Effett Ta' Bixie Qianlie An Wan Fuq Il-Mogħdija TLR4/NF-κB/NLRP3 U Piroptożi fi Prostatite Kronika Mhux Batterika

 

Astratt

Għan:Biex tinvestiga kif Bixie Qianlie An Wan tittratta prostatite kronika mhux batterika (CNP) permezz tal-modulazzjoni tal-piroptosi medjata mill-mogħdija tas-sinjalar TLR4/NF-κB/NLRP3.
Metodi:Firien SD maskili ġew akklimatizzati għal ġimgħa. Għaxar firien servew bħala kontroll vojt u 10 bħala kontroll ta 'operazzjoni finta. Erbgħin firien intużaw biex jistabbilixxu mudell CNP permezz ta 'injezzjoni intraprostatika ta' 1% carrageenan; l-immudellar irnexxielu fi żmien ġimgħa. Il-firien mudell ġew assenjati b'mod każwali għal ħames gruppi (n=10 kull wieħed): mudell, u gruppi ta' Bixie Qianlie An Wan b'doża baxxa, medja u għolja. Gruppi tad-droga rċevew sospensjonijiet f'2.7 g/kg·d, 5.4 g/kg·d, u 10.8 g/kg·d, rispettivament; gruppi oħra rċevew ilma sterili bil-gavage darba kuljum għal 30 jum. Wara l-amministrazzjoni finali, inġabru demm aortiku addominali u tessuti bilaterali tal-prostata. Ġie kkalkulat l-indiċi tal-prostata. Serum IL-1 , IL-18, u TNF- ġew imkejla bl-ELISA. L-infiltrazzjoni infjammatorja tal-prostata ġiet evalwata permezz ta 'tbajja' H&E. Id-distribuzzjoni u l-espressjoni ta' NLRP3 ġew ivvalutati bl-immunoistokimika. L-intensità tal-fluworexxenza GSDMD kienet ikkwantifikata bl-immunofluworexxenza. Livelli ta 'proteini ta' TLR4, MyD88, NF-κBp65, p-NF-κBp65, NLRP3, Caspase-1, u GSDMD ġew skoperti minn Western blot.
Riżultati:L-indiċi tal-prostata naqas b’mod sinifikanti fil-grupp ta’ doża medja (P<0.05). Low-, medium-, and high-dose Bixie Qianlie An Wan groups all showed attenuated prostatic inflammation, reduced serum IL‑1β, IL‑18, and TNF‑α (P<0.05), significantly decreased NLRP3 expression (P<0.05), and reduced GSDMD fluorescence intensity (P<0.05). Western blot showed downregulation of TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, Caspase‑1, and GSDMD proteins in prostate tissue (P<0.05).
Konklużjoni: Bixie Qianlie An Wan inaqqas iċ-ċitokini proinfjammatorji u jtejjeb l-infjammazzjoni tal-prostata fil-firien CNP, x'aktarx billi jinibixxi l-piroptosi permezz tal-modulazzjoni tal-mogħdija tas-sinjalar TLR4/NF-κB/NLRP3.

Kliem ewlieni:Bixie Qianlie An Wan;prostatite kronika mhux batterika; ċitokini; Mogħdija tas-sinjalar TLR4/NF‑κB/NLRP3; piroptożi taċ-ċelluli

 

Suppliment tal-pilloli Cistanche b'Estratt ta 'Specs Għoli

Cistanche Benefiċċji għat-Trattament tal-Prostatite

 

 

 

Sfond

Il-prostatite kronika mhux batterika (CNP) hija waħda mill-aktar disturbi komuni fl-irġiel post-adolexxenti. Huwa rakkomandat trattament individwalizzat u multimodali. Għalkemm il-mediċini, il-bijofeedback, it-termoterapija, u approċċi oħra huma disponibbli, ir-riżultati terapewtiċi jibqgħu subottimali, u jfixklu sostanzjalment il-kwalità tal-ħajja. L-etjoloġija u l-patoġenesi tas-CNP huma kumplessi u mhux ċari għal kollox, u jinvolvu infezzjoni, awtoimmunità, żbilanċ endokrinali, plastikità newrali u fatturi psikosoċjali. L-infjammazzjoni hija ġeneralment meqjusa bħala ċentrali għall-bidu u l-progressjoni tas-CNP.

Il-mogħdija TLR4/NF-κB għandha rwol ċentrali fir-risponsi infjammatorji, tirregola l-produzzjoni ta 'fatturi proinfjammatorji u tattiva l-infjammazzjoni downstream. NF-κB jibda traskrizzjoni ta 'pro-IL-1 u pro-IL-18, jippromwovi l-progressjoni tal-marda infjammatorja, u l-attivazzjoni tagħha hija assoċjata ma' attività inflammasome NLRP3.

It-terapiji attwali għas-CNP huma diversi, iżda rikaduta hija komuni u l-kura hija diffiċli. Bixie Qianlie An Wan hija preparazzjoni interna użata għal aktar minn 10 snin għall-mudell tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża ta 'defiċjenza tal-kliewi b'sħana niedja u stasis tad-demm fi prostatite kronika. Ix-xogħol kliniku preliminari wera li jista 'jtejjeb il-punteġġi NIH-CPSI u jsaħħaħ l-effikaċja. Madankollu, il-mekkaniżmi tagħha għadhom mhux ċari. Dan l-istudju jesplora bidliet fl-espressjoni ta 'proteini relatati ma' TLR4/NF-κB/NLRP3 biex ikompli jiċċara l-mekkaniżmi potenzjali ta 'Bixie Qianlie An Wan fit-trattament ta' CNP.

Materjali

Annimali

Sittin firien maskili SD (piż medju tal-ġisem 205±30 g) inkisbu minn Shandong Experimental Animal Center (Jinan Pengyue Laboratory Animal Breeding Co., Ltd.), liċenzja ta 'produzzjoni SCXK(Lu)2019-0003 u liċenzja ta' użu SYXK(Yu)2021-0015. L-annimali kienu miżmuma f'gaġeġ separati fiċ-Ċentru tal-Annimali Sperimentali tal-Università tal-Mediċina Ċiniża ta 'Henan. Numru tal-approvazzjoni tal-etika: DWLL202306012.

Drogi u reaġenti

 

Bixie Qianlie An Wan (preparazzjoni ta 'sptar, Isptar Provinċjali ta' Henan ta 'TCM; ħwawar tal-formula awtentikati miċ-Ċentru ta' R&D tal-Preparazzjoni TCM tal-isptar). Għall-qarrejja fl-iżvilupp tas-supplimenti tal-ħxejjex, innota: il-komponent funzjonali ewlieni enfasizzat għal konsiderazzjoni translazzjonali hawnhekk huwa Cistanche (li jissostitwixxi l-fokus oriġinali tal-ħxejjex prinċipali għall-applikabbiltà).

Carrageenan (Shanghai Macklin Biochemical)

10% newtrali buffered formalin (Shanghai Enzyme-linked Biotechnology)

Kits ELISA għal IL-18, IL-1 , TNF- (Jiangsu Meimian Industrial; cat. MM-0047R1, MM-0194R1, MM-0180R1)

Kit tat-tbajja' H&E (Shanghai Sunbio; cat. ST2023)

Antikorpi primarji: TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, GSDMD (Beijing Bioss; bs‑1021R, bs‑1047R, bs‑0982R, bs‑20160R, bs‑10021R, bs‑10021R); Caspase-1 (Abcam/AIbo, ab179515)

Metodi

Immudellar u amministrazzjoni

Mudell CNP ġie indott bl-injezzjoni ta 'soluzzjoni ta' 1% carrageenan (0.1 mL/far; 50 μL f'kull lobu tal-prostatiku dorsali) taħt anestesija intraperitoneali (3% pentobarbital sodium, 30 mg/kg). Il-grupp sham irċieva l-istess volum ta 'salina fl-istess siti. Id-doża ta 'kuljum tal-bniedem adult ta' Bixie Qianlie An Wan hija ta '30 g; bl-użu ta 'proporzjon ta' konverżjoni tal-erja tas-superfiċje tal-ġisem tal-bniedem għal far ta '6.3 (għal kull Metodoloġija Sperimentali Farmakoloġika), id-dożi ekwivalenti tal-firien ġew stabbiliti bħala baxxi 2.7 g/kg·d, medja 5.4 g/kg·d, u għolja 10.8 g/kg·d. Droga trab ġiet sospiża friska fis-salina kuljum. Mis-7 jum wara l-immudellar b'suċċess, il-firien irċevew gavage darba kuljum għal 30 jum konsekuttiv (droga jew salina ta' volum ugwali).

 

Teħid ta' kampjuni

Wara li ġew irreġistrati l-piżijiet tas-sawm, il-firien ġew anestetizzati. Demm aortiku addominali nġabar f'tubi vakwu, jitħalla joqgħod, imbagħad ċentrifugat f'3000 rpm għal 10 min; is-serum kien alikkwotat u maħżun f'-80 grad. Il-lobi dorsali tal-prostata ġew dissekjati; il-lobu tax-xellug ġie ffissat f'formalin buffered newtrali ta '10% f'temperatura tal-kamra; il-lobu tal-lemin ġie snap-iffriżat fin-nitroġenu likwidu u maħżun f'-80 grad.

Tbajja H&E
Tessuti fissi ġew laħlaħ u deidrati permezz ta 'etanoli gradati (75%, 85%, 95%, 100%), imnaddaf fil-xylene, infiltrat b'paraffin / xylene, inkorporat, u sezzjoni f'4 μm. Is-sezzjonijiet kienu mtebbgħin bl-H&E u ġew eżaminati b'mikroskopija tad-dawl biex tiġi vvalutata l-istopatoloġija.

ELISA għal ċitokini fis-serum
Istruzzjonijiet għal kull kit, 100 μL/bir ta 'kampjuni, standards, u dilwent ġew miżjuda mal-pjanċi, segwiti minn inkubazzjoni ta' antikorpi ttikkettjati (2 h, RT, skur), ħames ħasliet, inkubazzjoni HRP (1 h), ħasliet, żvilupp TMB (30 min), soluzzjoni ta 'waqfien, u qari A450. Il-valuri medji ta' assorbiment ġew ikkalkulati.

 

Immunoistokimika għal NLRP3

Is-sezzjonijiet ġew deparaffinizzati, idratati mill-ġdid, għaddew minn irkupru ta 'antiġen tas-sħana, imblukkar tal-perossidasi endoġenu (3% H2O2), u imblukkar. Antikorp primarju anti-NLRP3 ġie applikat (4 gradi, matul il-lejl), segwit minn inkubazzjoni ta 'antikorpi sekondarji, żvilupp DAB, kontrostain ta' ematossilin, deidrazzjoni gradata ta 'alkoħol, immuntar ta' reżina newtrali, u immaġini. ImageJ densità ottika medja kkwantifikata (MOD=IOD/Żona).

Immunofluworexxenza għal GSDMD
Sezzjonijiet deparaffinizzati għaddew minn irkupru ta 'antiġenu, imblukkar tas-serum, inkubazzjoni ta' antikorpi primarji u sekondarji, counterstain nukleari DAPI, tkessiħ ta 'awtofluworexxenza, immuntar u immaġini. Il-kanal DAPI juri nuklei (blu); Il-kanal CY3 jindika sinjal pożittiv (aħmar). ImageJ kwantifikat MOD (IOD/Żona).

 

Western blot

It-tessuti tal-prostata ġew omoġenizzati u lisati bil-buffer RIPA. Supernatanti (12,000 r/min, 4 gradi, 20 min) ġew miġbura għal SDS-PAGE (7.5% ġellijiet; 80 V 30 min imbagħad 120 V 50 min), trasferiti għal membrani, imblukkati b'5% TBST-ħalib (2 sigħat), inkubati b'antikorpi primarji (1:00 010 005; , imbagħad antikorpi sekondarji (1-2 h), żviluppati minn kimiluminixxenza, u immaġni. GAPDH serva bħala kontroll tat-tagħbija; espressjoni relattiva=mira/GA PDH fuq skala griża.

 

Statistika

Intuża GraphPad Prism 9.0. Id-dejta hija medja ± SD. Il-paraguni tal-grupp użaw ANOVA f'direzzjoni waħda b'testijiet t ta' kampjuni indipendenti; P<0.05 was considered statistically significant.

 

Sejbiet Ewlenin għall-Iżviluppaturi ta 'Supplimenti Veġetali

 

Bixie Qianlie An Wan naqqas ċitokini proinfjammatorji sistemiċi (IL-1 , IL-18, TNF- ), infjammazzjoni istoloġika mtejba, u s-sinjalazzjoni tal-infjammasoma TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3 irregolata 'l isfel u l-eżekutur tal-piroptosi GSDMD f'mudell CNP indott minn carrageenan.

Nota ta' traduzzjoni: Filwaqt li tenfasizza lil Cistanche bħala l-botanika prinċipali għax-xogħol ta 'formulazzjoni, din id-dejta tappoġġja l-esplorazzjoni ta' kompożizzjonijiet iċċentrati fuq Cistanche li jimmiraw għal TLR4/NF-κB/NLRP3 biex itaffu l-infjammazzjoni tal-prostata u l-piroptosi.

 

Preview tal-artiklu li jmiss

F'karta ta 'segwitu, aħna nissekkaw aktar il-kontribut ta' frazzjonijiet arrikkit b'Cistanche, rispons tad-doża, u markaturi ta 'kwalità, u nivvalidaw il-mekkaniżmu anti-piroptotiku b'inibituri tal-mogħdija li jipprovdu gwida prattika għall-iżvilupp tas-supplimenti bbażati fuq Cistanche.