L-estratti ta' Cistanche huma utli għat-trattament tal-PD (marda ta' Parkinson)?

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com

Introduzzjoni: Il-mutazzjoni DJ-1 hija raġuni kawżali għal familjalimarda ta' Parkinson(PD). Leucine166Proline (L166P) u C106S huma żewġ mutazzjonijiet importanti ta' DJ-1. F'dan l-istudju, waqqafna mudelli ċellulari ta' newroblastoma trasfettata (SH-SY5Y) ta' L166P u C106S DJ-1-indotta minn perossidu ta' l-idroġenu (H, O,marda ta' Parkinson) u investigat l-effetti ta’Estratti ta' Cistancheu komposti bijoattivi ewlenin, inklużi acteoside, echinacoside, caffeic acid, u Cistanche totali glycosides fuq dawn iż-żewġ mudelli. Metodi: Wara li jesprimu l-plażmidi L166P u C106S DJ-1 b'tikketta FLAG f'Escherichia coli, il-plażmidi espressi ġew miġbura, ittrattati b'enzima ta' restrizzjoni, u identifikati bl-użu ta' elettroforeżi tad-DNA. Wara l-purifikazzjoni, il-plażmidi L166P DJ-1 u C106S DJ-1 ġew trasfettati separatament f'ċelloli SH-SY5Y bl-użu ta' liposomi. Ċelloli SH-SY5Y trasfettati ġew skoperti permezz ta 'western blotting u immunocytochemistry. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet iddeterminata bl-użu ta' analiżi MTT.

Riżultati: Kemm il-western blotting kif ukoll l-immunoċitokimika wrew li L166P u C106S DJ-1 kienu espressi ħafna fiċ-ċelloli SH-SY5Y trasfettati. Assays MTT wrew li t-trasfezzjoni b'L166P jew C106S DJ-1 naqqset il-vijabbiltà taċ-ċelloli SH-SY5Y esposti għal H, O, meta mqabbla ma' ċelloli SH-SY5Y mhux trasfettati. Barra minn hekk,Estratti ta' Cistancheu komposti bijoattivi ewlenin, inklużi acteoside, echinacoside, caffeic acid, u Cistanche totali glycosides, inibixxu b'mod sinifikanti t-tnaqqis tal-vijabbiltà taċ-ċelluli kkawżati minn H, O, inL166P, u C106S DJ-1-ċelluli SH-SY5Y trasfettati. Konklużjonijiet: Dawn is-sejbiet jissuġġerixxu li waqqafna b'suċċess mudelli ta' ċelluli SH-SY5Y ta' PD sensittivi u stabbli H, O, indotti L166P DJ-1-u C106S DJ-1-trasfettati.(marda ta' Parkinson)uEstratti ta' Cistanchegħalhekk jista' jkun utli għall-kura tal-PD(marda ta' Parkinson).

Cistancheestratt għandu ħafna benefiċċji

Agħfas HAWN GĦALL-PARTI 1

DISKUSSJONI

Mutazzjonijiet ta 'DJ-1 huma ta' assoċjazzjoni mill-qrib ma 'PD awtosomali reċessiv ta' okkorrenza bikrija(marda ta' Parkinson)(Bonifati et al., 2003; Park et al., 2015). F'familja Taljana waħda, il-kawża hija mutazzjoni missense f'DJ‐1 (L166P) (Bonifati et al., 2003). Leu‐166 lokalizzat fin-nofs tal-helix C-terminal (Bonifati et al., 2003). Il-preżenza ta’ Pro, helix breaker qawwi, x’aktarx tiddestabilizza l-helix terminali fil-mutant DJ‐1 (Bonifati et al., 2003), li twassal għall-iżvolġiment tal-porzjon C‐terminal tal-proteina, li tfixkel l-omo- oligomerizzazzjoni (Bonifati et al., 2003). F'ċelluli trasfettati, L166P DJ‐1 huwa instabbli minħabba degradazzjoni eċċessiva (Bonifati et al., 2003; Gorner et al., 2004; Moore, Zhang, Dawson, & Dawson, 2003). Bonifati et al. (2003) issuġġerixxa li l-mutazzjoni L166P tfixkel l-omodimerizzazzjoni u l-funzjoni normali ta’ DJ-1, u għalhekk twassal għall-bidu bikri tal-PD(marda ta' Parkinson).

F'dan l-istudju, sibna li L166P DJ-1 huwa preżenti f'polimeru/kumpless b'massa molekulari ta' 70 kDa f'ċelloli SH-SY5Y trasfettati. L-istruttura ta' DJ-1 kienet preżunta li tadotta l-istess struttura a/ sandwich bħall-protease PH1704 (Bonifati et al., 2003). Minħabba l-istrutturi simili ta' DJ-1 u PH1704, aħna assumejna li, bħal PH1704, DJ-1 jifforma aggregati ogħla (trimers ta' dimmers). Gorner et al. (2004) wera li fi ħdan iċ-ċelloli trasfettati u l-limfoċiti tal-PD(marda ta' Parkinson)pazjenti, monomeriku L166P DJ-1 huwa preżenti fi ħdan l-istrutturi ogħla fiċ-ċelloli u l-limfoċiti trasfettati tal-PD(marda ta' Parkinson)pazjenti. Dan jista' jkun riżultat dirett ta' tiwi ħażin tal-proteina L166P DJ-1 jew il-formazzjoni ta' kumplessi bejn L166P DJ-1 monomeriku u proteini oħra. Barra minn hekk, minbarra l-istruttura tal-proteina, il-mutazzjoni L166P DJ-1 bidlet ukoll il-funzjoni antiossidativa ta 'DJ-1(Macedo et al.,2003; Taira et al,2004). Dan huwa notevoli, peress li l-istress ossidattiv huwa fattur importanti fil-PD(marda ta' Parkinson), u ċelluli SH-SY5Y trasfettati b'L166P DJ-1 kienu aktar sensittivi għal H, O, minn ċelluli mhux trasfettati. Flimkien mar-riċerka preċedenti li ċ-ċelloli SH-SY5Y trasfettati minn DJ-1 tat-tip selvaġġ ġew stabbiliti b'suċċess fil-laboratorju tagħna (Zhang, Wang, & Pu, 2007), nissuġġerixxu li H, O, indotta L166P DJ{{10 }}ċelluli SH-SY5Y trasfettati huma mudell ċellulari ġdid utli ta' PD(marda ta' Parkinson).

Cistancheestratt jista jipprevjenimarda ta' Parkinson

DJ-1 ġie rrappurtat li jnaqqas l-istress ossidattiv (Taira et al, 2004; Zhou & Freed, 2005). Wieħed mill-mekkaniżmi huwa l-ossidazzjoni tal-proteina nnifisha (Taira et al., 2004). Fost it-tliet residwi Cys ta' DJ-1, Cys-106 huwa l-aktar sensittiv għall-istress ossidattiv. Barra minn hekk, il-

funzjoni antiossidativa ta' DJ-1hija regolata permezz ta' ossidazzjoni ta' Cys-106 (Freed & Zhou, 2006), u mutazzjoni ta' Cys-106twassal għal telf tal-funzjoni antiossidativa ta' DJ-1 (Blackinton et al,2009; Kinumi, Kimata, Taira, Ariga, & Niki,2004).DJ-1 jaġixxi wkoll bħala chaperone molekulari li jinibixxi l-formazzjoni ta' aggregati ta' -synuclein(Shendelman et al.,2004)meta Cys-106 huwa ossidizzat għal aċidu sulfiniku (Zhou & Freed, 2005). Dawn is-sejbiet jindikaw li Cys-106 huwa kontributur ewlieni għall-funzjoni xierqa tad-DJ-1. Kif muri fit-Tabella 1, ċelluli SH-SY5Y trasfettati b'C106S DJ-1 kienu aktar sensittivi għal H, O, milli ċelluli mhux trasfettati. Ibbażat fuq ir-riċerka preċedenti (Zhang et al., 2007), dan jissuġġerixxi wkoll ċelluli SH-SY5Y trasfettati C106S DJ-1-H, O, indotti jistgħu wkoll ikunu mudell ċellulari utli ta' PD(marda ta' Parkinson).

Bl-użu ta' ċelloli SH-SY5Y trasfettati b'L166P DJ-1 jew C106S DJ-1, aħna skoprejna l-effett ta 'estratti Cistancheu komposti bijoattivi ewlenin, inklużi acteoside, echinacoside, caffeic acid, u Cistanche totali glycosides fuq HO, indott tnaqqis fil-vijabbiltà taċ-ċelluli. Ir-riżultati preżenti juru li acteoside, echinacoside, caffeic acid, u Cistanche totali glycosides kollha żiedu l-vijabbiltà taċ-ċelluli b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni, li jindikaw relazzjoni stabbli u lineari bejn L166P DJ-1u C106S DJ-1 livelli u l-vijabilità taċ-ċelluli SH-SY5Y.

Fil-qosor, stabbilixxejna b'suċċess mudelli ta' ċelluli SH-SY5Y ta' PD sensittivi u stabbli indotti minn H, O2 L166P DJ-1-u C106S DJ-1-trasfettati.(marda ta' Parkinson)u kkonferma liEstratti ta' Cistanchetejbet in-newrotossiċità indotta minn H, O, f'dawn iż-żewġ mudelli. Aħna nantiċipaw li dawn iż-żewġ mudelli ċellulari se jintużaw b'mod effettiv għall-PD(marda ta' Parkinson)riċerka uEstratti ta' Cistanchegħalhekk jista' jkun utli għall-kura tal-PD(marda ta' Parkinson)fil-futur.

Benefiċċji ta 'estratti Cistanche: anti-marda ta' Parkinson

REFERENZI

1. Abou‐Sleiman, PM, Healy, DG, Quinn, N., Lees, AJ, & Wood, NW (2003). Ir-rwol ta' mutazzjonijiet patoġeniċi DJ-1 fil-marda ta' Parkinson. Annals of Neurology, 54, 283–286. https://doi.org/10.1002/ (ISSN)1531‐8249

2. Andres‐Mateos, E., Perier, C., Zhang, L., Blanchard‐Fillion, B., Greco, TM, Thomas, B., … Dawson, VL (2007). It-tħassir tal-ġene DJ-1 juri li DJ-1 huwa perossidasi atipiku bħal perossiredoxin. Proċedimenti tal-Akkademja Nazzjonali tax-Xjenzi tal-Istati Uniti tal-Amerika, 104, 14807–14812. https://doi.org/10.1073/pnas.0703219104

3. Biosa, A., Sandrelli, F., Beltramini, M., Greggio, E., Bubacco, L., & Bisaglia, M. (2017). Sejbiet reċenti dwar il-funzjoni fiżjoloġika ta 'DJ-1: Lil hinnmarda ta' Parkinson. Newrobijoloġija tal-Mard, 108, 65-72. https://doi.org/10.1016/j.nbd.2017.08.005

4. Blackinton, J., Lakshminarasimhan, M., Thomas, KJ, Ahmad, R., Greggio, E., Raza, AS, Wilson, MA (2009). Il-formazzjoni ta 'aċidu sulfiniku ta' cysteine ​​stabilizzat hija kritika għall-funzjoni mitokondrijali tal-proteina tal-parkinsoniżmu DJ-1. Ġurnal tal-Kimika Bijoloġika, 84, 6476–6485. https://doi.org/10.1074/jbc.M806599200

5. Bonifati, V., Rizzu, P., Squitieri, F., Krieger, E., Vanacore, N., van Swieten; JC, … Heutink, P. (2003). DJ‐1 (DJ‐1), huwa ġene ġdid għal parkinsoniżmu awtosomali reċessiv, li jibda kmieni. Xjenzi Newroloġiċi, 24, 159–160. https://doi.org/10.1007/s10072-003-0108-0

6. Bonifati, V., Rizzu, P., van Baren, MJ, Schaap, O., Breedveld, GJ, Krieger, E., … van Swieten, JC, et al. (2003). Mutazzjonijiet fil-ġene DJ-1 assoċjati ma' parkinsoniżmu awtosomali reċessiv bikri. Xjenza, 299, 256–259.

7. Burke, RE, & O'Malley, K. (2013). Deġenerazzjoni axon fil-marda ta 'Parkinson. Newroloġija Sperimentali, 246, 72–83. https://doi.org/10.1016/j. expneurol.2012.01.011

8. Dexter, DT, Carter, C., Wells, FR, Javoy‐Agid, FJ, Agid, Y., Lees, AJ, Marsden, CD (1989). Il-perossidazzjoni tal-lipidi bażali fis-sustanza nigra hija miżjudamarda ta' Parkinson. Journal of Newrochemistry, 52, 381– 389. https://doi.org/10.1111/j.1471

9. Dexter, DT, Holley, AE, Flitter, WD, Slater, TF, Wells, FR, Daniel, SE, … Marsden, CD (1994). Livelli miżjuda ta 'idroperossidi tal-lipidi fil-parkinsonian substantia nigra: Studju HPLC u ESR. Disturbi tal-Moviment, 9, 92–97.

10. Freed, CR, & Zhou, W. (2006). DJ-1 jipproteġi n-newroni tad-dopamina permezz ta 'attivazzjoni selettiva jew ta' glutathione jew proteina ta 'xokk tas-sħana. Newroloġija Sperimentali, 198, 558–597.

11. Glizer, D., & MacDonald, PA (2016). Taħriġ konjittiv fiParkinson'smard: Reviżjoni ta' studji mill-2000 sal-2014.Parkinson'sMard, 2016, 9291713. https://doi.org/10.1155/2016/9291713

12. Gorner, K., Holtorf, E., Odoy, S., Nuscher, B., Yamamoto, A., Regula, JT,Kahle, PJ (2004). Effetti differenti ta'Parkinson'smard‐mutazzjonijiet assoċjati fuq l-istabbiltà u t-tiwi ta’ DJ‐1. Ġurnal tal-Kimika Bijoloġika, 279, 6943–6951. https://doi.org/10.1074/jbc.M3092

13. Hague, S., Rogaeva, E., Hernandez, D., Gulick, C., Singleton, A., Hanson, M., … St George‐Hyslop, PH, et al. (2003). Bidu bikriParkinson'smardikkawżat minn mutazzjoni DJ-1 eterozigota komposta. Annals of Neurology, 54, 271–274. https://doi.org/10.1002/(ISSN)1531‐8249

14. Kim, RH, Peter, M., Jang, YJ, Shi, W., Pintilie, M., Fletcher, GC, … Bray, MR, et al. (2005). DJ‐1, regolatur ġdid tas-soppressor tat-tumur PTEN. Ċellula tal-Kanċer, 7, 263–273. https://doi.org/10.1016/j. ccr.2005.02.010

15. Kinumi, T., Kimata, J., Taira, T., Ariga, H., & Niki, E. (2004). Cysteine-106 ta 'DJ-1 huwa l-aktar residwu cysteine ​​sensittiv għall-ossidazzjoni medjata mill-perossidu tal-idroġenu in vivo fiċ-ċelloli endoteljali tal-vina umbilikali tal-bniedem. Komunikazzjonijiet tar-Riċerka Bijokimika u Bijofiżika, 317, 722–728. https://doi.org/10.1016/j.bbrc.2004.03.110

16. Kitada, T., Asakawa, S., Hattori, N., Matsumine, H., Yamamura, Y., Minoshima, S., … Shimizu, N. (1998). Mutazzjonijiet fil-ġene tal-parkin jikkawżaw parkinsoniżmu taż-żgħażagħ awtosomali reċessiv. Natura, 392, 605– 608. https://doi.org/10.1038/33416

17. Macedo, MG, Anar, B., Bronner, IF, Cannella, M., Squitieri, F., Bonifati, V., … Rizzu, P. (2003). Il-proteina mutanti DJ‐1 L166P assoċjata ma' bidu bikriParkinson'smardhija instabbli u tifforma kumplessi ta’ proteini ta’ ordni ogħla. Ġenetika Molekulari tal-Bniedem, 12, 2807–2816.

18. Moore, DJ, Zhang, L., Dawson, TM, & Dawson, VL (2003). Mutazzjoni missense (L166P) f'DJ-1, marbuta ma' familjaliParkinson'smard, tagħti stabilità mnaqqsa tal-proteini u tfixkel l-omo-oligomerizzazzjoni. Ġurnal ta 'Newrokimika, 87, 1558–1567. https://doi.org/10.1111/ (ISSN)1471‐4159

19. Mullard, A. (2017). Droga tad-dijabete turi wegħda filParkinson'smard. Reviżjonijiet tan-Natura. Drug Discovery, 16, 593.

20. Nagakubo, D., Taika, T., Kitaura, H., Ikeda, M., Tamai, K., Iguchi‐Ariga, SMM, & Agria, H. (1997). , Onkoġen ġdid li jittrasforma ċ-ċelloli NIH3T3 tal-ġurdien b'kooperazzjoni ma 'ras. Komunikazzjonijiet tar-Riċerka Bijokimika u Bijofiżika, 231, 509–513. https://doi. org/10.1006/bbrc.1997.6132

21. Nikam, S., Nikam, P., Ahaley, SK, & Sontakke, AV (2009). Stress ossidattiv fiParkinson'smard. Ġurnal Indjan tal-Bijokimika Klinika, 24, 98-101. https://doi.org/10.1007/s12291-009-0017-y

22. Niki, T., Takahashi‐Niki, T., Taira, T., Iguchi‐Ariga, SMM, & Agria, H. (2003). DJBP: Proteina ġdida li torbot DJ-1, tirregola b'mod negattiv ir-riċettur ta' l-androġenu billi tirrekluta l-kumpless ta' histone deacetylase, u DJ-1 jantagonizza din l-inibizzjoni bl-abrogazzjoni ta' dan il-kumpless. Riċerka tal-Kanċer Molekulari, 1, 247–261.

Benefiċċji ta'Cistancheestratti: trattamentParkinson'smard