L-effett li jbaxxi l-aċidu uriku u l-mekkaniżmu ta 'acteoside u echinacoside estratt minn cistanche tubulosa
Mar 03, 2025
Astratt:Għan biex tesplora l-effetti li jbaxxu l-aċidu uriku u l-mekkaniżmi ta 'acteoside (AS) u echinacoside (ECH) estratti minnCistanche tubulosa.
MetodiIl-mudell tal-far hyperuricemia (HUA) ġie stabbilit bl-użu ta 'potassju oxonate (1.5 g · kg -1 · d -1) flimkien ma' adenine (100 mg · kg {-1}} {-1}). Il-firien tal-mudell Hua ġew maqsuma bl-addoċċ fi grupp ta 'kontroll tal-mudell, grupp ta' allopurinol (30 mg · kg -1 · d {-1), bħala baxx u għoli (50, 100 mg · kg {-1} · D {-1) gruppi ta 'doża mg · kg -1 · d -1) gruppi tad-doża. Ġie stabbilit grupp ta 'kontroll normali. Wara erba 'ġimgħat ta' amministrazzjoni, l-analizzatur tal-bijokimika tad-demm intuża biex jikxef il-livelli ta 'SUA, CREA, adenosine deaminase (ADA) u aċidu uriku (UUA) fl-awrina. L-assaġġ immunosorbenti marbut ma 'l-enżima ntuża biex jinstab livelli ta' xanthine oxidase (XOD) fis-serum. Inġabru tessut tal-kliewi, u l-koeffiċjent tal-kliewi kien jintiżen u kkalkulat. It-tebgħa tal-ematoxilin eosin (HE) intużat biex tosserva bidliet patoloġiċi tal-kliewi. Immunoistokimika (IHC) u PCR f'ħin reali ntużaw biex jindividwaw il-livelli ta 'espressjoni ta' proteina u mRNA ta 'trasportatur ta' l-urat 1 (URAT1), trasportatur tal-glukosju 9 (GLUT9), trasportatur ta 'anjoni organiku 1 (OAT1), u trasportatur ta' anjoni organika 3 (OAT3) fit-tessut tal-kliewi. Ir-riżultati bħala u l-ECH jistgħu jtejbu l-funzjoni tal-kliewi fil-firien tal-mudell HUA, inaqqsu l-livelli ta 'aċidu uriku fid-demm, jippromwovu l-eskrezzjoni ta' aċidu uriku, jirregolaw il-livelli fis-serum ta 'ADA u XOD, u jirregolaw il-proteina u l-espressjoni ta' mRNA ta 'URAT1 u GLUT9 fit-tessut tal-kliewi, filwaqt li jirregolaw proteina u mRNA espressjoni ta' OAT1 u OAT3 fit-tessut tal-klie.
Konklużjonijiet Il-glukożidi tal-feniletanojdi AS u l-ECH minn cistanche tubulosa jistgħu jeżerċitaw effetti li jbaxxu l-aċidu uriku billi jtejbu l-funzjoni tal-kliewi fil-firien tal-mudell HUA, inaqqsu l-livelli ta 'ADA u XOD, u jirregolaw l-espressjoni ta' URAT1, GLUT9, OAT1, OAT1, u OAT3.
Kliem Ewlenin: Cistanche Tubulosa; acteoside; echinacoside; iperuriċemija; Tnaqqis tal-aċidu uriku; mekkaniżmu
Estratt ta 'Cistanche tubulosa b'16% acteoside
Iperuriċemija (HUA) hija marda metabolika kkawżata minn metaboliżmu purina diżordinata fil-ġisem tal-bniedem, li twassal għal livelli elevati ta 'aċidu uriku fid-demm [1]. It is typically diagnosed when blood uric acid levels exceed 7.0 mg·dl⁻¹ (416.0 μmol·L⁻¹) in men and 6.0 mg·dl⁻¹ (357.0 μmol·L⁻¹) in women [2]. L-iżvilupp ta 'iperuriċemija huwa primarjament relatat ma' fatturi bħal dieti b'purini għoli, konsum kroniku ta 'alkoħol, użu ta' medikazzjoni, u ipotirojdiżmu. Huwa mhux biss iżid ir-riskju ta 'mard kardjovaskulari, dijabete, u pressjoni għolja [3-4] iżda wkoll ikollu impatt sinifikanti fuq is-saħħa tal-pazjenti.
Bħalissa, trattamenti kliniċi għall-iperuriċemija jinkludu prinċipalment mediċini li jinibixxu l-produzzjoni tal-aċidu uriku u jippromwovu l-eskrezzjoni tal-aċidu uriku. Madankollu, dawn it-trattamenti għandhom ċerti limitazzjonijiet għal pazjenti b'funzjoni tal-fwied jew kliewi indebolita [5-6]. Għalhekk, l-esplorazzjoni ta 'mediċini effettivi b'effetti sekondarji baxxi hija ta' sinifikat kbir għall-prevenzjoni u t-trattament ta 'iperuriċemija.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, użat komunement fil-mediċina tradizzjonali Ċiniża bħala ħwawar tat-tonifikazzjoni tal-kliewi, huwa użat biex jikkura kundizzjonijiet bħal impotenza, infertilità, defiċjenza ta 'essenza u demm, dgħjufija fid-dahar t'isfel u l-irkopptejn, dgħjufija fil-muskoli, u stitikezza minħabba nixfa intestinali [7]. Studji wrew danCistanche tubulosajippossjedi newroprotettivi [8], anti-infjammatorji [9], metaboliżmu li jirregola l-għadam [10], u effetti li jtejbu l-effikaċja fil-kemjoterapija għal pazjenti bil-kanċer [11]. Fost il-komponenti attivi varji tagħha, il-glukożidi feniletanojdi huma l-aktar abbundanti.
Acteoside (as) u echinacoside (ech), żewġ glycosides feniletanojdi b'kontenut għoli fiCistanche tubulosa, juru attività bijoloġika qawwija u għandhom potenzjal sinifikanti għall-iżvilupp u l-applikazzjoni. Konsegwentement, il-grupp ta 'riċerka tagħna magħżul bħala u ECH għal aktar studju. Permezz tat-tbassir tal-farmakoloġija tan-netwerk u l-isperimenti minn qabel fil-ġrieden, sirna nafu li estratti tal-glycoside feniletanojdiCistanche tubulosaJista 'jkollu ċertu effett li jbaxxi l-aċidu uriku. Madankollu, il-mogħdijiet u l-mekkaniżmi ta 'dawn l-effetti għadhom mhux ċari.
Għalhekk, bl-użu tal-mekkaniżmi ta 'produzzjoni ta' aċidu uriku u l-mogħdijiet ta 'eskrezzjoni primarja tagħha bħala l-fokus tar-riċerka, aħna investigajna l-effetti li jbaxxu l-aċidu uriku ta' l-estratti ta 'glycoside feniletanojdi bħala u ECH. Dan l-istudju għandu l-għan li jelimina l-mogħdijiet u l-mekkaniżmi li permezz tagħhom u ECH jeżerċitaw l-effetti li jbaxxu l-aċidu uriku tagħhom.
1 materjali
1.1 Annimali sperimentali
Sebgħin firien maskili ta 'grad SPF Sprague-Dawley (SD), li jiżnu 150-180 g, inxtraw miċ-ċentru tal-annimali sperimentali tal-Università Medika ta' Xinjiang. Numru tal-Liċenzja tal-Produzzjoni tal-Annimali: SCXK (Xin) 2023-0001. Dan l-esperiment ġie approvat mill-Kumitat tal-Etika tal-Annimali tal-Istitut tar-Riċerka dwar il-Mediċina ta 'Xinjiang Reġjun Awtonomu, bin-numru ta' approvazzjoni tal-etika tal-annimali: iacuc- (zhun) {-2024-009.
1.2 Drogi u Reaġenti
Estratti tal-glycoside feniletanojdi (AS u ECH)minnCistanche tubulosa (purity >98%, ivverifikati minn kromatografija likwida ta 'prestazzjoni għolja) ġew estratti, purifikati, u ppreparati mill-laboratorju ewlieni tax-xjenza tal-formulazzjoni ta' Uygur, Xinjiang Reġjun Awtonomu tal-Uygur Medicine Research Institute. Numri tal-lott: 20220617 (AS) u 20220526 (ECH).
Pilloli ta 'allopurinolNumru tal-lott: 62208726, manifatturat minn Jiangsu Wanbang Biochimical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Potassju oxonateuadenine, Numri tal-Lott: I2130050 u C2202255, mixtrija minn Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.
Crea (creatinine), UA (aċidu uriku), urea, u ADA (adenosine deaminase) Kits tal-assaġġNumri tal-lott: 141123010, 141223004, 141323008, u 043624005, mixtrija minn Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
XOD (Xanthine Oxidase) Kit ta 'l-Attività, Numru tal-lott: Y10001219, mixtrija minn Shanghai Macklin Biochimical Technology Co., Ltd.
Antikorpi (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), Numri tal-lott: 3I5723 0, 92F0296 / 4, 0F33081 / 2I44618, mixtrija minn Affinity Biosciences.
IgG anti-fenek IgG tal-Mogħoż bit-tikketta HRP, Numru tal-lott: 245440113, mixtrija minn ZSGB-Bio.
Soluzzjoni tat-tebgħa tal-ematoxilin, Numru tal-lott: 24135741H, mixtrija minn Beijing Lanjieke Technology Co., Ltd.
Kit tar-Reaġent Kromogeniku DAB, Numru tal-lott: 240010512, mixtrija minn ZSGB-Bio.
DEPC (diethyl pyrocarbonate), Numru tal-Katalgu: D 60029-500 ML, mixtrija minn Amresco (USA).
M5 Hiclear DL2000 DNA Marker, Numru tal-Katalgu: MF025, mixtrija minn Beijing Genomics Biotechnology Co., Ltd.
Reaġent Trizol ™, Numru tal-Katalgu: 15596026, mixtrija minn Thermo Fisher Scientific (l-Istati Uniti).
5x All-in-One RT MastermixuEVAGreen Express 2 × QPCR Mastermix-Low Rox, Numri tal-Katalgu: G492 u G891, it-tnejn mixtrija minn Applied Biological Materials Inc. (ABM).
2 metodi
2.1 Mudell ta 'Stabbiliment u Raggruppament
Sebgħin firien maskili Sprague-Dawley (SD) ġew akklimati u maqsuma f'żewġ gruppi: grupp ta 'kontroll normali (1 0 firien) u grupp ta' kontroll tal-mudell (60 firien). Il-grupp ta 'kontroll normali ġie amministrat 0.5% CMC-NA permezz ta' gavage. Il-grupp ta 'kontroll tal-mudell ingħata oxonate tal-potassju (1.5 g · kg⁻¹) flimkien ma' adenine (100 mg · kg⁻¹) f'doża ta '10 ml · kg⁻¹, darba kuljum għal 14-il jum konsekuttiv. Il-mudell ġie kkunsidrat stabbilit b'suċċess meta l-livelli ta 'urea, CREA, u SUA żdiedu b'mod sinifikanti, kif imkejjel minn analizzatur bijokimiku.
Il-firien tal-mudell ta 'iperuriċemija ġew maqsuma aktar fil-gruppi li ġejjin ibbażati fuq livelli ta' SUA, urea, u CREA: grupp ta 'kontroll tal-mudell, grupp allopurinol (3 0 mg · kg⁻¹), doża baxxa bħala grupp (50 mg · kg⁻¹), doża għolja bħala grupp (100 mg · kg⁻¹), grupp ta' ech-doża baxxa (50 Mg · KG⁻¹) u Grupp ECH ta 'doża għolja (100 mg · kg⁻¹), b'10 firien f'kull grupp. Biex tinżamm iperuriċemija stabbli, il-gruppi kollha ħlief il-grupp ta 'kontroll normali ġew amministrati oxonate tal-potassju (500 mg · kg⁻¹) flimkien ma' adenine (100 mg · kg⁻¹) permezz ta 'gavage filgħodu, segwit mill-għoti tal-mediċini rispettivi f'kull grupp ta' trattament wara nofsinhar. Il-grupp ta 'kontroll normali rċieva 0.5% soluzzjoni CMC-NA filgħodu u ilma tax-xorb wara nofsinhar b'doża ta '10 ml · kg⁻¹, darba kuljum għal 14-il jum konsekuttiv. Wara, l-għoti ta 'aġenti tal-immudellar twaqqaf, u l-mediċini rispettivi ġew kontinwament amministrati kuljum għal 14-il jum addizzjonali.
2.2 Ġbir tal-kampjun
Wara d-doża finali, il-firien ġew sawm matul il-lejl (l-ilma ma kienx ristrett). L-awrina minn kull grupp inġabret għall-ittestjar tal-aċidu uriku. Il-piż tal-ġisem ġie mkejjel wara s-sawm, u kampjuni tad-demm inġabru taħt anestesija. Is-serum kien separat permezz ta ’ċentrifugazzjoni u maħżun għal użu futur. It-tessuti tal-kliewi nġabru u jintiżnu. Kliewi waħda ġiet iffissata f'soluzzjoni ta '4% paraformaldehyde, filwaqt li l-oħra kienet iffriżata fin-nitroġenu likwidu għal analiżi ulterjuri.
2.3 Kejl tal-aċidu uriku fl-awrina tal-far
Kampjuni ta 'l-awrina minn kull grupp ġew iċċentrifugati (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, raġġ ta' ċentrifuga 14 cm), u s-supernatant inġabar. Il-kampjuni tal-awrina ġew dilwiti 1: 9 bil-melħ u analizzati għall-kontenut ta 'aċidu uriku bl-użu ta' analizzatur bijokimiku.
2.4 Kejl ta 'ADA, Urea, CREA, u SUA fis-serum tal-far
Kampjuni tad-demm minn kull grupp ġew iċċentrifugati (3, 000 r · min⁻¹, 10 min, raġġ ċentrifuga 14 cm), u s-serum inġabar. Il-livelli ta 'Ada, Urea, CREA, u SUA fis-serum ġew imkejla bl-użu ta' analizzatur bijokimiku.
2.5 Kejl ta 'XOD fis-serum tal-far
Il-bidliet fil-livelli ta 'XOD fis-serum tal-far ġew imkejla bl-użu ta' analiżi enżimatika skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. L-assorbenza inizjali (A₁) u l-assorbenza finali (A₂) f'290 nm ġew irreġistrati, u δa (ΔA=a₂ - a₁) ġiet ikkalkulata. Δa ġie sostitwit fil-formula:
Xod (nmol⁻¹ · min⁻¹ · ml⁻¹)=[ΔA × Sistema ta 'reazzjoni Volum totali ÷ (koeffiċjent ta' estinzjoni molari ta 'aċidu uriku × tul tal-passaġġ ottiku) × 10⁹] ÷ volum tal-kampjun ÷ ħin ÷ ħin=4262 × ×,
Biex tikkalkula l-ammont ta 'aċidu uriku katalizzat kull minuta għal kull millilitru tas-serum.
2.6 Kejl tal-Koeffiċjent tal-Kliewi
It-tessuti tal-kliewi nġabru, maħsula bil-melħ, u l-ilma żejjed tneħħa. Il-piż tal-organu ġie mkejjel b'mod preċiż, u l-koeffiċjent tal-kliewi ġie kkalkulat kif ġej:
Koeffiċjent tal-kliewi=piż tal-kliewi (mg) / piż tal-ġisem (g).
2.7 Osservazzjoni istopatoloġika tat-tessut tal-kliewi bit-tbajja '
Tessuti tal-kliewi ffissati f'4% soluzzjoni paraformaldehyde ġew deidrati b'konċentrazzjonijiet gradati ta 'etanol, ikklerjati b'xilene, inkorporati fil-paraffin, u maqsuma fi flieli 4-} μm. It-taqsimiet ġew deparaffinizzati b'xilene, idratat bl-etanol gradat, imtebba 'bl-ematoxilina u l-eosin (HE), u ssiġillat bil-gomma newtrali. Il-bidliet morfoloġiċi fit-tessut tal-kliewi ġew osservati taħt mikroskopju ħafif, u l-immaġini nqabdu f'400 × ingrandiment.
2.8 Sejbien ta 'espressjoni ta' proteina URAT1, GLUT9, OAT1, u OAT3 fit-tessut tal-kliewi minn IHC
Tessuti tal-kliewi ffissati f'4% soluzzjoni paraformaldehyde ġew deidrati b'konċentrazzjonijiet gradati ta 'etanol, ikklerjati ma' xilen, inkorporati fil-paraffin, u maqsuma. L-irkupru tal-antiġeni u l-imblukkar tas-serum tal-mogħża twettqu. Antikorpi primarji (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) ġew miżjuda b'dilwizzjoni 1: 200 u inkubati matul il-lejl f'4 grad. L-għada, it-taqsimiet ġew maħsula bil-PBS, imnixxef bl-arja, u inkubati bl-IgG anti-fenek tal-mogħża mmarkata bijotina fi 37 grad għal 30 minuta. It-taqsimiet ġew maħsula bil-PBS u inkubati bir-reaġent kromogeniku DAB għal 10 minuti, segwiti minn tlaħliħ tal-PBS, tebgħa tal-ematoxilin għal 3 minuti, differenzjazzjoni b'soluzzjoni ta 'etanol aċidu idrokloriku, blu tal-karbonat tal-litju, deidrazzjoni bil-gradjent bl-etanol, ikklerja ma' xilene, u s-siġillar bil-gum newtrali.
Għal kull far, ġew magħżula żewġ oqsma bl-addoċċ bl-addoċċ 0 0 × 0 × oqsma ta 'sezzjonijiet tal-kliewi. Tbajja pożittiva (isfar kannella) ġiet analizzata, u d-densità ottika integrata (IOD) ta 'kull qasam ġiet imkejla bl-użu ta' Image-Pro Plus 6.0 għal analiżi statistika.
