Avvanzi fid-Dermatoloġija bl-użu tad-DNA Aptamer "Aptamin C" Innovazzjoni: Prevenzjoni ta' Stress Ossidattiv U Massimizzazzjoni ta' Effett Ta' Vitamina Ċ Permezz ta' Antiossidazzjoni

joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Sooho Choi PhD1|Jeongmin Han Ph.D. Kandidat2|Ji Hyun Kim MS Kandidat1|A‐Ru Kim Ph.D. Kandidat3|Sang‐Heon Kim Ph.D. Kandidat3|Weontae Lee Ph.D., professur2|Moon‐Young Yoon Ph.D., professur3|Gyuyoup Kim PhD1|Yoon‐Seong Kim Ph.D., professur1

Astratt

Sfond:Vitamina Ċ(magħruf ukoll bħala aċidu L-ascorbic) għandu rwol kritiku fit-tnaqqis tal-ispeċijiet tal-ossiġnu reattiv (ROS) u r-riġenerazzjoni taċ-ċelluli billi jipproteġi ċ-ċelloli mill-istress ossidattiv. Għalkemm il-vitamina Ċ tintuża ħafna fis-swieq kożmetiċi u terapewtiċi, hemm evidenza konsiderevoli li l-vitamina Ċ tgħaddi faċilmentossidazzjonibl-arja, pH, temperatura, u dawl UV mal-ħażna. Din id-defiċjenza tal-vitamina Ċ tnaqqas il-qawwa tagħha bħala antiossidant u tnaqqas il-ħajja fuq l-ixkaffa tal-prodotti li fihom il-vitamina Ċ bħala l-ingredjent tagħha. Biex negħlbu d-defiċjenza tal-vitamina Ċ, żviluppajna Aptamin C, aptamer tad-DNA innovattiv li jimmassimizza l-effikaċja antiossidant tal-vitamina Ċ billi jorbot mal-forma mnaqqsa tal-vitamina Ċ u jdewwem tiegħuossidazzjoni.

Metodi:L-irbit ta' Aptamin C mal-vitamina Ċ ġie determinat bl-użu ta' analiżi ITC. L-esperiment tal-ITC sar bi 0.2 mmol/Lvitamina Ċli ġiet injettata 25 darba f'alikwoti ta' 2 µL fiċ-ċellula tal-kampjun ta' 1.8 mL li kien fiha l-Aptamin C f'konċentrazzjoni ta' 0.02 mmol/L. Id-dejta twaħħlet ma' isoterma ta' rbit f'sit wieħed bl-użu ta' programm ta' oriġini għal ITC v.5.0.

Riżultati:Biex tinvestiga l-effett ta 'Aptamin C uvitamina Ċkumplessi fil-ġlud tal-bniedem, saru kemm testijiet in vitro kif ukoll kliniċi. Aħna osservajna li l-kumpless ta 'Aptamin C u vitamina Ċ kien effettiv b'mod sinifikanti fit-titjib tat-tikmix, l-effett li jbajdu u ż-żieda fl-idratazzjoni. Fit-test kliniku, is-suġġetti ttrattati bil-kumpless urew titjib drammatiku fl-irritazzjoni tal-ġilda u l-ħakk. L-ebda reazzjoni avversa ma kienet ippreżentata minn Aptamin C complex fit-test.

Konklużjoni:Meħuda flimkien, dawn ir-riżultati wrew li Aptamin C, kompost ġdid innovattiv, għandu potenzjalment jiġi moqdi bħala ingredjent kożmeċewtiku ewlieni għal firxa ta 'kundizzjonijiet tal-ġilda.

KELMI EWLENINantiossidazzjoni, Aptamin C (Aptamer li torbot lill-vitamina Ċ),ossidazzjoni, stress ossidattiv,vitamina Ċ(L-aċidu askorbiku)

cistanchejippossjedi kapaċità qawwija ta 'antiossidazzjoni

1|INTRODUZZJONI

Speċijiet ta' ossiġnu reattiv (ROS) huma speċi ta' kimiċi reattivi kimikament li fihom l-ossiġnu, li għandu rwol importanti fis-sinjalar taċ-ċelluli u l-omeostażi.1-3 Dawn jinkludu mhux biss effetti pożittivi bħall-induzzjoni ta' ġeni ta' difiża ospitanti u l-mobilizzazzjoni ta' sistemi ta' trasport tal-joni iżda wkoll rwoli fl-apoptosi (mewt taċ-ċelluli programmata).4,5ROS livelli jistgħu jiżdiedu minn stress ambjentali, li jwassal għal ħsara lill-istrutturi taċ-ċelluli.3 Dan il-fenomenu jissejjaħ "stress ossidattiv." L-istress ossidattiv huwa wieħed mill-kawżi ewlenin ta' diversi mard inkluż mard newrodeġenerattiv, marda ta' Lou Gehrig, awtiżmu, sklerożi multipla, u mard tal-ġilda.6-15 Barra minn hekk, l-istress ossidattiv għandu influwenza diretta fuq il-proċess tat-tixjiħ tal-ġilda16; il-proteini, il-lipidi u d-DNA qed jirreaġixxu b'mod sensittiv għall-istress ossidattiv li huwa kkawżat minn ROS.17 L-antiossidanti huma effettivi ħafna fil-protezzjoni tal-ġilda peress li jirreaġixxu direttament għal ROS u ma jħallihomx jilħqu l-molekuli fil-mira bijoloġika.18,19 Antiossidanti bħalvitamina Ċ, vitamina E, coenzyme Q10, u komposti polifenoliċi jipproteġu l-ġilda mill-ħsara kkawżata minn ROS. L-antiossidanti b'hekk jgħinu biex jipprevjenu u jittrattaw diversi mard tal-ġilda u jnaqqsu l-proċess tat-tixjiħ tal-ġilda.20 L-użu tal-vitamina Ċ fl-industriji huwa primarjament minħabba l-proprjetajiet antiossidanti tagħha, li huma r-riżultat ta 'vitamina Ċl-abbiltà ta' li jinnewtralizza radikali ta' l-ossiġnu ħielsa, permezz ta' proċess imsejjaħ scavenging radikali.21,22 Madankollu, minħabba dawn l-istess proprjetajiet antiossidanti, il-molekula nnifisha hija intrinsikament suxxettibbli għad-degradazzjoni permezzossidazzjoni. Biex issolvi din il-problema, żviluppajna Aptamin C, aptamer tad-DNA li jingħaqad speċifikament mal-vitamina Ċ u jinibixxi l-ossidazzjoni tal-vitamina C. Aptamers huma oligonukleotidi bbażati fuq DNA jew RNA b'linja waħda li kapaċi jorbtu b'mod selettiv firxa wiesgħa ta 'molekuli. Aptamers huma identifikati b'mod komuni b'metodu ta' għażla in vitro imsejjaħ Evoluzzjoni Sistematika ta' Ligands permezz ta' arrikkiment ESPonenzjali jew "SELEX". Aħna identifikajna li Aptamin C jinibixxi l-ossidazzjonita’ vitamina Ċ minn diversi aġenti ossidanti u żżomm l-attività antiossidanti waqt ħażna fit-tul. Biex tiġi kkonfermata l-valutazzjoni tas-sigurtà ta 'Aptamin C, saru esperimenti fil-livell ċellulari u applikati direttament għall-bnedmin u ma ġiet osservata l-ebda tossiċità. Mard tal-ġilda bħal dermatite atopika, psorjasi, u akne huma relatati mar-rispons immuni u ROS.23Vitamina Ċgħandu l-abbiltà li jneħħi r-ROS u għandu effett kontra l-infjammazzjoni.24 Aptamin C jipprevjeniossidazzjonita 'vitamina ċ u timmassimizza l-effikaċja tagħha permezz ta' rilaxx bil-mod. Aħna, għalhekk, nistennew li l-kumpless Aptamin C-vitamina C se juri l-effett sinerġetiku.

2|MATERJALI U METODI

2.1|Skrinjar tal-aptamer kontra l-vitamina Ċ b'ossidu tal-graffen imnaqqas

Dan il-metodu twettaq billi ġie mmodifikat il-metodu tar-riċerka preċedenti.25 Il-kandidati ssDNA li jistgħu jorbtu speċifikament ma’vitamina Ċġew żviluppati minn librerija ssDNA każwali li tikkonsisti f’madwar 1X1018 sekwenza differenti. Għal-librerija ssDNA, użajna sekwenza magħmula apposta li d-daqs huwa 60mer u fiha 30 sekwenza ta’ nukleotidi ġenerati b’mod każwali u sit tal-primer għall-amplifikazzjoni (5′‐ATGCGATCCCGCGC‐(N)30‐GCGCGAAGCTTGCGC‐3′). Aħna wettaqna total ta 'ħames rawnds filwaqt li bdilna l-kundizzjoni sperimentali biex tagħżel sekwenza aktar speċifika. Il-volum totali għar-reazzjoni kien 200 μL. Madwar 20 μL ta '10 × buffer vinkolanti (10 × PBS miżjud 10 mmol / L MgCl2), 80 μL ta' rGO (5 mg / mL, dilwit fl-ilma), u 200 picomoles ta 'librerija ssDNA (20 μL ta' 100 μmol / L stokk ) ġew miżjuda u ppreżentati dH2O għal 200 μL. Ir-reazzjoni kompliet għal 30 minuta biex tgħaqqad il-librerija ssDNA fuq rGO, u mbagħad, it-taħlita ġiet ċentrifugata fi 20 000 g għal 20 minuta biex telimina s-supernatant. Il-gerbub rGO inħasel darba 1 b'200 μL ta 'buffer li torbot li hija l-istess konċentrazzjoni bħall-kondizzjoni ta' rbit fil-mira ta 'kull rawnd. Biex elute l-kandidati, 200 nanomoles tavitamina Ċdilwit f'200 μL ta 'buffer li torbot ġew miżjuda mal-pellet rGO, u l-pass ta' elużjoni għamel għal siegħa. L-ssDNA eluż ġie diviż permezz ta' ċentrifugazzjoni, sar f'{2}} g għal 20 minuta u amplifikat. Għamilna preċipitazzjoni EtOH biex neliminaw l-impuritajiet ħlief għall-ssDNA qabel l-amplifikazzjoni. Għamilna PCR asimmetriku biex niksbu ssDNA amplifikat. Il-proporzjon tal-primer forwarding għall-primer reverse tal-PCR asimmetriku kien 10:1. Għamilna elettroforeżi fuq ġel agarose 2.5 fil-mija biex nikkonferma l-prodott PCR bi ftit mikrolitri minnu. PCR asimmetriku ma jistax jipproduċi ssDNA biss. Allura, għamilna l-metodu tat-tgħaffiġ u t-tixrib biex niżolaw il-kandidati ssDNA. Għall-metodu, għamilna l-elettroforesi fuq ġel nattiv tal-polyacrylamide ta '12 fil-mija u mtebba' l-ġell b' ethidium bromide (EtBr). Biex tissepara d-DNA ta’ double-stranded (dsDNA) u ssDNA, il-parti tal-ġel imtebba’ b’ssDNA ġiet maqtugħa, pulverizzata, u estratta ssDNA bi tgħaffiġ u soak buffer (500 mmol/L NH4OAc, 0.1 fil-mija SDS, 0.1 mmol/L EDTA) matul il-lejl. Il-ġel polverizzat ġie separat permezz ta 'ċentrifugazzjoni. Is-supernatant li fih ssDNA huwa kkonċentrat u ppurifikat billi tagħmel preċipitazzjoni EtOH. L-ssDNA imnixxef inġabar b'dH2O sterilizzat u dan intuża għar-rawnd li jmiss bħala librerija.

ingredjenti naturalicistanche amazon

2.2|Esperiment tal-kalorimetrija tat-titrazzjoni iżotermika (ITC).

L-esperiment tal-kalorimetrija tat-titrazzjoni iżotermika twettaq bl-użu ta 'sistema VP‐ITC (MicroCal Inc Northampton) f'25 grad f'salina buffer tal-fosfat magħmul minn 1 mmol/L klorur tal-manjeżju (pH 7.4). Qabel kull esperiment ta' titrazzjoni, Aptamin C 2 mL uvitamina ĊKampjuni ta' 600 µL ġew degassjati għal 30 minuti taħt vakwu, mingħajr ma tħawwad, f'temperatura ftit gradi taħt dik tal-esperiment. Aħna ppreparajna 0.2 mmol/L vitamina Ċ li ġiet injettata 25 darba f'alikwoti ta '2 µL fiċ-ċellula tal-kampjun ta' 1.8 mL li kien fiha l-Aptamin C f'konċentrazzjoni ta '0.02 mmol/L. Id-dejta twaħħlet ma' isoterma li torbot f'sit wieħed bl-użu ta' programm ta' oriġini għal ITC v.5.0 (MicroCal Inc).

2.3|Analiżi tal-mikroplate bbażati fuq il-fluworexxenza għall-ossidazzjoni tal-vitamina Ċ

Ossidazzjonitavitamina Ċtkejjel billi jinstab il-prodott ossidizzat dehydroascorbate (DHA) bl-użu ta’ verżjoni modifikata tal-metodu deskritt minn Vislisel et al.7 F’dan il-metodu, DHA jiġi skopert permezz ta’ reazzjoni ma’ o‐phenylenediamine (OPDA) biex tifforma l-prodott ta’ kondensazzjoni fluworexxenti 3‐( dihydroxyethyl)furo[3,4‐b] quinoxaline‐1‐one. L-assaġġ sar kif ġej fi pjanċi suwed 384-well (Greiner Bio-One). Aptamers ġew l-ewwel maħlula f'salina buffered bil-fosfat, pH 7.2, li kien fih 1mM MgCl2, f'konċentrazzjoni ta '200 µmol/L imbagħad mitwija billi ssaħħan sa 95 grad u jitħalla jiksaħ bil-mod sa temperatura tal-kamra għal 15-il minuta. L-aptamers mitwija mbagħad ġew dilwiti 1:1 (v:v) f'soluzzjoni ppreparata friska ta' 5 mmol/Lvitamina Ċf'assay buffer [50 mmol/L aċetat tas-sodju, 1 fil-mija (w/v) BSA, 0.05 fil-mija (v/v) Tween 20, 1mM MgCl2 (Sigma, il-komponenti kollha) aġġustat għal pH 5.5], u it-taħlita ġiet inkubata għal 30 minuta f'temperatura tal-kamra, biex tippermetti li l-aptamers jorbtu qabel ma jiżdied l-ossidant. Ossidanti mbagħad ġew miżjuda mas-soluzzjonijiet ta 'vitamina C/aptamer f'konċentrazzjonijiet ta' (EM) H2O2 (Sigma). L-ossidanti ġew dilwiti minn qabel għall-konċentrazzjonijiet tax-xogħol tagħhom f'assay buffer. Il-kampjuni ġew imbagħad inkubati f'temperatura tal-kamra għal 10 minuti qabel iż-żieda ta 'OPDA (Sigma) f'konċentrazzjoni ta' 5.5 mmol/L f'assay buffer. Immedjatament wara ż-żieda ta 'OPDA, il-fluworexxenza tal-kampjuni f'425 nm ġiet iddeterminata bl-użu ta' qarrej tal-pjanċa SpectraMax® i3X (Apparat Molekulari) b'eċitazzjoni f'345 nm, fuq kors ta 'ħin ta' 45 minuta b'kejl magħmul kull 60 sekonda. Il-kampjuni kollha u r-reċipjenti li fihom ir-reaġent ġew imgeżwer f'fojl biex jipproteġuhom mid-dawl matul l-inkubazzjonijiet kollha mwettqa għall-analiżi tal-fluworexxenza.

2.4|Kejl tat-tnaqqis tal-vitamina Ċ bl-użu ta' DCPIP (2,6-Dichlorophenolindophenol)

Biex tiddetermina t-tnaqqis tavitamina Ċ, wettaqna l-esperimenti bl-użu tar-reazzjoni DCPIP. Il-Vitamina Ċ tirreaġixxi mad-DCPIP, u tbiddel il-kulur minn blu għal bla kulur. Il-vitamina Ċ ippreparata ġiet ittrattata b'5 fil-mija Aptamin CTM, u l-vitamina Ċ mhux ittrattata ġiet inkubata f'temperatura tal-kamra għal 8 ġimgħat. Il-kampjun tkejjel wara 2, 4, u 8 ġimgħat. Madwar 2 mL ta 'DCPIP ġew miżjuda mal-kunjett koniku bl-użu ta' pipetta, u l-ewwel vitamina Ċ mhux ittrattata ġiet miżjuda sakemm is-soluzzjoni saret bla kulur. L-ammont tavitamina Ċmiżjud kien imkejjel u ripetut ma 'kampjuni oħra. Il-grad ta' tnaqqis ta' kull kampjun ġie kkalkulat skont din id-dejta.

2.5|Studju in vitro tal-effett kontra t-tikmix fil-fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem

Biex tiġi evalwata l-vijabbiltà taċ-ċelluli fil-fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem, iċ-ċelloli ġew ittrattati b’konċentrazzjonijiet finali differenti ta’ Aptamin C b’vitamina Ċ(Aptamin C ug flimkien ma' vitamina C ug/mL) {{0}}.01 flimkien ma' 0.5 ug/mL, 0.1 flimkien ma' 5 ug/mL, 0.5 u 25 ug /mL, 1 flimkien ma' 50 ug/mL, u 2 flimkien ma' 100 ug/mL. U mbagħad, iċ-ċelloli ġew ittrattati f'konċentrazzjonijiet ta 'Aptamin C b'vitamina Ċ biex jindividwaw kollaġen intraċellulari, collagenase intraċellulari (MMP-1), u attività elastase.

Fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem (HDFs) intgħażlu fuq il-bażi ta '"Linji Gwida għall-evalwazzjoni tal-effikaċja tal-kożmetiċi funzjonali (ΙI)" tal-MFDS. HDFs ġew ikkultivati ​​f'taħlita DMEM/F12 3:1 ta 'glukożju għoli supplimentat b'10 fil-mija FBS u 1 fil-mija Antibijotiku-Antimycotic f'atmosfera umidifikata ta' 5 fil-mija CO2 f'37˚C.

L-HDFs (5 × 104 ċelluli/bir) ġew miżrugħa fi pjanċi ta’ 24 bir u inkubati għal 24 siegħa u ġew ittrattati b’diversi konċentrazzjonijiet ta’ Aptamin C b’vitamina Ċu inkubati għal 24 siegħa. Wara 24 siegħa, is-supernatant inġabar, u l-ammont ta 'procollagen liberat fil-medju tkejjel f'450 nm bl-użu ta' Procollagen Type IC-Peptide (PIP) ELISA Kit. Il-grad tal-produzzjoni tal-kollaġen ġie kkalibrat bil-kontenut totali ta 'proteina u mqabbel ma' TGF-1 bħala kontroll pożittiv. Medja mingħajr materjali tat-test intużat bħala kontroll tas-solvent.

L-HDFs (5 × 104 ċelluli/bir) ġew miżrugħa fi pjanċi ta’ 24 bir u inkubati għal 24 siegħa u ġew ittrattati b’diversi konċentrazzjonijiet ta’ Aptamin C b’vitamina Ċu inkubati għal 48 siegħa. Wara 48 siegħa, l-attività tal-collagenase ġiet imkejla f'450 nm bl-użu tal-MMP-1 Human ELISA Kit. L-attività MMP-1 ġiet ivvalutata bil-kontenut totali ta 'proteina u mqabbla ma' TGF-1 bħala kontroll pożittiv. Medja mingħajr materjali tat-test intużat bħala kontroll tas-solvent.

Id-dejta kollha ġiet espressa bħala medja ± devjazzjoni standard u ġiet minn 3 esperimenti indipendenti. Analiżi statistika twettqet minn kampjuni indipendenti t-test bl-użu tal-programm tas-softwer SPSS® (IBM) fil-livell ta 'sinifikat P <>

2.6|Kejl tat-tikmix tal-ġilda permezz ta 'sistema ta' analiżi ta 'immaġni 3D

Tnejn u għoxrin suġġett mara (età medja: 50.05 ± 2.94 sena) ipparteċipaw f’dan l-istudju. It-tikmix tal-ġilda tas-saqajn taċ-ċawla ġiet evalwata b'sistema ta' analiżi ta' immaġini 3D fil-linja bażi, 4 u 8 ġimgħat. L-idratazzjoni tal-ġilda ġiet evalwata bil-metodu ta 'capacitance, u TEWL bil-metodu tad-diffużjoni tal-ilma tal-wiċċ tal-ġilda u l-elastiċità tal-ġilda bil-metodu tal-ġbid ġew evalwati fil-linja bażi, 2, 4, u 8 ġimgħat wara t-trattament. Barra minn hekk, kwestjonarji li jikkonċernaw l-effikaċja mtlew mis-suġġetti f'ġimgħatejn u 4 u 8 ġimgħat, u dak tal-użabilità imtela mis-suġġetti fi 8 ġimgħat wara t-trattament. Id-dejta kollha miksuba ġiet analizzata statistikament bis-softwer SPSS®. Il-parametri tat-tikmix tas-saqajn taċ-ċawla ġew evalwati bl-użu ta 'PRIMOS® Premium (GFMesstechnik GmbH). Din is-sistema ppermettiet l-analiżi kwantitattiva tal-ħruxija, il-fond, l-erja, u l-volum ta 'sporġenza fuq it-tikmix tal-ġilda. L-immaġni ġiet analizzata fl-istess żona f'termini ta 'parametri tat-tikmix tal-ġilda (1, Fond medju tat-tikmix; 2, Fond medju l-akbar tikmix; 3, Fond massimu l-akbar tikmix; 4, Żona totali tat-tikmix; 5, Volum totali tat-tikmix; 6 , Tikmix tal-fattur tal-forma totali; 7, Tul totali tat-tikmix; 8, Ra; 9, Ry; u 10, Rz) fil-linja bażi, 4 u 8 ġimgħat wara t-trattament minn Primos 5.8 E ver. Software.

3|RIŻULTATI

3.1|Kien meħtieġ approċċ rigoruż għall-preparazzjoni tal-buffer biex twettaq b'suċċess rGO‐SELEX b'mira instabbli

Il-librerija ssDNA, li kienet marbuta ma 'rGO permezz ta' interazzjonijiet ta 'stivar π-π bejn iċ-ċrieki aromatiċi tal-wiċċ tal-grafene u l-bażijiet tad-DNA 26,27 u ssDNA mhux marbut fuq rGO, ġiet isseparata u mneħħija permezz ta' ċentrifugazzjoni. ssDNA li kien adsorbit fuq il-wiċċ rGO ġew elużi permezz ta 'trattament bil-kompost fil-mira. Skont ir-rapporti tal-letteratura, il-konformazzjoni tal-aptamer tinbidel wara li torbot mal-mira u billi ddgħajjef l-interazzjonijiet π-πstacking ma 'rGO.28-31 Dan il-proċess ġie ripetut għal ħames rawnds. Kull rawnd sussegwenti kompliet b'kundizzjonijiet ta 'buffer aktar ħorox u ħinijiet ta' elużjoni iqsar. Din il-prestazzjoni ppermettietna nżommu ssDNA b'ispeċifiċità aħjar għall-komposti fil-mira.

Id-dejta NGS tal-librerija arrikkita prodotta mill-proċess rGO-SELEX tat 404071 sekwenza. Aħna għażilna 119-il sekwenza minn din id-dejta, għamilna dawn fi 11-il grupp ibbażat fuq ix-xebh tal-istruttura, u għażilna sekwenzi rappreżentattivi għall-kandidati tal-aptamer (Figura 1A).

3.2|Aptamin C għażla

L-istrutturi sekondarji tal-kandidati tal-Aptamin C kienu mbassra bl-użu ta’ softwer b’xejn M‐Fold.32,33 Il-kandidati ġew miġbura skont il-pożizzjoni tagħhom, it-tul, il-forma u n-numru ta’ zokk u loop tal-ogħla struttura potenzjali (Figura 1B). DHA, ossidu ta'vitamina Ċ, jiġi skopert bir-reazzjoni tiegħu ma’ o‐phenylenediamine (OPDA) li għandu r-rwol bħala indikatur.34 Jekk l-aptamer jorbot u jipprevjeni tiegħuossidazzjoni, għall-vitamina Ċ u jipprevjeni l-ossidazzjoni tagħha, is-sinjal tal-fluworexxenza minn 3‐(dihydroxyethyl)‐furo‐[3,4‐b] quinoxaline‐1‐one, il-prodott ta 'kondensazzjoni tal-vitamina Ċ u OPDA, se jkun aktar baxx minn dak ta' kontroll no‐aptamer. Plott ta' kull aptamer kandidat imħallat ma' vitamina Ċ u ossidatur, bil-kontrolli pożittivi,vitamina Ċflimkien ma 'sekwenzi ossidanti u scramble mħallta ma' vitamina Ċ u ossidatur (Figura 1C). Ħames aptamers, Aptamin Cb, Cc, Cf, Cg, u Ck, intwerew li għandhom effetti ta 'antiossidazzjoni.

3.3|Inibizzjoni tal-ossidazzjoni tal-vitamina Ċ minn Aptamin C

Aptamin C għandu affinità ta 'rbit għoli għalvitamina Ċ. L-irbit ta' Aptamin C mal-vitamina Ċ ġie determinat bl-użu ta' analiżi ITC. Mill-iso‐terma li torbot, jistgħu jinkisbu l-entalpija (ΔH), l-entropija (ΔS), u l-istojkjometrija (n) tar-reazzjoni tal-irbit. L-irbit eżotermiku ta' Aptamin Cb ġie skopert mill-kejl ITC, u l-entalpija (ΔH) ġiet ikkalkulata bħala 302.5 ± 3.788, l-entropija (ΔS) ġiet ikkalkulata bħala 18.9, l-istojkjometrija (n) ġiet ikkalkulata bħala 56.7 ± {{21 }}.426, u l-kostanti ta 'dissoċjazzjoni (Kd) ġew ikkalkulati bħala 2.13uM għall-vitamina C. Aptamin Cf rabta eżotermika ġiet skoperta mill-kejl ITC, u l-entalpija (ΔH) ġiet ikkalkulata bħala 279.2 ± 2.992, entropija (ΔS) ġiet ikkalkulata bħala 18.4, stojkjometrija (n) ġiet ikkalkulata bħala 167 ± 1.15, u l-kostanti ta 'dissoċjazzjoni (Kd) ġew ikkalkulati bħala 0.89uM għall-vitamina C. Aptamin Ck rabta eżotermika ġiet skoperta mill-kejl ITC, u l-entalpija (ΔH ) ġiet ikkalkulata bħala 250.4 ± 3.742, entropija (ΔS) ġiet ikkalkulata bħala 19.8, stojkjometrija (n) ġiet ikkalkulata bħala 82.2 ± 0.732, u l-kostanti tad-dissoċjazzjoni (Kd) ġew ikkalkulati bħala 0.90 µmol/L għal vitamina Ċ (Figura 2A). Il-kejl tal-ITC jiżvela li l-bidla fl-entropija mal-assoċjazzjoni mal-Aptamin C hija forza ewlenija għalvitamina Ċ. Biex tipprevjeniossidazzjonita 'vitamina Ċ fl-istat likwidu, is-soluzzjonijiet kollha ġew ippreparati b'ilma dejonizzat ittrattat bin-nitroġenu. Il-fluworexxenza ġiet espressa u analizzata kwantitattivament meta OPDA (o-phenylenediamine) marbut ma' DHA iġġenerat minnossidazzjonital-vitamina C. Il-grad ta 'ossidazzjoni tal-vitamina C skond il-konċentrazzjoni ta' Aptamin C (125, 250, 500, u 1000 nmol/L) ġie mqabbel u kkonfermat permezz ta 'assaġġ OPDA. Ir-riżultati wrew li l-vitamina Ċil-konverżjoni għal dehydroascorbic acid kienet aktar bil-mod meta l-konċentrazzjoni ta 'Aptamin C kienet ogħla. (Figura 2B). Din id-dejta tipprova li Aptamin C hija inibitur dipendenti fuq id-doża tal-ossidazzjoni tal-vitamina Ċ.

Aħna wettaqna esperimenti biex niddeterminaw jekk Aptamin C jistax jipprevjeni l-ossidazzjonita’ vitamina Ċ fuq perjodu twil ta’ żmien. Aptamin C ikkurat flimkienvitamina Ċ, u l-vitamina Ċ mhux ittrattata ġew esposti għad-dawl u jitħallew joqgħodu f'temperatura tal-kamra għal 8 ġimgħat. Bħala riżultat, meta l-vitamina Ċ mhux ittrattata tħalliet waħedha, il-grad ta 'tnaqqis naqas għal inqas minn nofs f'ġimgħat 2, u kważi kollha ġew ossidizzati wara ġimgħat 4. Fil-preżenza ta 'Aptamin C, il-vitamina Ċ tnaqqset għal madwar nofs 8 ġimgħat (Figura 2C). Dan jissuġġerixxi li Aptamin C jipprevjeni l-ossidazzjoni tal-vitamina Ċ fuq perjodu twil ta 'żmien.

bodybuilding cistanche

3.4|Analiżi tal-attività tal-collagenase intraċellulari (MMP-1) u l-kollaġen

Fuq analiżi tal-attività tal-collagenase, il-produzzjoni tal-matrix metalloproteinase‐1 (MMP‐1) tnaqqset b'mod sinifikanti b'mod dipendenti fuq id-doża, b'7.06 fil-mija, 9.29 fil-mija, u 31.81 fil-mija f'konċentrazzjonijiet ta' {{1{ {12}}}}.01 flimkien ma' 0.5 ug/mL, 0.1 flimkien ma' 5 ug/mL, u 0.5 flimkien ma' 25 ug/ mL, rispettivament (Figura 3A). Fuq analiżi tas-sinteżi tal-kollaġen, il-peptide tal-karbossi terminali tat-tip Ι (PIP) tal-procollagen żdied b'mod sinifikanti b'mod dipendenti fuq id-doża, b'żieda ta' 25.{{20}} fil-mija f'0.01 flimkien ma' 0.5 ug/mL , 41.99 fil-mija f'0.1 flimkien ma '5 ug/mL, u 71.18 fil-mija f'0.5 flimkien ma' 25 ug/mL (Figura 3B).

3.5|Studju kliniku tal-effetti tat-titjib tat-tikmix tal-ġilda fuq il-ġilda tal-bniedem

Analiżi statistika tal-parametri tat-tikmix saret permezz ta 'sistema ta' analiżi ta 'immaġni 3D, biex tevalwa l-effetti tat-titjib tat-tikmix tal-ġilda tal-prodott tat-test fuq il-ġilda tal-bniedem. Meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, il-parametru "Fond medju tat-tikmix" naqas 4.77 fil-mija f'4 ġimgħat u 4.25 fil-mija fi 8 ġimgħat, il-parametru "Mean depth l-akbar tikmix" naqas 3.37 fil-mija f'4 ġimgħat u 4.53 fil-mija fi 8 ġimgħat, " Max. parametru tal-akbar t-tikmix tal-fond naqas 4.36 fil-mija f'4 ġimgħat u 7.19 fil-mija fi 8 ġimgħat, il-parametru "Tul totali tat-tikmix" naqas 1.61 fil-mija f'4 ġimgħat u 2.67 fil-mija fi 8 ġimgħat, il-parametru "Ra" naqas 4.22 fil-mija f'4 ġimgħat u 3.90 fil-mija fi 8 ġimgħat, il-parametru "Ry" naqas 2.66 fil-mija f'4 ġimgħat u 7.11 fil-mija fi 8 ġimgħat, il-parametru "Rz" naqas 3.69 fil-mija f'4 ġimgħat u 6.22 fil-mija fi 8 ġimgħat, it-tnaqqis kien 3.69 fil-mija ‐7.11 fil-mija (Figura 4).

4|KONKLUŻJONI

Vitamina Ċhija molekula kummerċjalment importanti iżda instabbli, għalhekk it-titjib tal-istabbiltà tiegħu huwa ta 'interess għal diversi setturi tas-suq. Ix-xogħol tagħna juri li Aptamin C, aptamers tad-DNA, potenzjalment jestendi l-ħajja fuq l-ixkaffa u jżid il-qawwa ta’ prodotti bħal dawn billi jdewwemvitamina Ċ ossidazzjonif'soluzzjoni. Aħna wrew l-effikaċja klinika tal-kumpless Aptamin C fit-titjib tat-tikmix u l-idratazzjoni tal-ġilda. Aptamin C kumpless jista 'wkoll jgħin biex ittaffi l-ġilda fil-ħarxa.

itejbu jbajdu l-ġilda