Astratt

Cistanche tubulosahija ħaxix toniku prezzjuż applikat b'mod wiesa 'fil-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża. Phenylethanoid glycosides rappreżentati minn echinacoside u acteoside huma s-sustanzi bijoattivi ewlenin tiegħu. Din ir-riċerka għandha l-għan li tottimizza l-parametri moderni tal-ipproċessar għalCistanche tubulosabiċċiet tad-decoction biex itejbu r-rendiment ta 'echinacoside u acteoside, u jesploraw aktar l-istress anti-ossidattiv u l-mekkaniżmu anti-infjammatorju tiegħu fil-livell ċellulari.

Twettqu esperimenti b'fattur wieħed, segwiti minn ottimizzazzjoni tal-wiċċ tar-rispons Box-Behnken bi ħxuna tal-qatgħat, ħin tal-fwar u temperatura tat-tnixxif bħala fatturi li jinfluwenzaw. Il-kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja (HPLC) ġiet adottata biex tiskopri l-kontenut ta' żewġ komposti li jimmarkaw. Il-mudell tal-ħsara tal-makrofagi RAW264.7 indott minn LPS inbena biex jevalwa l-attivitajiet farmakoloġiċi. Ġew determinati speċi ta 'ossiġnu reattiv (ROS), ossidu nitriku (NO), malondialdehyde (MDA), attivitajiet ta' enzimi antiossidanti inklużi kontenut ta 'SOD, CAT, LDH u glutathione (GSH). ELISA intuża biex jittestja l-livell ta' sekrezzjoni ta' ċitokini pro-infjammatorji TNF-, IL-1 u IL-6. Assaġġ Western blot sar biex janalizza l-istatus ta 'fosforilazzjoni ta' proteini ewlenin fil-mogħdija ta 'sinjalazzjoni p38/AKT/JNK/NF-κB.

L-aħjar kundizzjonijiet tal-ipproċessar kienu ħxuna tal-porzjon ta '0.6 ċm, ħin ta' fwar ta '6 min u temperatura tat-tnixxif ta' 57 grad. Taħt din il-kundizzjoni, il-kontenut ta 'acteoside laħaq 7.25 % u echinacoside laħaq 31.62 %. Estratti minn biċċiet tad-decoction ottimizzati jistgħu jnaqqsu b'mod sinifikanti l-produzzjoni żejda ta 'ROS intraċellulari, NO u MDA f'ċelluli RAW264.7 stimulati mill-LPS. Huwa saħħaħ l-attivitajiet ta 'SOD, CAT, LDH u żied il-livell intraċellulari ta' GSH, sadanittant inibixxi b'mod notevoli r-rilaxx ta 'TNF-, IL-1 u IL-6. Ir-riżultati tal-western-blot indikaw li l-proporzjon ta' fosforilazzjoni tal-estratt irregolat 'l isfel ta' p-p38/p38, p-AKT/AKT, p-JNK/JNK u p-NF-κB/NF-κB.

It-teknoloġija ottimizzata tal-ipproċessar tat-tnixxif bil-fwar tista' żżid b'mod effettiv ir-rata ta' rkupru tal-glikożidi feniletanojdi prinċipali ta'Cistanche tubulosa. Biċċiet tad-decoction jeżerċitaw effetti anti-ossidattivi u anti-infjammatorji kontra l-ħsara taċ-ċelluli ikkawżata mill-LPS billi jinibixxu l-mogħdija tas-sinjalar p38/AKT/JNK/NF-κB. Dan l-istudju jipprovdi parametri tekniċi prattiċi għall-ipproċessar industrijali standardizzat ta 'Cistanche tubulosa, u joffri evidenza sperimentali għall-iżvilupp ta 'ikel funzjonali u prodotti nutraċewtiċi derivati ​​minn din ir-riżorsa erbali.

Kliem ewlieni: Cistanche tubulosa; teknoloġija tal-ipproċessar tal-biċċa tad-decoction; acteoside; echinacoside; stress anti-ossidattiv; RAW264.7 makrofagu; mogħdija p38/AKT/JNK/NF‑κB

1. Introduzzjoni

Cistanche tubulosa(Schenk) Wight jappartjeni għall-familja Orobanchaceae, u l-parti mediċinali tagħha hija iz-zokk imnixxef imlaħħam b'weraq tal-iskala. Fiċ-Ċina, dan l-impjant huwa prinċipalment imħawla f'reġjuni aridi tal-majjistral, bl-akbar żona ta 'tħawwil fin-Nofsinhar ta' Xinjiang. Bħala mediċina veġetali tonika magħrufa sew, tiffunzjona biex tonifika l-yang tal-kliewi, timla l-essenza u d-demm, u xarrab l-imsaren biex ittaffi l-istitikezza. Klinikament, huwa użat għat-trattament ta 'defiċjenza tal-kliewi-yang, insuffiċjenza ta' essenza-demm, infertilità, uġigħ u dgħjufija tal-qadd u l-irkopptejn kif ukoll stitikezza ta 'nixfa intestinali.

Phenylethanoid glycosides, prinċipalment echinacoside u acteoside, huma l-komponenti attivi primarji ta 'Cistanche tubulosa. Skont ir-rekwiżiti tal-Farmakopea Ċiniża, il-kontenut totali ta 'echinacoside u acteoside f'materja prima mediċinali kwalifikata m'għandux ikun inqas minn 1.50 %, li jservi bħala l-indikatur kritiku tal-evalwazzjoni tal-kwalità. Approċċi tradizzjonali tal-ipproċessar għalCistanche tubulosal-aktar jadottaw metodi ta' tixrib-niddaf, tqattigħ-tnixxif jew inbid bil-fwar. Ħafna studji jiffokaw fuq it-titjib tar-rendiment tal-komponenti attivi, filwaqt li riċerki li jgħaqqdu l-ottimizzazzjoni tat-teknoloġija tal-ipproċessar mal-verifika tal-attività bijoloġika għadhom insuffiċjenti.

L-istress ossidattiv jaġixxi bħala l-bażi patoloġika komuni għal mard metaboliku u infjammatorju multipli. Riċerki eżistenti wrew li glycosides totali estratti minnCistanche tubulosajista' jrażżan ir-rispons infjammatorju u jattiva l-passaġġ Nrf2/HO-1 biex itaffi l-ħsara fil-fwied f'annimali sepsis. Il-frazzjonijiet ta 'lignan glycoside minn din il-ħaxix jistgħu jtaffu l-infjammazzjoni tal-makrofaġi billi jirregolaw is-sinjalar PI3K/AKT. Madankollu, il-proprjetà farmakoloġika tal-biċċiet tad-decoction ipproċessati moderni u l-mekkaniżmu molekulari sottostanti tagħha għadhom jeħtieġu aktar esplorazzjoni.

F'dan l-istudju, id-disinn tal-wiċċ ta 'rispons Box-Behnken ġie applikat ibbażat fuq testijiet ta' fattur wieħed, billi ħa l-ħxuna tal-qatgħat, il-ħin tal-fwar u t-temperatura tat-tnixxif bħala varjabbli biex jiġi ottimizzat il-fluss tax-xogħol tal-ipproċessar. Wara li nkisbu l-aħjar parametri tekniċi, ġie stabbilit mudell taċ-ċelluli ta 'ħsara ossidattiva RAW264.7 indott mill-LPS biex jevalwa l-istress anti-ossidattiv u l-kapaċità anti-infjammatorja u jiddissezzjona mekkaniżmu ta' sinjalar rilevanti. Dan ix-xogħol għandu l-intenzjoni li jipprovdi parametri ta' pproċessar stabbli u operabbli għall-produzzjoni fuq skala pilota, u jistabbilixxi pedament sperimentali għall-użu komprensiv ta'Cistanche tubulosariżorsi.

2. Materjali u Metodi

2.1 Materjal tal-Pjanti, Reaġenti u Strumenti

Zkuk imlaħħam friski taCistanche tubulosainħasdu fil-ħarifa minn Hotan, Xinjiang. Ċelloli tal-lewkimja RAW264.7 tal-ġurdien monocyte-macrophage inxtraw minn Procell Life Science & Technology Co., Ltd (Wuhan, iċ-Ċina).

Aċetonitrile u metanol ta' grad HPLC inkisbu mill-kumpanija Merck. L-istandards ta' referenza ta' Echinacoside (Akbar minn jew ugwali għal 98 %) u acteoside (Aktar minn jew ugwali għal 98 %) ġew fornuti mill-Istitut tal-Metroloġija ta' Beijing North Weiye. Dimethyl sulfoxide (DMSO) inxtara minn Sigma-Aldrich. Medji ta 'glucose għoli DMEM, serum bovin fetali (FBS), soluzzjoni ta' antikorpi doppji tal-peniċillina-streptomycin, kit ta 'kwantifikazzjoni tal-proteini BCA, kits ta' analiżi għal NO, MDA, SOD, CAT, GSH u LDH, lipopolysaccharide (LPS), reaġent MTT u kits ELISA għal ċitokini infjammatorji kienu kollha prodotti kummerċjali.

L-istrumenti sperimentali kienu jinkludu kromatografu likwidu ta’ prestazzjoni għolja Shimadzu, evaporatur rotatorju, pulverizer tal-ħxejjex Ċiniżi, forn tat-tnixxif tal-blast termostatiku, cooker tal-fwar, qarrej tal-mikroplate full-wavelength, bilanċ analitiku elettroniku, ċentrifuga refriġerata, kabinett tal-bijosigurtà u mikroskopju ottiku invertit.

2.2 Esperiment ta' Ipproċessar b'fattur Uniku

FriskCistanche tubulosazkuk imlaħħam inqatgħu fi flieli bi ħxuna ta '0.2 ċm, 0.4 ċm, 0.6 ċm, 0.8 ċm, 1.0 ċm u 1.2 ċm. Flieli ġew steamed għal 3 min, 6 min, 9 min, 12 min, 15 min, 18 min u 21 min rispettivament, u mnixxfa taħt gradjenti ta 'temperatura differenti inkluż temperatura tal-kamra (25 grad), 40 grad, 50 grad, 60 grad, 70 grad u 80 grad. Kampjuni ta' biċċa decoction imnixxfa ġew imfarrak u mgħarbel permezz ta' għarbiel ta' 40 malja għal skoperta sussegwenti. Formula ta' punteġġ kompost ġiet adottata għal valutazzjoni komprensiva: Punteġġ kompost=kontenut ta' echinacoside × 50 % + kontenut ta' acteoside × 50 %.

2.3 Determinazzjoni HPLC ta 'Acteoside u Echinacoside

Preparazzjoni tas-soluzzjoni tal-kampjun: iżen b'mod preċiż 1.0 g kampjun ta' trab, żid 100 mL 50 % soluzzjoni ta' metanol. Wara 30-min tixrib, estrazzjoni ultrasonika saret għal 40 min. It-telf ta' piż ġie supplimentat b'50 % metanol wara t-tkessiħ. Is-supernatant ġie ffiltrat b'membrana mikroporuża ta '0.22 μm qabel l-injezzjoni HPLC.

Soluzzjoni mħallta ta' referenza standard ta' acteoside u echinacoside ġiet ippreparata b'50 % metanol u dilwita f'konċentrazzjonijiet serjali għal plotting standard-curve. Kundizzjonijiet kromatografiċi: Kolonna kromatografika COSMOSIL C₁₈; sistema ta' fażi mobbli kienet tikkonsisti f'soluzzjoni milwiema ta' 0.1 % ta' aċidu fosforiku (A) u aċetonitrile (B); wavelength ta 'skoperta ġie stabbilit bħala 330 nm; temperatura tal-kolonna 35 grad; rata tal-fluss 1 mL/min. Intuża metodu standard estern għall-kalkolu kwantitattiv tal-komposti fil-mira.

2.4 Disinn Sperimentali tal-wiċċ ta' Rispons Box‑Behnken

Skont riżultati sperimentali b'fattur wieħed, il-ħxuna tal-qatgħat (X₁), il-ħin tal-fwar (X₂) u t-temperatura tat-tnixxif (X₃) intgħażlu bħala varjabbli indipendenti. Il-kontenut ta' Acteoside (Y₁, %) u l-kontenut ta' echinacoside (Y₂, %) servew bħala valuri ta' rispons. Is-softwer Design‑Expert 13.0 intuża biex tiġi stabbilita skema sperimentali Box‑Behnken bi tliet fatturi bi tliet livelli b’total ta’ 17-il grupp ta’ testijiet. It-twaħħil tal-mudell, l-analiżi tal-varjanza u t-tbassir tal-parametri tlestew b'softwer. L-esperimenti ta' verifika prattiċi twettqu fi tliet kopji wara li ġew aġġustati l-aħjar parametri teoretiċi biex jaqblu ma' l-operazzjoni attwali tal-produzzjoni.

2.5 Kultura taċ-Ċelloli u Preparazzjoni tal-Kampjun

Il-kampjun tal-biċċa tad-decoction miksub taħt kondizzjoni ottimizzata tal-ipproċessar ġie ppreparat fi trab tal-estratt. It-trab ġie maħlul f'DMSO u aktar dilwit b'medja DMEM kompluta li fiha 10 % FBS u 1 % penicillin-streptomycin għal esperimenti taċ-ċelluli. Iċ-ċelloli RAW264.7 ġew ikkultivati ​​f'inkubatur umidifikat f'37 grad b'5 % CO₂.

2.6 Assaġġ MTT għall-Vijabilità taċ-Ċelloli

Is-sospensjoni taċ-ċelluli ġiet imlaqqma fi pjanċi ta’ 96-well b’densità taċ-ċelluli ta’ 8 × 10⁴ ċelluli/mL. Gruppi ġew stabbiliti bħala grupp ta 'kontroll tas-solvent (0.1 % DMSO), grupp mudell LPS (1 ug/mL LPS), u gruppi ta' konċentrazzjoni multipli ta 'Cistanche tubulosaestratt (3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100, 200, 400 ug/mL). Wara sagħtejn qabel inkubazzjoni tal-kampjuni, LPS b'konċentrazzjoni finali ta '1 ug/mL ġie miżjud ħlief bjar ta' kontroll tas-solvent u inkubat għal 24 siegħa oħra. Soluzzjoni MTT (5 mg/mL) ġiet miżjuda għal reazzjoni ta' 4 sigħat. Wara li tneħħi s-supernatant, DMSO ġie miżjud biex jinħall il-kristall formazan. Il-valur ta' assorbiment f'490 nm ġie skopert minn microplate reader biex tiġi kkalkulata l-vijabbiltà taċ-ċelluli. Intgħażlet firxa ta' konċentrazzjoni sigura għal testijiet funzjonali ta' segwitu.

2.7 Kejl ROS intraċellulari

Iċ-ċelloli RAW264.7 ġew miżrugħa fi pjanċi ta '6-well f'densità ta' 4 × 10⁵ ċelluli għal kull bir. Wara li teħel mal-ħajt, iċ-ċelloli ġew ittrattati minn qabel b'konċentrazzjoni ta 'gradjentCistanche tubulosaestratt (12.5, 25, 50, 100 ug/mL) għal 2 sigħat, imbagħad stimulat minn 1 ug/mL LPS għal 24 siegħa. Il-livell ta' ROS intraċellulari ġie skopert b'kitt tar-reaġent tas-sonda fluworexxenti. L-intensità tal-fluworexxenza ġiet irreġistrata taħt wavelength ta 'eċitazzjoni 488 nm u wavelength ta' emissjoni 525 nm.

2.8 Sejbien ta 'NO, MDA, SOD, CAT, LDH u GSH

Is-supernatant tal-kultura taċ-ċelluli nġabar biex jinstab kontenut NO permezz tal-metodu Griess. Iċ-ċelloli ġew maħsula b'PBS imkessaħ minn qabel u lisati fuq is-silġ. Lisat taċ-ċelluli ġie ċentrifugat bi 10 000 rpm taħt 4 gradi għal 5 min biex jakkwista supernatant intraċellulari. Il-kontenut tal-MDA, l-attivitajiet tal-enżimi tal-livell ta 'SOD, CAT, LDH u GSH ġew imkejla strettament skont l-ispeċifikazzjonijiet tal-kit. Il-metodu BCA ġie applikat għan-normalizzazzjoni tal-proteini totali.

2.9 ELISA Sejbien ta' Ċitokini Pro-infjammatorji

Iċ-ċelloli RAW264.7 ġew ittrattati b'kampjun u LPS għal 16-il siegħa. Is-supernatant tal-kultura ġie miġbur u ċentrifugat fi 10 000 rpm għal 10 min. Il-konċentrazzjonijiet ta' sekrezzjoni ta' TNF-, IL-1 u IL-6 ġew ikkwantifikati minn kits ELISA.

2.10 Analiżi Western Blot

Wara intervent ta' 45 minuta ta' kampjuni u LPS, il-proteina ċellulari totali ġiet estratta bl-użu ta' buffer ta' liżi RIPA. Il-konċentrazzjoni tal-proteina ġiet ikkwantifikata permezz tal-kit BCA. Ammont ugwali ta 'kampjun ta' proteina (50 ug għal kull korsija) ġie żnaturat, separat b'elettroforeżi SDS-PAGE u trasferit fuq membrana PVDF. Il-membrana ġiet imblukkata b'soluzzjoni ta' 5 % ta' ħalib xkumat TBST għal siegħa, imbagħad inkubata b'antikorpi primarji matul il-lejl f'4 gradi. Wara ħasil ripetut b'TBST, l-antikorp sekondarju ġie inkubat f'temperatura tal-kamra għal siegħa. Meded ta 'proteini fil-mira ġew viżwalizzati permezz ta' reaġent kimiluminixxenti ECL. Saret analiżi fuq skala griża tal-banda biex jiġi kkalkulat il-proporzjon tal-fosforilazzjoni-proteina/proteina totali.

2.11 Analiżi Statistika

Is-softwer GraphPad Prism 8.0.2 intuża għall-plottjar tal-grafiċi u l-analiżi statistika. ANOVA f'direzzjoni waħda u t-test ġew adottati għat-tqabbil tad-dejta.P < 0.05 represented statistically significant difference; P < 0.01 and P < 0.001 stood for higher significance. All experimental data were expressed as mean ± standard deviation (\(\bar{x}\pm s\)).

3. Riżultati

3.1 Riżultati Sperimentali b'fattur Uniku

Il-ħxuna tal-qatgħat eżerċitat influwenza prominenti fuq il-kontenut tal-glukosid fil-mira. Flieli ta 'ħxuna ta' 0.2 ċm kienu faċli biex jiġu żżejjed, li kkawżaw dekompożizzjoni termali ta 'ingredjenti attivi. Flieli ħoxnin iżżejjed ixekklu r-rilaxx ta' sustanzi attivi interni. Meta l-ħin tal-fwar ġie ffissat għal 10 min u t-temperatura tat-tnixxif f'60 grad, 0.4 ċm kien l-aħjar parametru tal-ħxuna tal-qatgħat fl-iskrinjar b'fattur wieħed.

Ħin insuffiċjenti ta' fwar ma setax jeqred għal kollox l-istruttura taċ-ċelluli tal-pjanti u wassal għal rendiment baxx ta' glycoside. Meta l-ħin tal-fwar qabeż is-6 min, seħħet id-diżintegrazzjoni tat-tessut u l-echinacoside kif ukoll l-acteoside iddegradaw. Taħt ħxuna fissa ta 'slice ta' 0.4 ċm u temperatura ta 'tnixxif ta' 60 grad, 6 min kienet l-aħjar kundizzjoni ta 'ħin ta' fwar.

F'ċerta medda, il-kontenut ta 'phenylethanoid glycosides żdied flimkien ma' żieda fit-temperatura tat-tnixxif, iżda d-degradazzjoni seħħet ladarba t-temperatura qabżet is-60 grad. Bi ħxuna tal-porzjon ta '0.4 ċm u ħin ta' fwar ta '6 min, 60 grad wera l-aħjar prestazzjoni komprensiva fl-iskrinjar b'fattur wieħed.

3.2 Test ta' Verifika u Ottimizzazzjoni tal-wiċċ tar-rispons

L-analiżi tal-varjanza wriet li l-mudelli ta’ rigressjoni għall-kontenut ta’ acteoside u echinacoside kienu sinifikanti (P < 0.05, P < 0.01). The lack‑of‑fit term was non‑significant (P >0.05), li jindika grad tajjeb ta 'twaħħil tal-mudell. Il-koeffiċjent ta' determinazzjoni R² kien qrib 1, li wera korrelazzjoni għolja bejn il-valur previst u d-dejta sperimentali attwali.

L-ordni ta 'influwenza tal-fatturi għall-kontenut ta' acteoside kienet ħxuna tal-porzjon> temperatura tat-tnixxif> ħin tal-fwar. Għal kontenut ta 'echinacoside, l-ordni kienet ħin ta' fwar> temperatura tat-tnixxif> ħxuna tal-porzjon.

Parametri ottimali teoretiċi kkalkulati minn softwer kienu ħxuna tal-porzjon 0.600 ċm, ħin tal-fwar 5.685 min u temperatura tat-tnixxif 57.009 grad . Meta wieħed iqis il-kundizzjoni prattika tal-produzzjoni, il-parametri ġew aġġustati għal ħxuna tal-porzjon 0.6 ċm, ħin tal-fwar 6 min u temperatura tat-tnixxif 57 grad. Tliet gruppi ta' esperimenti ta' verifika paralleli kisbu kontenut ta' acteoside ta' 7.25 % u kontenut ta' echinacoside ta' 31.62 %. Id-devjazzjoni bejn il-valur prattiku u l-valur teoretiku previst kienet ta' 3.89 % u 4.92 % rispettivament, li wriet l-affidabbiltà ta' dan il-mudell tal-wiċċ ta' rispons.

3.3 Riżultat tal-Iscreening tal-Vijabilità taċ-Ċelluli

F'medda ta' konċentrazzjoni ta' 0-100 ug/mL,Cistanche tubulosaL-estratt tal-biċċa tad-decoction ma kellu l-ebda ċitotossiċità ovvja fuq iċ-ċelloli RAW264.7 u wera effett ħafif li jippromwovi l-proliferazzjoni. Meta l-konċentrazzjoni laħqet 200 ug/mL u aktar, il-vijabbiltà taċ-ċelluli naqset b'mod sinifikanti. Għalhekk, 12.5 ug/mL, 25 ug/mL, 50 ug/mL u 100 ug/mL ġew magħżula bħala konċentrazzjonijiet ta 'ħidma għal esperimenti sussegwenti taċ-ċelluli.

3.4 Effett fuq il-Livell ROS Intraċellulari

Meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll tas-solvent, il-grupp tal-mudell LPS wera intensità ta' fluworexxenza ROS intraċellulari notevolment elevata (P < 0.001), proving the successful establishment of oxidative‑stress injury model. Pretreatment of Cistanche tubulosaestratt naqqas l-akkumulazzjoni eċċessiva ta' ROS b'mod dipendenti mid-doża (P < 0.001 versus model group).

3.5 Regolament dwar NO, MDA u Indikaturi relatati mal-antiossidanti

L-istimulazzjoni ta 'LPS indotta żieda qawwija ta' kontenut ta 'NO u MDA fiċ-ċelloli RAW264.7. Meta mqabbel mal-grupp tal-mudell LPS, l-intervent tal-estratt naqqas b'mod sinifikanti l-livell ta' NO b'tendenza dipendenti mid-doża. 12.5 estratt ug/mL ma pproduċiex effett ovvju fuq il-kontenut tal-MDA, filwaqt li estratt ta' 25-100 ug/mL naqqas b'mod osservabbli l-konċentrazzjoni tal-MDA (P < 0.001).

Wara t-trattament LPS, l-attivitajiet tal-kontenut ta 'SOD, CAT, LDH u GSH intraċellulari naqsu b'mod notevoli. 12.5 estratt ug/mL jista' jtejjeb l-attività SOD mingħajr ma jtejjeb l-attivitajiet CAT u LDH. Estratt f'konċentrazzjoni ta' 25-100 ug/mL elevati b'mod sinifikanti l-attivitajiet tal-enzimi SOD, CAT, LDH u kontenut ta' GSH b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni.

3.6 Effett Inibitorju fuq Sekrezzjoni ta' Ċitokini Pro-infjammatorji

L-istimulazzjoni tal-LPS qanqlet rilaxx massiv ta 'TNF-, IL-1 u IL-6 fil-makrofagi RAW264.7.Cistanche tubulosaIt-trattament minn qabel tal-estratt tal-biċċa tad-decoction irażżan b'mod notevoli s-sekrezzjoni tat-tliet ċitokini pro-infjammatorji msemmija hawn fuq (P < 0.001), presenting prominent dose‑dependent anti‑inflammatory property.

3.7 Modulazzjoni fuq il-Passaġġ tas-Sinjali p38/AKT/JNK/NF‑κB

Meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll tas-solvent, l-intervent LPS żied il-proporzjon ta' fosforilazzjoni ta 'p-p38/p38, p-AKT/AKT, p-JNK/JNK u p-NF-κB/NF-κB. Gruppi ta' estratti ta' doża medja u għolja naqqsu b'mod sinifikanti l-proporzjon p-p38/p38 u p-JNK/JNK. Il-gruppi ta' konċentrazzjoni kollha regolati 'l isfel fil-livell p-AKT/AKT u p-NF-κB/NF-κB (P < 0.05 or P < 0.001). Results illustrated that optimized Cistanche tubulosaL-estratt tal-biċċa tad-decoction rażżan l-attivazzjoni tal-mogħdija tas-sinjalar p38/AKT/JNK/NF-κB billi inibixxi l-fosforilazzjoni tal-proteini.

4. Diskussjoni

Rekwiżiti tal-ipproċessar attwali għalCistanche tubulosairreġistrati fil-Farmakopea Ċiniża jiddeskrivu biss passi ta 'operazzjoni kwalitattiva mingħajr parametri kwantitattivi preċiżi. Riċerki preċedenti indikaw li metodi ta’ pproċessar differenti jikkawżaw differenzi kbar fil-kompożizzjoni kimika u l-attività farmakoloġika bejn mhux raffinat u pproċessat.Cistanche tubulosakampjuni. Il-prodotti pproċessati juru prestazzjoni aħjar antiossidanti u regolatorja immuni meta mqabbla mal-materja prima.

F'din ir-riċerka, l-ipproċessar modern tat-tnixxif bil-fwar ottimizzat permezz tal-metodoloġija tal-wiċċ tar-rispons kiseb rendiment ferm ogħla ta 'echinacoside u acteoside minn ħafna tekniki ta' pproċessar tradizzjonali. Jissuġġerixxi li kontroll preċiż fuq il-ħxuna tal-qatgħat, it-tul tal-fwar u t-temperatura tat-tnixxif jistgħu effettivament iżommu u jtejbu l-kontenut tal-phenylethanoid-glycoside ta 'Cistanche tubulosa.

L-istress ossidattiv u l-infjammazzjoni huma proċessi patoloġiċi konnessi mill-qrib. ROS eċċessiv jagħti lok għal perossidazzjoni tal-lipidi u akkumulazzjoni ta 'MDA; sadanittant jattiva kaskati infjammatorji downstream u jippromwovi l-ġenerazzjoni ta 'NO u ċitokini pro-infjammatorji multipli. Il-medjaturi infjammatorji jaċċelleraw aktar il-produzzjoni ta 'ROS u jiffurmaw ċiklu patoloġiku vizzjuż. Ir-riżultati sperimentali ċellulari tagħna wrew li ottimizzatiCistanche tubulosaL-estratt tal-biċċa tad-decoction jista 'jelimina ROS żejda, inaqqas il-markaturi ta' ħsara ossidattiva NO u MDA, jirrestawra l-attività tas-sistema tal-enżimi antiossidanti rappreżentati minn SOD, CAT, LDH u jimla GSH intraċellulari, kif ukoll jinibixxi r-rilaxx ta 'ċitokini pro-infjammatorji b'relazzjoni ovvja tal-effett tad-doża.

p38, JNK li jappartjenu għall-familja MAPK u l-assi AKT-NF-κB huma ċentri ewlenin tat-trasduzzjoni tas-sinjali li jimmedjaw ir-rispons ossidattiv-infjammatorju tal-makrofagi. L-istimulazzjoni tal-LPS tippromwovi l-fosforilazzjoni ta 'p38, JNK u AKT, tattiva aktar NF-κB u tinduċi traskrizzjoni ta' bosta ġeni pro-infjammatorji. Id-dejta tal-western-blot żvelat danCistanche tubulosaL-estratt tal-biċċa tad-decoction imblokka l-attivazzjoni tal-fosforilazzjoni ta' p38, JNK, AKT u NF-κB. Huwa dedott li l-echinacoside u l-acteoside b'kontenut għoli mill-ipproċessar ottimizzat jikkontribwixxu b'mod konġunt għat-trażżin tal-kaskata tas-sinjalar p38/AKT/JNK/NF-κB, sabiex ittaffi l-istress ossidattiv ikkawżat mill-LPS u l-ħsara infjammatorja fil-makrofaġi RAW264.7.

Għad hemm limitazzjonijiet eżistenti f'dan l-istudju. L-evalwazzjonijiet farmakoloġiċi kollha tlestew fuq mudell taċ-ċelluli in-vitro. Huma meħtieġa aktar esperimenti fil-livell tal-annimali biex tiġi vverifikata l-effikaċja in vivo u l-karatteristiċi metaboliċi ta’Cistanche tubulosabiċċiet tad-decoction.

Bħala konklużjoni, dan l-istudju stabbilixxa teknoloġija ta 'pproċessar moderna kwantifikabbli u skalabbli għalCistanche tubulosabiċċiet tad-decoction. Taħt parametri ta 'pproċessar ta' ħxuna ta 'slice 0.6 ċm, ħin ta' fwar 6 min u temperatura tat-tnixxif ta '57 grad, il-kontenut tal-glikożidi feniletanojdi prinċipali jitjieb ħafna. Biċċiet tad-decoction ipproċessati jistgħu jtaffu l-istress ossidattiv u l-ħsara infjammatorja fil-makrofaġi RAW264.7 stimulati mill-LPS billi jinibixxu l-mogħdija tas-sinjalar p38/AKT/JNK/NF-κB. Din ir-riċerka tipprovdi referenza teknika prattika għall-produzzjoni industrijalizzata, u toffri bażi sperimentali għall-iżvilupp ta' prodotti ta' ikel funzjonali u supplimenti tad-dieta ta' oriġini XinjiangCistanche tubulosa.

Rikonoxximenti

Dan ix-xogħol kien appoġġjat minn Żgħażagħ Xjenza u Teknoloġija Sinsla Innovazzjoni Kapaċità Proġett ta 'Kultivazzjoni ta' Xinjiang Akkademja tax-Xjenzi Agrikoli (xjnkq-2022022) u Xinjiang "Tianchi Doctor Program" (2021).

Referenzi

[1] Lin J, Yu H, Zhao Y, et al. Estrazzjoni ta 'echinacoside minnCistanche tubulosau investigazzjoni tal-effett protettiv tiegħu fuq il-ħsara fil-fwied fil-firien sepsis.Xjenza u Teknoloġija tal-Ikel. 2023;43:e010523.

[2] Guo J, Tang S, Miao Y, et al. L-effetti anti-infjammatorji ta 'lignan glycosides minnCistanche tubulosazkuk fuq ċelluli makrofaġi RAW264.7 indotti minn LPS/IFN permezz tal-mogħdija PI3K/AKT.Bijoteknoloġija Farmaċewtika kurrenti. 2021;22(10):1380‑1391.

[3] Rani V, Deep G, Singh RK, et al. Stress ossidattiv u disturbi metaboliċi: Patoġenesi u strateġiji terapewtiċi.Xjenzi tal-Ħajja. 2016;148:183‑193.

[4] Martínez-de-Toda I, Ceprián N, Díaz-de-Castro E. Ir-rwol tal-oxi-inflamm-aging fil-patofiżjoloġija umana.Ċelloli. 2021;10(11):2974.

[5] Chung YC, Song SJ, Lee A, et al. Isobavachin itaffi r-risponsi infjammatorji indotti minn lipopolysaccharide fil-makrofaġi u żebrafish billi jrażżan il-mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni MAPK u NF-κB.Ġurnal ta 'Ethnopharmacology. 2024;321:117501.