Transcriptomics b'Ċellula Unika Tiżvela Interazzjonijiet Ċellula-Ċellula tal-Filtru tal-Kliewi Mfixkla wara Korriment Bikrija u Selettiva tal-Podoċiti

Riżultati

Single-Cell Profiling of >29,000 Ċelluli tal-Kliewi Arrikkit-Glomerulari

Protokolli kurrenti ta' ċellula waħda għalkliewi kollha jidentifikaw<2.5% glomerular cells,9 and although a preparazzjoni glomerulari purifikatabilli tuża żibeġ manjetiċi tarrikkixxi għal din il-popolazzjoni,22 tonqos milli jaqbad ċellula oħratipi tal-kliewili jista’ jkun ta’ interess. Intuża metodu ta 'għarbil biex fl-istess ħin jarrikkixxi l-glomeruli u jaqbad tipi addizzjonali ta' ċelluli tal-kliewi biex jestendu dawn is-sejbiet u jiżviluppa fehim dettaljat tal-interazzjonijiet ċelluli-ċelluli fi ħdan il-glomerulus fil-kuntest tal-pajsaġġ ċellulari kollu tal-kliewi, qabel u wara l-ħsara podoċita.

Biex jiġu identifikati l-effetti traskrizzjonali bikrija tal-ablazzjoni tal-podoċiti b'mod speċifiku għat-tip taċ-ċelluli, twettqet scRNAseq b'tessut tal-kliewiminn WT u iCTCFpod / ġrieden miġbura permezz ta 'għarbil serjali wara ġimgħa ta' trattament b'doxycycline (Figura 1A). Tessut tal-kliewi minn erba 'annimali WT (erba' repliki bijoloġiċi) u erba' iCTCFpod / annimali taw total ta '14,783 WT u 14,727 iCTCFpod / ċelluli profilati wara l-filtrazzjoni (Figura Supplimentari S1, A u B; Tabelli Supplimentari S1 u S2). Id-dejta ġiet normalizzata biex tneħħi l-effetti minħabba n-numru ta 'UMIs u l-perċentwal ta' qari mitokondrijali. Wara l-integrazzjoni ta 'WT u iCTCFpod / kampjuni, intużat riżoluzzjoni baxxa ta' clustering biex tiskopri disa 'clusters (Figura 1B). Ir-repliki bijoloġiċi ta' WT u iCTCFpod / kampjuni tqassmu fost il-clusters kollha (Figura Supplimentari S2, AC). It-tipi kollha taċ-ċelluli tal-glomerulus, kif ukoll tipi addizzjonali ta 'ċelluli tal-kliewi, ġew identifikati bl-użu ta' markaturi stabbiliti u derivati ​​mid-dejta (Figura 1C; Tabella Supplimentari S3; Figura Supplimentari S3A).

Ċelloli glomerulari, li jirrappreżentaw total ta '82.1% taċ-ċelloli kollha rkuprati [36.9% podocytes, 42.1% ċelluli endoteljali glomerulari (GECs), 2.7% ċelluli mesanġjali, u 0.36% PECs] ġew iżolati u reclustered (Figura 1D) . Erba 'gruppi ta' podoċiti, ħames gruppi ta 'GECs, u raggruppament wieħed kull wieħed ta' ċelluli mesanġjali u PECs, li jesprimu markaturi tat-tip ta 'ċelluli kanoniċi, ġew identifikati (Figura 1E; Figura Supplimentari S3B). Repliki bijoloġiċi ta 'WT u iCTCFpod / kampjuni ġew imqassma fil-clusters kollha (Figura Supplimentari S2, DF; Tabella Supplimentari S4). Kif antiċipat, minħabba li t-tħassir CTCF speċifiku għal podoċiti jwassal għal telf ta 'podoċiti istoloġikament skoperti f'ġimgħatejn, 13 iCTCFpod / kampjuni kien fihom persentaġġ aktar baxx ta' podoċiti minn kampjuni WT (Figura 1F; Tabella Supplimentari S5). iCTCFpod / kampjuni kellhom 13.1% inqas podo cytes, 11.9% aktar GECs, u 1.5% aktar ċelluli mezanjali minn kampjuni WT (Tabella Supplimentari S5). Il-PECs ikkontribwew<1% to either of the iCTCFpod / or WT samples. This finding suggests that disruption of transcriptional programs critical for podocyte survival precedes histologically detectable podocyte injury and loss and highlights the power of scRNAseq in discerning subtle changes that can be missed by histologic analysis.

ĦWAWAR ĠODDA GĦAS-SAĦĦA TAL-KLIEI

Tħassir ta' CTCF Induċibbli Speċifiku għal Podoċiti jwassal għal Bidliet fl-Espressjoni tal-Ġene fit-Tipi kollha taċ-Ċelloli Glomerulari

Twettqet analiżi ta 'espressjoni differenzjali f'kull wieħed minn 11-il raggruppament li qabbel iċ-ċelluli iCTCFpod / u WT (Tabella Supplimentari S6). Ġeni tqiesu espressi b'mod differenzjat jekk jinstabu f'mill-inqas 10% taċ-ċelloli f'grupp partikolari, b'bidla minima assoluta ta' log fold ta' 0.1 u P <0 aġġustat. 05. Ctcf kien espress b'mod differenzjat f'kull wieħed mill-erba 'raggruppamenti ta' podoċiti, b'bidliet medji ta 'log darbiet ta' 0.390, 0.189, 0.331, u 0.303, rispettivament. In-numri ta 'ċelluli f'kull cluster ġew ikkampjunati u l-analiżi ta' espressjoni differenzjali ripetuta biex tqabbel in-numru ta 'ġeni espressi b'mod differenzjali fost il-11-il cluster. Ir-raggruppamenti tal-podoċiti kellhom l-aktar ġeni espressi b'mod differenzjat, segwiti minn GEC-1 u GEC-2 (Figura 1G). It-tliet raggruppamenti ta' GECs li jifdal, flimkien maċ-ċelloli mesanġjali u l-PECs, kellhom ħafna inqas ġeni espressi b'mod differenzjat (Figura 1G), li jissuġġerixxi li GEC-1 u GEC-2, fost il-clusters glomerulari kollha, kienu l-aktar affettwati. mis-sequelae ta' korriment ta' podoċiti ikkawżat minn deletioned CTCF.

Programmi tal-ġeni assoċjati mal-mard identifikati fi gruppi speċifiċi ta' podoċiti u ċelluli endoteljali

Dan l-istudju l-ewwel fittex li jeżamina kif ir-raggruppamenti individwali tal-podoċiti jirrispondu għall-korriment. Dijagramma Venn tal-ġeni espressi b'mod differenzjali f'kull wieħed mill-erba 'raggruppamenti ta' podoċiti żvelat li l-podoċiti 1 kellu l-aktar ġeni espressi b'mod differenzjat uniku tal-erba 'raggruppamenti ta' podoċiti (Figura 2A; Tabella Supplimentari S7). L-osservazzjoni li wieħed mill-erba 'raggruppamenti ta' podoċiti kien affettwat b'mod aktar prominenti hija taqbel ma' dejta istoloġika preċedenti li tindika li mhux il-podoċiti kollha huma affettwati b'severità ugwali quddiem korriment u tenfasizza s-setgħa ta 'scRNAseq biex tikkaratterizza molekulariment l-eteroġeneità tal-istati taċ-ċelluli fi ħdan il- istess tip ta’ ċellula.23

Twettqet analiżi ta 'rappreżentazzjoni żejda biex tidentifika programmi tal-ġeni arrikkit bħala konsegwenza ta' telf ta 'CTCF fil-cluster podocyte 1 (Tabella Supplimentari S8). It-termini arrikkit ta 'fuq ġew viżwalizzati b'mappa ta' arrikkiment biex tiġbor settijiet ta 'ġeni li jikkoinċidu b'mod reċiproku (Figura 2B). Grupp prominenti ta 'termini arrikkit kien funzjonijiet mitokondrijali, inklużi sinteżi ATP, organizzazzjoni mitokondrijali, katina ta' trasport ta 'elettroni, u fosforija ossidattiva (Figura 2B). Din id-dejta testendi l-ħidma reċenti li tipponta lejn disfunzjoni mitokondrijali bħala sinjal ta’ ħsara podoċiti.24 Barra minn hekk, il-ġenetika umana wriet l-importanza tal-funzjonijiet mitokondrijali fil-podoċiti, inklużi diversi mutazzjonijiet fil-mogħdija tal-bijosintesi CoQ (PDSS1, PDSS2, COQ2, COQ6, u ADCK4) li jikkawżaw sindromu nefrotiku, prinċipalment fit-tfal.25,26 Għalhekk ġie postulat li disfunzjoni mitokondrijali tal-podoċiti tista’ tirrappreżenta stat taċ-ċelluli prominenti assoċjat mal-mard kollu li ġej minn telf ta’ podoċiti.24 Id-dejta tipprovdi appoġġ għal dan il-kunċett b’mod wieħed. -riżoluzzjoni taċ-ċelluli, li tissuġġerixxi li disfunzjoni mitokondrijali tista 'tirrappreżenta l-istat ta' korriment l-aktar kmieni f'popolazzjoni speċifika ta 'podoċiti, li twassal għal telf ta' podoċiti.

Twettqet analiżi ta 'rappreżentazzjoni żejda biex tidentifika programmi tal-ġeni arrikkit bħala konsegwenza ta' telf ta 'CTCF fil-cluster podocyte 1 (Tabella Supplimentari S8). It-termini arrikkit ta 'fuq ġew viżwalizzati b'mappa ta' arrikkiment biex tiġbor settijiet ta 'ġeni li jikkoinċidu b'mod reċiproku (Figura 2B). Grupp prominenti ta 'termini arrikkit kien funzjonijiet mitokondrijali, inklużi sinteżi ATP, organizzazzjoni mitokondrijali, katina ta' trasport ta 'elettroni, u fosforija ossidattiva (Figura 2B). Din id-dejta testendi l-ħidma reċenti li tipponta lejn disfunzjoni mitokondrijali bħala sinjal ta’ ħsara podoċiti.24 Barra minn hekk, il-ġenetika umana wriet l-importanza tal-funzjonijiet mitokondrijali fil-podoċiti, inklużi diversi mutazzjonijiet fil-mogħdija tal-bijosintesi CoQ (PDSS1, PDSS2, COQ2, COQ6, u ADCK4) li jikkawżaw sindromu nefrotiku, prinċipalment fit-tfal.25,26 Għalhekk ġie postulat li disfunzjoni mitokondrijali tal-podoċiti tista’ tirrappreżenta stat taċ-ċelluli prominenti assoċjat mal-mard kollu li ġej minn telf ta’ podoċiti.24 Id-dejta tipprovdi appoġġ għal dan il-kunċett b’mod wieħed. -riżoluzzjoni taċ-ċelluli, li tissuġġerixxi li disfunzjoni mitokondrijali tista 'tirrappreżenta l-istat ta' korriment l-aktar kmieni f'popolazzjoni speċifika ta 'podoċiti, li twassal għal telf ta' podoċiti.

Wieħed mill-gruppi ewlenin ta 'termini arrikkit mill-analiżi ta' rappreżentanza żejda (Figura 2B) kien l-organizzazzjoni ċitoskeletali kif ukoll terminu arrikkit wieħed relatat għall-adeżjoni taċ-ċelluli-matriċi. Iċ-ċitoskeletru tal-actin għandu rwol essenzjali fiż-żamma tal-istruttura unika u kumplessa tal-podoċiti, u l-adeżjoni mal-GBM hija essenzjali għall-funzjoni tal-podoċiti.27 L-adeżjonijiet fokali maturi fihom mijiet ta’ proteini li jgħaqqdu ċ-ċitoskeletru tal-actin, ir-rabta tal-matriċi tar-riċettur, it-trasduzzjoni tas-sinjal intraċellulari. , u l-polimerizzazzjoni tal-aktina. Wieħed mill-aktar ġeni regolati 'l isfel fil-podocyte 1 kien Rhpn1 (Figura Supplimentari S4A), komponent essenzjali għall-istabbiliment tad-dinamika taċ-ċitoskeletru tal-podocyte u ż-żamma tal-arkitettura tal-proċess tas-sieq tal-podocyte.28 Il-komponent kumpless Arp2/3 Arpc3, mutur tal-polimerizzazzjoni tal-actin, kien regolat fil-grupp podocyte 1 (Figura 2C; Figura Supplimentari S4B). Ġene għal komponent addizzjonali tal-kumpless, Actr2, kien ukoll regolat 'il fuq kemm fil-podocyte 1 kif ukoll fil-podocyte 4. Barra minn hekk, Wasl, li l-prodott tal-proteini tiegħu, N-WASP, jattiva l-kumpless Arp2/3 u huwa meħtieġ għall-manutenzjoni. ta 'proċessi tas-sieq podocyte in vivo29, kien ukoll regolat 'il fuq f'podocyte 1, podocyte 3, u podocyte 4. Ir-regolatur ċitoskeletali Arhgdia, li t-tħassir tiegħu huwa assoċjat ma' sindromu nefrotiku fil-ġrieden,30 kien regolat 'l isfel f'podocyte 1 (Figura 1). 2C). Il-livelli ta' espressjoni ta' żewġ Rho GTPases

Figura 3 Il-grupp tal-podoċiti jirregola Col4a5. A: Col4a5 kien irregolat b'mod sinifikanti 'l fuq f'ċelluli podocyte 1 tat-tħassir CTCF speċifiċi għall-podoċiti inducibbli (iCTCFpod / ) meta mqabbla ma' ċelluli podocyte 1 tat-tip selvaġġ (WT). Ir-riċetturi tal-collagen tat-tip IV ɑ5 (COL4A5) kienu espressi b'mod qawwi f'ċelluli mesanġjali u subclusters taċ-ċelluli endoteljali glomerulari (GEC) 1 sa 4. Id-daqs tal-vleġġa jirrappreżenta l-espressjoni relattiva tar-riċettur. B: Kwantifikazzjoni tar-reazzjoni tal-katina ta' ibridizzazzjoni (HCR). Col4a5 kien irregolat b'mod sinifikanti 'l fuq f'ċelluli li jesprimu iCTCFpod / Nphs2-imqabbla ma' ċelloli li jesprimu WT Nphs{{20}}. Ġew evalwati erba' WT u erba' iCTCFpod / ġrieden. Il-glomeruli kollha minn tliet stampi ġew kwantifikati. C: Espressjoni Col4a5 fil-glomeruli ta' WT u iCTCFpod / annimali kif evalwati mill-HCR. *P < 0.0001 (test t b'żewġ denbu b'korrezzjoni ta' Welch). Ingrandiment oriġinali, 40; 63 (tkabbir ta' żoni f'kaxxa) (Ċ). Vireg tal-iskala Z 50 mm (C). IFI, immaġini immunofluworexxenti.

GEC-1 and GEC-2 had nearly as many differentially expressed genes as podocyte clusters 2 to 4, whereas the remaining GEC clusters, mesangial cells, and PECs had fewer differentially expressed genes. Therefore, these two endothelial clusters were most affected by podocyte injury. GEC-1 expressed >600 ġeni espressi b'mod differenzjat uniku (Figura Supplimentari S6A; Tabella Supplimentari S9). Analiżi ta' rappreżentazzjoni żejda indikat li l-ġeni espressi b'mod differenti b'mod uniku f'GEC-1 ġew arrikkit fi programmi tal-ġeni għall-migrazzjoni u l-adeżjoni taċ-ċelluli (Figura Supplimentari S6, B u C; Tabella Supplimentari S10). Dawn l-analiżi żvelaw l-aktar bidliet bikrin tat-traskrizzjoni li jseħħu fil-GECs bħala rispons għal korriment tal-podoċiti.

L-immudellar tal-Komunikazzjoni Interċellulari Tiżvela Interazzjonijiet Ewlenin bejn it-Tipi taċ-Ċelloli b'Reazzjoni għal Korriment Bikrija tal-Podoċiti

Wara li identifika programmi tal-ġeni mfixkla f'diversi raggruppamenti ta 'ċelluli distinti, l-istudju li jmiss fittex li jifhem kif il-crosstalk taċ-ċelluli glomerulari taċ-ċelluli kien influwenzat minn korriment tal-podoċiti. L-istudju l-ewwel eżamina l-lista ta’ ġeni espressi b’mod differenti f’raggruppamenti ta’ ċelluli podoċiti, GEC u mesanġjali. L-espressjoni ta 'żewġ ligandi ewlenin ta' prosurvival awtokrini, Vegfa u Pdgfb, kif ukoll l-espressjoni tar-riċettur PDGFB, Pdgfrb, ġew imfixkla (Tabella Supplimentari S6). L-espressjoni ta' Vegfa naqset fir-raggruppamenti kollha ta' podoċiti (bidla medja tal-log fold bejn 0.034 u 0.149). B'kuntrast, l-espressjoni Pdgfb żdiedet fir-raggruppamenti kollha tal-GEC (bidla medja log darbiet bejn 0.031 u 0.140), u r-riċettur Pdgfrb kien regolat 'il fuq fiċ-ċelloli mezanġjali (bidla medja log darbiet ta' 0.155). Din l-analiżi ssuġġeriet li l-ħsara ta 'podocyte twassal għal espressjoni mnaqqsa tal-ligand prosurvival Vegfa, li taffettwa b'mod negattiv il-GECs. Biex jikkumpensaw, il-GECs jistgħu jirregolaw il-ligand prosurvival Pdgfb, u jqanqlu liċ-ċelluli mesanġjali biex jirregolaw ir-riċettur Pdgfrb.

NicheNet, algoritmu ġdid li jiddeduċi kif l-interazzjonijiet tar-riċetturi tal-ligand derivati ​​minn data ta’ espressjoni jistgħu jaffettwaw miri speċifiċi billi jintegraw għarfien preeżistenti ta’ netwerks ta’ sinjalar u regolatorji, intuża biex jinvestiga aktar fil-fond l-interazzjonijiet ligand-riċettur u l-ġeni fil-mira putattivi tagħhom.20 NicheNet ġie applikat għal mudell f'interazzjonijiet bejn podoċiti u GECs kif ukoll ċelluli mesan gial u GECs li potenzjalment jistgħu jinduċu ġeni espressi b'mod differenzjali (ġeni fil-mira) f'GECs fl-issettjar ta 'korriment ta' podoċiti (Figura 4A). Għal din l-analiżi, ir-raggruppamenti kollha ta 'kull tip ta' ċellula ġew magħquda f'raggruppament wieħed. L-ogħla ligandi mbassra espressi minn ċelluli mesanġjali u/jew podoċiti kienu pleiotrofin (Ptn), angiopoetin 2 (Angpt2), Col4a1, molekula ta’ adeżjoni taċ-ċelluli vaskulari 1, proteina morfoġenetika tal-għadam 4 (Bmp4), Ephrin B1, fattur tat-tkabbir tat-tessut konnettiv, u semaphoring 3e (Sema3e) (Figura 4B). Il-mudell tal-espressjoni tar-riċetturi GEC li permezz tiegħu dawn il-ligands huma magħrufa li jaġixxu ġew immappjati ħdejn l-analiżi tal-attività tal-ligand. Barra minn hekk, il-ġeni fil-mira mbassra li kienu espressi b'mod differenzjali f'iCTCFpod / GECs meta mqabbla mal-kontrolli WT ġew ukoll immappjati. Ir-riżultati fil-Figura 4B huma miġbura fil-qosor bħala plottijiet ċirkolari fil-Figura 4, Ċ u D.

Diversi ligands, riċetturi, u ġeni fil-mira kienu notevoli minn din l-analiżi. Pleiotrophin, ligand espress ħafna f'ċelluli mesanġjali (Figura 4B), huwa fattur ta 'tkabbir imnixxi li jista' jorbot u jinibixxi riċettur tal-proteina tyrosine phosphatase tip B, jistimula l-migrazzjoni taċ-ċelluli endoteljali permezz ta 'żieda ta' Tek (Tie2) / Angpt137 u Kdr (Vegfr2) / Vegfa38. sinjalar. Għaldaqstant, Tek kien irregolat b'mod sinifikanti fil-GECs (Figura 4B). Angpt2, espress ħafna f'ċelluli mesanġjali, huwa ligand antagonistiku ta' Tek, li jinibixxi l-irbit ta' Angpt1.39 Minħabba li s-sinjalar Angpt1 huwa magħruf li jippromwovi s-sopravivenza tal-podoċiti u tfixkil tal-proporzjon Angpt1/Angpt2 jikkontribwixxi għall-iżvilupp ta' DKD,40 dan il-ligand L-analiżi tar-riċetturi dehret li tindika sinjalar Tek ħażin f'GECs bħala waħda mill-ewwel konsegwenzi ta' korriment tal-podoċiti

Dan l-istudju sab ukoll bidliet prominenti fl-espressjoni tal-kollaġen tat-tip IV f'diversi ċelluli glomerulari (Figura 4B). Normalment prodotti minn podoċiti b'saħħithom, kollaġen IV het erotrimers transizzjoni minn ɑ1ɑ1ɑ2 għal ɑ3ɑ4ɑ5 matul l-iżvilupp glomerulari, li huwa meħtieġ għall-formazzjoni u l-funzjoni xierqa tal-GBM. DKD.41,42 Fl-analiżi attwali, Col4a1 kien espress kemm minn ċelluli mesanġjali kif ukoll minn GECs (espressjoni medja ta 'mappa tas-sħana tal-ligand) (Figura 4B) u kien regolat b'mod speċifiku f'iCTCFpod / GECs meta mqabbel mal-kontrolli WT. Din id-dejta tissuġġerixxi li l-GECs jirregolaw Col4a1 fl-issettjar ta’ korriment tal-podoċiti, li jista’ jwassal għal GBM aktar iebes u fibrotiku li jikkontribwixxi għall-iżvilupp ta’ sklerożi segmentali.33

Bmp4 kien ligand mesanġjali espress ħafna identifikat mill-analiżi NicheNet (Figura 4, BD). Il-BMPs għandhom rwoli ewlenin fl-iżvilupp u l-mard tal-kliewi.43 Bmp4 huwa regolat 'il fuq fl-istabbiliment ta' nefropatija dijabetika fil-firien,42 u t-trattament ta' ġrieden bid-dijabete b'antikorp anti-BMP4 jipprevjeni r-regolazzjoni 'l fuq ta' Col4a1 u l-espansjoni tal-matriċi mesanjali. .44 Ta' interess partikolari, il-mesangial Bmp4 instab li jqanqal l-espressjoni GEC Smad6 (Figura 4B). L-espressjoni ta 'Smad6 hija indotta minn BMPs u f'ċirku ta' feedback negattiv, Smad6 jinibixxi speċifikament BMPs, inkluż BMP4.45 Smad6 kien regolat 'l isfel f'iCTCFpod / GECs meta mqabbel mal-kontrolli WT, li jissuġġerixxi żieda fis-sinjalar BMP fiċ-ċelloli endoteljali fl-issettjar ta' korriment podocyte .

Wieħed mill-ligands prijoritizzati identifikati fil-podocytes kien Sema3e (Figura 4, BD). Is-semaforini tal-Klassi 3 huma proteini mnixxija li jiffunzjonaw f'varjetà ta' proċessi bijoloġiċi, inklużi anġjoġenesi, limfanġjoġenesi u mard.46 Sema3a hija regolata 'l fuq fid-DKD uman,47 u Sema3g ġie identifikat reċentement bħala ġene speċifiku għall-podoċiti li jipproteġi l-podoċiti mill-infjammazzjoni. in vivo. 48 Ir-rwol ta' Sema3e fil-podocyte għadu mhux ċar. L-analiżi attwali żvelat par riċettur-ligand li qabel ma kienx rikonoxxut li bih il-podocyte Sema3e jinteraġixxi ma 'plexinD1 fuq GECs biex jikkawża diversi miri tal-ġeni downstream fl-issettjar ta' korriment podocyte (Figura 4, C u D).

Fost diversi ġeni fil-mira GEC identifikati ġodda, Hes1 u Cx3cl1 instabu wkoll fil-programmi tal-ġeni ta 'adeżjoni arrikkit f'GEC-1 (Figura 4, BD; Figura Supplimentari S6). Hes1 huwa mira ta 'sinjalazzjoni Notch, li għandha rwol importanti fil-kilwa li qed jiżviluppaw, iżda r-riattivazzjoni tista' twassal għal fibrożi.49 Cx3cl1 hija kemokine prodotta prinċipalment minn endotelju glomerulari li taġixxi bħala molekula ta 'kimoattrazzjoni u adeżjoni għar-riċettur tagħha, Cx3cr1, li huwa espress kullimkien fuq lewkoċiti limfatiċi mononukleari u ċirkolatorji.50 Cx3cl1 ġie implikat fivarjetà ta 'mard tal-kliewi, inklużDKD, Nefropatija IgA, u glomerulonefrite.50 Hes1 u Cx3cl1 kienu t-tnejn irregolati 'l fuq f'iCTCFpod / GECs meta mqabbla ma' kontrolli WT, li jissuġġerixxu li GECs jirrispondu għal korriment ta 'podocyte billi jirregolaw programmi proinfjammatorji u profibrożi.

Fl-aħħarnett, minħabba li ħafna mill-ligands u l-miri identifikati fl-analiżi NicheNet huma implikati f'DKD, kemm f'mudelli ta' annimali gerriema kif ukoll fil-bnedmin, is-sett tad-dejta tqabbel ma' sett ta' dejta transcriptomic ta' nuklei wieħed ta' DKD uman bikri.10 A speċifika sar paragun ta' ġeni espressi b'mod differenzjat bejn gruppi ta' ċelluli tal-bniedem u tal-ġrieden. Mill-138 ġeni espressi b'mod differenzjali f'DKD GECs tal-bniedem, 25 ġene ġew identifikati wkoll f'ċelluli iCTCFpod / endoteljali tal-ġurdien, inkluż Col4a1 (Figura Supplimentari S7; Tabella Supplimentari S11). Flimkien, dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li programmi taċ-ċelluli endoteljali spiss imfixkla fid-DKD tal-bniedem jistgħu jiġu parzjalment rikapitulati fil-mudell tal-ġurdien ta 'korriment glomerulari bikri permezz ta' ablazzjoni selettiva tal-podoċiti. Barra minn hekk, dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li, minbarra l-podoċiti, jista’ jkun hemm miri potenzjali speċifiċi endoteljali u strateġiji terapewtiċi biex iwaqqfu jew inaqqsu l-progressjoni ta’ kumplessi u ħafna.mard tal-kliewi prevalenti, bħalDKD.