Parti 1 Sejbien ta' Cistanches Herba (Rou Cong Rong) Prodotti mediċinali bl-użu ta' firem nukleotidi speċifiċi għall-ispeċi

Għal aktar informazzjoni, jekk jogħġbok ikkuntattja lil:Joanna.jia@wecistanche.com

Xiao-Yue Wang 1, Rong Xu 1, Jun Chen 1, Jing-yuan Kanzunetta 1, Steven-G Newmaster 2, Jian-ping Han 1 *, Zheng Zhang 1 * u Shi-lin Chen 3

1 Laboratorju Ewlieni ta 'Sustanzi Bijoattivi u Użu ta' Riżorsi tal-Mediċina Veġetali Ċiniża, Ministeru tal-Edukazzjoni, Istitut tal-Iżvilupp tal-Pjanti Mediċinali, Akkademja Ċiniża tax-Xjenza Mediċinali u Peking Union Medicine, Beijing, iċ-Ċina, 2 Alleanza ta 'Riċerka NHP, Istitut tal-Bijodiversità ta' Ontario (BIO), Università ta 'Guelph, Guelph, ON, il-Kanada,

3 Laboratorju ewlieni ta 'Beijing għall-Identifikazzjoni u l-Evalwazzjoni tas-Sigurtà tal-Mediċina Ċiniża, Istitut tal-Materia Medica Ċiniża, Akkademja taċ-Ċina tax-Xjenzi Mediċi Ċiniżi, Beijing, iċ-Ċina

Cistanche deserticola għandha ħafna effetti, ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

Cistanches Herbahija pjanta mediċinali li għandha proprjetajiet ta' ditossifikazzjoni u li tintuża b'mod komuni fl-Asja. Minħabba l-iżbilanċ bejn il-provvista u d-domanda, l-adulteranti spiss jiżdiedu għall-profitt. Madankollu, ma hemm l-ebda sorveljanza regolatorja minħabba li l-għodod ta' kontroll tal-kwalità mhumiex biżżejjed biex jiġu identifikati prodotti pproċessati ħafna. Għalhekk, ġiet żviluppata għodda molekulari ġdida bbażata fuq firem tan-nukleotidi u primers speċifiċi għall-ispeċi. Ir-reġjuni tal-ITS2 minn 251Cistanches Herbau kampjuni adulteranti ġew sekwenzati. Fuq il-bażi tas-siti SNP, ġew żviluppati erba' firem tan-nukleotidi fi ħdan 30∼37 pb u sitt primers speċifiċi għall-ispeċi, u ġew ivvalidati minn taħlitiet sperimentali artifiċjali li jikkonsistu f'sitt speċi differenti u proporzjonijiet differenti. Dan il-metodu ġie applikat ukoll għall-iskoperta 66Cistanches Herbaprodotti fis-suq, inklużi estratti u mediċini Ċiniżi għall-privattivi. Ir-riżultati wrew l-utilità tal-firem tan-nukleotidi fl-identifikazzjoni ta' adulteranti f'taħlitiet. L-istudju tas-suq żvela adulterazzjoni ta '36.4%: 19.7% involva adulterazzjoni ma' Cynomorium songaricum jewCistancheSinensis, u 16.7% kienu jinvolvu sostituzzjoni ma 'Cy. songaricum, Ci. sinensis, jew Boschniakia rossica. Ir-riżultati żvelaw ukoll li Cy. songaricum kien l-iktar adulterant komuni fis-suq. Għalhekk, nirrakkomandaw l-użu ta ' firem nukleotidi speċifiċi għall-ispeċi għar-regolazzjoni tal-adulterazzjoni u l-verifika tal-assigurazzjoni tal-kwalità tal-ktajjen tal-provvista tal-prodotti mediċinali, speċjalment għal prodotti pproċessati li d-DNA tagħhom huwa degradat.

Kliem ewlieni: Cistanches Herba, mediċina Ċiniża tal-privattivi, firma tan-nukleotidi, DNA degradat, kontroll tal-kwalità tal-mediċina

INTRODUZZJONI

Cistanches Herba(Rou Cong Rong) hija mediċina magħrufa rreġistrata fil-Farmakopea fl-Asja (Kummissjoni tal-Farmakopea Ċiniża, 2015; Il-Konvenzjoni Farmakopejali tal-Ġappun, 2016); din il-mediċina hija derivata miż-zkuk sukkulenti mnixxfa ta'Cistanche deserticolaY. C. Ma jewCistanche tubulosatoniku, peress li mhuwiex tossiku u jista 'jittieħed għal perjodi twal ta' żmien (Li et al., 2016). BarraminnhekkCistanchesHerba ngħata l-unur li jismu "Desert Ginseng" minħabba l-valur mediċinali kbir tiegħu, speċjalment fit-tisħiħ tal-funzjoni sesswali maskili (Zhang and Su, 2014; Gu et al., 2016). Hemm aktar minn 100 mediċina ċiniża tal-privattivi rreġistrati fil-Kummissjoni tal-Farmakopea Ċiniża (2015) u fi standards oħra lokali ppromulgati uffiċjali (Wang et al., 2012). Hekk kif il-popolazzjoni ta' individwi anzjani tiżdied, hemm domanda konsiderevoli għalCistanches Herbau l-prodotti mediċinali tiegħu. Madankollu, ir-riżorsi tal-materja prima qed isiru dejjem aktar skarsi. Fil-fatt, iż-żewġ speċi oriġinali ta 'Cistanches Herbaġew miżjuda mal-Ktieb tad-Dejta Ħamra tal-Pjanti taċ-Ċina bħala pjanti selvaġġi protetti mill-istat (kategorija II) (Fu, 1991). Il-materjali mediċinali fis-suq huma prinċipalment ikkultivati fil-majjistral taċ-Ċina.

Minħabba l-iżbilanċ konsiderevoli bejn il-provvista u d-domanda ta'CistanchesHerba, ħafna adulteranti daħlu fis-suq; dawn l-adulteranti huma inkonsistenti mal-istandards u jistgħu jheddu s-sigurtà tad-droga. L-adulteranti magħrufa jinkludu z-zkuk sukkulenti mnixxfa ta 'Cynomorium songaricum Rupr. (Cynomorii Herba, Suo Yang biċ-Ċiniż),Cistanchesinensis Beck, Orobanche coerulescens Stephan, u Boschniakia rossica (Cham. et Schlecht.) Fedtsch. et Flerov (Sun et al., 2012). Dawn l-adulteranti għandhom karatteristiċi morfoloġiċi simili għal dawk ta 'CistanchesHerba, li tagħmel l-identifikazzjoni tassonomika tradizzjonali diffiċli, b'mod partikolari wara li l-materjal jiġi pproċessat fi prodotti mediċinali. L-identifikazzjoni mikroskopika mhix disponibbli minħabba liCistanchesHerbam'għandha l-ebda karatteristika mikroskopika definittiva jew unika. L-għodod analitiċi attwali tal-kimika mhumiex biżżejjed biex jiskopru l-adulterazzjoni tal-Cistanches Herba minħabba li komposti simili jeżistu wkoll fi ħdan l-adulteranti magħrufa Ci. salsa (Lei et al., 2001; Chen et al., 2007) u Ci. sinensis (Liu et al., 2013). Għalhekk, l-iżvilupp ta 'metodu molekulari rapidu għall-awtentikazzjoni ta' Cistanches Herba u l-prodotti tiegħu huwa meħtieġ b'mod urġenti għal sistemi xierqa ta 'kontroll tal-kwalità fil-mediċina tal-privattivi Ċiniża u industriji oħra tal-prodotti mediċinali.

Chen et al. l-ewwel issuġġerixxa spacer traskritt intern 2 (ITS2) bħala barcode universali għall-pjanti mediċinali (Chen et al., 2010). Sun et al. ivverifika r-reġjun tal-ITS2 bħala barcode tad-DNA preferibbli għall-identifikazzjoniCistanchesHerba u l-adulteranti tagħha (Sun et al., 2012) . Madankollu, l-ITS2 ma jistax jintuża biex jiddistingwi l-mediċina tal-privattivi Ċiniża mid-DNA degradat. Riċentement, numru dejjem jikber ta 'studji wrew li l- "mini barcode" huwa metodu utli għall-amplifikazzjoni tad-DNA degradat (Hajibabaei et al., 2006; Meusnier et al., 2008; Dubey et al., 2011; Lo et al., 2015). Madankollu, il-firem tan-nukleotidi huma aktar xierqa minn mini barcodes, peress li ta' qabel jirreferu għal nukleotidi waħda jew aktar li huma uniċi għal speċi waħda u jistgħu jintużaw b'mod effettiv minn ħafna tekniki molekulari, bħal sondi tad-DNA, mikrofluidiċi, u amplifikazzjoni iżtermika medjata minn loop (de Boer et al., 2015). Han et al. żviluppaw firem tan-nukleotidi għal Panax ginseng, Angelica Sinensis, u Lonicera japonica u identifikaw b'suċċess il-mediċini assoċjati tal-privattivi Ċiniżi (Liu et al., 2016; Wang et al., 2016a; Gao et al., 2017).

prodotti funzjonali li fihomCistanchesHerba. Speċifikament, aħna (1) żviluppajna erba 'firem nukleotidi u sitt pari primer speċifiċi għad-distinzjoni awtentikaCistanchesHerba u adulteranti magħrufa, (2) ivvalidaw l-erba' firem nukleotidi f'esperimenti inklużi taħlitiet ta' vawċers tassonomiċi magħrufa użati biex jippreparaw prodotti Cistanches Herba li fihom ingredjenti kemm awtentiċi kif ukoll adulterati, u (3) wettqu stħarriġ tas-suq ta' 66CistanchesProdotti tal-erba' permezz tal-firem tan-nukleotidi tagħhom.

Cistanchegħandu ħafna effetti u jista 'jtejjeb il-funzjoni tal-kliewi

MATERJALI U METODI

Ġbir u Preparazzjoni tal-Kampjun

B'kollox inġabru 251 kampjun mill-Mongolja Interna, ix-Xinjiang u n-Ningxia, fost żoni oħra; dawn il-kampjuni kienu jinkludu 214Cistanches Herbau 37 adulteranti u huma dettaljati fit-Tabella Supplimentari S1. Kampjuni korrispondenti tal-vawċer ġew ivvalidati mit-tassonomiji u ddepożitati fl-Herbarium tal-Istitut għall-Iżvilupp tal-Pjanti Mediċinali, l-Akkademja Ċiniża tax-Xjenzi Mediċi, Beijing, iċ-Ċina. Total ta' 35 lott ta' trabijiet, ħwawar, u estratti ta'CistanchesHerba nxtraw minn ħwienet online u drugstores tal-briks u t-tikħil f'Beijing u Chengdu (Tabella 1). B'kollox, 31 lott ta 'mediċina tal-privattivi Ċiniża li fihomCistanchesHerba nxtraw minn mediċini differenti (Tabella 2), u l-kompożizzjonijiet iddikjarati ta' mediċini differenti ċiniżi tal-privattivi huma murija fit-Tabella Supplimentari S3. Il-karatteristiċi morfoloġiċi differenti ta' forom ta' doża differenti huma murija fil-Figura 1.

Kampjuni mħallta: Trabijiet ta' Ci.deżerticolaCi.tubulosa, Cy. songaricum, Ci. sinensis, B. rossica, u O. coerulescens kienu mħallta artifiċjalment f'kombinazzjonijiet differenti (fi proporzjon ta' 1:1) qabel l-estrazzjoni. Id-dettalji ta' dawn il-kampjuni mħallta huma murija fil-leġġenda tal-Figura 3. Barra minn hekk, it-trabijiet ta 'erba' adulteranti tħalltu mal-Ci ġenwin. deserticola bi proporzjonijiet differenti ta' piż: 10:1, 50:1, 100:1, 200:1, 500:1, 1000:1,

2000:1, 5000:1, 10000:1, 15000:1, 20000:1, 25000:1, 30000:1,

40000:1, 50000:1 u 60000:1 (Tabella 3). U ż-żewġ prodotti ġenwini jitħalltu fl-istess proporzjonijiet.

Decoction: Flieli ta' Ci. deżerti u Cy. il-songaricum intuża biex jipprepara d-decoction. Il-flieli (10 g) kienu mgħollija fi 300 mL ta' ilma ddistillat doppju għal 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, u 240 min u mbagħad użati għall-estrazzjoni tad-DNA.

Estrazzjoni tad-DNA, Amplifikazzjoni tar-Reazzjoni Katina tal-Polimerażi (PCR), u Sekwenzar

Kampjuni, decoction, u kampjuni mħallta: Il-kampjuni (40– 50 mg) kienu mitħuna fi trabijiet fini permezz ta 'mitħna tal-mixer tal-laboratorju Retsch MM400 (Retsch Co., il-Ġermanja) bi frekwenza ta' 30 Hz. Id-DNA ġenomika sussegwentement ġiet estratta b'Kit tad-DNA Ġenomika Universali tal-Pjanti (Tiangen Biotech Beijing Co., iċ-Ċina) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. ITS2 ġie amplifikat mill-primers universali 2F / 3R (Chen et al., 2010).

b'mod parallel għal kull lott. It-trab tal-mediċina tal-privattivi Ċiniż inħasel b'700 μL ta 'buffer ta' qabel il-ħasil [100 mM Tris-HCl, pH 8.0; 20 mM aċidu etilendiaminetetraacetic (EDTA), pH 8.0;

700 mM NaCl; 2% polyvinylpyrrolidone (PVP) -40; u 0.4% β-mercaptoethanol] diversi drabi sakemm is-supernatant kien ċar u bla kulur, u wara t-taħlita ġiet ċentrifugata f'7500 × g għal 5 min f'temperatura ambjentali. Il-preċipitat sussegwentement intuża biex joħroġ id-DNA ġenomiku permezz tal-Kit tad-DNA Genomiku Universali tal-Pjanti (Tiangen Biotech Beijing Co.) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Fl-aħħar, id-DNA minn kull lott kien ikkonċentrat f'tubu wieħed. Sitt pari primer speċifiċi għall-ispeċi—SYF1/SYR1, HMRCF/HMRCR, GHRCF/GHRCR, CCRF/CCRR,

SCRF / SCRR, u LDF / LDR - ġew iddisinjati permezz ta 'Primer Premier

6.0 softwer (Premier Co., Kanada) biex jamplifika Cistanches Herba u l-adulteranti tiegħu (id-dettalji huma murija fit-Tabella 4). Il-PCR sar f'reazzjoni ta' volum ta' 50 μL li fiha 1 μL ta'

KOD FX (Toyobo Co., il-Ġappun), 25 μL ta' 2 × buffer pcr, 10 μL ta' dNTPs (2 mM), 1.5 μL ta' kull primer (10 μM), u 4 μL (∼50 ng) tal-mudell tad-DNA; il-volum li jifdal kien jikkonsisti f'ilma ddistillat doppju. Ir-reazzjonijiet twettqu minn

ċiklutur termali (VeritiTM 96-Well Thermal Cycler, Applied Biosystems Co., USA); il-programmi termali huma elenkati fit-Tabella 4. Il-prodotti PCR ġew eżaminati permezz ta 'elettroforeżi tal-ġell agarożju ta' 3% u ppurifikati għal sekwenzar bidirezzjonali b'sekwenzar ABI 3730XL (Applied Biosystems Co.) skont il-metodu ta 'sekwenzar sanger. Imbagħad, is-sensittività tas-sitt primers ġiet ittestjata permezz tal-assaġġ kwantitattiv tal-PCR f'ħin reali (qRT-PCR) b'CFX96 Sistema f'ħin reali (Bio-rad Lab., USA). Il-limiti taċ-ċiklu ġew ikkalkulati awtomatikament mis-sistema permezz tal-mudell "PCR Baseline Subtracted Curve Fit". qRT-PCR sar f'reazzjoni ta' volum ta' 15 μL li fiha 7.5 μL ta' SYBR(X)R Premix Ex TaqTM (Tli RNaseH Plus)

(Takara Bio Co., il-Ġappun), 1.0 μL ta' kull primer (10 μM), u 1.0 μL ta' mudell tad-DNA bil-volum li jifdal li jikkonsisti f'ilma ddistillat doppju. Il-qRT-PCR twettaq bi tliet repliki tekniċi li abbażi tagħhom ġie kkalkulat l-iżball standard.

Analiżi tas-sekwenza: Is-sekwenzi ġew editjati u mmuntati manwalment permezz ta 'CodonCode Aligner 5.1.4 (CodonCode Co., USA).

Is-sekwenzi tal-ITS minn GenBank ġew annotati permezz tal-mudell Hidden Markov (HMM) biex jinkisbu s-sekwenzi ITS2 (Keller et al., 2009). Is-sekwenzi mbagħad ġew allinjati bis-softwer MEGA 5.0 permezz tal-metodu ta 'allinjament "Muskolu" (Edgar, 2004; Tamura et al., 2011).

Cistanchegħandha ħafna effetti u tista 'ttejjebKliewiFunzjoni

RIŻULTATI

Żvilupp ta ' Firem nukleotidi u speċi-Speċi-Speċifiċi Primer Pairs għall Cistanches Herba u Adulterants

L-amplifikazzjoni tal-PCR u r-rati ta 'suċċess tas-sekwenzar tal-251 kampjun kienu 100% meta ntuża l-par primer 2F / 3R. It-tul allinjat taċ-Cy. is-sekwenzi tal-songaricum ITS2 kienu 229 pb (Figura Supplimentari S1). Analiżi tas-sekwenzi mill-ispeċi tal-ħwam u dawk ta' speċi relatati mill-qrib miksuba mill-GenBank (Tabella Supplimentari S2) żvelat żewġ siti tal-polimorfiżmu nukleotidi (SNP) wieħed għaċ-Cy. songaricum. Fuq il-bażi tal-SNPs, Cy wieħed. ġiet żviluppata firma tan-nukleotidi speċifika għall-songaricum 30- bp (5′-caattatttg aggtgcattg taagaagcgt-3') (Figura 2A). Riżultati bażiċi ta ' l- Għodda ta ' Tiftix ta ' Allinjament Lokali (BLAST) f' BĊNI wrew li din il- firma tan- nukleotidi kienet unika għal Cy. songaricum (Tabella 5). B'analiżi simili tas-sekwenzi minn speċi relatati mill-qrib, wieħed sa żewġ SNPs ġew skoperti minn Ci. sinensis, B. rossica, u O. coerulescens. Fuq il-bażi tal-SNPs, il-firem tan-nukleotidi għat-tliet adulteranti l-oħra ġew żviluppati wkoll bl-istess mod, inkluża firma ta' 34 pb (5′-cgatggtctc ccgtgcgcga,ggatgcacgg ccgg-3') għal Ci. Sinensis, firma ta' 37 pb (5′- acactggcct cccgtgcgca acgacgtgcg gccggtc-3') għal B. rossica, u firma ta' 31 pb (5′-gtctgtcgtg tcggatggtg ttgcttgttg g-3′) għal O. coerulescens (Figuri 2BD). Analiżi tal- BLAST f' NCBI wriet ukoll li dawn il- firem tan- nukleotidi kienu speċifiċi u mhux preżenti f' xi speċi oħra (Tabella 5).

Cistanches Herbau l-adulteranti tiegħu jistgħu jiġu amplifikati simultanjament minn taħlitiet permezz tal-par primer universali 2F /3R. Għalhekk, iddisinjajna primers speċifiċi għall-ispeċi għall-amplifikazzjoni tal-firma tan-nukleotidi billi allinjaw is-sekwenzi ITS2. Erba 'pari primer speċifiċi - SYF1 / SYR1, CCRF / CCRR, SCRF / SCRR, u LDF / LDR - kienu ddisinjati biex jamplifikaw il-firem tan-nukleotidi ta' Cy. songaricum, B. rossica, Ci. sinensis, u O. coerulescens, rispettivament (Tabella 4). It-tulijiet tal-amplikoni kienu 123, 72, 131, u 71 pb, rispettivament.

Barra minn hekk, ġew analizzati total ta '214-il sekwenza TAL-ITS2 minn materjali sperimentali ta' Cistanches Herba. Żewġ primers speċifiċi qosra—HMRCF/HMRCR u GHRCF/GHRCR għal Ci. deżertikola u Ci. tubulosa, rispettivament — kienu ddisinjati biex jamplifikaw ir-reġjuni qosra tal-kampjuni degradati (Tabella 4). It-tulijiet tal-amplikoni kienu 132 u 134 pb, rispettivament.

Validazzjoni tal-Firma tan-Nukleotidi u l-Metodu Primer Speċifiku għall-Ispeċi Bbażat fuq Taħlitiet Artifiċjali u d-Decoction

L-effiċjenzi tal-amplifikazzjoni tal-pari primer il-ġodda ġew ivvalidati mit-taħlita. Il-prodotti pcr inkisbu permezz ta' kull par primer għal kull speċi fil-mira, kif muri

il-valuri cq ta' B. rossica jew O. coerulescens setgħu jinkisbu anki l-proporzjon ta' kampjuni kien ta' 30000:1 jew 40000:1, u r-riżultati tal-amplifikazzjoni ta' Ci. sinensis, Ci.tubulosa, u Ci deserticola setgħet tiġi skoperta meta l-proporzjon kien 20000: 1. Iżda l-ebda riżultat li jista 'jiġi osservat ma jista' jinkiseb għal Cy. songaricum meta kien jikkostitwixxi l-proporzjon ta' 20000:1.

Biex jiġi vverifikat jekk il-metodu tal-firma tan-nukleotidi jiffunzjonax b'materjali pproċessati, dekozzjonijiet ta' Ci. deżerti u Cy. il-songaricum tħejjew. Ir-riżultati wrew li l-barcode qasir minn Ci. id-deżert jista 'jiġi amplifikat, anke wara li l-kampjuni tgħallmu għal 210 min. Barra minn hekk, il-firma tan-nukleotidi ta' Cy. il-songaricum seta' jiġi amplifikat wara li l-kampjuni jkunu tgħallmu għal 150 minuta, filwaqt li ma nstabu l-ebda prodotti PCR wara li l-kampjuni tgħallmu għal 210 jew 240 min (Figura 4). Ir- riżultati tas- sekwenzar urew li l- firma qasira tan- nukleotidi nkisbet b' suċċess mid- dekażjoni.

Stħarriġ tas-Suq tal-Adulterazzjoni permezz tal-Firma tan-Nukleotidi u Primers Speċifiċi

Il-metodu ta' hawn fuq ġie applikat għall-iskoperta ta'CistanchesProdotti Herba fis-suq. Ħamsa u tletin lott ta 'CistanchesFlieli, trabijiet u estratti tal-herba ġew amplifikati u sekwenzati bl-użu ta' sitt primers speċifiċi ddisinjati (ir-riżultati tal-elettroforeżi tal-ġell tal-agarose jintwerew fil-Figura Supplimentari S2 u s-sekwenzi huma elenkati fil-Folja tad-Dejta Supplimentari 1). Analiżi tas-sekwenzi permezz tal-firem nukleotidi tagħhom żvelat li ħames lottijiet ta 'flieli kienu awtentiċi. Lott wieħed ta 'porzjon u lott wieħed ta' trab ġew sostitwiti b'Cy. songaricum u estratt wieħed ġew sostitwiti b'Ci. sinensis. Is-sitt lottijiet l-oħra ta 'trabijiet kienu taħlitiet: ħamsa ġew adulterati b'Cy. songaricum u Ci. sinensis u wieħed kienu adulterati b'Cy. songaricum (Tabella 1). Barra minn hekk, lott ta 'porzjon wieħed ġie sostitwit b'Salvia miltiorrhiza.

Il-Cistanches Herba fil-mediċini tal-privattivi Ċiniżi hija soġġetta għal diversi proċessi li jagħmlu l-awtentikazzjoni diffiċli. Il- ħila tas- sitt pari primer biex jamplifikaw ir- reġjuni tal- firma tan- nukleotidi speċifiċi għall- ispeċi mill- mediċini tal- privattivi Ċiniżi ġiet ittestjata (ir- riżultati ta ' l- elettroforesi tal- ġell agarose huma murija fil- Figura Supplimentari S2). Il-biċċa l-kbira tal-mediċini Ċiniżi tal-privattivi fihom komponenti ta' tipi differenti ta' speċijiet. Pereżempju, il-pilloli Shihu Yeguang (ZCY34) fihom 25 ingredjent, inklużi Cistanches Herba (Rou Cong Rong), Dendrobii Caulis (Shi Hu), u Ginseng Radix et Rhizoma (Ren Shen). Minn dawn l-ingredjenti, Cistanches Herba jista 'jiġi amplifikat speċifikament permezz tal-par primer GHRCF / GHRCR. Is-sekwenzar dirett tal-prodotti tal-PCR żvela traċċi nodfa ħafna. Madankollu, ma setgħetx tinkiseb faxxa viżibbli bil-par primer HMRCF/HMRCR.

Eżempju ieħor huwa l-pilloli Kangguzhi Zengsheng (ZCY44). Hemm tmien ingredjenti minbarraCistanchesHerba f'din il-mediċina Ċiniża tal-privattivi, iżda ma kien hemm l-ebda faxex viżibbli miksuba la mill-GHRCF/GHRCR jew mill-HMRCF/HMRCR, li kien ifisser li l-ebdaCistanches Herbakien preżenti. Madankollu, ir-reġjun adulteranti ta 'Cy. songaricum ġie amplifikat b'suċċess mill-par primer speċifiku SYF1 / SYR1. Ir- riżultati tas- sekwenzar urew il- firma qasira tan- nukleotidi ta ' Cy. songaricum inkiseb b'suċċess.

Cistanchegħandha ħafna funzjonijiet u għandhaanti-infjammatorjiEffetti