L-RNA M6 A Reader YTHDF2 Jikkontrolla l-Immunità Antitumorali U Antivirali taċ-Ċellola NK Parti 6

Mudell tal-melanoma metastatiku u sfida tal-MCMV

Iċ-ċelloli B16F10 (105) ġew injettati iv fil-ġrieden. 14 d wara l-injezzjoni, il-ġrieden ġew ewtanizzati għal analiżi postmortem. Noduli metastatiċi fil-pulmun ġew analizzati makroskopikament u magħduda. Il-linja taċ-ċelluli B16F10 ġiet ipprovduta minn Hua Yu (City ofHope, Los Angeles, CA). Il-ġrieden Ythdf2ΔNK u Ythdf2WT ġew infettati b'injezzjoni ip tar-razza Smith MCMV (2.5 × 104 PFU), li nxtrat mill-Ġbir tal-Kultura tat-Tip Amerikan (VR-1399). Kampjuni tad-demm periferali nkisbu permezz tat-titqib submandibulari fil-jiem 0, 4, u 7 wara l-infezzjoni.

In-noduli tal-metastasi pulmonari jirreferu għal noduli ffurmati minn ċelluli tat-tumur malinni minn siti oħra li jemigraw lejn il-pulmuni permezz tad-demm jew is-sistema limfatika. Għal ħafna pazjenti, din hija manifestazzjoni komuni tal-kanċer tal-pulmun.

Madankollu, għalkemm in-noduli tal-metastasi tal-pulmun huma ta 'theddida għas-saħħa fiżika tal-pazjenti, m'hemm l-ebda relazzjoni diretta bejnha u l-memorja. Għalhekk, għandna niffaċċjaw b'mod attiv l-isfidi tal-kanċer tal-pulmun u n-noduli tal-metastasi tal-pulmun, u ma nħallux emozzjonijiet negattivi u ansjetà jaffettwaw is-saħħa fiżika u mentali tagħna.

Fl-istess ħin, nistgħu nżommu u ntejbu l-memorja permezz ta 'xi metodi pożittivi. Pereżempju, wettaq xi taħriġ fil-memorja, bħal kalkoli matematiċi, qari, tisma' l-mużika, tilgħab logħob, eċċ. Barra minn hekk, iżżomm ma 'drawwiet ta' għajxien tajbin, bħal eżerċizzju regolari, torqod biżżejjed, tiekol b'mod tajjeb għas-saħħa, eċċ., tista 'wkoll. intejbu l-memorja tagħna.

L-iktar ħaġa importanti hija li żżomm attitudni pożittiva. Ma jimpurtax liema diffikultajiet tiffaċċja, trid temmen fis-saħħa tiegħek u l-flessibilità tas-sistema nervuża tiegħek, u permezz ta 'aġġustamenti u reazzjonijiet pożittivi, eventwalment se tegħleb b'suċċess id-diffikultajiet.

Fil-qosor, għalkemm noduli metastatiċi fil-pulmuni huma ta 'theddida għas-saħħa fiżika, mhumiex direttament relatati mal-memorja. Għandna niffaċċjawha b'mod pożittiv u nżommu u ntejbu l-memorja tagħna billi naġġustaw l-istil tal-ħajja tagħna u nżommu attitudni tajba. Wieħed jista 'jara li għandna bżonn intejbu l-memorja, u Cistanche deserticola jista' jtejjeb b'mod sinifikanti l-memorja, minħabba li Cistanche deserticola jista 'wkoll jirregola l-bilanċ ta' newrotrasmettituri, bħal żieda fil-livelli ta 'acetylcholine u fatturi ta' tkabbir. Dawn is-sustanzi huma importanti ħafna għall-memorja u t-tagħlim. Barra minn hekk, Cistanche deserticola jista 'wkoll itejjeb il-fluss tad-demm u jippromwovi l-kunsinna ta' ossiġnu, li jista 'jiżgura li l-moħħ jirċievi biżżejjed nutrijenti u enerġija, u b'hekk itejjeb il-vitalità u r-reżistenza tal-moħħ. Wieħed jista 'jara li għandna bżonn intejbu l-memorja, u Cistanche deserticola jista' jtejjeb b'mod sinifikanti l-memorja, minħabba li Cistanche deserticola jista 'wkoll jirregola l-bilanċ ta' newrotrasmettituri, bħal żieda fil-livelli ta 'acetylcholine u fatturi ta' tkabbir. Dawn is-sustanzi huma importanti ħafna għall-memorja u t-tagħlim. Barra minn hekk, Cistanche deserticola jista 'wkoll itejjeb il-fluss tad-demm u jippromwovi l-kunsinna ta' ossiġnu, li jista 'jiżgura li l-moħħ jirċievi biżżejjed nutrijenti u enerġija, u b'hekk itejjeb il-vitalità u r-reżistenza tal-moħħ.

Ikklikkja taf supplimenti biex tingħata spinta lill-memorja

Biex tkejjel it-tagħbijiet virali fid-demm periferali, il-milsa u l-fwied, id-DNA ġie iżolat bl-użu ta' QIAGEN DNeasy Blood and Tissue Kit għall-analiżi qPCR. Intużaw il-primers li ġejjin: MCMV-IE1,59-AGCCACCAACATTGACCACGCAC-39 (quddiem) u MCMVIE1, ​​59-GCCCCAACCAGGACACACACAACTC-39 (reverse).

Trattament tal-ġurdien in vivo b'IL-15

Għal trattament in vivo tal-ġrieden b'IL-15, Ythdf2ΔNK u Ythdf2WTmice ġew injettati b'2 µg ip IL uman rikombinanti IP-15 (cat.no. 745101; Istitut Nazzjonali tal-Kanċer) għal 5 d. Il-ġrieden ittrattati u ta' kontroll imbagħad ġew ewtanizzati għal analiżi ċitometrika tal-fluss.

Ċitometrija tal-fluss

Sospensjonijiet b'ċellula waħda ġew ippreparati minn BM, demm, milsa, fwied, u pulmun ta 'ġrieden Ythdf2ΔNK u Ythdf2WT kif deskritt qabel (Wang et al., 2018b). L-analiżi taċ-ċitometrija tal-fluss u l-għażla taċ-ċelluli saru fuq LSRFortessa X-20 u Ċitometru tal-Fluss FACSAriaFusion (BD Biosciences), rispettivament.

Id-dejta ġiet analizzata bl-użu ta' softwer NovoExpress (Teknoloġiji Agilent).

Intużaw l-antikorpi ttikkettjati biż-żebgħa tal-fluworexxenza minn BD Biosciences, BioLegend, Invitrogen, jew Cell Signaling Technology: CD3ε (145-2C11), CD19 (1D3), Gr-1 (RB{6-8C5) ),TER-119 (TER-119), CD11c (N418), CD4 (GK1.5), CD8 (53-6.7),CD122 (5H4), CD132 (TUGm2), NK1.1 (PK136), CD11b (M1/70),CD27 (LG.3A10), CD117 (2B8), CD127 (SB/199), CD135 (A2F10.1),KLRG1 (2F1), CD45 ({{46) }}F11), CD45.1 (A20), CD45.2 (104), IFN- (XMG1.2), 2B4 (m2B4), granzyme B (QA16A02), perforin (S16009A), Ly49H (3D10), Ly49D ( 4e5), CD69 (H1.2F3), CD226(TX42.1), NKG2D (CX5), NKG2A (16A11), NKp46 (29A1.4), TIGIT(1G9), PD-1 (J43), annessin V, Ki67 (b56), Tbet (4b10), u Eomes (WD1928), fosfo-p44/42 Erk1/2 (Thr202/Tyr204, #9101), fosfo-Akt (Ser473, #5315), proteina ribosomali fosfo-S6 ,fosfo-Stat3 (Tyr705, #9145), u fosfo-Stat5 (Tyr694, #9539).

Għall-evalwazzjoni tal-proliferazzjoni taċ-ċelluli NK, iċ-ċelluli ġew ittikkettati b'5 µM CTV (Invitrogen) skont il-protokoll tal-manifattur qabel it-trasferiment tagħhom f'ġrieden riċevituri. Tbajja intraċellulari ta 'Ki67, Tbet, u Eomes twettqet billi tiffissa u permeabilizing mal-Foxp3/Transcription Factor Staining Kit (eBioscience).

Għall-iskoperta ta' proteini fosforilati, ċelluli NK tal-milsa purifikati ġew ittrattati minn qabel b'IL{0}} uman rikombinanti (50 ng/ml) għal siegħa u mbagħad iffissati b'Phosflow Fix Buffer I segwit minn permeabilizzazzjoni b'Phosflow Perm Buffer III (BD Biosciences) u tbajja' bi antikorpi.

Trasferiment taċ-ċelluli adottivi

Għall-valutazzjoni tal-effett tad-defiċjenza ta 'Ythdf2 fuq il-maturazzjoni taċ-ċelluli NK, taħlita ta' ċelluli 5 × 106 BM fi proporzjon 1:1 minn ġrieden CD45.1 jew Ythdf2ΔNK CD45.2 ġew kotrasferiti fi ġrieden Rag2-/-Il2rg-/-. Ir-rikostituzzjoni tar-riċevituri ġiet ivvalutata permezz ta' flow cytometry8 wk wara t-trapjant.

Għal esperimenti ta' proliferazzjoni omeostatika kkaġunata mil-limfopenja, numri ugwali ta' ċelluli splenicNK purifikati minn ġrieden CD45.1 jew Ythdf2ΔNK CD45.2 ġew kotrasferiti fi ġrieden Rag2−/−Il2rg−/− segwiti minn valutazzjoni tal-perċentwali relattivi ta' WT u YthdfKΔNK trasferiti fiċ-ċelluli NK2. tar-riċevituri Rag2−/−Il2rg−/− permezz ta' ċitometrija tal-fluss f'punti ta' ħin indikati.

Għall-melanomodel metastatiku, 106 IL-2-ċelluli NK estiżi minn Ythdf2ΔNK jew Ythdf2WTmice ġew injettati iv fi ġrieden Rag2−/−Il2rg−/−. 1 d wara, B16F10cells (105) ġew injettati iv fil-ġrieden. 14 d wara l-injezzjoni, ġrieden ġew ewtanizzati għal analiżi postmortem. F'xi esperimenti, iċ-ċelluli ġew ittikkettati b'CTV (5 µM, Invitrogen) biex jintraċċaw il-proliferazzjoni taċ-ċelluli qabel it-trasferiment.

Assaġġ tat-traffikar in vivo

Għall-iskoperta tat-traffikar taċ-ċelluli NK minn BM għal demm periferali, 1 µg iv antikorp anti-CD45 ittikkettat bl-APC ġie injettat fil-ġrieden C57BL/6. Żewġ minuti wara l-injezzjoni tal-antikorpi, it-theice ġew ewtanizzati immedjatament, u ċ-ċelloli BM inġabru għaċ-ċitometrija tal-fluss wara li ċ-ċelloli ġew imtebba 'b'antikorpi CD3 u NK1.1. Iċ-ċelloli NK parenkimali ġew identifikati bin-nuqqas ta 'tbajja CD45, filwaqt li ċ-ċelloli NK sinusojdali ġew identifikati bil-preżenza ta' tikkettjar CD45. Għalhekk, il-proporzjon taċ-ċelluli NK fis-sinusojdi (CD45+) għal dak fir-reġjuni parenkimali (CD45-) jindika t-traffikar taċ-ċelluli NK minn demm BM toperiferali taħt stat fiss.

RT-qPCR u immunoblotting f'ħin reali

L-RNA ġie iżolat bl-użu ta' RNeasy Mini Kit (QIAGEN) u mbagħad traskritt b'lura għal cDNA b'PrimeScript RT Reagent Kit with gDNA Eraser (Takara Bio) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Il-livelli ta' espressjoni ta' mRNA ġew analizzati bl-użu ta' SYBRGreen PCR Master Mix u QuantStudio 12K Flex Real-TimePCR System (it-tnejn minn Thermo Fisher Scientific). Is-sekwenzi tal-primer huma elenkati fit-Tabella S1.

L-immunoblotting sar skont proċeduri standard, kif deskritt qabel (Denget al., 2015; Yu et al., 2006). Intużaw l-antikorpi li ġejjin: METTL3 (cat. nru 15073-1-AP; Proteintech), METTL14 (kat. nr.26158-1-AP; Proteintech), YTHDF1 (kat. nr. 17479-1-AP) ; Proteintech), YTHDF2 (kat. nr. RN123PW; MBL), YTHDF3 (kat. nr.25537-1-AP; Proteintech), ALKBH5 (kat. nr. ab195377; Abcam),FTO (kat. nr. ab124892; Abcam), MDM2 (kat. nru 33-7100; Invitrogen), TDP-43 (kat. nru. PA{5-29949; Invitrogen), u -actin (kat. nr. {{20} }}Ig; Proteintech).

siRNA knockdown assay

IL-2–expanded NK cells were transfected with Accell mouse Tardbp siRNA (cat. no. E-040078-00-0005; Dharmacon) or Mdm2 siRNA (cat. no. E-041098-00-0005; Dharmacon) using Accell delivery media (Dharmacon) according to the manufacturer's instructions in the presence of IL-15 (50 ng/ml). The Accell eGFP control pool was used as siRNA control. The transfection efficiency was >90% kif imkejjel permezz taċ-ċitometrija tal-fluss. L-effiċjenza tal-Geneknockdown ġiet iddeterminata minn qPCR u immunoblotting. 3 d wara t-trasfezzjoni, l-apoptożi taċ-ċelluli, u l-proliferazzjoni ġew analizzati permezz ta 'ċitometrija tal-fluss kif deskritt hawn fuq.

Assaġġ ta' reporter ta' Luciferase

Ir-reġjun promotur Ythdf2 li jvarja minn –2,000 bp sa +100 bpof-TSS ġie amplifikat minn ċelloli NK tal-marieni u kklonat f'apGL4-Basic Luciferase Reporter Vector (Promega) biex jiġġenera apGL{ {5}}Plasmid reporter Ythdf2. Iċ-ċelluli HEK293T mixtrija minn ATCC ġew kotrasfettati bil-plasmida reporter pGL4-Ythdf2 kif ukoll plasmidi ta 'espressjoni eċċessiva STAT5a jew STAT5b jew vettur vojt, flimkien ma' plasmid reporter pRL-TK Renilla (Promega) għan-normalizzazzjoni tal-effiċjenza tat-trasfezzjoni. Iċ-ċelluli nħasdu għal liżi 24 siegħa wara t-trasfezzjoni, u l-attività tal-luċiferase ġiet kwantifikata b'mod fluworimetriku bis-Sistema Dual-Luciferase (Promega). Is-sekwenzi tal-primer għall-klonazzjoni tal-promotur Ythdf2 u l-plażmidi ta' espressjoni żejda STAT5a u STAT5b huma elenkati fit-Tabella S1.

Assays ChIP

Assays ChIP saru bl-użu ta ' Pierce Magnetic ChIP Kit (cat. nru. 26157; Thermo Fisher Scientific) skond l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Fil-qosor, ammont ugwali ta 'ananti-anti-phospho-Stat5 (Tyr694, cat. Nru 9351; Cell Signaling Technologies) jew IgG tal-fenek normali ta' kontroll korrispondenti intuża separatament biex jippreċipita l-kumplessi cross-linked DNA-protein derivati ​​minn 5 × 106 ċelluli NK primarji tal-ġurdien purifikati li ġew ittrattati minn qabel b'IL-15 (50 ng/ml) għal siegħa. Wara t-treġġigħ lura tal-crosslinking, id-DNA immunopreċipitat mill-antikorp indikat ġie ttestjat bil-qPCR. Is-sekwenzi tal-primers kollha huma elenkati fit-Tabella S1.

Assaġġ ta' ċitotossiċità ex vivo

Iċ-ċitotossiċità ex vivo taċ-ċelluli NK ġiet evalwata b'assaġġi standard 51Crrelease. Linji taċ-ċelluli tal-limfoma tal-ġrieden Ċelloli RMA-S (MHC klassi Ideficient) u RMA (MHC klassi I suffiċjenti), rigal ta 'Andre'Veillette (McGill University, Montreal, Kanada), intużaw bħala ċelluli astarget. Il-ġrieden ġew ittrattati b'injezzjoni ip ta 'polyinosinic:polycytidylic acid [poly (I: C); 200 µg/ġrieden] għal 18-il siegħa. Ċelloli NK attivati ​​minn Poly(I: C) ġew iżolati mill-milsa bl-użu ta' EasySepMouse NK Cell Isolation Kit (STEMCELL Technologies). Iċ-ċelloli NK purifikati ġew kokulturati ma' ċelloli fil-mira fi proporzjon ta' 5:1, 2.5:1, u 1.25:1 fil-preżenza ta' IL-2 (50 U/ml).

m6A-seq

Ċelluli NK tal-milsa purifikati ġew estiżi b'IL-2 (1,000 U/ml, cat. nr. Bulk Ro 23-6019; Istitut Nazzjonali tal-Kanċer) in vitro għal7 d. L-RNA totali ġie iżolat mir-reaġent TRIzol (Thermo FisherScientific) minn 50 miljun IL-2-ċellula NK estiża. RNA polyadenylated kien arrikkit aktar mill-RNA totali bl-użu ta 'Dynabeads mRNA Purifikazzjoni Kit (Invitrogen). Il-kampjuni tal-mRNA kienu frammentati fi frammenti 100-t-tul b'reaġenti tal-frammentazzjoni tal-RNA (Invitrogen).

MRNA frammentat (5 µgmRNA) intuża għall-immunopreċipitazzjoni m6A bl-użu ta 'm6Aantibody (202003; Synaptic) wara l-protokoll standard tal-Kit Magna MeRIP m6A (Merck Millipore). L-RNA ġie arrikkit permezz ta' RNA Clean & Concentrator-5 (Zymo Research) għall-ġenerazzjoni tal-librerija b'KAPA RNA HyperPrep Kit (Roche). Is-sekwenzjar sar fil-faċilità tal-ġenomika ta' City of Hope fuq magna Illumina HiSeq 2500 b'modalità ta' qari wieħed 50-bp. Il-qari tas-sekwenzjar ġew immappjati mal-ġenoma tal-ġurdien bl-użu ta 'softwer HISAT2 v101 (Kim et al., 2015).

Mappedreads ta 'immunoprecipitation u libreriji ta' input ġew ipprovduti bl-użu tal-pakkett R exomePeak (Meng et al., 2014). m6Apeaks ġew viżwalizzati bl-użu ta 'Integrative Genomics Viewersoftware (http://www.igv.org). Il-motif li jorbot m6A ġie analizzat minn MEME (https://meme-suite.org) u HOMER (http://homer.ucsd.edu/homer/motif). Il-qċaċet imsejħa ġew annotati b'intersezzjoni mal-arkitettura tal-ġeni bl-użu tar-Rpackage ChIPseeker (Yu et al., 2015).

StringTie was used to assess expression levels for mRNAs from input libraries by calculating the total exon fragments/mapped reads in millions × exon length in kb (Pertea et al., 2015). The differentially expressed mRNAs were selected with log2(fold change) >1 orlog2 (bidla darbiet)<−1 and P < 0.05 using the R package edgeR (Robinson et al., 2010).

YTHDF2 RIP-seq

50 miljun IL-2-ċelluli NK estiżi ġew maħsuda u maħsula darbtejn b'PBS kiesaħ, u l-gerbub taċ-ċelluli ġie lysed b'2 vol oflysis buffer (10 mM Hepes, pH 7.6, 150 mM KCl, 2 mM EDTA, 0.5% NP-40, 0.5 mM dithiothreitol, 1:100 protease inhibitorcocktail [Thermo Fisher Scientific], u 400 U/ml SUPERase-In RNase Inhibitor [Thermo Fisher Xjentifiku]).

Il-lisat ġie inkubat fuq is-silġ għal 5 minuti u ċentrifugat għal 15-il minuta biex jitnaddaf it-lisat. Volum wieħed minn għaxra ta' lisat taċ-ċelluli ġie ffrankat bħala input. Il-bqija tal-lisat taċ-ċelluli ġie inkubat b'5 µg anti-YTHDF2 (cat.no. RN123PW; MBL) li kien akkoppjat ma' Protein A Magnetic Beads (kat. nru. 10001D; Invitrogen) f'4 gradi għal 2 h b'rotazzjoni ġentili. Wara, iż-żibeġ inħaslu ħames darbiet b'1 ml buffer tal-ħasil kiesaħ bis-silġ (50 mM HEPES, pH 7.6,200 mM NaCl, 2 mM EDTA, 0.05% NP-40, 0.5 mM dithiothreitol, u 200 U/ml RNase inibitur).

Kampjuni immunoprecipitati ġew soġġetti għal diġestjoni tal-Proteinase K f'buffer tal-ħasil supplimentat b'1% SDS u 2 mg/ml Proteinase K (ThermoFisher Scientific) inkubati bi tħawwad f'1,200 rpm f'55 grad għal siegħa. L-RNA totali ġie estratt kemm minn input kif ukoll minn RNA immunoprecipitat billi żżid 5 vol reaġent TRIzol segwit minn Direct-zol RNA Miniprep (Riċerka Zymo).

Il-librerija tal-cDNA kienet ġġenerata b'KAPA RNA HyperPrep Kit (Roche) u sekwenzata fuq pjattaforma Illumina HiSeq 2500. L-ogħla riżultati tas-sejħiet b'immunopreċipitazzjoni u libreriji ta' input ġew iġġenerati mill-pakkett R RIPSeeker (Li et al., 2013). HOMER intuża biex isib motivi tad-distribuzzjoni tad-dejta fir-reġjuni tal-ogħla livell. Il-qċaċet imsejħa ġew annotati b'intersezzjoni ma 'l-arkitettura tal-ġeni u traskrizzjoni bl-użu ta' ChIPpeakAnno (Zhu et al., 2010).

Assaġġ tal-istabbiltà tal-mRNA

Ċelluli NK tal-milsa purifikati minn ġrieden Ythdf2ΔNK u Ythdf2WT ġew kultivati ​​b'IL-15 (50 ng/ml). 3 d wara l-kultura, iċ-ċelloli ġew ittrattati bl-actinomycin D (5 µg/ml, cat. nru. A9415; Sigma) għall-ħin indikat. Ċelloli mingħajr trattament intużaw f'0 h. Iċ-ċelloli nġabru fil-ħin indikat, u l-RNA totali ġie estratt miċ-ċelloli għal qPCR. Il-half-life tal-mRNA ġiet ikkalkulata bl-użu tal-metodu deskritt qabel minn Weng et al.(2018). Is-sekwenzi tal-primer huma elenkati fit-Tabella S1.

Analiżi tad-database onlajn

Aħna użajna r-riżors onlajn BioGPS (http://biogps.org) biex tanalizza l-espressjoni speċifika għat-tessut tal-Ythdf2. Is-settijiet tal-RNA-seqdata kienu minn GEO taħt in-nri tal-adeżjoni. GSE106138, GSE113214, u GSE25672. Ġiet esportata dejta normalizzata minn analiżi RNA-seq, u l-punteġġ z tal-espressjoni tal-ġeni ġie viżwalizzat bil-funzjoni Heatmap.2 fi ħdan il-gplots Rlibrary

Statistika

It-testijiet t tal-Istudenti mhux imqabbla (żewġ denbu) saru bl-użu tas-softwer GraphPad Prism. ANOVA f'direzzjoni waħda jew f'żewġ direzzjonijiet twettqet meta tqabblu tliet gruppi indipendenti jew aktar. Il-valuri P ġew aġġustati għal paraguni multipli bl-użu tal-proċedura Holm-Sˇ´ıdak. P < 0.05 tqieset sinifikanti. *, P < {{10}}.05; **, P < 0.01; u ***, P < 0.001.

Materjal supplimentari onlajn

Fig. S1 turi l-livelli ta' proteina ta' YTHDF2 fiċ-ċelloli immuni, inklużi ċ-ċelloli NK b'rispons għal stimulazzjoni IL-15, infezzjoni MCMV, u progressjoni tat-tumur; il-ġenerazzjoni ta 'ġrieden b'tħassir speċifiku għal NKcell ta' Ythdf2. Fig. S2 turi t-titri virali fil-milsa u l-fwied minn ġrieden infettati b'MCMV u l-perċentwali u n-numru assolut ta' Ly49H+ u/jew Ly49D+ NKcells fil-ġrieden infettati bl-MCMV. Fig. S3 turi l-proliferazzjoni, is-sopravivenza, il-maturazzjoni, u l-espressjoni ta 'riċetturi attivanti u inibitorji ta' ċelluli NK minn ġrieden Ythdf2WT u Ythdf2ΔNK. Fig.S4 turi r-regolazzjoni tal-espressjoni YTHDF2 permezz ta' sinjalazzjoni IL-15-STAT5 u l-espressjoni tal-komponenti ta' riċetturi IL{-15, il-mogħdija PI3K–AKT, u l-mogħdija MEK–ERK f'ċelloli NK minn Ythdf2WT u Ythdf2ΔNK ġrieden. Fig. S5 turi analiżi ta' RNA-seq, m6A-seq u RIP-seq kollha f'ċelluli NK. It-Tabella S1 telenka l-primers użati fl-istudju.

Disponibbiltà tad-dejta

Id-data RNA-seq, m6A-seq, u RIP-seq ġew depożitati fiċ-Ċentru Nazzjonali għall-Informazzjoni dwar il-Bijoteknoloġija GEO taħt l-adeżjoni Nru. GSE174027. Id-dejta li jifdal li tappoġġja s-sejbiet ta 'dan l-istudju hija disponibbli mill-awturi korrispondenti fuq talba.

Rikonoxximenti

Dan ix-xogħol kien appoġġjat mill-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa (NS106170, AI129582, CA247550, CA163205, CA223400, CA068458, u CA210087), is-Soċjetà tal-Lewkimja u l-Limfoma (1364-19), l-Istitut tal-Kalifornja għall-Mediċina Riġenerattiva ({DISC2COVID 9}}), u l-Bast Cancer Alliance 2021 Eċċezzjonali ProjectAward. Dan ix-xogħol kien ukoll parzjalment appoġġjat minn USDAaward (USDA/NIFA 2020-67017-30843).

Kontribuzzjonijiet tal-awturi: S. Ma, J. Yu, u MA Caligiuri ikkonċepiw u ddisinjaw il-proġett. S. Ma, J. Yan, J. Zhang, uJ. Yu wettaq esperimenti u/jew analiżi tad-dejta. Z. Chen, L.-S.Wang, JC Sun, u J. Chen kkontribwew reaġenti u materjalsupport. S. Ma, J. Yu, J. Chen, u MA Caligiuri kitbu, irrevedew, u/jew irrevedew il-karta. L-awturi kollha ddiskutew ir-riżultati u kkummentaw dwar il-manuskritt.

Żvelar: J. Chen irrapporta "oħrajn" minn Genovel BiotechCorp. barra mix-xogħol sottomess u huwa fundatur xjentifiku ta Genovel Biotech Corp u konsulent xjentifiku tal-onkoloġija tar-razza. L-ebda żvelar ieħor ma ġie rrappurtat.

Referenzi

1.Arase, H., ES Mocarski, AE Campbell, AB Hill, u LL Lanier. 2002.Rikonoxximent dirett ta 'cytomegalovirus billi jattiva u inibitorju riċetturi NKcell. Xjenza. 296:1323–1326.

2.Ayala, YM, T. Misteli, u FE Baralle. 2008. TDP-43 jirregola l-fosforilazzjoni tal-proteini tar-retinoblastoma permezz tar-ripressjoni tal-espressjoni tal-kinase 6 dipendenti fuq iċ-ċiklin. Proc. Natl. Acad. Sci. L-ISTATI UNITI. 105:3785–3789.

3.Barbieri, I., K. Tzelepis, L. Pandolfini, J. Shi, G. Millan-Zambrano, SC Robson, ´D. Aspris, V. Migliori, AJ Bannister, N. Han, et al. 2017. Promoter-boundMETTL3 iżomm lewkimja majelojde minn translationcontrol dipendenti fuq m6A. Natura. 552:126–131.

4.Becknell, B., and MA Caligiuri. 2005. Interleukin-2, interleukin-15, u r-rwoli tagħhom fiċ-ċelloli naturali killer umani. Adv. Immunol. 86:209–239.

5.Bertoli, C., JM Skotheim, u RA de Bruin. 2013. Kontroll taċ-ċiklu taċ-ċelluli traskrizzjoni matul il-fażijiet G1 u S. Nat. Dun Mol. Cell Biol. 14:518–528.

6.Bezman, NA, CC Kim, JC Sun, G. Min-Oo, DW Hendricks, Y. Kamimura,JA Best, AW Goldrath, u LL Lanier. Konsorzju tal-Proġett tal-Ġenoma Immunoloġika. 2012. Definizzjoni molekulari tal-identità u l-attivazzjoni taċ-ċelloli naturali killer. Nat. Immunol. 13:1000–1009.

7.Carson, WE, JG Giri, MJ Lindemann, ML Linett, M. Ahdieh, R. Paxton, D.Anderson, J. Eisenmann, K. Grabstein, and MA Caligiuri. 1994. Interleukin (IL) 15 huwa ċitokin ġdid li jattiva ċ-ċelluli killer naturali tal-bniedem permezz ta' komponenti tar-riċettur IL-2. J. Exp. Med. 180:1395–1403.

8.Carson, WE, TA Fehniger, S. Haldar, K. Eckhert, MJ Lindemann, CF Lai,CM Croce, H. Baumann, and MA Caligiuri. 1997. Rwol potenzjali għall-interleukin-15 fir-regolament tas-sopravivenza taċ-ċelluli naturali killer tal-bniedem.J. Clin. Invest. 99:937–943.

9.Chan, CJ, MJ Smyth, u L. Martinet. 2014. Mekkaniżmi molekulari ta 'attivazzjoni taċ-ċelluli qattiel naturali bi tweġiba għall-istress ċellulari. Mewt Ċellula Differenti. 21:5–14.

10.Chen, X., J. Han, J. Chu, L. Zhang, J. Zhang, C. Chen, L. Chen, Y. Wang, H.Wang, L. Yi, et al. 2016. Terapija kombinata ta 'ċelluli EGFR-CAR NK u virus onkolitiku tal-herpes simplex 1 għal metastasi fil-moħħ tal-kanċer tas-sider.Oncotarget. 7:27764–27777.

For more information:1950477648nn@gmail.com