L-RNA M6 A Reader YTHDF2 Jikkontrolla NK Cell Antitumor U Immunità Antivirali Parti 1

Introduzzjoni

Iċ-ċelloli qattiel naturali (NK) huma ċ-ċelloli limfoiddi intrinsika predominanti li jimmedjaw l-immunità antivirali u antitumorali (Spits et al.,2016). Huma jirrikonoxxu ċelluli infettati bil-virus u kanċeroġeni permezz ta 'uċuħ multipli tagħhom–riċetturi attivanti u inibitorji espressi u joqtluhom permezz ta' effett ċitotossiku (Sun and Lanier, 2011).

Il-qattiel naturali huwa relatat mill-qrib mal-immunità minħabba li ċ-ċelloli qattiel naturali huma parti importanti mis-sistema immuni. Iċ-ċelloli qattiel naturali huma tip ta 'ċelloli immuni li jistgħu jidentifikaw u joqtlu malajr iċ-ċelloli tal-kanċer u l-patoġeni. Jistgħu jidentifikaw u jattakkaw ċelloli anormali mingħajr ma jikkawżaw ħsara liċ-ċelloli normali.

L-immunità hija l-abbiltà tal-ġisem li jirreżisti l-mard u l-infezzjoni, u hija d-difiża kontra l-invażjoni ta 'patoġeni barranin permezz ta' diversi mekkaniżmi tas-sistema immuni. Iċ-ċelloli qattiel naturali huma waħda mill-aktar armi importanti. Jistgħu jiġġieldu direttament il-patoġeni u ċ-ċelloli tat-tumur, u anke jaħdmu flimkien ma 'ċelloli immuni oħra biex itejbu l-effett tal-ġlieda kontra l-mard.

Iż-żamma ta 'immunità tajba hija importanti għall-prevenzjoni u t-trattament ta' ħafna mard. Xi fatturi relatati mal-attività u l-immunità taċ-ċelluli qattiel naturali jinkludu:

1. Nutrizzjoni: drawwiet ta 'ikel tajbin u t-teħid ta' nutrijenti xierqa jistgħu jippromwovu l-attività taċ-ċelluli qattiel naturali. Pereżempju, nutrijenti bħall-vitamini Ċ, E, u l-aċidu foliku għandhom rwol importanti fiż-żieda tal-attività taċ-ċelloli naturali qattiel.

2. Eżerċizzju: Eżerċizzju moderat jista 'jtejjeb il-funzjoni immuni u n-numru ta' ċelluli qattiel naturali, jippromwovi rispons immuni aħjar.

3. Stil ta 'ħajja b'saħħtu: Tieqaf tpejjep, tillimita l-alkoħol, torqod biżżejjed, tnaqqas l-istress, u telimina l-emozzjonijiet negattivi tista' ttejjeb l-immunità u ttejjeb l-attività taċ-ċelluli killer naturali.

Fil-qosor, iċ-ċelloli naturali killer huma waħda mill-aktar armi importanti fis-sistema immuni. Immunità tajba tista 'tipproteġi l-ġisem mill-mard. Billi tadotta stil ta 'ħajja tajjeb għas-saħħa, iżżomm nutrizzjoni tajba, u tidħol f'eżerċizzju moderat, tista' żżid in-numru u l-attività ta 'ċelluli qattiel naturali, ittejjeb l-immunità, u b'hekk ittejjeb kontinwament is-saħħa tal-ġisem tiegħek. Wieħed jista 'jara li għandna bżonn intejbu l-memorja, u Cistanche deserticola jista' jtejjeb b'mod sinifikanti l-memorja minħabba li Cistanche deserticola huwa materjal mediċinali tradizzjonali Ċiniż li għandu ħafna effetti uniċi, li wieħed minnhom huwa li jtejjeb il-memorja. L-effikaċja ta 'Cistanche deserticola ġejja mill-ingredjenti attivi multipli li fih, inkluż aċidu tanniku, polisakkaridi, glikożidi flavonojdi, eċċ Dawn l-ingredjenti jistgħu jippromwovu s-saħħa tal-moħħ permezz ta' varjetà ta 'mogħdijiet.

Ikklikkja taf 10 modi biex ittejjeb il-memorja

Jistgħu wkoll jipproduċu sett distint ta' ċitokini, bħal IFN- , TNF- , u IL-10, jew kimokini, bħal MIP-1 u - u RANTES, li jistgħu jkomplu jqanqlu risponsi immuni adattivi (Spits et al., 2016). Flimkien, l-attivitajiet multifunzjonali taċ-ċelluli NK jgħinu biex jeliminaw miri suxxettibbli u jamplifikaw ir-risponsi infjammatorji kontra viruses u kanċer.

Bħala l-modifikazzjoni posttraskrizzjoni l-aktar prevalenti fuq l-mRNA tal-mammiferi, il-modifika N6-methyladenosine (m6A) qed toħroġ bħala mekkaniżmu regolatorju mifrux li jikkontrolla l-espressjoni tal-ġene fi proċessi fiżjoloġiċi diversi (Yue et al., 2015).

Madankollu, kif il-metilazzjoni tal-m6A tirregola l-immunità medjata minn ċelluli intrinsika u adattata għad irid jinftiehem bis-sħiħ u sa dan ir-rapport, baqa' mhux magħruf fiċ-ċelloli NK.

Riċentement, ir-riċetturi tal-antiġeni kimeriċi (CARs) intwerew li jidderieġu ċelluli NK lejn ċelluli tat-tumur li jesprimu antiġen korrispondenti, u joħolqu opportunitajiet għall-ġlieda kontra l-kanċer (Chenet al., 2016; Chu et al., 2014; Han et al., 2015; Liu et al., 2015; al., 2020;Tang et al., 2018; Yilmaz et al., 2020).

Għalhekk, id-definizzjoni ċara tar-rwol tal-modifika m6A fiċ-ċelloli NK mhux biss se ttejjeb bil-kbir il-fehim tagħna tal-modifiki tal-RNA bħala saff ġdid u kritiku ta 'regolamentazzjoni tal-ġeni ta' wara t-traskrizzjoni li tikkontrolla l-funzjonijiet taċ-ċelluli immuni sinnati iżda tista 'wkoll tagħtina opportunità ġdida biex intejbu l-funzjoni tal-effetturi taċ-ċelluli NK u s-sopravivenza għall-kanċer. immunoterapija.

L-m6A methyltransferases ("kittieba," eż, METTL3 u METTL14) u demethylases ("erasers," eż, proteina assoċjata mal-andobeżità tal-massa tax-xaħam [FTO] u ALKBH5) jikkontrollaw b'mod dinamiku l-pajsaġġ tal-metilazzjoni m6A (Shi et al., 2019).

Il-proteini tal-qarrej Them6A (proteini tal-familja li fihom id-dominju YTH [YTHDF] YTHDF1, YTHDF2, u YTHDF3 u proteini li jgħaqqdu l-mRNA tal-fattur ta’ tkabbir 2 [IGF2BP] simili għall-insulina IGF2BP1, IGF2BP2, u IGF2BP3) preferenzjali jingħaqdu mal-funzjonijiet tal-RNA u tal-media methylated, promozzjoni tat-traduzzjoni jew li jaffettwaw l-istabbiltà ta 'mRNAs modifikati m6A (Huang et al.,2018; Shi et al., 2019; Wang et al., 2014; Wang et al., 2015).

Studji reċenti wrew li l-metilazzjoni ta 'm6A hija involuta immunità medjata minn ċelluli immuni inadatta u intrinsika (Shulman u Stern-Ginossar, 2020). It-tħassir tal-proteina m6Awriter METTL3 fiċ-ċelluli T tal-ġrieden tfixkel l-omeostażi taċ-ċelluli u d-divrenzjar billi timmira l-passaġġ IL-7/SOCS/STAT5 (Li et al., 2017). METTL3 iżomm funzjonijiet soppressivi taċ-ċelluli T reg permezz tas-sinjalar IL-2/STAT5 (Tong et al.,2018).

Il-metilazzjoni tal-RNA m6A għandha rwol essenzjali fl-iżvilupp taċ-ċelluli B kmieni (Zheng et al., 2020). Rapport reċenti wera li l-metilazzjoni tal-mRNA m6A medjata minn METTL 3- tippromwovi l-attivazzjoni taċ-ċelluli dendritiċi (DC) (Wang et al., 2019a).

L-mRNAs modifikati bl-m6A li jikkodifikaw il-cathepsins liżosomali jistgħu jiġu rikonoxxuti minn YTHDF1 f'DCs, u b'hekk irażżnu l-cross-primingability tad-DCs u jinibixxu r-risponsi immuni antitumorali (Han et al., 2019).

Modifiki m6A jikkontrollaw ukoll ir-rispons innateimmune għal infezzjoni virali (Liu et al., 2019; Rubio et al.,2018; Winkler et al., 2019). Madankollu, jekk u kif l-m6Amodifikazzjonijiet jaffettwaw ir-rispons immuni medjat miċ-ċelluli NK għaċ-ċelloli u l-viruses ma ġiex irrappurtat. et al., 2014).

Skont id-database tal-BioGPS (Wu et al., 2013) u d-dejta preliminari tagħna, iċ-ċelloli NK tal-marieni jesprimu YTHDF2 f'livell għoli, filwaqt li r-rwol tiegħu fir-regolazzjoni taċ-ċelloli NK mhuwiex magħruf. Dan immotivana biex nistudjaw YTHDF2 fiċ-ċelloli NK billi tuża approċċ kondizzjonali.

Aħna nuru li t-tnaqqis ta 'Ythdf2 fiċ-ċelluli tal-ġurdienNK imfixkel b'mod sinifikanti l-antitumur u l-immunità antivirali taċ-ċelluli NK. Barra minn hekk, YTHDF2 ikkontrolla l-omeostażi taċ-ċelluli NK, il-maturazzjoni u s-sopravivenza fi stat stabbli. Għalhekk, YTHDF2 jew m6Amodifications b'mod ġenerali għandhom rwoli multidimensjonali fir-regolazzjoni taċ-ċelloli NK.

Riżultati

YTHDF2 huwa regolat 'il fuq fiċ-ċelluli NK tal-marieni minn IL-15, infezzjoni murineCMV, u progressjoni tat-tumur

Biex nistudjaw ir-rwol tal-modifiki tal-m6A fiċ-ċelloli NK, l-ewwel eżaminajna l-livelli ta’ espressjoni ta’ kittieba, gomom, u qarrejja tal-m6A fiċ-ċelloli NK tal-marieni bl-użu tad-database BioGPS (http://biogps.org).

Għaldaqstant, l-espressjoni ta 'Ythdf2 mRNA kienet l-ogħla fost l-enzimi u l-qarrejja m6A l-oħra (Fig. 1 A). Interessanti, sibna li ċ-ċelloli NK għandhom ukoll espressjoni ta' mRNA kostituttiva u proteina ta 'Ythdf2 f'livelli għoljin meta mqabbla mal-biċċa l-kbira taċ-ċelloli immuni l-oħra, inklużi ċelloli B. , makrofaġi, u DCs (Fig. 1 B u Fig. S1 A).

Iċ-ċelloli NK jistgħu jiġu attivati ​​minn IL-15, li huwa regolatur ewlieni tal-omeostasi u s-sopravivenza taċ-ċelluli NK (Becknell u Caligiuri, 2005). B'lieva tad-database tal-Gene Expression Omnibus (GEO), sibna li ċ-ċelloli IL-15-attivati ​​NK għandhom livelli ogħla ta' mRNA ta 'Ythdf2 meta mqabbla ma' enzimi u qarrejja m6A oħra li aħna ttestjajna (Fig. 1 C; analizzati minn GEO taħt nru ta 'adeżjoni. GSE106138).

B'mod konsistenti mal-analiżi tagħna tad-dejta tal-GEO, il-PCR kwantitattiv (qPCR) u l-immunoblotting tagħna f'ħin reali wrew li l-attivazzjoni ta' IL-15 taċ-ċelloli NK irregolat b'mod sinifikanti Ythdf2 kemm fil-livell tal-mRNA kif ukoll tal-proteina u li Ythdf2 kellu livell ta' espressjoni għoli ħafna f'IL{{ {4}}-ċelluli NK attivati ​​meta mqabbla ma 'm6Aenzymes oħra u qarrejja li aħna ttestjati (Fig. 1, D-F; u Fig. S1 B).

Il-livelli tal-proteini ta 'YTHDF2 kienu wkoll regolati b'mod sinifikanti 'l fuq fiċ-ċelloli NK minn ġrieden IL-15 transġeniċi (Tg) li aħna ġġenerajna qabel meta mqabbla ma' kontrolli WT (Fig. S1 C; Fehniger et al., 2001). Iċ-ċelloli NK huma kritiċi medjaturi tal-immunità tal-ospiti kontra infezzjoni virali u tumuri malinni (Spits et al., 2016). Aħna għalhekk evalwajna l-mudell ta 'espressjoni ta' YTHDF2 fiċ-ċelloli NK waqt l-infezzjoni ta 'CMV tal-mur (MCMV).

Bl-użu tad-database GEO, wefound li Ythdf2 kien upregulated fil-jum 1.5 wara infezzjoni f'żewġ databases indipendenti (Fig. 1 G u Fig. S1 D). Assaġġ ta 'immunoblotting ikkonferma li l-livelli ta' proteina ta 'YTHDF2 kienu wkoll regolati f'jum 1.5 wara l-infezzjoni b'MCMV (Fig.S1 E), li jindika li YTHDF2 jista' jkollu rwol kritiku fl-immunità antivirali medjata minn NKcell.

Minbarra li jikkontrollaw l-infezzjoni virali, iċ-ċelluli NK jikkontribwixxu għall-immunosorveljanza kontra t-tumur. Imbagħad eżaminajna l-livelli ta’ Ythdf2 waqt l-iżvilupp tat-tumur. Bl-użu tal-mudell tal-metastasi tal-melanoma B16F10, sibna tnaqqis taċ-ċelloli NK fil-pulmun fl-istadju tard tal-iżvilupp tat-tumur (Fig. S1 F), li huwa konsistenti ma’ rapport minn qabel (Cong et al., 2018).

Sibna li l-mRNA u l-proteina levelsof Ythdf2 kienu sinifikament upregulated fiċ-ċelloli NK fl-istadju bikri ta 'żvilupp tat-tumur (Fig. 1 H u Fig. S1 G). Flimkien, din id-dejta turi li YTHDF2 hija espressa ħafna fiċ-ċelloli NK u hija regolata 'l fuq waqt l-infezzjoni virali u t-tumuriġenesi, li twassalna biex niipoteżi li YTHDF2 għandu rwol fir-regolazzjoni tad-difiża taċ-ċelluli NK kontra t-tumuriġenesi u l-infezzjoni virali.

Id-defiċjenza ta' YTHDF2 tfixkel l-immunità antitumorali taċ-ċelluli NK

Biex tiddefinixxi r-rwol ta 'YTHDF2 fl-antitumorimmunity medjata minn ċelluli NK, l-ewwel iġġenerajna ġrieden floxed Ythdf2 (Fig. S1, H andI). Imbagħad iġġeneraw ġrieden knockout kondizzjonali speċifiċi għaċ-ċelluli NK (minn hawn 'il quddiem imsejħa ġrieden Ythdf2ΔNK) billi qasmu ġrieden Ythdf2fl/fl ma' ġrieden Ncr1-iCre (Narni-Mancinelli et al.,2011). It-tħassir ta 'Ythdf2 fiċ-ċelloli NK ġie vverifikat permezz ta' qPCR u immunoblotting (Fig. S1, J u K).

Imbagħad waqqafna mudell ta 'melanoma metastatiku permezz ta' injezzjoni ġol-vini ta 'ċelluli B16F10 fi ġrieden Ythdf2WT u Ythdf2ΔNK. Kif muri f'Fig. 2 A, Ythdf2ΔNKmice wera piż ferm akbar ta 'nodules metastatiċi minn dak ta' ġrieden Ythdf2WT.

Sibna tnaqqis sinifikanti fil-perċentwali u n-numru assolut ta 'ċelluli NK infiltranti tessuti intumor ta' ġrieden Ythdf2ΔNK meta mqabbla ma 'dawk osservati ġrieden Ythdf2WT (Fig. 2, B, u C). Sadanittant, NKcells infiltranti minn ġrieden Ythdf2ΔNK wrew tnaqqis sinifikanti fl-espressjoni ta 'IFN-, granzyme B, u perforin meta mqabbla ma' dawk minn ġrieden Ythdf2WT (Fig. 2, D-F).

Madankollu, il-perċentwali ta 'ċelluli CD4+ T u CD8+ ċelluli T u l-espressjoni tagħhom ta' IFN- kienu komparabbli bejn ġrieden Ythdf2WT u Ythdf2ΔNK ġrieden (Fig. S1, L-O), li jissuġġerixxi li YTHDF2 fiċ-ċelluli NK hija essenzjali għall-kontroll tal-metastasi tat-tumur.

Biex tikkonferma r-rekwiżit intrinsiku taċ-ċelluli ta 'YTHDF2 għall-immunità antitumorali medjata miċ-ċelluli NK, aħna ttrasferijna b'mod adottiv numru ugwali ta' ċelluli NK minn ġrieden Ythdf2ΔNK jew ġrieden Ythdf2WT fi ġrieden Rag2−/−Il2rg−/−, li m'għandhomx ċelluli T, B u NK. , 1 d qabel injezzjoni ta 'ċelluli tat-tumur B16F10 (Fig. 2 G). Sibna inċidenza miżjuda b'mod sinifikanti ta 'metastasi tat-tumur fil-ġrieden trasferiti ma' ċelluli Ythdf2ΔNK NK meta mqabbla ma 'ġrieden injettati b'ċelluli Ythdf2WT NK (Fig. 2 G).

Bl-istess mod, f'dan il-mudell, sibna wkoll tnaqqis sinifikanti fil-perċentwali u n-numru assolut ta 'ċelluli NK infiltrantiYthdf2ΔNK (Fig. 2, H u I) kif ukoll tnaqqis fl-espressjoni ta' IFN-, granżima B, u perforin fil-ġrieden li rċevew b'mod adottiv. trasferiti ċelluli Ythdf2ΔNK NK meta mqabbla ma 'dawk li rċevew ċelluli Ythdf2WT NK (Fig. 2, J-L). Dawn id-dejta jindikaw rwol intrinsiku taċ-ċelluli ta' YTHDF2 fir-regolamentazzjoni tal-immunità kontra t-tumur taċ-ċelluli NK.

For more information:1950477648nn@gmail.com