ġilda u kanċer [9]. Għalhekk, il-produzzjoni ta' aġent li jbajdu l-ġilda aktar sigur u aktar effettiv li huwa bbażat fuq ingredjenti naturali huwa meqjus bħala imperattiv [10].

Il-kollaġen huwa proteina tal-matriċi extraċellulari (ECM) li tipproteġi l-ġilda billi tagħtiha s-saħħa u t-tensjoni; jgħin ukoll biex jittardja l-proċess ta 'tixjiħ billi jipprevjeni t-tikmix u t-telf ta' umdità. L-ECM jista' jiġi dekompost minn matrix metalloproteinases (MMPs) [11]. MMP-1, magħruf komunement bħala collagenase, jiddekomponi parzjalment il-collagen tat-tip 1 li jagħmel il-ġilda, filwaqt li MMP-9, magħruf bħala gelatinase, addizzjonalment jiddepolimerizza l-collagenhydrolyzed mill-MMP-1 [12]. Barra minn hekk, Ġie rrappurtat li l-istress ossidattiv indott minn speċi reattivi tal-ossiġnu (ROS) jaċċellera s-sintesi ta 'dawn l-enzimi, li jwassal għad-degradazzjoni tal-ECM u, fl-aħħar mill-aħħar, il-formazzjoni tat-tikmix [13]. Għalhekk, huwa meħtieġ li ssib ingredjenti naturali li jistgħu jinibixxu l-espressjoni ta 'TRP u MMPs u li fihom antiossidanti li jistgħu jneħħu speċi reattivi ta' ossiġnu biex jipprevjenu t-tixjiħ tal-ġilda billi jnaqqsu l-pigmentazzjoni u t-tikmix tal-ġilda [14]. Riċentement, peress li l-ingredjenti funzjonali għall-kosmetiċi ġew żviluppati prinċipalment fil-pjanti tal-art, bdew jinqalgħu limitazzjonijiet fl-esplorazzjoni ta 'speċi ġodda u provvista stabbli ta' ingredjenti naturali [15]. Konsegwentement, l-interess u d-domanda għal ingredjenti naturali derivati ​​minn pjanti tal-baħar żdiedu, u ġew identifikati varjetà ta’ ingredjenti ġodda mir-riżorsi tal-baħar [16].

Sargassu thunbergiihija speċi ta' makroalka kannella li tappartjeni għall-familja gulfweed u hija indiġena għall-kosta tal-Korea u ċ-Ċina [17]. Huwa rikonoxxut bħala tniġġis tal-baħar li jikkawża ħsara lill-irziezet tal-alka u tal-ħut billi jnaqqsu l-ossiġnu maħlul [18].Ftit minnhom jintużaw bħala mediċini antihelmintiċi fit-terapija tradizzjonali jew bħala kompost [19].Madankollu, ingredjent kontra l-kanċer ġie identifikat minn tiegħu. estratt fl-1995; minn dakinhar, ġabet attenzjoni bħala makroalka b'potenzjal għoli għall-użu fil-manifattura ta' komposti bijoattivi ġodda [20]. L-estrazzjoni ta 'komposti bijoattivi bl-użu ta' proċessi konvenzjonali, inklużi t-tkeċċija mekkanika, l-estrazzjoni superkritika, l-estrazzjoni tal-microwave, u l-estrazzjoni ta 'pressjoni ultra-għolja, huma assoċjati ma' limitazzjonijiet bħall-ħtieġa li tuża solvent żejjed, rendiment baxx ta 'estrazzjoni u konsum għoli ta' enerġija [21]. L-iżvilupp ta' metodi ġodda ta' estrazzjoni hija waħda mill-isfidi ewlenin fl-innovazzjoni teknoloġika biex jiġu żgurati komposti bijoattivi mill-makroalka [22]. Fost il-proċessi ta 'estrazzjoni konvenzjonali, l-estrazzjoni assistita bl-ultrasound (UAE) hija partikolarment attraenti minħabba s-simpliċità tagħha, spiża baxxa ta' tagħmir, rendiment għoli ta 'estrazzjoni minn matriċi differenti, konsum baxx ta' enerġija, ammont aktar baxx ta 'solvent meħtieġ, u inqas ħin [23]. L-UAE hija magħrufa li tinvolvi mewġ tal-ħoss ta' frekwenza għolja ta' 20–100 kHz [24]. Ir-rendiment tal-estrazzjoni huwa msaħħaħ bl-użu tal-ultrasound, u dan huwa attribwit għat-tfixkil tat-tessuti tal-pjanti, it-tnaqqis fid-daqs tal-partiċelli, u ż-żieda fit-trasferiment tal-massa tal-estratti għas-solvent ikkawżat mill-kollass tal-bżieżaq li huma prodotti minn kavitazzjoni akustika ripetuta [25,26] . Minħabba dawn il-vantaġġi, l-UAE hija rikonoxxuta bħala proċess irħas, rinnovabbli u effiċjenti li huwa użat ħafna fl-industrija tal-ikel biex jiġu estratti ingredjenti funzjonali mill-bijomassa terrestri u akkwatika [27].

Għalhekk, f'dan l-istudju, applikajna l-UAE biex niġbdu komposti bijoattivi minn S. thunbergii u dderivajna l-aħjar kundizzjonijiet UAE li jippermettu l-estrazzjoni massima tal-antiossidanti kif ukolljbajdu l-ġildau ingredjenti kontra t-tikmix bl-użu ta' ottimizzazzjoni bbażata fuq l-istatistika, u diversi effetti inibitorji ta' TRP-1, MMP-1, u MMP-9espressjoni tal-ġeni mill-estratt ta' S. thunbergii ġew evalwati biex tiġi vverifikata l-ġilda -tibjid ukontra t-tikmixl-effetti tal-komposti bijoattivi derivati ​​u jikkonfermaw il-possibbiltà ofutilizing S. thunbergii estratt bħala ingredjent kożmetiku funzjonali.

estratt ta' cistanche

2. Riżultati u Diskussjoni

2.1. Disinn tal-Esperiment

It-twaħħil tal-mudell huwa kruċjali biex tiġi interpretata l-eżattezza tal-mudell matematiku tal-metodoloġija tal-wiċċ tar-rispons (RSM) għat-tbassir tal-attività ta 'scavenging radikali (RSA), l-attività inibitorja tat-tyrosinase (TIA), u l-attività inibitorja tal-collagenase (CIA) ta'S. thunbergiiestratt. Id-disinn kompost ċentrali (CCD) ta 'RSM huwa metodu ta' disinn sperimentali li janalizza statistikament il-wiċċ tar-rispons prodott b'mod indipendenti jew bl-interazzjoni ta 'żewġ varjabbli indipendenti li jaffettwaw ir-risponsi. Is-CCD għandu l-vantaġġ li jistma b'mod effettiv il-kurvatura billi juża l-punt ċentrali u punti assjali multipli biex jipprevedi l-aħjar kundizzjonijiet [28–30]. F'dan l-istudju, CCD ġie applikat biex ibassar l-aħjar UAEconditions biex timmassimizza r-reazzjonijiet, inklużi l-RSA, TIA, u CIA, ta 'S. thunbergiiextract. Il-5 livelli (- , -1, 0, 1, ) ġew ikkodifikati, u 17-il ġirja sperimentali twettqu bħala bażi fuq CCD (Tabella 1). Ibbażat fuq l-istudji preċedenti tagħna, 3 varjabbli indipendenti ewlenin, inkluż il-ħin ta 'estrazzjoni (5.30 ~ 18.7 min), temperatura ta' estrazzjoni (22.4 ~ 79.6 ◦C), u konċentrazzjoni ta 'etanol (0 ~ 99.5 fil-mija), intgħażlu biex jinkiseb il-livell massimu ta' varjabbli dipendenti. [31]. Fl-iżvilupp tal-mudell tar-rigressjoni kwadratika, il-varjabbli sperimentali ġew ikkodifikati skont l-ekwazzjoni li ġejja.

xi {{0}} (Xi − X0)/∆X (1)

fejn xi huwa l-valur kodifikat tal-varjabbli Xi; X0 huwa l-valur ta' X fil-punt ċentrali, u ∆X huwa l-valur tal-bidla fil-pass.

Valuri sperimentali għal 17-il kundizzjoni b'differenzi fil-ħin tal-estrazzjoni, it-temperatura tal-estrazzjoni, u l-konċentrazzjoni tal-etanol huma murija fit-Tabella 2.

2.2. Effetti tal-Kundizzjonijiet tal-UAE fuq RSA

Skont is-17-il kundizzjoni applikata għall-estrazzjoni ta’S. thunbergiibl-użu ta' UAE,RSA kien 2.37~89.9 fil-mija, bil-valur massimu fi 12.0 ħin ta' estrazzjoni min, 51.0 ◦C temperatura ta' estrazzjoni, u 50.{{11} } fil-mija konċentrazzjoni ta 'etanol u l-valur minimu fi 12.0 ħin ta' estrazzjoni min, 51.0 ◦C temperatura ta 'estrazzjoni, u 99.5 fil-mija konċentrazzjoni ta' etanol; dan jindika li l-konċentrazzjoni tal-etanol kellha l-akbar effett fuq RSA (Tabella 2). Kif issuġġerit mis-softwer Design-Expert, intgħażlet u twaħħlet ekwazzjoni ta 'rigressjoni kwadratika għat-tliet varjabbli u tweġibiet indipendenti. F'termini ta 'valuri kodifikati, ir-risponsi mbassra għall-RSA, TIA, u CIA jistgħu jiġu espressi bl-użu ta' regressionequations kwadratiċi permezz ta 'analiżi ta' rigressjoni multipla (Tabella 3). Il-koeffiċjenti tal-mudell tas-CCD ġew validati bl-użu ta' analiżi tal-varjanza (ANOVA) għall-varjabbli tar-rispons tal-mudelli ta' kwadraticregression miġbura fil-qosor fit-Tabella 4. Jekk il-koeffiċjent ta 'determinazzjoni (R2), li jirrappreżenta l-qbil bejn il-valuri sperimentali u mbassra, huwa qrib 1, jimplika tjubija aċċettabbli ta 'tajbin [32]. L-R2 tal-ekwazzjoni tar-rigressjoni kwadratika għall-predizzjoni tal-kundizzjoni UAE ottimali b'RSA kien 0.8554, li jistabbilixxi li Greater minn jew ugwali għal 85.5 fil-mija tal-valur previst li jirriżulta jista 'jiġi spjegat kompletament, u b'hekk tirrikonoxxi l-idoneità tal-ekwazzjoni tar-rigressjoni kwadratika (Tabella 3).

Is-sinifikat ta 'kull varjabbli tal-mudell ġie determinat bl-użu ta' valuri p; valur p ta<0.05 indicates="" significance="" whereas="" a="" p-value="" of="">0.05 jindika insinifikanza fuq theRSA [33]. Ir-riżultati tal-ANOVA tal-istudju tal-ottimizzazzjoni indikaw li l-mudell kien sinifikanti (p=0.0283), li kien inqas mil-livell ta 'sinifikat stabbilit, li jindika li s-sinifikat kien rikonoxxut fi ħdan 5 fil-mija. Għalhekk, ir-riżultati jindikaw li l-mudelli jistgħu jbassru b'mod effiċjenti l-RSA, TIA, u CIA tal-estratt ta 'S. thunbergii meta l-varjabbli indipendenti kienu fil-meded murija hawn. Meta ċċekkjajna s-sinifikat ta' kull varjabbli indipendenti, sibna li l-konċentrazzjoni ta' etanol kellha l-aktar effett fuq RSA (p=0.0025), filwaqt li l-effetti tal-ħin tal-estrazzjoni (p=0.7418) u t-temperatura (p=0.=0.1622)kienu insinifikanti (Tabella 4).

Biex tevalwa l-effett ta 'kull varjabbli indipendenti fuq il-varjabbli dipendenti, weexpressed il-bidla fl-RSA skond il-ħin ta' estrazzjoni, temperatura ta 'estrazzjoni, konċentrazzjoni andethanol bħala plot perturbazzjoni (Figura 1A).

Konsegwentement, l-ogħla valur deher f'14.1 min tal-ħin tal-estrazzjoni u mbagħad naqas; il-valur massimu ġie kkonfermat f'60.7 ◦C u 46.2 fil-mija għat-temperatura ta 'estrazzjoni u l-konċentrazzjoni ta' etanol, rispettivament. Madankollu, meta tiġi viżwalizzata r-rata ta 'bidla fl-RSA minħabba l-interazzjonijiet bejn il-varjabbli bl-użu tal-kurva tal-wiċċ ta' rispons tridimensjonali, il-bidla fil-ħin tal-estrazzjoni u t-temperatura kellhom ftit effett fuq l-RSA, filwaqt li l-konċentrazzjoni tal-etanol kellha effett sinifikanti (Figura 2A, B)

Dan kien simili għar-riżultati tal-istudju minn Kim et al. l-identifikazzjoni tal-effett tal-konċentrazzjoni tas-solvent fuq l-RSA tal-estratt tal-Gynostemma pentaphyllum [34]. L-RSA kellha t-tendenza li tiżdied għal massimu u mbagħad naqset bil-konċentrazzjoni ta 'etanol, li turi l-valur massimu f'48.1 fil-mija tal-konċentrazzjoni ta' etanol. Il-bidla fil-polarità tas-soluzzjoni ta 'estrazzjoni minħabba t-taħlit ta' ilma distillat u etanol twassal għal żieda fl-effett antiossidant ta 'G. pentaphyllum u estratti ta' S. thunbergii. Barra minn hekk, dan huwa konsistenti mar-riżultati li jirrappurtaw li komposti bijoattivi solubbli fl-ilma prodotti bl-estrazzjoni ta’ ilma sħun mill-alka juru inqas attività antiossidanti u li estratti li jużaw 50 fil-mija etanol wrew attività antiossidanti ogħla, li jissuġġerixxi li l-użu ta’ solvent binarju (ilma u etanol) li jipproduċi komposti bijoattivi huwa ta 'benefiċċju biex iżid ir-rendiment tal-estrazzjoni [35,36].

2.3. Effetti tal-Kundizzjonijiet tal-UAE fuq TIA

It-TIA ta'S. thunbergiiestratti skont 17-il kundizzjoni UAE applikati għall-esperiment jidher fit-Tabella 2. Il-valur massimu TIA ta' 92.6 fil-mija ġie identifikat fi 12.0 min, 79.6 grad , u 50.{{13} } fil-mija u l-valur minimu ta' 55.3 fil-mija kien imbassar fi 12.0 min, 51.0 grad , u 0.{{20}} fil-mija tal-estrazzjoni ħin, temperatura ta 'estrazzjoni, u konċentrazzjoni ta' etanol, rispettivament. Konsegwentement, it-temperatura tal-estrazzjoni u l-konċentrazzjoni tal-etanol ġew ikkonfermati li għandhom effett sinifikanti fuq TIA. Fuq il-bażi tar-riżultati sperimentali, idderivajna ekwazzjoni ta 'rigressjoni kwadratika bl-użu ta' CCD u użajna biex inbassru l-aħjar kundizzjonijiet UAE (Tabella 3). L-R2 kien 0.8591, li jindika qbil ta '85.91 fil-mija bejn il-valuri tal-mudell imbassar u d-dejta sperimentali u jimplika li l-ekwazzjoni ta' rigressjoni kwadratika kienet adattata għat-tbassir TIA. Għat-tweġibiet ta 'RSA, TIA, u CIA, il-mudelli kienu sinifikanti ħafna meta l-valuri F ikkalkulati kienu akbar mill-valur F ikkalkulat u l-valuri tal-probabbiltà kienu baxxi (p <0.001); dan="" jindika="" li="" t-termini="" individwali="" f'kull="" mudell="" ta'="" rispons="" kienu="" sinifikanti="" f'termini="" tal-effett="" tal-interazzjoni="" [37].="" anova="" ġiet="" applikata="" biex="" tevalwa="" statistikament="" l-effett="" sinifikanti="" tal-ekwazzjoni="" tar-rigressjoni="" kwadratika.="" il-mudell="" sperimentali="" kien="" sinifikanti="" (p="0.0262)," li="" jindika="" livell="" ta="" 'sinifikat="" fi="" ħdan="" 5="" fil-mija="" (tabella="">

Meta aħna viżwalizzaw ir-rata ta 'bidla TIA bil-bidla ta' varjabbli wieħed meta jiffissaw il-valuri ta 'varjabbli oħra, varjazzjoni TIA minħabba l-konċentrazzjoni ta' etanol kienet l-akbar, b'TIA massimu misjub f'konċentrazzjoni ta 'etanol ta' 76.8 fil-mija (Figura 1B). L-interazzjonijiet tal-varjabbli indipendenti huma viżwalizzati bl-użu tal-kurva tal-wiċċ tar-rispons tridimensjonali billi simultanjament jinbidlu żewġ varjabbli (Figura 3).

Hekk kif it-temperatura tal-estrazzjoni u l-ħin jiżdiedu, TIA tiżdied inizjalment; madankollu, il-firxa tal-varjazzjoni mhix kbira, għalhekk ikkonfermajna mill-ġdid li l-effett interattiv tat-temperatura u l-ħin tal-estrazzjoni mhuwiex sinifikanti, kif determinat bl-użu tal-ANOVA (Figura 3A). Bil-maqlub, TIA żdied u naqas għal darb'oħra b'konċentrazzjoni ta 'etanol, bit-TIA massima mbassra li tkun f'konċentrazzjoni ta' etanol ta '75.6 fil-mija (Figura 3B). Dan ir-riżultat huwa konsistenti ma 'dawk tal-istudju minn Park, et al., Li wera li 70 ~ 80 fil-mija konċentrazzjoni ta' etanol twassal għal TIA ogħla mill-ilma fl-estrazzjoni ta 'komposti bijoattivi mill-estratt tar-ross selvaġġ [38]. Dak l-istudju rrapporta li l-konċentrazzjoni tal-etanol kienet varjabbli maġġuri fit-TIA u t-tendenza li tvarja fi proporzjon mal-konċentrazzjoni tal-etanol.

2.4. Effetti tal-Kundizzjonijiet tal-UAE fuq is-CIA

Meta kejlna s-CIA taħt kull waħda minn 17-il kundizzjoni, sibna li l-valur massimu tas-CIA kien 92.3 fil-mija f'16.0 min, 63.0 grad , u 80.{{ 12}} fil-mija u s-CIA minima kienet 48.1 fil-mija fi 12.0 min, 51.0 grad , u 0.0 fil-mija tal-ħin tal-estrazzjoni, temperatura tal-estrazzjoni, u l-konċentrazzjoni tal-etanol, rispettivament (Tabella 2). L-ekwazzjoni tar-rigressjoni kwadratika ġġenerata skont il-ħin tal-estrazzjoni, it-temperatura u l-konċentrazzjoni tal-etanol kellha R2 ta '0.9237, li timplika li l-varjazzjoni tal-kampjun ta' 92.37 fil-mija kienet attribwita għall-varjabbli indipendenti, u 7.63 fil-mija biss tal-varjazzjonijiet totali ma setgħux jiġu spjegati mill- mudell (Tabella 3). Dan jindika grad tajjeb ta' korrelazzjoni bejn il-valuri mbassra u sperimentali tas-CIA u jirrikonoxxi l-adegwatezza tagħha fit-tbassir tal-mudell sperimentali [39]. ANOVA wriet sinifikat statistiku (p=0.0037) taħt livell ta 'sinifikat ta' 1 fil-mija u kkonfermat li t-temperatura ta 'estrazzjoni (p=0.0030) u l-konċentrazzjoni ta' etanol (p=0.0006) fost it-termini lineari kien hemm varjabbli indipendenti li affettwaw b'mod sinifikanti s-CIA (Tabella 4).

Biex nevalwaw l-effetti ta 'kull varjabbli indipendenti fuq is-CIA, qabbilna CIA mal-bidla f'varjabbli waħda bl-użu ta' plott ta 'perturbazzjoni (Figura 1C). Hekk kif il-varjabbli indipendenti żdiedet, is-CIA inizjalment żdiedet għall-valur massimu, u l-konċentrazzjoni tal-etanol instabet li kienet l-aktar influwenti. Il-kurva tal-wiċċ ta 'rispons tridimensjonali rrappreżentat bidla tas-CIA minħabba l-effetti interattivi ta' varjabbli indipendenti, li kellhom it-tendenza li jiżdiedu u jonqsu bil-ħin tal-estrazzjoni u l-konċentrazzjoni tal-etanol. CIA żdied biż-żieda fil-ħin ta 'estrazzjoni u l-konċentrazzjoni ta' etanol, li turi s-CIA massima f'12.1 min ta 'ħin ta' estrazzjoni u 73.6 fil-mija ta 'konċentrazzjoni ta' etanol. Il-bidliet fis-CIA b'temperatura ta 'estrazzjoni u konċentrazzjoni ta' etanol f'ħin ta 'estrazzjoni kostanti wkoll kellhom it-tendenza li jkunu l-istess; madankollu, il-varjazzjonijiet fis-CIA b'konċentrazzjoni ta' etanol kienu kkonfermati li huma aktar sinifikanti (Figura 4B).

Il-valur massimu tas-CIA mbassar minn CCD kien 93.8 fil-mija b'ħin ta 'estrazzjoni ta' 14.5 min, temperatura ta 'estrazzjoni ta' 65.1 ◦C, u konċentrazzjoni ta 'etanol ta' 69.3 fil-mija. Dan kien aktar mid-doppju tad-39.4 fil-mija u 40.3 fil-mija tas-CIA għall-estratti tat-tè aħdar u l-ilma sħun tat-te abjad misjuba fi studju preċedenti [40]. Bħala konklużjoni, il-S. thunbergiiestratt kien ikkunsidrat kapaċi li jiġi utilizzat bħala ingredjent kożmetiku funzjonali biex inaqqas it-tikmix, peress li jrażżan l-attività tal-collagenase.

2.5. Ottimizzazzjoni tal-Proċess tal-UAE

Biex tidentifika l-aħjar kundizzjoni UAE għall-estrazzjoni tajbajdu l-ġildau komposti bijoattivi kontra t-tikmix mill-estratt ta 'S. thunbergii, ksibna punt ottimali formaximizing l-varjabbli dipendenti billi jikkoinċidu l-uċuħ tar-rispons individwali ofRSA, TIA, u CIA (Figura 5).

Meta l-firxa ta 'varjabbli indipendenti kienet limitata għal ħin ta' estrazzjoni ta '5.3 0 ~ 18.7 min, temperatura ta' estrazzjoni ta '22.4 ~ 79.6 ◦C, u konċentrazzjoni ta' etanol ta '0 ~ 99.5 fil-mija, il-kundizzjoni UAE ottimali kienet imbassra li jkun ħin ta 'estrazzjoni ta' 12.0 min, temperatura ta 'estrazzjoni ta' 65.2 ◦C, u konċentrazzjoni ta 'etanol ta' 53.5 fil-mija. Il-kundizzjoni ottimali tal-UAE ġiet idderivata abbażi tal-kriterji ta 'minimizzazzjoni tal-ħin tal-estrazzjoni minħabba li żmien qasir tal-proċess huwa ta' benefiċċju fit-tnaqqis tal-ispejjeż tal-proċess. Taħt l-aħjar kundizzjoni UAE derivata, 86.5 fil-mija, 88.3 fil-mija, u 91.4 fil-mija ofRSA, TIA, u CIA, rispettivament, kienu mbassra. Fi studji preċedenti, Yuan et al. irrapporta li l-kundizzjonijiet ottimali għall-estrazzjoni ta 'komposti bijoattivi minn S. thunbergii kienu kif ġej: proporzjon likwidu għal solidu ta' 120 mL / g, ħin ta 'estrazzjoni ta' 210 min, u temperatura ta 'estrazzjoni ta' 97 ◦C [41]. Filwaqt li Yuan et al. ottimizzat il-kondizzjonijiet ta 'estrazzjoni ta' ilma sħun għall-estrazzjoni ta 'komposti bijoattivi, fl-istudju preżenti, il-kundizzjonijiet UAE għall-estrazzjoni ta' komposti bijoattivi ġew ottimizzati. Għalhekk, il-kundizzjonijiet UAE taħt ħin qasir ta 'estrazzjoni u temperatura baxxa ġew ippruvati li huma proċess ta' estrazzjoni effettiv għall-komposti bijoattivi meta mqabbla mal-proċessi preċedenti ta 'estrazzjoni ta' ilma sħun.

Biex tivverifika r-riżultati, sar esperiment ta 'konferma bi tliet repliki fl-aħjar kundizzjoni kif previst mill-mudell CCD. Meta l-valuri sperimentali ta 'RSA, TIA, u CIA ġew evalwati taħt l-aħjar kondizzjoni, kienu 88.9 fil-mija ± 3.11 fil-mija, 85.1 fil-mija ± 2.76 fil-mija, u 89.7 fil-mija ± 4.09 fil-mija, rispettivament, u wrew a qbil qawwi mal-valuri tal-mudell ta' tbassir (p > 0.05). Għalhekk, il-valuri sperimentali kienu jaqblu tajjeb mal-valuri mbassra, li jipprova l-affidabbiltà tar-riżultati tal-ottimizzazzjoni tal-UAE.

2.6. Espressjoni ta' mRNA ta' TRP-1, MMP-1, u MMP-9

TRP-1 jiffunzjona bħala 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase, li huwa magħruf bħala l-kawża ewlenija tal-pigmentazzjoni tal-ġilda li taġixxi bl-istimulazzjoni tat-tyrosinase u l-eumelaninsynthesis fiċ-ċelloli epiteljali [42]. B'kuntrast, l-MMP-1 u l-MMP-9 ikissru l-collagen tat-tip 1, li jagħmel 90 fil-mija tas-saff tal-ġilda, u b'hekk jikkawża degradazzjoni tal-kollaġen, telf ta' elastiċità, u tixjiħ tal-ġilda [43].

F'dan l-istudju,S. thunbergiiestratt ġie prodott bl-użu tal-kundizzjonijiet UAE ottimali stabbiliti permezz ta 'ottimizzazzjoni bbażata statistikament, u l-estratt ġie ttestjat fuq linji taċ-ċelluli B{{0}}F0 biex jiġi evalwatjbajdu l-ġildaukontra t-tikmixproprjetajiet billi tqabbel il-livelli ta' espressjoni tal-RNA ta' TRP{{0}}, MMP-1, u MMP-9. Il-livell ta' espressjoni ta' TRP-1, ġene ewlieni relatat mas-sintesi tal-melanin, instab li kien dipendenti fuq il-konċentrazzjoni f'S. thunbergii estratt u naqas b'mod sinifikanti wara t-trattament b'1 u 2 mg/mL ta 'estratt meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll (p <0.05) (figura="">

Sibna wkoll li l-espressjonijiet ta 'MMP{{{{10}}}} u MMP-9 naqsu proporzjonalment mal-konċentrazzjoni tal-estratt ta' S. thunbergii (Figura 6B, C). B'mod partikolari, il-livelli ta' espressjoni ta' MMP{3} u MMP -9 ġew inibiti b'58.6 fil-mija u 78.8 fil-mija, rispettivament, fil-grupp ittrattat b'2 mg/mL ta' estratt ta' S. thunbergii meta mqabbel mal-gruppi ta' kontroll (p < 0.05).="" mir-riżultati="" ta'="" hawn="" fuq,="" ġie="" kkonfermat="" li="" l-estratt="" ta'="" s.="" thunbergii="" prodott="" taħt="" l-aħjar="" kundizzjonijiet="" uae="" jista'="" effettivament="" jinibixxi="" l-espressjonijiet="" ta'="" mrna="" ta'="" trp-1,="" mmp-1,="" u="" mmp-9="" inb16-="" linji="" taċ-ċelluli="" f0,="" u="" b'hekk="" jinibixxu="" l-produzzjoni="" tal-melanin="" u="" d-dekompożizzjoni="">

2.7. Identifikazzjoni ta 'Aċidu Kaffejku fl-Estratt ta' S. thunbergii

F'esperiment preċedenti, l-UAE kondizzjonijiet biex timmassimizza l-antiossidant, jbajdu l-ġilda, ukontra t-tikmixl-effetti tal-estratt ta 'S. thunbergii ġew ottimizzati; madankollu, kienu meħtieġa aktar studji biex jiġu esplorati l-ingredjenti bijoattivi fl-estratt. Għalhekk, komposti fenoliċi minnS. thunbergiiestratt ġew identifikati bl-użu ta 'kromatografija likwida-tandem spettrometrija tal-massa (LC-MS/MS), peress li din it-teknoloġija tippermetti l-identifikazzjoni preċiża ta' komposti fenoliċi b'karatterizzazzjoni strutturali u s-sejbien ta 'molekuli żgħar f'sorsi naturali. L-identifikazzjoni tal-qċaċet kienet ibbażata fuq il-ħin ta 'żamma (RT), joni prekursuri, u jonji framment relatati tal-istandards. Fis-sistema LC-MS/MS, l-aċidu caffeic wera quċċata f'1.95 min ta 'RT (Figura 7).

Fil-modalità ta 'jone negattiv, il-jone m/z 179.10, li wera wieħed miż-żewġ qċaċet tal-jone fl-ispettru tal-massa, jikkorrispondi għall-formula molekulari ta' aċidu caffeic u framment separat tal-jone ta 'm/z 135.56. Ġeneralment, wara dissoċjazzjoni kkaġunata mill-ħabta, il-komposti fenoliċi jipproduċu jone framment ikkaratterizzat mit-telf ta 'CO2 (44 Da) mill-grupp ta' l-aċidu karboksiliku. Minħabba dan it-telf, il-qsim sussegwenti tal-44-Da CO2 minn theion f'm/z 179.10 ta l-jone f'm/z 135.56. L-aċidu kaffejku huwa kompost fenoliku C{6-C3 prodott minn phenylalanine jew tyrosine minn pjanti permezz tal-mogħdija tax-shikimate tal-metaboliżmu sekondarju u huwa rappreżentant tal-klassi tal-aċidu ċinnamiku (jew phenylpropanoid). Jidħol fid-dieta tal-bniedem permezz ta 'diversi ħxejjex u frott [44]. F'dawn l-aħħar snin, bosta studji wrew li l-konsum ta 'aċidu kaffejku għandu bosta benefiċċji għas-saħħa minħabba l-proprjetajiet antiossidanti li jgħinu jipprevjenu diversi mard assoċjat ma' stress ossidattiv [45]. Għalhekk, dan l-istudju dwar il-komposti fenoliċi huwa utli ħafna u jista' jkollu rwol importanti fil-proċess tal-kontroll tal-kwalità u l-esplorazzjoni futura ta' S. thunbergiias ingredjent b'jbajdu l-ġildaukontra t-tikmixproprjetajiet.

3. Materjali u Metodi

3.1. Materjali u Reaġenti

S. thunbergiimiġbura mill-kosta tan-nofsinhar tal-Gżira ta' Jeju, il-Korea, f'Ottubru tat-2019 inxtara f'Para Jeju (Jeju, Korea). Qabel l-esperiment, S. thunbergii kien trab taħt 0.42 mm bl-użu ta 'grinder (HMF-3000S, Hanil Co., Wonju, Korea) u maħżun fi friġġ f'-5◦C. L-etanol għall-estrazzjoni tas-solvent inxtara minn SamchunChemical Co. (95.0 v/v fil-mija, Pyungtaek, Korea). Aċidu askorbiku (vitamina Ċ), arbutin, aċidu andkojiku użati bħala standards għal testijiet ta 'kontroll inxtraw minn Sigma-Aldrich Co., Ltd.(St. Louis, MO, USA). Il-kimiċi l-oħra kollha użati f'dan l-esperiment kienu ta 'grad analitiku.

3.2. Proċess UAE

Trab imnixxef tal-kampjun (1 g) tpoġġa ġo reċipjent taħt pressjoni (XF100, AntonPaar Co., Ltd., Graz, Awstrija) b'10 mL tas-solvent u mħallat bl-użu ta' vortex mixer (VM-10, Daihan sci. Co., Wonju, Korea) għal 1 min. Dawn il-kampjuni ġew estratti taħt kundizzjonijiet UAE 17individual derivati ​​minn CCD b'ħin ta 'estrazzjoni ta' 5.30 ~ 18.7 min, temperatura ta 'estrazzjoni ta' 22.4 ~ 79.6 ◦C, u konċentrazzjoni ta 'etanol ta' 0.0 ~ 99.5 fil-mija. UAE wasconducted permezz ta 'apparat ultrasoniku (SD-D250H, Sungdong Co., Seoul, Korea) b'qawwa elettrika ta' 200 W u frekwenza ta '40 kHz mgħammra b'arloġġ diġitali u kontrollur tat-temperatura. Wara l-estrazzjoni, is-supernatant ġie separat f'10,000 rpm għal 10 min bl-użu ta 'ċentrifuga (1236R, Labogene Co., Daejeon, Korea). Imbagħad is-soluzzjoni ġiet iffiltrata minn filtru tad-diska tal-aċetat taċ-ċelluloża b'porożità ta' 0.45 µm u użata għall-analiżi RSA, TIA, u CIA (Figura 8).

3.3. Disinn ta' Esperiment

Intuża softwer Design-Expert (Ver. 8.0, Stat-Ease, Minneapolis, MN, USA) biex jimmassimizza l-estrazzjoni ta’ komposti bijoattivi minnS. thunbergiipermezz tal-ottimizzazzjoni tal-kundizzjonijiet UAE bl-użu tas-CCD. Bħala varjabbli indipendenti, varjabbli ewlenin inklużi l-ħin tal-estrazzjoni (X1), it-temperatura tal-estrazzjoni (X2) u l-konċentrazzjoni tal-etanol (X3) ġew magħżula, u ġew ikkodifikati f'5 (-1.68, -1, 0, 1, 1.68) livelli , kif muri fit-Tabella 1. RSA, TIA, u CIA ġew stabbiliti bħala varjabbli dipendenti affettwati minn varjabbli indipendenti ewlenin.Valuri sperimentali nkisbu taħt 17-il kundizzjoni ġġenerata mill-CCD, u l-korrelazzjoni ta 'kull varjabbli indipendenti u dipendenti ġiet ikkwantifikata bl-użu ta' ekwazzjoni kwadratika ta 'gregressjoni [46]. L-ekwazzjoni ta' rigressjoni kwadratika li ġejja ntużat biex tikkalkula valuri varjabbli dipendenti skont bidliet fil-varjabbli indipendenti:

Y = β0 + k ∑ i = 1 βiXi + k ∑ i = 1 βiiX 2 i + k ∑ i>1 ijXiXj(2)

fejn Y tirrappreżenta l-varjabbli dipendenti (RSA, TIA, CIA), 0 huwa koeffiċjent kostanti, u k hija varjabbli tat-test. i, ii, u ij huma l-koeffiċjenti ta' rigressjoni għat-termini lineari, kwadratiċi u ta' interazzjoni, rispettivament.

Biex jiġi evalwat il-mudell imbassar fuq il-varjabbli indipendenti, saret analiżi tal-varjanza (ANOVA) b'livell ta 'fiduċja ta' 95 fil-mija biex jiġi evalwat l-effett ta 'kull varjabbli inkluż it-temperatura tal-estrazzjoni, il-ħin u l-konċentrazzjoni tal-etanol. Barra minn hekk, il-koeffiċjent ta 'rigressjoni (R2), il-valur p tal-mudell ta' rigressjoni, intuża biex jiddetermina l-fitness tal-mudell ta 'rigressjoni [47].

3.4. Assaġġ ta 'Attività ta' Tkessiħ Radikali (RSA).

L-effett antiossidant ta 'S. thunbergiil-estratt ġie vvalutat abbażi tal-attività ta' tkessiħ tagħhom fuq radikali ħielsa 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH, Sigma-Aldrich) bl-użu ta' analiżi DPPH modifikat [48]. Is-soluzzjoni tal-istokk ġiet ippreparata billi tħoll 0.1 M DPPH bil-metanol u mbagħad inħażen f'temperatura tal-kamra. Is-soluzzjoni dilwita ta’ DPPH bil-metanol ġiet ippreparata biex tikseb assorbenza ta’ 1.0 ± 0.{02 f’517 nm bl-użu ta’ UV-visspectrophotometer (Optizen 2120UV, Mecasys, Daejeon, Korea) . Alikwot ta' 1.25 mL ta' soluzzjoni DPPH tħallat ma' 0.25 mL ta' estratt dilwit ta' S. thunbergii (50-500 mg/mL) u jitħalla joqgħod f'temperatura tal-kamra fid-dlam għal 20 min. Il-bidla tal-assorbiment ġiet immonitorjata f'517 nm, u l-RSA ġiet ikkalkulata bl-użu tal-formula li ġejja:

RSA ( fil - mija )={1 −Abs (kampjun) / Abs (kontroll)} × 100 (3)

fejn l-Abs(kontroll) huwa l-assorbiment tal-kontroll u l-Abs(kampjun) huwa l-assorbiment tal-estratt. L-istess konċentrazzjoni ta 'aċidu askorbiku (50-500 mg/mL) intużat bħala kontroll apożittiv.

3.5. Assaġġ tal-Attività Inibitorja tat-Tyrosinase (TIA).

It-TIA tkejjel skont il-metodu rrappurtat minn Yagi [49]. It-taħlita ta' reazzjoni kienet fiha 0.4 mL ta' buffer tal-fosfat tas-sodju (67 mM, pH 6.8), 0.2 mL ta' 10 mM3,{{10}} dihydroxy phenylalanine (L-DOPA, Sigma-Aldrich), 0.2 mL ta 'faqqiegħ tyrosinase (125 unità/mL, Sigma-Aldrich), u 0.2 mL ta' soluzzjoni ta 'estratt. Ir-reazzjoni twettqet f'25 ◦C għal 30 min. Wara r-reazzjoni, l-assorbiment tkejjel f'475 nm, u r-riżultati ġew imqabbla mal-kontroll. It-TIA ġie kkalkulat skont l-ekwazzjoni ta’ hawn taħt:

TIA ( fil - mija )={1 −Abs (kampjun) / Abs (kontroll)}× 100 (4)

fejn l-Abs(kontroll) huwa l-assorbiment tal-kontroll u l-Abs(kampjun) huwa l-assorbiment tal-estratt.

cistanche tnaqqas l-attività tyrosinase

3.6. Assaġġ tal-Attività Inibitorja tal-Collamase (CIA).

L-assaġġ tas-CIA sar skont il-metodu rrappurtat minn Wünsch u Heindrich [50]. Collagenase (0.2 mg/mL, Sigma-Aldrich) ġie maħlul fi 0.1 M Tris–HCl (pH 7.5). Is-sottostrat, 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-Pro-Leu-Gly-Pro-Arg (0.4 mg/mL, Sigma-Aldrich), ġie maħlul fi 0.1 M Tris–HCl (pH 7.5) li fih 4 mM CaCl2. Taħlita ta' reazzjoni għall-evalwazzjoni tal-idroliżi tal-kollaġen kien fiha collagenase (75 µL), kampjun (50 µL), u soluzzjonijiet ta' substrat (125 µL). Għall-grupp ta' kontroll, 50 µL ilma distillat ġie miżjud fit-taħlita ta' reazzjoni minflok l-estratt. It-taħlita tħalliet tinkuba f'temperatura ta '37 ◦C għal 30 min, u 0.25 mL ta' aċidu ċitriku 25 mM ġew miżjuda għat-terminazzjoni tar-reazzjonijiet tal-enżimi. Wara li tħallat ma 'l-aċetat ta' l-etil, is-supernatant ġie separat, u l-assorbiment tkejjel f'320 nm. Il-perċentwal ta' inibizzjoni ġie kkalkulat skont il-formula li ġejja:

CIA ( fil - mija ) ={1 −Abs (kampjun)/Abs (kontroll)}× 100 (5)

fejn l-Abs(kontroll) huwa l-assorbiment tal-kontroll u l-Abs(kampjun) huwa l-assorbiment tal-estratt.

3.7. Validazzjoni tal-Mudell

Il-kundizzjonijiet ottimizzati għall-UAE (ħin ta 'estrazzjoni, temperatura ta' estrazzjoni, konċentrazzjoni u etanol) ġew ivvalidati bl-evalwazzjoni in vitro tal-attività antiossidanti,jbajdu l-ġilda, u effetti kontra t-tikmix (RSA, TIA, u CIA) skond il-valuri miksuba minn CCD. It-tweġibiet kollha reġgħu ġew determinati taħt il-kundizzjoni ottimizzata tal-UAE. Il-valuri sperimentali tqabblu ma' dawk imbassra mill-mudell sabiex tiġi vvalutata l-validità tiegħu. Twettqet analiżi LC-MS/MS fuq l-estratti ġenerati taħt l-aħjar kundizzjoni biex jinstabu l-komponenti ewlenin fil-S. thunbergiiestratt.

3.8. Kultura taċ-Ċelloli

Iċ-ċelloli tal-melanoma B{{0}}F0 inxtraw mill-Korean Cell Line Bank Co. (KCLB, Seoul, Korea) u ġew ikkultivati ​​fil-mezz Eagle modifikat ta' Dulbecco (DMEM, Gibco BRL Co., Ltd., Gaithersburg). , MD, USA) kontenut b'10 fil-mija serum bovin tal-fetu, u 1 fil-mija peniċillina (Thermo Fisher Sci. Inc., Waltham, MA, USA). Iċ-ċelloli ġew inkubati f'37 ◦C b'5 fil-mija CO2(MCO-5AC, Sanyo Co., Ltd., Tokyo, Japan) u mkabbra bħala monosaff f'25 cm2culture flasks. Meta linja taċ-ċelluli laħqet madwar 80 fil-mija ta 'konfluwenza, is-sottokultura saret billi ttrattat bi trypsin-EDTA biex jinkisbu ċelluli singoli biex jiżguraw tkabbir u saħħa xierqa taċ-ċelloli.

3.9. Reazzjoni tal-Katina tal-Polymerase Traskrizzjoni Reverse (RT-PCR)

Għat-twettiq ta 'RT-PCR, 1.0 × 106 ċelluli ġew ibbanjati għal kull bir ta' 24-pjanċa tal-bir. TotalRNA ġie estratt miċ-ċelloli b'kit ta 'estrazzjoni ta' RNA universali AccuPrep (BioneerCo., Daejeon, Korea). It-traskrizzjoni inversa twettqet b'0.5 µg ta' sintesi totali ta' RNA forcDNA bl-użu tat-taħlita prinċipali tal-platinu ta' sintesi amfiRivert cDNA (GenDEPOTCo., TX, USA). cDNA ġie amplifikat ma 'kull primer, bħal TRP-1, MMP-1, MMP-9, u -actin (Tabella 5). PCR twettqet f'volum ta' 20 µL li kien fih 1 µL cDNA, 10 µLTaq Premix (Genet bio, Daejeon, Korea), u 9 µL diethylpyrocarbonate (DEPC). Il-kundizzjonijiet tal-PCR kienu kif ġej: 94 ◦C għal 5 min, segwiti minn 25 ċiklu f'95 ◦C għal 5 s, 60 ◦C għal 31 s (għal TRP-1) jew 55 ◦C għal 30 s (għal MMP{{ {26}}) jew 59 ◦C għal 30 s (għal MMP-9), u 72 ◦C għal estensjoni ta' 30 s. Kull prodott PCR ġie elettroforizzat fuq ġel agarose 1 fil-mija u viżwalizzat bl-użu tas-sistema Gel Doc TM XR plus u softwer tal-kwantità waħda (Bio-Rad Co., Hercules, CA, USA). L--actin bħala ġene tad-dar intuża biex jinnormalizza l-livelli ta' espressjoni ta' TRP-1, MMP-1, u MMP-9.

3.10. Analiżi LC-MS/MS

Is-separazzjoni kromatografika tal-estratt ta 'S. thunbergii saret bl-użu ta' Finni gan Surveyor Plus HPLC System (Thermo Electron Corporation, San Jose). Is-separazzjoni inkisbet bl-użu ta’ kolonna ROC C18 b’tul ta’ kolonna ta’ 150 mm, dijametru intern ta’ 3 mm u daqs ta’ partiċelli ta’ 3 µm (RESTEK Co., Bellefonte, PA, USA) waqt li ntuża gradenteluzzjoni ta’ 0.1 fil-mija aċidu formiku fl-ilma (fażi mobbli A) u 0.1 fil-mija aċidu formiku f'acetonitrile (fażi mobbli B) b'rata ta 'fluss ta' 0.2 mL/min, kif ġej: 5 fil-mija sa 100 fil-mija fażi mobbli B għal 11 min, 100 fil-mija sa 5 fil-mija fażi mobbli B għal 4 min, 37 fil-mija fażi mobbli B għal 2 min, 37 fil-mija sa 10 fil-mija fażi mobbli B għal 0.1 min, u 10 fil-mija fażi mobbli B għal 2.4 min . Il-volum tal-injezzjoni kien 10 µL, u l-kolonna nżammet fi 30 ◦C. Esperimenti spettrometriċi tal-massa saru bl-użu ta 'spettrometru ta' quadrupolemass triplu Thermo Finnigan TSQ Quantum Ultra EMR (Thermo Fisher Sci. Inc., Waltham, MA, USA). L-S. thunbergii extractwas analizzati mill-jonizzazzjoni elettrospray negattiva bl-użu ta 'jonizzazzjoni elettrospray (ESI), speċifikament bl-użu tal-mod ta' sprej tal-jone turbo. Is-settings tas-sors ESI għall-jonizzazzjoni tal-estrazzjoni ta 'S. thunbergii fil-mod negattiv kienu kif ġej: temperatura tal-gass, 270 ◦C;fluss tal-gass, 19 L/min; temperatura tal-gass għant, 400 ◦C; fluss tal-gass għant, 10 L/min; vultaġġ kapillari, 3000 V; vultaġġ taż-żennuna, 1000 V. Spettri tal-massa ġew irreġistrati fil-jonemode negattiv bejn 100 u 500 m/z bl-użu tan-nitroġenu bħala l-gass tal-ħabta. L-analiżi tal-komponenti ewlenin filS. thunbergiiestratt sar billi tqabbel il-molekulari miksuba u l-mudelli ta 'frammentazzjoni tar-riżultati LC-MS/MS b'dejta mil-letteratura u b'librerija tal-massa għall-komposti standard.

4. Konklużjonijiet

Dan l-istudju ppropona l-aħjar kundizzjonijiet għall-proċess tal-UAE li jistgħu jimmassimizzaw l-antiossidanti,jbajdu l-ġilda, ukontra t-tikmixeffetti għall-produzzjoni ta 'komposti bijoattivi b'valur miżjud minn S. thunbergii, li huma mifruxa fil-kosta subtropikali tal-Asja tax-Xlokk, li jikkawżaw tniġġis tal-baħar u disturb ekoloġiku. L-iktar varjabbli influwenti fit-twettiq tal-ottimizzazzjoni tal-UAE kienet il-konċentrazzjoni tal-etanol, li kkonfermat li d-determinazzjoni tal-użu u l-konċentrazzjoni ta 'solventi binarji li jikkonsistu f'ilma u etanol kienet konsiderazzjoni importanti fl-UAE. Meta tgħaqqad kull wiċċ ta 'rispons għall-ottimizzazzjoni simultanja ta' RSA, TIA, u CIA, ħin ta 'estrazzjoni ta' 12.0 min, temperatura ta 'estrazzjoni ta' 65.2 ◦C, u konċentrazzjoni ta 'etanol ta' 53.5 fil-mija kienu mbassra, taħt liema kundizzjonijiet RSA ġew identifikati valuri ta' 86.5 fil-mija, valuri TIA ta' 88.3 fil-mija, u valuri CIA ta' 91.4 fil-mija.

Meta l-effetti ta' TRP-1, MMP-1, u MMP-9 fuq l-espressjoni ġew evalwati fil-livell ta' mRNA bl-użu ta' estratt ta' S. thunbergii prodott taħt l-aħjar kundizzjonijiet UAE, kien ikkonfermat li l-estratt ta' S. thunbergii jista' jnaqqas il-livelli ta' mRNA ta' TRP-1, MMP-1, u MMP-9 u b'hekk jipprevjeni l-produzzjoni tal-melanin kif ukoll id-dekompożizzjoni tal-kollaġen tal-ġilda.

Għalhekk,S. thunbergiiestratt huwa mistenni li jiġi utilizzat b'mod wiesa 'bħala sors ġdid mill-bijomassa marittima fil-produzzjoni ta' ingredjenti funzjonali għall-kożmetiċi, ikel, u mediċini. Barra minn hekk, il-proċess ta 'estrazzjoni ta' komposti bijoattivi bl-użu tal-UAE huwa maħsub li jipprovdi dejta fundamentali dwar l-iżvilupp tal-proċess u jikkontribwixxi għall- determinazzjoni ta' kundizzjonijiet ottimali ta' estrazzjoni fil-produzzjoni ta' ingredjenti funzjonali ġodda minn S.thunbergii u makroalka oħra.