Mekkaniżmi ta' Inibizzjoni tal-Melanoġenesi indotti minn N-(4-methoxyphenyl) Caffeamide

Sfond:

Id-derivattiv tal-kaffeina juri attività antiossidant u antityrosinase. L-attività u l-mekkaniżmu ta 'N-(4-methoxyphenyl) caffeine (K36E) fuq il-melanoġenesi ġew investigati.

Metodi:

Iċ-ċelloli B16F0 ġew ittrattati b'diversi konċentrazzjonijiet ta' K36E; il-kontenut tal-melanin u t-trasduzzjoni tas-sinjal relatata ġew studjati. Assaġġ Western blotting ġie applikat biex tiddetermina l-espressjoni tal-proteina, u spettrofotometrija saret biex tidentifika l-attività tyrosinase u l-kontenut tal-melanin.

Riżultati:

Ir-riżultati tagħna indikaw li K36E naqqas il-kontenut tal-melanin indott mill-ormon li jistimula l-melanocyte ( -MSH) u l-attività tyrosinase fiċ-ċelloli B16F0. Barra minn hekk, K36E inibixxa l-espressjoni ta 'proteina li tgħaqqad l-element ta' rispons ta 'fosfo-cyclic adenosine monophosphate (cAMP), fattur ta' traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmja (MITF), tyrosinase, u proteina relatata mat-tyrosinase-1 (TRP{{14} }). K36E attivat il-fosforilazzjoni ta 'proteina kinase B (AKT) u glycogen synthase kinase 3 beta (GSK3), li wassal għall-inibizzjoni tal-attività ta' traskrizzjoni MITF. K36E attenwat mogħdijiet tal-cAMP indotti minn -MSH, li jikkontribwixxu għall-ipopigmentazzjoni.

Fl-istess ħin, fir-riċerka, sibna wkoll applikazzjoni ġdida tal-glycosides totali ta 'Cistanche deserticola jew l-estratt li fih phenylethanoid glycosides ta' Cistanche deserticola u osservajna l-effett inibitorju tal-glycosides totali ta 'Cistanche deserticola fuq tyrosinase billi tuża r-rata tad-dopa tat-tyrosinase. metodu ta 'ossidazzjoni. Tyrosinase hija l-enzima ewlenija li tillimita r-rata fil-bijosintesi tal-melanin tal-ġilda, u hija kumplessa ta 'ram u proteina. Jista 'hydroxylate tyrosine, il-materja prima ewlenija għall-produzzjoni tal-melanin fil-ġisem, biex jipproduċi L-dopa, u mbagħad jossidizza dopa għal dopaquinone. Dopaquinone jgħaddi minn serje ta 'proċessi metaboliċi, jirranġa u polimerizza, u finalment jikkombina ma' kombinazzjoni ta 'proteini biex jipproduċi serje ta' melanin li jikkawża tiswir, għalhekk sibna li Cistanche deserticola għandha effett sinifikanti ta 'regolazzjoni 'l isfel fuq tyrosinase.

Ikklikkja benefiċċji għas-saħħa tal-prodott cistanche

Konklużjonijiet:

K36E irregola s-sintesi tal-melanin billi naqqas l-espressjoni ta 'proteini downstream inklużi p-CREB, p-AKT, p-GSK3 , tyrosinase, u TRP-1, u attiva l-fattur ta' traskrizzjoni, MITF. K36E jista' jkollu l-potenzjal li jiġi żviluppat bħala aġent li jbajdu l-ġilda.

Kliem ewlieni:

N-(4-methoxyphenyl) kaffeina, Melanogenesis, Propolis, Fattur ta' traskrizzjoni assoċjat mal-Mikroftalmja, proteina li tgħaqqad l-element tar-rispons cAMP, Glycogen synthase kinase 3 beta.

Sfond

Il-melanin għandu rwol ċentrali fil-prevenzjoni tal-fotoħsara u l-fotokarċinoġenesi tal-ġilda; madankollu, akkumulazzjoni anormali ta 'melanin tinduċi disturbi ta' iperpigmentazzjoni bħal spots ta 'età u melasma [1, 2]. Melanogenesis hija serje ta 'proċessi kumplessi b'ħafna fatturi parteċipanti. L-isfond ġenetiku huwa l-aktar fattur kruċjali għall-pigmentazzjoni tal-ġilda; aktar minn 150 ġeni nstabu li jirregolaw il-bijosintesi tal-melanin [3-5].

Barra minn hekk, fatturi mhux ġenetiċi, bħal medikazzjoni, bidliet ormonali, infjammazzjoni, tixjiħ, u espożizzjoni għall-irradjazzjoni ultravjola (UV), jaffettwaw il-pigmentazzjoni tal-ġilda [4, 5]. Il-melanogenesis hija rregolata minn diversi proteini u enżimi inklużi tyrosinase, fattur ta' traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmija (MITF), proteina relatata mat-tirosinażi-1 (TRP-1), u proteina relatata mat-tirosinażi-2 (TRP). -2) ​​[4, 6–8]. L-irradjazzjoni UV tistimula s-sekrezzjoni tal-ormon li jistimula -melanocyte (-MSH) fil-keratinoċiti, li jingħaqad mar-riċettur tal-melanocortin 1 (MC1R) u jikkatalizza l-konverżjoni tal-adenosine triphosphate għal cyclic adenosine monophosphate (cAMP) [9]. cAMP jistimula protein kinase A (PKA), u PKA jittrasloka fin-nukleu u jattiva proteina li torbot l-element tar-rispons cAMP (CREB) [10, 11]. Il-proteina li torbot l-element ta' rispons ta' fosfo-cAMP (p-CREB) iżżid l-espressjoni ta' MITF biex tinduċi l-espressjoni ta' tyrosinase, TRP-1, u TRP-2. Tyrosinase jgħaddi minn maturazzjoni u attivazzjoni permezz ta 'mekkaniżmi multipli, inkluż rbit tar-ram, glycosylation, u fosforilazzjoni, li jirriżultaw f'sintesi tal-melanin [12].

Riċerka sostanzjali studjat ir-regolamentazzjoni tal-bijosintesi tal-melanin għall-iżvilupp ta 'aġenti ipopigmentati. Biex tinibixxi l-attività tat-tyrosinase u titnaqqas is-sintesi tal-melanin, ġew żviluppati diversi inibituri tat-tyrosinase li jipprevjenu l-iperpigmentazzjoni permezz ta 'sinteżi jew iżolament minn sorsi naturali [1, 2, 7, 13]. N-(4-methoxyphenyl) caffeine (K36E; Fig. 1) hija analoga ta 'caffeic acid phenethyl ester, komponent attiv ta' propolis. Fl-istudju preċedenti tagħna, derivat tal-kaffeina wera proprjetajiet antiossidanti, ipprevjeni d-degradazzjoni tal-kollaġen tal-ġilda wara l-espożizzjoni UVB, u stimula s-sintesi tal-kollaġen fil-fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem u l-ġrieden bla pil [14, 15]. Derivat ieħor tal-kaffeina wera attività anti-melanoġenika billi jinibixxi l-attività u l-espressjoni tat-tyrosinase [16].

Barra minn hekk, derivattivi tal-aċidu caffeic bħal trans-N-caffeoyl tyramine u trans-N-dihydro-p-hydroxycinnamoyltyramine inibixxu l-attività ta 'tyrosinase fil-melanocytes [17]. Għalhekk, spekulajna li K36E jinibixxi l-melanoġenesi. Fl-istudju attwali, investigajna l-effett tal-attività K36E fuq is-sintesi tal-melanin fiċ-ċelloli B16F0, li huwa mudell stabbilit sew għall-investigazzjoni tal-aġenti li jbajdu l-ġilda [18-20]. Barra minn hekk, investigajna jekk l-attività anti-melanoġenika ta 'K36E tiddependix fuq ir-regolamentazzjoni ta' TRP1, AKT/glycogen synthase kinase 3 beta (GSK3 )/CREB, u MITF.

Metodi

Materjali u kimiċi

K36E ġie sintetizzat u identifikat mill-Professur YuehHsiung Kuo b'purità ta '99.9 fil-mija [21]. -MSH inxtara minn Merck (Darmstadt, il-Ġermanja). Arbutin, 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-DOPA), DL-dithiothreitol, H-89 dihydrochloride hydrate, phenylmethanesulfonyl fluoride, u L-tyrosine inxtraw minn Sigma-Aldrich Chemical Co. ( St. Louis, MO, l-Istati Uniti). Serum tal-fetu tal-bovini (FBS), Dulbecco's modifikat Eagle's medium (DMEM), u trypsin-ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) inxtraw mill-GIBCO Invitrogen Corporation (NY, USA). Antikorp li jirrikonoxxi l-MITF inkiseb minn Abcam (Cambridge, MA, USA). Antikorpi li jirrikonoxxu p-CREB u CREB inxtraw minn Cell Signaling Technology, Inc. (Danvers, MA, USA). Antikorpi li jirrikonoxxu phospho-AKT, AKT, u phospho-glycogen synthase kinase 3 beta (p-GSK3) inkisbu minn GeneTex, Inc. (CA, USA). Antikorpi li jirrikonoxxu l-actin, GSK3, TRP-1, u tyrosinase inkisbu minn Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA, USA).

Effett ta 'K36E fuq l-inibizzjoni tat-tyrosinase tal-faqqiegħ

L-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ ġiet determinata b'mod spettrofotometriku b'modifiki minuri għall-proċedura deskritta qabel [7, 21-23]. Arbutin (2 mM) kien kontroll pożittiv. Il-kampjun tat-test u l-L-tyrosine f'phosphate buffer saline (PBS) ġew miżjuda ma' 96-well microplate (Nunc, id-Danimarka), u tyrosinase tal-faqqiegħ ġie miżjud. Wara l-inkubazzjoni, l-ammont ta 'dopachrome prodott fit-taħlita ta' reazzjoni ġie determinat fid-densità ottika ta '492 nm bl-użu ta' microplate reader (Tecan, Grodig, Awstrija).

Kulturi taċ-ċelluli

Iċ-ċelloli B16F0 inxtraw miċ-Ċentru ta 'Ġbir u Riċerka tal-Bijoriżorsi fit-Tajwan u kkultivati ​​f'DMEM supplimentat b'10 fil-mija FBS u 100 unità/mL ta' peniċillina u streptomycin f'37 grad f'5 fil-mija CO2.

Assaġġ tal-vijabbiltà taċ-ċelluli

L-esperimenti tat-tkabbir taċ-ċelluli twettqu bl-użu ta' 3-(4, 5- dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) b'modifiki żgħar għall- proċedura deskritta qabel [7, 8, 24, 25]. Il-perossidu tal-idroġenu ntuża bħala l-kontroll pożittiv. Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​matul il-lejl u ttrattati b'diversi konċentrazzjonijiet ta 'K36E għal 48 siegħa, u mbagħad ġiet miżjuda soluzzjoni MTT ma' kull bir. Wara l-inkubazzjoni, ġiet miżjuda soluzzjoni ta 'sodium dodecyl sulfate (SDS), li tħoll il-kristalli ta' formazan prodotti fiċ-ċelloli. Id-densità ottika ġiet imkejla f'570 nm bl-użu ta' microplate reader (Tecan, Grodig, Awstrija).

Kontenut ta 'melanin ċellulari

Il-kontenut tal-melanin fiċ-ċelloli B16F0 kien imkejjel bl-użu ta 'metodu modifikat minn studji preċedenti [7, 8, 23]. Iċ-ċelloli B16F0 ġew miżrugħa fi 6-pjanċi ta' bir f'densità ta' 7 × 104 ċelluli għal kull bir u inkubati matul il-lejl. Iċ-ċelloli ġew esposti għal medium li kien fih -MSH u K36E għal 48 siegħa. Arbutin (1 mM) kien kontroll pożittiv. NaOH (2 N) ġie miżjud ma 'kull bir biex lyse iċ-ċelloli, li mbagħad ġew ċentrifugati. Il-kontenut tal-melanin fis-supernatant tkejjel f'405 nm bl-użu ta' qarrej ELISA (Tecan, Grodig, Awstrija).

Assaġġ tal-attività tat-tyrosinase ċellulari

L-attività tyrosinase taċ-ċelloli B16F0 wara t-trattament K36E tkejlet b'modifika żgħira għall-metodu deskritt fi studji preċedenti [7, 26, 27]. Iċ-ċelluli B16F0 ġew ibbanjati f'24-diversi dixxijiet sew u inkubati matul il-lejl. Iċ-ċelloli ġew ittrattati b'diversi konċentrazzjonijiet ta 'K36E u ġew inkubati għal 48 siegħa oħra. Ġew maħsula b'PBS u lysed b'1 fil-mija Triton X-100 imħallat f'100 mM PBS (pH 6.8); it-taħlita riżultanti ġiet iffriżata waqt l-inkubazzjoni f'-80 grad għal 15-il minuta u mdewweb f'temperatura tal-kamra. Sussegwentement, il-kampjuni ġew ċentrifugati. Sostrat ippreparat frisk (15 mM L-DOPA f'48 mM pH 7.1 sodium phosphate buffer) ġie miżjud mas-supernatant u inkubat. L-assorbenza sussegwentement ġiet imkejla f'405 nm bl-użu ta 'mikroplate reader (Tecan, Grodig, Awstrija).

Ir-rata tal-attività tyrosinase ġiet ikkalkulata bl-użu tal-ekwazzjoni li ġejja:

Analiżi Western blot

Analiżi Western blot intużat biex turi l-effetti ta 'K36E fuq l-espressjoni ta' proteini relatati mal-melanoġenesi fiċ-ċelloli B16F0 kif deskritt qabel [7, 8, 22, 28, 29]. Iċ-ċelloli B16F{{10}} ġew miżrugħa f'dixx ta' 10-ċm għal 24 siegħa u ttrattati b'-MSH waħdu (grupp ta' kontroll) jew b'-MSH flimkien ma' konċentrazzjonijiet varji ta' K36E għal 48 siegħa. Il-lysates ġew ċentrifugati u l-kontenut tal-proteini ġie determinat bl-użu ta 'reaġent Bradford (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Għoxrin mikrogramma ta 'proteina ġew isseparati fuq ġel elettroforesi tal-ġel tas-sodju dodecyl sulfate-polyacrylamide (SDS-PAGE) u blotted bl-użu ta' membrana polyvinylidene difluoride (PVDF) (Hybond ECL, Amersham Pharmacia Biotech Inc., Piscataway, NJ, USA). Il-blots ġew imblukkati b'5 fil-mija (w/v) ħalib xkumat f'salina b'Tris-buffered li fih 0.05 fil-mija Tween 20 u b'antikorpi speċifiċi: actin (1:1000), AKT (1:5000), p-AKT (1:5000). ), CREB (1:1000), p-CREB (1:1000), GSK3 (1:500), p-GSK3 (1:500), MITF (1:1000), TRP-1 (1: 500), u tyrosinase (1:200). Il-membrani PVDF ġew inkubati bil-perossidasi tar-ravanell G konjugat korrispondenti kontra l-immunoglobulina (Santa Cruz Biotechnology, Inc.). Proteini immunoreattivi ġew skoperti bl-użu ta 'kit Enhanced Chemiluminescence Plus (Fujifilm, LAS4000), u l-qawwiet tas-sinjali ġew ikkwantifikati permezz ta' programm densitometriku (MultiGauge V2.2). Ir-riżultati tal-analiżi tal-western blot irrappreżentaw mill-inqas tliet esperimenti individwali.

Analiżi statistiċi

Il-valuri ġew espressi bħala l-medja ± devjazzjoni standard mir-riżultati ta 'mill-inqas tliet esperimenti individwali. Id-differenzi fl-effetti ta' diversi trattamenti tqabblu bl-użu tat-test t ta' Student jew ANOVA kif ukoll it-test ta' Scheffe permezz ta' softwer SPSS (verżjoni 12.0). valuri P<0.05 indicated significance. 

Riżultati

Inibizzjoni tal-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ minn K36E

K36E f'1000 μM naqqas b'mod sinifikanti l-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ. L-effett inibitorju tat-tyrosinase tal-faqqiegħ f'500, 750, u 1000 μM kien 6.8 fil-mija ± 1.6 fil-mija, 14.0 fil-mija ± 7.1 fil-mija, u 36.8 fil-mija ± 1.1 fil-mija, rispettivament. Barra minn hekk, ir-rata ta 'inibizzjoni ta' 2 mM arbutin fuq l-attività tat-tyrosinase tal-faqqiegħ kienet ta '65.3 fil-mija ± 2.5 fil-mija.

Effett ta' K36E fuq il-vijabbiltà taċ-ċelloli B16F0

Il-vijabbiltà taċ-ċelluli wara t-trattament b'1, 1.5, 2, 2.5, 4, 5, 10, 25, u 50 μM K36E kienet 92.7 fil-mija ± 2.0 fil-mija, 91.7 fil-mija ± 2.1 fil-mija, 90.9 fil-mija ± 2.2 fil-mija, 87.8 fil-mija ± 4.2 fil-mija, 72.8 fil-mija ± 1.0 fil-mija, 68.5 fil-mija ± 2.4 fil-mija, 54.6 fil-mija ± 1.6 fil-mija, ± 38.3 fil-mija, ± 3.6 fil-mija 0.8 fil-mija, u 28.4 fil-mija ± 2.3 fil-mija, rispettivament. Il-perossidu tal-idroġenu kien kontroll pożittiv, u l-vijabbiltà taċ-ċelluli ta '0.1 μM H2O2 kienet 48.9 fil-mija ± 7.5 fil-mija wara trattament ta' 48 siegħa. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli kienet aċċettabbli għall-iżvilupp ta 'materjal għall-kożmetiċi. Skont l-Organizzazzjoni Internazzjonali għall-Istandardizzazzjoni (ISO) 10993– 5:2009 (Valutazzjoni Bijoloġika ta 'Apparat Mediku), il-vijabbiltà taċ-ċelluli ogħla minn 80 fil-mija hija meqjusa bħala nonċitotossiċità. Ir-riżultati indikaw li t-trattament b'0.5 sa 2.5 μM K36E għal 48 siegħa ma kellu l-ebda effett ċitotossiku fuq iċ-ċelloli B16F0.

Inibizzjoni tal-bijosintesi tal-melanin minn K36E fiċ-ċelloli B16F0

Il-Figura 2a turi l-effetti ta 'K36E fuq il-bijosintesi tal-melanin wara stimulazzjoni minn 0.5 μM -MSH f'ċelluli B16F0. Il-kontenut ta' melanin intraċellulari żdied għal 124.6 fil-mija ± 13.{{10}} fil-mija wara t-trattament b'-MSH. K36E f'dożi ogħla minn 1.0 μM naqqas b'mod sinifikanti l-kontenut ta 'melanin, li naqas għal 97.5 fil-mija ± 1.9 fil-mija, 96.6 fil-mija ± 3.3 fil-mija, 94.4 fil-mija ± 2.8 fil-mija, u 90.8 fil-mija ± 1.4 fil-mija (Fig. 2a). L-effett ta 'K36E fuq il-bijosintesi tal-melanin kien simili għal dak ta' 1 mM ta 'arbutin.

Inibizzjoni tal-attività tyrosinase minn K36E fiċ-ċelloli B16F0

K36E inibixxi b'mod sinifikanti l-attività tyrosinase fiċ-ċelloli B16F 0 wara t-trattament għal 48 siegħa (Fig. 2b). Il-livelli ta 'attività ta' tyrosinase kienu 83.2 fil-mija ± 2.1 fil-mija, 76.3 fil-mija ± 2.9 fil-mija, 72.0 fil-mija ± 5.0 fil-mija, u 67.2 fil-mija ± 4.4 fil-mija wara trattament b'1, 1.5, 2 , u 2.5 μM K36E, rispettivament, għal 48 siegħa. Ir-riżultati indikaw li K36E inibixxi l-kontenut tal-melanin taċ-ċelluli B16F0 permezz tal-inibizzjoni tal-attività tyrosinase.

Effetti ta 'K36E fuq proteini relatati mal-melanoġenesi

K36E irregolat tyrosinase u espressjoni TRP-1

Biex teżamina jekk l-inibizzjoni tal-melanoġenesi minn K36E kinitx relatata mal-livelli ta' espressjoni ta' proteini relatati mal-melanoġenesi, inklużi tyrosinase u TRP-1, ċelluli B16F0 ġew inkubati b'-MSH (0. 5 μM) u konċentrazzjonijiet varji ta 'K36E (1-2.5 μM) għal 48 siegħa. Għalkemm l-espressjoni ta 'tyrosinase wriet żieda ta' 2.7-darbiet meta mqabbla ma 'dik fil-kontroll wara t-trattament b'-MSH, K36E soppressa b'mod sinifikanti l-espressjoni ta' tyrosinase b'mod dipendenti fuq id-doża (Fig. 3). Barra minn hekk, K36E naqqas b'mod sinifikanti l-espressjoni TRP -1 stimulata minn -MSH f'dożi ogħla minn 1.5 μM (Fig. 3).

K36E downregolat espressjoni MITF

L-espressjoni tal-MITF fiċ-ċelloli B16F0 uriet żieda ta' 1.5-darbiet meta mqabbla ma' dik fil-kontroll wara t-trattament b'-MSH (Fig. 4). K36E trattat għal 4 h espressjoni MITF inibita b'mod dipendenti fuq id-doża u espressjoni MITF regolata b'mod sinifikanti 'l isfel fiċ-ċelloli B16F 0 f'konċentrazzjoni ta' 1 μM (Fig. 4).

K36E espressjoni p-CREB regolata 'l isfel

L-espressjoni p-CREB fiċ-ċelloli B16F0 uriet żieda ta' 1.4-darbiet meta mqabbla ma' dik fil-kontroll wara t-trattament -MSH (Fig. 5). K36E inibixxi b'mod sinifikanti l-espressjoni p-CREB f'konċentrazzjonijiet ogħla minn 1.5 μM u sussegwentement irregolat l-espressjoni MITF fiċ-ċelloli B16F0.

Effetti ta 'K36E fuq il-mogħdija tas-sinjalar tal-melanoġenesi

Melanoġenesi inibita minn K36E kienet assoċjata mar-regolamentazzjoni tal-PKA

Biex jiġi ddeterminat jekk il-melanoġenesi inibita minn K36E kinitx assoċjata ma' PKA, iċ-ċelloli B16F0 ġew inkubati b'10 μM H{-89, inibitur tal-PKA [30], u 2.5 μM K36E għal 48 siegħa . It-trattament b'K36E u H-89 separatament ikkawża tnaqqis ta' 1.2- u 1.5-darbiet fl-espressjoni ta' tyrosinase indotta minn -MSH, rispettivament, meta mqabbla ma' dik fil-kontroll (Fig. 6 ). Barra minn hekk, trattament konġunt b'K36E u H-89 jikkawża tnaqqis ta' 0.9-darbiet fl-espressjoni ta' tyrosinase meta mqabbel ma' dak fil-kontroll. Barra minn hekk, l-espressjoni ta' tyrosinase wara l-kotrattament kienet aktar baxxa b'mod sinifikanti minn dik tat-trattament K36E jew H-89 separatament. Ir-riżultati indikaw li l-mogħdija PKA tista 'tkun involuta fl-effett anti-melanoġeniku ta' K36E.

K36E inibixxi l-melanoġenesi billi rregola l-espressjoni p-AKT u p-GSK3

Kif muri fil-Fig. 7, it-trattament b'2.5 μM K36E għal 1 siegħa żied b'mod notevoli l-espressjoni p-AKT u p-GSK3. Il-livell ta' p-AKT laħaq massimu (żieda ta' 1.{{10}}darbiet meta mqabbel ma' dak fil-kontroll) wara siegħa u żieda ta' 1.5-darbiet wara sagħtejn; il-livell ta 'p-GSK3 wera wkoll żieda ta' 1.2-darbiet wara siegħa meta mqabbel ma 'dak fil-kontroll, li jissuġġerixxi li K36E irażżan il-melanoġenesi fiċ-ċelloli B16F0 billi attiva l-mogħdijiet ta' sinjalazzjoni AKT u GSK3, li jirriżulta fl-inibizzjoni ta ' Espressjoni MITF u attività ta 'traskrizzjoni u, b'hekk, jinibixxi l-espressjoni tal-ġene tyrosinase.

Diskussjoni

Tyrosinase u l-attività tiegħu għandhom rwol ewlieni fil-kontroll tal-melanoġenesi [31-33]. Aġenti jew prodotti li jinibixxu l-attività tat-tyrosinase intużaw fil-kożmetiċi u l-kożmeċewtiċi li jbajdu l-ġilda [1, 2, 34]. Quercetin u aċidu vaniliku inibit -MSH indotta l-espressjoni ta 'MITF, tyrosinase, TRP-1, u TRP-2, li jikkawżaw inibizzjoni tal-melanoġenesi [35, 36]. Id-derivattivi tar-resveratrol inibixxu s-sintesi tal-melanin permezz tal-inibizzjoni tal-espressjonijiet tal-enżimi melanoġeniċi bħal tyrosinase u TRP-1 [37]. Ir-riżultati tagħna indikaw li K36E inibixxi l-attività ta 'tyrosinase u l-espressjoni tal-proteina indotta minn -MSH, u b'hekk irażżan il-bijosintesi tal-melanin. Barra minn hekk, K36E inibixxi proteini relatati mal-melanoġenesi bħal TRP-1. TRP-1 huwa meqjus li għandu rwol vitali kemm bħala proteina strutturali kif ukoll bħala enzima katalitika fil-mogħdija eumelanic tal-melanożomi [38, 39]. Ir-riżultati msemmija hawn fuq issuġġerew li t-tnaqqis fil-melanoġenesi ta 'K36E jista' jinkiseb permezz tal-inibizzjoni tiegħu tal-mogħdija ta 'sinjalazzjoni li tirregola l-espressjoni u l-attività tat-tyrosinase.

MITF huwa l-aktar fattur ta 'traskrizzjoni kritiku li jirregola l-melanoġenesi billi jinduċi l-espressjoni ta' ġeni melanoġeniċi [5, 40]. L-attivazzjoni ta' MITF tirregola l-espressjoni ta' tyrosinase u TRP-1, u konsegwentement iżżid is-sintesi tal-melanin. F'dan l-istudju, K36E soppressa l-melanoġenesi billi jinibixxi l-espressjoni MITF indotta minn -MSH. Il-mogħdija tal-cAMP għandha rwol ċentrali fil-melanoġenesi indotta minn -MSH.

Fi studju preċedenti, l-aġenti li jgħollu l-cAMP inibixxu PI3K/AKT. GSK3 jista 'jistimula l-irbit ta' MITF mas-sekwenza fil-mira tiegħu biex jistimula l-espressjoni ta 'enzimi melanoġeniċi u jiffaċilita l-produzzjoni ta' melanin [41]. cAMP jinibixxi l-fosforilazzjoni u l-attività ta 'PI3K u AKT, u jnaqqas il-fosforilazzjoni ta' GSK3 biex jistimula l-attività tiegħu. L-attivazzjoni tat-trasduzzjoni tas-sinjal cAMP tirriżulta fit-twaħħil ta 'MITF mal-promotur ta' tyrosinase, u b'hekk twassal għall-istimulazzjoni tal-melanoġenesi [41, 42]. L-attivazzjoni tal-mogħdija AKT trażżan is-sintesi tal-melanin billi naqqset l-enzimi melanoġeniċi [41]. Cordycepin ġie rrappurtat li jinibixxi l-bijosintesi tal-melanin indotta minn -MSH u IBMX billi jinibixxi enzimi relatati mas-sintesi tal-melanin, bħal tyrosinase, TRP-1, u TRP{-2, jissopprimi l-attività CREB u MITF, u jattiva l-PI3K mogħdija /AKT fiċ-ċelloli tal-melanoma B16F10 [43]. Fir-riżultati tagħna, K36E inibit il-fosforilazzjoni CREB. K36E għolla l-espressjoni ta 'p-AKT u p-GSK3, possibbilment inaqqas it-traskrizzjoni tal-MITF biex irażżan l-espressjoni tal-ġeni tat-tyrosinase. Studji preċedenti rrappurtaw li l-attivazzjoni ta 'AKT inibit il-melanoġenesi fil-melanoċiti [33, 44]. Għalhekk, K36E inibit -MSH indott iperpigmentazzjoni kkawżata mill-attivazzjoni AKT u GSK3, u sussegwentement downregulated MITF, CREB, tyrosinase, u TRP -1 produzzjoni (Fig. 8).

L-espożizzjoni UV tistimula s-sekrezzjoni ta '-MSH fil-keratinoċiti. -MSH jingħaqad ma' MC1R fil-melanoċiti, li jirriżulta fi produzzjoni ta' cAMP u attivazzjoni ta' PKA [10]. It-trasduzzjoni tas-sinjal relatata mal-mogħdija tal-cAMP, inkluża l-attivazzjoni ta 'fatturi ta' traskrizzjoni PKA u CREB, twassal għar-regolazzjoni 'l fuq tal-MITF [45]. PKA sussegwentement fosforila CREB biex jattiva l-espressjoni tal-ġeni MITF [46, 47]. L-idroxamat tal-aċidu nikotiniku inibixxi s-sintesi tal-melanin permezz tal-attivazzjoni tal-mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni MEK/ERK u AKT/GSK3 fiċ-ċelloli tal-melanoma B16F10 [48]. Trab tal-konċentrazzjoni tar-rummien imnixxef jeżerċita effetti li jbajdu billi jnaqqas b'mod effettiv l-attività tat-tyrosinase u l-produzzjoni tal-melanin fiċ-ċelloli B16F10 permezz tal-inattivazzjoni tal-mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni p38 u PKA / CREB fiċ-ċelloli B16F10 [49]. L-inibizzjoni PI3K indotta minn cAMP tnaqqas il-fosforilazzjoni AKT u l-attivazzjoni tagħha. Fl-istudju preżenti, l-espressjoni MITF indotta minn -MSH ġiet inibita minn K36E u H-89, li huwa inibitur tal-PKA. Barra minn hekk, trattament konġunt b'K36E u H-89 attenwat b'mod sinifikanti t-tnaqqis indott minn K36E tas-sintesi tal-melanin. Ir-riżultati tagħna ssuġġerew li l-attività anti-melanogenic ta 'K36E hija assoċjata mal-mogħdija PKA u għalhekk twassal għal downregulation ta' MITF (Fig. 8).

Konklużjoni

K36E naqqas l-espressjoni MITF billi jinibixxi l-fosforilazzjoni CREB. Barra minn hekk, K36E inibixxi l-espressjoni ta 'MITF billi rregola l-fosforilazzjoni ta' AKT u GSK3, li sussegwentement inibixxi l-espressjoni ta 'tyrosinase u TRP-1 u b'hekk naqqas il-bijosintesi tal-melanin. Melanoċiti normali u studji in vivo jistgħu jiġu applikati għal aktar investigazzjoni dwar l-effett ta 'K36E fuq il-melanoġenesi. Bħala konklużjoni, K36E jista 'jkun kandidat għar-regolamentazzjoni tal-melanoġenesi u x'aktarx li jkollu diversi applikazzjonijiet fil-prodotti li jbajdu l-ġilda fil-futur.

Rikonoxximenti

Din ir-riċerka kienet appoġġata minn għotjiet mill-Ministeru tax-Xjenza u t-Teknoloġija (NSC100-2320-B-039-002-MY3; MOST{104-2320-B{-039-006), CMU taħt l-Aim for Top University Plan tal-Ministeru ta' l-Edukazzjoni, it-Tajwan, u t-Tajwan Ministeru tas-Saħħa u l-Benessri Clinical Prova u Ċentru ta' Riċerka ta' Eċċellenza (MOHW105-TDU-B-212-133019), u China Medical University (CMU102- ASJA-18).

Disponibbiltà ta 'data u materjali

Is-settijiet tad-dejta li jappoġġaw il-konklużjonijiet ta' dan l-artikolu huma inklużi fl-artikolu.

Kontribuzzjonijiet tal-awturi

YHK, CYL, u HMC kienu responsabbli għad-disinn tal-istudju u biex jipprovdu l-finanzjament tar-riċerka. PYW, CSW, u PJS iddisinjaw l-esperimenti u pprovdew gwida teknika. CCC u HMC wettqu l-operazzjoni sperimentali. YHK, YHK, CYL, u HMC kitbu l-karta. L-awturi kollha qraw u approvaw il-manuskritt finali.

Interessi li jikkompetu

L-awturi jiddikjaraw li m'għandhom l-ebda interessi li jikkompetu.

Kunsens għall-pubblikazzjoni

Ma japplikax.

Approvazzjoni etika u kunsens għall-parteċipazzjoni

Dan l-istudju uża linji taċ-ċelluli disponibbli kummerċjalment; għalhekk, l-approvazzjoni etika ma kinitx meħtieġa.

Dettalji tal-Awtur

1Dipartiment tax-Xjenzi Farmaċewtiċi Ċiniżi u r-Riżorsi tal-Mediċina Ċiniża, Università Medika taċ-Ċina, Taichung 404, Tajwan. 2 Dipartiment tal-Bijoteknoloġija, Asja University, Taichung 413, Tajwan. 3 Dipartiment tal-Kosmeċewtika, Università Medika taċ-Ċina, Taichung 404, Tajwan. 4 Dipartiment tad-Dermatoloġija, Isptar tal-Università Medika taċ-Ċina, Taichung 404, Tajwan. 5 Skola tal-Mediċina, Università Medika taċ-Ċina, Taichung 404, Tajwan. 6 Mużew Nazzjonali tal-Bijoloġija tal-Baħar u Akkwarju, Pingtung 944, Tajwan.

Referenzi

1. Solano F, Briganti S, Picardo M, Ghanem G. Aġenti Hypopigmenting: reviżjoni aġġornata dwar aspetti bijoloġiċi, kimiċi u kliniċi. Pigment Cell Res. 2006;19(6):550–71.

2. Chiang HM, Chen HW, Huang YH, Chan SY, Chen CC, Wu WC, Wen KC. Melanogenesis u aġenti naturali ta 'ipopigmentazzjoni. 2012.

3. Costin GE, Smigħ VJ. Pigmentazzjoni tal-ġilda tal-bniedem: il-melanoċiti jimmodulaw il-kulur tal-ġilda b'reazzjoni għall-istress. FASEB J. 2007;21(4):976–94.

4. Kondo T, Smigħ VJ. Aġġornament dwar ir-regolamentazzjoni tal-funzjoni tal-melanoċiti tal-mammiferi u l-pigmentazzjoni tal-ġilda. Espert Rev Dermatol. 2011;6(1):97–108.

5. Yamaguchi Y, Smigħ VJ. Fatturi fiżjoloġiċi li jirregolaw il-pigmentazzjoni tal-ġilda. Bijofatturi. 2009;35(2):193–9.

6. Smigħ VJ. Tragwardi fil-melanoċiti/melanogenesis. J Invest Dermatol. 2011;131(E1):E1.

7. Chiang HM, Chien YC, Wu CH, Kuo YH, Wu WC, Pan YY, Su YH, Wen KC. L-estratt idroalkoħoliku ta 'Rhodiola rosea L. (Crassulaceae) u l-idrolizzat tiegħu jinibixxu l-melanoġenesi fiċ-ċelloli B16F0 billi jirregolaw il-mogħdija CREB/MITF/tyrosinase. Ikel Chem Toxicol. 2014;65:129–39.

8. Wen KC, Chang CS, Chien YC, Wang HW, Wu WC, Wu CS, Chiang HM. Tyrosol u l-analogi tiegħu jinibixxu melanoġenesi indotta mill-ormoni li jistimulaw l-alfa-melanocyte. Int J Mol Sci. 2013;14(12):23420–40.

9. Cui R, Widlund HR, Feige E, Lin JY, Wilensky DL, Igras VE, D'Orazio J, Fung CY, Schanbacher CF, Granter SR, et al. Rwol ċentrali ta 'p53 fir-rispons tax-xemx u iperpigmentazzjoni patoloġika. Ċellula. 2007;128(5):853–64.

10. Hocker TL, Singh MK, Tsao H. Melanoma ġenetika u approċċi terapewtiċi fis-seklu 21: nimxu mill-bajja għall-komodina. J Invest Dermatol. 2008;128(11):2575–95.

11. Drira R, Sakamoto K. Isosakuranetin, flavonoid 4′-O-methylated, jistimula l-melanoġenesi fiċ-ċelloli tal-melanoma murini B16BL6. Ħajja Sci. 2015;143:43–9.

12. Chou TH, Ding HY, Lin RJ, Liang JY, Liang CH. Inibizzjoni tal-melanoġenesi u l-ossidazzjoni mill-aċidu protokatechuic minn Origanum vulgare (oregano). J Nat Prod. 2010;73(11):1767–74.

13. Yeom GG, Min S, Kim SY. 2,3,5,6-Tetramethylpyrazine ta 'Ephedra sinica jirregola l-melanoġenesi u l-infjammazzjoni f'sistema ta' kokultura ta 'melanoma/keratinoċiti indotta mill-UVA. Int Immunopharmacol. 2014;18(2):262–9.

14. Chiang HM, Chen CW, Lin TY, Kuo YH. N-phenethyl kaffeina u photodamage: Il-protezzjoni tal-ġilda billi tinibixxi d-degradazzjoni tal-procollagen tat-tip I u tistimula s-sintesi tal-kollaġen. Ikel Chem Toxicol. 2014;72C:154–61.

15. Kuo YH, Chen CW, Chu Y, Lin P, Chiang HM. Studji In Vitro u In Vivo dwar Azzjoni Protettiva ta 'N-Phenethyl Caffeamide kontra Photodamage tal-Ġilda. PLoS Wieħed. 2015;10(9):e0136777.

16. Shimoda H, Shan SJ, Tanaka J, Maoka T. beta-Cryptoxanthin irażżan il-melanoġenesi indotta mill-UVB fil-ġurdien: involviment tal-inibizzjoni ta 'prostaglandin E2 u mogħdijiet tal-ormoni li jistimulaw il-melanocyte. J Pharm Pharmacol. 2012;64(8):1165–76.

17. Okombi S, Rival D, Bonnet S, Mariotte AM, Perrier E, Boumendjel A. Analogi ta 'N-hydroxycinnamoylphenalkylamides bħala inibituri ta' melanocyte-tyrosinase tal-bniedem. Bioorg Med Chem Lett. 2006;16(8):2252–5.

18. Bellei B, Pitisci A, Izzo E, Picardo M. Inibizzjoni tal-melanoġenesi mill-klassi ta 'komposti pyridinyl imidazole: involviment possibbli tal-passaġġ ta' sinjalazzjoni Wnt/ beta-catenin. PLoS Wieħed. 2012;7(3):e33021.

19. Wang L, Lu AP, Yu ZL, Wong RN, Bian ZX, Kwok HH, Yue PY, Zhou LM, Chen H, Xu M, et al. L-effett inibitorju tal-melanoġenesi u l-formulazzjoni perkutanja ta 'ginsenoside Rb1. AAPS PharmSciTech. 2014;15(5):1252–62.

20. Suwannalert P, Kariya R, Suzu I, Okada S. L-effetti ta 'Salacia reticulata fuq ossidanti anti-ċellulari u inibizzjoni tal-melanoġenesi f'ċelluli tal-melanoma B16 stimulati b'alfa-MSH u irradjati UV. Nat Prod Commun. 2014;9(4):551–4.

21. Chou YC, Sheu JR, Chung CL, Chen CY, Lin FL, Hsu MJ, Kuo YH, Hsiao G. Inibizzjoni mmirata lejn nukleari ta' NF-kappaB fuq il-produzzjoni ta' MMP-9 minn N-2- ( 4-bromophenyl) ethyl kaffeina fiċ-ċelloli monoċitiċi umani. Chem Biol Interact. 2010;184(3):403–12.

22. Chiang HM, Lin JW, Hsiao PL, Tsai SY, Wen KC. L-idrolisati tal-pjanti taċ-ċitru jistimulaw il-melanoġenesi li jipproteġu kontra l-ħsara dermali kkawżata mill-UV. Phytother Res. 2011;25(4):569–76.

23. Chiang HM, Ko Y, Shih I, Wen K. Development of Wine Cake bħala aġent u Humectant li jbajdu l-ġilda. J Ikel Droga Anal. 2011;19(2):223–9.

24. Chiang HM, Chen HC, Lin TJ, Shih IC, Wen KC. L-estratt ta' Michelia alba jattenwa l-espressjoni indotta mill-UVB ta' metalloproteinases tal-matriċi permezz tal-mogħdija MAP kinase fil-fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem. Ikel Chem Toxicol. 2012;50(12):4260–9.

25. Salucci S, Burattini S, Battistelli M, Buontempo F, Canonico B, Martelli AM, Papa S, Falcieri E. Tyrosol jipprevjeni l-apoptosi f'keratinoċiti irradjati. J Dermatol Sci. 2015;80(1):61–8.

26. Zhang Y, Helke KL, Coelho SG, Valencia JC, Smigħ VJ, Sun S, Liu B, Li Z. Rwol essenzjali tal-chaperone molekulari gp96 fir-regolazzjoni tal-melanoġenesi. Pigment Cell Melanoma Res. 2014;27(1):82–9.

27. Park H, Kanzunetta KH, Jung PM, Kim JE, Ro H, Kim MY, Ma JY. Effett Inibitorju ta 'apigenin mill-Estratt ta' Fructus Arctii fuq Sinteżi ta 'Melanin permezz ta' Ripressjoni ta 'Espressjoni ta' Tyrosinase. Komplement Ibbażat fuq Evid Alternat Med: eCAM. 2013; 2013:965312.

28. Chiang HM, Lin TJ, Chiu CY, Chang CW, Hsu KC, Fan PC, Wen KC. L-estratt tal-Coffea arabica u l-kostitwenti tiegħu jipprevjenu t-tixjiħ tal-fotografija billi jrażżnu l-espressjoni tal-MMPs u l-passaġġ tal-kinase MAP. Ikel Chem Toxicol. 2011;49(1):309–18.

29. Chiang HM, Chiu HH, Liao ST, Chen YT, Chang HC, Wen KC. Isoflavonoid-Rich Flemingia macrophylla Extract itattenwa l-Ħsara tal-Ġilda Indotta mill-UVB billi Tneħħi Speċijiet Reattivi ta 'Ossiġenu u Inibixxi MAP Kinase u Espressjoni MMP. Evid Based Complement Alternat Med. 2013;2013:12.

30. Bertolotto C, Bille K, Ortonne JP, Ballotti R. Ir-regolamentazzjoni tal-espressjoni tal-ġene tat-tyrosinase minn cAMP fiċ-ċelluli tal-melanoma B16 tinvolvi żewġ motifi CATGTG madwar il-kaxxa TATA: implikazzjoni tal-prodott tal-ġene tal-mikroftalmja. J Cell Biol. 1996;134(3):747–55.

31. Korner A, Pawelek J. Mammalian tyrosinase jikkatalizza tliet reazzjonijiet fil-bijosintesi tal-melanin. Xjenza (New York, NY). 1982;217(4565):1163–5.

32. Tripathi RK, Hearing VJ, Urabe K, Aroca P, Spritz RA. Immappjar mutazzjonali tal-attivitajiet katalitiċi tat-tyrosinase tal-bniedem. J Biol Chem. 1992;267(33):23707–12.

33. Slominski A, Tobin DJ, Shibahara S, Wortsman J. Pigmentazzjoni tal-melanin fil-ġilda tal-mammiferi u r-regolamentazzjoni ormonali tagħha. Physiol Rev 2004;84(4):1155–228.

34. Fu YT, Lee CW, Ko HH, Yen FL. Estratti ta 'Artocarpus communis jonqsu l-melanoċiti li jistimulaw l-alfa-melanocyte il-melanoġenesi indotta mill-ormoni permezz tal-attivazzjoni ta' mogħdijiet ta 'sinjalazzjoni ERK u JNK. Xjentifiku World Journal. 2014; 2014:724314.

35. Chou TH, Ding HY, Hung WJ, Liang CH. Karatteristiċi antiossidanti u inibizzjoni ta 'melanoġenesi stimulata mill-ormoni li jistimulaw l-alfa-melanocyte ta' vanillin u aċidu vaniliku minn Origanum vulgare. Exp Dermatol. 2010;19(8):742–50.

36. Kumar KJ, Yang JC, Chu FH, Chang ST, Wang SY. Lucidone, inibitur ġdid tal-melanin mill-frott ta 'Lindera erythroderma Makino. Phytother Res. 2010; 24(8):1158–65.

37. Liu Q, Kim C, Jo YH, Kim SB, Hwang BY, Lee MK. Sinteżi u Evalwazzjoni Bijoloġika tad-Derivattivi tar-Resveratrol bħala Inibituri tal-Melanoġenesi. Molekuli (Basel, l-Isvizzera). 2015;20(9):16933–45.

38. Jimenez-Cervantes C, Solano F, Kobayashi T, Urabe K, Hearing VJ, Lozano JA, Garcia-Borron JC. Funzjoni enżimatika ġdida fil-mogħdija melanoġenika. L-attività 5,6-dihydroxy indole-2-carboxylic acid oxidase tal-proteina relatata mat-tyrosinase-1 (TRP1). J Biol Chem. 1994;269(27):17993–8000.

39. Kobayashi T, Urabe K, Winder A, Jimenez-Cervantes C, Imokawa G, Brewington T, Solano F, Garcia-Borron JC, Hearing VJ. Il-proteina 1 relatata mat-tyrosinase (TRP1) taħdem bħala DHICA oxidase fil-bijosintesi tal-melanin. EMBO J. 1994;13(24):5818–25.

40. Gaggioli C, Busca R, Abbe P, Ortonne JP, Ballotti R. Il-fattur ta' traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmija (MITF) huwa meħtieġ iżda mhuwiex biżżejjed biex jinduċi l-espressjoni ta' ġeni melanoġeniċi. Pigment Cell Res. 2003;16(4):374–82.

41. Khaled M, Larribere L, Bille K, Aberdam E, Ortonne JP, Ballotti R, Bertolotto C. Glycogen synthase kinase 3beta huwa attivat minn cAMP u għandu rwol attiv fir-regolazzjoni tal-melanoġenesi. J Biol Chem. 2002;277(37):33690–7.

42. Khaled M, Larribere L, Bille K, Ortonne JP, Ballotti R, Bertolotto C. Il-fattur tat-traskrizzjoni assoċjat mal-mikroftalmja huwa mira tal-passaġġ tal-fosfatidilinositol{2}}kinase. J Invest Dermatol. 2003;121(4):831–6.

43. Shao YY, Chen CC, Wang HY, Chiu HL, Hseu TH, Kuo YH. Kostitwenti kimiċi ta 'Antrodia camphorate mgħaddsa f'brodu sħiħ. Nat Prod Res. 2008;22(13):1151–7.

44. Oka M, Nagai H, Ando H, Fukunaga M, Matsumura M, Araki K, Ogawa W, Miki T, Sakaue M, Tsukamoto K, et al. Ir-regolazzjoni tal-melanoġenesi permezz tal-mogħdija ta' phosphatidylinositol 3-kinase-Akt fiċ-ċelloli tal-melanoma G361 tal-bniedem. J Invest Dermatol. 2000;115(4):699–703.

45. Busca R, Ballotti R. Cyclic AMP messaġġier ewlieni fir-regolamentazzjoni tal-pigmentazzjoni tal-ġilda. Pigment Cell Res. 2000;13(2):60–9.

46. ​​Shibahara S, Takeda K, Yasumoto K, Udono T, Watanabe K, Saito H, Takahashi K. Fattur ta 'traskrizzjoni assoċjat ma' mikroftalmija (MITF): multipliċità fl-istruttura, funzjoni u regolazzjoni. J Invest Dermatol Symp Proc/Soc Invest Dermatol, Inc [u] Eur Soc Dermatol Res. 2001;6(1):99–104.

47. Lee JY, Choi HJ, Chung TW, Kim CH, Jeong HS, Ha KT. Caffeic Acid Phenethyl Ester Jinibixxi Alpha-Melanocyte Stimulanti Sintesi tal-Melanin Indotta mill-Ormoni permezz tat-Trażżin tal-Attività ta 'Transattivazzjoni tal-Fattur ta' Traskrizzjoni Assoċjat tal-Microphthalmia. J Nat Prod. 2013;76(8):1399–405.

48. Huang GJ, Huang SS, Lin SS, Shao YY, Chen CC, Hou WC, Kuo YH. Effetti analġeżiċi u l-mekkaniżmi ta 'anti-infjammazzjoni ta' ergostatrien-3beta-ol minn Antrodia camphorate mgħaddas brodu sħiħ fil-ġrieden. J Agrikol Ikel Chem. 2010;58(12):7445–52.

49. Tsai TC, Tung YT, Kuo YH, Liao JW, Tsai HC, Chong KY, Chen HL, Chen CM. Effetti anti-infjammatorji ta 'Antrodia camphorate, mediċina tal-ħxejjex, f'mudell ta' iskemija tal-ġilda tal-ġrieden. J Ethnopharmacol. 2015;159:113–21.

For more information:1950477648nn@gmail.com