Ir-Rwoli Kruċjali tat-TRPM6 fir-Regolament Ċirkadjan tal-Pressjoni tad-Demm

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Importanza tal-kanal tal-joni renali TRPM6 fis-sekrezzjoni ċirkadjana tar-renin biex tgħolli l-pressjoni tad-demm

Yosuke Funato, Daisuke Yamazaki, Daisuke Okuzaki, Nobuhiko Yamamoto & Hiroaki Miki

Pressjoni tad-demmgħandha mudell ta 'kuljum, b'valuri ogħla fil-perjodu attiv. L-elevazzjoni tiegħu fil-bidu tal-perjodu attiv iżżid sostanzjalment ir-riskju ta 'avvenimenti kardjovaskulari fatali. Is-sekrezzjoni tar-renin stimulata minn newroni simpatetiċi renali hija meqjusa essenzjali għal dan il-proċess; madankollu, il-mekkaniżmu regolatorju tiegħu għadu fil-biċċa l-kbira mhux magħruf. Hawnhekk, nuru l-importanza tapotenzjal ta' riċettur temporanju relatat mal-melastatin 6 (TRPM6), kanal ta 'katjoni Mg2 plus -permeabbli, biex iżid is-sekrezzjoni tar-renin fil-perjodu attiv.TRPM6l-espressjoni titnaqqas b'mod sinifikanti fit-tubuli konvoluti distali ta' ġrieden defiċjenti ta' Cnnm{0}}ipotensivi. Aħna niġġeneraw speċifiċi għall-kliewiTRPM6-ġrieden defiċjenti u josservaw tnaqqis filpressjoni tad-demmu l-għajbien tal-varjazzjoni ċirkadjana tagħha. B'mod konsistenti, is-sekrezzjoni tar-renin mhix miżjuda fil-perjodu attiv. Barra minn hekk, is-sekrezzjoni ta 'renin wara l-attivazzjoni farmakoloġika ta' -adrenoreceptor, il-mira ta 'stimulazzjoni newronali, hija abrogata, u l-espressjoni tar-riċettur titnaqqas fiċ-ċelloli li jxerrdu renin. Dawn ir-riżultati jindikaw ir-rwoli kruċjali ta 'TRPM6 fir-regolament ċirkadjan tapressjoni tad-demm.

Madwar biljun ruħ madwar id-dinja huma stmati li għandhom pressjoni għolja, li żżid b'mod sinifikanti r-riskju ta 'diversi mard, inkluż mard potenzjalment fatali, bħal mard iskemiku tal-qalb u puplesija. Dawn l-inċidenti fatali relatati mal-pressjoni għolja huma magħrufa li jseħħu ta’ spiss filgħodu kmieni, il-bidu tal-perjodu attiv metademmpressjonijogħla sew. Is-sekrezzjoni tar-renin ikkawżata minn newroni simpatetiċi renali hija kkunsidrata li għandha rwol kruċjali f'danpressjoni tad-demmelevazzjoni, iżda l-mekkaniżmu regolatorju tiegħu mhuwiex mifhum tajjeb².

bodybuilding cistanche

Huwa aċċettat b'mod wiesa 'li xi minerali tad-dieta, partikolarment is-sodju u l-potassju, għandhom rwoli importanti fil-kontroll ta'demmpressjoni. Il-manjesju huwa element essenzjali ewlieni involut f'varjetà ta 'attivitajiet bijoloġiċi. Studji epidemjoloġiċi wrew relazzjoni inversa sinifikanti bejn il-livelli tal-manjeżju fid-dieta u r-riskju ta' pressjoni għolja3-6. Barra minn hekk, l-eskrezzjoni tal-manjeżju fl-awrina, li hija preżunta li tkun f'ekwilibriju approssimattiv mal-assorbiment tal-manjeżju intestinali, hija inversament korrelata mar-riskju ta 'pressjoni għolja. Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu assoċjazzjoni mill-qrib bejn l-omeostażi tal-manjeżju organiżmu upressjoni tad-demmregolamentazzjoni, li tenfasizza l-importanza tal-kanali Mg2 plus u/jew trasportaturi fir-regolamentazzjoni tapressjoni tad-demm.

Kwantità kbira ta 'manjeżju qed tiġi assorbita mill-ġdid fil-kliewi. Il-biċċa l-kbira tal-manjeżju fil-filtrat glomerulari jiġi assorbit mill-ġdid fil-parti oħxon axxendenti tal-linja ta 'Henle, iżda l-pass finali ta' assorbiment mill-ġdid iseħħ fit-tubuli konvoluti distali (DCT)8. Il-proċess tal-aħħar huwa regolat sewwa biex jaġġusta l-ammont ta 'riassorbiment għal livell xieraq għaż-żamma tal-omeostażi tal-manjeżju. Analiżi ġenomika ta’ mard konġenitali b’sintomi ta’ ipomanjeżmija wrew diversi molekuli ewlenin involuti f’dan il-proċessTRPM6, kodifikazzjonipotenzjal ta' riċettur temporanju relatat mal-melastatin 6(TRPM6), li hija mutata f'pazjenti b'ipomagnesemia reċessiva b'ipokalċemija sekondarja2,10.TRPM6jifforma kanal tal-joni Mg2 plus -permeabbli lokalizzat mal-membrana apikali taċ-ċelluli DCT u jimmedia t-teħid ta 'Mg2 plus mill-lumen1 tubulari. Molekula ewlenija oħra hija cyclin M2(CNNM2), u Mg2 plus trasportatur lokalizzat mal-membrana basolaterali taċ-ċelloli DCT12,13. Mutazzjonijiet Cnnm2 jikkawżaw ipomagnesemia dominanti familjali, li hija kkaratterizzata minn difetti fir-riassorbiment tal-manjeżju fil-kidneyl2. Ġrieden defiċjenti Cnmm2-juri sintomi simili ta' ipomanjeżemija b'ħela tal-manjeżju fil-kliewil4. Ir-rwol molekulari preċiż ta 'CNNM2 għadu kontroversjali, iżda bosta linji ta' evidenza jissuġġerixxu li jimmedja Mg2 flimkien ma 'effluss minn ċelluli DCT permezz tal-membrana basolaterali5, u b'hekk jikkontribwixxi għar-riassorbiment tal-manjeżju. Analiżi ulterjuri tal-ġrieden defiċjenti tas-Cnnm2-urew li dawn il-ġrieden għandhom ukoll aktar baxxi b'mod sinifikantidemmpressjonimilli kontroll ġrieden4. Madankollu, id-dettalji mekkanistiċi u l-involviment ta 'kanali/trasportaturi oħra Mg2 plus f'dandemmpressjoniregolament jibqa’ mhux magħruf.

Id-DCT renali huwa magħruf ukoll li għandu rwol kritikudemmpressjoniregolament minħabba li jassorbi mill-ġdid is-sodju b'mod sinifikanti u jirregola l-volum tal-fluwidu tal-ġisem6. Numru ta 'kanali/trasportaturi ta' katjoni, bħall-ko-trasportatur Na-Cl (NCC), kanal tas-sodju epiteljali (ENaC), u Na plus / H plus exchanger 2 (NHE2), huma espressi fil-membrana apikali DCT u xi wħud minn dawn il-proteini jimmedjaw Na flimkien mal-konsum fiċ-ċelloli DCT mill-lumen tubulari. Intraċellulari Na plus imbagħad jiġi estruż miċ-ċelloli permezz tal-membrana bażolaterali minn Na plus /K plus -ATPase biex iwettaq ir-riassorbiment tiegħu. Minbarra l-involviment dirett fir-regolazzjoni tal-volum tal-fluwidu tal-ġisem, id-DCT jinsab ħdejn il-macula densa, li tikkontrolla s-sekrezzjoni tar-renin, ormon bir-rwol prinċipali fl-orkestrazzjoni.pressjoni tad-demmregolament17,18. Billi jħossu l-livelli ta' Cl- fl-awrina, iċ-ċelluli tal-macula densa jistimulaw iċ-ċelluli juxta-glomerular (JG) fil-qrib biex inixxu renin.

F'dan ix-xogħol, aħna nwettqu analiżi tat-traskriptome bi kliewi ta' ġrieden defiċjenti ta' Cnnm{0}}ipotensivi. Insibu tnaqqis sinifikanti filTrpm6, li jqanqalna biex niġġeneraw speċifiċi għall-kliewiTrpm6-ġrieden defiċjenti. B'mod mhux mistenni, analiżi ta' din ir-razza tal-ġrieden jiżvelaw fenotip kwalitattivament differenti minn dak ta' Cnnm2-defiċjenti: it-telf tal-varjazzjoni ċirkadjana ta'demmpressjoni. Insibu wkoll li dan il-fenotip huwa kkawżat minn sekrezzjoni indebolita ta 'renin, apressjoni tad-demm-ormon li jgħolli l-livell tad-demm tiegħu normalment għoli matul il-fażi attiva.

bodybuilding cistanche

Riżultati

Downregolazzjoni ta'TRPM6 (potenzjal ta' riċettur temporanju relatat mal-melastatin 6)espressjoni fil-ġrieden Cnnm2-defiċjenti. Biex tesplora l-mekkaniżmu molekulari ta 'pressjoni tad-demmtnaqqis fil-ġrieden defiċjenti ta' Cnnm2-, għamilna analiżi tal-mikroarray tad-DNA biex ninvestigaw bidliet fl-espressjoni tal-ġeni fil-kliewi ta' Cnnm2f/il; Sitt 2-ġrieden Cre, nieqsa miż-żewġ alleli Cnnm2 fil-kidneyl4. Fost il-ġeni espressi b'mod differenzjali (Tabella 1), għażilna li janalizzaw Pvalb uTrpm6, li t-tnejn huma espressi fid-DCT919. Analiżi kwantitattivi PCR(qPCR) wrew liTrpm6l-espressjoni kienet imnaqqsa bl-istess mod fil-kliewi taż-żewġ Cnnm2fi; Sitt2-Cre u Cnnm2 plus / ġrieden. Peress li kemm Cnnm2 plus /A u Cnnm2fi/; Sitt2-ġrieden Cre kienu ipotensivi4, analizzatnaTRPM6 espressjoni f'aktar dettall. Analiżi ta 'immunoblotting ta' lisati tal-kliewi kkonfermaw tnaqqis sinifikanti ta 'TRPM6fil-livell tal-proteina b'defiċjenza ta' Cnnm2-, filwaqt li l-livelli ta 'NCC u NCC fosforilati (forma attiva) ma ġewx affettwati b'mod notevoli, l-espressjoni ta' CNNM2 ġiet ikkonfermata minn immunopreċipitazzjoni suċċessiva u analiżi immunoblotting). It-tnaqqis ta’TRPM6fil-kliewi ta' Cnnm2f/i; Sitt2-ġrieden Cre ġew ikkonfermati wkoll minn analiżi ta' immunofluworexxenza.

Eżaminajna wkollTRPM6espressjoni fil-ġrieden nieqsa mis-CNNM4, li juru wkoll sintomi ta' ipomanjeżmija20 iżda żdiedupressjoni tad-demm4. Analiżi ta 'immunoblotting u immunofluworexxenza indikaw liTRPM6l-espressjoni hija miżjuda fiċ-ċelloli DCT ta' ġrieden defiċjenti Cnnm4-, li jissuġġerixxi liTRPM6espressjoni hija assoċjata mill-qrib mapressjoni tad-demmvaluri, iżda mhuwiex direttament marbut mal-livelli tal-manjeżju fid-demm.

Regolament ta'TRPM6espressjoni minn Mg2 plus intraċellulari fiċ-ċelloli DCT. Biex tikkaratterizza l-mekkaniżmu molekulari ta 'TRPM6 downregulation fil-ġrieden defiċjenti Cnnm2-, użajna linja taċ-ċelluli derivati ​​mid-DCT MDCT21, li tesprimi b'mod dominanti Cnnm2 u moderatament Cnnm3 u Cnnm4 fost il-ġeni tal-familja Cnnm. Peress li CNNM2 u CNNM4 għandhom attività qawwija ta 'effluss Mg2 flimkien ma' CNNM3 filwaqt li CNNM3 m'għandha l-ebda attività ta 'effluss ta' Mg2 flimkien ma 'l5, wettaqna knockdown medjat minn RNA(siRNA) ta' interferenza żgħira ta 'jew Cnnm2, Cnnm4, jew it-tnejn. Cnnm2 knockdown miżjuda intraċellulari Mg plus livelli ([Mg plus ]), u knockdown simultanju ta 'Cnnm4 wasslu għall-elevazzjoni żgħira tal-medja [Mg2]; valur, li ma kienx statistikament sinifikanti. Wara eżaminajnaTrpm6espressjoni minn qPCR u sabet tnaqqis sinifikanti wara l-knockdown Cnnm2 u tnaqqis ferm akbar wara l-knockdown doppju ta 'Cnnm2 u Cnnm4. Għalhekk,Trpm6l-espressjoni tidher li hija regolata b'mod negattiv minn livelli intraċellulari ta' Mg2 plus, li hija konsistenti mar-rapporti preċedenti23. Biex neżaminaw direttament l-importanza ta 'Mg2 plus, aħna kkultivajna ċelluli MDCT f'midja b'diversi konċentrazzjonijiet ta' Mg2 plus .1h, it-tnaqqis tal-konċentrazzjoni extraċellulari Mg2 plus wassal għat-tnaqqis fil-livell intraċellulari Mg2 plus u ż-żieda ta 'Trpm6espressjoni, li tissuġġerixxi rwol soppressiv ta 'Mg2 plus .Fil-każ ta' ċelluli MDCT ta 'knockdown doppju (Cnnm2/Cnnm4),Trpm6l-espressjoni kienet mrażżna bi tnaqqis ta' Mg2 plus

flimkien ma' konċentrazzjonijiet 'l isfel għal 0.2 mm, iżda aktar tnaqqis ikkanċella l-effett soppressiv; kemm intraċellulari Mg2 plus uTrpm6il-livelli ma kinux differenti b'mod sinifikanti minn ċelluli ta' kontroll trasfettati bis-siRNA kemm f'kundizzjonijiet 0.1 kif ukoll 0.02 mM. Dawn ir-riżultati jindikaw mekkaniżmu regolatorju Mg2 plus -dipendenti ta 'Trpm6espressjoni, li tispjega l-Trpm6downregulation fil-kliewi ta' ġrieden defiċjenti Cnnm2-.

Tfixkil kondizzjonali ta'Trpm6 (potenzjal ta' riċettur temporanju relatat mal-melastatin 6)fil-kliewi. Sussegwentement, immiraw li niġġenerawTrpm6-ġrieden defiċjenti biex jinvestigaw aktar l-importanza taTRPM6fir-regolament ta’pressjoni tad-demm. Aħna użajna klonu taċ-ċelluli staminali embrijoniċi (ES) li ġġorr rikombinantiTrpm6alleli (Trpm6-) li fiha sekwenza ta 'aċċettazzjoni ta' splice, li tisforza t-twaqqigħ prematur ta 'l-mRNA u li jirriżulta f'mRNA maqtugħ wara exon 6. Ġrieden eterozigoti kimeriċi nkisbu b'injezzjoni ta' blastoċisti taċ-ċelluli ES u r-rikombinazzjoni ġiet ikkonfermata minn PCR. Aħna intercrossed dawnTrpm6plus /- ġrieden, imma leTrpm6-/--off_r-rebbiegħa nkisbu. Dan ir-riżultat huwa konsistenti mar-rapporti preċedenti li juru l-letalità embrijonika fiTrpm6-ġrieden defiċjenti24,25

Għalhekk, wettaqna tfixkil kondizzjonali speċifiku għall-kliewi taTrpm6bl-użu ta' Six2-Cre, li jippermetti l-espressjoni effiċjenti u speċifika ta' Cre recombinase mdewba bil-GFP fil-kliewi embrijoniku.Trpm6fl/, Sitt2-ġrieden Cre (speċifiċi għall-kliewiTrpm6-ġrieden defiċjenti) twieldu fil-proporzjon Mendelian mistenni. Biex tiddetermina l-espressjoni taTRPM6, għamilna analiżi immunoblotting bl-użu ta’ anti-TRPM6antikorp.TRPM6il-livelli tal-proteini tnaqqsu ħafna fil-kliewi taTrpm6fl/fl, Ġrieden Six2-Cre, iżda l-ebda tibdil sinifikanti ma ġie osservat f'organi oħra. L-analiżi tat-tbajja 'l-immunofluworexxenza wkoll ma wrew l-ebda espressjoni ta'TRPM6f'ċelluli DCT pożittivi għall-NCC. Aħna osservajna l-ebda sinifikantiTRPM6-sinjal pożittiv f'aktar minn 100 gruppi bħal dawn ta 'ċelluli pożittivi NCC, li jissuġġerixxi liTRPM6l-espressjoni hija kważi kompletament mrażżna fiċ-ċelloli DCT ta 'Trpmfi/; Sitt2-ġrieden Cre. Dawn ir-riżultati jikkonfermaw il-ġenerazzjoni ta 'suċċess ta' speċifiċi għall-kliewiTrpm6-ġrieden defiċjenti.

L-ewwel eżaminajna l-effett tal-kliewi speċifiċiTrpm6-defiċjenza fuq l-omeostażi tal-manjeżju. Żammna ġrieden f'gaġeġ metaboliċi u ġbarna kampjuni ta 'awrina u serum, li mbagħad ġew soġġetti għal kwantifikazzjoni kolorimetrika tal-livelli tal-manjeżju bl-użu ta' Xylidyl Blue-I. Il-livelli tal-manjeżju fis-serum kienu aktar baxxi b'mod sinifikanti fiTrpm6l/l; Sitt2-ġrieden Cre meta mqabbla ma' dawk fil-kontrollTrpm6plus / plus ; Sitt2-ġrieden Cre, filwaqt li l-livelli tal-manjeżju fl-awrina kienu ogħla. Aħna wettaqna wkoll analiżi tal-ispettroskopija tal-emissjoni tal-plażma akkoppjata b'mod induttiv (ICP-ES) biex tkejjel diversi elementi ewlenin tal-metall fis-serum u sibna li l-livelli tal-manjeżju biss kienu affettwati b'mod sinifikanti f'Trpmd/; Sitt2-ġrieden Cre. Dawn ir-riżultati jindikaw b'mod ċar li ġrieden defiċjenti ta' Trpm6-kliewi għandhom ipomanjeżemija b'ħela tal-manjeżju renali, kif osservat f'Cnnm2-defiċjenti ta' micel4 speċifiċi għall-kliewi.

Nuqqas ta 'varjazzjoni ċirkadjana ta'demmpressjoniu l-attività tar-renin. Sussegwentement, aħna suġġettiTrpm6i/l; Sitt2-ġrieden Cre għaldemmpressjonikejl bl-użu tar-radjutelemetrija. Sistolika u dijastolikapressjoni tad-demmvaluri kienu t-tnejn b'mod sinifikanti aktar baxxi fiTrpm6l/; Sitt2-ġrieden Cre milli fil-ġrieden ta' kontroll. Ta 'min jinnota li l-varjazzjoni ċirkadjana tas-soltu ta'pressjoni tad-demm, b'valuri għoljin matul il-perjodu skur u valuri baxxi matul il-perjodu tad-dawl fil-ġrieden, ma kienx osservat fiTrpm6f/l; Sitt2-ġrieden Cre. Biex neżaminaw jekk ir-ritmu ċirkadjan jipproċedix b'mod normali, użajna radjotelemetrija biex tkejjel l-attività lokomottiva tal-ġrieden u kkonfermajna varjazzjoni ċirkadjana ċara ħafna f'Trpm6l/; Sitt {{0}}ġrieden Cre. Aħna eżaminajna wkoll il-livelli tad-demm ta 'vasopressin (AVP) u livelli ta' mRNA ta 'żewġ ġeni tal-arloġġ Bmall u Per2 fil-moħħ u fil-kliewi; kollha huma magħrufa li juru varjazzjoni ċirkadjana tipika27,28. Aħna analizzajna f'sitt punti ta 'żmien differenti (f'ħinijiet zeitgeber 0,4,8 (ZT) għall-perjodu tad-dawl u f'12,16,20 ZT għall-perjodu skur). Il-ġrieden ta’ kontroll juru xejriet ċirkadjani ċari tal-espressjoni tagħhom kif irrappurtat qabel28, u għal darb’oħra, ma sibna l-ebda anormalitajiet sinifikanti fiTrpm6/il; Sitt2-ġrieden Cre. Aħna vverifikajna wkoll il-livell ta' espressjoni ta' Trpm7, li jikkodifika kanal Mg2 plus -permeabbli relatat mill-qrib ma'TRPM6, fil-kliewi. Il-mudelli tal-espressjoni kienu simili ħafna fit-tnejnTrpm6plus / plus ; Sitt2-Cre u Trpm6f/; Sitt2-ġrieden Cre, u ma wrewx xejriet ċirkadjani ċari. B'mod kollettiv, nikkonkludu li r-ritmu ċirkadjan jipproċedi normalment fiTrpm6i; Sitt2-ġrieden Cre. Ġie kkunsidrat lidemmpressjonielevazzjoni matul il-perjodu attiv (il-perjodu skur għall-ġrieden u l-perjodu tad-dawl għall-bnedmin) kemm fil-bnedmin kif ukoll fil-ġrieden isseħħ b'reazzjoni għal żieda fis-sekrezzjoni tar-renin fid-demm2. Aħna kejlu l-attività tar-renin f'kampjuni tad-demm miġbura fis-sitt punti ta 'żmien differenti deskritti hawn fuq. Żieda ċara fl-attività tar-renin tad-demm kienet osservata matul il-perjodi mudlama f’kampjuni minn ġrieden ta’ kontroll, iżda ma ġiet osservata l-ebda żieda sinifikanti f’kampjuni minn dawk ta’Trpm6/lSitta2-ġrieden Cre. Aħna kejlu wkoll il-livell tad-demm ta 'noradrenaline, li r-rilaxx tiegħu huwa magħruf li huwa stimulat mill-attivazzjoni tas-sistema renin-angiotensin29,30. Kif mistenni, il-varjazzjoni ċirkadjana tagħhom sparixxa wkoll fiTrpm6, Sitt2-ġrieden Cre. Sadanittant, il-livell tal-proteina ta 'angiotensinogen tad-demm (AGT), molekula oħra li tillimita r-rata għall-attivazzjoni tas-sistema renin-angiotensin fil-ġrieden31, ma kienx affettwat minnTrpm6 defiċjenza. Ir-riżultati jissuġġerixxu li l-varjazzjoni ċirkadjana indebolita tar-renin hija importanti għat-telf tal-varjazzjoni ċirkadjana ta’demmpressjoniminnTrpm6-defiċjenza.

Il-prossimità taTRPM6-ċelluli li jesprimu għal ċelluli li jxerrdu renin. Renin hija espressa fi u mnixxija miċ-ċelloli JG fil-kliewi17,18. Iċ-ċelloli JG huma f'kuntatt dirett mal-macula densa, li tinsab ħdejn id-DCT u tistimula s-sekrezzjoni ta 'renin miċ-ċelloli JG b'rispons għat-tnaqqis tal-livelli ta' Cl fl-awrina18. Tbajja ta' immunofluworexxenza għal renin u neuronal nitric oxide synthase(nNOS), markatur tal-macula densa, ma wriet l-ebda anormalitajiet la fil-mudell jew fl-intensità ta' sinjali pożittivi osservati ħdejn il-glomeruli f'Trpm6f/; Sitt2-ġrieden Cre. Għalhekk, iċ-ċelloli involuti direttament fis-sekrezzjoni tar-renin u r-regolamentazzjoni tagħha ma jidhirx li huma affettwati b’mod notevoli minnTrpm6defiċjenza. KifTRPM6hija ko-espressa ma 'NCC fid-DCT, aħna jmiss eżaminajna r-relazzjoni spazjali bejnTRPM6Ċelloli li jesprimu /NCC (DCT) u l-macula densa jew ċelluli JG. Immaġini konfokali ta 'sezzjonijiet DCT sagittali wrew koinċidenza kważi sħiħa ta'TRPM6u sinjali NCC matul id-DCT. Imbagħad imtebbgħin għal nNOS u NCC, u sibna li ż-żoni pożittivi għal nNOS u NCC huma konnessi, mingħajr ebda sovrapożizzjoni tas-sinjali. Barra minn hekk, tbajja doppja għal renin uTRPM6/NCC żvelat li xi wħudTRPM6Iċ-ċelloli li jesprimu /NCC huma qrib iċ-ċelloli JG li jesprimu renin, li jissuġġerixxi liTRPM6Ċelloli li jesprimu /NCC, kif ukoll il-macula densa, jista 'jkollhom impatt sinifikanti fuq is-sekrezzjoni tar-renin.

Indeboliment sekrezzjoni tar-renin minnTrpm6 (potenzjal ta' riċettur temporanju relatat mal-melastatin 6)defiċjenza. B'mod ġenerali, is-sistema nervuża awtonomika għandha rwol kruċjali fl-orkestrazzjoni tal-progressjoni tar-ritmu ċirkadjan. Is-sekrezzjoni tar-renin miċ-ċelluli JG matul il-perjodu attiv huwa maħsub li jiġi stimulat minn noradrenalin li joħroġ minn newroni simpatetiċi renali32. Biex tinvestiga direttament l-effett ta 'tali stimulazzjoni fuq is-sekrezzjoni tar-renin, ħejjejna flieli tal-kliewi u stimulajnahom b'isoproterenol, agonist -adrenoreceptor(AR). Ir-riżultati wrew tnaqqis ċar ħafna fis-sinjal pożittiv tar-renin li jibqa 'fil-porzjon wara stimulazzjoni ta' isoproterenol għal 30 min. Analiżi kwantitattivi wrew li l-persentaġġ ta 'glomeruli mdawra b'sinjal pożittiv ta' renin naqas minn madwar 80 fil-mija għal 30 fil-mija wara stimulazzjoni ta 'isoproterenol, li jindika l-okkorrenza ta' sekrezzjoni massiva ta 'renin. Madankollu, aħna ma osservajnax effett sinifikanti tal-istimulazzjoni tal-isoproterenol fuq is-sinjal tar-renin fil-flieli tal-kliewi minnTrpm6/1; Sitt2-ġrieden Cre. Biex tikkonferma r-riżultat, kejlna wkoll l-attività tar-renin tad-demm wara l-amministrazzjoni ta 'isoproterenol. Ir-riżultati juru li l-elevazzjoni sinifikanti tal-attività tar-renin tad-demm kienet osservata biss fil-ġrieden ta 'kontroll, filwaqt li ż-żieda tar-rata tal-qalb kienet osservata b'mod komuni fiż-żewġ razez. Dawn ir-riżultati jimplikaw li ċ-ċelloli JG li jxerrdu renin ma jistgħux jirrispondu għall-istimulazzjoni minn newroni simpatetiċi renali, konsistenti mal-għajbien taż-żieda ċirkadjana f'demmpressjoniu attività renin filTrpm6l/fl; Sitt2-ġrieden Cre.

Iċ-ċelluli JG jistgħu wkoll jiġu stimulati biex inixxu renin bi tweġiba għall-prostaglandini, fosthom il-prostaglandin E2(PGE2) huwa meqjus bħala l-aktar sinifikanti peress li huwa fiżjoloġikament inixxu miċ-ċelluli tal-macula densa meta l-livelli Cl- urinarja jonqsu17,18. Barra minn hekk, huwa magħruf ukoll li PGE, it-trattament tal-flieli tal-kliewi jista 'jistimula s-sekrezzjoni tar-renin b'mod effiċjenti33. L-istimulazzjoni taċ-ċelluli JG b'PGE2 u isoproterenol komunement jattiva l-produzzjoni tal-cAMP, li fl-aħħar mill-aħħar tikkawża sekrezzjoni ta 'renin. Għalhekk, aħna ttestjaw ukoll l-effett tal-PGE, u l-analogu cAMP permeabbli mill-membrana, dibutylyl-cAMP(db-cAMP).PGE2 u db-cAMP stimulaw b'suċċess is-sekrezzjoni tar-renin fi flieli tal-kliewi minn Trpmdi/A, Sitta2- Cre ġrieden, u ġrieden kontroll. Dan jindika liTrpm6 defiċjenza ma tneħħix il-makkinarju ġenerali involut fis-sensazzjoni ta 'indikazzjonijiet esterni, it-trażmissjoni ta' sinjali intraċellulari, u l-eżekuzzjoni ta 'sekrezzjoni ta' renin, iżda taffettwa speċifikament ir-rispons għal -AR.

Tnaqqis espressjoni -AR fiċ-ċelloli JG minnTrpm6 (potenzjal ta' riċettur temporanju relatat mal-melastatin 6)defiċjenza. Indeboliment tar-rispons tar-riċettur -ARTrpm6l/l; Sitt 2-ġrieden Cre wassluna biex ninvestigaw l-istatus tal-espressjoni tar-riċettur -AR, u għalhekk wettaqna immunofluworexxenza ta' 1-AR, is-sottotip ewlieni -AR espress fiċ-ċelloli JG34. Kif irrappurtat preċedentement34, sibna l-mudell tat-tbajja bħal band f'sezzjonijiet renali kemm tal-ġrieden ta' kontroll kif ukoll ta' Trpmdi/l, Six2-Cre. Huwa magħruf li 1-AR hija espressa b'mod qawwi kemm fil-vini tad-demm kif ukoll fiċ-ċelloli JG34, u b'mod konsistenti, iċ-ċelluli 1-AR-pożittivi fl-aħħar tat-tbajja 'bħal medda fil-kliewi tal-ġurdien ta' kontroll kienu wkoll pożittivi għat-tbajja’ tar-renin (muri b’vleġġa). B'kuntrast, it-tebgħa ta 'Trpm6l/fl; Sitt2-kliewi tal-ġurdien Cre wrew numru iżgħar ta' 1-AR/renin doppju ċelluli pożittivi, li jissuġġerixxu li 1-espressjoni AR naqset fiċ-ċelloli JG. Biex nikkorrobora din is-sejba, iżolajna ċelluli JG billi nużaw il-metodu ta 'ċentrifugazzjoni tal-gradjent tad-densità Percoll skont ir-rapport preċedenti35. Analiżi ta' immunoblotting wrew li ċ-ċelloli JG pożittivi għar-renin huma arrikkit fil-frazzjoni tal-faxxa 3, li hija konsistenti mar-rapport35 tagħhom, u 1-espressjoni AR f'din il-frazzjoni tal-faxxa 3 kienet speċifikament ħafna aktar baxxa f'Trpmdi/1; Sitt2-ġrieden Cre. Meħuda flimkien, sibna liTrpm6defiċjenza tnaqqas il-livell ta' espressjoni ta' 1-AR fiċ-ċelloli JG, li huwa konsistenti mas-sekrezzjoni indebolita tar-renin.

L-effett tal-intervent artifiċjali fuq iċ-ċirkadjandemmpressjonivarjazzjoni. Fis-sett finali ta 'esperimenti, ittestjajna l-effett ta' diversi interventi fuq ċirkadjandemmpressjonivarjazzjoni. Biex tikkonferma l-importanza tar-renin, amministrajna inibitur tar-renin aliskiren36 klinikament disponibbli lil ġrieden tat-tip selvaġġ. BħalTrpm6l-ablazzjoni, l-amministrazzjoni ta’ aliskiren bl-impjantazzjoni kirurġika ta’ minipompa osmotika soppressa b’mod sinifikanti ċ-ċirkadjandemmpressjonivarjazzjoni. Sussegwentement, wettaqna operazzjonijiet ta 'denervazzjoni renali, peress li l-attivazzjoni ta' -AR fuq ċelluli JG permezz tas-sistema nervuża simpatetika hija l-mogħdija ewlenija biex tistimula s-sekrezzjoni tar-renin b'mod ċirkadjan2. Għal darb'oħra, sibna li l-intervent irażżan il-demmpressjonivarjazzjoni. Dawn ir-riżultati jaqblu mal-mudell tagħna li difetti fir-rispons -AR u s-sekrezzjoni tar-renin huma responsabbli għat-telf ta 'pressjoni tad-demmvarjazzjoni fi Trpmdl/l; Sitt2-ġrieden Cre.

Aħna ttestjajna wkoll l-effett li ngħollu l-kontenut tal-manjeżju tad-dieta. Għal dan il-għan, ġrieden tat-tip selvaġġ ġew mitmugħa dieta b'ħafna Mg li kien fiha 0.6 fil-mija (dieta normali:0.3 fil-mija manjesju) għal xahar. Kif mistenni, dawk il-ġrieden wrew livelli elevati ta' Mg fid-demm. Aħna mbagħad iċċekkjaw il-livell ta 'espressjoni ta'TRPM6fid-DCT; naqas drastikament bl-għalf ta 'dieta għolja Mg, u l-firxa ta' naqasTRPM6l-espressjoni kienet akbar mill-ablazzjoni tas-Cnnm2 renali. Meta kellna l-pressjoni tad-demmf'dawn il-ġrieden, sibna li l-ġrieden mitmugħa b'dieta għolja ta 'Mg wrew sinifikament iżgħardemmpressjonivarjazzjoni minnTrpm6-defiċjenti ġrieden, li hija konsistenti mal-kunċett tagħna li renaliTRPM6huwa importanti għal ċirkadjanpressjoni tad-demmvarjazzjoni.

Tabella 1 Ġeni li kienu regolati 'l fuq jew 'l isfel fil-kliewi ta' Cnnm2flfl/flfl; Sitt2-ġrieden Cre.

Diskussjoni

F'dan l-istudju, aħna wrejna l-importanza ta 'TRPM6 (potenzjal ta' riċettur temporanju relatat mal-melastatin 6)fir-regolament ta’pressjoni tad-demm. B'mod partikolari, nuru għajbien kważi komplet tal-varjazzjoni ċirkadjana ta 'pressjoni tad-demmfil-kliewi speċifiċiTrpm6-ġrieden defiċjenti. Sibna wkoll li s-sekrezzjoni ta’ renin, ormon ewlieni li jordna l-pressjoni tad-demm, ġiet imneħħija b’mod sever f’Trpm6-ġrieden defiċjenti, li hija konsistenti mal-osservatipressjoni tad-demmfenotip. Diversi rapporti wrew li TRPM7, kanal ieħor Mg2 plus -permeabbli simili mill-qrib għalTRPM6, taffettwa wkoll il-pressjoni tad-demm37,38. TRPM7 jipprevjeni ż-żieda ta 'pressjoni tad-demmmal-għoti ta' Angiotensin II billi jrażżan ir-rispons taċ-ċelluli endoteljali vaskulari għal Angiotensin II37. Għall-kuntrarju, reċentement ġie rrappurtat li TRPM7 jiffaċilita wkoll l-elevazzjoni ta 'pressjoni tad-demmmal-għoti tal-leptin billi timmedja Mg2 flimkien ma' influss fiċ-ċelloli tal-ġisem tal-karotidi38. Għalhekk, ir-rwol ta 'TRPM7 filpressjoni tad-demmir-regolamentazzjoni hija ambigwa. Madankollu, peress li l-livell ta 'espressjoni ta' TRPM7 fil-kliewi ma kienx affettwat mill-kliewiTrpm6ablazzjoni (Fig. 5 Supplimentari), jidher li TRPM7 mhuwiex involut direttament fil-fenotipi osservati f'dan l-istudju.

Kif osservat fil-ġrieden defiċjenti Cnnm2-,pressjoni tad-demmvaluri tnaqqsu fiTrpm6-ġrieden defiċjenti(Fig.2)14. Madankollu, għandu jiġi nnutat li kien hemm differenza ċara bejn dawn il-ġrieden. Tfixkil Cnnm2 ġeneralment imnaqqaspressjoni tad-demm, iżda l-varjazzjoni ċirkadjana kienet għadha osservata b'mod ċar. B'kuntrast, din il-varjazzjoni sparixxa fiTrpm6-ġrieden defiċjenti. Differenza kwalitattiva bħal din hija konsistenti wkoll mal-osservazzjoni tagħna li l-varjazzjoni ċirkadjana tar-renin ġiet ippreservata fi ġrieden defiċjenti Cnnm 2- (Fig.9 Supplimentari). Għandu jiġi nnutat li kemm CNNM2 kif ukollTRPM6huma meqjusa li huma importanti għar-riassorbiment renali Mg2 flimkien ma 'medjazzjoni tal-Vettorial Mg2 plus trasport permezz tad-DCT, u tabilħaqq, ġrieden defiċjenti fi kwalunkwe ġene esibiti renali Mg2 plus -wasting fenotip identiċi (Fig. 1 u ref. 39). Id-differenza kwalitattiva tapressjoni tad-demmfenotip bejn Cnnm2-uTrpm6-ġrieden defiċjenti jissuġġerixxi li Mg2 flimkien ma 'trasport fid-DCT, il-funzjoni komuni taż-żewġ molekuli, mhix involuta direttament fil-varjazzjoni ċirkadjana ta'pressjoni tad-demmu s-sekrezzjoni tar-renin, li jissuġġerixxi li r-rwol indipendenti ta' CNNM2-TRPM6hija l-bażi ta' dawn il-fenotipi intriganti.

Diversi mekkaniżmi jaħdmu biex jistimulaw is-sekrezzjoni tar-renin miċ-ċelloli JG biex iżommupressjoni tad-demm. Fosthom, l-input min-newroni simpatetiċi renali huwa meqjus li għandu r-rwol prinċipali fl-żiedapressjoni tad-demmmatul il-perjodu attiv tal-varjazzjoni ċirkadjana32. Dawn in-newroni inixxu n-noradrenalina, li torbot ma' u jattiva -AR fuq iċ-ċelloli JG biex jistimulaw il-produzzjoni tal-cAMP, li fl-aħħar iwasslu għal sekrezzjoni ta' renin1732. Fl-esperimenti tagħna bl-użu flieli tal-kliewi miksuba minnTrpm6-ġrieden defiċjenti, stimulazzjoni b'isoproterenol, agonist -AR, ma wrew l-ebda effett fuq is-sekrezzjoni ta 'renin, filwaqt li stimulazzjoni b'PGE2 jew db-cAMP żiedet is-sekrezzjoni ta' renin b'mod effiċjenti (Fig. 4). PGE2 jiġi mnixxi mill-macula densa bi tweġiba għal livelli baxxi ta 'Cl- urinarju u jattiva riċetturi EP2 u EP4 fuq ċelluli JG, li, bħall-attivazzjoni -AR, fl-aħħar jistimula l-produzzjoni ta' cAMP40. Għalhekk, dawn ir-riżultati jimplikaw li s-sinjalar -AR jiġi mħassar b'mod selettiv fiċ-ċelloli JG ta 'Trpm6-ġrieden defiċjenti, mingħajr ma jaffettwaw il-mogħdija ta 'sinjalazzjoni medjata minn cAMP downstream. B'mod konsistenti, l-immunofluworexxenza tas-sezzjonijiet tal-kliewi tal-ġrieden u l-immunoblotting ta 'ċelluli JG iżolati wrew li l-espressjoni -AR naqset b'mod sinifikanti fiċ-ċelluli JG ta'Trpm6-ġrieden defiċjenti(Fig. 5). Tali espressjoni mnaqqsa -AR għandha tagħmel iċ-ċelluli JG ma jistgħux inixxu renin bi tweġiba għall-istimulazzjoni tan-nervituri simpatetiċi matul il-perjodu attiv, u b'hekk telimina l-varjazzjoni ċirkadjana tal-livell tar-renin fid-demm upressjoni tad-demm. Għandu jiġi nnutat li hemm studju li juża ġrieden knockout 1/ 2-AR, li wera tnaqqis ċirkadjanpressjoni tad-demmvarjazzjoni kifTrpm6-ġrieden defiċjenti41. Huma attribwha għall-attività lokomotriċi mnaqqsa, iżda jibqa’ possibbli li l-varjazzjoni ċirkadjana mnaqqsa tal-attività tar-renin tikkontribwixxi għal varjazzjoni ċirkadjana mnaqqsa ta’pressjoni tad-demme. Alternattivament, l-isfond mhux tas-soltu tal-ġrieden tagħhom (isfond imħallat ta 'C57BL6/J, 129, u VFB; użajna sfond C57BL6/ pur) jista' jaħbi l-effett ta '-AR fuqpressjoni tad-demmvarjazzjoni; sfondi ġenetiċi huma kritiċi għal ċirkadjanpressjoni tad-demmvarjazzjoni42.

bodybuilding cistanche

Kif it-telf taTRPM6 (potenzjal ta' riċettur temporanju relatat mal-melastatin 6)fiċ-ċelloli DCT twassal għat-tnaqqis -AR espressjoni fiċ-ċelloli JG baqgħet elużiva. Esperimenti li jużaw tipi oħra ta 'ċelluli wrew li l-espressjoni -AR hija regolata minn diversi molekuli magħrufa li jimmedjaw is-sinjalar interċellulari: Żieda ta' glukokortikojdi mal-mezz tal-kultura tal-linja taċ-ċelluli derivati ​​minn vas deferens DDT1 MF-2 iżid l-espressjoni -AR43. Ukoll, ġie rrappurtat li l-ossidu nitriku (NO) soppressa d-degradazzjoni -AR fiċ-ċelloli tal-qalb permezz ta 'S-nitrosylation ta' GRK24. Fost dawn il-molekuli, ta 'min jinnota li NO jinħeles miċ-ċelluli tal-macula densa tal-kliewi, li jistimula ċelluli JG b'mod parakrini biex iżid is-sekrezzjoni tar-renin45. Filwaqt li l-espressjoni ta 'nNOS, l-enzima li tipproduċi NO fil-kliewi, hija ristretta għal ċelluli macula densa, huma f'kuntatt dirett ma' ċelluli DCT, is-segment li jmiss tat-tubulel6 renali. Għalhekk, huwa possibbli liTrpm6-defiċjenza fiċ-ċelluli DCT twassal għat-tnaqqis fl-espressjoni -AR fiċ-ċelloli JG billi taffettwa l-produzzjoni jew ir-rilaxx ta 'NO miċ-ċelluli macula densa li jmissu magħhom.

Huwa magħruf li ċ-ċelluli JG jikkomunikaw ukoll ma 'ċelluli oħra billi jiffurmaw gap junctions ma' ċelluli tal-madwar, bħal ċelluli mezanġjali, u jirċievu Ca2 plus biex irażżnu s-sekrezzjoni tar-renin7. Għalkemm iċ-ċelluli JG u ċ-ċelluli DCT ma jikkuntattjawx direttament ma 'xulxin, għadhom jinsabu fil-qrib (ref.46 u Fig.3)u huwa possibbli li dawn iċ-ċelluli jużaw komunikazzjonijiet ta' junctional gap permezz ta 'ċelluli li jintervjenu, bħal ċelluli mesanġjali; it-tliet tipi taċ-ċelluli kollha rrappurtati jesprimu Cx3747,48, isoforma ta 'connexin li oligomerizes u tikkostitwixxi gap junctions. Analiżi ulterjuri tista 'tidentifika l-molekula u r-rotta responsabbli għas-sinjalar interċellulari bejn iċ-ċelloli DCT u JG, li huwa importanti biex jiġi żvelat il-mekkaniżmu ġenerali ta' ċirkadjan imfixkel.pressjoni tad-demmvarjazzjoni minnTrpm6-defiċjenza.

FilTrpm6-ġrieden defiċjenti, il-varjazzjoni ċirkadjana tal-livelli tad-demm ta 'mhux biss renin iżda wkoll noradrenaline sparixxew. L-attivazzjoni tas-sistema renin-angiotensin tistimula r-rilaxx ta 'noradrenaline fid-demm29,30, u għalhekk, jidher raġonevoli li l-effett ta'Trpm6 (potenzjal ta' riċettur temporanju relatat mal-melastatin 6)l-ablazzjoni fuq il-livelli ta' renin u noradrenaline fid-demm kienet simili. Peress li n-noradrenaline jaġixxi wkoll fuq -AR taċ-ċelloli JG biex jippromwovi s-sekrezzjoni tar-renin, iż-żewġ molekuli huma preżunti li jikkostitwixxu ċirku ta 'rispons pożittiv, li jistimulaw is-sekrezzjoni ta' xulxin. Madankollu, għandu jiġi nnutat li r-riżultati ta 'esperimenti ta' amministrazzjoni ta 'isoproterenol juru b'mod espliċitu d-difett fis-sekrezzjoni tar-renin (Fig.4), u għalhekk jidher li huwa l-kawża primarja tat-telf tal-varjazzjoni ċirkadjana kemm tar-renin kif ukoll tan-noradrenalin.

S'issa, ġew żviluppati u użati varjetà ta 'mediċini effettivi biex jikkuraw pazjenti bi pressjoni għolja. Madankollu, numru sinifikanti ta 'pazjenti juru reżistenza għat-trattamenti konvenzjonali li jużaw taħlita ta' mediċini anti-ipertensivi ewlenin ta 'mekkaniżmi funzjonali differenti4. Denervazzjoni kirurġika ta 'newroni simpatetiċi renali bl-użu ta' kateters endovaskulari twettqet fuq bażi ta 'prova biex tikkura pressjoni għolja reżistenti bħal din50. L-effettività prattika tagħha fit-titjibpressjoni tad-demmkontroll kien kontroversjali51,52, iżda studji ppubblikati reċentement urew tnaqqis sinifikanti filpressjoni tad-demmmeta mqabbla ma' kontrolli finti53,54. Hemm ukoll riżultati mħallta dwar l-effett tad-denervazzjoni tal-kliewi fuq il-varjazzjoni ċirkadjana tapressjoni tad-demm. Xi rapporti wrew li l-estent tapressjoni tad-demmtnaqqis mid-denervazzjoni tal-kliewi kien akbar matul il-perjodi attivi53, iżda oħrajn irrappurtaw l-ebda bidla fil-varjazzjoni ċirkadjana ta’pressjoni tad-demm55,56. Fl-analiżi bl-użu ta’ annimali tal-laboratorju, l-operazzjonijiet tagħna ta’ denervazzjoni tal-kliewi kontra l-ġrieden naqqsu l-varjazzjoni ċirkadjana ta’pressjoni tad-demm(Fig.6). Operazzjonijiet simili saru wkoll kontra l-firien, iżda anke l-firien tat-tip selvaġġ ta 'kontroll ma juru kważi l-ebda ċirkadjanpressjoni tad-demmvarjazzjoni fl-ewwel post57,58, li jagħmilha diffiċli biex jiġi evalwat l-effett tal-operazzjoni. Huma meħtieġa aktar studji biex jagħmlu ċar l-impatt tad-denervazzjoni tal-kliewi fuq iċ-ċirkadjanpressjoni tad-demmvarjazzjoni, li tgħinna wkoll nifhmu l-mekkaniżmu aktar dettaljat tapressjoni tad-demmdisregolazzjoni minnTrpm6-defiċjenza.

Kejl telemetriku ta'pressjoni tad-demm, ir-rata tal-qalb, u l-attività lokomotriċi. Kejl telemetriku ta'pressjoni tad-demmsaru kif ġej4.Pressjoni tad-demmtransducers (TAl1PA-C10, Data Sciences International) ġew imdaħħla kirurġikament fl-arterja karotide komuni tax-xellug ta' 2- sa 3-ġrieden ta' xahar taħt anestesija (b'amministrazzjoni intraperitoneali ta' 0.3 mg/ kg medetomidine, 4 mg/kg midazolam, u 5 mg/kg butorphanol). Wara 3 ġimgħat ta 'rkupru, sistolika u dijastolikapressjoni tad-demmil-valuri ġew irreġistrati b'kampjun ta' 2-min skedat kull 60 minuta bl-użu tas-softwer Dataquest ART (Data Sciences International). Inkisbu rekords għal mill-inqas ħamest ijiem konsekuttivi, u l-medji tal-kejl meħuda fl-istess ħin kull jum ġew determinati għal kull ġurdien u użati għal aktar analiżi statistiċi, ħlief għal Fig. 4 Supplimentari. Ibbażat fuq Nakamori et al.68, renali id-denervazzjoni saret ġimagħtejn qabel ma ddaħħalpressjoni tad-demmtransducers kif ġej. Il-kliewi ġew esposti b'inċiżjoni addominali u t-tessut konnettiv madwar il-vini tal-kliewi ġie dissekjat. Imbagħad, il-bastimenti tal-kliewi ġew mgħaddsa f'95 fil-mija etanol għal 2 min u wara, f'PBS għal 2 min. L-operazzjoni simulata saret bl-użu tal-proċedura ekwivalenti mingħajr immersjoni ta 'l-etanol. Aliskiren ingħata 25 mg/kg/kuljum billi daħħal taħt il-ġilda pompa osmotika (1004, ALZET), u r-reġistrazzjoni bdiet mill-ġurnata wara l-introduzzjoni tal-pompa. Għas-supplimentazzjoni tal-manjeżju, il-ġrieden ġew mitmugħa dieta arrikkita bil-manjeżju li fiha 0.6 fil-mija tal-manjeżju (CLEA Japan) għal xahar qabelpressjoni tad-demmkejl.

Ir-rata tal-qalb ġiet imkejla bl-istess sistema ta' radjotelemetrija, ħlief li r-reġistrazzjoni twettqet b'kampjun ta' 30-s skedat kull minuta, u ntuża kejl wieħed għal aktar analiżi.

L-attivitajiet tal-lokomozzjoni ġew evalwati bl-użu tal-istess sistema tar-radjotelemetrija, billi ssorveljaw il-bidliet fis-saħħa tas-sinjal mit-transducer minħabba l-lokomozzjoni tal-annimal. F'dan il-każ, transducers ġew imdaħħla kirurġikament fl-ispazju taħt il-ġilda fil-ġenb tal-lemin. Ir-reġistrazzjonijiet saru bl-istess intervalli ta’ ħin kif deskritt hawn fuq.

bodybuilding cistanche

Referenzi

1. Giles, TDCirkadian ritmu tapressjoni tad-demmu r-relazzjoni ma’ avvenimenti kardjovaskulari.J. Ipertens. 24, S11-S16 (2006).

2. Smolensky, MH, Portaluppi, F. & Hermida, RC inPressjoni tad-demmMonitoraġġ fil-Mediċina Kardjovaskulari u Terapewtika, 3rd EDT.(eds White, WB)Parti II, Ch.6, 105-128(Springer,2016).

3. Witteman, JCet al. Studju prospettiv ta 'fatturi nutrizzjonali u pressjoni għolja fost in-nisa Amerikani. Ċirkolazzjoni 80,1320-1327(1989).

4. Ascherio, A.et al. Studju prospettiv ta 'fatturi nutrittivi u pressjoni għolja fost l-irġiel Amerikani. Ċirkolazzjoni 86,1475-1484(1992).

5. Ascherio, A.et al. Studju prospettiv ta' fatturi nutrittivi,pressjoni tad-demm, u pressjoni għolja fost in-nisa Amerikani. Pressjoni għolja 27,1065-1072(1996).

Nota:dan ta' hawn fuq mhuwiex lista ta' referenza sħiħa