Jujube Polysaccharides Anemija mitigata fil-firien b'mard tal-kliewi kronika

Kuntatt: emily.li@wecistanche.com

Shiying Huang, et al

Astratt

Jujube polysaccharides (JP) huma wieħed mill-glikani attivi li ġejjin mill-ikel fil-frott tad-dieta ta 'Ziziphus jujuba, li ġie kkunsidrat għat-trattament ta' defiċjenza tad-demm. F'dan l-istudju, akronikakliewimard(CKD) mudell tal-firien intuża biex jevalwa l-effett ta 'JP u l-mekkaniżmu tiegħu fuq anemija assoċjata ma' CKD. Fil-firien CKD, it-trattament JP tjieb b'mod sinifikantikliewifunzjoni, kliewipatoloġiċikorriment, u parametri ematoloġiċi, inkluż żieda fiċ-ċelluli ħomor tad-demm, l-emoglobina, l-ematokrit u l-għadd tal-plejtlits. Barra minn hekk, ir-riżultati tal-metabolomika mmirati LC-MS/MS urew li JP ippromwova r-rilaxx ta 'aċidi grassi ta' katina qasira (SCFAs) fil-firien CKD. Barra minn hekk, JP alterna l-livell tal-eritropojetin fis-serum (EPO), l-mRNA tal-EPO tal-kliewi, ukliewiProteina EPO permezz tas-sinjalar HIF. B'mod kollettiv, dawn ir-riżultati jipprovdu evidenza li l-effett ta 'JP fuq anemija assoċjata ma' CKD jista 'jkun involut fir-regolamentazzjoni tar-rilaxx ta' SCFAs u l-produzzjoni ta 'eritropojetin, li jappoġġaw aktar żvilupp ta' JP bħala supplimenti tal-ikel fit-trattament tal-anemija assoċjata ma 'CKD.

Kliem ewlieni: Jujube polysaccharidesKronikakliewi mardAnemija Eritropojetin Fattur li jinduċi l-ipoksja- Aċidi grassi b'katina qasira

Ikklikkja hawn biex tikseb aktar informazzjoni dwar Cistanche

1. Introduzzjoni

Kronikakliewi mard(CKD) huwa definit bħala sindromu kliniku ta 'anormalitajiet strutturali renali jew indebolimenti funzjonali u qed isir dejjem aktar piż tas-saħħa pubblika madwar id-dinja (Webster, Nagler, Morton, & Masson, 2017). L-anemija tal-kliewi hija fost l-aktar kumplikazzjonijiet komuni tas-CKD li jikkontribwixxu għaż-żieda fir-riskju tal-mewt (Locatelli et al., 2019). L-insuffiċjenza tal-produzzjoni tal-eritropojetin (EPO) hija fattur ewlieni rikonoxxut tal-anemija f'CKD (Pappa, Dounousi, Duni, & Katopodis, 2015). EPO huwa prodott fil-fwied ukliewi, li hija essenzjali għall-produzzjoni ta 'eritroċiti (Lappin & Lee, 2019). Taħt kundizzjonijiet iposiċi, il-fattur li jinduċi l-ipoksja (HIF) jista’ jattiva l-espressjoni ta’ EPO (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). L-immirar tal-HIF biex jinduċi l-produzzjoni tal-EPO għalhekk ġie kkunsidrat bħala strateġija terapewtika ġdida biex tittratta l-anemija assoċjata ma' CKD.

Jujube huwa l-frott ta 'Ziziphus jujuba Mill. (Rhamnaceae), magħrufa wkoll bħala data Ċiniża. Jujube għandu użu tradizzjonali twil li jkopri eluf ta 'snin bħala ħxejjex mediċinali u suppliment tal-ikel. Jujube jintuża bħala suppliment tas-saħħa għal nies li għandhom ematoġeniċi jew sofrew minn malnutrizzjoni kronika. Jujube polysaccharides (JP), komponent li jinħall fl-ilma kompost bi proporzjonijiet differenti ta 'monosaccharide u aċidu uroniku (Ji, Hou, Yan, Shi, & Liu, 2020), huwa wieħed mill-ingredjenti attivi fi ħdan jujube (Ji et al., 2017). ), li ġie aċċettat tajjeb biex juri effett epatoprotettiv u attività immunomodulatorja u jsaħħaħ il-funzjoni tal-barriera intestinali (Liu et al., 2015, Yue et al., 2015). Tabilħaqq, JP huwa wkoll komunement meqjus li għandu effetti potenzjali fuq l-anemija. Madankollu, il-mekkaniżmu molekulari ta 'JP fit-trattament tal-anemija għadu inqas magħruf.

F'dawn l-aħħar snin, il-metabolomika ntużat ħafna biex tifhem fatturi potenzjali li jikkontribwixxu għall-progressjoni tal-marda. Metabolomika mmirata ntużat ħafna fl-identifikazzjoni ta 'markaturi molekulari ta' mard uman kumpless bħal CKD. Indoxyl sulfate (IS) u p-cresyl sulfate (PCS) ġew ivverifikati li huma l-bijomarkatur tal-progressjoni CKD (Meijers & Evenepoel, 2011), u żieda fil-grad ta 'trimethylamine-N-oxide (TMAO) tista' twassal direttament għal fibrożi tubulointerstizjali renali u disfunzjoni. (Tang et al., 2015). L-aċidi grassi b'katina qasira (SCFAs), il-metaboliti dipendenti fuq il-mikrobi tal-musrana, huma s-sottostrati tal-enerġija bil-kapaċità li jaffettwaw diversi proċessi fiżjoloġiċi (LeBlanc et al., 2017), u t-tnaqqis tal-SCFAs ġie rrappurtat li jikkontribwixxi għall-progressjoni tas-CKD (Koh, De Vader, Kovatcheva-Datchary, & B¨ ackhed, 2016, Wang et al., 2019). Barra minn hekk, SCFAs setgħu jipproteġu l-istruttura tal-kliewi mill-ħsara permezz tal-inibizzjoni tal-istress ossidattiv (Li, Ma, & Fu, 2017). Fl-istess ħin, l-SCFAs instabu li juru effett ta 'benefiċċju fuq l-assorbiment tal-ħadid u jirregolaw l-espressjoni tal-ġeni tal-globin embrijoniku/fetali, li jinduċi l-eritropojesi u jikkoreġi l-anemija (Tako, Glahn, Knez, & Stangoulis, 2014). Il-mekkaniżmu ta' SCFAs fl-anemija tal-kliewi madankollu għadu meħtieġ li jiġi eluċidat.

F'dan l-istudju, aħna ipoteżi li JP jista 'jirregola r-rilaxx ta' SCFAs u jistimula l-produzzjoni ta 'EPO medjata minn HIF, li r-riżultat tagħha huwa li tikkoreġi l-anemija renali. Hawnhekk, se ninvestigaw l-effett ta 'JP fit-titjib tal-anemija tal-kliewi f'firien CKD indotti minn nephrectomized 5/6, inklużi funzjonijiet renali u parametri ematoloġiċi. Approċċ ta' metabolomika mmirat li juża LC-MS/MS huwa żviluppat biex jiddetermina tmien SCFAs inklużi aċidu aċetiku, aċidu propanoiku, aċidu isobutyric, aċidu butiriku, 2-aċidu metil butiriku, aċidu isovaleriku, aċidu valeriku, u aċidu hexanoic fl-ippurgar u kampjuni tal-kliewi, u l-livelli ta 'SCFAs immirati huma evalwati f'firien b'saħħithom u CKD. Barra minn hekk, l-involviment tas-sinjalar HIF fil-firien ittrattati b'JP huwa żvelat ukoll.

Fig. 1. Kromatografija tipika GC-MS ta 'JP. (A) Formuli strutturali tal-monosaccharide wara derivatizzazzjoni tal-aċetat tal-aldononitrile; (B) Il-profili rappreżentattivi tal-kromatografija tal-joni mħallta GC–MS (MIC) ta 'taħlita ta' monosaccharides standard u monosaccharides idrolizzati JP. Il-qċaċet fil-profili tal-kromatografija kienu jikkorrispondu mal-markatur kimiku muri f'(A): 1. rhamnose, 2. arabinose, 3. fucose, 4. xylose, 5. mannose, 6. glucose, 7. galactose, 8. inositol (ISTD) ).

2. Materjali u metodi

2.1. Preparazzjoni ta 'jujube polysaccharide

Il-frott ta 'Z. jujuba inxtara minn Shenzhen Huahui Pharmaceutical Co., Ltd Il-materjali ġew awtentikati minn Dr Jianping Chen skont il-Farmakopea tar-Repubblika Popolari taċ-Ċina 2015 Edition. Il-kampjuni tal-vawċers inżammu fl-Isptar tal-Mediċina Tradizzjonali Ċiniża ta 'Shenzhen bin-numru 18100601.

Il-JP mhux raffinat ġie estratt mill-jujube kif deskritt qabel, b'modifiki minuri (Ji et al., 2020). Fil-qosor, jujubes ġew inkubati b'10 vol ta 'ilma (v/w) f'banju ta' l-ilma f'80 ◦C għal 3 sigħat u estratti 3 darbiet. Wara l-filtrazzjoni, għaqqad il-filtrati u ikkondensa din il-kombinazzjoni f'evaporatur li jdur taħt vakwu kkontrollat. Is-soluzzjoni konċentrat ġiet preċipitata aktar billi żżid erba 'darbiet ta' etanol (v/v) f'4 ◦C għal 12-il siegħa. Il-preċipitat inġabar biċ-ċentrifugazzjoni u ġie mnixxef taħt pressjoni mnaqqsa sa nixfa biex jinkiseb il-JP mhux raffinat. Il-purità ta 'JP ġiet iddeterminata li tkun 80 fil-mija bl-użu tal-kalorimetrija.

2.2. Karatterizzazzjoni tal-kompożizzjoni tal-monosaccharide tal-jujube polysaccharide

Sistema Shimadzu GC–MS (Shimadzu GC–MS TQ8040 interfaced ma' Shimadzu GC 2010 plus) mgħammra b'sors EI, kolonna kapillari SH-Rxi-5Sil MS (30 m × 0.25 mm ID, 0.25 µm ħxuna tal-film, Shimadzu) intuża biex jiddetermina l-monosaccharides idrolizzati ta 'derivazzjoni bi proporzjon maqsum ta' 10:1. It-temperatura tal-injezzjoni, is-sors tal-jone, u l-interface kienu 250 ◦C, 200 ◦C, u 250 ◦C. It-temperatura inizjali tal-kolonna inżammet f'120 ◦C għal 1 min, imbagħad imqassma f'15 ◦C/min sa 160 ◦C u miżmuma għal 4 min, 2 ◦C/min sa 165 ◦C u miżmuma għal 2 min, 20 ◦C /

min sa 195 ◦C, 5 ◦C/min sa 250 ◦C, u miżmuma għal 3 min. Ir-rata tal-fluss tal-gass trasportatur tal-elju nżammet f'46 ċm/s u 2 μL ta 'kull kampjun ġew injettati fl-istrument. L-analiti ġew ikkwantifikati fil-mod ta 'monitoraġġ tal-jone magħżul (SIM), il-jone fil-mira: rhamnose (m/z 129.00), arabinose (m/z 115.00), fucose (m/ z 103.00), xylose (m/z 115.00), mannose (m/z 115.00), glukosju (m/z 115.00 ), galattożju (m/z 115.00), inositol (m/z 126.00). L-istandards tal-monosaccharides ġew elenkati kif ġej: L ( plus )-arabinose (1506–200202), fucose (112014–201902), D-xylose (111508–201605), D-glucose (110833–201908), rhamnose (1011683–101683) ), galactose (100226–201807), D-mannose (140651–201805) inxtraw mill-Istituti Nazzjonali għall-Kontroll tal-Ikel u d-Droga. Inositol inkiseb minn Sigma (I7508-50 g).

Il-JP estratt (10 mg) ġie idrolizzat f'monosaccharides b'10 mL ta' 2 mol/L aċidu trifluworoacetiku (TFA) f'105 ◦C għal 3 sigħat, u l-monosaccharides idrolizzati minn JP ġew ikkonċentrati u maħsula taħt pressjoni mnaqqsa f'60 ◦C sa neħħi TFA, u r-resiedi ġie rikostitwit b'2 mL ilma. Miżjud 250 µL ta' 20 mg/mL hydroxylamine hydrochloride/pyridine soluzzjoni f'100 µL soluzzjoni ta' monosaccharides idrolizzati u miżmuma f'banju ta' l-ilma ta' 90 ◦C għal 45 min. U mbagħad 250 µL anidride aċetiku ġie miżjud u miżmum f'banju ta 'l-ilma ta' 90 ◦C għal 45 minuta oħra. Fl-aħħar tar-reazzjoni, it-taħlita ġiet estratta b'1 mL ta 'cyclohexane 5 darbiet, u s-saff ta' cyclohexane kien ikkonċentrat għal 1 mL. Injettat 1 µL supernatant f'GC–MS għall-analiżi (Li & Shi, 2013).

2.3. Annimali

L-esperimenti kollha saru bi protokolli approvati mill-Kumitat Istituzzjonali għall-Użu tal-Kura tal-Annimali tal-Università ta 'Guangzhou tal-Mediċina Ċiniża. Il-firien Sprague–Dawley, irġiel u nisa, li jiżnu 180–220 g, inkisbu miċ-Ċentru tal-Annimali tal-Laboratorju Mediku ta’ Guangdong (Foshan, iċ-Ċina, Permess Nru. SCXK (Yue) 2008–0002) u nżammu fi speċifika ħielsa minn patoġeni (SPF). ) faċilità għall-annimali taħt ċiklu ta' 12-il siegħa dawl-dlam, bl-ikel u l-ilma liberament.

Biex indott insuffiċjenza renali, 5/6 nefrectomija saret skont id-deskrizzjoni preċedenti (Chen et al., 2019). L-operazzjoni kirurġika kollha saret taħt anestesija b'10 fil-mija chloral hydrate. Il-grupp tal-operazzjoni finta (n=6) ħa l-istess passi biex jiftaħ il-kavità addominali u espona l-kilwa. Il-firien nefrectomy 5/6 kienu maqsuma b'mod każwali f'żewġ gruppi. Firien mingħajr trattament (grupp CKD, n=6), u firien li jirċievu JP (grupp CKD flimkien ma 'JP, n=6) ​​oralment permezz ta' gavage f'doża ta '1.2 g/kg/d. Wara 90 jum ta 'operazzjoni, bdew 90 jum ta' amministrazzjoni. Id-90 jum kien il-ħin finali ta 'amministrazzjoni ta' JP lill-firien, u wara 24 siegħa l-annimali ġew sagrifikati billi jittieħed demm mill-aorta addominali, u l-kampjuni ta 'awrina, ħmieġ, serum u kliewi inġabru minn kull far. Il-kampjuni kollha ġew maħżuna f'-80 ◦C qabel aktar analiżi.

2.4. Analiżi bijokimika

Wara l-istruzzjonijiet tal-manifattur, in-nitroġenu tal-urea tad-demm (BUN) u l-krejatinina fis-serum (Scr) ġew imkejla permezz ta 'kit ta' skoperta ta 'serum ta' kreatinina u kit ta 'skoperta BUN (WAKO, Ginza, Ġappun), u l-proteina urinarja ġiet imkejla minn kit Elisa (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institution, Nanjing, iċ-Ċina). Iċ-ċelluli ħomor tad-demm (RBC), l-emoglobina (Hb), l-ematokrit (HCT) u l-għadd tal-plejtlits (PLT) ġew analizzati mis-Sistemi tal-Ematoloġija (Siemens 2021i, Erlangen, il-Ġermanja) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur.

2.5. Eżami istoloġiku

Aċidu perjodiku-Schiff (PAS) u t-tbajja 'Masson intużaw biex jevalwaw il-ħsara patoloġika renali, fosthom, it-tbajja' PAS kienet impjegata biex tiżvela l-atrofija tubulari renali u ż-żona glomerulari, u t-tbajja' Masson kienet għall-fibrożi interstizjali renali (Xie et al. , 2020). Il-metodu ta 'analiżi kwantitattiva sar skont studji preċedenti (Chen et al., 2019). Fil-qosor, il-punteġġ ta 'atrofija tubulari fit-tbajja' PAS ġie definit kif ġej: 1. tubuli atrofiku wieħed rari; 2. diversi gruppi ta 'tubuli atrofiċi; 3. atrofija massiva. Iż-żona glomerulari kienet imkejla bis-softwer ZEN 3.1 (Axio Scope A1, ZEISS, Jena, il-Ġermanja). Iż-żona fibrotika fit-tbajja ta' Masson ġiet imkejla bl-użu ta' softwer Image J (NIH, Bethesda, MD, USA). Mill-inqas għaxar oqsma mikroskopiċi (200 ×) ta 'firien 6 għal kull grupp inqabdu b'mod każwali biex ikejlu l-punteġġ tal-atrofija, iż-żona glomerulari u l-erja fibrotika, b'mill-inqas glomerulus wieħed f'kull qasam mikroskopiku.

2.6. Analiżi immunoistokimika

Is-sezzjoni tal-paraffin renali (4 μm) minn kull kampjun kienet deidrazzjoni gradwali bi xylene darbtejn, u etanol gradjent (100-95-90-80-70 fil-mija), l-antiġen ġie rkuprat b'buffer tal-aċidu ċitriku (pH 6.0). ) għal 30 min, imblukkat minn 3 fil-mija perossidu tal-idroġenu għal 10 min u serum tal-mogħoż għal 30 min f'temperatura tal-kamra. Is-sezzjonijiet tat-tessut ġew inkubati separatament b'antikorp primarju HIF-1 (Bioss, bs{-0737R, 1: 500, Lot: BA01279129), HIF-2 (Bioss, bs-1447 R, 1: 500, Lott: BJ2044786) f'4 ◦C għal 10 h u antikorp sekondarju tal-mogħoż anti-fenek konjugat HRP (Abcam, ab6712, 1:1000) f'temperatura tal-kamra għal 30 min, DAB (diaminobezid in) intuża biex tiskopri l-attività HRP, in-nukleu kien counterstained minn ematossilin. il. L-immunoistokimika ġiet analizzata taħt oqsma mikroskopiċi 400 × minn kull grupp u ffissat l-iskala bar=20 μm minn Axio Scope A1, ZEISS, Jena, il-Ġermanja. In-nukleari kien tbajja blu minn ematossilin u l-immunopożittività ta 'DAB kienet kannella, it-tbajja' DAB aktar profonda tfisser immunoistokimika aktar b'saħħitha pożittiva.

2.7. Sejbien tal-EPO

Il-kontenut tal-EPO fis-serum ġie skopert mill-kit ELISA (Abcam, ab274398), u l-esperiment kien qed jirreferi għall-protokoll tal-kit ELISA. Kif fil-qosor, miżjud cocktail ta 'antikorpi EPO fil-kampjun u inkubat għal siegħa. wara l-inkubazzjoni, aħsel kull bir bil-wash buffer 3 darbiet, żied TMB mat-tieni inkubat għal 15-il minuta u waqqaf ir-reazzjoni.

L-mRNA totali tal-kliewi ġie estratt minn tessut tal-kliewi ffriżat bl-użu ta 'Trizol u tradott l-mRNA għal cDNA. Il-PCR f'ħin reali twettqet b'Maxima SYBR Green/ROX qPCR Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA USA, K0223) skont il-protokoll tal-manifatturi. Is-sinjal aħdar SYBR ġie akkwistat u mkejjel minn ABI Prism 7300 Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA). Il-primers kienu: 5′-CCG TCC CAG ATA CCA AAG TC-3′ u 5′-ACC CGA AGC AGT GAA GTG-3′ għall-firien EPO (214 bps, NM_017001. 2); 5′- GTC GGT GTG AAC GGA TTT G-3′ u 5′-TCC CAT TCT CAG CCT TGA C- 3′ għal GAPDH (181 bps, NM_017008.3), il- housekeeping gens bħala kontroll intern fil-każijiet kollha. U l-kwantifikazzjoni relattiva tal-espressjoni tal-ġeni ġiet ikkalkulata bil-metodu normalizzat tal-espressjoni tal-ġeni (2− ΔΔCT).

Ammonti ugwali ta 'proteina ta' lisati tal-kortiċi tal-kliewi ġew mgħobbija u separati b'10 fil-mija ġel SDS u mbagħad trasferiti għal membrani tan-nitrocellulose. Wara li ġew imblukkati f'5 fil-mija ħalib mhux grass għal 2 sigħat f'temperatura tal-kamra, il-membrani ġew inkubati b'antikorp primarju f'4 ◦C matul il-lejl. Imbagħad il-membrani ġew inkubati b'HRP (horseradish peroxidase)-konjugat kontra l-ġurdien IgG (Life Technologies) f'temperatura tal-kamra għal 45 min. L-attività HRP ġiet viżwalizzata bl-użu ta' Clarity Western ECL Substrate u analizzata mis-sistema tal-immaġini Tanon. F'dan l-istudju ntuża l-antikorp primarju li ġej: EPO monoklonali (B- 4) minn ġrieden (Santa Cruz Biotechnology, sc-5290, dilwizzjoni 1/500), -actin monoklonali mill-ġrieden (Teknoloġija tas-sinjalar taċ-ċelluli, 8H10D10, 1/1000 dilwizzjoni).

2.8. Analiżi ta' aċidi grassi b'katina qasira

Sistema Shimadzu UHPLC-LCMS/MS (Shimadzu LC-MS 8045 interfaced ma' Shimadzu LC-20AD) mgħammra b'sors ESI.

Separazzjonijiet kromatografiċi twettqu fuq kolonna Shim-pack GIST C18 (2.1 × 100 mm, 2 μm), bl-użu ta' {{10}}.1 fil-mija aċidu formiku fl-ilma ( solvent A) u aċetonitrile (solvent B) b'rata ta 'fluss ta' 0.3 mL/min b'eluzzjoni gradjent: 0-9 min, 25-30 fil-mija B; 9–11 min, 30–40 fil-mija B; 11-20 min, 40-50 fil-mija B; 20-20.1 min, 50-100 fil-mija B; 20.1–23 min, 100 fil-mija B; 23.1 min–25 fil-mija B għall-ekwilibrazzjoni mill-ġdid. It-temperatura tal-kolonna kienet 35 ◦C, u l-awtosampler inżamm f'4 ◦C waqt l-analiżi, 1 μL ta 'kull kampjun ġie injettat fl-istrument. L-iskoperta ta 'l-analite saret fil-modalità ta' monitoraġġ ta 'reazzjoni multipla (MRM), operata fil-modalità ta' jone pożittiv. Il-parametri MS: Gass nebulizzanti li jnixxi: 3.0 L/min; Tnixxif tal-gass li jnixxi: 10 L/min; Tisħin Gass li jnixxi: 10 L/min; Temperatura DL: 250 ◦C; temperatura tal-interface: 300 ◦C; Blokk tat-tisħin: 400 ◦C. It-tranżizzjonijiet MRM u l-enerġija tal-ħabta (CE) ġew magħżula u ottimizzati b'infużjoni diretta ta 'kull derivattiv standard. It-tranżizzjonijiet tal-MRM tal-kwantitajiet tal-analiti ġew miġbura fil-qosor fit-Tabella S1.

SCFAs tal-ħmieġ: Miżjud 100 μL ta '50 fil-mija acetonitrile fi 3 mg tal-ħmieġ lajofilizzat u vortexed għal 2 min. Imbagħad it-taħlita ġiet ċentrifugata f'12000 rpm għal 10 min f'4 ◦C u pipetta s-supernatant.

SCFAs tal-kliewi: Peżati 100 mg ta 'tessut tal-kliewi u vortex fuq is-silġ b'4 darbiet salina normali (100 mg/400 μL) biex jipprepara l-omoġenat tat-tessut. Miżjud 3 darbiet metanol kiesaħ f'300 μL omoġenat tat-tessut u vortexed għal 2 min, imbagħad it-taħlita ġiet ċentrifugata f'12000 rpm għal 10 min f'4 ◦C u pipetta s-supernatant. Is-supernatant ġie mnixxef b'N2 u rikostitwit b'100 μL 50 fil-mija aċetonitrile.

Miżjud 500 mmol/L N-(3-dimethyl aminopropyl)-Ń -ethyl carbodiimide hydrochloride (EDC, Aladdin, Shanghai, China), 50 mmol/L 3H-[1,2,3]-Triazolo[4, 5-b] piridina-3-ol (HOAT, Aladdin, Shanghai, iċ-Ċina) u 50 mg/mL 12C-Dansylhydrazine ( 12C-DnsHz, J&K, Beijing, iċ-Ċina) f'20 μL tal-estrazzjoni tal-kampjun f' sekwenza bl-istess volum. L-EDC u l-HOAT ġew ippreparati b'aċidu ethanesulfonic frisk 500 mmol/L 2-(N-Morpholino) (MES, Macklin, Shanghai, iċ-Ċina). Wara li tkun inkubata f'20 ◦C għal 90 min, 20 μL 50 mmol/L CuCl2 (Macklin, Shanghai, Ċina) ġiet miżjuda mat-taħlita biex titfi r-reazzjoni tad-derivalizzazzjoni f'40 ◦C għal 30 min (Zhao & Li, 2018). Fl-aħħar tad-derivalizzazzjoni, it-taħlita kienet 10 darbiet dilwita b'25 fil-mija acetonitrile. Qabel l-analiżi, 100 μL supernatant tħallat ma 'soluzzjoni standard interna ta' 100 μL. It-tikketta 13C-DnsHz intużat bħala standards interni (ISTD1-8) skont l-istess reazzjoni ta' derivatizzazzjoni. L-istandard SCFAs: aċidu aċetiku (AA, A116173), aċidu propanoiku (PA, P110446), aċidu isobutyric (IBA, I103524), aċidu butiriku (BA, B110438), 2-aċidu butiriku tal-metil (2- BA, M107377), aċidu isovaleriku (IVA, I108280), aċidu valeriku (VA, V108271), aċidu hexanoic (HA, H103632) ġew fornuti minn Aladdin (Shanghai, iċ-Ċina).

2.9. Analiżi statistika

Id-dejta ta' kull grupp kienet espressa bħala medja ± devjazzjoni standard (SD). Is-sinifikat statistiku fost il-gruppi twettqet permezz ta 'ANOVA one-way u analiżi post hoc bit-test Student-Newman-Keuls (SNK) jew it-test T3 ta' Dunnett. Il-valur ta' P < 0.05="" kien="" ikkunsidrat="" statistikament="" sinifikanti.="" id-dejta="" kollha="" twettqet="" bl-użu="" ta’="" softwer="" tal-istatistika="" spss="" (verżjoni="" 22.0,="" spss="" inc.,="" chicago,="" il,="">

3. Riżultati

3.1. JP tejbet il-funzjoni tal-kliewi tal-firien CKD

Il-monosaccharide ta' JP kien ikkaratterizzat qabel it-trattament fuq l-annimali. Il-JP użat fl-istudju preżenti kien magħmul minn seba 'monosaccharides, jiġifieri, rhamnose (1.62 fil-mija), arabinose (15.79 fil-mija), fucose (0.21 fil-mija), xylose (4.56 fil-mija), mannose (3. 00 fil-mija), glukożju (73.44 fil-mija), u galattożju (4.99 fil-mija) (Fig. 1). Il-metodu ta 'analiżi tagħna ġie vvalidat permezz ta' linearità, preċiżjoni, ripetibbiltà, stabbiltà u rkupru (Tabelli S2–S3). L-analiti ġew ikkonfermati li kienu stabbli f'temperatura tal-kamra għal 24 siegħa. Ir-rendiment ta 'JP għandu jkun ogħla minn 8.63 fil-mija, u l-purità għandha tkun mhux inqas minn 77.16 fil-mija. L-analiżi kimika msemmija qabel ta 'JP serviet bħala approċċ ta' kontroll tal-kwalità biex tiġi żgurata r-riproduċibbiltà tal-istudji ta 'hawn taħt fuq l-annimali.

Scr, BUN, u proteina urinarja kienu l-aktar rappreżentattivi tal-funzjonijiet tal-kliewi. Scr, BUN, u livelli ta' proteina urinarja fil-firien CKD kienu ogħla b'mod sinifikanti minn dak tal-grupp sham (P <{{0}}.01). wara="" 90="" jum="" ta="" 'trattament="" b'jp,="" il-livelli="" ta'="" scr,="" bun,="" u="" proteina="" urinarja="" naqsu="" meta="" mqabbla="" mal-grupp="" ckd="" (p=""><0.01) (fig.="">

3.2. JP tejjeb il-ħsara patoloġika renali fil-firien CKD

Il-piż tal-kliewi tal-lemin kollu għall-grupp sham u l-kliewi tal-lemin tal-fdal għal CKD u CKD flimkien mal-grupp JP intużaw għall-valutazzjoni tal-morfoloġija tal-kliewi skont il-piż tal-kliewi (KW) u l-piż tal-kliewi/piż tal-ġisem (KW/BW). Fi tmiem l-esperimenti, il-KW u l-KW/BW tal-grupp CKD żdiedu meta mqabbla mal-grupp sham (kollha P <{{0}}.05). fil-mudell="" ckd="" indott="" minn="" nefrectomija="" 5/6,="" it-tnaqqis="" tal-attivitajiet="" tal-proteinasi="" renali="" kkawża="" tkabbir="" tal-kliewi="" kumpensatorju,="" kumpaniji="" b'ipertrofija="" renali="" (morton="" &="" griffiths,="" 1985),="" u="" tagħna="" kkonfermat="" din="" id-dikjarazzjoni.="" wara="" t-trattament="" jp,="" kw="" naqas="" b'mod="" sinifikanti="" (p=""><0.05) u="" għalaq="" għal="" grupp="" ta="" 'sham="" (p="" ˃="" 0.05);="" filwaqt="" li="" l-kw/bw="" naqas="" ftit="" (p="" ˃="" 0.05).="" (fig.="">

Fig. 2. JP ipproteġiet il-funzjoni tal-kliewi fil-firien CKD. Il-livell ta 'Scr (A), BUN (B) u proteina urinarja (C) fi grupp differenti. (D) piż tal-kliewi, (E) KW/BW. Id-dejta ġiet ippreżentata bħala l-medja ± SD, n=6 għal kull grupp (**P < 0.01="" meta="" mqabbla="" mal-grupp="" finta;="" #p="">< 0.05="" ,="" ##p=""><0.01 meta="" mqabbel="" mal-grupp="">

Fil-grupp CKD, tubulari tal-kliewi intwera atrofija massiva meta mqabbel mal-grupp sham (P <{{0}}.01), u="" ż-żona="" tal-glomerulus="" u="" l-fibrożi="" interstizjali="" renali="" kienu="" kważi="" darbtejn="" aktar="" minn="" dik="" tal-grupp="" sham="" fl-analiżi="" kwantitattiva="" (p=""><0.01). wara="" t-trattament="" jp,="" il-punteġġ="" tal-atrofija="" tubulari="" naqas="" bi="" kważi="" darbtejn="" (p="">< 0.01),="" iż-żona="" tal-glomerulus="" ġiet="" kważi="" rkuprata="" għal="" grupp="" finta="" (p="">< 0.01),="" u="" l-fibrożi="" interstizjali="" renali="" naqset="" bi="" terz="" (p="">< 0.01)="" hekk="" kif="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" ckd="" (fig.="">

Fig. 3. JP ipproteġiet l-istruttura tal-kliewi fil-firien CKD. (A) Tbajja tal-PAS. (B) Tbajja ta' Masson. (C) Punteġġ ta 'atrofija tubulari. (D) Żona glomerulari (E) Żona fibrotika. L-immaġini kollha huma ppreżentati b'ingrandiment identiku, 200×, bar ta' skala=100 μm. Id-dejta ġiet ippreżentata bħala l-medja ± SD, n=6 għal kull grupp (**P <0.01 meta="" mqabbel="" mal-grupp="" sham;="" #p="">< 0.05,="" ##p="">< 0.01="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" ckd="">

3.3. JP modula l-parametri ematoloġiċi fil-firien CKD

Għal parametri ematoloġiċi analiżi bijokimika, ġew imkejla RBC, Hb, HCT, u PLT. Fil-firien CKD, il-livell ta’ RBC niżel minn 9.06 għal 7.20 × 1012 /L, Hb minn 15.28 għal 13.22 g/dL, HCT minn 47.1 għal 40.4 fil-mija, u PLT żdiedu minn 1012 sa 1526 × 109 /L meta mqabbla ma 'grupp sham (P <0.01), li="" indika="" li="" s-sinjali="" ta'="" anemija="" kienu="" osservati="" fil-firien="" ckd.="" il-livelli="" mnaqqsa="" ta="" 'rbc,="" hb,="" hct,="" u="" plt="" fil-firien="" ckd="" ittrattati="" b'jps="" ġew="" restawrati="" (p=""><0.01) (fig.="">

Fig. 4. JP rijabilitat il-parametri ematoloġiċi fil-firien CKD. Il-livell ta 'PLT (A), RBC (B), Hb (C), HCT (D). Id-dejta ġiet ippreżentata bħala l-medja ± SD, n=6 għal kull grupp (**P < 0.01="" meta="" mqabbla="" mal-grupp="" finta;="" #p="">< 0.05="" ,="" ##p=""><0.01 meta="" mqabbel="" mal-grupp="">

3.4. JP stimula l-espressjoni tal-EPO

Meta mqabbel mal-grupp sham, il-livell tal-EPO fis-serum u l-ammont tal-mRNA tal-EPO tal-kliewi naqsu b'mod sinifikanti fil-firien tal-anemija CKD (P <0.01). analiżi="" western="" blotting="" wriet="" li="" l-livell="" tal-proteina="" epo="" ippreżenta="" ftit="" tnaqqis="" fil-grupp="" ckd="" mingħajr="" differenza="" sinifikanti.="" wara="" t-trattament="" jp,="" il-livell="" tal-epo="" fis-serum,="" l-mrna="" tal-epo="" tal-kliewi="" u="" l-proteina="" ġew="" imtejba="" b'mod="" sinifikanti="" meta="" mqabbla="" mal-grupp="" ckd="" (p=""><0.01 jew="" p=""><0.05) (fig.="">

Fil-kortiċi tal-kliewi, HIF-1 kien prodott prinċipalment minn ċelluli epiteljali tubulari renali, HIF-2 kien espress prinċipalment f'ċelloli endoteljali u fibroblasti interstizjali renali (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). L-analiżi tal-kimika immunohisto wriet li, bħal għall-HIF-1, fil-firien CKD, it-tubulari kienu mtebbgħin aktar b'saħħithom mill-grupp sham. Wara t-trattament JP, it-tubulari tal-kliewi kellu tbajja ta 'żona aktar b'saħħitha u akbar meta mqabbla mal-grupp CKD kif il-vleġġa ħamra indikata f'Fig. 5E. HIF-2 wera immunoistokimika relattivament dgħajfa pożittiva fl-interstizjali renali fil-grupp Sham. Fil-grupp CKD, HIF-2 wera immunoistokimika pożittiva. Wara t-trattament JP, HIF-2 wera immunoistokimika aktar b'saħħitha meta mqabbla mal-grupp CKD (Fig. 5F).

Fig. 5. JP stimula l-espressjoni EPO. (A) Kontenut tas-serum EPO. (B)KilwamRNA relattiv tal-EPO. GAPDH kien ikkunsidrat bħala ġene tad-dar. (C) L-immaġini rappreżentattivi tal-western blot tal-espressjoni tal-proteina EPO. (D) Analiżi densitometrika tal-EPO. (E) Immunoistokimika ta' HIF{{0}}. (F) Immunoistokimika ta 'HIF- 2 normalizzata għal kontenut ta' -actin. L-immaġini ta' l-immunoistokimika huma ppreżentati b'ingrandiment identiku, 400×, bar tal-iskala=20 μm. In-nukleari kien tbajja blu minn ematossilin u l-immunopożittività ta 'DAB kienet kannella, it-tbajja' DAB aktar profonda tfisser immunoistokimika aktar b'saħħitha pożittiva. Il-vleġġa ħamra tipponta lejn immunoistokimika pożittiva. Id-dejta ġiet ippreżentata bħala l-mezzi ± SD, n=6 għal kull grupp (*P < 0.05="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" sham;="" #p="">< 0.05,="" ##p="">< 0.01="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="">

3.5. JP indotta r-rilaxx ta 'SCFAs

Ġie żviluppat approċċ ta 'metabolomics immirat ibbażat fuq LC-MS biex jikkwantifika r-rilaxx ta' tmien SCFAs f'kampjuni tal-ħmieġ. Il-metodu stabbilit ġie vvalidat billi vvaluta l-linearità, is-sensittività, il-preċiżjoni, l-effett tal-matriċi, l-eżattezza u l-istabbiltà. Kampjuni ta 'kontroll tal-kwalità ta' konċentrazzjoni baxxa, medja u għolja (LQC, QMC, HQC) għal sensittività, preċiżjoni, preċiżjoni u validazzjoni tal-istabbiltà, intgħażlu skont l-iktar punti ta 'konċentrazzjoni baxxi, medji u ogħla tal-kurva standard tal-matriċi, u r-riżultati ġew murija fit-Tabelli S4–S6. L-analiti ġew ikkonfermati li huma stabbli f'4 ◦C għal 48 siegħa. Il-kromatogramma LC-MS/MS ta 'SCFAs intweriet fil-Fig. 6.

Fig. 6. Kromatografija UHPLC-MS/MS ta 'SCFAs. (A) In-naħa ta 'fuq kienet l-ekwazzjoni kimika ta' derivatizzazzjoni ta 'SCFAs; l-taħt kienet formula strutturali SCFAs wara derivatization dansylhydrazine; (B) Il-Kromatogramma UHPLC/MRM-MS tal-istandards tat-taħlita u l-kampjun tal-ħmieġ, il-qċaċet kromatografiċi f'(B) kienu rwieġbu għall-markatur kimiku muri f'(A):1. 12C-aċidu aċetiku; 2. 13C-aċidu aċetiku (ISTD1); 3. Aċidu 12C-propanoic; 4. Aċidu 13C-propanoic (ISTD2); 5. Aċidu butiriku 12C-iso; 6. 12C-aċidu butiriku; 7. Aċidu 13C-isobutyric (ISTD3); 8. 13C-aċidu butiriku (ISTD4); 9. 12C-2-aċidu metilbutiriku; 10. 12C-aċidu isovaleriku; 11. 12C aċidu valeriku; 12. 13C-2-aċidu metilbutiriku (ISTD5); 13. 13C-aċidu isovaleriku (ISTD6); 14. 13C-aċidu valeriku (ISTD7); 15. Aċidu 12C-hexanoic; 16. Aċidu 13C-hexanoic (ISTD8).

Fir-rigward tal-kampjun tal-ħmieġ, fil-grupp CKD, il-livelli ta 'AA u PA naqsu b'mod notevoli kważi 4 darbiet u 5 darbiet meta mqabbla ma' grupp ta 'sham (P <0.01); filwaqt="" li="" wara="" t-trattament="" jp,="" ammonti="" ta="" 'aa="" u="" pa="" ġew="" restawrati="" lura="" għal="" 4/5="" tal-grupp="" sham="" (p=""><{{10}}.01). bl-istess="" mod,="" il-livelli="" ta="" 'ba="" u="" va="" naqsu="" b'mod="" qawwi="" kważi="" 30="" darbiet="" u="" 4="" darbiet="" fil-grupp="" ckd="" meta="" mqabbla="" ma'="" grupp="" sham="" (p=""><0.01). it-trattament="" b'jp="" wera="" xejra="" ta'="" żieda="" iżda="" mhux="" titjib="" sinifikanti.="" il-kontenut="" ta'="" iba,="" iva,="" u="" 2-ba="" ma="" werax="" bidla="" notevoli="" bejn="" ckd="" u="" sham="" group.="" wara="" t-trattament="" jp,="" il-livell="" iba,="" iva,="" u="" 2-ba="" żdied="" (p="">< 0.01).="" madankollu,="" ha="" ma="" wrietx="" bidla="" ovvja="" fost="" it-tliet="" gruppi="" (fig.="" 7a).="" barra="" minn="" hekk,="" fir-rigward="" tat-tessut="" tal-kliewi,="" fil-grupp="" ckd,="" l-ammonti="" ta="" 'tmien="" scfas="" kollha="" naqsu="" b'mod="" sinifikanti="" (p=""><0.01), filwaqt="" li="" wara="" t-trattament="" jp,="" il-livelli="" ta'="" scfas="" żdiedu="" ħlief="" għal="" ba="" u="" ha="" (p=""><0.01 jew="" p="">< 0.5).="" ba="" żdiedet="" kemmxejn="" mingħajr="" b'mod="" sinifikanti,="" u="" ha="" ma="" wrietx="" bidla="" wara="" t-trattament="" jp="" (fig.="">

Fig. 7. Kontenut ta' SCFAs fi grupp differenti. (A) SCFAs fekali. (B) SCFAs tal-kliewi. Id-dejta ġiet ippreżentata bħala l-mezzi ± SD, n=6 għal kull grupp (**P < 0.01="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" finti;="" ##p="">< 0.="" 01,="" #p=""><0.05 meta="" mqabbel="" mal-grupp="">

4. Diskussjoni

Fil-mudell preżenti 5/6 nefrectomy far CKD, ilkliewifunzjoniindikaturi (Scr, BUN, u proteina ta 'l-awrina) żdiedu b'mod sinifikanti, l-ipertrofija tal-kliewi fdal u l-ħsara patoloġika renali dehru, akkumpanjati minn parametri ematoloġiċi mibdula. Din id-dejta kienet konformi ma’ studji preċedenti (Garrido et al., 2015, Morton & Griffiths, 1985). L-indikaturi ta 'hawn fuq urew li l-firien CKD-anemija indotti min-nefrectomija 5/6 ġew stabbiliti b'suċċess u setgħu jiġu vverifikati għall-effett ta' benefiċċju ta 'JP fit-trattament tal-firien CKD-anemija. Bil-kliewifunzjonikompliet iddeterjorat, l-anemija ġiet rikonoxxuta bħala kumplikazzjoni opportunistika magħrufa ta' CKD, li kellha impatt negattiv fuq il-kwalità tal-ħajja tal-pazjenti (Locatelli, Fishbane, Block, & Macdougall, 2017). Il-fehim tal-fatturi ta' riskju relatati mal-progress tal-anemija tal-kliewi se jgħin biex jiġu żviluppati approċċi terapewtiċi. Illum il-ġurnata, ir-rabta bejn il-mard u l-mikrobijota metabolika tal-musrana ġibdet dejjem aktar attenzjoni, filwaqt li r-relazzjoni bejn l-SCFAs u l-anemija renali għadha inqas magħrufa. SCFAs, prinċipalment metabolizzati minn Clostridium, Coprococcus, u Bacteroides (Koh et al., 2016), qed jimmiraw riċetturi speċifiċi marbuta mal-membrana, li għandhom rwol importanti fiż-żamma tal-bilanċ tal-ambjent tal-imsaren u s-saħħa tal-ġisem kollu. L-SCFAs diġà ġew ippruvati li għandhom relazzjoni inseparabbli ma 'CKD, u l-livelli ta' aċidu aċetiku, aċidu propjoniku, aċidu butiriku tnaqqsu f'CKD (Wang et al., 2019). Fil-firien CKD indotti mill-adenine, l-abbundanza u d-diversità tal-mikrobijota tal-musrana nbidlu b'mod sinifikanti, il-kumpaniji naqqsu l-livell ta 'aċidu propanoiku, aċidu butiriku u aċidu valeriku (Lakshmanan, Al, Ali, & Terranegra, 2021). Ibbażat fuq l-istudju preċedenti tagħna, is-sekwenzjar ta '16S rDNA wera li d-disbiożi tal-mikrobijota tal-musrana kienet murija f'firien CKD indotti minn nephrectomized 5/6 meta mqabbla mal-grupp sham. Xi wħud mill-SCFAs li jipproduċu ġeneri speċjalment aċidu butiriku minn Clostridium, Coprococcus wettaq differenzi fil-firien CKD (Zheng et al., 2020). F'konformità ma 'dan, ir-riżultati tagħna wrew li ammonti ta' aċidu aċetiku, aċidu propjoniku, aċidu butiriku, aċidu valeriku naqsu b'madwar 60 fil-mija, 80 fil-mija, 85 fil-mija, u 60 fil-mija fil-firien CKD, li jindika li, it-tnaqqis ta 'SCFAs jikkorrispondi. bl-iżbilanċ ambjentali tal-imsaren. Ta 'min jinnota, id-disturb fl-ambjent tal-imsaren indott minn CKD wassal għall-metaboliżmu tal-mikrobijota tal-musrana anormali (Feng et al., 2019). Barra minn hekk, sibna li, fil-firien CKD-anemija, tmien tipi ta 'livelli ta' SCFAs naqsu. Pereżempju, l-anormalità tal-prodotti finali metaboliċi, jiġifieri SCFAs tista' tirriżulta mill-progressjoni tas-CKD.

Polisakkaridi, wieħed mill-ingredjenti attivi nstabu f'diversi ħxejjex aromatiċi, bħal Dioscoreae Rhizoma, Schisandra Chinensis, Astragali Radix, u Jujubae Fructus. Il-polisakkaridi jistgħu jiġu ffermentati u degradati mill-mikrobijota tal-musrana. Bħala riżultat, il-polisakkaridi huma ppreżentati bħala sottostrat għall-mikrobijota tal-musrana biex jimmetabolizzaw f'SCFAs jew huma kkunsidrati li għandhom effett simili għal prebijotiku biex itejjbu l-kompożizzjoni tal-mikrobijota tal-musrana biex jiffaċilitaw il-produzzjoni tal-SCFAs (Cai et al., 2019). F'dan l-istudju, is-sejbiet tagħna wrew li l-polisakkaridi minn jujube stimulaw ir-rilaxx tal-mikrobijota tal-musrana ta 'SCFAs, bħal aċidu aċetiku, aċidu propanoiku, aċidu isobutyric, 2-methyl butyric acid fil-firien CKD. Barra minn hekk, wara t-trattament JP, il-livell ta 'SCFAs fil-kliewi tal-firien CKD-anemija tjieb, u t-tendenza tal-bidla kienet konsistenti mal-kampjun tal-ippurgar. Ibbażat fuq riċerka eżistenti, ir-relazzjoni bejn SCFAs u CKD kienet saret ċara gradwalment. Per eżempju, l-aċidu aċetiku ġie rrappurtat li jimmodula s-sistema immuni u jtejjeb l-akutkliewikorrimentbilli jinibixxi s-sinjalar NADPH oxidase fiċ-ċelloli T (Al-Harbi et al., 2018). L-aċidu propanoiku ġie ppruvat li jipprevjeni l-progressjoni ta 'CKD indotta minn adenine permezz ta' riċettur ta 'aċidu xaħmi ħieles 2 (FFA2) u FFA3 (Mikami et al., 2020). Għalhekk, iddeduċejna li l-livell SCFA tal-kliewi li jerġa 'jakkwista kien ta' benefiċċju għal kilwa morda. Ġie rrappurtat li JP żied id-diversità tal-mikrobijota tal-musrana u żied l-abbundanza relattiva tal-mikrobijota attiva SCFAs (Bacteroides) fil-ġrieden tal-kanċer tal-kolorektum (Ji et al., 2020). Barra minn hekk, JP żied il-konċentrazzjoni ta 'SCFAs totali f'kampjuni tal-ħmieġ (Ji et al., 2019). Għalhekk, aħna ddeduċejna li JP jista 'jistimula l-produzzjoni ta' SCFAs biex jinkiseb l-iskop li jittardja l-progressjoni tas-CKD. JP jista' jkun ukoll sottostrat tal-metaboliżmu għall-mikrobijota dominanti ta' SCFAs biex jistimula l-produzzjoni ta' SCFAs f'CKD, jew komponent simili għal prebijotiċi biex jirrestawra l-ambjent tal-imsaren, speċjalment id-diversità ta 'mikrobijota dominanti ta' SCFAs, u jippromwovi aktar ir-rilaxx ta 'SCFAs, sabiex jipprevjeni l-progressjoni tas-CKD.

B'mod ġenerali, SCFAs (mingħajr karbonju minn 6) b'piż molekulari żgħir u polarità kimika għolja huma diffiċli biex jiġu analizzati direttament permezz ta 'approċċi kromatografiċi. Derivatizzazzjoni kimika tikkettata b'isotopi ta 'strateġija ta' SCFAs tista 'ttejjeb is-sensittività ta' l-istrument u tnaqqas l-iżbalji ta 'analiżi, li pprovdiet strateġija utli għad-determinazzjoni ta' SCFAs fl-analiżi LC-MS/MS (Higashi & Ogawa, 2016). Riċentement, approċċi tikkettati b'dansyl hydrazine intużaw b'mod sodisfaċenti fl-iskoperta ta 'metaboliti fil-plażma tal-bniedem fil-mira li fihom l-aċidu carboxylic (Chen & Zhang, 2020). B'appoġġ għal dan, f'dan l-istudju, żviluppajna aktar derivatizzazzjoni kimika bbażata fuq l-approċċ LC-MS/MS għad-determinazzjoni ta '8 SCFAs fil-ħmieġ tal-firien. L-SCFAs huma prodotti mill-mikrobijota tal-musrana, u kważi 10 fil-mija SCFAs huma eliminati permezz tal-ħmieġ (Boets et al., 2015). Għalhekk, analiżi tal-kampjun tal-ippurgar ta 'SCFAs tista' tirrifletti l-bidliet fl-ambjent tal-imsaren direttament u għandha aktar referenzjali fl-analiżi konġunta multi-omika bejn SCFAs u mikrobijota tal-musrana. Notevolment, il-validazzjoni tal-instabilità, sibna li l-SCFAs tikkettati b'dansyl hydrazine kienu instabbli f'temperatura tal-kamra, u l-intensità tagħhom fuq l-ispettru tal-massa wriet tendenza 'l isfel maż-żmien, iżda tista' tibqa 'stabbli għal 48 siegħa f'4 ◦C. Għalhekk, wara d-derivalizzazzjoni tal-SCFAs, l-analiti għandhom jinżammu f'4 ◦C qabel l-analiżi.

Fi stadji avvanzati ta 'CKD 4-5, defiċjenza tal-produzzjoni tal-EPO tirrestrinġi l-eritropojesi, li tikkontribwixxi għall-aktar fattur kritiku fl-iżvilupp tal-anemija renali (Sakashita, Tanaka, & Nangaku, 2019). It-trattament ta' rutina b'aġenti li jistimulaw l-eritropojesi (ESAs) għall-anemija huwa ssuġġerit minn linji gwida tal-prattika klinika. Madankollu, is-sigurtà tal-ESAs li hija assoċjata ma 'riskju akbar ta' mewt u l-avvenimenti kardjovaskulari għandha tkun ikkonċernata (Thavarajah & Choi, 2019). F'pazjenti bl-anemija tal-kliewi, l-espressjoni tal-EPO kellha tkun konsistenti jew elevata b'mod viżibbli meta mqabbla mal-korpi b'saħħithom (Babitt & Lin, 2012). Fi stadju bikri, il-livell tal-EPO ippreżenta t-tendenza tal-aġġornament, filwaqt li fl-istadju tard, il-livell tal-EPO wera xejra 'l isfel meta mqabbel mal-istadju bikri, saħansitra aktar baxx min-normal (Panjeta, Tahirovi´c, Sofi's, ´ Cori's, & Derviˇsevi). ´c, 2017). Li jikkorrispondu għal esperimenti preċedenti (Chen et al., 2019; Wang et al., 2020), ir-riżultati tagħna indikaw li l-livell EPO fis-serum naqas fil-firien CKD-anemija. Aħna rispettivament skoprejna l-mRNA tal-EPO tal-kliewi u l-livell tal-proteina fil-firien CKD, u l-livell tal-proteina tal-EPO tal-kliewi naqas kemmxejn meta mqabbel mal-grupp ta 'sham filwaqt li l-ammont tal-mRNA tal-EPO tal-kliewi ġie degradat u l-grad tiegħu kien akbar mil-livell tal-EPO fis-serum. Il-kliewi hija s-sors primarju tas-sinteżi tal-EPO fl-adulti u l-pazjenti ERSD.kliewigħadu jżomm il-kapaċità li jipproduċi eritropojetin (Bernhardt et al., 2010). Biex tikkoreġi l-livelli endoġeni tal-EPO fis-serum u tadatta għall-anemija tal-kliewi, il-produzzjoni tal-EPO tal-kliewi ġiet attivata, għalkemmkliewikorrimentespressjoni mRNA tal-EPO mnaqqsa (Sch¨ odel & Ratcliffe, 2019). Wara t-trattament JP, il-livell tal-EPO fis-serum żdied, kif ukoll il-livelli tal-mRNA tal-EPO tal-kliewi u tal-proteini ġew it-tnejn imtejba. Fl-istudju preċedenti tagħna, JP jista 'jistimula l-attività ta' traskrizzjoni HRE u saħħaħ il-ġene EPO (Chen et al., 2014). Għalhekk, aħna spekulajna li JP jista 'jirkupra l-livell EPO tas-serum tal-firien CKD għal anemija tal-kliewi regolata, li tista' tiġi kkontribwita mill-espressjoni tal-ġene EPO tal-kliewi stimulata fil-livell tal-mRNA.

Fil-kortiċi, HIF-1 instab prinċipalment fit-tubulari, u HIF-2 fl-interstizju renali. Minħabba li l-EPO huwa prodott prinċipalment minn fibroblasti li fihom HIF-2 huwa ko-lokat, dan jappoġġja li HIF-2 jista' jkun responsabbli għar-regolazzjoni tal-produzzjoni tal-EPO (Maxwell, 2003). Fl-istudju tagħna, sibna li HIF-1 u HIF-2 jistgħu jiġu attivati ​​minn CKD, u t-trattament b'JP jista' jistimula l-attività HIF-1 u HIF{-2 meta mqabbel mal-firien CKD . Kien ippruvat li l-HIF-2 għandu rwol ewlieni fir-regolamentazzjoni tal-produzzjoni tal-EPO (Kapitsinou et al., 2010), filwaqt li r-regolazzjoni 'l fuq tal-HIF-1 jista' jkollha effett ta' protezzjoni renali fil-kliewi (Jiang et al., 2010). al., 2020), li indirettament itejjeb il-produzzjoni tal-EPO. Il-produzzjoni tal-EPO tal-kliewi kienet l-ewwel irregolata fil-livell tal-mRNA, taħt anemija jew ipoksja, l-espressjoni tal-mRNA tal-EPO tista 'tiżdied bl-istimulazzjoni tal-proteina HIF. Preċedentement, ir-riċerka farmakoloġika wriet li jujube stimulat l-espressjoni EPO permezz tar-regolamentazzjoni tal-livell tal-proteina HIF fil-mudell ċellulari (Chen et al., 2014, Lam et al., 2016). Għalhekk, aħna ddeduċejna li JP jista 'jirregola l-espressjoni tal-mRNA tal-EPO permezz tal-proteina HIF biex jinkiseb l-iskop li ttaffi l-anemija tal-kliewi.

Barra minn hekk, abbażi tar-riżultati attwali, nispekulaw li t-tnaqqis fl-SCFAs jista 'jkollu rwoli kruċjali fl-espressjoni tal-EPO medjata minn HIF, li tikkontribwixxi għall-anemija CKD. Inkonsistenti ma 'dan, ġie muri li l-livell miżjud ta' aċidu aċetiku kien ta 'benefiċċju għall-aċetilazzjoni HIF-2 u l-ġenerazzjoni tal-kumpless tal-proteina-HIF 2 li torbot CREB, u indotta aktar espressjoni ta' EPO (Xu et al., 2014). L-aċidu propioniku attenwa t-tfixkil mitokondrijali, l-apoptożi tal-hippocampal, u l-iżbilanċi newroloġiċi permezz tal-mogħdija HIF-1 /ERK (Cheng et al., 2019). Barra minn hekk, l-aċidu butiriku nstab li jistabbilizza HIF-1, ġeni attivi fil-mira tal-HIF fuq iċ-ċelluli tal-kolon,s u ttaffi r-rispons infjammatorju tal-kolon (Kelly et al., 2015). Fl-istudju tagħna, sibna li l-livelli ta 'aċidu aċetiku, aċidu propanoiku u aċidu butiriku naqsu b'mod sinifikanti akkumpanjati minn firien CKD ta' espressjoni anormali tal-proteina HIF, li indika li l-istabbiltà ta 'HIF- tista' tkun relatata ma 'tnaqqis SCFAs, u SCFAs jista' jkollhom l-effett tal-istabbilizzazzjoni tal-HIF biex tirregola l-espressjoni tal-EPO.

5. Konklużjonijiet

Bħala konklużjoni, aħna ppruvajna li JP tejbet is-CKD u l-anemija assoċjata tagħha, li l-mekkaniżmu tagħha kien involut fir-regolamentazzjoni tar-rilaxx ta 'SCFAs u l-produzzjoni tal-EPO. U JP jista 'jkun l-ingredjent bijoattiv tal-ġujube għat-trattament tal-anemija. Dawn is-sejbiet jistgħu jipprovdu evidenza għal aktar żvilupp ta' JP bħala supplimenti tal-ikel għat-trattament tal-anemija assoċjata ma' CKD.

Dikjarazzjoni etika

L-esperimenti kollha fuq l-annimali fir-riċerka tagħna saru bi protokolli approvati mill-Kumitat tal-Etika tal-Università ta 'Guangzhou tal-Mediċina Ċiniża u skont il-Linja Gwida tal-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa għall-kura u l-użu tal-annimali tal-laboratorju (Pubblikazzjonijiet NIH Nru 80-23, riveduta fl-1996). M'hemm l-ebda ksur tal-linji gwida ta 'hawn fuq fir-riċerka tagħna.

Rikonoxximenti

Dan ix-xogħol huwa appoġġjat mill-Fondazzjoni tax-Xjenza Naturali tal-Provinċja ta 'Guangdong (2018A030313305), Fondazzjoni tax-Xjenza Naturali taċ-Ċina (81804052, 81973577, u 82004248), Proġett tal-Pjan tax-Xjenza u Teknoloġija ta' Shenzhen (JSGG20191129102216637 u Z51804 Provinċja Ċiniża tal-Mediċina Tradizzjonali tal-Provinċja ta 'Guangdong Z504S820), 20201320).

Referenzi

Al-Harbi, NO, Nadeem, A., Ahmad, SF, Alotaibi, MR, AlAsmari, AF, Alanazi, WA, … Ibrahim, KE (2018). L-aċidu xaħmi ta 'katina qasira, l-aċetat itejjeb akut ikkaġunat minn sepsiskliewikorrimentpermezz ta' inibizzjoni ta' sinjalazzjoni ta' NADPH oxidase fiċ-ċelloli T. Immunofarmakoloġija Internazzjonali, 58, 24-31.
Babitt, JL, & Lin, HY (2012). Mekkaniżmi ta 'anemija f'CKD. Ġurnal tas-Soċjetà Amerikana tan-Nefroloġija, 23(10), 1631–1634.
Bernhardt, WM, Wiesener, MS, Scigalla, P., Chou, J., Schmieder, RE, Günzler, V., …Eckardt, KU (2010). L-inibizzjoni tal-prolyl hydroxylases iżżid il-produzzjoni tal-eritropojetin fl-ESRD. Ġurnal tas-Soċjetà Amerikana tan-Nefroloġija, 21(12),
2151–2156.
Boets, E., Deroover, L., Houben, E., Vermeulen, K., Gomand, SV, Delcour, JA, … Verbeke, K. (2015). Kwantifikazzjoni tal-produzzjoni ta' aċidu xaħmi ta' katina qasira tal-kolon in vivo mill-inulina. Nutrijenti, 7(11), 8916–8929.

Cai, Y., Liu, W., Lin, Y., Zhang, S., Zou, B., Xiao, D., … Xie, Z. (2019). Il-polisakkaridi komposti jtejbu l-kolite sperimentali billi jimmodulaw il-kompożizzjoni u l-funzjoni tal-mikrobijota tal-musrana. Ġurnal tal-Gastroenteroloġija u l-Epatoloġija, 34(9),1554–1562.

Chen, G., & Zhang, Q. (2020). Kwantifikazzjoni simultanja ta 'aċidi grassi ħielsa u acylcarnitines f'kampjuni ta' plażma bl-użu ta 'tikkettjar ta' dansylhydrazine u kromatografija likwida–spettrometrija tal-massa quadrupole triple. Analitiċi u BijoanalitiċiKimika, 412(12), 2841–2849.

Chen, J., Lam, CT, Kong, AY, Zhang, WL, Zhan, JY, Bi, CW, … Tsim, KW (2014). L-estratt tal-frott Ziziphus jujuba (jujube) jinduċi espressjoni ta' eritropojetin permezz ta' fattur li jinduċi l-ipoksja -1 f'ċelloli Hep3B kkultivati. PlantaMedica, 80(17), 1622–1627.

Chen, J., Wang, F., Huang, S., Liu, X., Li, Z., Qi, A., … Li, S. (2019). Id-decoction Jian-Pi-Yi-Shen ittaffi l-anemija tal-kliewi f'5/6 firien nefrectomizzati: Produzzjoni ta 'eritropojetin permezz ta' sinjalazzjoni ta 'fattur induċibbli ta' ipoksja. Mediċina Kumplimentari u Alternattiva Ibbażata fuq l-Evidenza, 2019, 1–8.
Cheng, Y., Mai, Q., Zeng, X., Wang, H., Xiao, Y., Tang, L., … Ding, H. (2019). Propionate jtaffi l-aċċessjonijiet indotti minn pentylenetetrazol, tfixkil mitokondrijali konsegwenti, nekrożi tan-newroni u defiċits newroloġiċi fil-ġrieden. Farmakoloġija Bijokimika, 169, Artikolu 113607.
Feng, YL, Cao, G., Chen, DQ, Vaziri, ND, Chen, L., Zhang, J., … Zhao, YY (2019). Microbiome-metabolomics tiżvela mikrobijota tal-musrana assoċjata ma 'metaboliti glycineconjugated u metaboliżmu tal-poliamine f'mard kroniku tal-kliewi. Xjenzi tal-Ħajja Ċellulari u Molekulari, 76(24), 4961–4978.
Garrido, P., Ribeiro, S., Fernandes, J., Vala, H., Bronze-da-Rocha, E., Rocha-Pereira, P., … Reis, F. (2015). Dismetaboliżmu tal-ħadid-Hepcidin, anemija u ipoksja renali, infjammazzjoni u fibrożi fil-mudell tal-firien tal-kliewi tal-fdal. PLoS ONE, 10(4), Artikolu e124048.
Higashi, T., & Ogawa, S. (2016). Reaġenti ta' derivatizzazzjoni li jtejbu l-ESI kodifikati bl-isotopi għal analiżi differenzjali, kwantifikazzjoni u profili ta' metaboliti f'kampjuni bijoloġiċi permezz ta' LC/MS: Reviżjoni. Ġurnal ta 'Analiżi Farmaċewtika u Bijomedika, 130, 181-193.
Ji, X., Hou, C., Gao, Y., Xue, Y., Yan, Y., & Guo, X. (2020). Analiżi metaġenomika ta 'effetti modulatorji tal-mikrobijota tal-musrana ta' polisakkaridi tal-jujube (Ziziphus jujuba Mill.) f'mudell tal-ġrieden tal-kanċer tal-kolorektum. Food & Function, 11(1), 163–173.
Ji, X., Hou, C., Yan, Y., Shi, M., & Liu, Y. (2020). Tqabbil tal-karatterizzazzjoni strutturali u l-attività antiossidanti tal-polisakkaridi mill-frott tal-ġujube (Ziziphus jujuba Mill.). Ġurnal Internazzjonali ta 'Makromolekuli Bijoloġiċi, 149, 1008–1018.

Ji, X., Hou, C., Zhang, X., Han, L., Yin, S., Peng, Q., … Wang, M. (2019). Analiżi mikrobijomemetabolomika tal-impatt ta 'Zizyphus jujuba cv. Muzao polysaccharides konsum fuq ġrieden tal-kanċer tal-kolorektum mikrobijota ippurgar u metaboliti.Ġurnal Internazzjonali ta 'Makromolekuli Bijoloġiċi, 131, 1067–1076.

Ji, X., Peng, Q., Yuan, Y., Shen, J., Xie, X., & Wang, M. (2017). Iżolament, strutturi u bijoattivitajiet tal-polisakkaridi mill-frott tal-ġujube (Ziziphus jujuba Mill.): Reviżjoni. Kimika tal-Ikel, 227, 349–357.
Jiang, N., Zhao, H., Han, Y., Li, L., Xiong, S., Zeng, L., … Sun, L. (2020). HIF-1 ittejjeb il-ħsara tubulari fin-nefropatija dijabetika permezz ta' kontroll medjat minn HO-1- tad-dinamika mitokondrijali. Proliferazzjoni taċ-Ċelloli, 53(11), Artikolu e12909.
Kapitsinou, PP, Liu, Q., Unger, TL, Rha, J., Davidoff, O., Keith, B., … Haase, VH (2010). HIF epatiku-2 jirregola r-risponsi eritropojetiċi għall-ipoksja fl-anemija tal-kliewi. Demm, 116(16), 3039–3048.
Kelly, CJ, Zheng, L., Campbell, EL, Saeedi, B., Scholz, CC, Bayless, AJ, … Colgan, SP (2015). Crosstalk bejn l-aċidi grassi tal-Katina Qasira Derivat mill-Mikrobijota u l-HIF epiteljali intestinali jżid il-funzjoni tal-barriera tat-tessuti. Cell Host & Microbe, 17 (5), 662–671.
Koh, A., De Vadder, F., Kovatcheva-Datchary, P., & B¨ ackhed, F. (2016). Mill-fibra tad-dieta għall-fiżjoloġija ospitanti: Aċidi grassi ta 'Katina Qasira bħala metaboliti batterjali ewlenin. Ċellula, 165(6), 1332–1345.
Lakshmanan, AP, Al, ZM, Ali, BH, & Terranegra, A. (2021). L-influwenza tal-akaċja tal-gomma prebijotika fuq il-kompożizzjoni tal-mikrobijoma intestinali fil-firien b'mard kroniku sperimentali tal-kliewi. Bijomediċina u Farmakoterapija, 133, Artikolu
110992.
Lam, C., Chan, PH, Lee, P., Lau, KM, Kong, A., Gong, A., … Tsim, K. (2016). Valutazzjoni kimika u bijoloġika ta 'decoctions tal-ħxejjex li fihom Jujube (Ziziphus jujuba): Induzzjoni tal-espressjoni tal-eritropojetin f'kulturi. Ġurnal ta 'Kromatografija Teknoloġiji analitiċi fix-Xjenzi Bijomediċi u tal-Ħajja, 1026, 254-262.
Lappin, TR, & Lee, FS (2019). Aġġornament dwar mutazzjonijiet fil-passaġġ HIF: EPO u r-rwol tagħhom fl-eritroċitosi. Reviżjonijiet tad-Demm, 37, Artikolu 100590.
LeBlanc, JG, Chain, F., Martín, R., Bermúdez-Humaran, ´ LG, Courau, S., & Langella, P. (2017). Effetti ta 'benefiċċju fuq il-metaboliżmu ta' l-enerġija ospitanti ta 'aċidi grassi ta' katina qasira u vitamini prodotti minn batterji kommensali u probijotiċi. Fabbriki taċ-Ċelloli Mikrobiċi, 16 (1), 79.
Li, L., Ma, L., & Fu, P. (2017). Aċidi grassi b'katina qasira derivati ​​mill-mikrobijota tal-imsaren u mard tal-kliewi. Żvilupp u Terapija tad-Disinn tad-Droga, 11, 3531–3542.
Li, L., & Shi, JY (2013). Analiżi ta 'polysaccharide u komponenti tal-lipidi tal-kortiċi cinnamomi minn GC-MS. Zhong Yao Cai, 36(4), 578–580.
Liu, G., Liu, X., Zhang, Y., Zhang, F., Wei, T., Yang, M., … Zhao, Z. (2015). Effetti epatoprotettivi ta' polisakkaridi estratti minn Zizyphus jujube cv. Huanghetanzao. Ġurnal Internazzjonali ta 'Makromolekuli Bijoloġiċi, 76, 169-175.

Locatelli, F., Fishbane, S., Block, GA, & Macdougall, IC (2017). Timmira għall-Ipoksja Fatturi li jistgħu jinduċu għat-trattament tal-anemija f'pazjenti b'mard kroniku tal-kliewi. Ġurnal Amerikan tan-Nefroloġija, 45(3), 187–199.

Locatelli, F., Hannedouche, T., Fishbane, S., Morgan, Z., Oguey, D., & White, WB (2019). Is-sigurtà kardjovaskulari u l-mortalità għal kull Kawża tal-methoxy polyethylene

Glycol-Epoetin beta u aġenti oħra li jistimulaw l-eritropojesi fl-anemija ta 'CKD: Prova ta' noninferjorità randomised. Ġurnal kliniku tas-Soċjetà Amerikana tan-Nefroloġija: CJASN, 14 (12), 1701–1710.
Maxwell, P. (2003). HIF-1: Sistema ta' rispons għall-ossiġnu b'rilevanza speċjali għall-kliewi. Ġurnal tas-Soċjetà Amerikana tan-Nefroloġija, 14(11), 2712–2722.
Meijers, BK, & Evenepoel, P. (2011). L-assi imsaren-kliewi: Indoxyl sulfate, p-cresyl sulfate u progressjoni CKD. Trapjant tad-Dijaliżi tan-Nefroloġija, 26(3), 759–761.
Mikami, D., Kobayashi, M., Uwada, J., Yazawa, T., Kamiyama, K., Nishimori, K., … Iwano, M. (2020). L-aċidu xaħmi b'katina qasira jtaffi l-mard kroniku tal-kliewi indott mill-adenina permezz tal-mogħdijiet FFA2 u FFA3. Biochimica Biophysica Acta-Molecular and Cell Biology Lipids, 1865(6), Artikolu 158666.
Morton, DB, & Griffiths, PH (1985). Linji gwida dwar ir-rikonoxximent ta 'uġigħ, dwejjaq u skumdità f'annimali sperimentali u ipoteżi għall-valutazzjoni. Rekord Veterinarju, 116(16), 431–436.
Panjeta, M., Tahirovi´c, I., Sofi´c, E., Cori´ ´c, J., & Derviˇsevi´c, A. (2017). Interpretazzjoni tal-livelli ta 'eritropojetin u emoglobina f'pazjenti b'diversi stadji ta' mard kroniku tal-kliewi. Ġurnal tal-Bijokimika Medika, 36(2), 145-152.
Pappa, M., Dounousi, E., Duni, A., & Katopodis, K. (2015). Mekkaniżmi patofiżjoloġiċi inqas magħrufa ta 'anemija f'pazjenti b'nefropatija dijabetika. Uroloġija Internazzjonali u Nefroloġija, 47(8), 1365–1372.
Sakashita, M., Tanaka, T., & Nangaku, M. (2019). Inibituri tad-dominju tal-Fattur Induċibbli mill-Ipoksja-Prolyl hydroxylase biex jittrattaw l-anemija f'mard kroniku tal-kliewi. Kontribuzzjonijiet għan-Nefroloġija, 198, 112–123. https://doi.org/10.1159/000496531.
Schodel, ¨ J., & Ratcliffe, PJ (2019). Mekkaniżmi ta 'sinjalazzjoni ta' ipoksja: Implikazzjonijiet ġodda għan-nefroloġija. Nature Reviews Nephrology, 15 (10), 641–659.
Tako, E., Glahn, RP, Knez, M., & Stangoulis, JC (2014). L-effett tal-prebijotiċi tal-qamħ fuq il-popolazzjoni batterjali tal-imsaren u l-istatus tal-ħadid ta 'tiġieġ brojler defiċjenti fil-ħadid. Ġurnal tan-Nutrizzjoni, 13, 58.
Tang, WH, Wang, Z., Kennedy, DJ, Wu, Y., Buffa, JA, Agatisa-Boyle, B., … Hazen, SL (2015). Il-mogħdija tat-trimethylamine N-oxide (TMAO) dipendenti fuq il-mikrobijota tal-musrana tikkontribwixxi kemm għall-iżvilupp ta 'insuffiċjenza renali kif ukoll għar-riskju ta' mortalità f'mard kroniku tal-kliewi. Riċerka taċ-Ċirkolazzjoni, 116(3), 448–455.
Thavarajah, S., & Choi, MJ (2019). L-użu ta 'aġenti li jistimulaw l-eritropojesi f'pazjenti b'CKD u kanċer: Approċċ kliniku. Ġurnal Amerikan tal-Mard tal-Kliewi, 74(5), 667–674.
Wang, F., Yu, H., Huang, S., Zheng, L., Zheng, P., Zhang, S., … Chen, J. (2020). Jian-PiYi-Shen jirregola l-EPO u l-espressjonijiet tal-proteini tar-riċiklaġġ tal-ħadid fil-firien anemiċi b'mard kroniku tal-kliewi: Akkumulazzjoni ta 'fattur li jinduċi l-ipoksja-2 permezz ta' sinjalazzjoni ERK. Mediċina Kumplimentari u Alternattiva Ibbażata fuq l-Evidenza, 2020, 8894257.
Wang, S., Lv, D., Jiang, S., Jiang, J., Liang, M., Hou, F., … Chen, Y. (2019). It-tnaqqis kwantitattiv fl-aċidi grassi b'katina qasira, speċjalment il-butirrat, jikkontribwixxi għall-progressjoni tal-mard kroniku tal-kliewi. Xjenza Klinika, 133(17), 1857–1870.
Webster, AC, Nagler, EV, Morton, RL, & Masson, P. (2017). Mard kroniku tal-kliewi. Lancet (Londra, l-Ingilterra), 389(10075), 1238–1252.
Xie, X., Yang, X., Wu, J., Ma, J., Wei, W., Fei, X., … Wang, M. (2020). Trib1 jikkontribwixxi għall-irkupru minn ħsara fil-kliewi akuta Indotta minn Iskemija/Riperfużjoni billi tirregola l-polarizzazzjoni tal-makrofaġi renali. Fruntieri fl-Immunoloġija, 11, 473.
Xu, M., Nagati, JS, Xie, J., Li, J., Walters, H., Moon, YA, … Garcia, JA (2014). Swiċċ tal-aċetat jirregola l-eritropojesi tal-istress. Nature Medicine, 20(9), 1018–1026.
Yue, Y., Wu, S., Li, Z., Li, J., Li, X., Xiang, J., … Ding, H. (2015). Il-polisakkaridi tal-jujube selvaġġ jipproteġu kontra l-mard infjammatorju sperimentali tal-musrana billi jippermettu funzjoni mtejba tal-barriera intestinali. Food & Function, 6(8), 2568–2577.

Zhao, S., & Li, L. (2018). Tikkettar ta 'l-isotopi ta' Dansylhydrazine LC-MS għal profili komprensivi tas-submetaboloma ta 'l-aċidu karbossiliku. Kimika Analitika, 90 (22), 13514–13522.

Zheng, L., Chen, S., Wang, F., Huang, S., Liu, X., Yang, X., … Chen, J. (2020). Risposti distinti tal-mikrobijota tal-musrana għad-decoction Jian-Pi-Yi-Shen huma assoċjati ma 'riżultati kliniċi mtejba f'firien nephrectomized 5/6. Frontiers in Pharmacology, 11, 604.