Metodu Għall-Identifikazzjoni ta 'Ingredjenti Attivi Kimiċi Ta' Cistanche

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com

Komponenti Kimiċi Identifikazzjoni Ta 'Cistanche Deserticola Bl-użu tas-Sistema QTOF X500R

Li Yuejie, Cheng Haiyan, Liu Ting, Li Lijun, Jin Wenhai SCIEX, Ċentru ta' Appoġġ għall-Applikazzjoni tal-Ażja-Paċifiku (Shanghai), iċ-Ċina

Introduzzjoni

Cistanche deserticolal-ewwel ġie rreġistrat fil-"Shen Nong Materia Medica"; huwa magħruf ukoll bħala "Dayun," "Rousong Rong," u "Zong rong." Bħala mediċina veġetali tradizzjonali, għandha l-proprjetajiet li ssostni l-yang tal-kliewi, ittejjeb il-fluss tad-demm, taġixxi bħala lassattiv, stimulazzjoni immuni, u effetti oħra[1]. Fl-1983, l-istudjuż Ġappuniż H. Kobayashi u oħrajn bdew jistudjaw il-kompożizzjoni kimika ta 'Cistanche Deserticola[2], u minn dakinhar saret suġġett popolari fir-riċerka tal-mediċina Ċiniża li ġġenerat interess kbir kemm domestikament kif ukoll barra minn Malta matul l-aħħar 30 sena.Cistanche Deserticolajappartjeni għall-klassi ta 'pjanti li fihom fenoliċiglikosidi, iridojdi, u tagħhomglikosidi, u lignans u tagħhomglikosidi.

L-ispettrometrija tal-massa Quadrupole time-of-flight (QTOF) hija għodda sensittiva u speċifika għall-identifikazzjoni ta 'komponenti tal-mediċina Ċiniża li gradwalment saru indispensabbli għar-riċerka. Din it-teknoloġija għelbet sfidi tekniċi tradizzjonali b'analiżi retrospettiva ta 'injezzjonijiet singoli li jippermettu l-estrazzjoni ta' data importanti u l-akkwist l-aktar komprensiv ta 'informazzjoni tal-kampjun. L-użu tad-dejta TOF-MS u TOF-MS/MS ta 'massa eżatta u ta' riżoluzzjoni għolja jippermetti analiżi kwalitattiva simultanja, speċifika ħafna mmirata u mhux immirata. Madankollu, il-kumplessità tal-operazzjoni tal-istrument u l-użu tas-softwer illimitaw ħafna t-tixrid u l-iżvilupp ta 'din it-teknoloġija. Hawnhekk nintroduċu sistema QTOF ġdida li tuża mogħdija TOF rivoluzzjonarja ġdida bbażata fuq il-ġeometrija tat-tip N, softwer intuwittiv, u tekniki preċiżi ta 'piż molekulari li huma aktar faċli biex jintużaw fl-identifikazzjoni tal-komponenti tal-mediċina Ċiniża.

Il-benefiċċji ta 'dan il-metodu huma kif ġej:

1. L-X500R juża s-sors tal-jone Turbo VTM durabbli u approvat mill-industrija u d-disinn tal-interface tal-gass tal-purtieri tal-arja, li għandu karatteristika qawwija kontra l-kontaminazzjoni;

2. SCIEX OS Software għandu funzjonijiet integrati ta 'akkwist, ipproċessar u rappurtar fuq pjattaforma waħda; l-interface hija intuwittiva, faċli biex tikkontrolla, u għandha korrezzjoni ta 'aġġustament awtomatiku one-touch biex tiżgura li l-analisti bi kwalunkwe grad ta' kompetenza jistgħu jiksbu dejta ta 'kwalità għolja u affidabbli;

3. L-użu ta 'SCIEX OS Software biex jipproċessa d-dejta biex jidentifika l-komponenti tal-mediċina Ċiniża huwa sempliċi u jippermetti estrazzjoni rapida ta' informazzjoni utli, għalhekk;

4. Jiġi riżultati ta 'identifikazzjoni aktar preċiżi u affidabbli minn libreriji tal-mediċina Ċiniża li fihom spettri MS/MS;

5. Id-databases tal-mediċina Ċiniża MS/MS b'riżoluzzjoni għolja huma bbażati fuq l-ingredjenti attivi tat-TCM tal-Parti 1 "Farmakopea Ċiniża"; inklużi referenzi ta 'komponenti fil-farmakopea u ingredjenti attivi fil-ħxejjex aromatiċi, hemm kważi 900 kompost

cistanche deserticola ittejjeb l-effikaċja

Proċess Sperimentali

1. Bl-użu tal-modalità TOF-MS-IDA MS/MS, injetta kampjun u fl-istess ħin tikseb joni prekursuri primarji u spettri sekondarji korrispondenti;

2. L-użu ta 'screening immirat ta' SCIEX OS Software, konferma ta 'komposti fil-mira, u spettri sekondarji flimkien ma' screening ta 'standards tal-mediċina Ċiniża u metodi ta' tqabbil jistgħu jżidu l-eżattezza u l-produttività tax-xogħol.

3. Il-fluss tax-xogħol ta 'identifikazzjoni mhux immirat ta' SCIEX OS Software juża tfittxijiet fil-librerija u jlesti tfittxijiet mhux magħrufa f'ChemSpider biex jivverifika r-riżultati, u jiżgura li aktar komponenti jiġu identifikati bi fluss tax-xogħol aktar sempliċi.

Kampjuni u Metodu ta' Preproċessar

Sors tal-kampjun:

Mixtri mill-ispiżeriji ta 'Shanghai f'forma mqatta'

Metodu ta' pproċessar minn qabel:

1. Flieli ġew imfarrak biex jiffurmaw trab;

2. 0.9mg ġiet miżuna u mgħaddsa fi 3mL metanol għal 40min;

3. Il-kampjun mill-pass 2) ġie ultrasonikat 1 h;

4. Twettqet iċ-ċentrifugazzjoni u t-tneħħija tas-supernatant biex jintuża bħala kampjun.

Kundizzjonijiet tal-Kromatografija Likwida (LC).

Kolonna Kromatografika: XSelect HSS T3, 2.1 * 150mm, 3.5µm;

Fażi mobbli: Intużat elużjoni tal-gradjent

Fażi mobbli: A hija 0.1 fil-mija ilma aċidu formiku-2mM NH4FA

B huwa 95 fil-mija aċetonitrile-5 fil-mija ilma-2mM NH4FA

Rata tal-fluss: 0.5mL/min

Temperatura tal-kolonna: 40ºC

Ammont imdaħħal: 5µL

Metodu ta' Spettrometrija tal-Massa:

Metodu ta' skanjar: TOF MS-IDA-15 MS/MS screening kwalitattiv

Parametri tas-sors tal-jone ESI:

Gass tal-purtieri tal-arja CUR: 35psi; Vultaġġ IS: 5500V/-4500V

Temperatura tas-sors: 600ºC

Gass atomizzanti GAS1: 55psi; Gass awżiljarju GAS2: 60psi

Tfittxija fil-mod ta' strumentazzjoni:

One-touch (agħżel MS Check fuq in-naħa t'isfel tal-lemin), il-mod ta 'korrezzjoni TOF-MS u TOF-MS/MS kompletament awtomatizzat jiżguraw li l-analisti ta' kwalunkwe livell ta 'kompetenza jistgħu jiksbu dejta preċiża, affidabbli u riproduċibbli.

BPCs b'mod ta' joni pożittivi u negattivi:

Proċedura ta' Identifikazzjoni Komposti

1. Fluss tax-xogħol ta 'identifikazzjoni tal-komponent immirat

1.1: Tfittxija tal-formula molekulari

L-isem tal-kompost kimiku u l-formula molekulari biss huma meħtieġa; dawn jistgħu jiġu input direttament jew importati bl-użu ta ' l-Excel kopja u paste funzjoni biex jinħoloq metodu ta ' l-ipproċessar

Ladarba tinħoloq tabella tar-riżultati, ir-riżultati kwantitattivi u kwalitattivi jistgħu jitqiesu fl-istess tieqa. Sistema indikatur aħmar/aħdar tintuża biex tindika l-eżattezza tal-massa, il-ħin ta 'żamma, it-tip ta' iżotopi, u l-kunfidenza fl-identifikazzjoni permezz tat-tqabbil tad-database.

Is-softwer SCIEX OS jippermetti lill-utenti jiffiltraw ir-riżultati u juru biss dawk il-komposti li jissodisfaw il-kriterji ta' aċċettazzjoni u li jaqgħu f'intervalli ta' kunfidenza definiti mill-utent. Jista 'malajr isib riżultati mmirati f'databases kbar.

Id-database TCM tal-ispettri MS/MS tippermetti tqabbil sekondarju u tagħti riżultati aktar affidabbli (il-kulur griż fid-database jindika data MS/MS)

Il-letteratura fiha ismijiet u formuli molekulari ta 'fenoliċiglycosideingredjenti attivi. Bl-użu tal-proċess ta 'hawn fuq għall-identifikazzjoni tal-komponenti fil-mira, ġie determinat li l-kampjun fih 39 tip ta' glikosidi fenoliċi:

Minbarra l-fenoliċiglycosidekomponenti attivi, Cistanche fih ukoll numru kbir ta 'komposti bħal iridojdi, glycosides, u lignans. Ir-riżultati tal-identifikazzjoni huma kif ġej:

Il-lista ta' identifikazzjoni ta' iridojdi, glikosidi u lignans:

1.2: Tiftix fil-Bażi tad-Dejta:

53 kompost inkisbu minn identifikazzjoni ta 'tqabbil fid-database tat-TCM: 43 joni pożittiv, 22 joni negattiv, u 12 ripetizzjoni, elenkati hawn taħt. Minbarra fenoliċi attivglikosidi, iridojdi, glycosides, u lignans, Cistanche fih ukoll

2. Analiżi tal-komponenti mhux immirati

L-identifikazzjoni tal-komponenti mhux immirati tista 'titwettaq bil-funzjoni ta' tfittxija integrata ta 'ChemSpider biex tiddetermina l-klassifikazzjoni u t-tip ta' mhux magħrufa. Għal identifikazzjoni ta 'komponent mhux immirat, sempliċement agħżel il-mod "mhux immirat" u t-tfittxija tal-formula molekulari tiżviluppa metodu ta' pproċessar. Il-fluss tax-xogħol huwa kif ġej:

Għal mhux magħrufa sħaħ, ir-riżultati tat-tfittxija tal-formula molekulari huma murija f'tieqa tal-brawżer tal-quċċata fil-parti t'isfel tal-ispettru tal-massa TOF MS; bit-tfittxija fid-database ChemSpider, ir-riżultati huma elenkati skond il-prijorità, u l-informazzjoni strutturali miksuba f'ChemSpider titqabbel awtomatikament mal-ispettru MS/MS miksub, li jipprovdi feedback sekondarju għal identifikazzjoni rapida.

Sommarju

1. Akkwist rapidu ta 'data b'riżoluzzjoni għolja; injezzjoni waħda tat dejta TOF MS u MS/MS b'riżoluzzjoni għolja, b'39 komponenti attivi phenolic glycoside identifikabbli u 16 iridoids, lignans, u glycosides;

2. Database ta 'TCM ta' spettri sekondarji tipprovdi informazzjoni addizzjonali ta 'tqabbil, u s-softwer awtomatikament jipprovdi punteġġ ta' tqabbil tad-database. Bl-użu tal-punteġġ, wieħed jista 'faċilment, malajr, u b'mod preċiż jidentifika l-komponenti tal-mediċina Ċiniża;

3. L-apparat huwa sempliċi u għandu korrezzjoni ta 'aġġustament awtomatiku one-touch biex jiżgura li l-analisti bi kwalunkwe grad ta' kompetenza jistgħu jiksbu dejta ta 'kwalità għolja u affidabbli;

4. Il-verżjoni l-ġdida tas-softwer SCIEX OS tintegra l-akkwist tad-dejta, l-ipproċessar (kwantitattiv u kwalitattiv), il-wiri, ir-rappurtar u l-ġestjoni tad-database. Issolvi d-diffikultajiet li ħafna utenti jiffaċċjaw b'interface intuwittivi u faċli biex tużah;

5. Kemm il-flussi tax-xogħol tal-iskrinjar immirati kif ukoll dawk mhux immirati huma sempliċi, u l-gwida tal-metodu integrata tgħin lill-utenti joħolqu metodi b'mod preċiż u rapidu.

Referenzi

1. ISBN 978-7-5067-7337-9, farmakopea tar-RPĊ [S]. Beijing: Kummissjoni Nazzjonali tal-Farmakopea, 2015

2. Lei, Song Zhihong, Tu Pengfei; Avvanzi tar-riċerka fil-kompożizzjoni kimika tal-pjanti tal-ġeneru Cistanche, "Chinese Herbal Medicine," Volum 34, Nru 5, Mejju 2003, 473-476.