Kif tuża l-formula li tonifika l-kliewi biex tipproteġi l-ħsara ossidattiva liċ-ċelloli MES23.5?

Kuntatt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Email:audrey.hu@wecistanche.com

Yihui Xu,¹Wei Lin,²Shuifen Ye,³Huajin Wang,⁴Tingting Wang,⁵Youyan Su, ⁵Liangning Wu,⁶Yuanwang Wang,⁷Qian Xu,⁵Chuanshan Xu,⁸u Jing Cai 5 , *

Astratt

Ħsara ossidattivagħandu rwol kritiku fl-etjoloġija ta 'disturbi newrodeġenerattivi inkluż il-marda ta' Parkinson (PD). Fl-istudju tagħna, Ċiniż tal-qedemtonifikazzjoni tal-kliewiformula, li tikkonsisti f'Cistanche, Epimedii, u Polygonatum cirrhifolium, ġiet investigata biex tipproteġi n-newroni dopaminerġiċi MES23.5 kontra l-perossidu tal-idroġenu (H2O2-) indottħsara ossidattiva. L-effetti ta 'ħsara ta' H2O2 fuqĊelloli MES23.5u l-effetti protettivi tal-KTF kontraossidattivstress ġew evalwati bl-użu ta 'assaġġ MTT, mikroskopija elettronika ta' trażmissjoni (TEM), immunoċitokimika (ICC), assaġġ immunosorbenti marbut ma 'enżimi (ELISA), u immunoblotting. Ir-riżultati wrew li l-vijabbiltà taċ-ċelluli naqset b'mod drammatiku wara espożizzjoni ta '12-il siegħa għal 150 μM H2O2. L-osservazzjoni TEM sabet li l-H2O2-trattatĊelloli MES23.5ippreżenta ħsara lill-organelli ċellulari. Madankollu, meta ċ-ċelloli ġew inkubati b'KTF (3.125, 6.25, u 12.5 ug/ml) għal 24 siegħa wara l-espożizzjoni għall-H2O2, ġie osservat effett protettiv sinifikanti kontra l-ħsara kkawżata mill-H2O2-f'Ċelloli MES23.5. Bl-użu tal-ICC, sibna li KTF inibixxi t-tnaqqis tat-tyrosine hydroxylase (TH) indott minn H2O2, irregola l-espressjoni tal-mRNA u tal-proteini ta’ HO-1, CAT, u GPx-1, u rregola l-espressjoni ta’ caspase 3. Dawn ir-riżultati indikaw li KTF jista' jipprovdi protezzjoni tan-newroni kontra l-ħsara taċ-ċelluli kkawżata minn H2O2-permezz ta' titjibossidattivstress, u s-sejbiet tagħna jipprovdu strateġija potenzjali ġdida għall-prevenzjoni u t-trattament tal-marda ta 'Parkinson.

BENEFIĊĊJU TA' CISTANCHE:kura tal-marda ta' Parkinson

1. Introduzzjoni

Il-mard newrodeġenerattiv dan l-aħħar sar problema importanti tas-saħħa pubblika. Il-marda ta' Parkinson (PD) hija marda newrodeġenerattiva kkaratterizzata mit-telf progressiv ta' newroni dopaminerġiċi fis-substantia nigra. Anke jekk il-kawża tal-PD għad trid tiġi ċċarata, bosta linji ta 'evidenza jissuġġerixxu b'mod qawwi danħsara ossidattivau disfunzjoni mitokondrijali għandhom rwol importanti fil-mekkaniżmi patoloġiċi tal-PD [1-3]. Żiedaossidattivstress jirriżulta minn żbilanċ bejnossidattivprodotti bħal speċi ta 'ossiġnu reattiv (ROS) u molekuli antiossidanti fiċ-ċellula [4]. It-titjib tal-kapaċità antiossidativa taċ-ċelloli tal-moħħ sar strateġija effettiva fil-protezzjoni taċ-ċelloli tan-nervituri kontra l-ħsara mill-istress ossidattiv.

Il-PD hija marda diffiċli biex tittratta li thedded lill-anzjani madwar id-dinja. Il-mediċini terapewtiċi attwali għandhom effikaċja limitata b'effetti sekondarji severi. Ħwawar u formuli tradizzjonali Ċiniżi ntużaw ħafna fil-mediċina folkloristika biex jittrattaw mard newrodeġenerattiv inkluż PD għal żmien twil. Skont it-teorija tal-mediċina Ċiniża, id-defiċjenza tal-kliewihuwa l-mekkaniżmu patoloġiku ewlieni tal-PD. Cistanche deserticola YC Ma, speċi ta’ Cistanche li tappartjeni għall-familja Orobanchaceae, hija ħaxixa magħrufa sew fil-mediċina tradizzjonali Ċiniża bl-hekk imsejħatonifikazzjoni tal-kliewieffikaċja u jintuża għat-trattament takliewidefiċjenza, infertilità femminili, lewkorrea morboża, newrastenja, u stitikezza senile [5]. Ġie rrappurtat li l-glycosides totali ta 'Cistanche eżerċitaw effetti protettivi fuq in-newroni dopaminerġiċi substantia nigra f'mudelli ta' ġrieden u ċelloli ta 'PD [6, 7]. Barra minn hekk, l-ingredjenti attivi ta 'Cistanche ġew dokumentati li għandhom effett newroprotettiv billi jtejbu l-kapaċità antiossidanti u jinibixxu l-apoptożi tan-newroni [8-15]. Herba Epimedii hija wkoll tradizzjonalitonifikazzjoni tal-kliewiĦwawar Ċiniża b'attività antiossidativa b'mod sinifikanti, li hija utilizzata ħafna fit-trattament tal-osteoporożi u l-mard kardjovaskulari u t-titjib tal-funzjonijiet sesswali u newroloġiċi [16]. Polygonatum sibiricum huwa spiss impjegat bħala assistent biex ittejjeb l-effettività tad-droga monarka u d-droga tal-ministru fil-formula tradizzjonali Ċiniża. Rapport reċenti wera li l-estratti ta 'l-ilma ta' Polygonatum sibiricum huma antiossidanti naturali.

Ibbażat fuq dawn il-benefiċċji miċ-Ċiniż tal-qedemtonifikazzjoni tal-kliewiformula (KTF) li tikkonsisti f'Cistanche, Epimedii, u Polygonatum cirrhifolium, aħna ipoteżijna li KTF jista' jipproteġi n-newroni dopaminerġiċi MES23.5 kontra l-perossidu tal-idroġenu (H2O2-) indottħsara ossidattiva. Hawnhekk, bħala prova ta' kunċett, wettaqna serje ta' esperimenti biex neżaminaw l-effetti tal-KTF fuq il-mewt taċ-ċelluli u l-espressjoni tal-enzimi antiossidanti fl-H2O2-trattatiĊelloli MES23.5.

Il-Formula Tonifikanti tal-Kliewi tista 'tipproteġi l-Ħsara Ossidattiva liċ-Ċelloli MES23.5

2. Materjali u Metodi

2.1. Kimiċi u Reaġenti

L-antikorpi HO-1, CAT, caspase 3, u -actin inkisbu minn Cell Signaling Technology Inc. (Boston, USA). L-antikorp GPx-1 kien minn Abcam (Cambridge Science Park, UK). Fenek Anti-Tyrosine Hydroxylase kien minn Boster (BA1454, iċ-Ċina). IgG1 kontra l-fenek tal-mogħoż konjugat ma' tikketta tal-perossidasi tar-ravanell kien minn Santa Cruz Biotechnology Inc. (Kalifornja, USA). Dulbecco's modifikat Eagle's medium (DMEM) inxtara minn GIBCO BRL Co Ltd (Gaithersburg, MD, USA). Ir-reaġenti l-oħra kollha, sakemm ma jkunx iddikjarat mod ieħor, kienu minn Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). RevertAid™ First Strand cDNA Synthesis Kit kien minn Fermentas Inc. (Burlington, USA). DreamTaq Green PCR Master Mix (2x) kien minn Fermentas Inc. (Burlington, USA). Bio DL100 kien minn BioFlux (Tokyo, Ġappun). Polink-2 flimkien ma' Polymer HRP Detection System for Rabbit Primary Antibody (PV-9001) u DAB (3, 3′-diaminobenzidine tetrahydrochloride) (ZLI-9032) kienu minn ZSGB-BIO (Beijing, iċ-Ċina). Kits ELISA għall-kejl ta' CAT, GPx-1, u GSH kienu minn Hufeng Biotechnology Inc. (Shanghai, iċ-Ċina). L-estratti tal-Ginkgo biloba (GE) kienu minn Shanghai Sine Promod Pharmaceutical Co., Ltd. (Shanghai, iċ-Ċina).

2.2. Preparazzjoni u Standardizzazzjoni ta 'Formula Tonifikazzjoni tal-Kliewi

Il-komponenti tal-tonifikazzjoni tal-kliewiformula, Cistanche deserticola, Epimedium brevicornum, u Polygonatum sibiricum, ġew fornuti mit-Tieni Sptar tal-Poplu Affiljat, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, u awtentikati bir-reqqa skont il-farmakopea Ċiniża (Il-Kummissjoni tal-Farmakopea taċ-Ċina, 2005). Biex tipprepara kampjuni KTF, Cistanche deserticola, Epimedium brevicornum, u Polygonatum sibiricum fil-proporzjon tal-piż ta '1: 1: 1.2 tħalltu u mitħun fit-trab u mbagħad mgħaddsa f'volum totali ta' 10 darbiet (w/v) ilma distillat għal 1 h u mgħolli għal 2 h. Wara li s-soluzzjoni ġiet iffiltrata, il-filtrat inġabar. Ir-residwu kollu ġie miġbur u mgħolli aktar b'volum totali ta '8 darbiet (w/v) ilma distillat għal 2 sigħat. Is-soluzzjoni ġiet iffiltrata u ż-żewġ filtrati ġew magħquda, ikkonċentrati, u mnixxfa bil-friża. Ir-rendiment tal-estratt finali mnixxef kien 25 fil-mija (w/w) tal-materja prima tal-ħxejjex tal-bidu u nħażen f'-20 grad sakemm jintuża. Is-soluzzjoni tal-ħażna KTF (10 mg/ml) ġiet ippreparata billi tħoll il-KTF f'soluzzjoni buffer tal-fosfat (PBS), segwita minn ivvibrar, sterilizzazzjoni f'100 grad, u filtrazzjoni.

2.3. Kultura taċ-Ċelloli u Trattament H2O2

Ċelloli MES23.5kienu kkultivati ​​u esposti għal H2O2 kif deskritt mid-dokument preċedenti tagħna [10]. Fil-qosor,Ċelloli MES23.5tkabbru f'medja DMEM/F12 (GIBCO BRL Co. Ltd., Gaithersburg, MD, USA) li fiha 5 fil-mija (vol/vol) FBS (GIBCO BRL Co. Ltd., Gaithersburg, MD, USA), 1{{12} }0 U penicillin/streptomycin, 2 mM L-glutamina (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO, USA), u Sato's (50 × Sato's: insulina 25 mg; trasferiment ta' 25 mg; aċidu piruviku, 243 mg; putresċina 20 mg; 1 mg/ml selenat tas-sodju, 25 ul; 0.315 mg/ml progesterone) f'37 grad b'5 fil-mija CO2. Il-lejl imkabbarĊelloli MES23.5ġew inkubati aktar b'150 μM H2O2 għal 12-il siegħa.

2.4. Trattament KTF

Ċelloli MES23.5kienu maqsuma b'mod każwali fi grupp ta 'kontroll (medju ta' kultura frisk), grupp H2O2 (medju ta 'kultura H2O2), grupp ta' estratt ta 'Ginkgo biloba (GE) (mezz ta' kultura H2O2 u GE), u gruppi KTF inkluża d-doża baxxa ta 'trattament KTF, doża tan-nofs ta' Trattament FTF, u doża għolja ta 'trattament KTF.Ċelloli MES23.5fil-fażi logaritmika ġew miżrugħa fi pjanċa tal-kultura miksija b'poly-L-lysine (PLL) għal 24 siegħa. Iċ-ċelloli fil-grupp ta 'kontroll ġew ittrattati bil-medju tal-kultura frisk, u dawk fil-gruppi l-oħra kollha ġew ittrattati bil-mezz tal-kultura li kien fih 150 μM H2O2 għal 12-il siegħa. Iċ-ċelloli fil-grupp GE ġew ittrattati bil-medju tal-kultura li kien fih 12.5 ug/ml GE, u dawk fil-grupp KTF ta 'doża baxxa, grupp KTF ta' doża tan-nofs, u grupp KTF ta 'doża għolja ġew ittrattati b'KTF fil-konċentrazzjonijiet ta' 3.125, 6.25, u 12.5 ug/ml għal 24 siegħa, rispettivament.

2.5. Vijabilità taċ-Ċelloli

Wara t-trattament KTF għal 2 0 sigħat, iċ-ċelloli ġew inkubati b'MTT (0.5 mg/ml) għal 4 sigħat f'temperatura ta '37 grad, u l-midja tneħħiet bir-reqqa u 150 μL ta' DMSO ġew miżjuda ma 'kull bir. Il-kristalli tal-formazan ġew maħlula għal 10 min, u l-assorbiment tkejjel f'490 nm. Id-densità ottika (OD) ta 'kull bir kienet imkejla bi spettrofotometru (BIO-TEK ELX 800, BioTek Instruments Inc., Vermont, USA). Mezz tal-kultura taċ-ċelluli friski intuża bħala kontroll negattiv.

Il-Formula Tonifikanti tal-Kliewi tista 'tipproteġi l-Ħsara Ossidattiva liċ-Ċelloli MES23.5

2.6. Osservazzjoni Morfoloġija Ultrastrutturali

Wara t-trattament KTF għal 24 siegħa, iċ-ċelloli ġew miġbura, sospiżi, u ffissati bi 3 fil-mija glutaraldehyde f'soluzzjoni ta '1.5 fil-mija paraformaldehyde (pH 7.3) f'4 gradi għal 24 siegħa. Is-sospensjonijiet taċ-ċelluli mbagħad ġew laħlaħ darbtejn b'PBS u postfissati b'1 fil-mija ta 'aċidu osmiku u 1.5 fil-mija tas-soluzzjoni ta' hexacyanoferrate (II) tal-potassju (pH 7.3) u inkubati f'4 grad għal 2 h; imbagħad is-sospensjonijiet taċ-ċelluli ġew deidrati f'serje gradata ta 'alkoħol għal 5 minuti kull wieħed. Il-gerbub deidrati ġew inkorporati tliet darbiet b'ossidu tal-propilene għal 1 siegħa u infiltrati b'taħlita ta 'reżina / ossidu tal-propilene f'proporzjon ta' 1: 1 għal 2 sigħat u mbagħad b'reżina għal 12-il siegħa f'temperatura tal-kamra. L-inklużjoni saret b'reżina epoxy 618 u Araldite u l-polimerizzazzjoni saret f'60 grad għal 48 siegħa. Fl-aħħarnett, sezzjonijiet ultrathin (80 nm) kienu mtebbgħin b'uranyl acetate u counterstained b'ċitrat taċ-ċomb għal 5 min. Iċ-ċelloli mtebbgħin ġew eżaminati bil-mikroskopju elettroniku ta 'trasmissjoni H7650 (Hitachi, Ġappun).

2.7. Assaġġ Immunoċitokimiku ta' Tyrosine Hydroxylase (TH)

Wara t-trattament KTF għal 24 siegħa, iċ-ċelloli ġew maħsula darbtejn għal 2 min b'PBS u ffissati b'4 fil-mija paraformaldehyde għal 15-il minuta. Iċ-ċelloli fissi ġew maħsula 3 darbiet u mbagħad ittrattati bi 0.5 fil-mija Triton X-100 għal 20 min. Wara, iċ-ċelloli ġew maħsula 3 darbiet u ttrattati bi 3 fil-mija H2O2 għal 10 min. Iċ-ċelluli ttrattati H2O2-inħaslu 3 darbiet u mbagħad ġew imblukkati bis-serum tal-mogħoż għal 20 min. Wara li tneħħa, il-fenek anti-TH (1: 400) ġie miżjud ma' kull kampjun f'4 gradi matul il-lejl. Il-kampjuni mbagħad ġew maħsula 3 darbiet u ttrattati b'Polymer Helper għal 20 min. Wara t-trattament tal-Polimer iċ-ċelloli ġew maħsula 3 darbiet u ttrattati b'IgG kontra l-fenek poly-HRP għal 20 min. Iċ-ċelloli ġew maħsula 3 darbiet u ttrattati b'DAB għal 3 min. Fl-aħħarnett, il-kampjuni ġew maħsula bl-ilma ġieri u ttrattati b'ematossilina counterstaining għal 1 min u mbagħad maħsula bl-ilma ġieri u ssiġillati b'mezz ta 'immuntar importanti.

2.8. Kejl ta' Enżimi Antiossidattivi permezz ta' ELISA

Wara trattament KTF għal 24 siegħa, il-livell ta 'attività ta' CAT intraċellulari, GPx-1, u GSH ġew imkejla bl-użu ta 'kit ELISA (Hufeng Biotechnology Inc., Shanghai, iċ-Ċina) skond l-istruzzjoni tal-manifattur. Fil-qosor, 100 μL omoġenat supernatant tal-lisat taċ-ċelluli ttrattati ġie miżjud mal-bjar ELISA u mbagħad inkubat f'37 grad għal 30 min. Wara li ġiet maħsula ħames darbiet u mnixxfa, 50 μL soluzzjoni ta 'ħidma ta' antikorpi tikkettati bl-enżimi ġiet miżjuda ma 'kull bir (tubu ta' kontroll mistenni). Is-soluzzjoni riżultanti ġiet inkubata għal 30 min f'37 grad u maħsula ħames darbiet u mnixxfa. Soluzzjoni tax-xogħol tas-sottostrat (150 μL) ġiet miżjuda ma 'kull bir u inkubata għal 15-il minuta f'37 grad. Fl-aħħarnett, soluzzjoni ta 'waqfien (50 μL) ġiet miżjuda ma' kull bir u l-valur ta 'assorbenza ġie ddeterminat f'450 nm bl-użu ta' qarrej ELISA awtomatiku (XL800, BioTex, Incorporated, Houston, TX, USA).

2.9. Analiżi Western Blot

Wara trattament KTF għal 24 siegħa, iċ-ċelloli ġew maħsula b'PBS kiesaħ bis-silġ, u l-proteini ġew estratti f'liżi buffer li kien fih 50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 1 mM EDTA, 150 mM NaCl, 1 fil-mija Nonidet P{{ 9}}, 1 mM phenylmethylsulfonyl fluworide, u 10 ug/mL aprotinin. Il-konċentrazzjoni tal-proteina ġiet iddeterminata bl-użu ta' BCA Protein Assay Kit (Thermo Scientific Pierce, Rockford, Illinois, USA). Il-proteina ġiet isseparata b'elettroforeżi SDS-PAGE u trasferita għal PVDF (Bio-Rad, Hercules, CA, USA). L-imblukkar sar b'5 fil-mija ħalib imnixxef mingħajr xaħam; il-membrana ġiet inkubata mal-fenek anti-far HO-1, CAT, caspase 3, -actin antikorp (1: 1000, Cell Signaling), u fenek anti-far GPx-1 antikorp (1: 1000) , Abcam) matul il-lejl f'4 grad. Il-membrana ttrattata ġiet maħsula u mbagħad esposta għal mogħoż kontra l-fenek IgG1 konjugat ma 'tikketta perossidasi tar-ravanell (1: 5000, Santa Cruz, USA) għal 2 sigħat f'temperatura tal-kamra. Wara ħames ħasliet oħra, ir-reattività inkroċjata ġiet viżwalizzata bl-użu ta 'reaġenti ta' detezzjoni tal-Blot tal-Punent tal-Electrochemiluminescence (ECL) u analizzata bl-użu ta 'densitometrija tal-iskannjar f'Sistema ta' Immaġini (Bio-Rad, Hercules, CA, USA).

2.10. Analiżi RT-PCR

PCR primers ta 'HO-1, CAT, GPx-1, u -actin inxtraw minn Sangon Biotech Co. Ltd. (Shanghai, iċ-Ċina). Wara trattament KTF għal 24 siegħa, l-RNA totali taċ-ċelloli ġie iżolat bl-użu ta 'reaġent Trizol skont l-istruzzjoni tal-manifattur. Traskrizzjoni inversa (RT) saret bl-użu tas-sistema ta 'traskrizzjoni inversa AMV (Fermentas, Burlington, USA). Framment ta 'cDNA u -actin ġew amplifikati bl-użu ta' Green PCR master MIX Kit (Fermentas, Burlington, USA). Id-DNA ġie amplifikat immedjatament b'ċiklu wieħed f'94 grad għal 5 min u 30 ċiklu f'94 grad għal 30 s u 58 grad għal 30 s u 72 grad għal 30 s għal -actin, u pass ta 'estensjoni finali ttieħed f'72 grad għal 10 min. Ġellijiet imtebbgħin bil-bromur tal-Ethidium ġew skannjati u kkwalifikati bl-użu ta 'Tanon Image Software. L-intensità ta 'kull faxxa ġiet normalizzata kontra l-intensità ta' -actin.

2.11. Analiżi Statistika

Analiżi statistika saret bl-SPSS 18.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Id-dejta kollha ntweriet bħala medja ± SD (devjazzjoni standard), u s-sinifikat statistiku tad-differenza twettqet b'ANOVA f'direzzjoni waħda u LSD (devjazzjoni standard lineari). Differenza kienet meqjusa bħala sinifikanti f'P <>

Il-Formula Tonifikanti tal-Kliewi tista 'tipproteġi l-Ħsara Ossidattiva liċ-Ċelloli MES23.5

3. Riżultati

3.1. L-Effetti tal-Ħsara ta 'H2O2 fuq Ċelloli MES23.5 u l-Effetti Protettivi tal-KTF kontra Stress Ossidattiv

Kif muri fil-Figura 1(a), H2O2 wera inibizzjoni dipendenti fuq id-doża u l-ħin fil-vijabbiltà taċ-ċelloli newronali dopaminerġiċi MES23.5. Wara 12-il siegħa espożizzjoni għal 50 μM H2O2, ġie nnutat telf sinifikanti tal-vijabbiltà taċ-ċelluli, u t-telf tal-vijabbiltà taċ-ċelluli żdied gradwalment bid-doża ta 'H2O2 tiżdied għal 150 μM. Madankollu, iż-żieda ulterjuri tad-doża ta 'H2O2 minn 200 għal 500 μM ma rriżultatx f'telf ogħla b'mod sinifikanti tal-vijabbiltà taċ-ċelluli. TestendiĊelloli MES23.5espożizzjoni għal H2O2 minn 12-il siegħa sa 24 siegħa u 48 siegħa żied it-telf tal-vijabbiltà taċ-ċelluli f'konċentrazzjonijiet aktar baxxi ta' H2O2. Telf sinifikanti tal-vijabbiltà taċ-ċelluli MES23.5 ġie nnutat wara espożizzjoni ta '24 siegħa għal 25 μM H2O2 u 48 siegħa espożizzjoni għal 12.5 μM H2O2. Ġie osservat mod ta' telf ta' vijabbiltà taċ-ċelluli li jiddependi mill-ħin fil-konċentrazzjoni kollha ttestjata ta' H2O2.

Figura 1 L-effetti ta 'ħsara ta' H2O2 fuqĊelloli MES23.5u l-effetti protettivi tal-KTF kontraossidattivstress ġew evalwati bl-użu ta 'assaġġ MTT. (a) Effetti ta 'konċentrazzjonijiet differenti ta' trattament H2O2 fuq il-ħsara taċ-ċelluli. Iċ-ċelloli MES23.5 ġew ittrattati bi 12.5, 25, 50, 100, 150, 200, 300, 400, u 500 μMol/L H2O2 għal 12, 24, u 48 siegħa. (b) Effetti protettivi ta' konċentrazzjonijiet differenti ta' trattament ta' KTF fuq ħsara taċ-ċelluli indotta minn H2O2-. It-trattament ta 'KTF irriżulta f'żieda fil-vijabbiltà taċ-ċelloli MES23.5 wara ż-żieda ta' H2O2.Ċelloli MES23.5ġew inkubati b'GE (12.5 ug/ml) jew KTF (3.125, 6.25, 12.5 ug/ml) għal 24 siegħa wara ż-żieda ta 'H2O2. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli kienet imkejla bl-MTT. Id-dejta hija espressa bħala medja ± SD (devjazzjoni standard) fi tliet esperimenti indipendenti. #P < 0.05="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" ta'="" kontroll.="" ∗p="">< 0.05="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" tat-trattament="">

TesponiĊelloli MES23.5għal KTF waħdu ma kellux effett ċitotossiku sinifikanti anki meta l-konċentrazzjoni tal-KTF kienet sa 100 ug/ml. Iċ-ċelloli MES23.5 kkultivati ​​flimkien ma '150 μM H2O2 għal 12-il siegħa kkawżaw telf ta' vijabbiltà taċ-ċelluli ta '46.76 fil-mija. L-effett ċitotossiku ta 'H2O2 fuq ċelluli MES23.5 kien attenwat b'mod sinifikanti fuq trattament KTF għal 24 siegħa (Figura 1 (b)). Vijabilità miżjuda ta' H2O2 ittrattatĊelloli MES23.5ġie rrestawrat għal 95.86 fil-mija ± 7.18 fil-mija, 96.49 fil-mija ± 15.07 fil-mija, u 99.04 fil-mija ± 10.57 fil-mija permezz ta 'trattament b'KTF f'konċentrazzjonijiet ta' 3.125, 6.25, u 12.5 ug/ml, rispettivament.

TEM wera li ċ-ċelloli normali fil-grupp ta 'kontroll esibiti forma ovali b'membrana taċ-ċelluli intatta li għandha ħafna corrugations u strutturi simili għal mikrovilli. In-nukleu taċ-ċellula kien ellittiku fiċ-ċentru b'nukleolo wieħed u kellu ewkromatina normali u eterokromatina mxerrda. Mitokondrija esibiti bħal virga jew ellittika, imxerrda, u b'mitokondrijali normali cristae. Ir-retikulu endoplasmiku mhux maħdum kien żviluppat tajjeb u ma kellu l-ebda degranulazzjoni ovvja (Figura 2(a)). Madankollu, iċ-ċelloli ttrattati bl-H2O2 ippreżentaw tipiċiħsara ossidattivab'nuklei iżgħar, irregolari, u mitokondrija minfuħa. Instabet degranulazzjoni ovvja fir-retikulu endoplasmiku mhux maħdum (Figura 2(b)). Fiċ-ċelloli ttrattati mill-KTF imtejjeb H2O2-indottaħsara ossidattiva, mitokondrija esebiti bħal virga jew ellittika, imxerrda, u b'aktar mitokondrija cristae. Ir-retikulu endoplasmiku mhux maħdum ma kellu l-ebda degranulazzjoni ovvja (Figuri 2(d), 2(e), u 2(f)).

Figura 2 Effett tal-KTF fuq l-ultrastruttura ċellulari f'H2O2-indottaĊelloli MES23.5. Ultrastruttura ċellulari kienet osservata taħt TEM. Morfoloġija normali taċ-ċitoplasma, organelli taċ-ċelluli fil-grupp ta' kontroll ((a), ×15,000), morfoloġija ultrastrutturali karatteristika ta'ħsara ossidattivafi H2O2-grupp ittrattat ((b), ×15,000), trattament bil-grupp KTF (3.125, 6.25, u 12.5 ug/ml, rispettivament) ((d), (e), (f), ×15,000), jew estratt tal-Ginkgo (12.5 ug/ml) ((c), ×15,000).

3.2. Żieda fl-Espressjoni ta 'TH fiċ-Ċelloli MES23.5 wara Trattament KTF

TH hija enzima katalizzanti kritika fil-konverżjoni tal-amino acid L-tyrosine għal L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) li huwa l-prekursur għan-newrotrasmettituri dopamine. L-espressjoni normali ta 'TH hija l-marka tan-newroni attivi. Għalhekk, qabbilna l-espressjoni TH fl-H2O2-inkubataĊelloli MES23.5bi jew mingħajr wara t-trattament KTF bl-immunoistokimika. Ir-riżultat wera li H2O2 naqas l-espressjoni TH fiċ-ċelloli MES23.5, u wara t-trattament KTF jista 'jtejjeb l-espressjoni TH b'mod sinifikanti (Figura 3). Dan jindika li t-trattament KTF kien kapaċi jirrestawra l-funzjoni taċ-ċelloli MES23.5 ittrattati H2O2-.

Figura 3 KTF imtejjeb H2O2-indott tnaqqis ta 'TH inĊelloli MES23.5. Iċ-ċelloli ġew iffissati b'4 fil-mija paraformaldehyde u l-espressjoni ta 'TH ġiet skoperta mill-immunoċitokimika. (a) Tan jirrappreżenta l-espressjoni pożittiva TH (×400). (b) Kontroll negattiv. (c) Ir-riżultati huma espressi bħala grad medju ta' griż. Id-dejta hija medja ± SD fi tliet esperimenti indipendenti. #P <0.05 meta="" mqabbel="" mal-grupp="" ta="" 'kontroll.="" ∗p="">< 0.05="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" tat-trattament="">

3.3. KTF mrażżna H2O2-Attivazzjoni ta' Caspase 3 Indotta fiċ-Ċelloli MES23.5

Għal aktar investigazzjoni tal-mekkaniżmu tal-ħsara taċ-ċelluli MES23.5, aħna evalwajna l-espressjoni ta 'proapoptosis factor caspase 3 permezz ta' immunoblotting. Ir-riżultat wera li t-trattament H2O2 irregola b'mod sinifikanti l-espressjoni ta 'procaspase 3 u rregola 'l fuq l-espressjoni ta' caspase 3. B'kuntrast, it-trattament KTF rrestawra l-bilanċ ta 'procaspase 3 u caspase 3 billi żied l-espressjonijiet ta' procaspase 3 u naqqas l-espressjoni ta 'caspase 3 (Figura 4) ). Dawn is-sejbiet juru li t-trattament KTF inibixxi b'mod effettiv l-attivazzjonijiet ta' caspase 3.

Figura 4 Effett ta' KTF fuq l-espressjoni tal-proteina ta' caspase 3 f'H2O2-indottaĊelloli MES23.5. (a) L-espressjoni tal-proteina ta 'caspase 3 ġiet iddeterminata bil-western blot u kkwantifikata f'(b). Id-dejta hija espressa bħala medja ± SD fi tliet esperimenti indipendenti. #P < 0.05="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" ta'="" kontroll.="" ∗p="">< 0.05="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" ikkurat="" h2o2="">

3.4. Żieda fl-Espressjoni ta' Enżimi Antiossidattivi fiċ-Ċelloli MES23.5 permezz ta' Trattament KTF

L-analiżi ELISA wriet li CAT intraċellulari, GPx-1, u GSH ġew irregolati wara trattament ta '150 μM H2O2 fiċ-ċelloli MES23.5. Ta 'min jinnota, wara t-trattament ta' KTF irrestawra l-espressjoni intraċellulari ta 'CAT, GPx-1, u GSH. L-analiżi RT-PCR indikat li t-trattament b'H2O2 irregola l-espressjoni tal-mRNA ta' CAT u GPx-1; madankollu, it-trattament KTF irrestawra l-espressjonijiet ta 'CAT u GPx-1 mRNA fiĊelloli MES23.5. Immunoblot b'antikorpi speċifiċi kkonferma wkoll li l-espressjoni tal-proteini CAT u GPx-1 fiĊelloli MES23.5kienu regolati 'l isfel minn trattament H2O2, u t-trattament KTF kien kapaċi jerġa' jġib l-espressjoni tal-proteini CAT u GPx-1. Barra minn hekk, espressjoni mRNA taossidattivil-proteina HO{0}} li tirreaġixxi għall-istress ġiet inibita wkoll wara t-trattament bl-H2O2 u mbagħad ġiet restawrata billi ssegwi t-trattament KTF. L-immunoblotting wera wkoll li l-espressjoni tal-proteina HO-1 kienet irregolata sew minn H2O2, iżda t-trattament b'KTF kien kapaċi jerġa' jġib l-espressjoni tal-proteina HO-1. Kif mistenni, l-ogħla konċentrazzjoni KTF użata fl-investigazzjoni tagħna għandha l-aħjar effett fuq ir-restawr tal-espressjoni CAT, GPx -1, GSH, u HO -1 (Figuri (Figuri55 u u6).6). Meħuda flimkien, ir-riżultati miksuba juru li t-trattament KTF irregola b'mod sinifikanti s-sottostrati antiossidanti fiċ-ċelloli MES23.3 ittrattati H2O2-.

Figura 5 Effett ta' KTF fuq il-livell ta' CAT intraċellulari, GPx-1, u GSH f'H2O2-indottaĊelloli MES23.5. Il-livell ta' attività ta' CAT intraċellulari, GPx{{0}}, u GSH ġew imkejla bl-użu ta' kit ELISA. Id-dejta hija espressa bħala medja ± SD fi tliet esperimenti indipendenti. #P <0.05 meta="" mqabbel="" mal-grupp="" ta'="" kontroll.="" ∗p="">< 0.05="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" tat-trattament="">

Figura 6 KTF żiedet l-espressjoni tal-proteina u tal-mRNA tal-enzimi antiossidanti f'H2O2-indottaĊelloli MES23.5. (a) L-espressjonijiet tal-proteini ta 'HO{{0}}, CAT, u GPx-1 ġew determinati b'Western blot u kkwantifikati f'(c). (b) L-espressjonijiet tal-mRNA ta 'HO-1, CAT, u GPx-1 ġew determinati b'RT-PCR u kkwantifikati f'(d). Id-dejta hija espressa bħala medja ± SD fi tliet esperimenti indipendenti. #P <0.05 meta="" mqabbel="" mal-grupp="" ta'="" kontroll.="" ∗p="">< 0.05="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" tat-trattament="" h2o2="">

4. Diskussjoni

Bħala komponent importanti tas-sistema redox, ROS għandu rwol importanti fir-regolazzjoni tal-funzjoni taċ-ċelluli. Livelli moderati ta 'ROS jistgħu jiffunzjonaw bħala sinjali biex jippromwovu l-proliferazzjoni u s-sopravivenza taċ-ċelluli. Taħt kundizzjonijiet fiżjoloġiċi, il-bilanċ bejn il-ġenerazzjoni u l-eliminazzjoni ta 'ROS iżomm il-funzjoni xierqa tas-sistema ta' sinjalazzjoni sensittiva għar-redox. L-omeostażi redox tista’ tiġi mfixkla b’żieda fil-produzzjoni ta’ ROS jew tnaqqis fil-kapaċità ta’ tneħħija ta’ ROS, li twassal għal żieda ġenerali fil-ossidattivstress [17, 18], sussegwentement jikkawża ħsara irriversibbli ta 'struttura intraċellulari u jinduċi mewt taċ-ċelluli.

Konsum għoli ta 'O2 fil-moħħ iwassal għall-akkumulazzjoni ta' ROS; għalhekk, newroni huma partikolarment vulnerabbli għall-attakk taossidattivstress. Investigazzjonijiet wara l-mewt urew perossidazzjoni tal-lipidi uħsara ossidattivagħaċ-ċelloli tal-moħħ f'pazjenti b'PD [19]. Studji li qed jikbru jikkonfermaw danħsara ossidattivagħandu rwol kritiku fil-patoġenesi ta 'mard deġenerattiv tan-newroni, bħal AD, PD, HD, u ALS [18, 20]. Fl-istudju preżenti, ġie osservat telf sinifikanti tal-vijabbiltà taċ-ċelluli f'ċelluli newronali dopaminerġiċi MES23.5 wara espożizzjoni għal 50 μM H2O2 għal 12-il siegħa, 25 μM H2O2 għal 24 siegħa, jew 12.5 μM H2O2 għal 48 siegħa. Kif muri mill-osservazzjoni tal-morfoloġija, iċ-ċelloli esposti 12-il siegħa sa 150 μM H2O2 urew ħsara ossidattiva tipika inkluż vacuoles membranużi multipli fiċ-ċitoplasma, tfixkil tar-retikulu endoplasmiku, u mitokondrion, u kondensazzjoni ta 'euchromatin fin-nukleu taċ-ċellula.

Skont it-teorija tal-mediċina Ċiniża, id-defiċjenza tal-kliewihuwa l-mekkaniżmu patoloġiku ewlieni tal-PD. Jitsaħħaħ il-kliewihija strateġija importanti fit-trattament tal-PD. Fl-istudju preżenti, sibna li l-tradizzjonalitonifikazzjoni tal-kliewiformula KTF, li tikkonsisti f'Cistanche, Epimedii, u Polygonatum sibiricum, tejbet b'mod sinifikanti l-vijabbiltà taċ-ċelluli u l-espressjoni ta' TH ta' H2O2-trattatĊelloli MES23.5.

L-apoptosi taċ-ċelluli hija mod ta' mewt taċ-ċelluli programmata fuq stimoli varji li jattivaw mogħdijiet estrinsiċi jew intrinsiċi. Cysteinyl aspartate-proteases speċifiċi (caspases) huma kkonservati ħafna f'organiżmi multiċellulari u jiffunzjonaw bħala regolaturi ċentrali ta 'apoptosi. L-attivazzjoni tal-caspases hija l-assi prinċipali tal-avvenimenti kollha tal-apoptosi. Fost dawk il-caspases, caspase 3 ġie identifikat bħala medjatur ewlieni u indikatur tal-apoptosi taċ-ċelluli. Bħal caspases oħra, caspase 3 normalment teżisti bħala proenzyme inattiva (procaspase 3). Wara l-ipproċessar proteolitiku, se jipproduċi żewġ subunitajiet li jistgħu jiddimerizzaw biex jiffurmaw caspase 3 attiv, u sussegwentement tevoka ħafna mill-bidliet bijokimiċi u bijofiżiċi biex jinduċu l-apoptożi taċ-ċelluli [21]. L-istudju preżenti tagħna wera li t-trattament H2O2 irregola b'mod sinifikanti l-kaspase 3, iżda din it-tendenza ġiet imreġġa 'lura bit-trattament KTF f'Ċelloli MES23.5, li jindika li KTF naqqas l-apoptosi taċ-ċelluli taċ-ċelloli MES23.5 ittrattati H2O2-.

Enżimi antiossidanti, bħal superoxide dismutase (SOD), CAT, GPx-1, GSH, u HO-1, huma mekkaniżmi ta' difiża importanti taċ-ċelloli kontraossidattivstress. Bħala enzima antiossidativa, SOD jista' jittrasforma s-radikali tas-superossidu f'perossidu tal-idroġenu li sussegwentement ġie kkonvertit f'H2O minn CAT u GPx [22]. GSH huwa wkoll antiossidant importanti. Il-konverżjoni katalitika ta 'glutathione mnaqqas (GSH) għal glutathione ossidizzat (GSSG) minn GPx hija ta' għajnuna biex tikkonverti H2O2 għal O2. Ġie rrappurtat li l-attività tal-antiossidant naqset fil-ġrieden tal-mudell PD [23-25]. Għalhekk, mediċini li jirregolaw l-espressjoni ta 'antiossidanti enżimatiċi jistgħu jservu bħala kandidati potenzjali għat-trattament tal-PD. Id-dejta tagħna wriet li t-trattament bl-H2O2 irażżan CAT, GPx, GSH, u HO-1 fiĊelloli MES23.5, filwaqt li t-trattament tal-KTF f'konċentrazzjonijiet differenti rrestawra b'mod effettiv l-espressjoni ta 'CAT, GPx, GSH, u HO-1.

Bħala konklużjoni, is-sejbiet tagħna juru dik il-ħaxix tradizzjonali Ċiniżtonifikazzjoni tal-kliewiformulazzjoni, li tikkonsisti minn Cistanche, Epimedii, u Polygonatum sibiricum, għandha kapaċità antiossidativa qawwija u effetti newroprotettivi sinifikanti. Dan l-istudju jipprovdi ħjiel għall-iżvilupp tal-tonifikazzjoni tal-kliewiformulazzjoni bħala aġent terapewtiku potenzjali biex jipprevjeni u jikkura l-marda ta’ Parkinson.

Il-Formula Tonifikanti tal-Kliewi tista 'tipproteġi l-Ħsara Ossidattiva liċ-Ċelloli MES23.5

Rikonoxximenti

Dan ix-xogħol kien appoġġjat mill-Fond Xjentifiku tal-Kummissjoni Nazzjonali dwar is-Saħħa u l-Ippjanar tal-Familja tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina (WKJ-FJ-38), Chen Keji Development Fund Of Integrative Medicine (CKJ2014012), u Fund Of Key Disciplinary ( X2014010-terremot). L-awturi jesprimu r-ringrazzjament sinċier tagħhom lil Miss Xin Pan għall-għajnuna utli tagħha.

Interessi Kompetituri

L-awturi jiddikjaraw li r-riċerka twettqet fin-nuqqas ta' kwalunkwe relazzjoni kummerċjali jew finanzjarja li tista' tiġi interpretata bħala kunflitt ta' interessi potenzjali.

Kontribuzzjonijiet ta' l-Awturi

Yihui Xu u Wei Lin jaqsmu l-istess kontribuzzjoni għall-artiklu. Chuanshan Xu huwa l-awtur korrispondenti.

Referenzi

1. Fahn S., Cohen G. L-ipoteżi tal-istress ossidant fil-marda ta 'Parkinson: evidenza li tappoġġjaha. Annali tan-Nuroloġija. 1992;32(6):804–812. doi: 10.1002/ana.410320616. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

2. Jenner P., Olanow CWOssidattivstress u l-patoġenesi tal-marda ta' Parkinson. Newroloġija. 1996;47(suppliment 3): S161–S170. doi: 10.1212/wnl.47.6_suppl_3.161s. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

3. Akaneya Y., Takahashi M., Hatanaka H. Involviment ta 'radikali ħielsa f'MPP flimkien ma' newrotossiċità kontra newroni dopaminerġiċi tal-firien fil-kultura. Ittri tan-Newroxjenza. 1995;193(1):53–56. doi: 10.1016/0304-3940(95)11668-M. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

4. Emerit J., Ideat M., Bricaire F. Mard newrodeġenerattiv uossidattivstress. Bijomediċina u Farmakoterapija. 2004;58(1):39–46. doi: 10.1016/j.biopha.2003.11.004. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

5. Kummissjoni tal-Farmakopea Ċiniża. Farmakopea tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina. Vol. 1. Beijing, iċ-Ċina: Dar tal-Pubblikazzjoni Medika tan-Nies; 2010. [Google Scholar]

6. Cai J., Tian Y., Lin R., Chen X., Liu Z., Xie J. Effetti protettivi ta 'tonifikazzjoni tal-kliewiPreparazzjoni veġetali Ċiniża fuq newroni substantia nigra f'mudell tal-ġurdien tal-marda ta 'Parkinson. Riċerka dwar ir-Riġenerazzjoni newrali. 2012;7(6):413–420. [Artiklu bla PMC] [PubMed] [Google Scholar]

7. Li WW, Yang R., Cai DF Effetti protettivi ta 'Cistanche glycosides totali fuq newron dopaminerġiku f'substance nigra ta' ġrieden mudell tal-marda ta 'Parkinson. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 2008;28(3):248–251. [PubMed] [Google Scholar]

8. Wei W., Jing C. Analiżi tal-mudell TCM u l-formula għall-marda ta 'Parkinson. Ġurnal tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża. 2013;54(20):1778–1782. [Google Scholar]

9. Tian Y., Cai J., Chen X. Protezzjoni tatonifikazzjoni tal-kliewiĦwawar Ċiniża fuq in-newroni strijatali nigra ġrieden bil-marda ta 'Parkinson. Ġurnal Ċiniż tal-Ġerontoloġija. 2011;31(3):440–443. [Google Scholar]

10. Lin SG, Ye SF, Huang JM, et al. Kif mediċini Ċiniżi li tonifika l-kliewijinibixxi l-apoptożi tan-newroni dopaminerġiċi? Riċerka dwar ir-Riġenerazzjoni newrali. 2013;8(30):2820–2826. doi: 10.3969/j.issn.1673-5374.2013.30.004. [Artiklu bla PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

11. Wang H., Li W.-W., Cai D.-F., Yang R. Effett protettiv ta 'estratti ta' Cistanche fuq korriment indott MPP plus tal-mudell taċ-ċelluli tal-marda ta 'Parkinson. Ġurnal tal-Mediċina Integrattiva Ċiniża. 2007;5(4):407–411. doi: 10.3736/jcim20070409. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

12. Geng X., Tian X., Tu P., Pu X. Effetti newroprotettivi ta 'echinacoside fil-mudell MPTP tal-ġurdien tal-marda ta' Parkinson. Ġurnal Ewropew tal-Farmakoloġija. 2007;564(1–3):66–74. doi: 10.1016/j.ejphar.2007.01.084. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

13. Tian X.-F., Pu X.-P. Phenylethanoid glycosides minn Cistanches salsa jinibixxi l-apoptosi indotta minn jone tal-1-metil-4-phenylpyridinium fin-newroni. Ġurnal ta 'Ethnopharmacology. 2005;97(1):59–63. doi: 10.1016/j.jep.2004.10.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

14. Geng X., Song L., Pu X., Tu P. Effetti newroprotettivi ta' phenylethanoid glycosides minn Cistanches salsa kontra 1-metil-4-phenyl-1,2,3,{{ 6}}tossiċità dopaminerġika indotta minn tetrahydropyridine (MPTP) fil-ġrieden C57. Bullettin Bijoloġiku u Farmaċewtiku. 2004;27(6):797–801. doi: 10.1248/bpb.27.797. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

15. Wong HS, Ko KM Herba Cistanches jistimula ċ-ċikliżmu redox tal-glutathione ċellulari minn speċi reattivi ta 'ossiġnu ġġenerati minn respirazzjoni mitokondrijali f'kardjomijoċiti H9c2. Bijoloġija Farmaċewtika. 2013;51(1):64–73. doi: 10.3109/13880209.2012.710242. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

16. Wing Sze SC, Tong Y., Ng TB, Yin Cheng CL, Cheung HP Herba Epimedii: anti-ossidattivproprjetajiet u l-implikazzjonijiet mediċi tagħha. Molekuli. 2010;15(11):7861–7870. doi: 10.3390/molecules15117861. [Artiklu bla PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

17. Trachootham D., Lu W., Ogasawara MA, Valle NR-D., Huang P. Redox regulation of cell survival. Antiossidanti u Sinjali Redox. 2008;10(8):1343–1374. doi: 10.1089/ars.2007.1957. [Artiklu bla PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

18. Moore DJ, West AB, Dawson VL, Dawson TM Patofiżjoloġija molekulari tal-marda ta 'Parkinson. Reviżjoni Annwali tan-Newroxjenza. 2005;28:57–87. doi: 10.1146/annurev.neuro.28.061604.135718. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

19. Sian J., Dexter DT, Lees AJ, et al. Alterazzjonijiet fil-livelli ta 'glutathione fil-marda ta' Parkinson u disturbi newrodeġenerattivi oħra li jaffettwaw il-gangli bażali. Annali tan-Nuroloġija. 1994;36(3):348–355. doi: 10.1002/ana.410360305. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

20. Halliwell B., Gutteridge JMC Rwol ta 'radikali ħielsa fil-mard tal-bniedem: ħarsa ġenerali. Metodi fl-Enzymology. 1990;186:1–85. [PubMed] [Google Scholar]

21. Venderova K., Park DS Mewt taċ-ċelluli programmat fil-marda ta' Parkinson. Cold Spring Harbour Perspettivi fil-Mediċina. 2012;2(8) doi: 10.1101/cshperspect.a009365.a009365 [artiklu PMC ħieles] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

22. Fridovich I. Aspetti fundamentali ta 'speċi ta' ossiġnu reattiv, jew x'inhi l-kwistjoni bl-ossiġnu? Annali ta 'l-Akkademja tax-Xjenzi ta' New York.... 1999;893:13–18. doi: 10.1111/j.1749-6632.1999.tb07814.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

23. Xiong Q., Kadota S., Tani T., Namba T. Effetti antiossidanti ta 'phenylethanoids minn Cistanche deserticola. Bullettin Bijoloġiku u Farmaċewtiku. 1996;19(12):1580–1585. doi: 10.1248/bpb.19.1580. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

24. Koppula S., Kumar H., More SV, Lim H.-W., Hong S.-M., Choi D.-K. Aġġornamenti reċenti fir-regolamentazzjoni redox u l-effetti ta 'tneħħija tar-radikali ħielsa minn prodotti veġetali f'mudelli sperimentali tal-marda ta' Parkinson. Molekuli. 2012;17(10):11391–11420. doi: 10.3390/molecules171011391. [Artiklu bla PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

25. Fang Z., Wang Y. Effett ta 'isatin fuq l-attivitajiet ta' antioxidase fil-ġrieden mudell PD. Ispiżerija taċ-Ċina. 2008;19(22):1696–1697. [Google Scholar]