L-Effett Ta' Tropisetron Fuq Stress Ossidattiv, SIRT1, FOXO3a, U Claudin-1 fit-Tessut Renali Ta' Firien Dijabetiċi Indotti minn STZ

edmund.chen@wecistanche.com

Astratt

Tropisetron huwa antagonist tar-riċettur 5-HT3 li jeżerċita effett protettiv kontra d-DN. L-għan ta 'dan l-istudju kien li jinvestiga l-mekkaniżmi molekulari possibbli assoċjati mal-effetti renoprotective ta' tropisetron fil-firien dijabetiċi indotti minn STZ. L-annimali ġew suddiviżi f'5 gruppi ugwali; kontroll, tropisetron, dijabete, tropisetron flimkien mad-dijabete, u glibenclamide flimkien mad-dijabete (n=7). Għall-induzzjoni tad-dijabete tat-tip 1, ingħatat injezzjoni waħda ta 'STZ (55 mg/kg, ip) lill-annimali. Firien dijabetiċi ġew ittrattati b'tropisetron (3 mg/kg) u glibenclamide (1 mg/kg) għal ġimgħatejn. Skont l-analiżi mwettqa, id-dijabete wasslet għalrenali disfunzjoni (tnaqqis fir-rata ta 'filtrazzjoni glomerulari u urea u krejatinina ta' l-awrina kif ukoll elevazzjoni fl-urea fil-plażma u krejatinina) u anormalitajiet fis-sistema ta 'difiża antiossidanti (tnaqqis fit-TAC u elevazzjoni fl-MDA), meta mqabbla mal-grupp ta' kontroll, li ġie evitat minn tropisetron trattament. Ir-reazzjoni tal-katina tal-polimerażi kwantitattiva tat-traskrizzjoni inversa u l-analiżi tal-western blotting wrew li l-espressjoni tal-ġeni SIRT1 naqset filwaqt li l-espressjoni tal-ġeni FOXO3a u NF-κB kif ukoll il-proporzjonijiet tal-proteini fosforilati FOXO3a/total FOXO3a u l-livell tal-proteina claudin-1 żdiedu fil-kliewita’ firien dijabetiċi meta mqabbla mal-grupp ta’ kontroll. Hawnhekk, ir-riżultati ta 'din ir-riċerka wrew li t-trattament b'tropisetron biddel dawn il-bidliet. Barra minn hekk, dawn il-bidliet kollha tqabblu ma' dawk prodotti minn glibenclamide bħala kontroll pożittiv. Għalhekk, tropisetron tjiebħsara renaliminħabba nefropatija dijabetika possibilment billi jrażżnu l-istress ossidattiv u l-alterazzjoni tal-livelli SIRT1, FOXO3a, u claudin-1.

Kliem ewlieni:ħsara renali; funzjoni renali; mard tal-kliewi; kliewi; tessuti tal-kliewi

CISTANCHE SE TTEJJEB INSUFFIRIMENT TAL-KLIEI/RENALI

Introduzzjoni

Nefropatija dijabetika (DN) hija marda mikrovaskulari li hija kkaratterizzata minn proteinurja eċċessiva b'morbidità ta '25-40 fil-mija (Chen et al. 2011; Ritz et al. 2010). Alterazzjonijiet morfoloġiċi u funzjonali inklużi ipertrofija glomerulari, akkumulazzjoni eċċessiva ta’ matriċi extraċellulari u glomerulosclerosis, u, fl-aħħar mill-aħħar, telf ta’funzjoni renaliġolkliewihuma assoċjati ma 'ipergliċemija u, sussegwentement, disturb fil-metaboliżmu tal-glukożju (Kanwar et al. 2008; Vikram et al. 2014). Għalhekk, ingħatat attenzjoni speċjali għal ġestjoni jew trattament effettiv li jista 'jkun meħtieġ għall-ġlieda kontra l-marda fl-istadju bikri. L-evidenza akkumulata tindika li l-produzzjoni ta 'speċi ta' ossiġnu reattiv (ROS) bħala kwistjoni diretta ta 'ipergliċemija u sussegwentement, il-produzzjoni ta' ċitokini infjammatorji huma mekkaniżmi ewlenin fl-iżvilupp ta 'kumplikazzjonijiet dijabetiċi (Beckman and Ames 1998; Giacco and Brownlee 2010; Jaimes et al. 2010; ; Kiritoshi et al. 2003). Huwa evidenti li l-iżbilanċ bejn il-kapaċità ta 'difiża pro-ossidant u antiossidanti jirriżulta f'akkumulazzjoni ta' radikali ħielsa li tista 'tagħmel ħsara lill-makromolekuli ċellulari inklużi d-DNA kif ukoll il-modifika tal-proteini u l-perossidazzjoni tal-lipidi (Peluso and Raguzzini 2016).

Is-sirtuini tal-mammiferi huma familja ta' deacetylases dipendenti fuq NAD plus, inklużi seba' membri (SIRT1-7). Fosthom, SIRT1, l-ewwel membru tal-familja, ġie studjat bl-aktar mod estensiv (Dong et al. 2014). Studji reċenti wrew li SIRT1 għandu rwol importanti fir-regolamentazzjoni tal-mewt taċ-ċelluli/lonġevità kif ukoll rispons ta 'stress akut u kroniku fil-mammiferi billi attenwa l-ħsara tad-DNA, l-infjammazzjoni u l-apoptożi (Hasegawa et al. 2013; Yun et al. 2012 ). Diversi studji jindikaw livelli ogħla ta 'downregulation indotta minn ROS ta' l-attività SIRT1 fid-dijabete.kliewi,kemm in vivo kif ukoll in vitro (Akhtar and Siragy 2019; Du et al. 2016; Kumar et al. 2014; Papadimitriou et al. 2015; Park et al. 2016; Shi and Huang 2018).

SIRT1 jista' jeżerċita l-azzjoni tiegħu billi jirregola diversi proteini, bħall-fatturi ta' traskrizzjoni tal-fattur nukleari-kappaB (NF-κB) u l-familja FOXO (Brunet et al. 2004; Langley et al. 2002; Motta et al. 2004; Yeung et al. . 2004). Riċentement, ġie nnotifikat li SIRT1 jirregola l-metaboliżmu tal-glukożju billi jikkontribwixxi għal FOXOs (Kobayashi et al. 2005). FOXO3a huwa sottogrupp tal-familja FOXO ta 'fatturi ta' traskrizzjoni li għandhom rwol importanti waqt stress ossidattiv (Accili and Arden 2004). Modifiki ta 'FOXO3a jseħħu permezz ta' fosforilazzjoni u aċetilazzjoni li jistgħu jidhru simultanjament f'diversi kundizzjonijiet. Skont il-letteratura, SIRT1 jista 'deacetylate FOXO3a, u b'hekk iżid il-livell ta' ubiquitination tiegħu u jipproteġi kontra stressors (Wang et al. 2017a). Hemm ftit informazzjoni dwar il-mekkaniżmu tal-interazzjonijiet bejn SIRT1 u FOXO waqt kundizzjonijiet ipergliċemiċi (Yun et al. 2012). Madankollu, ġie ssuġġerit li SIRT1 jimmodula l-attività tal-FOXO probabbilment bit-traslokazzjoni nukleari tagħhom (Brunet et al. 2004) u jikkontrolla wkoll it-traskrizzjoni speċifika għall-ġene (Kobayashi et al. 2005). Għalhekk, it-traslokazzjoni ta 'FOXO3a miċ-ċitoplasma għan-nukleu hija kkawżata prinċipalment mill-attività ta' deacetylation ta 'SIRT1, speċjalment fl-istatus ta' stress ossidattiv (Yun et al. 2012).

Wang et al. irrapporta li t-trattament ta 'glukożju għoli modula l-espressjoni tal-proteina SIRT1 u FOXO3a fil-bniedemkliewiċelluli epiteljali (Wang et al. 2017b). Barra minn hekk, FOXO3a jiffunzjona bħala regolatur pożittiv tas-sinjalar NF-κB, li fih jista 'jintuża biex jaffettwa strateġiji ta' sopravivenza taċ-ċelluli taħt kundizzjonijiet ta 'stress (Li et al. 2012). Claudin-1 huwa markatur speċifiku taċ-ċelluli epiteljali parietali (PEC) putattiv (Huby et al. 2009; Ohse et al. 2009; Rincon-Choles et al. 2006), li huwa assoċjat b'mod negattiv mal-espressjoni SIRT1 fiż-żewġ prossimali. tubuli u reġjun glomerulari. Intwera li r-regolazzjoni 'l isfel ta' SIRT1 fid-dijabete hija kkorroborata mill-upregulation tal-proteina tight junction claudin-1 f'podoċiti li jikkontribwixxu għall-albuminurja (Gong et al. 2017; Hasegawa et al. 2013). Peress li l-istress ossidattiv, ċitokin infjammatorju, u l-medjaturi molekulari tagħhom huma suġġetti ewlenin fl-effett ta 'ħsara tad-dijabete, aġenti antiossidanti u anti-infjammatorji jistgħu jipprovdu terapiji ġodda kontra d-DN (Elmarakby and Sullivan 2012).

Tropisetron huwa antagonist tar-riċettur 5-HT3 emerġenti reċentement li ġie identifikat bħala mediċina antiemetika waqt il-kimoterapija (Barzegar-Fallah et al. 2015). Diversi rapporti wrew li tropisetron jista 'joffri effetti antiapoptotiċi, antidijabetiċi, kontra l-kanċer, antilipidemiċi, newroprotettivi u kardjoprotettivi li huma probabbilment medjati permezz ta' mekkaniżmi antiossidanti u anti-infjammatorji (Aminzadeh 2017; Asadi et al. 2016; Barzegar-Fallah et al. 2015; Barzegar-Fallah et al 2014; Gholizadeh-Ghaleh Aziz et al. 2019; Rashidi and Bazi 2020). Hemm xi studji li jipprovaw l-effett anti-ossidattiv ta 'tropisetron, kemm in vitro kif ukoll in vivo, bħall-effett protettiv ta' tropisetron fuq disturb ossidattiv indott mill-ipergliċemija fiċ-ċelluli PC12 (Aminzadeh 2017), titjib tal-ħsara mitokondrijali billi titbaxxa nitreġiku l-attività tas-sistema fil-moħħ (Haj Mirzaian et al. 2016), jew attenwazzjoni tal-istress ossidattiv kontra t-tixjiħ tal-moħħ fil-ġrieden (Mirshafa et al. 2020).

Riċentement, Barzegar Fallah et al. żvelat li tropisetron itejjeb il-glukożju fid-demm u wkollfunzjoni renalikif muri bit-tnaqqis tan-nitroġenu urea fid-demm fis-serum (BUN), livelli tal-krejatinina fis-serum, u eskrezzjoni tal-albumina fl-awrina.. Barra minn hekk, kontenut ta 'malondialdehyde (MDA), livelli ta' glutathione (GSH), superoxide dismutase (SOD), u attivitajiet catalase (CAT) kienu imtejba f'annimali dijabetiċi kkurati b'tropisetron (Barzegar-Fallah et al. 2015). Madankollu, m'hemm l-ebda evidenza qawwija oħra dwar il-modulazzjoni tad-DN minn tropisetron u l-mekkaniżmu molekulari tiegħu. Dan l-istudju, għalhekk, għandu l-għan li jevalwa, l-ewwel: l-effetti ta 'tropisetron fuq medjaturi molekulari inklużi SIRT1, NF-κB, u FOXO3a, kif ukoll claudin-1, li hija proteina involuta f'junctions epiteljali stretti u għandha rwol ewlieni firenalinefropatija dijabetika; it-tieni, biex tqabbel l-effett ta 'tropisetron mal-mediċina standard kontra d-dijabete kkummerċjalizzata, glibenclamide, sabiex issib aġent aktar ta' benefiċċju u sigur bħala mediċina antidijabetika standard tad-deheb.

CISTANCHE SE TTEJJEB IL-MARD TAL-KLIEWA/KLIEWA

materjali u metodiDan l-istudju sar skont il-Prinċipji tal-Kura tal-Annimali tal-Laboratorju fl-Università tax-Xjenzi Mediċi ta 'Urmia. L-approvazzjoni etika nkisbet mid-Direttiva tal-UE 2010/63/UE għal esperimenti fuq l-annimali skont il-linji gwida tal-Kumitat tal-Etika Medika, Ministeru tas-Saħħa, Iran (IR.UMSU.REC.1397.291). Ħamsa u tletin firien maskili Wistar (piż 230-270 g, età ta '3-4 xhur) ġew allokati f'5 gruppi (seba' firien f'kull grupp): 1. Grupp ta 'kontroll: Il-firien irċevew salina normali intraperitoneally għal ġimgħatejn. 2. Grupp Tropisetron: Il-firien irċevew tropisetron intraperitonealment għal ġimagħtejn. 3. Grupp tad-dijabete: Id-dijabete kienet indotta minn injezzjoni ta 'streptozotocin (STZ) fil-firien. 4. Tropisetron flimkien ma 'grupp tad-dijabete: Il-firien irċevew 3 mg/kg ta' tropisetron (Gholizadeh-Ghaleh Aziz et al. 2019) intraperitonealment għal ġimgħatejn wara l-induzzjoni tad-dijabete. 5. Glibenclamide flimkien ma 'grupp tad-dijabete: Il-firien irċevew 1 mg/kg glibenclamide (Gholizadeh-Ghaleh Aziz et al. 2019) intraperitonealment għal ġimgħatejn wara l-induzzjoni tad-dijabete.

Induzzjoni tad-dijabeteStreptozotocin (50 mg/kg) ġie injettat intraperitonealment f'doża waħda biex jinduċi d-dijabete fil-firien. Ibbażat fuq dan il-metodu, id-dijabete tat-tip I ġiet indotta fil-firien 72 siegħa wara l-injezzjoni. Id-dijabete ġiet iddijanjostikata u kkonfermata billi ħolqot korriment minuri bl-użu ta 'lancet fid-denb tal-firien sawm, u mbagħad tpoġġiet qatra demm fuq strixxa tal-glukometru. Imbagħad, tkejjel b'glukometru (Boehringer Mannheim Indianapolis, IN), u livelli ta 'glukożju fid-demm 'il fuq minn 300 mg/dl kienu kkunsidrati bħala indikatur ta' induzzjoni tad-dijabete. Wara ġimgħatejn u 24 siegħa qabel l-anestetizzazzjoni, il-firien tqiegħdu f'gaġeġ metaboliċi wieħed wieħed, u nġabret l-awrina. Imbagħad, kampjuni tal-awrina ġew ċentrifugati minnufih bil-wiċċ trasparenti tal-kampjuni maħżuna f'-20 grad għall-analiżi tal-urea u l-krejatinina. Wara, il-firien ġew miżun u anestetizzati b'injezzjoni intraperitoneali ta 'taħlita ta' ketamina (60 mg/kg) u xylazine (4 mg/kg). Imbagħad, il-kavità addominali nfetħet; id-demm inkiseb mill-qalb permezz ta 'siringa dejqa u mħallat ma' ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) u ċentrifugat f'4000 × g għal 20 min. Imbagħad, il-plażma prodotta nħażen f'-80 grad għal kejl aktar tard tal-urea, il-krejatinina u l-kapaċità antiossidant totali (TAC). It-tnejnkliewital-annimali tneħħew, maħsula b'serum fiżjoloġiku kiesaħ, u peżati. Ix-xellugkliewitessuti ġew omoġenizzati minn Ultra Turrax (T10B, IKA, u l-Ġermanja) f'soluzzjoni li fiha RNAase biex jiġu ttestjati l-livelli ta 'espressjoni ta' SIRT1, NF-κB, u FOXO3a bl-użu tal-metodu PCR f'ħin reali. Drittkliewiġie ffriżat f'-80 grad għall-kejl tal-MDA u l-analiżi tal-western blot (FOXO3a totali u fosforilati u claudin-1).

Glukożju fid-demm waqt is-sawmFl-aħħar tal-protokoll, wara sawm matul il-lejl (14 sa 18 h), inkisbu kampjuni tad-demm mill-ponta tad-denb, u mbagħad tkejlu l-livelli tal-glukożju bl-użu ta 'glukometru diġitali (Elegance, CT-X10, Frankenberg, il-Ġermanja).Urea u krejatinina fl-awrina u fil-plażmaGħal dan il-għan, il-livelli tal-urea u tal-krejatinina fl-awrina u fil-plażma se jitkejlu minn kits ekonomiċi speċifiċi għall-kejl tal-urea u l-krejatinina (Biotekniċi; Varginha, Minas Gerais, Brażil).Rata ta' filtrazzjoni glomerulariIr-rata ta 'filtrazzjoni glomerulari (GFR) hija l-aħjar indiċi ġenerali ta'funzjonijiet tal-kliewi, li ġie evalwat billi kkalkolat it-tneħħija tal-krejatinina (GFR=[UCr × V]/SCr) u bl-użu tal-konċentrazzjonijiet tal-krejatinina fil-plażma u fl-awrina u r-rata jew il-volum tal-fluss tal-awrina.

Malondialdehyde u kapaċità antiossidant totaliL-MDA bħala l-prodott finali tal-perossidazzjoni tal-lipidi ġie vvalutat permezz ta’ reazzjoni ma’ aċidu tiobarbituriku (Sigma-Aldrich; USA) fil-kliewikampjuni skond il-protokoll tal-manifattur (Esterbauer and Cheeseman 1990). Fil-qosor, 0.3–0.4 g tal-tessut tal-kliewiġie omoġenizzat f'KCl kiesaħ bis-silġ (15 0 mM) u mbagħad ċentrifugat fi 3000 × g għal 10 min. Imbagħad, 0.5 ml tas-supernatant ġie kkombinat ma '3 ml aċidu fosforiku (1 fil-mija, v/v), u wara t-taħlit tal-vortiċi, 2 ml ta' 6.7 g/l TBA ġew sottomessi mal-kampjuni. Il-kampjuni ġew imsaħħna f'100 grad għal 45 min. Wara li tkessaħ fuq is-silġ, n-butanol (3 ml) ġie kkombinat u l-prodotti ġew ċentrifugati aktar fi 3000 × g għal 10 min oħra. Imbagħad, l-assorbiment tal-prodotti kienet ikkunsidrata f'532 nm permezz ta 'spettrofotometrija. Il-livell ta 'assorbiment tqabbel mal-kurva standard. It-TAC tkejjel permezz ta' kit ta' status antiossidant totali Randox, li fih ABTS 2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonate) huwa inkubat ma' peroxidase u H2O2 li jirriżulta fil-katjoni radikali ABTS flimkien mal-produzzjoni . Dan għandu kulur blu-aħdar stabbli, li jiġi evalwat bl-użu ta' analizzatur awtomatiku 600-nm (Amini et al. 2020).

CISTANCHE SE TTEJB L-UĠIGĦ TAL-KLIEI/KLIEWA

Disinn tal-primer u PCR f'ħin realiL-RNA ġie estratt l-ewwel mill-kit rilevanti (GENALL), u l-RNA kondensat ġie vvalutat kwalitattivament (elettroforesi) u kwantitattivament (nano-drop) sabiex tiġi żgurata l-estrazzjoni u l-applikazzjoni tal-RNA f'tekniki molekulari sussegwenti. Imbagħad, is-cDNA rilevanti ġie sintetizzat mill-kampjuni kollha ta 'RNA estratti. Il-primers tal-ġeni fil-mira u l-ġene glyceraldehyde dehydrogenase (GAPDH) bħala ġene tad-dar ġew eżaminati fuq is-sit NCBI bl-użu tas-softwer Generunner (Tabella Supplimentari). Imbagħad, l-espressjoni tal-ġeni ġiet analizzata bl-użu tal-primers sintetizzati permezz ta 'kit PCR, segwit minn analiżi statistika tad-dejta.

Western blotIl-metodu Western blot intuża biex jiġu ddeterminati l-livelli ta’ proteini FOXO3a (totali u fosforilati) u claudin-1 fil-kliewi.Żewġ ġels li jirrisolvu u stivar huma użati biex jagħmlu l-ġell elettroforesi. Wara li ppreparat il-ġell li jirriżolvi ​​u tferrah fil-moffa, ġie miżjud ġel tal-istivar wara siegħa u wara l-istivar. Il-kampjuni ġew mgħobbija fi bjar magħmulin minn moxt speċjali. Imbagħad ġew separati minn SDS-PAGE. Fi żmien siegħa, il-kampjuni kollha mgħobbija ġew trasferiti għall-membrana PVDF. Sussegwentement, il-kampjuni ġew imblukkati b'5 fil-mija buffer tal-ħalib xkumat inkluż 0.1 fil-mija Tween 20 u mbagħad ġew inkubati b'antikorpi primarji matul il-lejl f'4 gradi f'inkubatur shaker. Imbagħad il-membrani ġew inkubati b'antikorp sekondarju konjugat bil-perossidasi tar-ravanell. Fl-aħħarnett, beta-actin intuża bħala standard intern għall-analiżi tal-western blot. Fl-aħħar, l-effetti ta 'kampjuni mħassra, skond il-livell ta' proteina fil-mira, ġew evalwati fuq il-film tar-radjografija f'kamra mudlama. Biex jiġu kkwantifikati l-proteini fil-mira, ir-riżultati tal-iskannjar tal-film ġew ikkalkulati minn densitometru relattiv għal-livell ta 'actin. L-antikorpi użati fl-analiżi tal-Western blotting huma murija fit-Tabella Supplimentari (numri tal-katalgu u kumpaniji).

Analiżi statistikaIr-riżultati ġew ippreżentati bħala medja ± SEM. Analiżi statistika saret bl-użu ta' SPSS 16.0. It-tqabbil bejn il-gruppi kien stmat bit-test ANOVA segwit mit-test post hoc ta 'Tukey. Id-differenzi kienu preżunti statistikament sinifikanti f'P <>

Riżultati

Tropisetron naqqas il-glukożju fid-demm waqt is-sawm (mg/dl), il-piż tal-kliewi (g), u l-indiċi tal-kliewi (mg/g), filwaqt li żied il-piż tal-ġisem (g) fil-firien dijabetiċi indotti minn STZB'mod simili għal studji preċedenti f'dan ix-xogħol, gruppi dijabetiċi wrew ipergliċemija severa (P <{{0}}.001) meta="" mqabbla="" mal-grupp="" ta'="" kontroll.="" il-konsum="" ta'="" tropisetron="" (p=""><0.01) u="" glibenclamide="" (p="">< 0.05)="" għal="" ġimgħatejn="" naqqsu="" b'mod="" sinifikanti="" l-glukożju="" fid-demm="" fi="" gruppi="" dijabetiċi="" indotti="" minn="" stz,="" iżda="" xorta="" kien="" ogħla="" b'mod="" sinifikanti="" minn="" dak="" fil-grupp="" ta'="" kontroll="" (p="">< 0.001="" ).="" ma="" kien="" hemm="" l-ebda="" differenza="" sinifikanti="" fil-piż="" tal-ġisem="" (bw)="" fost="" il-gruppi="" fil-bidu="" ta="" 'dan="" l-istudju="" (dejta="" mhux="" murija).="" l-induzzjoni="" tad-dijabete="" minn="" stz="" naqset="" b'mod="" sinifikanti="" (p=""><0.001) finalment="" (bw)="" fil-firien="">Kilwail-piż (KW) ma kienx sinifikanti fost il-gruppi għall-ewwel; madankollu, żdiedet fil-grupp dijabetiku u naqas wara interventi.Kilwaindiċi (KW/BW) żdied b'mod sinifikanti (P ​​<{{0}}.001) f't1dm="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" ta="" 'kontroll.="" interessanti,="" wara="" ġimgħatejn="" ta="" 'amministrazzjoni="" ta'="" tropisetron="" u="" glibenclamide,="" kw/bw="" modulati="" (p=""><0.05) (tabella="">

Tropisetron tejjeb l-analiżi bijokimika fil-firien dijabetiċi indotti minn STZBħal fi studji preċedenti, il-livelli ta’ urea fil-plażma u l-awrina tal-grupp dijabetiku kienu ogħla b’mod sinifikanti minn dawk fil-grupp ta’ kontroll (P <{{0}}.001) .="" fil-grupp="" tropisetron="" flimkien="" mad-dijabete,="" plażma="" (p="">< 0.{{10}}01)="" u="" awrina="" (p=""><0.0 5)="" il-livelli="" ta="" 'urea="" naqsu="" b'mod="" sinifikanti="" meta="" mqabbla="" ma'="" dawk="" fil-gruppi="" tad-dijabete.="" madankollu,="" l-urea="" ta="" 'l-awrina="" kienet="" għadha="" inqas="" b'mod="" sinifikanti="" minn="" dik="" fil-grupp="" ta'="" kontroll="" (p=""><0.01). m'hemm="" l-ebda="" differenza="" sinifikanti="" fil-livell="" ta'="" urea="" fil-plażma="" bejn="" tropisetron="" flimkien="" mad-dijabete="" u="" gruppi="" ta'="" kontroll.="" il-livell="" tal-krejatinina="" fil-plażma="" (p="">< 0.001)="" u="" fl-awrina="" (p="">< 0.05)="" wera="" żieda="" sinifikanti="" fil-firien="" dijabetiċi="" meta="" mqabbla="" ma="" 'dak="" fil-grupp="" ta'="" kontroll.="" l-għoti="" ta'="" tropisetron="" naqqas="" il-livelli="" tal-krejatinina="" fl-awrina="" u="" fil-plażma="" b'mod="" sinifikanti="" (p="">< 0.001)="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" dijabetiku.="" f'annimali="" dijabetiċi,="" it-tneħħija="" tal-krejatinina,="" bħala="" indikatur="" tar-rata="" ta="" 'filtrazzjoni="" glomerulari,="" kienet="" inqas="" b'mod="" sinifikanti="" minn="" dik="" fil-grupp="" ta'="" kontroll="" (p=""><0.05). il-kura="" b'tropisetron="" żiedet="" b'mod="" sinifikanti="" t-tneħħija="" tal-krejatinina="" meta="" mqabbla="" ma'="" dik="" fil-grupp="" tad-dijabete="" (p=""><0.001). l-istess="" riżultati="" nkisbu="" fil-grupp="" ittrattat="" bil-glibenclamide.="" madankollu,="" l-urea="" fil-plażma="" hija="" ħafna="" aktar="" baxxa="" fil-grupp="" ikkurat="" b'tropisetron="" meta="" mqabbel="" ma="" 'dak="" fil-grupp="" ta'="" glibenclamide="" flimkien="" mad-dijabete="" (p=""><0.01) (tabella="">

Tropisetron żied il-kontenut ta' TAC fil-plażma u attenwat il-livell ta' MDA fil-firien dijabetiċi indotti minn STZIl-livell ta' MDA fil-gruppi ta' kontroll, tropisetron, dijabete mellitus, tropisetron flimkien mad-dijabete, u glibenclamide flimkien mad-dijabete kien 8.65 ± 1.01, 10.89 ± 1.6 35.54 ± 1.6 35.54 ± 7.1, 18.76 ± 3.6, u 16.89 ± 4.1 nmol/mg ta 'proteina, rispettivament. L-istudju tagħna, flimkien ma' dawk ta' oħrajn, wera l-ogħla livell ta' MDA fil-grupp tad-dijabete, li wera żieda sinifikanti meta mqabbel mal-grupp ta' kontroll (P <0.00 1).="" il-livell="" ta'="" mda="" fil-gruppi="" ta'="" tropisetron="" flimkien="" mad-dijabete="" u="" glibenclamide="" flimkien="" mad-dijabete="" wera="" tnaqqis="" sinifikanti="" (p=""><{{30}}.01) meta="" mqabbel="" mal-grupp="" tad-dijabete="" (fig.="" 1a).="" il-livelli="" ta'="" tac="" fil-gruppi="" ta'="" kontroll,="" tropisetron,="" dijabete,="" tropisetron="" flimkien="" mad-dijabete,="" u="" glibenclamide="" flimkien="" mad-dijabete="" kienu="" 0.65="" ±="" 0.{{40}}3,="" {{44}="" }.76="" ±="" 0.06,="" 0.26="" ±="" 0.08,="" 0.45="" ±="" 0.06,="" u="" 0.57="" ±="" 0.08="" nmol/ml,="" rispettivament.="" il-livelli="" ta="" 'tac="" naqsu="" fil-grupp="" tad-dijabete="" meta="" mqabbla="" ma'="" dak="" tal-grupp="" ta="" 'kontroll="" (p=""><0.001), kif="" muri="" qabel.="" iż-żewġ="" amministrazzjonijiet="" ta="" 'tropisetron="" u="" glibenclamide="" żiedu="" b'mod="" sinifikanti="" l-livelli="" ta'="" tac="" fil-plażma="" f'annimali="" dijabetiċi="" meta="" mqabbla="" mal-grupp="" dijabetiku="" (fig.="">

Tropisetron żied SIRT1 u naqas l-espressjonijiet tal-ġeni FOXO3a u NF-κB L-espressjonijiet tal-ġeni ġew evalwati b'PCR f'ħin reali li pprovda evidenza importanti għal differenza bejn il-gruppi. Għaldaqstant, id-dijabete kienet assoċjata ma' tnaqqis sinifikanti (0.65 ± 0.08) fl-espressjoni tal-ġene SIRT1 (P <0.01. )="" u="" żieda="" sinifikanti="" (p="">< 0.0{01)="" f'foxo3a="" (1.98="" ±="" 0.08)="" u="" nf-κb="" (1.71="" ±="" 0.14)="" espressjoni="" tal-ġeni="" meta="" mqabbla="" mal-grupp="" ta="" 'kontroll.="" il-kura="" b'tropisetron="" żiedet="" sirt1="" (0.88="" ±="" 0.3)="" u="" naqas="" il-livelli="" ta'="" mrna="" ta'="" foxo3a="" (1.53="" ±="" 0.08)="" (p=""><0.05) u="" nf-κb="" (1.27="" ±="" 0.03)="" (p="">< 0.01)="" b'mod="" sinifikanti="" fil-firien="" dijabetiċi="" (fig.="" .2a–c).="" riżultati="" simili="" ġew="" ipprovduti="" fl-annimali="" ttrattati="" bil-mediċina="" standard,="">

Tropisetron naqqas l-espressjonijiet tal-proteini FOXO3a u claudin-1Biex tiġi evalwata l-espressjoni tal-proteina FOXO3a (total u fosforilata) u claudin- 1 wara trattament ta’ tropisetron u glibenclamide, intuża western blotting fil-kliewita’ gruppi differenti. L-analiżi tad-dejta turi żieda sinifikanti fil-proporzjonijiet tal-proteina fosforilata FOXO3a/total FOXO3a (4.6 ± 0.17) u claudin-1 (3.02 ± 0}.16 ) livelli ta' proteina fil-grupp dijabetiku meta mqabbel mal-kontroll (P <0.001). l-għoti="" ta'="" tropisetron="" naqqas="" b'mod="" notevoli="" l-proporzjonijiet="" tal-proteina="" fosforilata="" foxo3a/total="" foxo3a="" (2.14="" ±="" 0.31)="" u="" l-livelli="" ta'="" claudin-1="" (2.4="" ±="" 0.12)="">kliewital-firien dijabetiċi (P <{{0}}.01). it-trattament="" b'glibenclamide="" attenwat="" b'mod="" sinifikanti="" kemm="" il-proporzjonijiet="" tal-proteina="" fosforilata="" foxo3a/total="" foxo3a="" (2.57="" ±="" 0.5)="" (p=""><0}.001) u="" claudin{-1="" (2.2="" ±="" 0.11)="" (p="">< 0.05)="" )="" livelli="" ta="" 'proteina="" fil-firien="" dijabetiċi="" indotti="" minn="" stz="" (fig.="">

Diskussjoni Is-sejbiet tal-istudju attwali huma mogħtija fit-taqsimiet li ġejjin: injezzjoni waħda ta 'T1DM indotta minn STZ kienet assoċjata ma' ipergliċemija severa, telf ta 'piż, ukliewidisfunzjoni, li hija manifestata b'żieda mmarkata ta 'krejatinina u urea fil-plażma u tnaqqis notevoli fit-tneħħija tal-krejatinina bħala indiċi ta' GFR meta mqabbel ma 'dak fil-grupp ta' kontroll. STZ ħarbat il-bilanċ ossidattiv fil-kliewitessut li ġie ppruvat billi żżid l-MDA u tnaqqas il-kontenut tat-TAC. Analiżi molekulari ulterjuri wriet li d-dijabete naqqset l-mRNA ta’ SIRT1 u żiedet l-mRNA ta’ NF-κB kif ukoll il-proporzjonijiet ta’ proteina fosforilata FOXO3a/total FOXO3a u l-livell ta’ proteina claudin-1 fil-kliewital-firien maskili. Titjib sinifikanti ta 'urea, kreatinina, krejatinina

tneħħija, kif ukoll SIRT1 mRNA, NF-κB mRNA, proporzjonijiet ta 'proteina fosforilata FOXO3a/total FOXO3a, u proteina claudin-1, simili għal dawk tal-annimali ta' kontroll, kienu osservati fil-grupp ta 'tropisetron flimkien mad-dijabete. DN li huwa kkaratterizzat minn diversi karatteristiċi bħal tfixkil filrenaliintegrità strutturali u funzjonali, żieda filkliewidaqs, kif ukoll ipertrofija glomerulari u tubulari, hija kawża ewlenija tal-istadju finalimard tal-kliewi(Singh et al. 2018; Yaribeygi et al. 2018). Albuminurja progressiva, tnaqqis fil-GFR, u elevazzjoni tal-pressjoni tad-demm arterjali huma l-aktar sintomi funzjonali evidenti osservati f'pazjenti dijabetiċi (Alzahrani et al. 2020). L-ewwel markatur tad-DN huwa l-albuminurja li hija kkawżata minn ħsara glomerulari progressiva bħala karatteristika ċentrali fil-bidu.korriment fil-kliewi(Elsherbiny et al. 2018). B'mod konsistenti mas-sejbiet tagħna, studji preċedenti enfasizzaw li DN huwa akkumpanjat minn żidiet fil-krejatinina fis-serum u l-urea li jissuġġerixxu disfunzjoni tal-tessut renali(Sharma et al. 2006; Tang et al. 2018).

L-evidenza akkumulata tindika li l-ġenerazzjoni ta 'radikali ħielsa minħabba l-ipergliċemija hija avveniment ewlieni fil-bidu u l-progressjoni ta' kumplikazzjonijiet mikrovaskulari dijabetiċi inkluż DN. Produzzjoni eċċessiva ta 'ROS tikkontribwixxi għal ħsara ossidattiva billi taffettwa makromolekuli, ċelloli, u tessuti u tirriżulta f'insult irriversibbli jew disturbi funzjonali (Kiritoshi et al. 2003).

L-MDA bħala markatur tal-perossidazzjoni tal-lipidi hija attivata mill-attakk ta 'radikali ħielsa fuq aċidi grassi mhux saturati tal-membrana, li kkontribwew għal kumplikazzjonijiet dijabetiċi (Pieme et al. 2017). L-istatus totali antiossidant ġie stmat minn TAC li huwa bijomarkatur biex jiddetermina stress ossidattiv f'ħafna kundizzjonijiet patoloġiċi. Għalhekk, indebolimenti MDA u TAC f'pazjenti dijabetiċi jirriflettu l-produzzjoni ta 'radikali ħielsa li jinduċu status ta' stress ossidattiv (Peluso and Raguzzini 2016). B'mod konsistenti, ir-riżultati ta 'dan l-istudju wrew żieda fl-MDA u tnaqqis fil-livelli ta' TAC fil-far dijabetikukliewi. Meta wieħed iqis dan il-fatt, l-attenwazzjoni tal-istress ossidattiv tejbet il-kumplikazzjonijiet dijabetiċi inklużikorriment renali(Alzahrani et al. 2020; Barzegar-Fallah et al. 2015).

Tropisetron, bħala antagonist 5-HT3 b'attivitajiet antiossidanti u anti-infjammatorji, juri effetti protettivi f'diversi kundizzjonijiet patoloġiċi bħad-dijabete (Barzegar-Fallah et al. 2015; Rashidi and Bazi 2020). L-effett nefroprotettiv ta 'tropisetron kien deskritt qabel f'esperimenti fuq l-annimali. F'din il-fehma, tropisetron tejjeb id-DN b'mod 5-HT3 indipendenti mir-riċettur billi jipprevjeni żieda fil-glukożju fid-demm,renaliMDA, CAT, SOD, Gpx, u TNF-livelli u tnaqqis fl-eliminazzjoni taċ-ċitokini urinarja u albuminurja (Barzegar-Fallah et al. 2015).

F'konformità ma 'din il-kwistjoni, fl-investigazzjoni attwali, l-evidenza hija pprovduta biex turi li l-ipergliċemija modulata ta' tropisetron, telf ta 'piż, u status ta' stress ossidattiv li huwa esebit billi jitnaqqas l-MDA u jiżdied il-kontenut ta 'TAC u mtejjeb.kliewidisfunzjoni (tnaqqis sinifikanti fl-urea fil-plażma u l-krejatinina). Glibenclamide ġie applikat bħala mediċina standard skont studji preċedenti (Amini et al. 2020). Interessanti, ma ġiet osservata l-ebda differenza sinifikanti fil-parametri msemmija fil-gruppi li ngħataw glibenclamide u dawk li ngħataw tropisetron fil-kliewital-firien dijabetiċi. Madankollu, il-mekkaniżmi preċiżi wara l-effett protettiv ta 'tropisetron fid-DN għadhom mhux magħrufa. Sa fejn nafu aħna, dan huwa l-ewwel studju li juri li tropisetron żied l-espressjoni tal-ġeni SIRT1 u naqqas il-proporzjonijiet ta’ proteina fosforilata FOXO3a/total FOXO3a, NF-κB, u livelli ta’ proteina claudin- 1 fil-kliewita' annimali dijabetiċi.

SIRT1 hija proteina deacetylase tal-klassi III li tinvolvi ruħha fis-sopravivenza taċ-ċelluli taħt kundizzjonijiet stressanti billi tattiva diversi proteini ewlenin. Huwa fattur essenzjali għall-modulazzjoni tal-espressjoni tal-ġeni b'reazzjoni għall-ġenerazzjoni ROS bħal fatturi ta 'traskrizzjoni NF-κB u foxo (Brunet et al. 2004; Sengupta et al. 2011). Fost il-familja foxo, FOXO3a huwa preżunt li għandu rwol importanti waqt stress ossidattiv billi jirregola bosta antiossidanti, inklużi SOD u CAT.

(Hasegawa et al. 2008; Kops et al. 2002). B'mod partikolari, l-inattivazzjoni ta 'FOXO3a ġiet assoċjata mad-downregulation ta' stress ossidattiv indott minn CAT waqt kundizzjonijiet ta 'ipergliċemija (Wang et al. 2017b). SIRT1 jimmaniġġja l-attivazzjoni ta 'FOXO3a permezz ta' deacetylation u jimmodula r-rispons taċ-ċelluli għal stress ossidattiv direttament jew indirettament (Hori et al. 2013). Ġie ddikjarat li hemm assoċjazzjoni funzjonali bejn ir-regolamentazzjoni SIRT1 u FOXO3 tas-sistema ta 'difiża antiossidanti MnSODmediated (Tanaka et al. 2009; Zhang et al. 2015). Għaldaqstant, Zhang et al. (2015) wrew li l-icariin ipproteġiet il-ħsara akuta fil-pulmun ikkawżata minn mogħdija tas-sinjalar SIRT1/FOXO3 medjata minn iskemija intestinali/riperfużjoni permezz ta' regolazzjoni 'l fuq tal-espressjoni MnSOD. Rapporti preċedenti implikaw ukoll li r-regolazzjoni 'l fuq ta' SIRT1 ittaffi n-nefropatija indotta minn cisplatin,renalikorriment iskemiku/ riperfużjoni, u nefropatija dijabetika (Funk and Schnellmann 2013; Gu et al. 2016; Kim et al. 2011). Notevolment, ir-regolazzjoni baxxa tas-SIRT1 indotta mid-dijabete li tmexxi l-alterazzjonijiet patofiżjoloġiċi twassal għalrenalitossiċità (Wang et al. 2017b). Hasegawa et al. (2013) wrew li tnaqqis ta 'SIRT1 fit-tubuli prossimali wassal għall-bidu ta' DN u rriżulta f'albuminurja. B'mod konformi, ir-riżultati ta 'din ir-riċerka identifikati naqsurenaliEspressjoni tal-ġeni SIRT1 fil-grupp dijabetiku. Għalhekk, l-attivazzjoni ta 'SIRT1 ikkawżat ir-reżistenza ta'renaliċelluli tubulari għal stress ċellulari (Kume et al. 2013). Kollox ma 'kollox, l-attivaturi SIRT1 kisbu attenzjoni notevoli bħala kandidati interessanti għat-terapija tad-dijabete (Song et al. 2018)

Barra minn hekk, ir-riċerka preżenti wriet ukoll rispons infjammatorju immarkat fid-dijabetekliewikif muri mill-elevazzjoni NF-κB. Huwa fattur regolatorju essenzjali marbut mar-rispons immuni u l-infjammazzjoni (Hayden and Ghosh 2012). B'mod konsistenti mas-sejbiet ta 'din ir-riċerka, bosta studji rrappurtaw li l-attivazzjoni ta' NF-κB u t-traslokazzjoni nukleari tagħha tiżdied kemm f'DN sperimentali kif ukoll uman (Alzahrani et al. 2020; Kuhad and Chopra 2009). Barra minn hekk, l-elevazzjoni ta’ SIRT1 tikkontribwixxi għall-inattivazzjoni ta’ NF-κB biex isalva l-podoċiti minn korriment fid-dijabete.kliewi(Liu et al. 2014). Interessanti, l-espressjoni żejda ta 'SIRT1 attenwa espressjoni ta' proteina f'junctions epiteljali stretti, jiġifieri, claudin -1, fil-firien ipergliċemiċi, li hija f'korrelazzjoni mal-livell ta 'proteinurja. Il-claudin attivat-1 fil-podoċiti jiddeterjora l-funzjoni tal-barriera glomerulari permezz tat-tnaqqis tal-espressjoni tas-synaptopodin jew tal-podocin li tirriżulta f'albuminurja (Hasegawa et al. 2013). Dawn is-sejbiet ġew approvati wkoll fil-kliewi tal-firien dijabetiċi.

Hawnhekk, intwera għall-ewwel darba li taħt kundizzjonijiet dijabetiċi, l-amministrazzjoni ta 'tropisetron wasslet għal espressjoni tal-ġeni SIRT1 msaħħa u fl-istess ħin naqsu l-proporzjonijiet ta' proteina fosforilata FOXO3a/total FOXO3a, NF-κB, u livelli ta 'proteina claudin-1. Għalhekk, huwa loġiku ħafna li tali attivazzjoni f'SIRT1 u t-tnaqqis sussegwenti fil-proporzjonijiet tal-proteini fosforilati FOXO3a/total FOXO3a, NF-κB, u claudin-1 ikunu, parzjalment, jistgħu jkunu responsabbli għat-titjib fil- dijabetikufunzjoni tal-kliewi. Ir-riċerkaturi rrappurtaw li l-effetti protettivi tat-tropisetron fid-DN jidhru li huma 5-HT3 indipendenti mir-riċettur peress li granisetron, imblokkatur selettiv ieħor tar-riċetturi 5-HT3, naqas milli jipproteġi d-DN. Ġie ddikjarat li l-mekkaniżmi antiossidanti u anti-infjammatorji ta 'tropisetron jista' jkollhom rwol kritiku fil-tessut renaliprotezzjoni fid-dijabete (Barzegar-Fallah et al. 2015). Riċentement, il-laboratorju tagħna osserva li t-trattament ta 'tropisetron żied is-sekrezzjoni ta' l-insulina u naqqas il-livell ta 'glucose fid-demm billi jgħolli l-espressjoni tal-ġeni GLUT2 kif ukoll il-mogħdija UCP2/ZnT8 (Naderi et al. 2020). Tropisetron bħala imblokkatur tar-riċettur 5-HT3 żied ir-rilaxx tal-insulina mil-linja taċ-ċelluli beta tal-frixa li tipproduċi l-insulina li rriżultat f'ipogliċemija (Heimes et al. 2009). Għalhekk, jidher li l-modulazzjoni tar-rilaxx tal-insulina u sussegwentement l-omeostażi tal-glukożju jistgħu jinvolvu risponsi antiossidattivi u anti-infjammatorji li jikkontribwixxu għalkliewiprotezzjoni.

F'konformità mas-sejbiet preżenti, tropisetron biddel il-ħsara ossidattiva billi żied l-espressjoni tal-ġene SIRT1 fis-senescence fil-ġrieden (Mirshafa et al. 2020). Barra minn hekk, attenwazzjoni tal-ħsara fil-fwied, livelli ta 'proteina TNF- , u IL-6 ġew osservati fil-fwied ta' firien dijabetiċi wara ko-trattament ta 'tropisetron (Amini et al. 2020; Gholizadeh-Ghaleh Aziz et al. 2019). Ukoll, fir-riċerka preżenti, tropisetron wera rispons simili għal mediċina standard, glibenclamide. Għaldaqstant, l-espożizzjoni għal glibenclamide żiedet SIRT1 u naqqset il-proporzjonijiet tal-proteina fosforilata FOXO3a/total FOXO3a, NF-κB, u livelli ta’ claudin-1 fid-dijabetiċi.kliewifl-istudju attwali. Glibenclamide huwa mediċina stabbilita li ntużat ħafna fit-trattament ta 'pazjenti dijabetiċi billi jinibixxi l-kanali K plus sensittivi għall-ATP. Peress li kien hemm xi riżultati kontradittorji rigward l-effett tal-glibenclamide fid-DN (Akbar et al. 2013; Elmalí et al. 2004; Nakamura et al. 2000), probabbilment minħabba d-dożaġġ jew it-tul tat-trattament, dan l-avveniment ipprovda l-motivazzjoni għall-introduzzjoni ta’ mediċina ġdida għal pazjenti dijabetiċi bħala aġent sigur u effettiv b'inqas effetti sekondarji

B'mod ġenerali, tropisetron jitjieb b'mod effettivfunzjoni renalif'DN probabbilment billi tbiddel l-espressjoni ta 'SIRT1, proporzjonijiet ta' proteina fosforilata FOXO3a/total FOXO3a, NF-κB, u claudin-1. Dan l-istudju kellu xi limitazzjonijiet biex jappoġġja dan is-suġġett. Pereżempju, studji morfoloġiċi għandhom jippruvaw jipprovdu aktar evidenza biex jivvalidaw l-investigazzjoni preżenti. Ukoll, ir-riċerkaturi ma impjegawx inibituri tal-molekula biex jivvalidaw il-mekkaniżmu eżatt tal-mogħdija tas-sinjalar.

Konklużjoni

Bħala konklużjoni, is-sejbiet ta 'dan l-istudju wrew l-effett nefroprotettiv ta' tropisetron f'T1DM indott minn STZ. Is-sejbiet notevoli ta 'din l-investigazzjoni indikaw li l-effett nefroprotettiv ta' tropisetron possibbilment involva bidliet fl-espressjoni ta 'SIRT1, FOXO3a, NF-κB, u claudin-1. Din id-dejta tista' tkun stimulanti għal aktar riċerka f'dan il-qasam.