In-Nanofibri tal-Aċidu Oleanoliku Attenwaw Stress Ossidattiv Ikkaġunat mill-Materja Partikulata fil-Keratinoċiti

Jekk jogħġbok ikkuntattja lil oscar.xiao@wecistanche.com għal aktar informazzjoni

Astratt:Il-materja partikulata fl-arja (PM) hija minerali tal-indikaturi tat-tniġġis tal-arja, u hija wkoll il-fattur ewlieni li jikkawża stress ossidattiv fil-ġilda. L-aċidu oleanoliku (OA), kompost terpenojdi naturali, inibixxi b'mod effettiv it-tixjiħ tal-ġilda kkaġunat mill-PM; madankollu, l-OA għandu solubilità fqira fl-ilma u assorbiment tal-ġilda, li jillimitaw l-applikazzjoni tiegħu f'mediċini u kożmetiċi. L-għan ta 'dan l-istudju kien li jipprepara nanofibri ta' l-aċidu oleanoliku (OAnf) u jevalwa l-effetti ta 'OA u OAnf f'keratinoċiti trattati bil-PM. Ir-riżultati wrew li (OA maħlul fi maħlul f'dimethyl sulfoxide (DMSO) attenwat il-produzzjoni żejda ta' speċi ossiġer reattivi indotti mill-PM, attivazzjoni tal-proteina kinase/Jun-amino-terminal kinase (SAPK/JNK) attivata mill-istress, u l-espressjonijiet ta 'infjammatorji u tal-ġilda -proteini relatati mat-tixjiħ Barra minn hekk, il-proċess tan-nanofibra ta 'OA tejbet b'mod effettiv is-solubilità fl-ilma ta' OA aktar minn 99,000-foldthrough tbiddel il-proprjetajiet fiżikokimiċi tagħha, inkluż żieda fl-erja tal-wiċċ, tnaqqis fid-daqs tal-partiċelli, trasformazzjoni amorfa, u formazzjoni ta' rbit ta' idroġenu b'eċċipjenti. Il-kapaċità ta' penetrazzjoni tal-ġilda ta' OAnf kienet b'mod konsistenti aktar minn 10-darbiet ogħla minn dik ta 'OA. Barra minn hekk, meta maħlul fil-PBS, OAnf wera attivitajiet antiossidanti, anti-infjammatorji u kontra t-tixjiħ tal-ġilda superjuri fil-PM keratinocytes ittrattati milli OA.B'konklużjoni, is-sejbiet tagħna jissuġġerixxu li OAnf jista 'jkun formulazzjoni antiossidant topika biex ittaffi l-problemi tal-ġilda kkawżati minn PM.

Kliem ewlieni:Materjali partikuli; aċidu oleanoliku; nalnofibra; antiossidant; anti-infjammatorji; kontra t-tixjiħ

1. Introduzzjoni

It-tniġġis tal-arja issa huwa problema tas-saħħa pubblika madwar id-dinja kollha. Bl-iżvilupp tat-teknoloġija, diversi sustanzi ta 'ħsara, inklużi gassijiet, sustanzi kimiċi, inkwinanti bijoloġiċi, u partiċelli, jakkumulaw fl-atmosfera u jaffettwaw b'mod sever il-ħajja u s-saħħa tan-nies. Il-materja partikulata (PM), indikatur tas-sustanzi li jniġġsu l-arja, hija kombinazzjoni ta' diversi komposti organiċi, materjali derivati ​​bijoloġikament, u nuklei tal-karbonju tal-partikuli[1]. Il-PM jidħol fil-pulmuni bin-nifs u jidħol fiċ-ċirkolazzjoni tad-demm u jikkawża perikli sistemiċi għas-saħħa bħal infjammazzjoni tal-organi u mard kardjovaskulari u respiratorju [2,3]. Barra minn hekk, PM jista 'jgħaddi mill-barriera tal-ġilda u jakkumula fil-follikuli tax-xagħar u saħansitra jippenetra fid-dermis b'kuntatt ripetut; għalhekk, espożizzjoni żejda tal-ġilda għall-PM ġiet assoċjata ma 'tixjiħ estrinsiku tal-ġilda, bidliet fil-pigmentazzjoni, dermatite atopika, akne u psorjasi [2,4]. Kuntatt fit-tul mal-PM iwassal għall-produzzjoni żejda ta 'speċi ta' ossiġnu reattiv (ROS) fil-keratinoċiti, li jqanqal diversi mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni inklużi l-mogħdija ta' l-apoptożi, mogħdijiet ta 'proteina kinażi attivata minn mitoġenu (MAPKs), u infjammazzjoni. Espressjoni elevata ta' cycloxygenase-2 (COX-2), fattur tan-nekrożi tat-tumur- (TNF-a), u interleukin-1 (IL{-1 ) tidher b'mod komuni f'keratinoċiti esposti għal PM.Barra minn hekk, PM jattiva wkoll matrix metalloproteinases (MMPs) u jirriżulta fit-telf tal-elastiċità tal-ġilda u t-tixjiħ [5].

Jekk jogħġbok ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

Prodotti naturali ilhom jintużaw bħala ingredjenti kożmeċewtiċi effettivi. Oleano-lic acid (OA, 3 -hydroxyolean-12-en-28-oicacid), kompost triterpenojdi b'ħames ċrieki, huwa preżenti b'mod wiesa' fil-pjanti, frott u ħxejjex [6]. L-OA hija magħrufa sew għall-effetti protettivi epatiċi tagħha bħat-tnaqqis tal-ħsara akuta fil-fwied ikkawżata minn kimiċi u fibrożi/ċirrożi f'mard kroniku tal-fwied [6,7]. Barra minn hekk, studji preċedenti wrew li l-OA pos-sesses effetti antiossidanti, kontra l-kanċer, anti-infjammatorji, anti-dijabetiċi, anti-mikrobiċi [8]Kim et al. żvelat li l-OA jista' jnaqqas l-espressjoni taċ-ċitokini pro-infjammatorji (TNF-a,IL-6) u tal-proteina li qed tixjieħ fil-ġilda (MP{-1) f'keratinoċiti trattati bil-PM [9]. Madankollu, il-proprjetajiet fiżikokimiċi tal-OA jagħmluha diffiċli biex tinħall fl-ilma, u dan jillimita l-applikazzjoni tiegħu f'mediċini, ikel u kożmetiċi.

Id-disinji tal-formulazzjoni tal-kunsinna tad-droga bħal nanocarriers ibbażati fuq polimeri, li. posomes, u nanofibers huma normalment użati biex itejbu l-proprjetajiet fiżikokimiċi ta ' l-ingredjenti attivi. L-inkapsulament ta 'ingredjenti attivi ma' eċċipjenti f'dawn il-formulazzjonijiet farmaċewtiċi jista 'jtejjeb is-solubilità fl-ilma u l-assorbiment tal-ġilda tagħhom u jnaqqas it-tossiċità u l-irritazzjoni potenzjali għall-ġilda. Fost dawn, nanofibers huma formulazzjoni nanosized emerġenti, b'erja tal-wiċċ kbira, densità baxxa, u volum ta 'pori għoli, u diġà huma użati ħafna fil-bijomediċina, li jistgħu jnaqqsu l-volum ta' mediċini orali, iżidu l-istabbiltà ta 'ingredjenti attivi, kontroll rilaxx, ittejjeb il-bijodisponibilità, u tagħmel tessuti artifiċjali [10]. L-elettrospinning hija teknoloġija komuni użata biex tipproduċi nanofibri u hija kompatibbli ħafna mal-produzzjoni tal-massa [1]. Għalhekk, il-preparazzjoni ta 'nanofiber bl-użu tal-proċess ta' electrospinning tista 'fl-istess ħin ittejjeb il-bijodisponibilità. u l-effiċjenza tal-produzzjoni ta' ingredjent attiv b'solubilità fqira fl-ilma. Polyvinyl pyrrolidone (PVPK90) u 2-hydroxypropyl- -cyclodextrin (HPBCD) huma komposti approvati mill-FDA għas-solubilizzazzjoni u l-kunsinna ta' ingredjenti farmaċewtiċi attivi idrofobiċi fil-bnedmin.kolesterol cistancheStudji preċedenti wrew li nanofibers ippreparati b'HPBCD u PVPK90 tejbu b'mod sinifikanti s-solubilità fl-ilma u l-penetrazzjoni tal-ġilda tar-resveratrol [12] u żejt plai [13]. Għalhekk, l-għan ta 'dan l-istudju kien li juża PVPK90 u HPBCD bħala trasportaturi tal-kunsinna biex jippreparaw in-nanofibri tal-aċidu oleanoliku (OAnf) u biex jevalwaw l-effetti ta' OA u OAnf f'keratinoċiti trattati bil-PM.

Cistanche jista 'anti-aging

L-għan ta 'l-istudju preżenti kien li jevalwa l-effett bijoloġiku ta' OA maħlul f'DMSO fil-ħsara tal-keratinoċiti indotta mill-PM. Biex negħlbu s-solubilità fqira tal-ilma tal-OA, użajna PVPK90 u HPBCD bħala trasportaturi tal-kunsinna biex nippreparaw nanofibri tal-aċidu oleanoliku (OAnf) permezz ta 'proċess ta' electrospinning u mbagħad iddeterminajna l-bidliet tal-proprjetajiet fiżikokimiċi bejn OA mhux maħdum u OAnf biex niċċaraw it-titjib tas-solubilità tal-ilma u penetrazzjoni tal-ġilda. Biex tqabbel l-effett bijoloġiku wara l-proċess tan-nanofibra ta 'OA, intuża mudell ta' ħsara lill-keratinoċiti indotti mill-PM biex jevalwa l-attività antiossidativa, anti-infjammatorja u kontra t-tixjiħ ta 'OAnf u OA.

2. Materjali u Metodi

2.1.Materjali

L-idrat tal-aċidu oleanoliku (OA) inxtara minn Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. (Tokjo, Ġappun). Polyvinyl pyrrolidone (Luviskol" K90 Powder, PVP) inxtara minn Wei Ming Pharmaceutical Mfg. Co., Ltd. Taipei, Tajwan). Hydroxypropyl-beta-cyclodextrin (HPBCD) inkiseb minn Zibo Qianhui (Zibo, China).Metanol u dimetil sulfoxide (DMSO) inxtraw minn Aencore Chemical (Surrey Hills, Awstralja) Il-kimiċi jew ir-reaġenti kollha għall-kulturi taċ-ċelluli kienu ta 'grad bijoloġiku, u kimiċi oħra ta' determinazzjoni fiżikokimika kienu ta 'kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja (HPLC).

2.2.Assaġġ tal-Vijabilità taċ-Ċellula

Id-determinazzjoni tal-vijabbiltà taċ-ċelluli ta 'ingredjent attiv huwa metodu komuni użat biex jintgħażlu l-firxiet ta' konċentrazzjoni xierqa għall-ingredjenti attivi biex jevalwaw l-attività bijoloġika tagħhom. Il-keratinoċiti HaCaT inxtraw minn Istituto Zooprofilattico Sperimen-tale della Lombardia edell'Emilia Romagna (Brescia, l-Italja). Iċ-ċelloli HaCaT ġew ikkultivati ​​f'DMEM (Himedia Laboratories, Mumbai, India) li kien fih 10 fil-mija serum bovin tal-fetu (Hazelton Product, Denver, PA, USA) b'1 fil-mija penicillin-streptomycin (Biological Indus-tries, Connecticut, NE) , USA), u ċelluli HaCaT ġew inkubati f'inkubatur (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) bil-kundizzjonijiet stabbiliti f'37 grad b'5 fil-mija COz. Għall-preparazzjoni tal-kampjuni tat-test, OA u OAnf ġew maħlula f'DMSO u PBS, rispettivament, u mbagħad kull kampjun ġie dilwit f'DMEM mingħajr serum bovin fetali għad-determinazzjoni tal-vijabbiltà taċ-ċelluli. Iċ-ċelloli HaCaT ġew miżrugħa fi 96-pjanċi tal-bir f'densità ta '1 × 104 ċelluli/100 μL/bir għal 24h. Il-mezz tal-kultura mbagħad tneħħa, u ċ-ċelloli ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'OA u OAnf li jvarjaw minn 5 sa 80 uM f'DMEM mingħajr serum għal 24 siegħa. Fil-ħin tal-assaġġ, il-mezz ta 'trattament tneħħa, u 150 μL ta' 0.5 mg/mL soluzzjoni MTT ġiet miżjuda f'kull bir. Wara 3 sigħat ta 'inkubazzjoni, is-soluzzjoni MTT tneħħiet, u l-kristalli tal-formazan vjola ta' kull bir ġew maħlula f'100 uL ta 'DMSO. L-assorbiment f'550 nm ta 'kull bir imbagħad tkejjel bl-użu ta' spettro-fotometru tal-mikroplate (BioTek uQuant, Winoski, VT, USA). Il-vijabbiltà taċ-ċelluli ġiet ikkalkulata bil-formula li ġejja:

2.3.Determinazzjoni tal-Kontenut ta' Speċi ta' Ossiġenu Reattiv (ROS).

PM (Materjal ta 'Referenza Standard, SRMB1649b) inxtraw mill-Istitut Nazzjonali tal-Istandards u t-Teknoloġija. Dan il-prodott inġabar fl-1976 u l-197 f'Washington, DC Made. Total ta '10 mg/mL ta' PM ġew sospiżi f'PBS u mbagħad ivvibrati għal 10 min qabel l-użu. Total ta '1 × 10 flimkien ma' keratinoċiti HaCaT ġew ikkultivati ​​fi 96-pjanċi ta 'bir għal 24 siegħa taħt kundizzjonijiet ta' 37 grad u 5 fil-mija CO2. Iċ-ċelloli ġew ittrattati b'konċentrazzjonijiet differenti ta 'OA f'DMSO, OA f'PBS, u OAnf f'PBS għal 24h, rispettivament. Imbagħad, ġew inkubati b'20 uM dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA; Sigma, Tokyo, Japan) soluzzjoni għal 30 min. Sussegwentement, 50 ug/cm² PM ġie miżjud f'kull bir u inkubati għal siegħa. Wara dan, iċ-ċelloli ġew maħsula. darbtejn b'PBS, u l-intensità tal-fluworexxenza ta' kull kampjun ġiet analizzata bl-użu tal-qarrej tal-pjanċa fluworexxenti (eċċitazzjoni: 485 nm; emissjoni: 528 nm) (BioTek, Winooski, VI, USA) L-ekwazzjoni li ġejja ġiet użata biex tikkalkula l-perċentwali ta 'inibizzjoni Produzzjoni ROS:

2.4. Analiżi Western Blot

Total ta' 4 × 105 keratinoċiti HaCaT ġew ikkultivati ​​fi pjanċi ta' 6-bjar għal 24 siegħa. Iċ-ċelloli mbagħad ġew ittrattati b'OA jew OAnf f'medju mingħajr serum għal 24 siegħa segwit biż-żieda ta 'PM. Wara diversi punti ta' żmien, iċ-ċelluli ġew lysed bil-buffer RIPAlysis (Merck Millipore, Burlington, MA, USA), imbagħad ċentrifugati fi 12,000 rpm għal 10 min. Intuża kit ta' analiżi tal-proteina BCA (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) biex tiddetermina l-konċentrazzjoni tal-proteina. Imbagħad, il-proteini ġew separati b'elettroforesi tal-ġel tas-sodju dodecylsulfate-polyacrylamide (SDS-PAGE), u mbagħad imblukkati fuq mem-branes polyvinylidene difluoride (PVDF) (Merck Millipore). Il-membrani ġew imblukkati għal siegħa u maħsula b'salina buffered Tris ( TBS) b'1 fil-mija Tween-20. Il-membrani ġew inkubati b'antikorpi primarji f'4 gradi matul il-lejl. L-antikorpi primarji użati f'dan l-istudju kienu jinkludu cyclooxygenase-2 (COX{-2), matrix metalloproteinase-9 (MMP{-9), inibitur tat-tessuti tal-metallopro-teinase-1 (TIMP-1), proteina kinase attivata mill-istress/Jun-amino-terminal kinase (SAPK/JNK) (Teknoloġija tas-Sinjali taċ-Ċelloli, Danvers, MA, USA), GAPDH (Santa Cruz Bi-otechnology, Dallas, TX, USA), matrix metalloproteinase-1 (MMP{-1) (Proteintech Group, Rosemont, IL, USA), p380, protein kinases regolati extra-ċellulari (ERK), u fattur nukleari kappa-light-chain- li jsaħħaħ iċ-ċelluli B attivati ​​(NF-kB) (Merck Millipore, Burlington, MA, USA). Sussegwentement, antikorpi sekondarji ġew miżjuda għal siegħa f'temperatura tal-kamra u rreaġixxew b'reaġenti mtejba ta 'chemilu-minescence (ECL; Thermo Fisher Scientific). Antikorpi kontra GAPDH intużaw bħala kontrolli interni. L-espressjoni ta 'kull proteina ġiet analizzata bl-użu ta' Touch Imager (e-BLOT; Shanghai, iċ-Ċina), u l-espressjoni ġiet ikkwantifikata bl-użu ta 'ImageJ.

2.5.Preparazzjoni ta 'Nanofibers ta' Aċidu Oleanoliku (OAnf)

OAnfs kienu elettrospun bi proporzjonijiet differenti ta 'OA:PVP:HBPCD (1:8:5,1:8:10,u 1:8:20). Is-soluzzjoni elettrospun ġiet ippreparata kif ġej: 25 mg ta 'OA ġie maħlul f'5 mL ta' metanol, u HPBCD ġie miżjud u mħawwad b'ħawwad kalamita biex tinkiseb soluzzjoni ċara; imbagħad, PVPK90 ġie miżjud immedjatament, u t-taħlita tħawwad għal siegħa.effetti sekondarji cistanche deserticolaIn-nanofibri ġew minsuġa bl-użu ta 'tagħmir ta' elettro-spinning FES-COS (Falco Tech Enterprise Co., Taipei, Tajwan) taħt il-kundizzjonijiet li ġejjin: siringa ta '10 mL b'labra ta' dijametru intern ta '0. 22 mm kien impjegat għall-elettrospinning; ir-rata tal-fluss ġiet aġġustata għal 0.2 mL/h; il-vultaġġ applikat ġie stabbilit għal 12 KV; id-distanza tal-ponta-kollettur kienet 10 ċm. Wara l-proċess tal-electrospinning, in-nanofibri nġabru bl-użu ta 'fojl tal-aluminju. In-nanofibri li għadhom kif ġew sintetizzati tpoġġew f'borża tal-plastik issiġillata u maħżuna f'kontenitur li ma jgħaddix umdità.

2.6.Kromatografija Likwida ta' Prestazzjoni Għolja (HPLC) Analiżi tal-Aċidu Oleanoliku

Is-sistema ta' analiżi HPLC (LaChrom Elite L{{0}}, Hitachi, Tokyo, il-Ġappun) kienet tikkonsisti minn pompa L-2130, autosampler L-2200, u L{{3 }} ditekter ultravjola-viżibbli (UV-vis). Il-kolonna tal-analiżi kienet kolonna Mightysil RP-18 GP (250×4.6 mm id.,5 um). Il-fażi mobbli kienet magħmula minn metanol u soluzzjoni ta 'aċidu aċetiku glaċjali ta' 0.1 fil-mija fi proporzjon fiss (95:5; w/v). Ir-rata tal-fluss tal-fażi mobbli kienet ta '1 mL/min, u l-wavelength ta' skoperta tad-ditekter UV kien issettjat għal 215 nm. Il-quċċata ta 'assorbiment għall-aċidu oleanoliku deher f'7.5 min. Il-kurva tal-kalibrazzjoni tal-aċidu oleanoliku wriet （r =0.999) lineari tajba fil-medda 0.01-100 ug/mL.

2.7.Morfoloġija, Dijametru tal-Fibra, u Kejl tad-Daqs tal-Partiċelli ta 'OAnf

Kampjuni differenti ta 'nanofibers ġew ibbanjati bil-platinu b'joon coater (E{{0}}, HITACH, Tokyo, Ġappun); il-kundizzjoni ġiet issettjata għal 10 mA 120 s wara. Il-morfoloġija u l-forma ta 'kull kampjun ġew osservati permezz ta' mikroskopju elettroniku tal-iskannjar (Hitachi S4700 Hitachi, Tokyo, Ġappun). Id-dijametru ta 'kull kampjun kien ikkalkulat permezz ta' softwer tal-immaġni j. Analizzatur Zetasizer 3000HS (Malvern, Worcestershire, UK) intuża biex ikejjel id-daqs tal-partiċelli ta 'OAnf. Id-daqs tal-partiċelli ta 'OA u OAnf ġew imkejla f'konċentrazzjoni ta' 1 mg/mL u 0.1 mg/mL, rispettivament.cistanche dożaġġ redditBarra minn hekk, osservajna wkoll l-uniformità tal-morfoloġija ta 'OAnf wara li tinħall fl-ilma permezz ta' mikroskopju elettroniku ta 'trażmissjoni (TEM, JEM {{0}}strument EXII, JEOL Co., Tokyo, Japan). Il-kampjun tat-test ġie aġġustat għal 1 ug/mL ta 'OA f'ilma dejonizzat u mbagħad imqatta' fil-malji tar-ram, u mbagħad 0.5 fil-mija (w/v) aċidu fosfotungstiku kien imqattar immedjatament. Wara t-tnixxif, kull kampjun tpoġġa fuq it-TEM għall-osservazzjoni.

2.8.Tagħbija tad-Droga u Effiċjenza ta 'Inkapsulament ta' OAnf

Huwa importanti ħafna li tiġi ddeterminata l-effiċjenza tat-tagħbija u l-inkapsulament tad-droga tas-sistema tal-kunsinna għall-evalwazzjoni tal-prestazzjoni tal-proċess farmaċewtiku. It-tagħbija tad-droga ġiet ikkalkulata bħala l-perċentwal tal-kontenut determinat u l-kontenut teoretiku tal-OA li jinsab fin-nanofibri OA. Għad-determinazzjoni tat-tagħbija tad-droga 100 μL ta 'kull kampjun ġie miżjud f'900 μL ta' metanol, u l-konċentrazzjoni OA kienet fejn CoA hija l-konċentrazzjoni ta 'OA minn OAnf, WoA huwa l-ammont teoretiku ta' OA miżjud, VoAnf huwa l-volum ta 'soluzzjoni OAnf.

L-effiċjenza ta ' l-inkapsulament tindika jekk in-nanofibers incapsu-lated b'suċċess il-komposti attivi. Kampjuni OAnf ġew maħlul f'ilma dejonizzat, u ġew miżjuda fl-apparati tal-filtru ċentrifugali (Microcon YM-10, Millipore, Billerica, MA, USA), u mbagħad ċentrifugati fi 12,00 rpm għal 10 min b' iċ-ċentrifuga refriġerata (Centrifuge 5430R, Eppendorf, Hamburg, il-Ġermanja). Il-parti inkapsulata nżammet fit-tubu ta 'fuq, u l-parti mhux inkapsulata nġabret mit-tubu t'isfel minħabba d-differenza fil-piż molekulari. L-ammont ta 'OA mhux inkapsulat ġie skopert bil-metodu HPLC imsemmi hawn fuq. L-ekwazzjoni li ġejja ntużat biex tiġi kkalkulata l-effiċjenza tal-inkapsulament:

fejn AoA huwa l-ammont teoretiku ta 'OA (kiseb mill-kundizzjoni ta' tmigħ) inkorporat fin-nanofibers, u Aunentrapped OA huwa l-ammont ta 'OA mhux inkapsulat.

2.9.Solubbiltà fl-ilma ta' OAnf

OA mhux ipproċessat (1 mg) u formulazzjonijiet ta’ proporzjon differenti ta’ OAnf (li fihom ekwivalenti ta’ 1 mg aċidu oleanoliku) ġew maħlula f’1 mL ilma dejonizzat, rispettivament, u mbagħad ivvibrati taħt ultrasonikatur (Branson 5510, Emerson Electric, St. Louis, MO, USA) għal 20 min. Kull kampjun ġie ffiltrat minn membrana 0.45 um (Pall Corporation, Washington, NY, USA), u dilwit 10-darbiet. Is-soluzzjonijiet dilwiti ġew analizzati bl-HPLC, u l-kurva standard ġiet impjegata biex tiddetermina l-ammont ta 'aċidu oleanoliku għat-tqabbil tas-solubilità fl-ilma tagħhom.

2.10. Determinazzjoni tat-Trasformazzjoni Kristallina għal Amorfa

Diffrattometry tar-raġġi X (Siemens D500, Karlsruhe, il-Ġermanja) intużat biex tanalizza l-forma kristallina ta 'OA, eċċipjenti u OAnf. L-analiżi saret bl-użu ta 'radjazzjoni Cu-Ka ffiltrata bin-nikil, bl-użu ta' vultaġġ ta '40 kV u kurrent ta' 25 mA. Ir-rata tal-iskannjar kienet 1 grad / min, u l-firxa tal-angoli skennjati kienet minn 5 gradi sa 50 grad. 2.11.Interazzjoni intermolekulari bejn OA u Eċċipjenti

Spettroskopija infra-aħmar tat-trasformazzjoni Fourier (FTIR) u reżonanza manjetika 1HNuclear (1H NMR) huma ġeneralment użati biex jikkonfermaw l-interazzjoni intermolekulari bejn ingredjenti attivi u eċċipjenti. Aċidu oleanoliku, PVP, HPBCD, u formulazzjonijiet ta 'proporzjon differenti ta' OAnf kienu, rispettivament, imħallta ma 'bromur tal-potassju (KBr) fi proporzjon tal-volum ta' 1:9 bl-użu ta 'mehrież u ppressati f'pilloli. Kull kampjun imbagħad ġie analizzat mill-ispettrofotometru FTIR (spettrofotometru Perkin-Elmer 200, Perkin-Elmer, Norwalk, CT USA). Il-medda tal-iskannjar kienet 400-4000 ċm-4. Barra minn hekk , kull kampjun ġie maħlul f'0.8 mL ta '99.8 fil-mija DMSO-dg(Merck, St.Louis,MO, USA)u analizzat mill-ispettrometru JEOL Alpha 400 (Nihon Denshi Co., Tokyo, Japan).

2.12.Penetrazzjoni tal-ġilda Ex Vivo tal-Aċidu Oleanoliku u n-Nanofibra tiegħu

Dan l-esperiment sar skond il-protokoll standard tal-linji gwida tal-Assoċjazzjoni Ewropea tat-Toiletry u l-Fwejjaħ Kosmetiċi (COLIPA). Is-sistema taċ-ċelluli tad-diffużjoni Franz tista 'tinqasam f'kontenituri tal-ħġieġ tal-kamra tad-donaturi ta' fuq u l-kamra tar-riċettur t'isfel. Total ta' 1.5 mL soluzzjoni buffer li tinkludi 0.14MNaCl,2mMK-HPO4, 0.4 mM KH2PO4 (pH7.4) tpoġġa fil-kamra tar-riċettur u tħawwad b'bar manjetiku f'600 rpm matul l-esperiment. Ġilda friska tal-ġenb minn ħanżir inkisbet minn biċċier lokali fis-suq u mkessħa matul il-perjodu tal-esperiment. Kull kampjun tal-ġilda kien maqtugħ f'biċċiet ta '2 ċm × 2 ċm u mqiegħed bejn iż-żewġ kmamar, bl-istratum corneum iħares 'il fuq. Iċ-ċellula tad-diffużjoni Franz inżammet fi 32 grad b'banju ta 'l-ilma li jiċċirkola.benefiċċji ta 'estratt ta' cistancheImbagħad, 200 μL ta '1 mg/mL ta' OA jew OAnf ġew miżjuda mal-kamra tad-donatur għal 1,2, jew 4 sigħat. Wara dan, il-ġilda tal-majjal tneħħiet miċ-ċellula tad-diffużjoni Franz, u l-istratum corneum inkiseb bit-tqaxxir tat-tejp 15-il darba. Kull kampjun tal-ġilda residwu kien imsaħħan sa 95 grad b'kuxxinett tas-sħana, u l-epidermide u d-dermis ġew separati bl-użu ta 'skalpell. Kull kampjun kien mgħaddas fil-metanol u ivvibrat għal 1h biex jiġi estratt l-OA, u l-kontenut ta 'aċidu oleanolic f'kull kampjun ġie ddeterminat bil-metodu HPLC. 2.13. Analiżi Statistika

Id-dejta kollha ġiet murija bħala medja ± devjazzjoni standard (SD). Is-sinifikat statistiku bejn gruppi differenti ġiet analizzata b'analiżi tal-varjanza (ANOVA) bit-test post hoc ta' Tukey.p<0.05 indicated="" statistical="" significance.="">

3.1. L-Aċidu Oleanoliku Jista' Jrażżan Infjammazzjoni, Tixjiħ, u Mogħdijiet ta' Sinjali ta' ROS/MAPKs f'Ħsara mill-Keratinoċiti Indotta mill-PM

Biex tinstab il-firxa ta 'konċentrazzjoni xierqa għall-evalwazzjoni tal-attività bijoloġika, iċ-ċitotossiċità ta' OA maħlula f'DMSO ġiet iddeterminata fiċ-ċelloli tal-keratinoċiti HaCaT tal-bniedem bl-użu ta 'assaġġ MTT. Kif muri fil-Figura 1A, 40 u 80 μM ta 'OA kienu assoċjati ma' 32 sa 16 fil-mija vijabbiltà taċ-ċelluli. OA f'inqas minn 20 μM kienu għadhom kellhom rata ta 'sopravivenza taċ-ċelluli aktar minn 85 fil-mija. Dawn ir-riżultati indikaw li l-OA f'konċentrazzjoni ta' 5-20 μM m'għandu l-ebda effetti ċitotossiċi fuq il-keratinoċiti HaCaT umani (Figura 1A). Għaldaqstant, l-OA ġie studjat f'konċentrazzjoni ta' 5-20 uM biex tinvestiga l-attività antiossidant u kontra t-tniġġis tagħha fil-ħsara tal-keratinoċiti indotta mill-PM. Riċentement, ħafna studji wrew li l-PM huwa tniġġis ta’ l-arja komuni li jikkawża produzzjoni żejda ta’ ROS u ħsara sussegwenti lis-sistema tal-ġilda permezz ta’ serje ta’ stress ossidattiv, inkluż perossidazzjoni tal-lipidi, karbonilazzjoni tal-proteini, u mutazzjoni tad-DNA [14-16]Kif muri f’ Figura 1B, it-trattament tal-PM żied b'mod sinifikanti l-produzzjoni tal-ROS meta mqabbel mal-grupp mhux ittrattat (p<0.05).in contrast,="" pretreatment="" with="" oa="" effectively="" decreased="" pm-induced="" ros="" overproduction="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.05).there-fore, these="" results="" suggested="" that="" oa="" possessed="" antioxidant="" activity="" to="" prevent="" pm-induced="" oxidative="" stress="" by="" reducing="" the="" ros="" overproduction.="" in="" addition,="" ros="" overproduction="" after="" pm="" exposure="" can="" activate="" the="" phosphorylation="" of="" mapks="" proteins,="" including="" p-erk,="" p-p38,="" and="" p-jnk,="" triggering="" the="" protein="" expressions="" of="" inflammation="" and="" aging[17,18]the="" present="" study="" also="" found="" that="" pm="" treatment="" can="" increase="" the="" expression="" of="" inflam-matory="" proteins="" (cox-2="" and="" nf-kb),skin="" aging-related="" proteins="" (mp-1,mmp-9="" and="" timp-1),and="" phosphorylation="" of="" erk,jnk,="" and="" p38=""><0.05). our="" present="" results="" also="" demonstrated="" that="" oa="" at="" 10="" and="" 20="" um="" significantly="" inhibited="" the="" protein="" expression="" of="" nf-kb="" and="" cox-2="" when="" compared="" with="" the="" pm="" treatment="" group="" (p=""><0.05)(figure 1c)furthermore,="" oa="" pretreatment="" also="" effectively="" reversed="" pm-induced="" alteration="" on="" mmp-1="" and="" timp-1="" expression=""><0.05) but="" had="" no="" effect="" on="" mmp-9(figure="" 1d).="" we="" further="" de-termined="" the="" effects="" of="" oa="" treatment="" on="" phosphorylation="" of="" mapks="" during="" pm="" exposure,="" and="" our="" results="" indicated="" that="" oa="" could="" inhibit="" the="" phosphorylation="" of="" jnk=""><05), but="" had="" no="" effect="" on="" erk="" or="" p38="" (figure="" 1e).="" according="" to="" the="" above="" results,="" when="" dissolved="" in="" dmso,="" oa="" displayed="" good="" skin-protective="" activity="" and="" could="" ameliorate="" pm-induced="" ros="" overproduction,="" jnk="" activation,="" and="" inflammatory="" and="" skin-aging="" protein="" expression="" in="">

3.2. In-Nanofibri tal-Aċidu Oleanoliku Żiedu s-Solubbiltà fl-Ilma u l-Penetrazzjoni tal-Ġilda tal-Aċidu Oleanoliku Nej billi Tejbu l-Proprjetajiet Fiżikokimiċi

3.2.1.Morfoloġija tal-wiċċ ta 'l-Aċidu Oleanoliku u n-Nanofibri tiegħu

Taħt osservazzjoni SEM, id-dehra ta 'HBPCD ppreżentat eċċipjent sferiku u poruż, u d-daqs tiegħu kien ta' madwar 20 sa 50 μm (Figura 2A). .L-aċidu oleanoliku mhux ipproċessat huwa trab granulari tond b'mod irregolari b'daqs ta' 3-60 um. Figura 2D-F turi d-dijametru medju tal-fibra ta 'proporzjonijiet ta' piż differenti ta 'aċidu oleanoliku: HPBCD: PVPK90 kienu 174.83±19.53nm, 219.23±18.93nm, u 403.17±32.99nm, rispettivament. Instab li proporzjon ogħla ta' HPBCD (18 :20) wasslet biex OAnf ikollu dijametru tal-fibra akbar (Tabella 1).

3.2.2.Daqs tal-Partiċelli u Morfoloġija ta' OAnf Rikostitwit fl-Ilma

Sabiex tosserva l-forma tal-partiċelli u d-daqs tal-partiċelli tal-OAnf (OA:PVP:HPBCD, 1:8:20) maħlul fl-ilma, l-immaġni ta 'OAnf taħt il-mikroskopju elettroniku tat-trażmissjoni (TEM) wriet li l-partiċelli tal-aċidu oleanoliku kienu sferiċi u mifruxa b'mod uniformi fl-ilma (Figura 3). Id-daqs tal-partiċelli ġie kkonfermat ukoll minn analizzatur tad-daqs tal-partiċelli tal-laser (Tabella 2). Id-daqsijiet tal-partiċelli ta 'OA u OAnf kienu 5079.50±384.87 nm u 302.37±11.91 nm, rispettivament. L-indiċi tal-polydispersity (PDI) ta 'OA u OAnf kienu 1.63±0.21 u 0.32±0.02, rispettivament. Dawn ir-riżultati jindikaw li l-proċess ta 'electrospinning naqqas b'mod effettiv id-daqs tal-partiċelli ta' OA b'distribuzzjoni uniformi tal-partiċelli u rriżulta f'titjib tal-erja tal-wiċċ.

3.2.3.Tagħbija tad-Droga, Effiċjenza tal-Inkapsulament, u Solubilità fl-Ilma tan-Nanofibri tal-Aċidu Oleanoliku

Kif muri fit-Tabella 3, il-perċentwali tat-tagħbija ta 'OA fi proporzjonijiet differenti ta' eċċipjenti kienu 72.36±10.45 fil-mija, 84.23±3.62 fil-mija, u 98.19±4.82 fil-mija, rispettivament. Ir-riżultati indikaw li proporzjon ogħla ta 'HBPCD wera effett aħjar ta' tagħbija tad-droga. L-effiċjenza ta 'inkapsulament tal-formulazzjonijiet kollha kienet akbar minn 95 fil-mija, li indikat li PVPK90 u HPBCD effettivament inkapsulat OA.Barra minn hekk, is-solubilità fl-ilma ta' OAnf bi proporzjonijiet differenti ta 'eċċipjenti kienu 296.14±57.75 ug/mL, 395.87±32.77 ug/mL , u 998.7±58.32 ug/mL, rispettivament.cistanche genghis khanDawn ir-riżultati wrew li ż-żieda fl-HBPCD fil-formulazzjoni tejbet b'mod drammatiku s-solubilità fl-ilma ta 'OA mhux maħdum. B'kuntrast, is-solubilità fl-ilma ta' OA mhux maħdum ma setgħetx tiġi determinata minħabba li hija taħt il-limitu ta' skoperta (0.01 ug/mL) fil-metodu HPLC. Dan ir-riżultat indika li l-1:8:20 OAnf kellu aktar minn 1000-darbiet titjib fis-solubilità fl-ilma meta mqabbel ma 'OA mhux maħdum. Għalhekk, fl-istudji li ġejjin, 18:20 OAnf intuża biex tiddetermina l-attività bijoloġika fil-mudell tal-ħsara tal-keratinoċiti indotti mill-PM.

3.2.4.Bidla Kristallina tal-Aċidu Oleanoliku u n-Nanofibri tiegħu

Il-mudelli ta' diffrazzjoni tar-raġġi X (XRD) ta' OA mhux ipproċessat, eċċipjenti, u n-nanofibri tiegħu huma murija fil-Figura 4. OA mhux ipproċessat wera qċaċet multipli ta' difrazzjoni karatteristika ta' intensità għolja f'angolu ta' skannjar ta' 5 gradi -20 grad, li jindika li OA mhux maħdum kien kompost kristallin. Min-naħa l-oħra, il-mudelli ta 'diffrazzjoni ta' PVPK90 u HPBCD m'għandhom l-ebda qċaċet ta 'diffrazzjoni karatteristiku ovvju. Barra minn hekk, għal OA mhux ipproċessat taħt ipproċessar ta' elettrospinning, il-qċaċet ta 'diffrazzjoni karatteristiċi kollha ta' l-OA mhux ipproċessat sparixxew għal kollox, li indikat li n-natura ta 'materja prima OA ġie trasformat minn kristallin għal amorfu (Figura 4). Skont dawn ir-riżultati, nistgħu nikkonkludu li l-aċidu oleanoliku mhux ipproċessat ġie inkapsulat b'suċċess f'HBPCD u inkapsulat minn PVPK90 wara l-proċess tan-nanofibra.

3.2.5.Formazzjoni ta' Bond ta' Idroġenu Intermolekulari bejn Aċidu Oleanoliku u Eċċipjenti

L-interazzjoni intermolekulari ta 'OA mhux ipproċessat u HPBCD ma' PVPK90 ġiet determinata mill-ispettroskopija FTIR, u r-riżultati huma murija fil-Figura 5. L-ispettru FTIR wera biċ-ċar l-assorbiment ta 'diversi gruppi funzjonali kimiċi ta' OA mhux maħdum, inkluża medda ta 'assorbiment f'3463 cm{{ 3}} (——vibrazzjoni tal-medda OH), 1696 ċm-1 (——vibrazzjoni tal-medda C{=O), u 1462 ċm-l (—vibrazzjoni tal-medda CHz) (Figura 5). Meta OA, PVPK90, u HPBCD ġew kumplessi biex jiffurmaw nanofibers, l-assorbiment ta 'dawn il-gruppi funzjonali kimiċi ovvjament imċaqlaq għal assorbiment aktar baxx. Dawn is-sejbiet kienu indikattivi ta 'interazzjonijiet ta' bonds ta 'idroġenu inter-molekulari bejn OA u HPBCD ma' PVPK90. Barra minn hekk, l-istudju preżenti uża wkoll 'H NMR biex jikkonferma l-interazzjoni intermolekulari ta' OA u eċċipjenti. L-ispettru 1HNMR ta 'OA mhux ipproċessat (Figura 6C) wera sinjal karbossiliku f'812 ppm (H28), protoni marbuta doppju f'85.15 ppm (H12), sinjal ta' protoni idrossi f'83.38 ppm (H3), u protoni tal-metil (81 ppm). , L-ispettru HNMR ta 'nanofibers OA wera li s-sinjal karbossiliku ta' OA sparixxa, u ċ-ċaqliq kimiċi ta 'protoni double-ble bound, hydroxy, u methyl kienu ovvjament imċaqalqa upfield (Figura 6). Dawn ir-riżultati wrew il-formazzjoni ta 'rabtiet ta' idroġenu intermolekulari bejn OA u eċċipjenti, li appoġġaw l-inkapsulament b'suċċess ta 'OA minn HPBCD u PVPK90.

3.2.6.Penetrazzjoni tal-ġilda in vitro tal-aċidu oleanoliku mhux ipproċessat u n-Nanofibri tiegħu

L-attività bijoloġika ta 'formulazzjoni topika tiddependi l-aktar fuq l-assorbiment tal-ġilda. Il-penetrazzjonijiet tal-ġilda tal-OA mhux ipproċessat u n-nanofibri tiegħu ġew determinati fil-ġilda tal-majjal ex vivo. Kif muri fil-Figura 7, kontenut aktar baxx ta 'OA（<5 μg/cm2）was="" detected="" in="" the="" epidermis="" and="" dermis="" after="" 1,2,="" and="" 4h="" of="" topical="" administration,="" and="" these="" results="" also="" indicated="" that="" raw="" oa="" could="" not="" penetrate="" the="" skin="" in="" a="" time-dependent="" manner.="" the="" result="" showed="" that="" the="" skin="" absorption="" of="" raw="" oa="" was="" extremely="" poor.="" by="" contrast,="" the="" nanofiber="" formulation="" dramatically="" increased="" the="" content="" of="" oa="" in="" the="" epidermis="" and="" dermis="" with="" 19.63="" ug/cm2,31.56="" ug/cm2,and="" 45.27="" ug/cm2="" after="" 1,2,and="" 4h="" of="" topical="" administration,="" respectively.="" these="" results="" demonstrated="" that="" the="" oanf="" formulation="" significantly="" increased="" skin="" absorption="" when="" compared="" with="" the="" raw="" oa="" topical="" administration=""><>

3.3.Nanofibri tal-Aċidu Oleanoliku f'Konċentrazzjonijiet Mhux Ċitotossiċi Kellu Attività Aħjar Kontra t-Tniġġis billi Tejbu l-Attività Antiossidanti, Kontra l-Infjammazzjoni u Kontra x-Xjuħija

Simili għall-OA maħlul f'DMSO, l-OAnf maħlul f'PBS f'40 uM u 80 uM naqqas il-vijabbiltà taċ-ċelloli HaCaT għal 14.1 fil-mija u 5.6 fil-mija, rispettivament (Figura 8A). Għalhekk, 10 uM ta 'OAnf ġew evalwati għal aktar attività anti-ossidanti u kontra t-tniġġis sabiex wieħed jifhem jekk l-OA u n-nanofibri tiegħu għandhomx il-kapaċità li jinibixxu l-produzzjoni eċċessiva ta' ROS ikkawżata minn PM. Il-Figura 8B turi li OAnf f'10 uM naqqas notevolment il-produzzjoni żejda ta 'ROS indotta mill-PM. Aħna kkalkulajna wkoll ir-rata ta 'inibizzjoni tal-produzzjoni ta' ROS biex tqabbel l-attività antiossidant bejn OA maħlul bil-PBS u OAnf. Għaxar OA mikromolar fil-PBS irriżultaw f'inibizzjoni ta '28.3 fil-mija tal-produzzjoni ta' ROS, u OAnf kiseb inibizzjoni ta '97.6 fil-mija (Figura 8B). Barra minn hekk, qabbilna wkoll l-attività anti-infjammatorja tal-ħsara tal-keratinoċiti indotta mill-PM. Trattament minn qabel b'OA mhux maħdum fil-PBS ma setax jinibixxi l-espressjoni tal-proteina indotta mill-PM ta 'NF-KB u COX-2 B'kuntrast, trattament minn qabel b'OAnf fil-PBS naqas b'mod sinifikanti l-espressjoni ta' NF. kB u COX-2 f'ċelloli ttrattati bil-PM (p<0.05).these results="" supported="" that="" oanf="" in="" pbs="" had="" better="" anti-inflammatory="" activity="" than="" raw="" oa="" in="" pbs="" (figure="" 8c).then,="" we="" also="" compared="" their="" anti-skin-aging="" activity.="" pretreatment="" with="" oa="" in="" pbs="" had="" no="" effects="" on="" pm-induced="" mmp-1="" or="" timp-1="" alteration.="" however,="" oanf="" in="" pbs="" could="" reduce="" the="" expression="" of="" mmp-1="" and="" rescue="" the="" expression="" of="" timp-1="" when="" compared="" with="" the="" pm-induced="" keratinocytes="" damage="" group=""><0.05)(figure 8d).these="" findings="" indicated="" that="" oanf="" possessed="" better="" anti-skin-aging="" properties="" than="" raw="" oa="" in="" pbs.="" finally,="" we="" analyzed="" the="" phosphorylation="" of="" erk,="" jnk,="" and="" p38="" to="" confirm="" the="" regulation="" of="" mapks="" signaling.="" figure="" 8e="" showed="" that="" the="" treatment="" of="" raw="" oa="" in="" pbs="" could="" not="" downregulate="" pm-induced="" phosphorylation="" of="" these="" mapks="" protein.="" however,="" pretreatment="" with="" oanf="" only="" reduced="" pm-induced="" phospho-jnk="" (p-jnk)="" expression="" but="" had="" no="" effect="" on="" p-erk="" and="" p-p38="" (figure="" 8e).the="" percentage="" changes="" of="" protein="" expression="" induced="" by="" oa="" in="" dmso,="" oa="" in="" pbs,and="" oanf="" in="" pbs="" are="" summarized="" at="" table="" 4.="" oanf="" in="" pbs="" markedly="" reversed="" pm-induced="" protein="" alterations,="" which="" was="" barely="" observed="" in="" oa="" in="" the="" pbs="" group.="" in="" addition,="" the="" effects="" of="" oanf="" in="" pbs="" were="" comparable="" to="" the="" equivalent="" amount="" of="" oa="" in="" dmso,="" which="" indicated="" that="" the="" electrospinning="" process="" increased="" the="" water="" solubility="" of="" oa="" without="" altering="" its="" bioactivities.="" accordingly,="" oanf="" effectively="" inhibited="" the="" expressions="" of="" inflammatory="" proteins="" and="" skin-aging="" proteins="" and="" downregulated="" the="" mapks="" signaling="" pathway="" in="" pm-induced="" keratinocytes="">

4. Diskussjoni

Riċentement, il-monitoraġġ tal-konċentrazzjoni tal-materja partikulata fl-arja sar wieħed mill-indikaturi l-aktar importanti użati biex jiġi evalwat l-indiċi tal-kwalità tal-arja. Il-ġilda hija l-akbar organu immuni tal-bnedmin, u espożizzjoni eċċessiva tal-PM tista 'tagħmel ħsara lill-funzjonijiet tal-ġilda. Jin et al. żvelat li diversi tipi ta 'PM mhux biss baqgħu fl-istratum corneum ta' barra tal-epidermide iżda ppenetraw ukoll fl-istratum spinosum u l-follikuli tax-xagħar [14]. Jekk ikun espost għal PIA eċċessiva għal żmien twil, dan jikkawża disfunzjoni tal-barriera tal-ġilda u huwa assoċjat ma 'ħafna mard tal-ġilda, bħal dermatite atopika, psorjasi, akne u tixjiħ [19,20]. Dijkhoff et al. muri b'mod ċar li l-PM jista 'jikkawża formazzjoni ta' ROS esoġenu u endoġenu, li jirriżulta fi progressjoni tal-istress ossidattiv, inkluż perossidazzjoni tal-lipidi, ossidazzjoni tal-proteini, disfunzjoni mitokondrijali, ħsara fid-DNA, attivazzjoni tal-infjammazzjoni u aċċelerazzjoni tal-proċess tat-tixjiħ [15]. Għaldaqstant, il-ġlieda kontra l-produzzjoni żejda ta 'ROS indotta mill-PM hija strateġija tajba u l-ewwel għażla biex tiġi evitata l-ħsara ta' stress ossidattiv waqt espożizzjoni eċċessiva tal-PM. Studji preċedenti wrew ukoll li trattamenti antiossidanti, bħal diphlorethohydroxycarmalol [21], dieckol [22], estratt ta 'Opuntia humifusa [23], u estratt taċ-ċirasa tart [24] jistgħu jnaqqsu b'mod effettiv id-disfunzjoni tal-keratinoċiti indotta mill-PM. Ir-riżultati tagħna sabu wkoll li l-OA fid-DMSO jista 'jnaqqas ROS indott mill-PM fuq il-produzzjoni u jipprevjeni l-ħsara mill-PM. Barra minn hekk, NF-kB huwa fattur ta 'traskrizzjoni kullimkien u li jista' jinduċibbli li jirregola l-espressjoni ta 'proteini proinfjammatorji, bħal COX-2, li għandhom rwol kritiku f'ħafna mard tal-ġilda. Ir-riżultati tagħna semmew li OA jista 'jnaqqas l-attivazzjoni indotta mill-PM ta' NF-kB biex jinibixxi l-espressjoni tal-proteina infjammatorja COX-2[25]. Barra minn hekk, l-attivazzjoni tas-sinjalar tal-MAPKs tista 'ttejjeb l-espressjoni ta' AP-1 u jwassal għal regolamentazzjoni traskrizzjoni tal-MPs[18]. F'dan l-istudju, OA kien kapaċi jrażżan l-espressjoni tal-proteina tat-tixjiħ tal-ġilda MP-1 u żżid l-espressjoni tal-proteina kontra t-tixjiħ tal-ġilda TIMP-1 biex tipprevjeni t-tixjiħ indott mill-PM tal-keratinoċiti. Ir-riżultati tagħna wrew ukoll li l-OA kien effettivament inibit il-fosforilazzjoni ta 'JNK Għalhekk, OA jista' jinibixxi l-infjammazzjoni tal-ġilda u t-tixjiħ indotti mill-PM billi jirregola l-mogħdija ta 'sinjalazzjoni ROS / JNK fil-ħsara tal-keratinoċiti indotta mill-PM.

Sa fejn nafu tagħna, is-solubilità fqira fl-ilma tal-komposti attivi hija assoċjata ma 'bijodisponibilità baxxa, li tillimita l-applikazzjoni tagħhom fl-industriji tal-mediċina, l-ikel u l-kosmetiċi [26,27]. Huwa magħruf sew li l-komposti b'solubilità fqira fl-ilma għandhom diversi karatteristiċi fiżikokimiċi komuni, bħal daqs ta 'partiċelli eċċessivament kbir erja tal-wiċċ aktar baxxa, struttura lipofilika, u forma kristallina [28]. Ir-riżultati tagħna indikaw ukoll li l-OA mhux ipproċessat kellu dawn il-proprjetajiet fiżikokimiċi, inkluż daqs kbir tal-partiċelli (5079.50±384.87 nm), trab granulari irregolari 3-60 um b'erja tal-wiċċ aktar baxxa (Figura 2C), u forma kristallina ovvja. Dawn ir-riżultati indikaw li s-solubilità fl-ilma tal-OA kienet inqas minn 0.01 ug/mL u setgħet tiġi kklassifikata bħala kompost attiv prattikament li ma jinħallx skont il-klassifikazzjoni tas-solubilità fl-ilma tal-Phar-macopeia(USP) tal-Istati Uniti[29]. Jekk dawn l-iżvantaġġi ma jistgħux jiġu solvuti, l-attivitajiet ta 'OA fuq il-ġilda jkunu limitati ħafna. L-istudju preżenti uża b'suċċess PVPK90 u HPBCD bħala trasportaturi bl-użu ta 'proċess ta' electrospinning biex jipprepara OAnf. It-titjib tas-solubilità fl-ilma huwa l-indiċi ewlieni użat biex jikkonferma l-aħjar formulazzjoni farmaċewtika, u r-riżultati tagħna wrew li OA:PVPK90:HPBCD f'1:8:20 kellu l-aħjar solubilità fl-ilma Dan indika li OAnf żied b'mod effettiv is-solubilità fl-ilma tal-materja prima. OA skond il-proporzjon HPBCD. Bl-istess mod, studji preċedenti wrew ukoll li proporzjon ogħla ta 'cyclodextrin itejjeb il-kapaċità ta' inkapsulament tal-formulazzjoni u jirriżulta f'żieda sinifikanti fis-solubilità fl-ilma u l-attività bijoloġika tal-curcumin [30], resvera-trol [12], thymol [31] , u difenoconazole[32].Barra minn hekk, l-istudju preżenti qabbel ukoll il-proprjetajiet fiżikokimiċi ta 'OA mhux ipproċessat u n-nanofibri tiegħu biex jiċċaraw il-mekkaniżmi ta' titjib tas-solubilità fl-ilma tan-nanofibri OA.OA prodotti f'dan l-istudju kienu kollha filamenti b'nano-daqs uniformi. Ir-riżultati tal-analiżi tad-daqs tal-partiċelli semmew ukoll li OAnf rikostitwit fl-ilma wera partiċelli nanosized b'omoġeneità ta 'distribuzzjoni superjuri. Dawn ir-riżultati indikaw li OAnf kellu erja tal-wiċċ akbar minn OA mhux maħdum. Barra minn hekk, il-formazzjoni ta 'irbit ta' idroġenu intermolekulari bejn komposti attivi u trasportaturi tista 'wkoll tikkontribwixxi għat-titjib tas-solubilità fl-ilma. L-ispettru ta 'FTIR u HNMR ta' OAnf wera li l-OA mhux ipproċessat kien effettivament inkapsulat f'HBPCD u ffurmat struttura ta 'nanofibra stabilizzata b'PVPK90 permezz tal-iffurmar tat-twaħħil tal-idroġenu intermolekulari bejn OA u HPBCD/PVPK90. Il-forma kristallina trasformata f'forma amorfa tal-kompost attiv kienet ukoll indikatur tat-titjib tas-solubilità fl-ilma. Il-mudell XRD ta 'OAnf wera li l-istruttura kristallina ta' OA mhux maħdum ġiet trasformata għal struttura amorfa wara l-formazzjoni ta 'nanofibers. Dan ir-riżultat simili kien osservat ukoll f'diversi komposti attivi mgħobbija fin-nanofibri [12,30]. Meħuda flimkien, il-formulazzjoni tan-nanofibra tejbet b'mod effettiv is-solubilità fl-ilma tal-OA mhux ipproċessat permezz tat-titjib tal-proprjetajiet fiżikokimiċi, inkluż tnaqqis fid-daqs tal-partiċelli, żieda fl-erja tal-wiċċ, formazzjoni ta 'irbit tal-idroġenu ma' trasportaturi, u trasformazzjoni amorfa.

Formulazzjonijiet topiċi li fihom antiossidanti huma effettivi għall-kunsinna lill-epidermide u d-dermis biex jikkontrobattu l-istress ossidattiv indott mill-PM, l-infjammazzjoni u t-tixjiħ tal-ġilda [33]. Ibbażat fuq l-għarfien tal-assorbiment tal-ġilda, l-istratum corneum huwa l-fattur li jillimita r-rata li jillimita l-penetrazzjoni tal-ġilda u l-assorbiment ta 'komposti attivi, li jirriżulta fi tnaqqis fl-attività bijoloġika [34]. Ir-riżultat mill-penetrazzjoni tal-ġilda in vitro indika li OAnf għadda mill-istratum corneum aktar faċilment u malajr mill-OA mhux ipproċessat u baqa 'fl-epidermide u d-dermis f'ammonti kbar. Dan ir-riżultat ikkonferma li OAnf jista 'jtejjeb b'mod effettiv l-assorbiment tal-ġilda ta' OA mhux maħdum. Sussegwentement, sabiex jiġi ddeterminat jekk l-OAnf kellux attività kontra t-tniġġis aħjar mill-OA mhux ipproċessat, f'dan l-istudju, intuża mudell ta 'ħsara tal-keratinoċiti indotti mill-PM biex iqabbel l-attivitajiet bijoloġiċi tagħhom. Ir-riżultati tagħna wrew li l-OAnf fil-PBS kellu effetti kontra t-tniġġis aħjar minn OA mhux ipproċessat, inkluż tnaqqis fil-produzzjoni żejda ta’ ROS, tnaqqis fl-espressjoni tal-proteini infjammatorji (COX-2 u NF-kB) u proteina li tixjieħ il-ġilda (MP-1), żieda fl-espressjoni tal-proteina kontra t-tixjiħ tal-ġilda (TIMP-1), u fosforilazzjoni JNK regolata 'l isfel. Għalhekk, OAnf jista 'jkun formulazzjoni topika bħala aġent antiossidant għall-prevenzjoni tal-ħsara tal-keratinoċiti indotta mill-PM.

Fil-qosor, OAnf tejbet il-proprjetajiet fiżikokimiċi tagħha biex issolvi s-solubilità fqira ta 'l-ilma ta' OA mhux ipproċessat u tejbet ukoll b'mod sinifikanti l-assorbiment tal-ġilda ta 'OA mhux ipproċessat. OAnf kellu attivitajiet antiossidanti, kontra l-infjammazzjoni u kontra t-tixjiħ aħjar fil-ħsara tal-keratinoċiti indotta mill-PM. Konsegwentement, nissuġġerixxu li OAnf jista 'jintuża bħala prodott għall-kura tal-ġilda jew bħala formulazzjoni farmaċewtika biex jipprevjeni ħsara fil-ġilda kkawżata mill-PM fil-futur.

Dan l-artikolu huwa estratt minn Antioxidants 2021, 10, 1411. https://doi.org/10.3390/antiox10091411 https://www.mdpi.com/journal/antioxidants