Studju dwar il-Metodu ta' Determinazzjoni tal-Kontenut ta' Glycoside Pineal U Ergosterol Glycoside f'Cistanche Tubulosa

Cistanche tubulosa huwa zokk imlaħħam niexef bi weraq bil-qoxra li jappartjenu għall-ġeneru Cistanche tal-familja Ledaceae. Huwa ta 'natura sħuna, ħelu u mielaħ fit-togħma, u jappartjeni għall-meridjani tal-kliewi u tal-musrana l-kbira. Għandu effetti tradizzjonali bħal tonifying yang tal-kliewi, essenza nutrittiva u demm, niedja l-imsaren u promozzjoni tal-movimenti tal-musrana, u dewmien tat-tixjiħ. Huwa magħruf bħala l-"ġinseng tad-deżert". Mill-edizzjoni tal-2010 tal-Farmakopea tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina, Cistanche tubulosa (Schrenk) R. Wight ġiet miżjuda bħala waħda mill-pjanti bażali statutorji ta 'Cistanche u elenkata flimkien ma' C. deserticola.

Cistanche tubulosa hija prodotta prinċipalment tul ix-xifer tan-Nofsinhar tal-Baċir ta 'Tarim fir-Reġjun Awtonomu ta' Xinjiang Uygur, li tikber b'mod parassitiku fuq l-għeruq tal-pjanti Tamarix. Huwa s-sors primarju ta 'materjali mediċinali Cistanche tubulosa fis-suq taċ-Ċina fil-preżent, bi produzzjoni annwali li tammonta għal aktar minn 60%. Minħabba l-iskarsezza dejjem tikber ta 'riżorsi selvaġġi, ġiet elenkata bħala pjanta protetta tat-tieni klassi fil-Lista Nazzjonali tal-Pjanti Selvaġġi Protetti Ewlenin (edizzjoni 2021).

Ir-riċerka farmakoloġika moderna wriet li s-sustanza farmakoloġika ewlenija ta 'Cistanche tubulosa hija bbażata fuq phenylethanoid glycosides (PhGs), li fosthom Echinacoside (C35H46O20) u Acteoside/verbascoside (C29H36O15) għandhom l-ogħla kontenut u l-aktar attività b'saħħitha, u huma komponenti karatteristiċi espliċitament ta' kwalità tad-disinn tubulosa b'mod espliċitu. Farmakopea Ċiniża. Skont l-edizzjoni tal-2020 tal-Farmakopea Ċiniża, l-ammont totali ta 'echinacroside u verbascoside fil-prodott imnixxef ta' Cistanche tubulosa m'għandux ikun inqas minn 1.5%, li huwa ħafna ogħla mill-istandard ta '0.30% għad-deżert Cistanche tubulosa. Għalhekk, l-istabbiliment ta 'metodi ta' determinazzjoni tal-kontenut preċiżi, effiċjenti u riproduċibbli huwa ta 'sinifikat kbir għall-kontroll tal-kwalità, l-evalwazzjoni tal-oriġini, l-ottimizzazzjoni tat-tħawwil, u l-iżvilupp tal-prodott ta' materjali mediċinali Cistanche tubulosa.

Echinoside, il-komponent kimiku ewlieni ta 'Cistanche tubulosa

Acteoside, il-komponent kimiku ewlieni ta 'Cistanche tubulosa

Karatteristiċi kimiċi ta 'Pinecone Chrysanthemum Glycoside u Ergotamin Glycoside

struttura kimika

Pinecone glycoside u ergosterol glycoside huma t-tnejn phenylethanoid glycosides, li l-iskeletru bażiku tagħhom huwa magħmul minn nukleu phenylethanoid konness minn bonds glycosidic ma 'gruppi taz-zokkor (ġeneralment glukożju u rhamnose), u gruppi sostitwiti bħal gruppi caffeoyl hydroxyl huma introdotti fil-pożizzjoni idrossilika. Il-formula molekulari ta 'echinacoside hija C35H46O20, b'piż molekulari relattiv ta' 786.72. L-istruttura tagħha fiha grupp wieħed ta 'caffeoyl, grupp wieħed ta' glucose, u grupp wieħed ta 'rhamnose. Il-formula molekulari ta 'ergosterol glycoside (verbascoside) hija C29H36O15, b'piż molekulari relattiv ta' 624.59. L-istruttura tiegħu hija simili għal dik tal-pinealoside, iżda m'għandhiex rhamnose u xi sostituzzjonijiet caffeoyl. It-tnejn jinħallu faċilment f'solventi polari bħal metanol, etanol u ilma, u għandhom assorbiment karatteristiku fir-reġjun ultravjola (wavelength ta 'assorbiment massimu ta' madwar 330 nm), li jipprovdi bażi teoretika għall-iskoperta HPLC-UV.

Attività farmakoloġika

Pinecone chrysanthemum glycoside u ergosterol glycoside għandhom firxa wiesgħa ta 'attivitajiet farmakoloġiċi: (1) effett antiossidant - billi jneħħu anions superoxide (O2 · -), radikali hydroxyl (· OH), u perossidu idroġenu (H2O2), jattivaw il-passaġġ ta' sinjalazzjoni Nrf2/ARE, u jirregolaw l-attività GSH Px antiossidant u upregulating; (2) Effett newroprotettiv - jippromwovi l-espressjoni ta 'fatturi newrotrofiċi bħal GDNF, li għandu effett ta' titjib fuq il-mudelli tal-marda ta 'Alzheimer u l-marda ta' Parkinson; (3) Effetti simili għall-ormoni - jippromwovu l-espressjoni ta 'enzimi relatati mas-sinteżi tat-testosterone u jtejbu l-funzjoni riproduttiva; (4) Effett hepatoprotective - tnaqqis ta 'korriment alkoħoliku tal-fwied u stress ossidattiv; (5) Effett antitumorali - jinduċi apoptożi taċ-ċelloli tal-kanċer esophageal permezz ta 'mogħdijiet dipendenti mitokondrijali. L-attivitajiet ta 'hawn fuq jagħmluhom komponenti indikaturi insostitwibbli għall-evalwazzjoni tal-kwalità ta' Cistanche tubulosa.

Effetti ta' cistanche-antitumor

Ħarsa ġenerali tal-Metodi ta' Determinazzjoni tal-Kontenut

Fil-preżent, il-metodi biex jiġi ddeterminat il-kontenut ta 'glycoside pineal u ergosterol glycoside f'Cistanche tubulosa prinċipalment jinkludu kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja (HPLC), kromatografija likwida ta 'prestazzjoni ultra-għolja (UPLC), diġitizzazzjoni ta' immaġni kromatografika b'saff irqiq (TLC ImageJ), u tandem kromatografija likwida tal-kromatografija/MSspectrometrija likwida (LC). Fost dawn, il-metodu HPLC ġie adottat bħala l-metodu ta 'determinazzjoni legali mill-Farmakopea Ċiniża minħabba l-popolarità għolja tat-tagħmir tiegħu, it-tħaddim sempliċi u r-riproduċibilità tajba, u bħalissa huwa l-aktar metodu rrappurtat fil-letteratura. Dan li ġej jiffoka fuq l-istabbiliment tas-sistema u l-proċess ta 'ottimizzazzjoni tal-metodu HPLC.

L-influwenza ta 'oriġini u hosts differenti fuq il-kontenut

Differenzi fl-Oriġini

Studji multipli wrew b'mod konsistenti li hemm differenzi sinifikanti fil-kontenut ta 'echinacroside u ergosterol f'Cistanche tubulosa minn reġjuni differenti. Meta tieħu Xinjiang bħala eżempju, id-differenza fil-kontenut ta 'żewġ komponenti f'kampjuni minn postijiet bħal Hetian Moyu County, Kashgar Jiashi County, u Alar City tista' tilħaq 2-5 darbiet. B'mod ġenerali, l-ammont totali ta 'phenylethanoid glycosides f'Cistanche tubulosa prodotti fiż-żona Hotan (speċjalment Moyu County, Minfeng County, u Yutian County) huwa relattivament għoli, u l-kontenut ta 'phenylethanoid glycosides f'xi kampjuni ta' kwalità għolja jista 'jilħaq 2.5% sa 5.0% ta' pharmacopo.5.

Influwenzi ospitanti differenti

Cistanche tubulosa parasitizes l-għeruq ta 'pjanti differenti fil-ġeneru Tamarix, u l-ispeċi ospitanti għandhom impatt sinifikanti fuq il-kwalità ta' materjali mediċinali. Chen et al. (2005) irrappurtaw li l-kontenut ta 'aċidu feniletanoliku f'kampjuni parasitizzati fuq T. talama kanensis kien ġeneralment ogħla minn dak parasitizzat fuq T. ramosissima. Barra minn hekk, hemm differenzi bejn prodotti selvaġġi u kkultivati. Ġeneralment, il-kontenut ta 'żewġ komponenti fi prodotti selvaġġi huwa ogħla minn dak fil-prodotti kkultivati, iżda prodotti kkultivati ​​ta' kwalità għolja jistgħu wkoll jiksbu livelli ogħla billi jottimizzaw il-kundizzjonijiet tat-tħawwil.

Differenzi fl-ispeċifikazzjonijiet u l-partijiet

L-ispeċifikazzjonijiet (dijametru, tul) u l-partijiet mediċinali ta 'Cistanche tubulosa għandhom ukoll impatt fuq il-kontenut tagħha. Ir-riċerka wriet li l-kontenut ta 'echinacoside u ergosterol fi zkuk imlaħħam irqaq ħafna drabi huwa ogħla minn dak fi zkuk eħxen; Il-kontenut fil-parti ta 'fuq taz-zokk (ħdejn it-tarf tal-fjoritura) huwa ġeneralment ogħla minn dak fil-bażi. Din ir-regola tipprovdi referenza għall-għażla tal-partijiet waqt il-ħsad u l-ipproċessar tal-ħxejjex mediċinali.

Introduzzjoni għal metodi oħra ta 'kejl

Kromatografija likwida ta' prestazzjoni ultra-għolja (UPLC)

Cistanche tubulosa esperiment

Ikklikkja hawn biex tara Cistanche Tubulosa Estratt Naturali Suppliment Trab

【Staqsi għal aktar】 Email:cindy.xue@wecistanche.com / WhatsApp: 0086 18599088692 / WeChat: 18599088692

Il-metodu UPLC juża kolonna tal-kromatografija b'daqs ta 'partiċelli iżgħar (bħal Waters HSS T3, 1.8 μ m, 100 × 2.1 mm), rata ta' fluss ta '0.3 mL/min, volum ta' injezzjoni ta '1 μ L biss, u l-ħin tal-analiżi jista' jitqassar għal 10-15 min, separazzjoni aħjar HPLC 30-50 min. Liang Jiansong et al. (2021) stabbilixxa metodu UPLC għal determinazzjoni simultanja ta 'sitt glikosidi feniletanoliċi, li għandu firxa lineari wiesgħa u rata ta' rkupru għolja, u huwa adattat għal screening rapidu ta 'kwantitajiet kbar ta' kampjuni.

Metodu LC-MS/MS

Il-metodu tal-ispettrometrija tal-massa tandem tal-kromatografija likwida għandu sensittività estremament għolja u jista 'fl-istess ħin jiddetermina għexieren ta' komponenti f'Cistanche tubulosa, inklużi echinacoside, ergosterol glycoside, isoergosterol glycoside, u guanosine A. Huwa adattat għal riċerka metabolomika u evalwazzjoni komprensiva tal-kwalità. It-teknoloġija magħquda RPLC-HILIC tista 'saħansitra tkejjel 23 komponent polari u mhux polari f'daqqa, li tkopri firxa ta' kontenut ta '5 ordnijiet ta' kobor.

Mikroestrazzjoni tas-solvent taħt pressjoni onlajn metodu HPLC tal-kromatografija tal-kurrent eddy

Dan il-metodu jgħaqqad l-estrazzjoni tal-kampjuni, il-purifikazzjoni u s-separazzjoni kromatografika onlajn, u jnaqqas b'mod sinifikanti l-konsum ta 'solventi organiċi u l-użu tal-kampjun. Il-LOQs tat-tliet phenylethanolic glycosides huma 0.50 mg/L (echinacoside), 0.25 mg/L (ergosterol glycoside), u 0.38 mg/L (isoergosterol glycoside), rispettivament, li huma adattati għal analiżi rapida ta 'kampjuni prezzjużi.

Metodu ta' Diġitizzazzjoni tal-Immaġni TLC

cistanche estratt trab

Ibbażat fuq is-softwer ImageJ, saret analiżi kwantitattiva fuq il-valuri tal-griż ta 'tikek ta' kromatografija ta 'saff irqiq. Il-koeffiċjenti ta 'korrelazzjoni r ta' pineal chrysanthemum glycoside, guanosine A, ergosterol glycoside, u isoergosterol glycoside kienu 0.9974, 0.9931, 0.9923, u 0.9890, rispettivament, li kienu konsistenti mal-metodu HPLC. Dan il-metodu huwa ta 'spiża baxxa, faċli biex topera, u adattat għal screening rapidu fl-unitajiet tal-bażi u l-qasam.

diskussjoni

Kwistjonijiet ewlenin fl-ottimizzazzjoni tal-kundizzjonijiet kromatografiċi

L-għażla tal-fażi mobbli hija kruċjali fl-iżvilupp tal-metodi HPLC. It-tqabbil tal-letteratura juri li: (1) is-sistema tal-aċetonitrile tal-ilma hija suxxettibbli li tikkawża tailing tal-quċċata tal-phenylethanolic glycoside, u żżid 0.1% aċidu formiku jew 1% aċidu aċetiku tista 'ttejjeb b'mod sinifikanti l-għamla tal-quċċata; (2) L-effiċjenza tas-separazzjoni tas-sistema ternarja tal-aċidu aċetiku tal-metanol acetonitrile hija superjuri għal dik tas-sistema binarja tal-metanol pur jew tal-aċetonitrile pur; (3) L-għażla tal-wavelength ta 'skoperta ta' 330-334 nm tista 'tibbilanċja l-intensità ta' assorbiment taż-żewġ komponenti, b'rispons kemmxejn ogħla f'334 nm u inqas interferenza minn ergosterol f'330 nm. It-temperatura tal-kolonna għandha impatt fuq il-ħin ta 'żamma iżda ma tbiddilx b'mod sinifikanti l-grad ta' separazzjoni, b'firxa raġonevoli ta '30-35 grad.

Ottimizzazzjoni ta 'Metodi ta' Estrazzjoni

Il-konċentrazzjoni tas-solvent, il-proporzjon solidu-likwidu, it-temperatura tal-ultrasound, u l-ħin kollha jaffettwaw l-effiċjenza tal-estrazzjoni. Ir-riċerka wriet li: (1) 50% ~ 80% metanol jew etanol jistgħu effettivament estratt iż-żewġ komponenti glycoside, b'rata ta 'estrazzjoni kemmxejn ogħla ta' 60% ~ 80% etanol; (2) Proporzjon solidu-likwidu ta '1:30 ~ 1:50 (g/mL) huwa biżżejjed għal estrazzjoni bir-reqqa; (3) L-aħjar kombinazzjoni hija temperatura ta 'l-ultrasound ta' 50-60 grad u ħin ta '40 min; (4) L-estrazzjoni ultrasonika hija superjuri għall-estrazzjoni tar-rifluss, peress li din tal-aħħar tista 'faċilment twassal għad-degradazzjoni ta' glikosidi feniletanoliċi termosensittivi.

Diskussjoni dwar ir-Razzjonalità tal-Istandards tal-Farmakopea

Il-farmakopea attwali tistipula li l-ammont totali ta 'paeoniflorin u ergosterol glycosides f'Cistanche tubulosa għandu jkun Akbar minn jew ugwali għal 1.5%. Dan l-istandard huwa relattivament maħlul - kampjuni ta 'kwalità għolja minn Xinjiang normalment jilħqu 3% sa 5%, bi ftit kampjuni ta' kwalità baxxa biss joqorbu lejn il-limitu aktar baxx. Xi riċerkaturi jissuġġerixxu li jgħollu l-istandard għal 2.0% sa 2.5% biex jiżguraw aħjar il-kwalità tal-materjali mediċinali. Barra minn hekk, il-farmakopea tuża biss żewġ komponenti bħala indikaturi, filwaqt li Cistanche tubulosa fiha wkoll diversi phenylethanolic glycosides attivi bħal guanosine A, isoergosterol glycosides, u hesperidin. Evalwazzjoni komprensiva b'ħafna indikaturi hija d-direzzjoni ta 'żvilupp futur.

Suġġerimenti għall-Għażla tal-Metodu

Għall-ispezzjoni tal-kwalità ta 'materjali mediċinali ġenerali u kontroll tal-kwalità tal-produzzjoni ta' kuljum, huwa rakkomandat li tuża l-metodu HPLC tal-farmakopea. Il-metodu huwa matur, ir-rekwiżiti tat-tagħmir huma baxxi, u r-riżultati huma komparabbli ħafna. Għal screening ta 'kampjuni fuq skala kbira jew analiżi ta' kampjuni prezzjużi, metodi UPLC jew PLME-TFC-HPLC onlajn huma aktar effiċjenti. Il-metodu ta 'klassifikazzjoni LC-MS/MS huwa l-metodu preferut għal evalwazzjoni fil-fond tal-kwalità u identifikazzjoni tal-varjetà. Il-metodu tal-immaġni TLC huwa adattat għal screening inizjali rapidu fil-livell tal-bażi. Ir-riċerkaturi għandhom jagħmlu għażliet raġonevoli bbażati fuq il-ħtiġijiet attwali.

cistanche estratt trab

Konklużjoni

Dan l-artikolu jelabora b'mod sistematiku fuq il-metodu HPLC għad-determinazzjoni tal-kontenut ta 'echinacoside u ergosterol f'Cistanche tubulosa. Dan il-metodu ġie vvalidat b'metodoloġija multidimensjonali u għandu l-karatteristiċi ta' firxa lineari wiesgħa (r Akbar minn jew ugwali għal 0.999), preċiżjoni tajba (RSD<3%), high accuracy (recovery rate 95.7%~100.7%), and easy operation, fully meeting the quality control requirements of the Chinese Pharmacopoeia for Cistanche tubulosa.

Analiżi komprensiva turi li: (1) il-kontenut ta 'glycoside pineal f'Cistanche tubulosa huwa ġeneralment 3-8 darbiet dak ta' glycoside ergosterol, u l-ammont totali tat-tnejn ivarja skond il-post ta 'oriġini, ospitanti, daqs, u post; (2) L-ammont totali ta 'aċidu feniletanoliku f'kampjuni ta' kwalità għolja minn Hotan, Xinjiang jista 'jilħaq 2-3 darbiet jew aktar tal-istandard tal-farmakopea; (3) Teknoloġiji ġodda bħal UPLC u LC-MS/MS jipprovdu għodda qawwija għal determinazzjoni sinkronika b'ħafna komponenti u evalwazzjoni profonda tal-kwalità.

Ir-riċerka futura għandha tiffoka fuq: (1) l-istabbiliment ta 'sistema ta' valutazzjoni tal-kwalità b'ħafna indiċi li tkopri aktar phenylethanoid glycosides; (2) tinvestiga bir-reqqa l-impatt komprensiv tal-ambjent tat-tħawwil, il-perjodu tal-ħsad tal-ospitanti, u l-metodu tal-ipproċessar fuq il-kontenut; (3) il-promozzjoni tal-istandardizzazzjoni tal-katina tal-industrija kollha ta 'Guanhua Cistanche minn ħxejjex mediċinali għal ikel għas-saħħa u materja prima kożmetika.

Referenzi

[1] Metodu HPLC tal-ħażiż tas-soppa għad-determinazzjoni tal-kontenut ta' echinacoside u ergotamine f'Guanhua Roucong Kui [J]. Ispiżjar Ċiniż, 2009, 12 (8): 1061-1063

[2] Chen M, Xiao SP, Cui GH, et al. Id-determinazzjoni ta' echinacoside u acteoside f'ħxejjex aromatiċi ta' Cistanche tubulosa[J]. China Journal of Chinese Materia Medica, 2005, 30(11): 839-841.

[3] Baoshan, Ju Aihua, Xiao Zhibin. Determinazzjoni tal-kontenut ta' echinacoside u ergotamina f'Guanhua Roucong Kui [J]. Reviżjoni tal-Mediċina Ċiniża, 2017, 23 (19): 39-40, 44

[4] Liang Jiansong, Xue Cuili, Wu Menghua, eċċ Determinazzjoni tal-kontenut UPLC u evalwazzjoni kimometrika ta 'sitt glikożidi feniletanojdi f'Roucong Kui u Shacong Kui [J]. Ġurnal tal-Analiżi Farmaċewtika, 2021, 41 (2): 226-235

[5] Kumitat tal-Farmakopea tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina Farmakopea tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina (edizzjoni 2020, Volum 1) [S]. Beijing: China Medical Science and Technology Press, 2020: 148-149

[6] Zhang Leihong, Du Niansheng, Wang Qing, eċċ Determinazzjoni tal-Kontenut ta' Echinochlorin f'Kapsuli ta' Glycosides Totali Roucongkui mill-HPLC [J]. Ġurnal Farmaċewtiku tal-Majjistral, 2002, 17 (1): 3-4

[7] Ju Aihua, Ao Geriletu, Zhou Kai Determinazzjoni tal-kontenut ta' echinacoside u ergotamine f'laħam immellaħ u ġirasol mill-Inner Mongolia [J]. Ġurnal Ċiniż tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża, 2011, 26 (1): 178-180

[8] Kanzunetta Peng, Tu Pengfei. Progress tar-riċerka dwar il-kontroll tal-kwalità u l-evalwazzjoni tal-mediċina tradizzjonali Ċiniża Roucongkui [J]. Northern Pharmacy, 2011, 8 (2): 45-47

[9] Guo Dingyu, Xiao Jinglei. Progress fil-Kontroll tal-Kwalità u r-Riċerka tal-Attività Bijoloġika ta' Komponenti Funzjonali f'Roucongkui [J]. Jilin Traditional Chinese Medicine, 2023, 43 (7): 856-860

[10] Lu Yinghui, Pi Wenmin, Zhang Yue, eċċ Studju Komparattiv u Analiżi tal-Istatus tas-Suq ta' Roucong Kui u Guanhua Roucong Kui [J]. Mediċina Ċiniża Moderna, 2019, 21 (8): 1105-1110

[11] Standard tal-Kumitat Nazzjonali tal-Farmakopea għall-granuli tal-formula ta' Roucongkui (Guanhua Roucongkui) [S]. Beijing: China Medical Science and Technology Press, 2021

[12] Fu C, Li J, Aipire A, et al. Cistanche tubulosa phenylethanoid glycosides jinduċu apoptosi fiċ-ċelloli Eca-109 permezz tal-mogħdija dipendenti fuq il-mitokondrija[J]. Ittri tal-Onkoloġija, 2019, 17(2): 1883-1892.

[13] Xu Mingjun, Stenna Analiżi tal-Kwalità u Evalwazzjoni Komprensiva tal-Ġirasol tal-Laħam tad-Deżert minn Reġjuni Differenti fiċ-Ċina [J]. Xjenza u Teknoloġija tal-Industrija tal-Ikel, 2022, 43 (15): 312-320

[14] Sister Hao, Chen Sumei, Yan Donghai, eċċ Progress tar-riċerka dwar l-applikazzjoni ta' Roucongkui fil-kożmetiċi [J]. Ġurnal tax-Xjenza Kimika ta 'Kuljum, 2021, 44 (9): 28-33

[15] Hou Ji, Wang Bo, Li Guanghui, eċċ Progress tar-riċerka u status ta' industrijalizzazzjoni ta' Roucongkui [J]. Shandong Agricultural Science, 2020, 52 (12): 147-154