għal aktar informazzjoni:ali.ma@wecistanche.com

Pls ikklikkja hawn għall-Parti 2

Yasaman Alaghbanda,b,c, Janine L. Kwapisa,b,d, Alberto J. Lópeza,b,c, André O. Whitea,b,c,3, Osasumwen V. Aimiuwua,b,c,1, Amni Al- Kachaka,b,c,2, Kasuni K. Bodinayakea,b,c,

Nicole C. Oparaugoa,b,c, Richard Danga,b,d, Mariam Astarabadia,b,c,4, Dina P. Matheosa,b, and Marcelo A. Wooda,b,c,d

a301 Qureshey Research Lab, Dipartiment tan-Newrobijoloġija u l-Imġieba, Ċentru għall-

Newrobijoloġija tat-Tagħlim uMemorja, Università ta’ Kalifornja, Irvine, Irvine, California, 92697 ċentri għan-Newrobiology of Learning andMemorja(CNLM), Irvine, California, 92697 c

Irvine Center for Addiction Newroscience (ICAN), Università ta' Kalifornja, Irvine, California,92697d Istitut għalMemorjaIndebolimenti u Disturbi Newroloġiċi, Università ta’ Kalifornja, Irvine,

Ikklikkja biexCistanche tubulosa benefiċċji u effetti sekondarji għat-titjib tal-memorja

Astratt

Histone deacetylases (HDACs) huma enzimi li jimmodifikaw il-kromatina li ġew implikati bħala regolaturi negattivi qawwija ta'memorjaproċessi. HDAC3 intwera li għandu rwol ċentrali fil-memorja fit-tul għall-lokazzjoni tal-oġġett kif ukoll l-estinzjoni tal-kokaina assoċjatamemorja, iżda mhuwiex ċar jekk din il-funzjoni tiddependix fuq id-dominju tad-deacetylase ofHDAC3. Hawnhekk, ittestjajna jekk id-dominju tad-deacetylase ofHDAC3 għandux rwol fil-lokazzjoni tal-oġġettmemorjaformazzjoni kif ukoll il-formazzjoni u l-estinzjoni ta’ memorji assoċjati mal-kokaina. Bl-użu ta 'deacetylase-dead point mutant ta' HDAC3, sibna li l-imblukkar selettiv tal-attività deacetylase HDAC3 fl-ippocampus dorsali saħħaħ il-memorja fit-tul għall-lokazzjoni tal-oġġett, iżda ma kellu l-ebda effett fuq il-formazzjoni ta 'memorja assoċjata mal-kokaina. Meta dan l-istess virus mutant ta’ punt ta’ HDAC3 ġie infuż fil-kortiċi prelimbiċi, naqas li jaffettwa assoċjati mal-kokaina.memorjaformazzjoni. Fir-rigward tal-estinzjoni, it-tfixkil tad-dominju HDAC3 deacetylase fil-kortiċi infralimbika ma kellu l-ebda effett fuq l-estinzjoni, iżda ġie osservat effett ta 'estinzjoni ffaċilitat meta l-virus mutant tal-punt ġie kkunsinnat lill-ippokampus dorsali. Dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li d-dominju tad-deacetylase ta’ HDAC3 għandu rwol selettiv f’reġjuni speċifiċi tal-moħħ sottostanti fit-tul.memorjaformazzjoni tal-lokazzjoni tal-oġġett kif ukoll assoċjati mal-kokainamemorjaformazzjoni u estinzjoni.

Kliem ewlieni

memorja fit-tul; epiġenetika; kromatina; il-post tal-oġġett; preferenza ta' post kundizzjonat; ippokampus dorsali

Introduzzjoni

L-aċetilazzjoni tal-histone hija mekkaniżmu li jimmodifika l-kromatina studjat sew involut fir-regolazzjoni tal-espressjoni tal-ġeni meħtieġa għalmemorja. Bosta studji wrew li l-aċetilazzjoni tal-histone hija involuta fit-tulmemorjaformazzjoni (egreviewed in Levenson and Sweatt, 2006; McQuown and Wood, 2011; Gräffand Tsai, 2013; Peixoto and Abel, 2013; Penney and Tsai 2014). L-aċetilazzjoni tal-histone titwettaq minn histone acetyltransferases u histone deacetylases (HDACs), li b'mod ġenerali jiffaċilitaw u jrażżnu l-espressjoni tal-ġeni, rispettivament (Jenuwein u Allis 2001; Kouzarides, 2007). Histone deacetylase 3 (HDAC3) huwa l-HDAC tal-Klassi I l-aktar espress ħafna fil-moħħ, u dan l-HDAC speċifiku huwa regolatur negattiv qawwi tal-proċessi tat-tagħlim u l-memorja (Kwapis et al., 2017; Malvaez et al., 2013; McQuown et al. ., 2011; Rogge et al., 2013). Il-laboratorju tagħna wera li l-HDAC3 għandu rwol kritiku fil-lokazzjoni tal-oġġett u l-formazzjoni tal-memorja relatata mal-biża '(McQuown et al., 2011; Kwapis et al., 2017) bl-użu ta' manipulazzjonijiet speċifiċi tal-HDAC3 tal-hippocampus u l-amigdala. Aħna wrejna wkoll li l-inibizzjoni tal-HDAC3 tiffaċilita l-estinzjoni tal-imġieba li tfittex id-droga b'mod li jimblokka r-riintegrazzjoni (Malvaez et al., 2013). L-esperimenti ta' estinzjoni f'Malvaez et al (2013) użaw inibitur selettiv HDAC3 mogħti b'mod sistemiku, u għalhekk ma stajniex nidentifikaw liema reġjuni tal-moħħ huma l-aktar importanti għall-modulazzjoni tal-estinzjoni dipendenti fuq HDAC3-.

HDAC3 innifsu għandu attività deacetylase qawwija (Guenther et al., 2002; Lahm et al., 2007; Zhang et al., 2002), u jassoċja ma 'HDAC4/HDAC5 permezz ta' interazzjonijiet mal-corepressor tar-riċettur nukleari ko-repressor (NCoR) biex jiffurmaw kumpless ta' repressuri multi-proteini funzjonali (Guenther et al., 2001; Fischle et al., 2002; Alenghat et al., 2008). Idea waħda hija li dawn il-kumplessi multi-proteini jistgħu jkunu meħtieġa għad-deacetylation minħabba li HDAC4 għandu ftit jew xejn attività katalitika fuq substrati kanoniċi acetyl-lysine (Lahm et al., 2007). HDAC4 intwera li jimmodulamemorjaindipendenti mid-dominju tad-deacetylase tagħha (Sando et al., 2012). Barra mill-qasam tat-tagħlim umemorja, HDAC3-espressjoni tal-ġeni medjata f'tessuti oħra mhux neċessarjament teħtieġ funzjoni enżimatika HDAC3 (Sun et al., 2013), li tissuġġerixxi li forsi l-attività deacetylase ofHDAC3 tista 'ma tkunx meħtieġa għall-formazzjoni tal-memorja. Sa ftit ilu, l-attività deacetylase ofHDAC3 fil-formazzjoni tal-memorja ma kinitx ġiet ittestjata direttament. Kwapis u l-kollegi (2017) wrew li tabilħaqq l-attività enżimatika ta’ HDAC3 hija meħtieġa għal forom ta’ amygdala dipendenti.memorjaformazzjoni.

Studji preċedenti kienu wrew li l-amministrazzjoni sistemika ta’ inibitur HDAC3 tista’ tiffaċilita kemm il-formazzjoni tal-lokazzjoni tal-oġġett.memorja(OLM) kif ukoll l-estinzjoni tal-kokaina-kuntest assoċjatimemorja(Malvaez et al., 2013). Madankollu, jekk l-attività deacetylase ofHDAC3 hijiex meħtieġa għall-lokazzjoni tal-oġġettmemorjaOLM fl-ippokampus, u l-estinzjoni tal-memorja assoċjata mal-kuntest tal-kokaina fil-kortiċi infralimbiċi għadha mhix ċara. Fl-istudju attwali, immirajna speċifikament l-attività tad-deacetylase ta’ HDAC3 fil-formazzjoni tal-memorja dipendenti mill-ippokampus kif ukoll fl-ippokampus dorsali (DH), il-kortiċi prelimbiċi (PrL), u l-kortiċi infralimbiċi (IL) fir-rigward tal-akkwist u l-estinzjoni ta’ preferenza tal-post ikkundizzjonat mill-kokaina, jew assoċjata mal-kuntest tal-kokainamemorjaproċessi.

Materjali u metodi

Suġġetti

Il-proċeduri kollha ġew approvati mill-Università ta 'Kalifornja, il-Kumitat Istituzzjonali għall-Kura tal-Annimali, u l-Użu ta' Irvine u kienu konformi mal-linji gwida tal-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa. Il-ġrieden kellhom 8-12-il ġimgħa u kellhom aċċess għall-ikel u l-ilma ad libitum fil-gaġeġ tad-dar tagħhom bid-dwal miżmuma fuq ċiklu ta 'dawl/dlam ta' 12-il siegħa. L-ittestjar tal-imġieba sar matul il-parti ħafifa taċ-ċiklu. Is-suġġetti kienu ġrieden maskili adulti C57BL/6J għall-esperimenti AAV-HDAC3(Y298H)-v5. Għall-esperiment tat-tħassir HDAC3 flox, ġrieden Hdac3flox/flox u wild-type Hdac3 plus / plus littermate nżammu fuq sfond C57BL/6J (Mullican et al., 2011). Fil-qosor, dawn il-ġrieden ġew iġġenerati fil-laboratorju ta 'Dr Mitch Lazar fl-Università ta' Pennsylvania (Philadelphia, PA) b'siti loxP li jmexxu l-eson 4 permezz tal-eson 7 tal-ġene Hdac3, reġjun meħtieġ għall-attività katalitika tal-enzima (Mullican et al., 2011).

Drogi

Kokaina-HCl inxtrat minn Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, USA) u maħlul fis-salina (0.9 fil-mija NaCl). Il-kokaina-HCl hija espressa bħala l-piż tal-melħ. Għat-taħriġ tal-kokaina-CPP fl-esperimenti tal-akkwist, il-kokaina-HCl ġiet maħlula għal konċentrazzjoni finali ta '0.5 mg/ml u amministrata f'volum ta' 10 ml/kg piż tal-ġisem, li rriżultat f'doża finali ta '5 mg/kg. Għat-taħriġ tal-kokaina-CPP fl-esperiment tal-estinzjoni, il-kokaina-HCl ġiet maħlula għal konċentrazzjoni finali ta '2 mg/ml u amministrata f'volum ta' 10 ml/kg piż tal-ġisem, li rriżultat f'doża finali ta '20 mg/kg. Il-kokaina-HCl u l-melħ ġew amministrati intraperitonealment (ip).

Kirurġija

Ġrieden ġew indotti b'4 fil-mija isoflurane fl-ossiġnu u miżmuma f'1.5–2.0 fil-mija għat-tul tal-kirurġija. L-annimali ġew injettati jew b'AAV-HDAC3(Y298H)-v5 jew AAV-EV (Vector Vojt) (Kwapis et al., 2017). Għall-esperimenti DH, 1 µlofvirus ġie infuż bilateralment. Għall-esperimenti prelimbiċi u infralimbiċi, 0.3 µl ta' virus ġie infuż bilateralment. Intużat immunofluworexxenza biex tikkonferma l-espressjoni ta 'HDAC3 (Y298H). Labar tal-injezzjoni tbaxxew sal-koordinati mixtieqa b'rata ta' 0.2mm/15s. {{20}}min wara li laħaq il-fond fil-mira, il-virus ġie injettat b'rata ta' 6 µl/hr. Wara l-infużjoni, labar tal-injezzjoni tħallew f'posthom għal 2-min biex il-virus ikun jista' jinfirex. L-injetturi mbagħad tgħollu 0.1mm u tħallew joqogħdu għal minuta oħra qabel ma tneħħew bil-mod (0.1mm/ 15s). L-inċiżjoni ġiet suturata u ġimgħatejn ġew permessi għal espressjoni virali sħiħa qabel l-imġieba. Il-viruses ġew infużi b'infusers doppji ta' 28 gauge (DH: 3mm ċentru għal ċentru; PrL/IL: 0.8 mm ċentru għal ċentru) imwaħħla ma' tubi PE50 u konnessi ma' Hamilton Syringes immuntat fuq pompi tal-infużjoni. Il-koordinati għad-DH kienu: AP, −2.0mm; ML, ± 1.5mm; DV, -1.5mm relattiv għal Bregma. Koordinati għall-PrL kienu: AP, flimkien ma '1.9mm; ML, ± 0.4mm; DV, -2.2mm relattiv għal Bregma. Koordinati għall-IL kienu: AP, flimkien ma '1.5; ML, ± 0.4mm; DV, -3.2mm relattiv għal Bregma.

Produzzjoni AAV

HDAC3 tat-tip selvaġġ ġie amplifikat minn cDNA tal-hippocampal tal-ġrieden u kklonat f'pAAV-IRES-hrGFP modifikat (Agilent), taħt il-kontroll tal-promotur CMV u l-intron -globin. Biex tinħoloq il-mutazzjoni tal-punt, inħolqot sostituzzjoni ta 'nukleotide waħda f'exon 11 għal produzzjoni diretta ta' residwu ta 'histidine minflok tyrosine fl-aċidu amminiku 298 (plasmid MW92). Għall-kontroll tal-Vector Vojt, is-sekwenza ta 'kodifikazzjoni HDAC3 ma kinitx preżenti, iżda l-elementi l-oħra kollha jibqgħu (plasmid MW87). Virus adeno-assoċjat (AAV) sar mill-Penn Vector Core (Università ta 'Pennsylvania) mill-plażmidi deskritti hawn fuq u ġie serotipat b'AAV 2.1. It-titru finali ta 'AAV-HDAC3(Y298H) kien 6.48 × 1012 GC/mL u t-titer finali ta' AAV-EV kien 1.35 × 1013 GC/mL.

Immunofluworexxenza

Fl-esperimenti tal-imġieba murija fil-figuri 2-7, kull annimal inkluż fl-analiżi tal-imġieba kellu infużjoni virali kkonfermata mill-immunoistokimika. Ġrieden ġew ewtanizzati permezz ta 'dislokazzjoni ċervikali u l-imħuħ tagħhom tneħħew u flash-ffriżati fl-isopentane kiesaħ bis-silġ. Flieli ta' 20µm inġabru matul l-IL/PrL jew DH, immuntati b'tidwib fuq slides, u maħżuna fi -80 grad sakemm jintużaw. Għall-analiżi tal-immunofluworexxenza, slides ġew iffissati b'4 fil-mija paraformaldehyde għal 10 minuta u permeablizzati f'0.01 fil-mija Triton X-100 f'0.1M PBS għal 15-il minuta. Slajds imbagħad ġew imblukkati għal 1h f'temperatura tal-kamra f'8 fil-mija serum normali tal-mogħoż (Jackson), u inkubati matul il-lejl f'4 gradi f'antikorp primarju (antikorp HDAC3 klonu Y415: 1:250; Abcam). L-għada, slides ġew inkubati għal siegħa f'temperatura tal-kamra bil-mogħoż anti-fenek Alexa 488 (1:1000 dilwizzjoni, Invitrogen) fid-dlam segwit minn jew 15-minuta inkubazzjoni DAPI (1: 10,000, Invitrogen; DH). Għall-esperimenti li fihom intużat tebgħa nissl fluworexxenti ħamra NeuroTrace (1:50 NeuroTrace 530/615; Life Technologies), slides ġew inkubati għal 50 minuta f'temperatura tal-kamra segwiti minn żewġ ħasliet f'0.01 fil-mija Triton-X-100 għal 5 minuti u mbagħad żewġ ħasliet fil-PBS għal 5 minuti. Slajds ġew coverslipped bl-użu ta 'mezz ta' muntaġġ VectaShield Antifade (Vector Laboratories).

L-immaġini kollha ġew akkwistati b'Olympus Scanner VS110 b'objettiv apokromatiku 20× (apertura numerika 0.75) b'softwer tal-iskaner VS110. Il-gruppi kollha ta 'trattament kienu rappreżentati fuq kull slide u l-immaġini kollha fuq slide inqabdu bl-istess ħin ta' espożizzjoni. L-intensità tal-immunotikkettar ġiet ikkwantifikata b'ImageJ billi ttieħdet kampjun tad-densità ottika fis-saff taċ-ċelluli ta 'CA1 normalizzat għall-isfond.

RT-PCR kwantitattiv

Twettqet RT-PCR kwantitattiva f'ħin reali biex tivverifika V5expression u upregulation ta 'espressjoni Hdac3mRNA wildtype wara infużjoni AAV-HDAC3(Y298H) (esperiment 1) kif deskritt qabel (López et al., 2016; White et al., 2016). Għall-esperiment 1, punches ta '1mm fid-DH inġabru minn slices ta' 500 µm fiż-żona ta 'espressjoni virali (jew reġjun ekwivalenti fil-ġrieden EV) kif ikkonfermat mill-immunofluworexxenza. It-tessut kollu kien maħżun f'-80 grad sal-ipproċessar.

L-RNA ġie iżolat bl-użu ta 'RNeasy Minikit (Qiagen) u cDNA inħoloq bl-użu tal-kit tat-Trancriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Applied Science). Intużaw il-primers li ġejjin, derivati ​​mir-Roche Universal ProbeLibrary: Hdac3right primer, 5'- ttcaacgtgggtgatgactg-3'; Hdac3left primer, 5'- ttagctgtgttgctccttgc-3'; sonda, ctgctccc; Hdac3-v5right primer, 5'-tggagattctcgagggtaagc-3'; Hdac3-v5left primer, 5'- atgccacccgtagatctgg-3'; sonda, ctctcctc. Kull waħda mis-sondi għal dawn il-ġeni fil-mira kienet konjugata maż-żebgħa FAM. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (Gapd) intuża bħala ġene ta' referenza għall-analiżi RT-qPCR kollha. Għal Gapd, użajna l-primers li ġejjin: left primer, 5'atggtgaaggtcggtgtga-3'; primer tal-lemin, 5-aatctccactttgccactgc-3'; sonda, tggcggtattgg. Il-Gapdprobe ġie konjugat ma' LightCycler Yellow 555. Iż-żebgħat u t-tifi li ma jikkoinċidux fuq il-ġene ta' referenza jippermettu l-multiplexing fil-magni Roche LightCycle 480 II (Roche Applied Sciences). Il-valuri kollha ġew normalizzati għal-livelli ta' espressjoni ta' Gapd. L-analiżi u l-istatistika saru bl-użu tal-algoritmi proprjetarji ta’ Roche u s-softwer REST 2009 ibbażat fuq il-metodu Pfaffl (Pfaffl 2001; Pfaffl et al., 2002).

Ħidmiet OLM u ORM

Għall-OLM u rikonoxximent ta 'oġġett ġdidmemorja(ORM), data ta 'abitazzjoni (distanza vvjaġġata matul sessjonijiet ta' abitazzjoni individwali), taħriġ, u vidjows ta 'ttestjar inġabru bl-użu ta' softwer ta 'analiżi tal-imġieba ANY-maze. It-taħriġ u l-ittestjar għall-OLM u l-ORM saru kif deskritt qabel (López et al., 2016; McQuown et al., 2011; Vogel-Ciernia et al., 2013; Vogel-Ciernia and Wood, 2014). Qabel it-taħriġ, il-ġrieden ġew immaniġġjati 1-2 min għal 4 d u kienu abitwati mal-apparat sperimentali 5 min għall-kamra OLM għal 6 ijiem konsekuttivi fin-nuqqas ta 'oġġetti. Matul il-prova tat-taħriġ, il-ġrieden tqiegħdu fl-apparat sperimentali b'żewġ oġġetti identiċi (OLM: 100 ml beakers, 2.5 ċm dijametru, 4 ċm għoli; ORM: laned tal-ħwawar u xemgħat tal-ħġieġ) u tħallew jesploraw dawn l-oġġetti għal 3 min. , li ma jirriżultax fi żmien qasir jew fit-tulmemorja. Preċedentement urejna li perjodu ta’ taħriġ ta’ 3 minuti mhuwiex biżżejjed biex jiġġenera LTM ittestjat f’24 siegħa (Haettig et al., 2011, 2013; López et al., 2016; McQuown et al., 2011; Stefanko et al., 2009) . Erbgħa u għoxrin siegħa wara, iż-żamma tal-annimali ġiet ittestjata għal 5 min. Għal OLM, kopja waħda tal-oġġett familjari tqiegħdet fl-istess post bħal waqt il-prova tat-taħriġ, u kopja waħda tal-oġġett familjari tpoġġiet fin-nofs tal-kaxxa. Għall-ORM, kopja waħda tal-oġġett familjari u oġġett ġdid tqiegħdu fl-istess post bħal waqt il-prova tat-taħriġ. Il-provi kollha tat-taħriġ u l-ittestjar ġew irreġistrati bil-vidjo u skurjati bl-idejn minn individwi għomja għat-trattamenti tal-annimali. Vidjows ġew analizzati għall-esplorazzjoni totali ta 'oġġetti minbarra l-indiċi ta' diskriminazzjoni (DI) [(ħin mgħoddi biex jesplora objettiv ġdid imqatta' biex jesplora oġġett familjari)/(ħin totali biex jesplora ż-żewġ oġġetti) × 100 fil-mija]. Il-kombinazzjonijiet u l-postijiet kollha ta 'oġġetti ntużaw b'mod ibbilanċjat biex inaqqsu l-preġudizzji potenzjali attribwibbli għal preferenza għal postijiet jew oġġetti partikolari.

Apparat Preferenza Post Kundizzjonat

Il-kundizzjonament tal-preferenza tal-post sar kif deskritt qabel fl-istudji tagħna (Malvaez et al., 2011; Rogge et al., 2013; White et al., 2016). Fil-qosor, il-ġrieden ġew immaniġġjati għal 1 minuta kuljum għal 3 ijiem qabel il-bidu tal-esperiment (jiem 1-3). Il-proċedura CPP għall-esperimenti kollha twettqet bl-użu ta 'protokoll imparzjali u kontrobilanċjat. Il-preferenzi tal-linja bażi għal kull wieħed mill-esperimenti ġew evalwati billi l-annimali tqiegħdu fil-kompartiment ċentrali tal-apparat tal-preferenza tal-post u ppermettiet aċċess liberu għall-kompartimenti kollha għal 15-il minuta (pre-test; jum 4). L-istadju tat-taħriġ beda jum wieħed wara l-pre-test. Il-kondizzjonament sar matul l-4 ijiem sussegwenti bil-bibien tal-giljottina magħluqa, u b'hekk l-annimali kienu limitati f'wieħed miż-żewġ kompartimenti ta' barra tal-apparat CPP għal 30 min (jiem 5-8). Intuża disinn imparzjali sabiex nofs l-annimali ngħataw kokaina qabel it-tqegħid fil-kompartiment iċċekkjat u nofs irċieva kokaina qabel it-tqegħid f'kompartiment abjad fil-jum tat-taħriġ 1 (CS plus). L-għada, it-trattament u l-kompartiment ġew maqluba għal kull annimal (jum tat-taħriġ 2), il-ġrieden ġew injettati b'salina qabel it-tqegħid fil-kompartiment alternattiv (CS-). Injezzjonijiet ġew mibdula għal sessjonijiet ta 'kondizzjonament sussegwenti. Għall-esperimenti ta 'akkwist murija fil-Fig. 3–5, l-annimali rċevew total ta' żewġ 30-min tqabbil mal-kokaina f'kompartiment wieħed u żewġ 30-min tqabbil mas-salina fl-ieħor. Tmienja u erbgħin siegħa wara l-aħħar sessjoni ta 'kondizzjonament, il-preferenza (15-il minuta; wara t-test 1; jum 10) ġiet ivvalutata fl-annimali kollha kif deskritt hawn fuq fi stat ħieles mid-droga. Għall-esperimenti ta 'estinzjoni murija fil-Fig. 6–7, l-annimali għaddew minn kondizzjonament segwit minn wara t-test 1 48 sigħat wara l-aħħar sessjoni ta’ kondizzjonament kif deskritt hawn fuq. Ġimagħtejn wara l-infużjoni virali fid-DH jew IL, l-annimali għaddew minn testijiet ripetuti ta 'preferenza ħielsa mid-droga kuljum (15 min; wara t-testijiet 2-5; jiem 25-28). Il-punteġġ tas-CPP ġie kkalkulat bħala ħin (i) mgħoddi f'kompartimenti mqabbda mal-kokaina (CS plus ) nieqes saline-paired (CS-). Il-ħin imqatta 'f'kull wieħed mill-kompartimenti kbar ta' barra ġie analizzat b'softwer awtomatizzat minn vidjows MPEG bl-użu ta 'softwer EthoVision 3.1 (Noldus Technology; ara Malvaez et al., 2011).

Analiżi Statistika

Graphpad Prism 7.02 (GraphPad Software) intuża għall-analiżi statistiċi kollha.

L-abitwazzjoni ġiet analizzata bl-użu ta 'ANOVA f'żewġ direzzjonijiet biex titqabbel id-distanza totali vvjaġġata matul is-sessjonijiet ta' abitazzjoni. Id-dejta tat-taħriġ u l-ittestjar ġiet analizzata bl-użu tat-test t ta’ Student biex iqabbel jew l-esplorazzjoni jew id-DI ​​bejn annimali ta’ kontroll u tat-test. Id-dejta tat-test ġiet analizzata wkoll bl-użu ta' test t ta' denb wieħed li qabbel il-valuri DI ma' żero biex jiġi ddeterminat jekk ġietx osservata jew le diskriminazzjoni sinifikanti. L-esperimenti tas-CPP ġew analizzati bl-użu ta' analiżi ta' varjanza f'żewġ direzzjonijiet (ANOVAs) segwit minn Bonferroni'sposthoctests with Preference Scores (PS) f'testijiet bħala varjabbli fi ħdan is-suġġetti u grupp/ġenotip (Empty Vector vs Y298H point mutant; Hdac3 plus / plus vs. Hdac3flox/flox). Dan it-test statistiku ntuża biex jagħmel paraguni speċifiċi meta ġew osservati interazzjonijiet sinifikanti u/jew effetti tal-grupp prinċipali. Id-dejta tat-test ġiet analizzata wkoll bl-użu ta' test t ta' denb wieħed li qabbel il-valuri PS ma' żero biex jiġi determinat jekk kinitx osservata preferenza sinifikanti jew le. Għal esperimenti ta 'estinzjoni, it-testijiet t ta' Student l-ewwel saru biex jiddeterminaw jekk l-annimali ffurmawx preferenza sinifikanti fuq wara t-test 1 qabel l-infużjoni virali. Il-valuri RT-qPCR inkisbu kif deskritt hawn fuq. Id-differenzi fil-valuri RT-qPCR ġew evalwati bit-test t ta' Student. Għall-analiżi kollha, kien meħtieġ valur ta' 0.05 għas-sinifikat.