Bidliet fl-attività anti-ossidanti waqt il-fermentazzjoni tal-enzimi

Kapitolu 4 Bidliet fl-attività anti-ossidanti waqt il-fermentazzjoni tal-enzimi

Il-frott huwa rikk fin-nutrijenti u jidħol f'ħafna varjetajiet. Il-produzzjoni ta 'sustanzi waqt il-fermentazzjoni hija kumplessa u varjata, u hemm ħafna studji fuqhomAttività anti-ossidanti- In-nies dejjem qed jesploraw u jiskopru, ifittxu ikel li huwa ta 'benefiċċju għalihSaħħa tal-Bniedem, għalhekk l-enzimi saru suġġett jaħraq f'dawn l-aħħar snin. Il-proċess tradizzjonali tal-produzzjoni tal-enzimi huwa li jinkisbu enzimi permezz ta 'fermentazzjoni naturali ta' frott u ħaxix. Ibbażat fuq riċerka preċedenti, dan l-artikolu jżid 4 batterji ta 'fermentazzjoni ta' benefiċċju. Din il-batterja nnifisha teżisti wkoll fl-enzima. Wara ż-żieda addizzjonali ta 'batterji, in-numru u t-tip ta' mikro-organiżmi fil-proċess ta 'fermentazzjoni huma mibdula. X'effett se jkollha din il-bidla fuq l-attività anti-ossidanti tagħha? Fil-kapitolu ta 'qabel, ħadna t-tuffieħ bħala eżempju għal spjegazzjoni dettaljata. It-tqabbil tal-attività anti-ossidanti tal-grupp sperimentali u l-grupp ta 'kontroll f'konċentrazzjonijiet ta' enzimi differenti wrew li l-attività anti-ossidanti ta 'l-enzima fil-grupp sperimentali kienet ikbar minn dik tal-grupp ta' kontroll. L-intensità tal-attività anti-ossidanti tirrifletti wkoll l-affidabbiltà tal-enzima b'ċertu mod.

Herbs ġodda cistanche b'qawwa anti-ossidanti qawwija

 

Servizz ta 'appoġġ ta' Wecistanche-L-akbar esportatur ta 'Cistanche fiċ-Ċina:
Email: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp / Tel: +86 15292862950

 

Dan il-kapitolu jżid il-lanġas tal-frott komuni u ċ-ċitru mal-esperiment oriġinali, u jsegwi u jiskopri l-bidliet fihomAttività anti-ossidantiwaqt il-fermentazzjoni. Fuq il-bażi tat-tnaqqis tal-ispejjeż, permezz ta 'esperimenti, nittamaw li nirriflettu b'mod aktar komprensiv l-attività bijoloġika ta' l-enzimi wara li jiżdiedu l-batterji, u nipprovdu ċertu bażi teoretika u appoġġ tad-dejta għall-produzzjoni ta 'enzimi mikrobjali By Inokulazzjoni artifiċjali ta 'razez.

 

 

 

4.1 Materjali u Metodi

4.1.1 Materjali

(1) Materjali sperimentali

Aħsel tuffieħ frisk, lanġas u frott taċ-ċitru b'ilma sterili f'kundizzjonijiet sterili, nixxefhom b'mod naturali fuq mejda operattiva sterili, qaxxarhom u aqta'hom għal użu aktar tard. Żid iz-zokkor abjad u l-frott ma 'vażett tal-ħġieġ sterilizzat fi proporzjon tal-massa ta' 1: 1. Attiva l-batterja meħtieġa għall-esperiment u tlaqqamhom fl-enzima skont l-iskema ottima (din il-pass ta 'operazzjoni titħalla barra għall-grupp ta' kontroll), tissiġillaha u poġġih f'post frisk u niexef. Ħu kampjuni f'perjodi ta 'żmien differenti ta' fermentazzjoni f'temperatura tal-kamra biex tikseb il-likwidu tal-enzima kollha li jkun fih il-polpa tal-frott, u ffiltrah. Ħu s-supernatant bħala l-kampjun sperimentali, u użaha biex tkejjel id-dejta rilevanti wara li tiċċentrifugaha f'10, 000 RPM f'ċentrifuga b'veloċità għolja għal 15-il minuta. Ta 'min jinnota li fil-proċess li jsiru enzimi, sabiex tiġi evitata kontaminazzjoni bla bżonn, l-operazzjonijiet kollha tagħna jitwettqu f'kundizzjonijiet sterili.

(2) Strumenti ewlenin

L-istrumenti meħtieġa għall-esperiment huma l-istess bħal 3.1.1 (2).

 

4.1.2 Metodi

(1) Bidliet fil-kontenut totali tal-fenol waqt il-fermentazzjoni

Ġew miżjuda 450μl ta 'soluzzjoni tal-kampjun b'ilma distillat biex tagħmel il-volum 46ml, u mbagħad ġie miżjud 1ml ta' reaġent ta 'folin-fenol. Ħallat sew u rreaġixxi għal 3min. Imbagħad ġie miżjud 3ml ta '20% NaCO3. It-taħlita kienet imħawwda f'banju tal-ilma tat-temperatura kostanti f'25 grad għal 2h. L-ilma distillat intuża bħala kontroll vojt. L-assorbenza A ġiet imkejla fi 760nm bi spettrofotometru. Saru tliet repliki għal kull trattament. Il-kontenut totali tal-fenol ġie kkalkulat skont l-ekwazzjoni tal-kurva standard.

(2) Bidliet fit-tnaqqis tal-qawwa waqt il-fermentazzjoni

Żid 45 0 μl ta 'kampjun ma' 2.5ml ta 'buffer tal-fosfat b'konċentrazzjoni ta' 0. 2mol / L u valur ta 'pH ta' 6.6, imbagħad żid 2.5ml ta 'ferricyanide tal-potassju (w / v) b'konċentrazzjoni tal-massa ta' 1%, tirreaġixxi f'5 0 grad għal 30 minuta, Żid (w / v) b'konċentrazzjoni tal-massa ta '10%, ċentrifuga fi 3000rpm għal 10 minuti, ħu u immedjatament iġbed 2.5ml ta' supernatant fi flixkun volumetriku, żid 2.5ml ta 'ilma distillat u 0.5ml ta' kloridu ferriku (w / v) b'konċentrazzjoni tal-massa ta '0.1%. Uża ilma distillat bħala kontroll vojt, u kejjel l-assorbenza A f'tul ta 'mewġa ta' 700nm bi spettrofotometru. Wettaq 3 repliki għal kull trattament. Is-saħħa tat-tnaqqis tal-qawwa hija ddeterminata abbażi tal-valur tal-assorbenza.

 

(3) Bidliet fil-kapaċità ta 'tfarfir radikali tas-superossidu waqt il-fermentazzjoni
Poġġi 4.5 ml ta '0. {{{1 0}} 5 mol / L pH 8.2 buffer Tris-HCl f'banju tal-ilma tat-temperatura kostanti u aġġusta t-temperatura għal 25 grad. Wara 20 min, żid 1 ml ta 'soluzzjoni tal-kampjun tal-enzima u 0.4 ml ta' soluzzjoni ta 'pyrogallol b'konċentrazzjoni molari ta' 25 mmol / L. Ħallat sew u poġġi f'banju tal-ilma ta '25 grad għal 5 min. Żid 1.0 ml ta '8 mol / L HCl biex ittemm ir-reazzjoni. Uża buffer Tris-HCl bħala referenza u uża spettrofotometru biex tkejjel l-assorbenza A f'299 nm biex tikkalkula r-rata ta 'tħaffir. Il-grupp ta 'kontroll vojt juża 1 ml ta' solvent minflok kampjun. Ir-rata ta 'tfarfir radikali tas-superoxide hija kkalkulata skond il-Formula 4.1: Rata ta' Scavenging Radical Superoxide Anion (%)=(a {1- a2) / a1 × 100 (4.1) fejn: A1 hija l-assorbenza tal-grupp ta 'kontroll vojt; A2 hija l-assorbenza tas-soluzzjoni tal-kampjun tal-enzima tal-grupp sperimentali.

 

(4) Bidliet fil-kapaċità ta 'ħmieġ ta' radikali idrossiliċi waqt il-fermentazzjoni

 

Żid l-ilma ma '45 0 μL Soluzzjoni tal-kampjun ma' 2ml, imbagħad żidha ma '1.4ml ta' perossidu ta 'l-idroġenu b'konċentrazzjoni ta' massa molari ta '6mmol / L, imbagħad żid 0.6ml ta' salicylate ta 'sodju b'konċentrazzjoni ta' massa molari ta '20mmol / L u 2ml ta' sulfat tal-ħadid b'konċentrazzjoni tal-massa molari ta ' banju f'37 grad għal 1h. Żero b'ilma distillat, u kejjel l-assorbenza A f'tul ta 'mewġa ta' 562nm bi spettrofotometru. Saru tliet repliki għal kull trattament. Ir-rata ta 'tfarfir radikali idrossiliku ġiet ikkalkulata skond il-Formula 4.2: rata ta' tfarfir radikali hydroxyl (%)=[(a 1- a2) / a1] × 100 (4.2) fejn: A1 hija l-assorbiment medju tal-vojt; A2 hija l-assorbenza medja tas-soluzzjoni tal-kampjun.

 

(5) Bidliet fil-kapaċità ta 'ħmieġ radikali ħielsa mid-DPPH waqt il-fermentazzjoni
Ittrasferixxi b'mod preċiż 2 ml ta 'soluzzjoni tal-kampjun tal-enzima għal flixkun volumetriku 1 0 ml, imbagħad żid 2 ml ta' 80% soluzzjoni milwiema DPPH etanol mal-flixkun volumetriku, b'konċentrazzjoni tal-massa molari ta '2 × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × × ({5 {5}} mol / L. Ħallat sew u ħalli toqgħod fit-temperatura tal-kamra għal 30 min. Ħu soluzzjoni ta '80% etanol bħala referenza u kejjel l-assorbenza tal-kampjun f'tul ta' mewġa ta '517 nm, li hija rreġistrata bħala A1. Ħallat 2 ml ta 'soluzzjoni DPPH u 2 ml ta' 80% soluzzjoni ta 'etanol, u kejjel l-assorbenza tagħhom fl-istess tul ta' mewġa, li hija rreġistrata bħala A0. Ħallat 2 ml ta 'soluzzjoni ta' enzima u 2 ml ta '80% soluzzjoni ta' etanol, u kejjel l-assorbenza tagħhom fl-istess tul ta 'mewġa, li hija rreġistrata bħala A2. Saru tliet repliki għal kull trattament. Ikkalkula r-rata ta 'ħmieġ radikali ħielsa mid-DPPH skond il-Formula 4.3:
Rata ta 'scavenging radikali free dpph (%) {{0}} [1- (a 1-}} a2) / a {0] × 100 (4.3) fejn: A1 hija l-assorbenza medja ta' 2 ml dpph dpph 80% soluzzjoni ta 'l-etanol akwapju u 2 ml soluzzjoni ta' kampjun; A2 hija l-assorbenza ta 'soluzzjoni ta' enzima ta '2 ml u soluzzjoni mħallta ta' etanol ta '2 ml 80%; A0 hija l-assorbenza ta '2 ml soluzzjoni DPPH u 2 ml 80% soluzzjoni mħallta tal-etanol.

(6) Bidliet fl-ABTS Ħieles ta 'Sengħa ta' Radikali Ħieles waqt il-Fermentazzjoni
8 μl soluzzjoni tal-kampjun ġiet issupplimentata għal 10 μL ma 'buffer tal-fosfat (5 mmol / L pH 7.4) u mbagħad imħallta b'mod uniformi ma '10 ml ta' sulfat tal-potassju u soluzzjoni mħallta ABTS biex tirreaġixxi f'temperatura ta 'reazzjoni ta' 30 grad u ħin ta 'reazzjoni ta' 5 min. Żero Is-soluzzjoni b'ilma distillat u kejjel l-assorbenza A f'tul ta 'mewġa ta' 734 nm bl-użu ta 'spettrofotometru. Saru tliet repliki għal kull trattament. Ir-rata ta 'sengħa radikali ħielsa mill-ABTS ġiet ikkalkulata skond il-Formula 4.4:
ABTS Rata radikali ħielsa rata (%)=[(a 1- a2) / a1] × 100 (4.4) fejn: A1 hija l-assorbenza tal-grupp ta 'kontroll vojt; A2 hija l-assorbenza tal-grupp sperimentali tal-kampjun.