Trasport sensittiv għal Phloridzin ta 'Echinacoside U Acteoside U Rotta ta' Assorbiment Intestinal Mibdula Wara l-Applikazzjoni ta 'Estratt ta' Cistanche Tubulosa

Għal aktar informazzjoni:ali.ma@wecistanche.com

Tadatoshi Tanino et al

Għanijiet Astratti

L-għan ta’ dan l-istudju kien li jindirizza l-effetti ta’ benefiċċjuEstratt ta' Cistanche tubulosafuq it-titjib tal-permeabilità intestinali baxxa ofechinacoside (ECH) u acteoside (ACT).

Metodi

Assorbiment ta 'ECH u ACT fiEstratt ta' Cistanche tubulosakien ikkaratterizzat bl-użu ta' monosaffi taċ-ċelluli Caco-2 intestinali umani b'komposti intatti. L-assorbiment ta' ECH u ACT li jiddependi mit-trasportatur tal-glukożju ġie kkonfermat permezz ta' teknika ta' perfużjoni fil-post.

Sejbiet ewlenin

Il-permeabilità apparenti (Papp) ma kinitx differenti b'mod sinifikanti bejn ECH intatt u ACT intatt. Fil-preżenza ta 'phloridzin, il-Papp ta' theECH u ACT f'doża għolja tnaqqset għal 20 fil-mija tan-nuqqas ta 'trattament rispettiv iżda ma nbidlitx minn phloretin u verapamil.Estratt ta' Cistanche tubulosaf'dożi baxxi u għoljin tejbu l-Papp ta' ECH u ACT (it-tnejn bi tliet darbiet), li rriżultaw fil-parteċipazzjoni kbira tagħhom f'assorbiment indipendenti mit-trasportatur tal-glukożju dipendenti mis-sodju. F'konċentrazzjoni baxxa, livelli konkomitanti ta' ECH u ACT fil-portblood kienu mrażżna b'mod sinifikanti minn phloridzin.

Konklużjoni

Il-dieta u mediċinaliEstratt ta' Cistanche tubulosait-titjib tal-assorbiment intestinali ta 'ECH u ACT jista' jservi biex jimmaniġġja aħjar is-saħħa tal-bniedem, għalkemm l-involviment ta 'trasport sensittiv għall-phloridzin għandu jitnaqqas.

Kliem ewlieniacteoside; Monosaffi taċ-ċelluli tal-caco-2;Estratt ta' Cistanchetubulosa; echinacoside;trasportatur tal-glukożju sensittiv għall-phloridzin

Estratt ta' Cistanche tubulosa

Ikklikkja għal Cistanche tubulosa trab

Introduzzjoni

L-għeruq ta 'Cistanche tubulosa kienu tradizzjonalment użati għall-mediċina u l-ikel.Estratt ta' Cistanche tubulosahuwa magħruf li għandu effetti farmakoloġiċi f'diversi mard tal-moħħ, funzjonijiet kontra t-tixjiħ, metaboliżmu tax-xaħam u tkabbir tax-xagħar.[1–4]Riċentement, iridojdi, monoterpenojdi, phenylethanoidglycosides, u lignans ġew iżolati minnCistanche tubulosa.[5,6] Phenylethanoid glycosides, klassi ta' komposti polifenoliċi, huma l-ingredjenti kimiċi ewlenin fl-ispeċi Cistanche,[7] għalkemm l-ammonti tagħhom ivarjaw fost speċi differenti. Echinacoside (ECH; Figura 1) huwa wieħed mill-phenylethanoid glycosides ewlenin f'HerbaCistanchis. Huwa idrolizzat għal acteoside (ACT; imsejħa wkoll verbascoside) minn enzimi ta 'oriġini batterjali fil-musrana l-kbira.[8,9] ECH u ACT għandhom l-attività ta' benefiċċju ta 'epatoprotection[10] u anti-infjammazzjoni[11] f'annimali gerriema. B'mod sorprendenti, l-ECH li jinħall ħafna fl-ilma jtejjeb ir-riżultati tal-imġieba u newrokimiċi f'mudell tal-ġrieden tal-marda ta' Parkinson u inibixxi l-attivazzjoni ta' caspase-3 u caspase-8 fin-newroni tal-granuli ċerebellari.[9] Huwa magħruf sew li l-barriera tad-demm-moħħ tillimita b'mod strett id-dħul u d-distribuzzjoni tal-ksenobijotiċi fil-moħħ mid-demm. Wu et al.[12] wera wkoll li l-ACT solubbli fl-ilma kien imqassam malajr fit-tessuti tal-moħħ tal-firien. Għalhekk, ECHand ACT jistgħu jiġu ttrasportati fil-moħħ, fl-imsaren, u fil-fwied mis-sistema(i) speċifika(i).

Għalkemm hemm evidenza qawwija li tissuġġerixxi li l-konsum taEstratt ta' Cistanche tubulosahija ta' benefiċċju għas-saħħa tal-bniedem, il-permeabilità ta' ECH pur madwar is-saffi ta' ċelluli Caco{{0}} f'konċentrazzjoni apikali ta' 8.4 ± 1.6 ug/ml hija ugwali għal jew inqas minn dik tal-markermannitol tat-trasport paraċellulari.[13] Meta ECH pur jingħata oralment lill-firien (doża, 1{{10}}{0 mg/kg), l-assorbiment huwa estremament mgħaġġel (Tmax, 15 min), u l-konċentrazzjoni massima tas-serum hija baxxa ħafna (Cmax, 0.61 ± 0.32 ug/ml).[14] Il-bijodisponibilità assoluta tal-ECH hija biss 0.83 fil-mija. Bl-istess mod, meta ċ-ċelloli Caco-2 jiġu inkubati bi frazzjoni fenolika parzjalment ippurifikata mill-ilma tad-dranaġġ tal-mitħna taż-żebbuġ, l-assorbiment ta' ACT pur huwa rapidu b'akkumulazzjoni massima li sseħħ wara 30 min u effiċjenza totali ta' akkumulazzjoni ta' 0.1 fil-mija, li tipprovdi livelli intraċellulari ta' 130. pmol/mg proteina taċ-ċelluli.[15] Fil-firien, il-konċentrazzjoni massima (0.13 ± 0.03 ug/ml) ta' ACT pur intlaħqet fi żmien 30 min wara doża orali b'100 mg/kg,[12] li timplika assorbiment intestinali rapidu. Il-bijodisponibilità orali ta 'ACT, kif ukoll ECH, hija pjuttost baxxa (0.12 ± 0.04 fil-mija), li tissuġġerixxi l-possibbiltà ta' effetti tal-ewwel pass fil-passaġġ intestinali u l-fwied. Fil-bili tal-firien, il-konjugati tal-metilazzjoni u l-glukuronidazzjoni tal-ECH huma metaboliti ewlenin,[16] għalkemm il-firxa tal-metaboliżmu epatiku għadu mhux ċar. Aħna preliminarjament sibna li ECH u ACT kienu pjuttost stabbli fl-omoġenati tal-mukoża intestinali tal-firien u l-gastricacid artifiċjali (dejta mhux murija). Najar et al.[17] wera li l-ACT jinibixxi l-attività tal-P-glycoprotein (P-gp)-ATPase b'mod simili għal verapamil (inibitur P-gp rappreżentattiv), li jimplika modulatur P-gp; madankollu, huwa inċert jekk ACT huwiex disponibbli bħala sottostrat P-gp. Interessanti, is-sejbiet reċenti ta' flavonoid-D-glucosides tad-dieta wrew li l-proteina ta' reżistenza għal ħafna mediċini (MRP2) moħbi it-trasportatur tal-glukożju dipendenti fuq is-sodju (SGLT) 1-l-assorbiment medjat ta' quercetin 4′-O- -glukożju,[18 ,19] li huwa responsabbli għal assorbiment fqir ħafna. Madankollu, ftit li xejn huwa magħruf dwar is-sensittività tal-glukosidi polifenoliċi għat-trasportaturi li jassorbu, inklużi t-trasportaturi tal-glukożju. tubulosa.

F'dan l-istudju, investigajna l-assorbiment medjat mit-trasportatur tal-glukożju ta' ECH u ACT intatti bl-użu ta' monosaffi taċ-ċelluli Caco-2 intestinali umani. Fl-istess ħin, it-trasport ta 'assorbiment ta' ECH u ACT tad-dieta konkomitantiEstratt ta' Cistanche tubulosakienet ikkaratterizzata minn sistema ta 'perfużjoni intestinali in-vitromodel u in-situ b'kampjunar portalblood, li tista' faċilment tiddistingwi bejn l-estent ta 'assorbiment u l-evitar ta' l-ewwel passdisposizzjoni epatika.

Materjali u metodi

Materjali

ECH u ACT intatti kienu rigali ġenerużi minn EishinTrading Co., Ltd (Osaka, il-Ġappun). Phloridzin u phloretin inxtraw minn Tokyo Kasei Co., Ltd (Tokyo, Ġappun). Verapamil u aċidu p-cumariku, użati bħala standards interni għal analiżi ta' kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja (HPLC), inkisbu minn Sigma-Aldrich (St Louis, MO). ,L-ISTATI UNITI). Il-kimiċi l-oħra kollha użati kienu ta' grad analitiku u disponibbli kummerċjalment.

Materjal tal-pjanti u preparazzjoni ta 'estratt themethanolic

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) hija pjanta parassitika perenni li tikber fuq l-għeruq ta 'speċi ta' Salvadoraor Calotropis, u mqassma f'pajjiżi ta 'l-Afrika ta' Fuq, Għarbija u Asjatiċi. Zkuk imnixxfa tas-C. tubulosa kienu trab u estratti tliet darbiet b'refluss metanolunder għal 3 sigħat. Evaporazzjoni tas-solvent taħt pressjoni mnaqqsa sakemm l-estratt metanoliku. Estratt Themethanolic (grad kummerċjali, Lott Nru 20070130; isem kummerċjali reġistru, Sabaku Ninnjinn Kanka) kien rigal ġeneruż minn Eishin Trading Co., Ltd permezz ta ' Muraoka andMorikawa (Kinki University, Ġappun), u l-identifikazzjoni botanika saret mill-Professur Jia Xiaoguang fil theXinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines.

Analiżi tal-estratt tal-pjanti: kromatografija

Iddeterminajna l-kontenut ECH u ACT fil-Estratt ta' Cistanche tubulosa(Lott Nru. 20070130) b'analiżi HPLC deskritta hawn taħt. Id-dejta miksuba tidher fit-Tabella 1.

Kultura taċ-ċelluli

Ċelloli Caco{{0}}, mixtrija mill-American Type CultureCollection (ATCC, Rockville, MD, USA), intużaw fil-passaġġi 38–53. Huma tkabbru f'mezz ta' kultura li jikkonsisti f'mezz ta' Eagle modifikat ta' Dulbecco (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kyoto, Ġappun) supplimentat b'0.1 mM aċidi amminiċi mhux essenzjali, 10 fil-mija serum bovin fetali inattivat bis-sħana, 100 U/ml peniċillina G, u 0.1 mg/mlstreptomycin sulfate.

Studji dwar it-trasport

Iċ-ċelloli Caco-2 ġew ibbanjati f'densità ta '6.4 × 103 ċelluli/cm2 fuq filtri tal-polikarbonat. Monosaffi ġew utilizzati għal esperimenti ta 'trasport 21-25 jum wara ż-żrigħ. ECH u ACT intatti li kienu ekwivalenti għall-kontenut tagħhom fiEstratt ta' Cistanche tubulosa (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

Echinacoside fiEstratt ta' Cistanche tubulosa

Perfużjoni intestinali fil-post

Firien Wistar maskili (230-250 g) inkisbu minn SLCJapan (Hamamatsu, Ġappun). L-annimali kienu miżmuma f'kamra bl-arja kondizzjonata taħt ċiklu ta 'dawl/dlam ta' 12-il siegħa għal ġimgħa qabel l-użu. Il-firien ġew mitmugħa ikel standard tal-laboratorju (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Ġappun) bl-ilma ad libitum u sajmu matul il-lejl qabel it-test. L-istudju tal-perfużjoni in-siturecirculating sar skond il-proċedura modifikata deskritta minn Mihara et al.[20] Fil-qosor, il-firien kienu anestetizzati b'soluzzjoni ta ' 25 fil-mija urethane (1 mg/kg) biex jiġi evitat tnaqqis fil-pressjoni tad-demm. Saret inċiżjoni midlineaddominali u l-musrana ż-żgħira ġiet esposta. Il-kanal tal-bili kien marbut biex tiġi evitata t-tnixxija tal-bili fil-perfusate. Il-musrana ż-żgħira kollha bħala parti waħda (mid-duwodenu sal-ileum) ġiet laħlaħ b'salina normali f'37 grad għal 10 minuti sakemm il-ħasil deher ċar. Tubi tal-ħġieġ konnessi ma 'tubi tas-silikonju mbagħad ġew kanulati fiż-żewġt itruf tal-musrana ż-żgħira u mwaħħla b'ħajt tas-sutura. Imbagħad, il-musrana ż-żgħira ġiet sostitwita fl-addome, u l-kannuli ġew imqabbda ma 'pompa peristaltika. Il-vina portal kienet kannulata b'tubi tal-polyethylene (PE10).Estratt ta' Cistanche tubulosadisponibbli kummerċjalment ġie sospiż f'buffer tal-bikarbonat Krebs–Henseleit (pH 7.4) biex jagħti konċentrazzjoni finali ta' 4.5 mg/ml u ġie ċentrifugat għal 10 min fi 8000 rpm biex jitneħħew komponenti li ma jinħallux. Is-supernatant fin-nuqqas jew il-preżenza ta 'phloridzin (1 mM) inġabar f'ġibjun, li nżamm f'temperatura ta' 37 ± 0.5 grad matul il-kors tal-esperiment. Fil-ħinijiet indikati, id-demm ittieħed mill-kannula tal-vina portal. Wara ċ-ċentrifugazzjoni tal-kampjuni tad-demm, il-plażma li tirriżulta ġiet deproteined bl-acetonitrile li kien fih l-istandard intern u ġiet ċentrifugata f'3000 rpm. Is-supernatanti ġew evaporati, u r-residwu ġie solvut b'fażi mobbli li tikkonsisti ofacetonitrile u 0.5 fil-mija aċidu aċetiku. Is-soluzzjoni mħallta ġiet mgħobbija fuq kolonna HPLC. Il-firien intużaw skont proċeduri etiċi skont il-Linji Gwida għall-Kura u l-Użu tal-Annimali tal-Laboratorju maħruġa mill-gvern Ġappuniż u l-Università Kinki.

Analiżi HPLC

L-analiżi HPLC twettqet fuq sistema mgħammra b'aShimadzu SPD{{0}}A, UV detector, Shimadzu LC-10A pompa, u Shimadzu C-R4A chromatopac integrator (Kyoto, il-Ġappun). ECH u ACT ġew separati bl-użu ta 'Inertsil ODScolumn (5 μm, 4.6 × 150 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Ġappun). Fażi mobbli ta 'acetonitrile u 0.5 fil-mija aċidu aċetiku fi proporzjon ta' 15:85 (v/v) intużat b'rata ta 'fluss ta' 1.0 ml/min. L-iskoperta saret f'334 nm

Analiżi kinetika

Koeffiċjenti ta' permeabilità apparenti (Papp) ġew stmati mill-inklinazzjoni tal-porzjon lineari tal-kors tal-ħin tat-trasport kompost tul is-saffi ta' ċelluli Caco-2, kif ġej: P dQ dt AC app=( ) ( )

fejn dQ/dt hija r-rata ta' permeabilità, C0 hija l-konċentrazzjoni inizjali tas-solut fil-kamra donatur, u A hija l-erja tal-wiċċ tal-membrana (4.7 cm2).

Fl-istudju tal-perfużjoni intestinali in-situ tal-firien, l-erja taħt il-kurva tal-konċentrazzjoni fil-plażma-ħin (AUC0–90) fil-vina portal minn ħin żero sal-aħħar imkejla ġiet ikkalkulata skont ir-regola trapezojdali lineari.

Acteoside inEstratt ta' Cistanche tubulosa

Proprjetajiet fiżikokimiċi

L-erja tal-wiċċ polari u l-erja tal-wiċċ mhux polari tal-komposti ġew ikkalkulati bl-użu tal-programm SAS (verżjoni 0.8,Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997–2001, AstraZeneca, Cary , NC, l-Istati Uniti). Valuri ta' log P u pKa determinati b'mod sperimentali nkisbu mil-letteratura.

Analiżi statistika

Id-dejta ġiet analizzata b'analiżi one-way tal-varjanza segwita mit-test post-hoc ta' Tukey. Valuri ta' probabbiltà inqas minn 5 fil-mija tqiesu sinifikanti.

Riżultati

Trasport assorbenti ta' echinacoside andacteoside permezz ta' monosaffi taċ-ċelluli Caco-2

Fil-ġrieden u l-firien, ECH[10,14] u ACT[12,21] intatti huma amministrati mill-ħalq f'dożi ta' 100–1000 mg/kg. Il-Estratt ta' Cistanche tubulosaużat kien fih madwar 30 fil-mija ECH u 15 fil-mija ACT għal kull doża. Peress li l-estratt biddel il-pressjoni osmotika u l-pH fil-mezz ta' inkubazzjoni, ġew determinati konċentrazzjonijiet ta' 4.5 u 13.5 mg/ml abbażi tad-dożaġġ orali (komposti intatti: 2–20 mg/2{{2{{31} }}} g piż tal-ġisem) fil-ġrieden. L-estratt f'dożi baxxi (4.5 mg/ml) u għoljin (13.5 mg/ml) kien fih 2.0 u 6.1 mg għal ECH u 1.0 u 3.0 mg għal ACT, rispettivament. Aħna applikajna ammonti ta' estratt ta' C. tubulosa li kienu ħafna inqas mid-dożaġġ orali ta' ECH u ACT irrappurtat fil-bnedmin (konċessjoni tad-dieta rakkomandata ta' estratt: 150 mg li fihom madwar 45 mg għal ECH u 22.5 mg għal ACT). F'dożi baxxi u għoljin ta 'komposti intatti, profili ta' assorbiment (Figura 2) u Papp ma kinux differenti b'mod sinifikanti bejn ECH u ACT bħala ekwivalenti għal anECH (Tabella 2). Meta l-estratt ta 'C. tubulosa f'doża għolja ta' 13.5 mg/ml ġie mgħobbi fil-medju, Pappvalues ​​(1.27 ± 0.13 u 0.34 ± 0.03 × 10-6 ċm/s, rispettivament) ta' ECH u ACT konkomitanti kienu tliet darbiet ogħla minn dawk (0.38 ± 0.09 u 0.10 ± 0.03 × 10−6 ċm/s, rispettivament) ta' ECH u ACT intatti (Tabella 2). L-estratt, b'differenza mill-komposti intatti, tejjeb b'mod sinifikanti t-trasport ta 'assorbiment ta' ECH u ACT.

Effett inibitorju ta 'phloridzin, phloretin, u verapamil

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3 mM) ta' phloretin ma setgħetx tintuża minħabba tossiċità notevoli taċ-ċelluli. Barra minn hekk, P-gp ġie identifikat bħala attur importanti responsabbli għall-interazzjoni bejn il-mediċini erbali u s-sottostrati P-gp klinikament importanti. Verapamil ma saħħaħx it-trasport ta 'assorbiment ta' komposti intatti (Figura 3).

It-trasport ta 'assorbiment ta' ECH u ACT fl-estratt (doża baxxa) kien inibit b'mod sinifikanti minn phloridzin (Tabella 2 u Figura 4). L-estratt fid-doża għolja soppressa inibizzjoni sensittiva għall-phloridzin, għalkemm it-trasport ta 'ECH intatt u ACT kien aktar sensittiv għal phloridzin (Tabella 2).

L-istudju tal-perfużjoni intestinali in-situ

Fi studju in-situ, ittestjajna jekk ECH u ACT fihomxEstratt ta' Cistanche tubulosaġew trasportati minn SGLT1 li jinsab fuq in-naħa apikali tal-musrana ż-żgħira. Meta l-estratt tad-dieta fid-doża baxxa (4.5 mg/ml) ġie mxerred, ECH u ACT dehru malajr fid-demm portal (Figura 5). L-AUC kien determinat bħala 2702.8 ± 384.1 μm·min għall-ECH u 698.3 ± 197.2 μm·min għall-ACT. Wara li l-AUC ġiet normalizzata b'kontenut minnEstratt ta' Cistanche tubulosa, l-ammont assorbit ma kienx differenti b'mod sinifikanti bejn ECH u ACT. SGLT1-phloridzin sensittiv, b'differenza mill-phloretin, irażżan b'mod sinifikanti t-trasport assorbenti ta' ECH konkomitanti (AUC, 649.4 ± 248.2 μm·min) u ACT (mhux misjuba).

Diskussjoni

Xi ingredjenti tal-ħxejjex huma sottostrati ta 'P-gp espressa ħafna fil-fwied, l-imsaren, il-moħħ u l-kliewi. P-gp huwa fattur determinanti għall-bijodisponibilità in vivo, dispożizzjoni, u distribuzzjoni ta' rimedji erbali, inklużi St John'swort, curcumin, echinacea, ġinseng, ginkgo, u ġinġer.[22,23]Il-bijodisponibilità tal-ġenistein{{5} }glucoside, derivat tal-flavonoid, kien limitat ukoll mit-trasportatur intestinali MRP2.[24] Għalhekk, dan l-istudju kien iddisinjat biex jinvestiga l-proprjetajiet ta’ assorbiment ta’ ECH u ACT fid-dieta u mediċinali konkomitanti.Estratt ta' Cistanche tubulosa.

Monosaffi taċ-ċelluli Polarizzati Caco{{0}}, kif ukoll l-imsaren,[25], jesprimu trasportaturi ta’ effluss tad-droga intestinali ewlenin, bħal P-gp, MRPs, u proteina tar-reżistenza għall-kanċer tas-sider.[26]Flavonojdi tad-dieta. ta' quercetin[27] u myricetin[28] intwera li jinibixxu l-effluss medjat minn P-gp kemm fil-linji taċ-ċelluli kif ukoll fil-mudelli tal-annimali. Verapamil, inibitur P-gp, ma biddilx il-permeabilità ta 'ACT u ECH madwar is-saffi ta' ċelluli Caco-2(Figura 3), li jindika li ECH u ACT intatti ma kinux limitati mill-pompa ta 'effluss P-gp. L-istudji preċedenti tagħna wrew li l-proteini MRP2 ma kinux espressi f'monosaffi taċ-ċelluli Caco-2.[29] P-gp u MRP2-effluss medjat jistgħu jiġu esklużi fit-trasport ECH u ACT. Xi glikożidi tal-quercetin b'lipofiliċità baxxa ġew assorbiti b'mod aktar effiċjenti mill-quercetin innifsu.[30] Huwa wkoll importanti li wieħed jinnota li ACT b'moety taz-zokkor huwa mqassam malajr fit-tessuti tal-moħħ. L-attenzjoni tagħna kienet iffukata fuq l-azzjoni magħquda ta 'żewġ trasportaturi tal-glukosju inenteroċiti: SGLT fil-membrana tal-bord tal-pinzell u t-trasport tal-glukożju ta' diffużjoni ffaċilitata (GLUT) fil-membrana basolaterali. Il-kultura taċ-ċelluli Caco-2 tista' tintuża bħala mudell għall-istudju ta' trasportaturi GLUT2 sensittivi għall-phloretin, SGLT1 u 2 sensittivi għall-andphloridzin.[31–34] Il-glukożju jiġi ttrasportat mill-apikali sal-basolateralside ta' monosaffi Caco-2. b'rata għolja b'Pappof 36.8 ± 1.1×10−6 ċm/s.[35] Tippossjedi Papp ogħla mill-markatur tat-trasport transċellulari propranolol (23.4 ± 2.8 × 10-6 ċm/s). Kif muri fit-Tabella 2, ECHand ACT intatti kellhom Papp ħafna aktar baxxi minn dak irrappurtat fil-glucoseand propanolol passiv. Aħna kkalkulajna l-logaritmu tal-koeffiċjent tal-qsim (ottanol-ilma), log P, ġie kkalkulat li jkun -2.32 u 0.077 għal ECH u ACT, rispettivament. Il-komposti idrofiliċi Polaror huma maħsuba li jiġu ttrasportati permezz ta' passaġġ paraċellulari (minn junctions stretti). Il-glikożidi twophenylethanoid, bħall-mannitol, jidhru li jiġu trasportati permezz ta 'rotta paraċellulari. Madankollu, phloridzin naqqas b'mod drammatiku l-permeabilità ta 'assorbiment ta' ECH u ACT intatti (Tabella 2), li tissuġġerixxi li apicalSGLT1 għandu rwol ewlieni fl-assorbiment intestinali ta 'ECH u ACT intatti. F'doża ekwivalenti, permeabilità ACT idrofobika ogħla kienet qrib il-permeabilità ECH (Figura 2 u Tabella 2). Yoshikawa et al.[36] wrew li t-trasportaturi faċilitattivi (GLUT 1 u 2), kif ukoll SGLT1 sensittiv għall-phloridzin, huma espressi b'mod intensiv fil-musrana ż-żgħira. Peress li l-ammonti assorbiti ta 'komposti huma bbażati fuq il-bilanċ tal-massa bejn l-assorbiment u l-eliminazzjoni, aħna evalwajna l-parteċipazzjoni ta' GLUT2. Glucosecrosses il-membrani apikali ta 'enteroċiti minn SGLT1 b'affinità għolja u kapaċità baxxa u joħroġ mill-membrana basolaterali permezz ta' GLUT2 b'affinità baxxa u kapaċità għolja. Phloretin (inibitur speċifiku ta 'GLUT2) ma neħħax it-trasport ta' ECH u ACT intatti (Figura 3). Funes et al.[37] wera li ACT interaġixxa b'mod qawwi mal-gruppi tal-fosfat tal-membrani fosfolipidi. Peress li l-gruppi hydroxyl huma abbundanti fl-istruttura tal-ACT, ir-rabtiet tal-idroġenu bejn dawn il-gruppi u l-irjus polari tal-gliċerol jew il-gruppi tal-fosfat tal-fosfolipidi huma l-aktar interazzjonijiet probabbli li jseħħu. Meta l-ECH intatt u l-ACT ekwivalenti tiegħu ġew inkubati b'monosaffi ta' Caco-2 għal 11-il siegħa, l-akkumulazzjoni ċellulari ta 'ACT (0.24 ± 0.04 nmol/cm2) kienet tliet darbiet akbar minn dik ta' ECH (0.07 ± 0.01 nmol/cm2). Ħsibna li SGLT1-ECH u ACT sensittivi ġew imċaqalqa bil-mod mill-enteroċiti għad-demm, li possibbilment wassal għall-lowPapp osservat. Meta mqabbel ma 'ECH idrofiliku ħafna, il-permeabilità baxxa ta' ACT tista 'tkun dovuta għal interkalazzjoni fil-membrani taċ-ċelluli.

Estratt ta' Cistanche tubulosa

Komposti polifenoliċi huma kkunsmati f'taħlitiet ta 'ħxejjex matul l-applikazzjoni klinika tagħhom u huma disponibbli kummerċjalment bħala supplimenti tad-dieta. Fi studju in-vitro, intwera li l-assorbiment tal-epicatechina fenolika ma kienx influwenzat mill-kompożizzjoni tal-ingredjenti tal-materjali tal-ikel tax-xorb.[38] B'kuntrast, Hypericum perforatumL. matriċi tal-prodott jaffettwaw it-trasport ta' quercetinglucosides (rutin u isoquercitrin) u hyperosideacross taċ-ċelloli Caco-2 minħabba differenzi fil-kompożizzjoni fitokimika matriċi u l-karatteristiċi tat-trasport, jiġifieri trasferiment paraċellulari u trasport medjat minn trasportatur jew attiv.[39] F'dan l-istudju, C. tubulosa ipprovda trasport transepiteljali tliet darbiet ogħla minn ECH u ACT intatti (Figura 2 u Tabella 2). Aħna nispekulaw li l-komponenti fil-Estratt ta' Cistanche tubulosajattiva t-trasportatur sensittiv għall-phloridzin u/jew taċċellera l-eliminazzjoni ta 'ECH intraċellulari u ACT.Estratt ta' Cistanche tubulosafid-doża għolja deher li jaħbi ħafna l-qawwa tat-trasport sensittiv għall-phloridzin (Tabella 2). Karboidrati tad-dieta[40] u proteini[41]interazzjoni ma 'xi polifenoli fil-passaġġi gastrointestinali.Morikawa et al.[10] wera li ħames iridojdi, kankanosides AD, u kankanol, monoterpene glycoside, kankanoside E, żewġ phenylethanoid oligoglycosides, kankanosides F u G, u zokkor oligo aċilat, kankanose, jistgħu jiġu iżolati mill-Estratt ta' Cistanche tubulosa

użati bħalissa. Ingredjenti oħra, inklużi proteini fil-Estratt ta' Cistanche tubulosa, jibqgħu mhux ċari. Flimkien ma 'l-ispekulazzjoni ta' hawn fuq, aħna ddisinjati biex neżaminaw jekk komponenti oħra jinteraġixxux ma 'SGLT1 u jinibixxu l-assorbiment ta' ECH u ACT.

Esperimenti in vivo ma jistgħux jiddistingwu faċilment bejn il-firxa ta 'assorbiment u l-evitar tad-dispożizzjoni tal-ewwel pass mill-fwied. Il-mudell tal-perfużjoni intestinali in-situ għandu vantaġġ fuq mudelli in-vivo u in-vitro minħabba l-kontroll faċli tal-parametri tal-esperiment u l-esklużjoni tal-impatt ta 'organi oħra u ż-żamma ta' provvista tad-demm intestinali intatta.[22] L-involviment tat-trasportatur tal-glukożju sensittiv għal thephloridzin ġie evalwat f'sistema ta' perfużjoni intestinali anin-situ. Kif muri fil-Figura 5, ammonti assorbiti ta 'ECH u ACT konkomitanti fiEstratt ta' Cistanche tubulosa (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10−6 ċm/s huma assorbiti kompletament fil-bnedmin, filwaqt li mediċini u peptidi assorbiti ħażin (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10−6 ċm/s (Tabella 2), li tissuġġerixxi bijodisponibilità orali għolja fl-annimali u l-bnedmin. Crespy et al.[43] wera li l-effluss fi studju ta' perfużjoni intestinali in-situ ma kienx differenti b'mod sinifikanti bejn phloridzin u phloretin. Huma[44] wrew ukoll li l-bijodisponibilità orali ta 'phloridzin b'sensittività għolja għal SGLT1 kienet biss 10 fil-mija fil-firien. Studji fil-ġejjieni jeħtieġ li jevalwaw il-bijodisponibilità u l-effett epatiku tal-ewwel pass tal-ECH konkomitanti wara l-għoti orali tal-estratt tad-dieta f'doża għolja. Riżultati fil-post jimplikaw li l-konsum ta 'Estratt ta' Cistanche tubulosajista' jtejjeb l-assorbiment orali baxx ta' ECH u ACT intatti.

Konklużjoni

Il-dieta u mediċinaliEstratt ta' Cistanche tubulosait-titjib tal-assorbiment intestinali tal-ECH u l-ACT jista' jservi biex timmaniġġja aħjar is-saħħa tal-bniedem, għalkemm l-involviment tat-trasport sensittiv għall-phloridzin għandu jitnaqqas.

Dikjarazzjonijiet

Kunflitt ta' interessi

L-Awtur(i) jiddikjara(w) li m'għandhom l-ebda kunflitt ta' interess x'jiżvelaw

Finanzjament

Dan ix-xogħol kien parzjalment appoġġjat mill-High-Tech ResearchCenter mill-Università Kinki.

Rikonoxximenti

L-awturi jixtiequ jirringrazzjaw lil Osamu Muraoka (Università ta' Kinki, Osaka, Ġappun) u Toshio Morikawa (Università ta' Kinki, Osaka, Ġappun) għall-provvista ta'Estratt ta' Cistanche tubulosaukostitwenti puri. Aħna grati ħafna lil Masahiro Iwaki (Kinki University) għall-appoġġ għall-istudju.

Estratt ta' Cistanche tubulosaprodotti

Minn: ' Trasport sensittiv għal Phloridzin ta' echinacoside u acteoside u rotta mibdula ta' assorbiment intestinali wara l-applikazzjoni ta'Estratt ta' Cistanche tubulosa'minnTadatoshi Tanino et al

---© 2015 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, pp. 1457–1465,Phenylethanoid glucosides trasportati minn SGLT1

Referenzi

1. Tanaka J et al. Effett ta'Estratt ta' Cistanche tubulosafuq diversi mard tal-moħħ. Stil tal-Ikel 21 2008; 12: 24–26.

2. Tanaka J et al. Funzjonijiet kontra t-tixjiħ taEstratt ta' Cistanche tubulosa. Stil tal-Ikel 21 2008; 12: 27–29.
3. Tanaka J et al. Funzjonijiet tat-tkabbir tas-sbuħija u tax-xagħar taEstratt ta' Cistanche tubulosa. Stil tal-Ikel 21 2008; 12: 29–32.
4. Tanaka J et al. Effett metabolizzanti tax-xaħam ta 'Estratt ta' Cistanche tubulosa. Stil tal-Ikel 21 2008; 12: 30–33.
5. Yoshizawa F et al. Il-kostitwenti ta' Cistanche tubulosa Schrenk (Hook) f.II. iżolament u struttura ta 'phenylethanoid glycoside ġdid u neolignan glycoside ġdid. Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M et al. Phenylethanoid oligoglycosides u oligosugars acylated b'attività vasorelaxant minn Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF et al. Analiżi ta 'phenylethanoid glycosides ta' Herba ċistanzi minn RP-HPLC. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294–300.
8. Lei L et al. Regolazzjoni metabolika ta 'phenylethanoid glycosides minn Herba cistanches fil gastrointestinali tal-klieb. Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432–435.
9. Geng X et al. Effetti newroprotettivi ta 'echinacoside fil-mudell MPTP tal-ġurdien tal-marda ta' Parkinson. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66–74.
10. Morikawa T et al. Acylate phenylethanoid oligoglycosides b'attività epatoprotective mill-pjanta tad-deżert Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882–1890.
11. Paola RD et al. Effetti ta 'verbascoside, ippurifikat bijoteknoloġikament minn kulturi taċ-ċelluli tal-pjanti Syringa Vulgaris, f'mudell ta' annimali gerriema ta 'periodontite. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 707–717.
12. Wu YT et al. Determinazzjoni ta 'acteoside f'Cistanche deserticola u Boschniakia rossica u l-farmakokinetika tagħha fil-firien li jiċċaqilqu liberament bl-użu ta' LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89–95.
13. Matthias A et al. Studji ta' permeabilità ta' alkylamides u konjugati ta' aċidu kaffejku mill-echinacea bl-użu ta' mudell ta' monosaff taċ-ċelluli caco-2. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7–13.
14. Jia C et al. Determinazzjoni ta 'echinacoside fis-serum tal-firien bil-kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja b'fażi inversa b'detezzjoni ultravjola u l-applikazzjoni tagħha għall-farmakokinetika u l-bijodisponibilità. J Chromatogr 2006; 844: 308–313.
15. Cardinali A et al. Verbascosides mill-ilma tal-mitħna taż-żebbuġ: valutazzjoni tal-bijoaċċessibbiltà u l-assorbiment intestinali tagħhom bl-użu ta' sistema mudell ta' diġestjoni/caco-2 in vitro. J Food Sci 2011; 176: H48–H54.
16. Jia C et al. Metaboliżmu ta 'echinacoside, antiossidant tajjeb, fil-firien: iżolament u identifikazzjoni tal-metaboliti biljari tiegħu. Drug Metab Dispos 2009; 37: 431–438.
17. Najar IA et al. Modulazzjoni tal-attività tal-ATPase tal-glikoproteina P minn xi fitokostitwenti. Phytother Res 2009; 24: 454–458.
18. Walgren RA et al. Effluss ta' flavonoid tad-dieta quercetin 4′-beta-glukoside tul is-saffi ta' ċelluli caco-2 intestinali umani minn proteina apicali assoċjata mar-reżistenza għal ħafna mediċini-2. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830–836.
19. Walgren RA et al. It-teħid ċellulari ta 'quercetin flavonoid tad-dieta 4′-beta-glucosidase minn trasportatur tal-glukożju SGLT1 li jiddependi mis-sodju. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837–843.
20. Mihara K et al. Metaboliżmu intestinali first-pass ta' eperisone fil-far. Pharm Res 2001; 18: 1131–1137.
21. Isacchi B et al. Attività kontra l-iperalġeżija ta 'verbascoside f'żewġ mudelli ta' uġigħ newropatiku. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 594–601.

22. Cook TJ et al. Permeabilità intestinali ta 'chlorpyrifos bl-użu tal-metodu ta' perfużjoni intestinali b'pass wieħed fil-far. Tossikoloġija 2003; 184: 125–133.

23. Kumar YS et al. Interazzjoni tad-droga veġetali medjata minn P-glikoproteina u ċitokromu P-450-. Drug Metabol Drug Interact 2010; 25: 3–16.
24. Walle UK et al. Trasport ta' genistein-7-glucoside miċ-ċelluli CACO-2 intestinali umani: rwol potenzjali għal MRP2. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45–56.
25. Ito K et al. Espressjoni tal-wiċċ apikali/bażolaterali tat-trasportaturi tad-droga u r-rwol tagħha fit-trasport vettorjali tad-droga. Pharm Res 2005; 22: 1559–1577.
26. Laitinen L et al. Kulturi taċ-ċelluli caco-2 fil-valutazzjoni tal-assorbiment intestinali: effetti ta 'xi mediċini ko-amministrati u komposti naturali f'matriċi bijoloġiċi. (Università ta’ Ħelsinki, il-Finlandja, 2006) Dissertazzjoni Akkademika, pp. 1–66.
27. Scambia G et al. Quercetin isaħħaħ l-effett ta 'adriamycin f'linja taċ-ċelluli tal-kanċer tas-sider uman MCF-7 reżistenti għal ħafna mediċini: P-glycoprotein bħala mira possibbli. Cancer Chemother Pharmacol 1994; 34: 459–464.
28. Choi DH et al. Effett ta' myricetin, antiossidant, fuq il-farmakokinetika ta' losartan u l-metabolit attiv tiegħu, EXP-3174, fil-firien: rwol possibbli taċ-ċitokrom P450 3A4, ċitokromu P450 2C9 u P- inibizzjoni tal-glikoproteina minn myricetin. J Pharm Pharmacol 2010; 62: 908–914.
29. Tanino T et al. Il-prodrug ta' Paclitaxel-2′-ethylcarbonate jista' jevita l-effluss ċellulari medjat mill-P-glycoprotein biex iżid iċ-ċitotossiċità tal-mediċina. Pharm Res 2007; 24: 555–565.
30. Hollman PC et al. Assorbiment ta ' glikożidi quercetin tad-dieta u quercetin f'voluntiera b'saħħithom ileostomy. Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276–1282.
31. Kellett GL et al. Il-komponent diffużiv tal-assorbiment tal-glukożju intestinali huwa medjat mir-reklutaġġ indott mill-glukożju ta 'GLUT2 mal-membrana tal-bord tal-pinzell. Biochem J 2000; 350: 155–162.
32. Materja K et al. L-għażla tal-proteini endoġeni tal-membrana tal-plażma sseħħ minn żewġ siti f'ċelloli epiteljali intestinali tal-bniedem kultivati ​​(Caco-2). Ċellula 1990; 60: 429–437.
33. Mahraoui L et al. Preżenza u espressjoni differenzjali ta' mRNAs tat-trasportaturi ta' hexose SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3, u GLUT5 fi kloni taċ-ċelluli Caco-2 fir-rigward tat-tkabbir taċ-ċelluli u l-konsum tal-glukosju. Biochem J 1994; 298: 629–633.

34. Mesonero J et al. Espressjoni dipendenti fuq iz-zokkor tat-trasportatur tal-fruttożju GLUT 5 fiċ-ċelloli Cac-2. Biochem J 1995; 312: 757–762.

35. Walgren RA et al. Trasport ta' quercetin u l-glukosidi tagħha tul iċ-ċelloli Caco-2 epiteljali intestinali umani. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721–1727.
36. Yoshikawa T et al. Espressjoni komparattiva ta 'trasportaturi hexose (SGLT1, GLUT1, GLUT2, u GLUT5) matul il-passaġġ gastrointestinali tal-ġrieden. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183–194.
37. Funes L et al. Effetti ta 'verbascoside, phenylpropanoid glycoside minn verbena tal-lumi, fuq membrani mudell ta' fosfolipidi. Chem Phys Lipids 2010; 163: 190–199.
38. Neilson AP et al. Influwenza tal-kompożizzjoni tal-matriċi taċ-ċikkulata fuq il-bijoaċċessibbiltà tal-flavan-3-ol tal-kawkaw in vitro u l-bijodisponibilità fil-bnedmin. J Agric Food Chem 2009; 57: 9418–9426.
39. Gao S et al. Kontenuti varjabbli ħafna ta 'fenoli fil-prodotti tal-wort ta' San Ġwann jaffettwaw it-trasport tagħhom fil-mudell taċ-ċelluli Caco-2 intestinali tal-bniedem: raġuni farmaċewtika u bijofarmaċewtika għall-istandardizzazzjoni tal-prodott. J Agric Food Chem 2010; 58: 6650–6659.
40. Schramm DD et al. Effetti tal-ikel fuq l-assorbiment u l-farmakokinetika tal-flavanols tal-kawkaw. Life Sci 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C et al. L-etanol u l-matriċi ta 'l-inbid ħieles mill-polifenoli jistimulaw id-divrenzjar taċ-ċelloli Caco-2 intestinali umani. Influwenza tal-assoċjazzjoni tagħhom ma 'estratt taż-żerriegħa tal-għeneb b'ħafna procyanidin. J Agric Food Chem 2005; 53: 5541–5548.
42. Artursson P et al. Korrelazzjoni bejn l-assorbiment orali tad-droga fil-bnedmin u l-koeffiċjenti apparenti tal-permeabilità tad-droga fiċ-ċelloli epiteljali interni umani (Caco-2). Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880–885.
43. Crespy V et al. Tqabbil ta 'l-assorbiment intestinali ta' quercetin, phloretin, u l-glukosidi tagħhom fil-firien. J Nutr 2001a; 131: 2109–2114.
44. Crespy V et al. Il-bijodisponibilità ta' phloretin u phloridzin fil-firien. J Nutr 2001b; 131: 3227–3230.