Carvedilol, Imblokkatur Adrenerġiku, Jrażżan is-Sinteżi tal-Melanin Billi Jinibixxi l-Pathway ta' Sinjali CAMP/CREB f'Melanoċiti Umani U Kultura tal-Ġilda tal-Bniedem Ex Vivo

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Myoung Eun Choi 1,†, Hanju Yoo 1,2,†, Ha-Ri Lee 2,3, Ik Joon Moon 1, Woo Jin Lee 1,Youngsup Song 3,*,‡ u Sung Eun Chang 1

Astratt:Il-katekolamini jiffunzjonaw permezz ta' riċetturi akkoppjati mal-proteini G, li jwasslu għal żieda fil-livelli intraċellulari ta' 30, 50-cyclic adenosine monophosphate (cAMP) f'diversi ċelloli. Catecholaminebiosynthesis u r-riċettur -adrenerġiku jeżistu fimelanoċiti; għalhekk, il-katekolamini jistgħu jilagħbu rwoli kritiċi fil-pigmentazzjoni tal-ġilda. Madankollu, l-azzjoni tagħhom u l-mekkaniżmi li jimmedjaw il-ġilda inumana tal-melanoġenesi għadhom ma ġewx investigati. Għalhekk, eżaminajna l-effett potenzjali kontra l-melanogenetice ta 'carvedilol, imblokkatur mhux selettiv b'attivitajiet ta' imblukkar dgħajfa 1-. Carvedilol naqqas il-kontenut ta' melanin u l-attività ċellulari tyrosinase mingħajr ma tikkomprometti l-vijabbiltà ċellulari fil-bniedem normalimelanoċitikif ukoll fil Mel-Ab immortalized melanocytes ġurdien. Fattur ta' traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmija (MITF), tyrosinase, tyrosinase-relatedprotein (TRP)-1, u TRP-2 irregolat 'l isfel. It-trattament b'Carvedilol wassal għar-regolazzjoni 'l isfel tal-proteina li tgħaqqad l-element fosfor-cAMPresponse (CREB). Barra minn hekk, iż-żieda fil-livelli ta 'cAMP fuq it-trattament bil-forskolin qalbet l-azzjoni anti-melanoġenika ta' carvedilol. Barra minn hekk, carvedilol remarkably reduced l-indiċi tal-melanin fil-kulturi tal-ġilda tal-bniedem irradjati bl-ultravjola. Meħuda flimkien, ir-riżultati tagħna jindikaw li carvedilol effettivament irażżan il-melanoġenesi fil-bniedemmelanoċitiu ex vivohuman ġilda billi jinibixxi s-sinjalar cAMP/protein kinase A/CREB. L-effetti anti-melanoġeniċi ta 'carvedilol għandhom sinifikat potenzjali għall-ġildajbajduaġenti.

Kliem ewlieni:karvedilol; imblokkatur adrenerġiku;sintesi tal-melanin; sinjalar cAMP/CREB

Cistanchehuwa kapaċi jinibixxi s-sintesi tal-melanin

1. Introduzzjoni

Firxa wiesgħa ta 'disturbi pigmentari tal-ġilda għandha impatt psikoloġiku u soċjali sinifikanti fuq il-pazjenti. Diversi modalitajiet ta' trattament, inklużi aġenti sistemiċi u topiċi kif ukoll terapija bil-laser, ġew żviluppati [1-3]. Madankollu, ir-riżultati huma ħafna drabi mhux sodisfaċenti u reazzjonijiet avversi, bħal iperpigmentazzjoni post-infjammatorja (PIH) u ipopigmentazzjoni, mit-trattament huma komuni. Barra minn hekk, it-trattament huwa għali u jieħu ħafna ħin [4-6].

Il-katekolamini, li jinkludu dopamine, epinephrine, u norepinephrine, huma molekuli ta 'sinjalazzjoni li jaġixxu bħala newrotrasmettituri u ormoni endokrinali. Fil-ġilda, il-bijosinteżi u d-degradazzjoni tal-katekolamini jseħħu fil-keratinoċiti umani, iżda s-sintesi tal-katekolamini fil-melanoċiti hija kemmxejn differenti [7-9]. Il-katekolamini jiffunzjonaw permezz ta' riċetturi akkoppjati mal-proteini G (GPCRs). L-irbit tal-catecholamines mal-GPCRs iqanqal l-attivazzjoni tal-adenylatecyclase intraċellulari, li jissintetizza 30, 50-cyclic adenosine monophosphate (cAMP) minn ATP [10]. Il-cAMP secondmessenger jeżerċita l-attività tiegħu billi jorbot is-subunità R tal-proteina kinażi A (PKA), li jirriżulta fil-fosforilazzjoni tal-proteina li torbot l-element tar-rispons cAMP (CREB). Il-GPCRs huma attivati ​​minn amini u peptidi, inklużi glucagon, ormon tal-paratirojde, secretin u calcitonin [10].

Antagonisti tar-riċetturi adrenerġiċi jinkludu antagonisti tar-riċettur u tar-riċettur. -Riċetturi antagonisti huma sottokategorizzati f'aġenti mhux selettivi, 1-selettivi, u 2-selettivi, filwaqt li -antagonisti tar-riċetturi huma sottoklassifikati bħala mhux selettivi, 1-selettivi, u 2-selettivi aġenti bbażati fuq l-attivitajiet ta' imblukkar selettiv tagħhom. B'differenza mill-antagonisti tar-riċetturi mhux selettivi tal-ewwel ġenerazzjoni, bħal propranolol, timolol, u nadolol, carvedilol huwa imblokkatur mhux selettiv tat-tielet ġenerazzjoni li juri azzjonijiet vażodilataturi billi jimblokka 1-adrenoreceptors (1-ARs) [11]. Għalhekk, carvedilol huwa -imblokkatur annunciattiv b'attivitajiet ta' imblukkar dgħajfin 1-[12]. Jintuża prinċipalment bħala medikazzjoni orali biex tikkontrolla pressjoni tad-demm għolja u mard tal-qalb konġestiv, simili għal imblokkaturi oħra [12]. Madankollu, l-imblokkaturi tat-tielet ġenerazzjoni juru attivitajiet anġjoġeniċi, antiossidanti, anti-proliferattivi, anti-ipertrofiċi, u anti-apoptotiċi li jeħtieġu aktar iluċidazzjoni [11]. Fil-qasam dermatoloġiku, minħabba l-azzjonijiet antiossidanti u anti-infjammatorji tiegħu, il-carvedilol spiss jintuża f'formulazzjonijiet orali biex jittratta r-rosacea tematotelangiectatic [13,14]. Barra minn hekk, l-attività antiossidant ta 'carvedilol tirriżulta fil-prevenzjoni ta' karċinoġenesi tal-ġilda indotta mill-ultravjola (UV), li tagħmilha aġent attraenti għall-ġestjoni tal-mard tal-ġilda assoċjat mal-UV [15-18]. Madankollu, l-effetti kimopreventtivi ta 'carvedilolare ma ġewx medjati direttament permezz ta' ARs. [19] Għalkemm il-mekkaniżmu eżatt huwa relattivament mhux magħruf, il-mogħdija tas-sinjalar cAMP/PKA u PKC-δ tista 'tkun relatata mal-proprjetajiet ta' carvedilol kontra metastasi tal-ġilda [20].

Fl-istadji bikrija tal-investigazzjoni tal-pigmentazzjoni, tal-bniedemmelanoċitiinstabu li jesprimu -1-sinjalar AR wara induzzjoni extraċellulari b'norepinephrine. Madankollu, -ARs ma nstabux wara stimulazzjoni b'sinjalar adrenerġikumelanoċiti[8]. Bil-maqlub, Cillbro et al. aktar tard wera li sinjal funzjonali speċifiku 2-AR jeżisti fil-melanoċiti umani u li 2-ARstimulazzjoni twassal għal pigmentazzjoni permezz tal-mogħdija 2-AR/cAMP [7]. Għalhekk, ir-rwol ofcatecholamines fil-kontroll tal-pigmentazzjoni ġie ssuġġerit, u cAMP huwa meqjus bħala l-assi prinċipali għall-kontroll tal-catecholamine tal-melanoġenesi.

Il-melanogenesis hija proċess kumpless li jinvolvi bosta mogħdijiet. Tyrosinase, proteina 1 relatata mat-tyrosinase (TRP-1), u TRP-2, imsejħa wkoll dopachrome tautomerase (DCT), huma t-tliet enzimi ewlenin speċifiċi għall-melanoċiti involuti fisintesi tal-melanin[21]. Il-melanogenesis hija indotta jew inibita minn bosta fatturi, inklużi ormoni, ċitokini, newrotrasmettituri, fatturi ta 'tkabbir, u mikromolekuli [21-23].

L-aktar regolatur pożittiv importanti huwa r-riċettur tal-melanocortin-1 u l-ligandi tiegħu, il-melanokortins u l-ormon adrenokortikotropiku [23]. Madankollu, fatturi mixxellanji involuti fil-melanoġenesi huma -endorphin, estroġeni, androġeni, vitamina D3, u catecholamines [23]. L-evidenza kumulattiva ssuġġerixxiet li L-tyrosine u L-DOPA, li huma sottostrati u intermedji tal-melanoġenesi, jaġixxu bħala indutturi u regolaturi pożittivi tal-mogħdija melanoġenika, flimkien ma 'regolaturi ta' funzjonijiet ċellulari oħra [24]. Barra minn hekk, Jeff Howe et al. issuġġerixxa li l-induzzjoni u r-regolamentazzjoni tal-melanoġenesi minn L-tyrosine hija medjata b'attivazzjoni diretta ta 'riċetturi adrenerġiċi minn L-tyrosine, aktar milli kkawżati mill-prodotti metaboliċi tiegħu bħal catecholamines [25]. Fl-istudji tagħhom, norepinephrine u epinephrine stimulaw l-attività tyrosinase, iżda l-effett induttiv tagħhom fuqsintesi tal-melaninkien komparattivament aktar baxx minn L-tyrosine [25].

Il-katekolamini jista' jkollhom rwoli importanti fis-sistema tal-pigmentazzjoni tal-ġilda; madankollu, l-effetti tagħhom fuq il-melanoġenesi fir-rigward tal-azzjoni tal-imblokkatur mhux selettiv tat-tielet ġenerazzjoni għadhom ma ġewx esplorati. Għalhekk, fl-istudju preżenti, għandna l-għan li ninvestigaw jekk carvedilol jaffettwax il-melanogenesis u esplorajna l-mekkaniżmi ta 'azzjoni tiegħu fil-bniedemmelanoċitiu l-ġilda umana ex vivo u l-użu potenzjali tagħha bħala ajbajduprodott.

jinibixxu l-formazzjoni tal-melanin bilherba cistanches

2. Riżultati

2.1. Carvedilol Jrażżan Melanogenesis

Iċ-ċitotossiċità ta 'carvedilol kontra bniedem normalimelanoċiti(NHMs) u Mel-ab cellswas evalwati permezz ta 'assaġġ ta' proliferazzjoni taċ-ċelluli WST. Konċentrazzjoni ta 'carvedilol ta' 10 µM bdiet turi ċitotossiċità kemm kontra ċelluli NHMs kif ukoll Mel-ab (Figura 1A, B). Għalhekk, f'valutazzjonijiet ulterjuri, użajna 8 µM ta 'carvedilol, li mhuwiex ċitotossiku għall-NHMs.

It-trattament b'carvedilol naqqas il-kontenut ta 'melanin b'mod dipendenti fuq id-doża mingħajr ma jaffettwa l-vijabbiltà ta' NHMs (Figura 1C). Il-kontenut ta 'melanin naqas bi 28.36 fil-mija wara trattament ta' 96 hof 8 µM carvedilol (Figura 1C). Iż-żieda ta '100 mg/mL arbutin naqqset il-kontenut ta' melanin sa grad inqas minn carvedilol (Figura 1C). Wara 4 ijiem ta 'trattament ta' carvedilol, il-kontenut tal-melanin naqas b'mod dipendenti fuq il-ħin (Figura 1D). Madankollu, it-trattament b'forskolin (FSK) għal 4 ijiem wara t-trattament minn qabel b'carvedilol wassal għal żieda fil-kontenut ta' melanin (Figura 1E). /PKA/CREB mogħdija (Figura 1F).

2.2. Carvedilol Inibixxi l-Espressjoni tal-MITF u l-Ġeni fil-Mira tiegħu u Tnaqqas il-Livell ta' Phospho-CREB Sin NHMs

Minħabba li carvedilol naqqas l-akkumulazzjoni tal-melanin, investigajna l-attività tat-tirosinażi ċellulari. It-trattament b'carvedilol naqqas l-attività tat-tyrosinase ċellulari b'mod dipendenti fuq id-doża fl-NHMs (Figura 2A). L-attività Tyrosinase naqset bi 28.48 fil-mija wara 96 ​​siegħa ta 'trattament ta' 8 µM carvedilol (Figura 2A). Imbagħad iddeterminajna jekk carvedilol jaffettwax l-espressjoni ta 'MITF, li għandu rwol kruċjali fir-regolamentazzjoni ta' tyrosinase u ġeni melanoġeniċi downstream. It-trattament FSK żied il-livelli ta 'cAMP intraċellulari u biddel l-azzjonijiet anti-melanoġeniċi ta' carvedilol. Carvedilol naqqas b'mod sinifikanti l-livelli ta 'proteina ta' MITF, fattur ta 'traskrizzjoni ċentrali ta' melanogenesis, f'72 siegħa (Figura 2B). Barra minn hekk, l-espressjoni tal-ġeni fil-mira tagħha, bħal tyrosinase u TRP-1, naqset wara t-trattament bil-carvedilol (Figura 2B). Dawn ir-riżultati jindikaw li carvedilol jinibixxi l-melanoġenesi billi jirregola s-sinjalar MITF.

Sussegwentement, investigajna l-mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni intraċellulari tal-melanoġenesi, li jirregolaw MITFtranscription, billi kejlu l-livelli ta' espressjoni ta 'phospho-CREB u phospho-ERK. Il-livelli ta' Phospho-ERK ma nbidlux maż-żmien wara kura b'carvedilol; madankollu, il-livelli ta' fosfo-CREB naqsu (Figura 2B). B'mod konsistenti ma 'osservazzjonijiet preċedenti, ir-riżultati tagħna wrew li carvedilolinhibits melanoġenesi billi jinibixxi l-mogħdija tas-sinjalar cAMP/PKA/CREB. Barra minn hekk, it-trattament FSK biddel l-azzjoni anti-melanoġenika ta 'carvedilol billi żied il-livelli ta' cAMP.

2.3. Indiċi Melanin u Tbajja Immunoistokimika fil-Kultura tal-Ġilda tal-Bniedem Ex Vivo

Id-densità tal-melanocyte epidermali u l-indiċi tal-melanin f'sezzjonijiet tal-kultura tal-ġilda umana ex vivo ġew skoperti bit-tbajja' ta' Melan-A u Fontana-Masson, rispettivament. Carvedilol ma affettwax in-numru ta' Melan-A ( plus )melanoċitifil-kampjun trattat b'carvedilol flimkien ma 'UVradiation (UVR) meta mqabbel ma' dak fil-kampjun trattat b'UVR waħdu (Figura 3A). Il-melanoċiti HMB45( plus ) jistgħu jindikaw li l-attività melanoċitika żdiedet mat-trattament UVR u ġiet regolata b'mod invers wara t-trattament b'carvedilol (Figura 3B). Madankollu, il-kontenut ta 'melanin tnaqqas b'mod sinifikanti f'kampjuni ttrattati b'carvedilol flimkien ma' UVR meta mqabbel ma 'dak f'kampjuni trattati bl-UVR waħdu (Figura 3C). Għall-kalkolu tal-indiċi tal-melanin, il-frazzjoni taż-żona mtebba' Fontana-Masson fuq l-erja totali bejn kampjun espost għal UVR u dik għal carvedilol flimkien ma' UVR ġiet ikkalkolata u mqabbla (Figura 3D). Lisati taċ-ċelluli ta 'kull kampjun ġew analizzati permezz ta' blotassay tal-Punent, li żvela li tyrosinase, TRP1, u DCT żdiedu permezz ta 'trattament UVR u downregulated bycarvedilol (Figura 3E). Bħala riżultat, carvedilol naqqas b'mod notevoli l-indiċi tal-melanin u l-proteini relatati mal-melanogenesis, u wera l-effett anti-melanoġeniku tiegħu fuq il-ġilda tal-bniedem ittrattata bl-UVR.

3. Diskussjoni

Il-melanin huwa l-pigment responsabbli għall-kulur tal-ġilda u tax-xagħar u huwa sintetizzat fil-melanosomes minnmelanoċiti. Għalkemm il-melanin epidermali għandu rwol protettiv importanti kontra l-UVR, il-produzzjoni żejda u l-akkumulazzjoni tal-melanin fil-ġilda jikkawżaw disturbi iperpigmentarji tal-ġilda idejqek, bħal PIH, dispigmentazzjoni assoċjata mat-tixjiħ tal-fotografija, melasma u lentigines solari [18,26]. Għalhekk, l-inibizzjoni tal-melanoġenesi kienet il-fokus ta 'trattamenti mediċinali u kosmetiċi għas-sbuħija u s-saħħa tal-ġilda. Saru sforzi konsiderevoli biex jiġu identifikati aġenti ġodda u effettivi kontra l-pigmentazzjoni. Madankollu, il-mekkaniżmi kontra l-melanogenesis tal-aġenti speċifiċi bħalissa huma inċerti u ġeneralment ġew evalwati fiċ-ċelloli tal-ġrieden, li jagħtu riżultati li mhux dejjem ikunu konsistenti ma 'dawk tal-provi tal-ġilda umana [27,28]. Barra minn hekk, peress li l-melanoġenesi tal-melanoċiti hija regolata sewwa minn keratinoċiti u ċelluli ġirien oħra, ċelluli umani kkultivati ​​jew skin uman ex vivo huma settings sperimentali aktar affidabbli għall-esplorazzjoni ta 'effetti effettivi.jbajduaġenti [29]. Il-biċċa l-kbira tal-aġenti li jbajdu l-ġilda, kemm jekk derivati ​​b'mod naturali jew kimikament, jistgħu jikkawżaw tossiċità jew irritazzjoni tal-ġilda, li jistgħu jiġu mbassra sa ċertu punt bl-użu ta 'analiżi tal-vijabbiltà taċ-ċelluli in vitro b'melanoċiti. Fl-istudju tagħna, carvedilol ma werax ċitotossiċità meta użat f'dożi moderati.

cistanche bienfaits

Il-kremi topiċi Hydroquinone jistgħu jirriżultaw f'disturbi mhux mixtieqa ta 'ipopigmentazzjoni u tossiċità tal-ġilda [30-32]. Barra minn hekk, xi wħudjbajduil-kożmetiċi għandhom konsegwenzi diżastrużi billi jinduċu ipopigmentazzjoni permezz tad-degradazzjoni tal-proteini tyrosinase [33-35]. L-aġenti li jbajdu jistgħu jintużaw f'dożi ogħla skont l-utent biex jimmassimizzaw it-tibjid tal-leżjonijiet iperpigmentari. Għalhekk, l-isforzi biex jiskopru aġenti li jbajdu l-ġilda sikuri u b'saħħithom huma kontinwament taħt esplorazzjoni.

Għalhekk, l-istudju preżenti kien iddisinjat biex jitwettaq f'ċelloli umani normali u ġilda umana ex vivo. Barra minn hekk, ibbażat fuq il-mekkaniżmu ta 'azzjoni stabbilit tal-katecholamines ta' sinjalazzjoni G, li jżid il-livell ta 'cAMP ċellulari, aħna nemmnu li imblokkatur adrenerġiku jista' jnaqqas il-livelli ta 'cAMP u jinibixxi l-passaġġ ta' sinjalazzjoni UVR/cAMP/CREB, li huwa l-mekkaniżmu ewlieni għall-iperpigmentazzjoni tal-ġilda indotta mill-UV [36,37]. Għalhekk, aħna ipoteżijna li l-imblokkaturi adrenerġiċi li jnaqqsu l-livelli ta 'cAMP inaqqsusintesi tal-melanin.

Barra minn hekk, biex tiżviluppa sigurjbajduaġenti, mekkaniżmi affidabbli u riproduċibbli ta'anti-melanogenesis għandhom jiġu segwiti b'mod parallel. L-aktar stimulu fiżjoloġikament sinifikanti huwa l-UV, u fost is-sinjalar UVR għall-epidermalimelanoċiti, l-assi CREB huwa l-aktar mogħdija stabbilita għar-regolamentazzjoni tal-melanoġenesi fl-epidermide umana [29]. L-espożizzjoni għall-UV suċċessivament jattiva l-produzzjoni ta 'AMP, PKA, u l-fattur ta' traskrizzjoni CREB, li, min-naħa tiegħu, jinduċi l-espressjoni ta 'MITF u ġeni melanoġeniċi fil-mira downstream [38,39]. Minbarra l-fosforilazzjoni CREB minn PKA, studji reċenti wrew li r-reklutaġġ ta 'coactivator ta' traskrizzjoni regolat minn CREB (CRTC) 3 għall-kumpless ta 'traskrizzjoni CREB huwa meħtieġ ukoll għal MITF stimulat minn cAMP. L-MITF twettaq l-aktar rwol essenzjali fir-regolamentazzjoni tasintesi tal-melaninu t-traskrizzjoni li tirriżulta ta' enzimi melanoġeniċi [26,40,41]. Matul dan il-proċess ta 'sinjalazzjoni intraċellulari, il-melanoġenesi hija regolata minn enzima ewlenija, tyrosinase, u proteini enżimatiċi addizzjonali, bħal TRP -1 u DCT [1-4]. Fl-istudju preżenti, carvedilol naqqas b'mod effettiv il-fosforilazzjoni ta' CREB, li jindika li naqqas il-proteini MITF u tyrosinase billi inibixxi t-traskrizzjoni tal-MITF (Figura 4). Meta wieħed iqis li r-regolamentazzjoni tal-ġeni tal-mRNA tal-MITF hija kkontrollata b'mod kumpless u salvata minn molekuli oħra ta 'sinjalazzjoni intraċellulari u koattivaturi, ir-regolamentazzjoni tal-livell ta' traskrizzjoni tal-MITF hija strateġija promettenti għall-esplorazzjoni ta 'ingredjenti b'saħħithom li jbajdu l-ġilda minħabba li l-funzjoni ta' sopravivenza tal-MITF hija preservata u salvata [1,38,40]. Tabilħaqq, meta investigajna t-traskrizzjoni tal-MITF indotta mill-FSK, l-mRNA tal-MITF instab li kellu l-kurva ta 'rispons tal-quċċata tiegħu stess għall-melanoġenesi u s-sopravivenza ċellulari għall-omeostażi ċellulari. Il-funzjonijiet bijoloġiċi ta'melanoċitideher li kien intrinsikament regolat minn sinjali oħra ta 'feedback fil-melanoċiti umani. Barra minn hekk, carvedilol għandu riskju aktar baxx ta 'avvenimenti avversi ta' ipopigmentazzjoni peress li jnaqqas l-attività ċellulari tyrosinase maż-żmien, aktar milli f'daqqa.

Il-katekolamini jinkludu dopamine, epinephrine u norepinephrine u huma sintetizzati mit-tyrosine tad-dieta bl-azzjoni tal-enzimi [42]. Il-bijosintesi u d-degradazzjoni tal-katekolamini jseħħu f'firxa wiesgħa ta 'ċelluli, inklużi n-newroni tan-nervituri simpatetiċi u l-moħħ, ċelluli adrenomedullari, ċelluli endoteljali, newtrofili u ċelluli mononukleari [43-45]. Fil-ġilda tal-bniedem, il-catecholaminesynthesis isseħħ fil-keratinoċiti. Bil-maqlub, il-melanoċiti jesprimu wkoll mRNA u enzimi għas-sintesi awtokrina ta 'norepinephrine iżda mhux epinephrine [7,42]. Fil-bniedemmelanoċiti, -1-AR jista' jkun importanti fir-reazzjoni għal norepinephrine, iżdasintesi tal-melaninhija influwenzata wkoll minn 2-ARsignaling funzjonali [7,8]. Interessanti, pazjenti b'vitiligo żdiedu 2-densità AR fil-keratinoċiti [46].Instabu livelli miżjuda ta' norepinephrine fl-awrina u fil-plażma ta' pazjenti b'vitiligo mhux segmentali, li jimplika li l-metaboliżmu tal-katekolamina jista' jkun assoċjat mal-iżvilupp u l-progressjoni tal-vitiligo [47]. Barra minn hekk, minbarra n-newrotrasmettituri klassiċi tal-istress, il-melanoċiti jipproduċu newropeptidi u ormoni, bħal fattur li jirrilaxxa l-corticotropin u proopiomelanocortin.Din il-produzzjoni hija stimulata minn UVR u aġenti oħra li jaġixxu fi ħdan is-sistema newroendokrinali tal-ġilda [48]. Għalhekk, l-azzjoni tal-katekolamini u l-funzjoni melanoċitika huma relatati mill-qrib f'varjetà ta 'mogħdijiet kumplessi. Barra minn hekk, carvedilol jista' jinterferixxi mar-reazzjonijiet kimiċi fil-passaġġ melanoġeniku u din il-possibbiltà għandha tiġi studjata aktar. Carvedilol jista 'jkollu vantaġġi peress li għandu effetti anti-infjammatorji simultanji, peress li l-biċċa l-kbira tad-disturbi iperpigmentari huma PIH klinikament jew sub-klinikament f'pazjenti ta' ġilda skura. Peress li l-permeazzjoni ta 'carvedilol mill-ġilda ġiet studjata kemm in vitro kif ukoll ex vivo, carvedilol jista' jiġi żviluppat bħala topikujbajduaġent fil-futur [49–51].

L-għoti sistemiku ta' carvedilol jista' jikkawża bradikardija, sturdament, pressjoni baxxa, uġigħ ta' ras, u ħfief. L-applikazzjoni topika ta 'carvedilol normalment ma tikkawżax sintomi sistemiċi; madankollu, għandna nagħtu attenzjoni bir-reqqa lil dawn is-sintomi meta napplikawha għal pazjenti b'barrieri tal-ġilda difettużi, bħal dawk b'dermatite atopika. Barra minn hekk, ekżema, ħakk, u eruzzjoni tal-likenoid huma rrappurtati f'każijiet rari meta tieħu carvedilol. Dawn l-effetti sekondarji dermatoloġiċi kif ukoll dermatite tal-kuntatt għandhom jitqiesu wkoll meta jiġi applikat carvedilol bħala topiku.jbajduaġent.

Bħala konklużjoni, urejna li carvedilol naqqas b'mod effettiv il-melanoġenesi fil-bniedemmelanoċitiu l-ġilda umana ex vivo billi jinibixxi l-passaġġ cAMP/CREB/MITF, li jissuġġerixxi l-użu potenzjali tiegħu bħala aġent li jbajdu effettiv. Għandha ssegwi aktar investigazzjoni tal-involviment funzjonali tar-riċettur adrenerġiku minn carvedilol fil-melanoċiti umani.

4. Materjali u Metodi

4.1. Materjali

Carvedilol, 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-DOPA), tossina tal-kolera (CT), u 12-Otetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) inxtraw minn Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) u Dulbecco's phosphate-buffered saline werepurchased minn WelGENE (Daegu, Korea). Serum bovin tal-fetu (FBS), antibijotiku-antimikotiku, u trypsin-EDTA inxtraw minn Gibco (Grand Island, NY, USA). Medju 254 (CascadeBiologics, Portland, OR, USA) u FSK ([3R-(3 ,4a ,5 ,6 ,6a ,10 ,10a ,10b )]-5-(Acetyloxy)-3-etenildodekaidro{ {24}},10,10b-trihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-1H-naphtho[2,1-b]pyran-1-wieħed )inxtraw mingħand Tocris Bioscience (Bristol, UK).

4.2. Linji taċ-Ċelloli u Kultura taċ-Ċelloli

NHMs primarji miksuba minn Invitrogen (Carlsbad, CA, USA) inżammu f'Medju 254 (Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) supplimentat b'Suppliment tat-Tkabbir tal-Bniedem Melanocyte (Thermo Fisher). Iċ-ċelloli Mel-ab, linja taċ-ċelluli tal-melanoċiti immortalizzati spontanjament derivati ​​mill-ġrieden, inkisbu mill-Bank Korean tal-Linja taċ-Ċelluli (KCLB, Seoul, Korea) u miżmuma f'DMEM supplimentat b'10 fil-mija FBS, penicillin-streptomycin, 100 nM TPA, u 1 nM CT. Iċ-ċelloli kollha kienu miżmuma b'mod regolari f'37 ◦C f'ambjent umidifikat ta '5 fil-mija CO2.

4.3. Antikorpi u Western Blots

Iċ-ċelloli ġew maħsula darba b'PBS kiesaħ u lysed fil-proteina liżi buffer (1 fil-mija SDS f'10 mMTris u 5 mM EDTA, pH 7.4), segwit minn inkubazzjoni f'98 ◦C għal 10 min. Il-kampjuni tal-proteini ġew separati b'elettroforeżi tal-ġell SDS-polyacrylamide 8 fil-mija, imblukkati fuq membrani tan-nitrocellulose (GE Healthcare Life Sciences, Chicago, IL, USA), u mbagħad imblukkati b'salina buffered Tris li fiha 0.5 fil-mija Tween 20 u 5 fil-mija BSA, u soġġetti għal immunoblotting. Antikorpi Tyrosinase u TRP-1 inxtraw minn Santa Cruz Biotechnology (Dallas, TX, USA), u MITF inxtara minn Abcam (Cambridge, UK). -tubulina (Gentex, Holland, MI, USA) intuża bħala kontroll intern tat-tagħbija.

4.4. Kontenut tal-melanina

L-effett ċitotossiku ta 'carvedilol ġie evalwat bl-użu ta' Ez-Cytox Cell Viability Assay Kit (Dogen-Bio Co., Ltd., Seoul, Korea) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Iċ-ċelloli Mel-Ab u l-NHMs inżergħu fi pjanċi b'sitt bir f'densità ta '6 × 105 u 3 × 105cells/well, rispettivament. Iċ-ċelloli ġew ittrattati b'carvedilol, kif muri fil-figuri, għal 3 jew 5 ijiem (d). Qabel ma tkejjel il-kontenut ta 'melanin, iċ-ċelloli ġew osservati taħt mikroskopju b'kuntrast ta' fażi u ritratti (Olympus, Tokyo, Ġappun). Iċ-ċelloli ġew maħlula f'550 µL ta' 1 N NaOH f'100 ◦C għal 30 min u ċentrifugati fi 13,000 rpm għal 5 min. L-assorbiment tas-supernatanti kienet imkejla f'405 nm minn microplate reader. Il-kontenut ta 'melanin intraċellulari kien ippreżentat bħala perċentwali relattiv għall-kontroll mhux ittrattat taċ-ċelloli. Arbutin (100 mg/mL) intuża bħala kontroll pożittiv.

4.5. Attività Ċellulari Tyrosinase

L-attività tyrosinase ġiet evalwata billi tkejjel ir-rata ta 'formazzjoni ta' dopachrome ta 'L-DOPA.Wara l-inkubazzjoni ma' carvedilol, iċ-ċelloli ġew maħsula f'PBS kiesaħ bis-silġ u lysed f'tyrosinase lysis buffer (buffer tal-fosfat, pH 6.8, li kien fih 1 fil-mija Triton X{ {5}}) b'ċikli ripetuti ta 'iffriżar/tidwib. Il-lisati ġew iċċarati permezz ta' ċentrifugazzjoni f'15,000 rpm f'4 ◦C għal 10 min. Wara li kkwantifikaw il-livelli tal-proteina tal-lisat u aġġustaw il-konċentrazzjonijiet tal-proteini b'liżi buffer, 90 µL ta' supernatant imħallat ma' 10 µL ta' 10 mM L-DOPA f'tyrosinase lysis buffer ġew inkubati f'37 ◦C. 475 nm bl-użu ta' microplatereader kull 10 minuti għal mill-inqas siegħa. Arbutin (100 mg/mL) intuża bħala aġent ta 'kontroll pożittiv.

herba cistanches

4.6. Analiżi Immunoistokimika

Tessuti tal-ġilda tal-bniedem inkorporati fil-paraffin inqatgħu f’sezzjonijiet ħxuna ta’ 6-µm u mtebbgħin b’Melan-A (Novocastra, Newcastle, UK), kits Fontana-Masson (ID laboratorji, Londra, ON, Kanada), u HMB45 (Santa Clara). , CA, USA), skont l-istruzzjonijiet tal-manifatturi. L-indiċi tal-melanin ġie ddeterminat billi tkejjel il-perċentwal taż-żona mtebbgħin mal-erja totali tat-tessut bl-użu ta 'ImageJ 1.52asoftware (Istituti Nazzjonali tas-Saħħa, Bethesda, MD, USA).

4.7. Analiżi Statistika

Id-dejta hija ppreżentata bħala l-mezzi ± żball standard tal-medja (SEM), u s-sinifikat statistiku ġie ddeterminat minn test t ta' Student mhux imqabbad bl-użu tas-softwer GraphPad Prism5 (San Diego, CA, USA). F'dan l-istudju, p < 0.05,="" p="">< 0.01,="" u="" p="">< 0.001="" tqiesu="" statistikament="" sinifikanti="" u="" huma="" rappreżentati="" minn="" *,="" **,="" u="" ***,="">

Referenzi

1. Gillbro, JM; Olsson, MJ Il-melanoġenesi u l-mekkaniżmi ta 'aġenti li jħaffu l-ġilda—Approċċi eżistenti u ġodda. Int. J. Kosmet. Sci. 2011, 33, 210–221. [CrossRef] [PubMed]

2. Lee, YJ; Shin, HJ; Noh, TK; Choi, KH; Chang, SE Trattament ta 'Melasma u Iperpigmentazzjoni Post-Infjammatorja minn Picosecond 755-nm Alexandrite Laser f'Pazjenti Asjatiċi. Ann. Dermatol. 2017, 29,779–781. [CrossRef] [PubMed]

3. Lee, YJ; Park, JH; Lee, DY; Lee, JH Akkwista Dispigmentazzjoni Bilaterali fuq Wiċċ u Għonq: Approċċi Klinikament Appropriati. J. Korean Med. Sci. 2016, 31, 2042–2050. [CrossRef] [PubMed]

4. Kang, HJ; Na, JI; Lee, JH; Roh, MR; Ko, JY; Chang, SE Iperpigmentazzjoni ta 'wara l-infjammazzjoni assoċjata mat-trattament ta' lentigines solari bl-użu ta 'Q-Switched 532-nm Nd: YAG laser: A multicenter survey.J. Dermatologu. Ittratta. 2017, 28, 447–451. [CrossRef] [PubMed]

5. Kato, H.; Araki, J.; Eto, H.; Doi, K.; Hirai, R.; Kuno, S.; Higashino, T.; Yoshimura, K. Studju kkontrollat ​​prospettiv randomised ta 'aċidu tranexamic orali għall-prevenzjoni ta' iperpigmentazzjoni wara l-infjammazzjoni wara laser ruby ​​Q-switched. Dermatol. Surg. 2011, 37, 605–610. [CrossRef] [PubMed]

6. Taylor, CR; Anderson, RR Trattament ineffettiv ta 'melasma refrattarja u iperpigmentazzjoni ta' wara l-infjammazzjoni bil-laser ruby ​​Q-switched. J. Dermatol. Surg. Oncol. 1994, 20, 592–597. [CrossRef]

7. Gillbro, JM; Marles, LK; Hibberts, NA; Schallreuter, KU Autocrine catecholamine biosynthesis u sinjal thebeta-adrenoceptor jippromwovu pigmentazzjoni fil-melanoċiti epidermali umani. J. Investig. Dermatol.2004, 123, 346–353. [CrossRef]

8. Schallreuter, KU; Korner, C.; Pittelkow, MR; Swanson, NN; Gardner, ML L-induzzjoni tas-sistema ta' trasduzzjoni tas-sinjali ta' thealpha-1-adrenoceptor fuq melanoċiti umani. Exp. Dermatol. 1996, 5, 20–23.[CrossRef]

9. Sivamani, RK; Shi, B.; Griffiths, E.; Vu, SM; Lev-Tov, HA; Dahle, S.; Chigbrow, M.; La, TD; Mashburn, C.;Peavy, TR; et al. Ferita akuta tbiddel is-sinjalar beta2-adrenerġiku u l-mogħdijiet sintetiċi tal-katekolamina fil-keratinoċiti. J. Investig. Dermatol. 2014, 134, 2258–2266. [CrossRef]

10. Żmerill, riċetturi AC Catecholamine: Prototipi għal skoperta ta 'droga bbażata fuq GPCR. Adv. Pharmacol. 2013, 68,335–356.

11. Do Vale, GT; Ceron, CS; Gonzaga, NA; Simplicio, JA; Padovan, JC Tliet Ġenerazzjonijiet ta 'beta-blockers: Storja, Differenzi ta' Klassi, u Applikabilità Klinika. Curr. Ipertens. Apk 2019, 15, 22–31. [PubMed]

12. McTavish, D.; Campoli-Richards, D.; Sorkin, EM Carvedilol: Reviżjoni tal-proprjetajiet farmakodinamiċi u farmakokinetiċi tiegħu, u l-effikaċja terapewtika. Drogi 1993, 45, 232–258. [CrossRef] [PubMed]

13. Hsu, CC; Lee, JY Fawra qawwija tal-wiċċ u eritema persistenti ta 'rosacea ttrattati b'mod effettiv b'carvedilol, imblokkatur beta-adrenerġiku mhux selettiv. J. Am. Acad. Dermatol. 2012, 67, 491–493. [CrossRef][PubMed]

14. Pietschke, K.; Schaller, M. Ġestjoni fit-tul ta 'fawra tal-wiċċ distinta u eritema persistenti ofrosacea permezz ta' trattament b'carvedilol. J. Dermatolog. Ittratta. 2018, 29, 310–313. [CrossRef] [PubMed]

15. Chang, A.; Yeung, S.; Thakkar, A.; Huang, KM; Liu, MM; Kanassatega, RS; Parsa, C.; Orlando, R.;Jackson, EK; Andresen, BT; et al. Prevenzjoni tal-karċinoġenesi tal-ġilda mill-beta-blocker carvedilol. KanċerPrev. Riż. 2015, 8, 27–36. [CrossRef] [PubMed]

16. Chen, M.; Liang, S.; Shahid, A.; Andresen, BT; Huang, Y. Il-Beta-Blocker Carvedilol PreventedUltravjola-Medjata Ħsara ta 'Ċelloli Epidermali Murine u 3D Bniedem Reconstructed Ġilda. Int. J.Mol. Sci. 2020, 21, 798. [CrossRef] [PubMed]

17. Huang, KM; Liang, S.; Yeung, S.; Oiyemhonlan, E.; Cleveland, KH; Parsa, C.; Orlando, R.; Meyskens, FL, Jr.;Andresen, BT; Huang, Y. Carvedilol Applikat Topikament Jattenwa l-Karċinoġenesi tal-Ġilda Indotta mir-Radjazzjoni Ultravjola Solari. Kanċer Prev. Riż. 2017, 10, 598–606. [CrossRef]

18. Brenner, M.; Smigħ, VJ Ir-rwol protettiv tal-melanin kontra l-ħsara mill-UV fil-ġilda tal-bniedem. Photochem.Photobiol. 2008, 84, 539–549.

19. Cleveland, KH; Liang, S.; Chang, A.; Huang, KM; Chen, S.; Guo, L.; Huang, Y.; Andresen, BT Carvedilolinhibits JB6 P medjat mill-EGF flimkien ma 'formazzjoni ta' kolonji permezz ta 'mekkaniżmu indipendenti mill-adrenoceptors.PLoS ONE 2019, 14, e0217038. [CrossRef]

20. Dzong, G.; Zhongbing, M.; Qinye, F.; Zhigang, Y. Carvedilol irażżan il-migrazzjoni u l-invażjoni ta 'ċelluli malinni tas-sider billi jinattiva Src li jinvolvi mogħdija ta' sinjalazzjoni cAMP / PKA u PKCdelta. J. Cancer Res. Ther.2014, 10, 998–1003.

21. Rzepka, Z.; Bussman, E.; Beberok, A.; Wrzesniok, D. Minn tyrosine għal melanin: Mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni u fatturi li jirregolaw il-melanoġenesi. Postepy Hig. Med. Dosw. Online 2016, 70, 695–708. [CrossRef]

22. Kim, Y.; Cho, JY; Oh, SW; Kang, M.; Lee, SE; Jung, E.; Park, YS; Lee, J. Globular adiponectin jaġixxi bħala sinjal melanoġeniku f'melanoċiti epidermali umani. Br. J. Dermatol. 2018, 179, 689–701. [CrossRef][PubMed]

23. Slominski, A.; Tobin, DJ; Shibahara, S.; Wortsman, J. Pigmentazzjoni tal-melanin fil-ġilda tal-mammiferi u r-regolamentazzjoni ormonali tagħha. Physiol. Rev 2004, 84, 1155–1228. [PubMed]

24. Slominski, A.; Zmijewski, MA; Pawelek, J. L-tyrosine, u L-dihydroxyphenylalanine bħala regolaturi li jixbhu l-ormoni tal-funzjonijiet tal-melanoċiti. Melanoma Ċellula tal-pigment Res. 2012, 25, 14–27. [CrossRef] [PubMed]

25. Howe, J.; Costantino, R.; Slominski, A. Dwar il-mekkaniżmu putattiv ta 'induzzjoni u regolazzjoni tal-melanogenesis minn L-tyrosine. Acta Derm Venereol. 1991, 71, 150–152.

26. D'Mello, SA; Finlay, GJ; Baguley, BC; Askarian-Amiri, ME Mogħdijiet ta' Sinjali fil-Melanoġenesi. Int. J.Mol. Sci. 2016, 17, 1144. [CrossRef]

27. Jung, JA; Kim, BJ; Kim, MS; Inti, HJ; Yoon, ES; Dhong, ES; Park, SH; Kim, DW Effett protettiv tat-tossina botulinika kontra l-pigmentazzjoni tal-ġilda kkaġunata mill-ultravjola. Plast. Reconstr. Surg. 2019, 144, 347–356.[CrossRef]

28. Jeong, YM; Oh, WK; Tran, TL; Kim, WK; Sung, SH; Bae, K.; Lee, S.; Sung, JH Aglycone ta 'Rh4inhibits is-sintesi tal-melanin fiċ-ċelloli tal-melanoma B16: Involviment possibbli tal-mogħdija tal-proteina kinase A.Biosci. Bijoteknoloġija. Biochem. 2013, 77, 119–125. [CrossRef]

29. Kim, YH; Kim, D.; Ħong, AR; Kim, JH; Yoo, H.; Kim, J.; Kim, I.; Kang, SW; Chang, SE; Kanzunetta, Y.Potenzjal Terapewtiku ta 'Rottlerin għal Disturbi Iperpigmentari tal-Ġilda billi Inibixxi l-Attività Traskrizzjoni ta' Koattivaturi tat-Traskrizzjoni Irregolati minn CREB. J. Investig. Dermatol. 2019, 139, 2359–2367.e2.[CrossRef]

30. Das, A.; Ghosh, A.; Kumar, P. Lewkoderma kimika minħabba hydroquinone: Fenomenu mhux tas-soltu. Indjan J.Dermatol. Venereol. Leprol. 2019, 85, 567. [CrossRef]

31. Jow, T.; Hantash, BM Depigmentazzjoni indotta minn Hydroquinone: Rapport tal-każ u reviżjoni tal-letteratura.Dermatite 2014, 25, e1–e5. [CrossRef]

32. Kersey, P.; Stevenson, CJ Vitiligo u espożizzjoni fuq il-post tax-xogħol għall-idroquinone minn magni li jirfotografaw lilhom infushom. Ikkuntattja Dermat. 1981, 7, 285–287. [CrossRef] [PubMed]

33. Sasaki, M.; Kondo, M.; Sato, K.; Umeda, M.; Kawabata, K.; Takahashi, Y.; Suzuki, T.; Matsunaga, K.; Inoue, S. Rhododendron, kompost fenoliku li jinduċi d-depigmentazzjoni, jeżerċita ċitotossiċità tal-melanocyte permezz ta 'mekkaniżmu dipendenti mit-tyrosinase. Melanoma Ċellula tal-pigment Res. 2014, 27, 754–763. [CrossRef] [PubMed]

34. Yoshikawa, M.; Sumikawa, Y.; Hida, T.; Kamiya, T.; Kase, K.; Ishii-Osai, Y.; Kato, J.; Kan, Y.; Kamiya, S.;Sato, Y.; et al. Analiżi klinika u epidemjoloġika f'149 każ ta' leukoderma indotta mir-rhododendron.J. Dermatol. 2017, 44, 582–587. [CrossRef] [PubMed]

35. Harris, JE Vitiligo Indotta minn Kimiċi. Dermatol. Clin. 2017, 35, 151–161. [CrossRef] [PubMed]

36. Li-Sha, G.; Yi-He, C.; Na-Dan, Z.; Teng, Z.; Yue-Chun, L. Effetti tat-trattament ta 'carvedilol fuq l-espressjoni tal-proteina li torbot l-element ta' cAMPresponse kardijaku u l-fosforilazzjoni f'mijokardite indotta ta 'coxsackievirus B3-. BMC Cardiovasc. Disturb. 2013, 13, 100. [CrossRef] [PubMed]

37. Zhang, F.; Steinberg, SF S49G u R389G polimorfiżmi tar-riċettur beta(1)-adrenerġiku influwenza sinjal permezz tal-mogħdijiet cAMP-PKA u ERK. Physiol. Genom. 2013, 45, 1186–1192. [CrossRef]

38. Lee, AY; Noh, M. Ir-regolamentazzjoni tal-melanoġenesi epidermali permezz ta 'mogħdijiet ta' sinjalar cAMP u/jew PKC: Intuwizzjonijiet għall-iżvilupp ta 'aġenti ipopigmentati. Arch. Pharm. Riż. 2013, 36, 792–801. [CrossRef]

39. Garcia-Borron, JC; Abdel-Malek, Z.; Jimenez-Cervantes, C. MC1R, il-mogħdija tal-cAMP, u r-rispons għall-UV solari: Estensjoni tal-orizzont lil hinn mill-pigmentazzjoni. Melanoma Ċellula tal-pigment Res. 2014, 27, 699–720.[CrossRef]

40. Lin, CB; Babiarz, L.; Liebel, F.; Roydon Price, E.; Kizoulis, M.; Gendimenico, GJ; Fisher, DE; Seiberg, M.Modulazzjoni tal-espressjoni tal-ġene tal-fattur tat-traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmja tbiddel il-pigmentazzjoni tal-ġilda.J. Investig. Dermatol. 2002, 119, 1330–1340. [CrossRef]

41. Kim, JH; Ħong, AR; Kim, YH; Yoo, H.; Kang, SW; Chang, SE; Kanzunetta, Y. JNK irażżan il-melanoġenesi billi tinterferixxi mal-koattivatur tat-traskrizzjoni regolat minn CREB 3-espressjoni MITF dipendenti. Theranostics2020, 10, 4017–4029. [CrossRef] [PubMed]

42. Rios, M.; Habecker, B.; Sasaoka, T.; Eisenhofer, G.; Tian, ​​H.; Landis, S.; Chikaraishi, D.; Roffler-Tarlov, is-sinteżi ta 'S.Catecholamine hija medjata minn tyrosinase fl-assenza ta' tyrosine hydroxylase. J. Neurosci. 1999,19, 3519–3526. [CrossRef] [PubMed]

43. Cosentino, M.; Marino, F.; Bombelli, R.; Ferrari, M.; Lecchini, S.; Frigo, G. Endogenous catecholaminesynthesis, metaboliżmu, ħażna u teħid fin-newtrofili umani. Ħajja Sci. 1999, 64, 975–981. [CrossRef]

44. Marino, F.; Cosentino, M.; Bombelli, R.; Ferrari, M.; Lecchini, S.; Frigo, G. Katecholaminesynthesis endoġenu, ħażna tal-metaboliżmu, u teħid f'ċelluli mononukleari tad-demm periferali tal-bniedem. Exp. Hematol.1999, 27, 489–495. [CrossRef]

45. Sorrento, D.; Santulli, G.; Del Giudice, C.; Anastasio, A.; Trimarco, B.; Iaccarino, G. Ċelloli endoteljali huma kapaċi li jissintetizzaw u jirrilaxxaw katekolamini kemm in vitro kif ukoll in vivo. Pressjoni għolja 2012, 60, 129–136.[CrossRef] [PubMed]

46. ​​Cucchi, ML; Frattini, P.; Santagostino, G.; Preda, S.; Orecchia, G. Il-katekolamini jiżdiedu fl-awrina tal-vitiligo mhux segmentali speċjalment matul il-fażi attiva tiegħu. Pigment Cell Res. 2003, 16, 111–116. [CrossRef][PubMed]

47. Salzer, BA; Schallreuter, KU Investigazzjoni ta 'l-istruttura tal-personalità f'pazjenti b'vitiligo u assoċjazzjoni possibbli ma' metaboliżmu ta 'catecholamine indebolit. Dermatoloġija 1995, 190, 109-115. [CrossRef][PubMed]

48. Slominski, A. Attività newroendokrina tal-melanocyte. Exp. Dermatol. 2009, 18, 760–763. [CrossRef]

49. Gannu, R.; Vishnu, YV; Kishan, V.; Rao, YM Permeazzjoni in vitro ta 'carvedilol permezz tal-ġilda tal-ħnieżer: Effectof vetturi u li jsaħħu l-penetrazzjoni. PDA J. Pharm. Sci. Technol. 2008, 62, 256–263.

50. Kshirsagar, SJ; Bhalekar, MR; Mohapatra, SK Żvilupp u evalwazzjoni ta 'sistema ta' kunsinna ta 'droga transdermali mgħobbija b'carvedilol: Studju ta' karatterizzazzjoni in-vitro u in-vivo. Drug Dev. Ind Pharm. 2012,38, 1530–1537. [CrossRef]

51. Tanwar, YS; Chauhan, CS; Sharma, A. Żvilupp u evalwazzjoni ta 'garża transdermali carvedilol.Acta Pharm. 2007, 57, 151–159. [CrossRef] [PubMed]