Inibizzjoni In Vitro Ta 'Sekrezzjoni Renali OCT2 U MATE1 Permezz ta' Drogi Antiemetiċi
Mar 18, 2022
Imbierek Ġorġ1, Xia Wen1, Edgar A. Jaimes2, Melanie S. Joy3,4,5,†u Lauren M. Aleksunes
Astratt:It-trasportatur tal-katjoni organiku 2 (OCT2) u proteina ta 'estrużjoni multidroga u tossina 1(MATE1) medjatur is-sekrezzjoni renali tad-drogi. Studji riċenti jissuġġerixxu li ondansetron, mediċina antagonista ta' 5-HT3 użata biex tipprevjeni dardir u rimettar, tista' tinibixxiOCT2- u MATE1-medjat it-trasport. L-iskop ta' dan l-istudju kien li jittestja l-abbiltà ta' ħames mediċini antagonisti 5-HT3 li jinibixxu l-OCT2u trasportaturi MATE1. It-trasport tas-sottostrat tas-sonda OCT2/MATE1 ASP plus ġie vvalutat bl-użu ta' żewġ mudelli: (1) HEK293kliewiċelluli li jesprimu żżejjed tal-bniedemOCT2jew MATE1, u (2) ċelluli MDCK trasfettati bil-bniedemOCT2and MATE1. In HEK293 cells, the inhibition ofASP+ uptake by OCT2 listed in order of potency was palonosetron (IC50: 2.6 µM) > ondansetron >granisetron > tropisetron > dolasetron (IC50: 85.4 µM) and the inhibition of ASP+ uptake by MATE1in order of potency was ondansetron (IC50: 0.1 µM) > palonosetron = tropisetron > granisetron >dolasetron (IC50: 27.4 µM). Ondansetron (0.5–20 µM) inibixxi t-trasport transċellulari basolaterali għal apikali ta 'ASP flimkien ma' sa 64 fil-mija. Konċentrazzjonijiet ogħla (10 u 20 µM) ta' palonosetron, tropisetron u dolasetron naqqsu bl-istess mod it-trasport transċellulari ta' ASP plus. F'ċelluli OCT2-MATE1 MDCK transfettati doppjament, ondansetron f'konċentrazzjonijiet ta '0.5 u 2.5 µM ikkawża akkumulazzjoni intraċellulari sinifikanti ta' ASP plus. Meħuda flimkien, din id-dejta tissuġġerixxi li 5-drogi antagonisti HT3 jistgħu jinibixxu s-sekrezzjoni renali ta 'mediċini katjoniċi billi jinterferixxu mal-funzjoni OCT2 u/jew MATE1.
Kliem ewlieni:OCT2; MATE1; katjoniku; 5-Antagonist HT3;kliewi; sekrezzjoni; trasport
Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com
Cistanche tubulosa jipprevjenikliewimarda, ikklikkja hawn biex tikseb il-kampjun
1. Introduzzjoni
Is-sekrezzjoni tal-kliewi tinkiseb permezz tal-assorbiment u l-effluss koordinat ta 'mediċini madwar l-epitelju tat-tubuli. Għal drogi u tossiċi li huma katjoni organiċi, it-trasport transepiteljali tagħhom fil-filtrat jinkiseb l-ewwel mit-trasportatur tal-cation organiku 2 (OCT2) fuq il-wiċċ basolaterali u, sussegwentement, mit-trasportatur multidrug and toxin extrusion 1 (MATE1) fuq il-bord tal-pinzell. membrana. Qabel ma skoprew il-ġeni OCT2/SLC22A1 u MATE1/SLC47A1, kien mifhum sew li s-sekrezzjoni ta 'katjoni organika tista' tiġi inibita farmakoloġikament [1]. Bl-użu ta 'varjetà ta' approċċi sperimentali madwar speċi prekliniċi differenti, intwera li katjoni organiċi jgħaddu minn trasport attiv u sekrezzjoni renali [2-4]. Minn dawn l-osservazzjonijiet bikrija, ir-riċerka avvanzat biex tifhem mhux biss il-mekkaniżmi molekulari tas-sekrezzjoni ta 'katjoni organika iżda wkoll il-potenzjal għal interazzjonijiet ta' mediċini klinikament rilevanti wara t-tfixkil ta 'OCT2 u MATE1 (revedut fi [5]).
Antagonisti tar-riċettur tas-serotonin 5-HT3 ħarġu bħala mediċini kritiċi għall-ġestjoni tad-dardir u r-rimettar. Is-serotonin jiġi rilaxxat miċ-ċelloli enterokromaffin tal-musrana ż-żgħira. 5-Antagonisti HT3 jinibixxu l-kanal tal-joni jonotropic ligand-gated fuq in-nervituri afferenti mill-vagu u jipprevjenu r-rifless tar-rimettar [6]. Ondansetron kien l-ewwel antagonist 5-HT3 approvat biex jipprevjeni dardir u rimettar ikkawżati mill-kimoterapija [7,8]. Minn dak iż-żmien, mediċini addizzjonali f'din il-klassi (inklużi tropisetron, granisetron, dolasetron u palonosetron) ġew żviluppati [9]. Filwaqt li l-indikazzjoni terapewtika primarja tal-antagonisti 5-HT3 kienet il-prevenzjoni tal-kimoterapija u l-emesi kkaġunata mir-radjazzjoni, huma wkoll approvati għall-ġestjoni ta’ dardir u rimettar wara l-operazzjoni u jintużaw off-label biex jittrattaw mard filgħodu, iperemesi gravidarum. , delirju wara l-operazzjoni, u ħakk [10-14].
Minħabba n-natura katjonika tal-antagonisti 5-HT3 (Figura 1), dawn ħarġu bħala sottostrati u inibituri tat-trasportaturi OCT u MATE. Studji in vitro wrew li ondansetron u tropisetron huma sottostrati u inibituri ta 'OCT1 u OCT2 [15-20]. Barra minn hekk, individwi b'varjanti ta' telf ta' funzjoni fil-ġene OCT1/SLC22A1 intwerew li biddlu l-farmakokinetiċi ta' tropisetron u tjiebu l-effikaċja klinika [16]. Bl-istess mod, ondansetron jista 'jinibixxi t-trasportaturi MATE, li jwassal għal akkumulazzjoni renali tal-mediċina antidijabetika metformin, kif ukoll żieda fin-nefrotossiċità tal-mediċina kontra l-kanċer cisplatin [19]. Fil-bnedmin, ondansetron inaqqas it-tneħħija mill-kliewi ta' metformin, preżumibbilment billi jinibixxi l-efflux ta' MATE1 [21]. Flimkien, din id-dejta tindika l-potenzjal għall-antagonisti ta' 5-HT3 li jinibixxu s-sekrezzjoni transepiteljali ta' mediċini permezz ta' OCT2 u MATE1. Għalhekk, fittxejna li nqabblu b'mod sistematiku ħames 5-antagonisti HT3 għall-kapaċità tagħhom li jinibixxu t-trasport medjat ta' OCT2 u MATE1- uman ta' substrat katjoniku ta' sonda bl-użu ta' trasfettazzjoni waħda jew doppja.kliewiċelloli. Ta' min jinnota, l-istudju attwali ffoka primarjament fuq MATE1, bħala livelli ta' proteina MATE2-K fil-bniedemkliewipreċedentement intwera li l-kortiċi huma taħt il-limitu aktar baxx ta 'kwantifikazzjoni bl-użu ta' spettrometrija tal-massa [22].
2. Riżultati
2.1. Karatterizzazzjoni ta' ASP plus bħala Substrat Fluworexxenti fiċ-Ċelloli HEK293 li jesprimu żżejjed OCT2 u MATE1
Studji inizjali kkaratterizzaw l-assorbiment ta 'ASP plus f'ċelloli li jesprimu vettur vojt (EV), OCT2, jew MATE1 (Figura 2). ASP flimkien ma' assorbiment murija dipendenti fuq il-ħin (Figura 2A) u dipendenti fuq il-konċentrazzjoni (Figura 2B) kemm f'ċelloli li jesprimu l-OCT2- kif ukoll il-MATE1-u urew kinetiċi saturabbli (OCT2: Vmax 8.1 nmol/mg/min , Km 2.9 uM, R2 0.95; MATE1: Vmax 3.4 nmol/mg/min, Km 8.2 uM, R2 0.96). Iċ-ċelloli EV urew akkumulazzjoni minima ta 'ASP plus (Vmax 1.9 nmol/mg/min, Km 37.3 uM, R2 0.92). Fuq il-bażi ta' dawn is-sejbiet, l-assorbiment ta' ASP flimkien ma' ġie kkwantifikat wara 1 min (medda lineari għat-trasport OCT2 u MATE1) f'konċentrazzjoni ta' 10 uM, li pprovdiet sensittività suffiċjenti għall-iskoperta tal-fluworexxenza u l-iskrinjar ta' antagonisti 5-HT3 bħala inibituri.
Biex jiġi żgurat li dawn il-kundizzjonijiet jirriflettu t-trasport attiv minn kull trasportatur, ġew determinati l-valuri IC5{{10}} ta 'cimetidine, inibitur OCT2 u MATE1 stabbilit sew (Figura 3 u Tabella 1). L-IC50 għal cimetidine kien 24.5 土 4.0 uM f'ċelloli li jesprimu OCT2-u 0.23 土 0.2 uM f'ċelloli li jesprimu MATE{1-, bi qbil mad-dejta ppubblikata li turi inibizzjoni ta' MATE1 f'konċentrazzjonijiet aktar baxxi [18,20]. Cimetidine ma kellu l-ebda influwenza fuq l-assorbiment ta' ASP flimkien ma' ċelloli EV.
2.2. Inibizzjoni ta' OCT2- u MATE1-Trasport medjat minn Droga Antiemetika fiċ-Ċelloli HEK293
Ħames antagonisti 5-HT3 differenti (ondansetron, palonosetron, granisetron, tropisetron, u dolasetron) ġew evalwati għall-inibizzjoni tagħhom tat-trasport OCT2 u MATE1 fiċ-ċelloli HEK293 bl-użu ASP plus bħala sottostrat (Figura 3). Tnaqqis dipendenti fuq il-konċentrazzjoni fl-ASP flimkien ma' l-assorbiment kien osservat f'ċelloli li jesprimu OCT2- u MATE1-fil-preżenza tal-ħames antagonisti 5-HT3 kollha ttestjati fuq firxa ta' konċentrazzjonijiet. Il-valuri IC50 għall-inibizzjoni ta' ASP flimkien ma' akkumulazzjoni minn antagonisti ta' 5-HT3 bl-użu tal-firxiet ta' konċentrazzjoni ttestjati huma murija fit-Tabella 1. Bl-eċċezzjoni ta' granisetron, l-antagonisti 5-HT3 l-oħra inibixxew MATE1 b'mod aktar qawwi milli għamlu OCT2. It-trasport medjat mill-OCT2-kien inibit sa ~90 fil-mija filwaqt li t-trasport medjat1-MATE ġie inibit sa ~70 fil-mija fil-konċentrazzjonijiet ittestjati.
B'mod ġenerali, l-assorbiment ta' ASP plus miċ-ċelloli EV ma nbidlitx sa grad kbir mill-antagonisti 5-HT3. Madankollu, ġie nnutat li palonosetron u tropisetron stimolaw l-assorbiment addizzjonali ta 'ASP plus fiċ-ċelloli EV u l-ogħla konċentrazzjoni ta' granisetron ikkawżat tnaqqis żgħir fl-akkumulazzjoni ta 'ASP flimkien.
2.3. Karatterizzazzjoni tat-Trasport Transċellulari u Akkumulazzjoni Intraċellulari ta 'ASP plus f'OCT2/MATE1-Esprimi Ċelloli MDCK
Biex tinvestiga l-kontribuzzjoni magħquda ta 'OCT2 u MATE1 fis-sekrezzjoni transepiteljali, saru esperimenti sussegwenti f'ċelloli MDCK li polarizzaw b'uċuħ basolaterali (OCT2) u apikali (MATE1). L-espressjoni tal-proteina OCT2 u MATE1 ġiet ikkonfermata f'ċelloli MDCK transfettati doppjament bl-użu ta 'Western blotting (Figura 4A). It-trasport transċellulari tas-sottostrat tas-sonda katjonika ASP plus (25 uM) ġie ttestjat f'dawn iċ-ċelloli bl-użu ta 'inserzjonijiet Transwell. It-trasport basolaterali għal apikali (B-to-A) ta 'ASP plus kien ħafna akbar (sa 2.8-darbiet f'120 min) mit-trasport apikali għal basolaterali (A-to-B) fiċ-ċelloli transfettati doppji OCT2/MATE1 (Figura 4B). Il-proporzjon ta 'effluss B-to-A/A-to-B f'120 min kien stmat li jkun 2.7 għaċ-ċelloli OCT2/MATE1 li jappoġġaw is-sekrezzjoni attiva ta' ASP plus. B'kuntrast, iċ-ċelloli ta 'kontroll urew ASP ħafna aktar baxx flimkien ma' trasport fiż-żewġ direzzjonijiet meta mqabbla ma 'ċelloli OCT2/MATE1. It-trasport B-to-A ta' ASP plus kien ogħla b'mod sinifikanti meta mqabbel mat-trasport A-to-B fiċ-ċelloli ta' kontroll f'90 (1.3-darbiet) u 120 min (1.7-darbiet). ). L-assaġġi ta 'inibizzjoni ulterjuri kollha saru fid-direzzjoni B-to-A.
Il-kapaċità tas-sustanzi kimiċi li jinibixxu ASP flimkien mal-fluss u jakkumulaw f'ċelloli transfettati doppji OCT2/MATE1 fil-kundizzjonijiet tat-test speċifikati ġiet evalwata bl-użu ta 'tliet inibituri ta' kontroll pożittiv (cimetidine 5 u 50 uM, pyrimethamine 1 uM, u olanzapine 20 uM) (Figura 4C). Cimetidine huwa inibitur magħruf ta 'OCT2 u MATE1, b'qawwa akbar għal MATE1 (Tabella 1) [18]. Pyrimethamine huwa inibitur speċifiku MATE1 [23], filwaqt li olanzapine instab li jinibixxi OCT2 b'mod aktar qawwi (Figura Supplimentari S1) [18,20]. It-tliet kimiċi kollha inibixxu l-fluss transċellulari ta 'ASP plus (18 fil-mija cimetidine 5 uM, 40 fil-mija cimetidine 50 uM, 36 fil-mija pyrimethamine 1 uM, u 28 fil-mija olanzapine 20 uM f'120 min).
L-akkumulazzjoni ta 'ASP plus intraċellulari kienet ukoll kwantifikata f'lysates f'120 min. Cimetidine u pyrimethamine żiedu l-akkumulazzjoni intraċellulari ta' ASP plus b'1.8- darba u 1.3-darbiet (minħabba l-inibizzjoni ta' MATE1 primarjament), rispettivament, filwaqt li olanzapine naqqas l-akkumulazzjoni intraċellulari ta' ASP plus b'51 fil-mija (minħabba l-inibizzjoni ta 'OCT2). Fiċ-ċelloli tal-kontroll, l-ebda inibizzjoni sinifikanti tat-trasport B-to-A ta 'ASP plus ma ġiet osservata fi kwalunkwe mill-punti tal-ħin. Fiċ-ċelloli ta' kontroll, ma kien hemm ukoll l-ebda tibdil sinifikanti fl-akkumulazzjoni intraċellulari ta' ASP plus meta mqabbel maċ-ċelloli ta' kontroll tal-vettura, ħlief għal tnaqqis modest fl-akkumulazzjoni ta' ASP plus fil-preżenza ta' olanzapine 20 uM.
2.4. Inibizzjoni tat-Trasport Transċellulari ta' ASP plus minn 5-Antagonisti HT3 f'Ċelloli OCT2/MATE1- Jesprimu MDCK
Il-ħames antagonisti 5-HT3 (ondansetron, palonosetron, granisetron, tropisetron, u dolasetron) ġew evalwati għall-kapaċità tagħhom li jaffettwaw it-trasport transċellulari u l-akkumulazzjoni intraċellulari ta 'ASP plus f'ċelloli transfettati doppju OCT2/MATE1 (Figuri5 u 6). Cimetidine (50 uM) kien inkluż ma 'kull esperiment f'sett parallel ta' Transwells bħala kontroll pożittiv. Interessanti, il-ħames antagonisti 5-HT3 kollha wrew gradi differenti ta 'inibizzjoni fuq it-trasport transċellulari B-to-A ta' ASP plus (Figura 5). Meta mqabbel maċ-ċelloli ttrattati bil-vettura, ondansetron inibixxi t-trasport B-to-A ta 'ASP plus b'mod dipendenti fuq il-konċentrazzjoni, b'inibizzjoni ta' 36 fil-mija f'120 min fl-ogħla konċentrazzjoni ttestjata (20 uM). Palonosetron u tropisetron wrew ukoll inibizzjoni dipendenti fuq il-konċentrazzjoni ta 'ASP flimkien ma' sekrezzjoni, li kienet sinifikanti f'10 u 20 uM għall-punti kollha tal-ħin. Inibizzjoni ta 'ASP flimkien ma' sekrezzjoni kienet osservata b'palonosetron u tropisetron f'20 uM. Dolasetron f'10 u 20 uM inibit ASP flimkien ma 'trasport f'120 min biss. Fl-aħħar nett, granisetron ma biddilx it-trasport B-to-A ta 'ASP plus fi kwalunkwe konċentrazzjoni ttestjata. Iċ-ċelloli ta' kontroll ma wrew l-ebda inibizzjoni sinifikanti fit-trasport B-to-A ta' ASP flimkien ma' xi wieħed mill-antagonisti 5-HT3 (dejta mhux murija).
2.5. ASP flimkien ma' Akkumulazzjoni Intraċellulari f'OCT2/MATE1-Esprimi Ċelloli MDCK Wara
Trattament b'Antagonisti 5-HT3
Konċentrazzjonijiet baxxi (0.5 u 2.5 uM) ta' ondansetron irriżultaw f'żieda ta' 1.3-darbiet fl-ASP intraċellulari flimkien ma' akkumulazzjoni fiċ-ċelloli li jesprimu OCT2/MATE1-, filwaqt li ma kien hemm l-ebda differenza meta mqabbla ma 'vetturi f'konċentrazzjonijiet ogħla (10 u 20 uM) (Figura 6). Madankollu, fiċ-ċelloli tal-kontroll, kien hemm tnaqqis (40 fil-mija) fl-akkumulazzjoni ta 'ASP plus f'konċentrazzjonijiet għoljin ta' ondansetron. Fiċ-ċelloli OCT2/MATE1, tropisetron u granisetron żiedu l-ASP flimkien mal-akkumulazzjoni (1.5 u 1.3-darbiet, rispettivament) fl-ogħla konċentrazzjoni (20 uM). Ma ġew osservati l-ebda bidliet sinifikanti fl-akkumulazzjoni ta' ASP flimkien ma' palonosetron jew dolasetron.
3. Diskussjoni
OCT2 u MATE1 huma trasportaturi ewlenin li jikkoordinaw is-sekrezzjoni renali ta 'katjoni organika. Huma jaqsmu għadd ta' sottostrati li jikkoinċidu inklużi metformin, cisplatin, lamivudine, u entecavir, kif ukoll jagħżlu mediċini antagonisti ta' 5-HT3 [15–20,24]. Studji preċedenti ssuġġerew li l-antagonisti 5-HT3 jistgħu wkoll jinibixxu t-trasport minn OCT2 u MATE1. B'mod partikolari, ondansetron intwera li jnaqqas it-trasport ta 'cisplatin u metformin minn MATE1 [19]. L-istudju attwali kellu l-għan li jestendi dan ix-xogħol preċedenti biex iqabbel ħames antagonisti 5-HT3 għall-kapaċità tagħhom li jinibixxu OCT2 u MATE1 individwalment meta espressi żżejjed f'ċelloli HEK293 u meta koespressi f'ċelloli MDCK u mkabbra fuq inserzjonijiet Transwell. Ondansetron u palonosetron setgħu jinibixxu l-assorbiment ta' kimika katjonika ta' sonda, ASP plus, fiċ-ċelloli HEK293 li jesprimu OCT2 jew MATE1, l-aktar, f'konċentrazzjonijiet baxxi daqs 0.1–0.5 uM . Bl-istess mod, granisetron, tropisetron, u dolasetron kienu wkoll kapaċi jinibixxu kull trasportatur (f'konċentrazzjonijiet ogħla, madankollu). Bl-użu ta 'ċelloli MDCK transfettati doppji OCT2/MATE1, ondansetron inibixxi l-ASP basolaterali għal apikali flimkien ma' sekrezzjoni fil-konċentrazzjonijiet kollha ttestjati (0.5-20 uM), li kien osservat biss f'konċentrazzjonijiet ogħla għal palonosetron, tropisetron u dolasetron. Din id-dejta miksuba bl-użu ta' sottostrat fluworexxenti ta' sonda, tissuġġerixxi l-potenzjal għal interazzjonijiet ta' mediċina medjati mill-OCT2- u MATE1-ma' antagonisti 5-HT3.
Id-dejta ġġenerata fiċ-ċelloli transfettati doppji OCT2/MATE1 taqbel fil-biċċa l-kbira mad-dejta HEK293, bl-eċċezzjoni ta 'granisetron. Ondansetron, palonosetron, u tropisetron urew inibizzjoni dipendenti fuq il-konċentrazzjoni tat-trasport B-to-A ta 'ASP flimkien ma' l-ordni tal-potenzi li jirriflettu dik osservata bl-inibizzjoni MATE1 li tidher fiċ-ċelloli HEK293. B'mod sorprendenti, granisetron ma wera l-ebda inibizzjoni sinifikanti fiċ-ċelloli OCT2/MATE1 MDCK, anki f'konċentrazzjonijiet ħames darbiet ogħla mill-konċentrazzjoni IC50 osservata fiċ-ċelloli HEK293 li jesprimu OCT2 jew MATE1. Minħabba li ċ-ċelluli MDCK jixbħu ċelluli tubulari indiġeni sa punt akbar minn ċelluli HEK293, hemm il-potenzjal li d-dispożizzjoni ta 'granisetron tinbidel minħabba l-espressjoni ta' ortologi tat-trasportaturi endoġeni ta 'OCT2 jew MATE1, jew potenzjalment trasportaturi oħra. Pereżempju, iċ-ċelloli MDCK jesprimu ħafna t-trasportatur tal-glikoproteina P tal-klieb [25], li jista 'jwassal għal efflux tal-granisetron. Jappoġġja din l-ispekulazzjoni huwa l-fatt li polimorfiżmu ta 'nukleotide wieħed fit-trasportatur MDR1/ABCB1 uman tejjeb l-effikaċja klinika ta' granisetron għat-trattament tal-emesi [26]. Din id-dejta tissuġġerixxi li granisetron jista 'jkun sottostrat għal P-glycoprotein tal-klieb, li jikkawża alterazzjoni fil-konċentrazzjoni intraċellulari esposta għat-trasportatur MATE1.
Filwaqt li hemm ħafna koinċidenza bejn is-sottostrati u l-inibituri tat-trasportaturi OCT u MATE, distinzjonijiet jeżistu. L-interazzjonijiet tad-droga bbażati fuq it-trasportatur jistgħu spiss ikunu dipendenti fuq l-identità tas-sottostrat tal-vittma li qed jiġi evalwat, kif intwera għal OCT2 [27-29]. Għal OCT2, l-għażla tas-sottostrat katjoniku għandha impatt kemm kwantitattiv kif ukoll kwalitattiv fuq il-firxa u t-tip ta 'inibizzjoni [27,28]. B'kuntrast, il-kostanti Michaelis apparenti tas-sottostrat trasportat u l-valuri IC50 għall-inibizzjoni ta 'MATE1 fuq erba' sottostrati differenti kienet simili [30]. Din id-dejta tissuġġerixxi li hemm sit kondiviż ta' rbit għall-interazzjoni ta' sottostrati u inibituri fuq il-wiċċ estern ta' hMATE1. Bħala riżultat, l-interazzjonijiet ta' mediċini antagonisti ta' 5-HT3 ma' OCT2 u MATE1 jistgħu jseħħu permezz ta' mekkaniżmi differenti, minkejja n-natura katjonika kondiviża tagħhom. Studji futuri huma meħtieġa biex javvanzaw l-istudju attwali bl-użu ta 'sottostrat ta' sonda u jevalwaw l-interazzjonijiet ma 'sottostrati speċifiċi ta' mediċini bħal cimetidine, metformin, u cisplatin.
Klassijiet addizzjonali ta' mediċini lil hinn mill-antagonisti ta' 5-HT3 jintużaw ukoll biex jipprevjenu dardir u rimettar. Fi studji preliminari, aħna vvalutajna l-kapaċità ta 'mediċini antiemetiċi oħra li jinibixxu t-trasport medjat ta' OCT2 u MATE1- ta 'ASP plus fiċ-ċelloli HEK293. Interessanti, olanzapine, prochlorperazine, u metoclopramide inibixxu l-attività OCT2 fuq firxa ta 'konċentrazzjonijiet (Figura Supplimentari S1). L-ebda waħda minn dawn il-mediċini ma inibixxa l-attività MATE1 f'konċentrazzjoni ta '10 uM (dejta mhux murija). Antiemetiċi oħra, inklużi aprepitant u dexamethasone, ma kellhom l-ebda impatt fuq l-assorbiment ta' ASP flimkien ma' ċelloli OCT2- jew MATE1-li jesprimu HEK293 (dejta mhux murija). Bħala riżultat, jista' jkun hemm il-potenzjal għal mediċini antiemetiċi oħra (olanzapine, prochlorperazine, u metoclopramide) mogħtija flimkien ma' antagonisti ta' 5-HT3 li jkollhom impatt ukoll fuq is-sekrezzjoni renali ta' katjoni, l-aktar permezz tal-kapaċità tagħhom li jinibixxu l-assorbiment ta' OCT2.
Huwa importanti li jiġi kkunsidrat kemm il-mudelli in vitro jirrikapitulaw il-karatteristiċi tat-trasport endoġenu fil-bniedemkliewi. Il-livelli tal-proteina OCT2 u MATE1 tal-bniedem ġew ikkwantifikati qabel f'ċelluli MDCK transfettati doppjament minn LC-MS/MS (hOCT2 u hMATE1 kienu 28.6 u 6.9 fmol/ug proteina tal-membrana, rispettivament) [31]. B'paragun, studji li jiddeterminaw l-espressjoni tal-proteini fil-kortiċi tal-kliewi tal-bniedem u l-membrani tal-kliewi umani jiżvelaw differenza aktar modesta fl-espressjoni bejn iż-żewġ trasportaturi jew saħansitra espressjoni akbar MATE1 (OCT2 7.4 pmol/mg, MATE{{14} }}.1 pmol/mg) [22] u (OCT2 5 fmol/ug, MATE1 10 fmol/ug) [32]. Dawn id-differenzi bejn mudelli in vitro u l-espressjoni umana endoġena ta 'OCT2 u MATE1 għandhom jiġu kkunsidrati u fatturati fl-iżvilupp ta' mudelli farmakokinetiċi bbażati fiżjoloġikament għal interazzjonijiet potenzjali ta 'mediċini katjoniċi fil-kliewi.
L-istudju attwali ffoka l-aktar fuq is-sekrezzjoni renali ta 'drogi katjoniċi. Madankollu, huwa importanti li wieħed jagħraf li l-fwied jesprimi wkoll OCT1 u MATE1, li jippermettu t-tneħħija biljari ta 'kimiċi katjoniċi. Dan huwa importanti għaliex l-antagonisti ta' 5-HT3 huma differenti fl-istruttura, il-metaboliżmu, l-irbit tal-proteini, u r-rotot ta' tneħħija tagħhom. Strutturalment, 5-antagonisti tar-riċetturi HT3 fihom amina bażika, sistema ta 'ċirku aromatiċi jew eteroaromatiċi, u karbonil (jew struttura simili) li hija koplanari mar-reġjun aromatiku (Figura 1) [33]. Notevolment, l-istruttura tal-parti ta' l-amina hija differenti għal ondansetron u tinkludi imidazole, filwaqt li 6-ċrieki tal-membri huma inkorporati fl-antagonisti 5-HT3 l-oħra. Ir-rilevanza ta' dawn id-differenzi strutturali fuq l-interazzjoni ma' OCT2 u/jew MATE1 teħtieġ aktar investigazzjoni iżda tista' tispjega l-effetti aktar sinifikanti ta' ondansetron f'konċentrazzjonijiet aktar baxxi. Barra minn hekk, xi antagonisti 5-HT3 jitneħħew b'mod estensiv mill-kliewibħala ġenituri jew metaboliti (bħal palonosetron u tropisetron). Ħafna mill-antagonisti 5-HT3 (inklużi ondansetron, tropisetron, palonosetron, u granisetron) huma metabolizzati ħafna (48–95 fil-mija) mill-enzimi taċ-ċitokromju P450 fil-fwied. Riċentement, studji wrew li l-metaboliti jista 'jkollhom rwol akbar fl-interazzjonijiet mediċina-droga milli kien maħsub qabel [34]. Ittestjar ulterjuri tat-trasport OCT2 u MATE1 b'metaboliti ewlenin ta' antagonisti ta' 5-HT3 li jaqbżu l-25 fil-mija tal-espożizzjoni sistemika tal-ġenitur huwa ġġustifikat. Bl-istess mod, fi ħdan il-klassi kimika, hemm mediċini b'half-lives qosra (< 6="" h,="" ondansetron,="" and="" tropisetron),="" moderate="" half-lives="" (8–9="" h,="" granisetron,="" and="" dolasetron),="" and="" a="" long="" half-life="" (40="" h,="" palonosetron).="" these="" factors="" should="" be="" considered="" when="" evaluating="" potential="" drug-drug="" interactions="" using="" in="" vitro="" transporter="">
Ibbażat fuq il-Gwida 2020 tal-FDA għall-Metaboliżmu In Vitro u l-Istudji tal-Interazzjoni Droga-Droga Medjati bit-Trasportatur [35], mediċina għandha l-potenzjal li tinibixxi lit-trasportatur in vivo jekk: il-valur Cmax (mhux marbut)/IC50 huwa akbar minn jew ugwali għal 0.1. Fuq il-bażi ta' dawn il-linji gwida, il-valuri MATE1 Cmax/IC50 għal ondansetron jindikaw interazzjonijiet potenzjali ta' mediċina in vivo bl-użu ta' ASP plus bħala substrat tas-sonda. It-tqabbil tal-valuri IC50 għall-antagonisti ta' 5-HT3 l-oħra mal-valuri Cmax tagħhom (firxa minn nanomolar għoli għal mikromolar baxx) ma jissuġġerixxix riskju ta' interazzjoni tad-droga, għall-inqas b'ASP plus bħala s-sottostrat tal-vittma. Bl-istess mod, bħalissa ma nafux il-konċentrazzjonijiet intrarenali tal-antagonisti ta' 5-HT3, li jkunu importanti għall-evalwazzjoni tal-interazzjonijiet potenzjali tal-mediċina MATE1. Hemm dejta klinika limitata li tevalwa l-interazzjonijiet tad-droga relatati ma' ondansetron ma' sottostrati OCT/MATE. Pereżempju, il-livelli ta' kreatinina u metformin jiżdiedu f'suġġetti b'saħħithom b'ondansetron minħabba l-inibizzjoni tat-trasportatur renali [21,36]. Interessanti, ondansetron mhux biss naqqas it-tneħħija renali ta 'metformin iżda kellu wkoll miżuri ta' tolleranza għall-glukożju mtejba [21]. Fi studji kliniċi oħra, ondansetron ġie rrappurtat li jżid in-nefrotossiċità ta’ mediċina sottostrat billi potenzjalment jibdel is-sekrezzjoni medjata mit-trasportatur fi ħdankliewi[37–39]. Flimkien, din id-dejta tiġġustifika aktar investigazzjoni tal-interazzjonijiet tal-mediċina ondansetron permezz tal-inibizzjoni tat-trasportaturi OCT u MATE.
Fil-qosor, din id-dejta in vitro tindika li ħafna mill-antagonisti ta' 5-HT3 għandhom qawwa akbar lejn l-inibizzjoni ta' MATE1, u jgħollu l-potenzjal għal konċentrazzjoni tubulari akbar ta' mediċini katjoniċi. Barra minn hekk, ondansetron kien qawwi biżżejjed biex iżid il-konċentrazzjoni intraċellulari ta' substrat ta' sonda, ASP plus f'konċentrazzjonijiet qrib is-Cmax klinikament rilevanti. Din id-dejta hija konformi ma’ studji in vivo preċedenti fil-ġrieden fejn ġiet osservata żieda fin-nefrotossiċità medjata minn cisplatin bl-għoti fl-istess ħin ta’ ondansetron [19]. Ibbażat fuq il-kriterji attwali għall-evalwazzjoni tal-potenzjal kliniku ta’ interazzjoni bejn mediċina u oħra, l-antagonisti ta’ 5-HT3 l-oħra, kif ukoll mediċini antiemetiċi ttestjati fl-istudju tagħna, x’aktarx joħolqu inqas riskju ta’ interazzjoni ta’ mediċina klinikament rilevanti minħabba terapewtiċi ħafna aktar baxxi. konċentrazzjonijiet fil-plażma u kostanti ta 'inibizzjoni ogħla.
4. Materjali u Metodi
4.1. Kimiċi
4-(4-(Dimethylamino)styryl)-N-methyl pyridinium iodide (ASP plus ) inxtara minn Life Technologies (Grand Island, NY, USA). Tropisetron inxtara minn Abcam (Cambridge, MA, USA). Il-kimiċi l-oħra kollha huma minn Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA).
4.2. Linji taċ-Ċelloli u Kultura taċ-Ċelloli
Il-kontroll tal-Vector vojt (EV) (pcDNA5-trasfettat) u l-linji taċ-ċelluli Flp-In tal-kliewi tal-embrijun uman (HEK)293 li jesprimu b'mod stabbli trasportaturi umani MATE1 u OCT2 ġew ipprovduti b'mod ġeneruż minn Dr Kathy Giacomini fl-Università ta' California, San Francisco. Iċ-ċelloli HEK293 ġew ikkultivati fil-mezz ta' l-Ajkla Modifikat (DMEM) ta' Dulbecco supplimentat b'10 fil-mija serum bovin tal-fetu, 2 mM L-glutamine, 100 U/mL penicillin, 100 ug/mL streptomycin, u 200 ug/mL hygromycin BA3 Vector (hygromycin. 1 plus u pcDNA3.1/Hygro( plus )) u linji taċ-ċelluli tal-kliewi tal-kliewi tal-kliewi tal-kliewi tal-kliewi (MDCK) tal-bniedem OCT2/MATE1 transfettati doppju tal-bniedem ġew ipprovduti b'mod ġeneruż minn Dr Joanne Wang fl-Università ta 'Washington, Seattle, WA. Iċ-ċelloli MDCK inżammu f'mezz essenzjali minimu (MEM) supplimentat b'10 fil-mija serum bovin fetali, 500 ug/mL G418, u 200 ug/mL hygromycin B. Il-linji taċ-ċelluli kollha ġew ikkultivati f'inkubatur umidifikat f'37oC b'5 fil-mija CO2.
4.3. Assaġġ ta' Inibizzjoni ta' teħid u Effluss fiċ-Ċelloli HEK293
Ċelloli HEK293 li jesprimu żejjed OCT2- u MATE1-inżergħu fi pjanċi ċari miksija b'poli-D-lysine 24-bir (Fisher Scientific, Hanover Park, IL, USA) u mkabbra għal 24 siegħa sa madwar 90 fil-mija konfluwenti. Wara li nħaslu darba b'Hank's Buffered Saline Solution (HBSS) imsaħħan minn qabel, iċ-ċelluli ġew inkubati minn qabel għal 30 min f'37oC b'diversi 5-antagonisti HT3 għal ċelluli OCT2 jew f'soluzzjoni ta' 30 mM NH4Cl f'HBSS f'pH 6.5 għal ċelluli MATE1 għal intraċellulari aċidifikazzjoni. It-teħid fiċ-ċelloli OCT2 inbeda permezz ta' espożizzjoni għal 10 uM ta' substrat fluworexxenti ASP flimkien direttament fil-midja ta' inkubazzjoni. It-teħid fiċ-ċelloli MATE1 inbeda bl-applikazzjoni ta' HBSS f'pH 7.4 li kien fih antagonisti 5-HT3 u 10 uM ta' substrat fluworexxenti ASP plus. Wara l-inkubazzjoni għal 1 min fi 37oC fuq shaker, l-assorbiment tas-sottostrat twaqqaf billi żżid HBSS kiesaħ bis-silġ li fih 500 uM cimetidine. Il-midja tneħħa u maħsula erba' darbiet b'HBSS kiesaħ bis-silġ. Iċ-ċelloli ġew lysed b'1 fil-mija Triton X-100. Il-fluworexxenza nstabet bl-użu ta' Spectramax Microplate Reader (Apparat Molekulari, Sunnyvale, CA, USA) fil-wavelengths li ġejjin (Eċċitazzjoni 485 nm/Emissjoni 495 nm). Il-fluworexxenza intraċellulari kienet normalizzata għall-konċentrazzjoni totali tal-proteina ta 'lysates taċ-ċelluli minn kull bir bl-użu tal-assaġġ tal-aċidu bicinchoninic (BCA) (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA). L-esperimenti ġew ripetuti tliet darbiet separati, bi tlieta sa erba 'repliki f'kull esperiment.
4.4. Studji Transwell fiċ-Ċelloli MDCK-OCT2/MATE1
Control and OCT2/MATE1-expressing MDCK cells were evaluated for protein expression of OCT2 and MATE1 using SDS-PAGE and western blotting with specific primary antibodies (OCT2, sc292622 1:500 and MATE1, sc133390 1:250, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), followed by an antirabbit HRP-conjugated secondary antibody (1:1000, Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) and Super Signal Western Dura Extended Duration Substrate (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, USA). Detection was performed with a FluorChem imager (ProteinSimple, Santa Clara, CA, USA). Both MDCK cell lines were seeded on 0.4 um transwell inserts (VWR, Radnor, PA, USA) at a density of 2 × 105 cells/cm2. Transport experiments were performed 3 to 5 days after seeding. The integrity of MDCK monolayers was verified by measuring transepithelial electrical resistance (TEER) >150 o * cm2 bl-użu ta 'ohmmeter volt epiteljali, EVOM2 (World Precision Instruments, Sarasota, FL). Formazzjoni xierqa ta 'junctions stretti ġiet ivverifikata wkoll bil-kejl tal-permeabilità passiva ta' lucifer isfar fid-direzzjoni basolateral-to-apical (B-to-A). Lucifer isfar (20 uM) ġie applikat għall-kamra basolaterali għal 1 siegħa, u l-midja nġabret mill-kamra apikali. Il-fluworexxenza isfar ta 'Lucifer inqrat f'wavelength ta' eċċitazzjoni ta '430 nm u wavelength ta' emissjoni ta '538 nm. Il-valuri medji tal-permeabilità passiva (Papp) kienu 7 × 10-7 ċm/s, li huwa konformi mal-valuri tal-letteratura [40].
Wara li nħaslu ċ-ċelloli darba b'Hank's Buffered Saline Solution (HBSS) pH 7.4, inbdew studji tat-trasport wara li aspiraw il-wash buffer kemm mill-kompartimenti apikali kif ukoll dawk bażali. Iċ-ċelloli ġew inkubati b'antagonisti 5-HT3 fil-kamra apikali f'HBSS pH 6.0 u 5- antagonisti HT3 b'ASP plus (25 uM) fil-kamra basolaterali f'HBSS pH 7.4 u inkubati fi 37 oC għal 120 min. Biex jitkejjel it-trasport transċellulari li jiddependi mill-ħin, inġabret alikwot tal-medju ta' inkubazzjoni (100 uL) mill-kamra apikali (kamra li tirċievi) f'40, 60, 90, u 120 min u mibdula b'volum ugwali ta' buffer frisk li fih {{ 19}}Antagonist HT3 jew il-kimika ta' kontroll pożittiv fil-konċentrazzjoni oriġinali. Wara 120 min, il-midja tat-trattament tneħħiet u Transwells ġew maħsula tliet darbiet b'HBSS kiesaħ bis-silġ. Iċ-ċelloli ġew lysed b'1 fil-mija Triton X-100. Il-fluworexxenza ġiet skoperta bl-użu ta' Spectramax Microplate Reader fil-wavelengths li ġejjin (Eċċitazzjoni 485 nm/Emissjoni 495 nm). Il-fluworexxenza intraċellulari kienet normalizzata għal konċentrazzjoni totali ta' proteina ta' lisati taċ-ċelluli minn kull transwell bl-użu tal-assaġġ BCA. L-esperimenti saru fi tliet inserts individwali ta' Transwell.
4.5. Analiżi Statistika
GraphPad Prism v6 (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) intuża għall-analiżi statistika. Km u Vmax ġew ikkalkulati bl-użu ta' rigressjoni mhux lineari (ekwazzjoni tal-kinetika tal-enżimi Michaelis–Menten, (Y=Vmax × X/(Km flimkien ma' X), tajbin għall-inqas kwadri). Dejta b'żewġ varjabbli ġiet analizzata permezz ta' żewġ- mod ANOVA segwit minn one-way ANOVA u/jew test posthoc ta' Dunnett għal paraguni multipli.Il-valuri IC50 ġew ikkalkulati permezz ta' rigressjoni mhux lineari għall-inqas kwadri.Differenzi kienu kkunsidrati statistikament sinifikanti f'p <>
Materjali Supplimentari:Dawn li ġejjin huma disponibbli onlajn fuq https://www.mdpi.com/article/10 .3390/ijms22126439/s1.
Kontribuzzjonijiet tal-Awtur:Kunċettwalizzazzjoni, BG, MSJ, LMA; metodoloġija, BG, XW; analiżi formali, BG, LMA; riżorsi, LMA; kitba—preparazzjoni tal-abbozz oriġinali, BG, LMA; kitba— reviżjoni u editjar, MSJ, LMA; amministrazzjoni tal-proġett, LMA; akkwist ta’ fondi, MSJ, EAJ, LMA L-awturi kollha qraw u qablu mal-verżjoni ppubblikata tal-manuskritt.
Finanzjament:Din ir-riċerka kienet iffinanzjata mill-Istitut Nazzjonali tax-Xjenzi Mediċi Ġenerali (Għotja GM123330) u l-Istitut Nazzjonali tax-Xjenzi tas-Saħħa Ambjentali (għotjiet ES005022, ES007148), Istitut Nazzjonali tal-Kanċer (Għotjiet CA072720, CA046934, CA008748), u l-Istitut Nazzjonali tad-Dijabete u Mard Diġestiv u tal-Kliewi (Grant DK093903), komponenti tal-Istituti Nazzjonali tas-Saħħa.
Dikjarazzjoni tal-Bord ta' Reviżjoni Istituzzjonali: Mhux applikabbli.
Dikjarazzjoni ta' Kunsens Informat:Ma japplikax.
Dikjarazzjoni tad-Disponibbiltà tad-Data:Ma japplikax.
Rikonoxximenti:Napprezzaw ħafna l-linji taċ-ċelluli tat-trasportatur HEK293 ġenerużi minn Kathy Giacomini u l-linji taċ-ċelluli MDCK trasfettati minn Joanne Wang.
Kunflitti ta' Interess:L-awturi ma jiddikjaraw l-ebda kunflitt ta' interess.
Referenzi
1. Acara, M.; Rennick, B. L-effett bifażiku ta 'katjonijiet organiċi fuq l-eskrezzjoni ta' katjoni organiċi oħra. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1976, 199, 32–40. [PubMed]
2. Holohan, PD; Ross, CR Mekkaniżmi ta 'trasport ta' katjoni organiku fil-vesikoli tal-membrana tal-plażma tal-kliewi: 1. Studji ta 'kontrotrasport. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1980, 215, 191–197.
3. Kinsella, JL; Holohan, PD; Pessah, NI; Ross, CR Trasport ta' joni organiċi f'vesikoli tal-membrana kortikali renali u antiluminali. J. Pharmacol. Exp. Ther. 1979, 209, 443–450.
4. Wold, JS; Miller, BL Inibizzjoni ta 'l-effluss ta' joni organiċi minn slices kortikali renali. Experientia 1978, 34, 630–631. [CrossRef] [PubMed]
5. Gessner, A.; König, J.; Fromm, MF Aspetti Kliniċi ta' Interazzjonijiet Mediċina-Droga Mmedjata minn Trasportatur. Clin. Pharmacol. Ther. 2019, 105, 1386–1394. [CrossRef]
6. Smith, HS; Cox, LR; Smith, EJ 5-Antagonisti tar-riċetturi HT3 għat-trattament ta' dardir/rimettar. Ann. Palliat. Med. 2012, 1, 115–120. [CrossRef] [PubMed]
7. Costall, B.; Gunning, SJ; Naylor, RJ; Tyers, MB L-effett ta' GR38032F, antagonist ġdid tar-riċettur 5-HT3- fuq it-tbattil tal-istonku fil-fniek tal-Indi. Br. J. Pharmacol. 1987, 91, 263–264. [CrossRef]
8. Kris, MG; Gralla, RJ; Clark, RA; Tyson, LB Evalwazzjoni tal-firxa tad-doża tal-antagonist tas-serotonin GR-C507/75 (GR38032F) meta użat bħala antiemetiku f'pazjenti li qed jirċievu kimoterapija kontra l-kanċer. J. Clin. Oncol. 1988, 6, 659–662. [CrossRef]
9. Tricco, AC; Blondal, E.; Veronika, AA; Soobiah, C.; Vafaei, A.; Ivorju, J.; Strifler, L.; Cardoso, R.; Reynen, E.; Nincic, V.; et al. Sigurtà komparattiva u effettività ta 'antagonisti tar-riċetturi tas-serotonin f'pazjenti li jkunu qed jagħmlu kimoterapija: Reviżjoni sistematika u meta-analiżi tan-netwerk. BMC Med. 2016, 14, 216. [CrossRef]
10. Boelig, RC; Barton, SJ; Saccone, G.; Kelly, AJ; Edwards, SJ; Berghella, V. Interventi għat-trattament ta' hyperemesis gravidarum: Reviżjoni sistematika Cochrane u meta-analiżi. J. Matern. Fetal Neonatal Med. 2018, 31, 2492–2505. [CrossRef]
11. Haque, N.; Naqvi, RM; Dasgupta, M. Effikaċja ta 'Ondansetron fil-Prevenzjoni jew Trattament ta' Delirju wara l-operazzjoni-Reviżjoni Sistematika. Can. Geriatr. J. 2019, 22, 1–6. [CrossRef] [PubMed]
12. McParlin, C.; O'Donnell, A.; Robson, SC; Beyer, F.; Moloney, E.; Bryant, A.; Bradley, J.; Muirhead, CR; Nelson-Piercy, C.; Newbury-Birch, D.; et al. Trattamenti għal Hyperemesis Gravidarum u Dardir u Rimettar fit-Tqala: Reviżjoni Sistematika. JAMA 2016, 316, 1392–1401. [CrossRef] [PubMed]
13. Wang, W.; Zhou, L.; Sun, L. Ondansetron għal ħakk indott minn morfina newraxjali: Meta-analiżi ta 'provi kkontrollati randomised. J. Clin. Pharm. Ther. 2017, 42, 383–393. [CrossRef]
14. Yokoi, A.; Mihara, T.; Ka, K.; Goto, T. Effikaċja komparattiva ta 'ramosetron u ondansetron fil-prevenzjoni ta' dardir u rimettar ta 'wara l-operazzjoni: Reviżjoni sistematika aġġornata u meta-analiżi b'analiżi sekwenzjali ta' prova. PLoS ONE 2017, 12, e0186006. [CrossRef]
15. Morse, BL; Kolur, A.; Hudson, LR; Hogan, AT; Chen, LH; Brackman, RM; Sawada, GA; Fallon, JK; Smith, PC; Hillgren, KM Farmakokinetiċi ta' Substrati ta' Organic Cation Transporter 1 (OCT1) f'Oct1/2 Ġrieden Knockout u Differenza ta' Speċi fl-OCT tal-fwied 1-Medjat ta' teħid. Droga Metab. Dispos. 2020, 48, 93–105. [CrossRef] [PubMed]
16. Tzvetkov, MV; Saadatmand, AR; Bokelmann, K.; Meineke, I.; Kaiser, R.; Brockmoller, J. Effetti ta 'polimorfiżmi OCT1 fuq l-assorbiment ċellulari, konċentrazzjonijiet fil-plażma u l-effikaċja ta' l-antagonisti 5-HT(3) tropisetron u ondansetron. Farmakoġenomika. J. 2012, 12, 22–29. [CrossRef] [PubMed]
17. Zhu, P.; Ye, Z.; Guo, D.; Xiong, Z.; Huang, S.; Guo, J.; Zhang, W.; Polli, JE; Zhou, H.; Li, Q.; et al. Irinotecan Ibiddel id-Disposizzjoni tal-Morfina permezz tal-Inibizzjoni tat-Trasportatur tal-Kation Organic 1 (OCT1) u 2 (OCT2). Pharm. Riż. 2018, 35, 243. [CrossRef]
18. Kido, Y.; Matsson, P.; Giacomini, KM Profiling ta 'librerija ta' mediċini bir-riċetta għal interazzjonijiet potenzjali tal-kliewi tad-droga-droga medjati mit-trasportatur tal-cation organiku 2. J. Med. Chem. 2011, 54, 4548–4558. [CrossRef] [PubMed]
19. Li, Q.; Guo, D.; Dong, Z.; Zhang, W.; Zhang, L.; Huang, SM; Polli, JE; Shu, Y. Ondansetron jista 'jtejjeb in-nefrotossiċità indotta minn cisplatin permezz ta' inibizzjoni ta 'tossini multipli u proteini ta' estrużjoni (MATEs). Tossikol. Appl. Pharmacol. 2013, 273, 100–109. [CrossRef]
20. Wittwer, MB; Żur, AA; Khuri, N.; Kido, Y.; Kosaka, A.; Zhang, X.; Morrissey, KM; Sali, A.; Huang, Y.; Giacomini, KM Skoperta ta' inibituri potenti, selettivi ta' multidrug u toxin extrusion transporter 1 (MATE1, SLC47A1) permezz ta' profiling ta' mediċini bir-riċetta u mmudellar komputazzjonali. J. Med. Chem. 2013, 56, 781–795. [CrossRef] [PubMed]