Vesikuli Extraċellulari Ipossiċi Mesenkimali Stem derivati ​​minn Ċelloli Staminali jtejbu l-Fbrożi Renali Wara Korriment ta' Iskemija-riperfużjoni billi Jirrestawraw l-Ossidazzjoni tal-Aċidu Xaħmi Medjata minn CPT1A

Astratt

1. Sfond

Il-fibrożi renali hija proċess patoloġiku komuni ta 'mard kroniku tal-kliewi indott minn fatturi multipli. It-trattament minn qabel iposiku ta 'ċelloli staminali mesenkimali jista' jtejjeb l-effikaċja ta 'vesicles extraċellulari secreted (MSC-EVs) f'diversi mard, iżda mhuwiex ċar jekk jistgħux itejbu aħjar il-fibrożi renali. L-aħħar riċerka wriet li l-irkupru tal-ossidazzjoni tal-aċidu xaħmi (FAO) jista 'jnaqqas il-fibrożi renali. F'dan l-istudju, immirajna li neżaminaw jekk it-trattament minn qabel iposiku b'vesikli extraċellulari MSC (Hypo-EVs) jistax itejjeb il-FAO biex jirrestawra l-fibrożi renali u jinvestiga l-mekkaniżmu sottostanti.

2. Metodi

Hypo-EVs ġew iżolati minn MSC derivati ​​mill-plaċenta umana trattat minn qabel (hP-MSC), u Norm-EVs ġew iżolati minn hP-MSC ikkultivati ​​taħt kundizzjonijiet normali. Aħna użajna l-mudell tal-fibrożi renali indotta mill-iskemija-riperfużjoni (I/R) in vivo. Il-ġrieden ġew injettati b'PBS, Hypo-EVs, jew Norm-EVs immedjatament wara l-kirurġija u jum 1 wara l-operazzjoni. Il-funzjoni tal-kliewi, il-patoloġija tal-kliewi, u l-fibrożi renali ġew evalwati għall-evalwazzjoni tal-ħsara fil-kliewi. Għal esplorazzjoni mekkanistika, l-ossidazzjoni tal-aċidu xaħmi (FAO), alterazzjonijiet morfoloġiċi mitokondrijali, produzzjoni ATP, u proteini tal-massa mitokondrijali ġew skoperti in vivo. Il-potenzjal tal-membrana mitokondrijali u l-produzzjoni ta 'speċi ta' ossiġnu reattiv (ROS) ġew investigati in vitro.

3. Riżultati

Sibna li l-Hypo-EVs jagħtu effett terapewtiku superjuri fuq l-irkupru ta 'ħsara fl-istruttura renali, ir-restawr tal-funzjoni renali, u t-tnaqqis fil-fibrożi renali. Sadanittant, Hypo-EVs tejbu l-FAO mitokondrijali fil-kliewi billi restawraw l-espressjoni ta 'enzima li tillimita r-rata ewlenija tal-FAO carnitine palmitoyl-transferase 1A (CPT1A). Mekanistikament, it-titjib tal-omeostasi mitokondrijali, ikkaratterizzat minn struttura mitokondrijali msewwija, restawr tal-massa mitokondrijali u produzzjoni ATP, inibizzjoni ta 'stress ossidattiv, u żieda fil-potenzjal tal-membrana mitokondrijali, jispjega parzjalment l-effett ta' Hypo-EVs fuq it-titjib tal-FAO mitokondrijali u b'hekk attenwat I/ Ħsara R.

4. Konklużjonijiet

Hypo-EVs jrażżnu l-fibrożi renali billi jirrestawraw il-FAO mitokondrijali medjata minn CPT1A, liema effetti jistgħu jinkisbu permezz tar-regolamentazzjoni tal-omeostasi mitokondrijali. Is-sejbiet tagħna jipprovdu appoġġ ulterjuri mekkaniżmu għall-iżvilupp ta 'terapija mingħajr ċelluli għall-fibrożi renali.

5. Kliem ewlieni

Ċellula staminali mesenkimali, Ipossiċi, Vesicles extraċellulari, Mitokondrijali, Ossidazzjoni tal-aċidu xaħmi, Fibrożi renali.

Ikklikkja hawn biex tixtri s-suppliment Cistanche

Introduzzjoni

Il-mard kroniku tal-kliewi (CKD) huwa marda severa li thedded is-saħħa tal-bniedem u hija wkoll kwistjoni pubblika globali importanti. L-inċidenza, il-prevalenza u l-mewt globali ta 'CKD huma sinifikanti, u qed jiżdiedu, u l-prevalenza hija ta' madwar 10 fil-mija fost l-adulti madwar id-dinja [1, 2]. Korriment tal-iskemija-riperfużjoni (I/R) tal-kliewi hija assoċjata ma' fibrożi renali u CKD progressiva [3, 4]. Il-fibrożi tal-kliewi hija meqjusa bħala proċess patoloġiku komuni li jwassal għal CKD u mard renali fl-aħħar stadju. Madankollu, bħalissa m'hemmx terapiji effettivi li jipprevjenu jew ireġġgħu lura l-fibrożi b'suċċess [5].

Vesicles extraċellulari derivati ​​minn ċelluli staminali mesenkimali (MSC-EVs) ġie rrappurtat li għandhom rwol riġenerattiv u antifibrotiku f'diversi mudelli prekliniċi ta 'CKD [6- 9]. Madankollu, ir-rendiment baxx ta 'MSC-EVs huwa fattur li jillimita għall-produzzjoni fuq skala kbira ta' terapiji mingħajr ċelluli [10]. Il-prekondizzjonament tal-ipoksja jistimula l-attivitajiet parakrini tal-MSCs u jżid il-funzjoni u l-produzzjoni tal-EVs u huwa meqjus bħala approċċ ta 'inġinerija biex itejjeb il-potenzjal terapewtiku tal-EVs [11, 12]. Studju reċenti indika li l-MSCs prekundizzjonati mill-ipoksja huma aktar sinifikanti minn MSCs mhux ittrattati fil-prevenzjoni tal-fibrożi renali u l-infjammazzjoni [13]. Madankollu, ir-rwol tal-EVs derivati ​​minn MSC prekundizzjonati mill-ipoksja fil-fibrożi renali għadu ma ġiex stabbilit.

Il-mekkaniżmu patoloġiku tal-fibrożi renali ġie rivedut f'ħafna studji reċenti [14-16], partikolarment fil-qasam tar-regolamentazzjoni metabolika [17]. Huwa magħruf sew li ċ-ċelloli tubulari prossimali (PTCs) huma l-aktar ċelloli li jitolbu l-enerġija fil-kliewi u għandhom rwol ċentrali fil-progressjoni tal-fibrożi tubulointerstizjali [18, 19]. L-ossidazzjoni tal-aċidu xaħmi (FAO) hija s-sors primarju tal-enerġija tal-PTCs [19, 20]. Ir-riżultati ta 'studji ta' transcriptome mal-ġenoma kollu wrew li l-espressjoni ta 'enzimi metaboliċi ewlenin relatati mal-FAO u regolaturi tat-traskrizzjoni naqset b'mod notevoli f'mudelli umani u ġrieden b'fibrożi tubulointerstizjali [20]. Barra minn hekk, ir-restawr tal-metaboliżmu tal-aċidu xaħmi jista 'jipproteġi l-ġrieden minn fibrożi tubulointerstizjali [17, 20]. Studju reċenti kkonferma li l-espressjoni żejda tal-enzima li tillimita r-rata ewlenija carnitine palmitoyl-transferase 1A (CPT1A) tista 'ttejjeb il-FAO fiċ-ċelloli epiteljali tubulari tal-kliewi, tnaqqas l-espressjoni ta' medjaturi infjammatorji, u twassal għal ttaffi sinifikanti tal-fibrożi fi tliet mudelli sperimentali [21] ]. Għalhekk, terapiji mmirati mill-FAO jistgħu jkunu strateġija terapewtika potenzjalment effettiva għat-tnaqqis tal-fibrożi.

Il-mitokondrija għandhom rwol indispensabbli fir-regolamentazzjoni tal-FAO. Studju preċedenti indika li astragaloside IV jista 'jtejjeb il-FAO billi jirregola l-attività mitokondrijali waqt ix-xjuħija [22]. Il-qerda tal-omeostasi mitokondrijali għandha rwol importanti fil-ħsara bikrija tal-mard tal-kliewi, tiswija anormali wara korriment, u l-patoġenesi tas-CKD [23, 24]. Taħt kundizzjonijiet fiżjoloġiċi u patoloġiċi, diversi mekkaniżmi jikkoordinaw biex iżommu l-omeostasi mitokondrijali, inkluża difiża antiossidanti, tiswija tad-DNA mitokondrijali, fużjoni u fissjoni mitokondrijali, awtofaġija mitokondrijali u bijoġenesi mitokondrijali [25]. Diversi studji wrew li l-MSC-EVs jistgħu jtaffu l-ħsara mitokondrijali billi jistabbilizzaw id-DNA mitokondrijali [26], jinibixxu l-fissjoni mitokondrijali, u jistimulaw id-difiża antiossidanti mitokondrijali u l-produzzjoni ta’ adenosine triphosphate (ATP) f’mudelli ta’ ħsara akuta fil-kliewi (AKI) [27, 28] . Studji preċedenti indikaw li t-trattament Hypo-EVs kellu effetti aħjar fuq il-promozzjoni tal-anġjoġenesi, il-proliferazzjoni u l-migrazzjoni, u l-inibizzjoni tal-infjammazzjoni u l-apoptożi mit-trattament b'Norm-EVs [29-31]. Madankollu, ir-riċerkaturi ma ddeterminawx b'mod konklużiv jekk ir-riżultati terapewtiċi ta' Hypo-EVs fil-fibrożi jiddependux fuq l-omeostasi mitokondrijali.

L-għanijiet ta 'dan l-istudju kienu (1) li jesplora jekk it-trattament minn qabel hypoxic ta' vesicles extraċellulari derivati ​​minn MSCs (Hypo-EVs) għandux effett aħjar kontra l-fibrożi; (2) biex jiddetermina jekk Hypo-EVs itaffu l-fibrożi indotta mir-riperfużjoni ta 'iskemija billi jsaħħu l-FAO medjata minn CPT1A; (3) biex teżamina jekk l-effett protettiv ta 'Hypo-EVs fuq il-FAO huwiex relatat mar-regolamentazzjoni tal-omeostasi mitokondrijali.

Trab Cistanche

Metodi

1. Il-kultura taċ-ċelluli u l-prekondizzjonament tal-ipoksja

MSC derivati ​​mill-plaċenta tal-bniedem (hP-MSC) ġew ipprovduti mill-Istitut tal-Fondazzjoni, l-Akkademja Ċiniża tax-Xjenzi Mediċi u kkultivati ​​f'Taħlita Medja/Nutrijent tal-Ajkla Modifikata ta 'Dulbecco F-12 (DMEM/F12, Gibco) medju b'10 fil-mija serum bovin tal-fetu (FBS, Corning) supplimentat b'100 U/mL penicillin-streptomycin (Gibco) u miżmum f'37 grad f'atmosfera umidifikata ta '5 fil-mija CO2. Wara li l-hP-MSC laħaq 60 fil-mija -70 fil-mija konfluwenza, il-midja tal-kultura ġew sostitwiti b'FBS imnaqqsa bl-eżosomi (SBI, 50A-1) u ġew ikkultivati ​​f'37 grad, 5 fil-mija CO2, 21 fil-mija O2 jew f'1 fil-mija O2, 94 fil-mija N2, u 5 fil-mija CO2 għal 48 siegħa addizzjonali. Il-mezz imbagħad inġabar għall-iżolament tal-EVs, u l-EVs miġbura mit-trattament minn qabel hypoxic tal-MSC (1 fil-mija O2) kienu jissejħu Hypo-EVs, u l-MSC normali (21 fil-mija O2) kien jissejjaħ Norm-EVs. Intuża biss hP-MSC minn passaġġi 6-10 għal aktar esperimenti.

2. Kultura taċ-ċelluli u trattament

Ċelloli epiteljali tubulari prossimali renali tal-bniedem (HK-2, ATCC, USA) ġew ikkultivati ​​f'DMEM/F12 b'10 fil-mija FBS u supplimentati b'100 U/mL penicillin-streptomycin. Iċ-ċelloli nżammu f'37 grad f'atmosfera umidifikata li fiha 5 fil-mija CO2. Aħna użajna żewġ approċċi biex nimitaw is-CKD in vitro. Il-mudell ta 'ipoksja/riossiġenazzjoni taċ-ċelluli (H/R) sar kif irrappurtat qabel [32]. Fil-qosor, iċ-ċelluli HK-2 kienu esposti għal kundizzjoni iposika (37 grad , 1 fil-mija O2, 94 fil-mija N2, u 5 fil-mija CO2) għal 12-il siegħa f'glukożju u medju mingħajr serum biex jinduċu ħsara iposika. Sussegwentement, il-medju ġie sostitwit, u ċ-ċelloli tqiegħdu taħt il-kondizzjoni normali (21 fil-mija O2) għar-riossiġenazzjoni 24 siegħa. Il-grupp ta 'kontroll kien ikkultivat taħt il-kondizzjoni normali (21 fil-mija O2) skond id-disinn sperimentali. Metodu ieħor kien li jiġu inkubati ċelluli HK-2 b'fattur ta' tkabbir trasformattiv beta-1 (TGF{- 1) f'konċentrazzjoni finali ta' 10 ng/mL għal 48 siegħa kif irrappurtat qabel [13]. Waqt ir-riossiġenazzjoni jew il-ħin stimulat TGF- 1- Norm-EVs jew Hypo-EVs (100 ug/mL ta' medju nutrittiv) ġew miżjuda maċ-ċelloli.

3. Iżolament u identifikazzjoni tal-MSC‑EVs

EVs derivati ​​minn MSC ġew iżolati bl-użu ta 'metodu ta' ultraċentrifugazzjoni differenzjali. Fil-qosor, il-mezz tal-kultura ġie ċentrifugat f'4 gradi kif ġej: 500 × g għal 10 min, fi 2,000 × g għal 20 min, u 10,000 × g għal 30 min. Il-medju ġie ffiltrat minn filtru ta' 0.22-μm qabel ultraċentrifugazzjoni f'100,000×g għal 2 sigħat. Fl-aħħarnett, il-gerbub EV ġew sospiżi mill-ġdid f'PBS u ultracentrifuged għal 2 sigħat addizzjonali biex jarmu l-proteini li jikkontaminaw, u mbagħad l-EVs purifikati ġew maħsuda f'PBS u maħżuna f'-80 grad għal aktar użu. Il-konċentrazzjonijiet tal-proteini tan-Norm-EVs u Hypo-EVs ġew eżaminati bl-użu ta 'assaġġ tal-proteina tal-aċidu bicinchoninic (BCA, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). L-istruttura tipika tal-membrana bi saffi f'forma ta 'sfera tal-EVs ġiet osservata bl-użu ta' mikroskopija elettronika ta 'trażmissjoni (TEM). Western blotting intuża biex jeżamina l-kwalità tal-EVs, u d-distribuzzjoni tad-daqs tal-EVs ġiet eżaminata permezz ta 'tifrix tad-dawl dinamiku (DLS).

Cistanche tubulosa

4. Esperimenti fuq l-annimali

Ġrieden maskili C57BL / 6 SPF (7-9 ġimgħat) ġew fornuti mis-Xjenza u t-Teknoloġija tal-Annimali Sperimentali Sibeifu (Beijing, iċ-Ċina) u ġew mitmugħa b'mod adattiv għal 4 d fiċ-ċentru tal-annimali fl-Isptar Ġenerali Ċiniż PLA qabel l-esperiment. Il-ġrieden kienu maqsuma b'mod każwali f'erba 'gruppi: il-gruppi ta' kontroll, phosphate-buffered saline (PBS), Norm-EVs, u Hypo-EVs. Ġrieden ta 'gruppi PBS, Norm-EVs, u Hypo-EVs kienu suġġetti għal iskemija-riperfużjoni renali kif deskritt qabel [33, 34]. Fil-qosor, il-ġrieden ġew anestetizzati b'pentobarbital (50 mg/kg) permezz ta' injezzjoni intraperitoneali. Ix-xagħar dorsali ta 'fuq il-kilwa tal-ġurdien ġie mnaddaf u mbagħad il-bastimenti bilaterali tal-pediku renali ġew esposti. Biex tinduċi iskemija renali, l-arterja tal-kliewi tax-xellug ġiet ikklampjata b'morsa vaskulari mhux trawmatika għal 30 min u l-kilwa tal-lemin tneħħiet fl-istess ħin. Wara, inbdiet ir-riperfużjoni billi ħarġet il-morsa. Il-kliewi ġew osservati għal 5 minuti biex tiġi żgurata riperfużjoni wara li tneħħiet il-morsa. Il-mejda tal-operat u t-temperatura tal-kamra nżammu f'37 grad waqt l-operazzjoni. F'mudelli ta 'trattament, 100 ug ta' Norm-EVs jew Hypo-EVs f'0.15 mL ta 'solvent PBS ġew amministrati b'injezzjoni tal-vini tad-denb immedjatament wara l-kirurġija u jum (D) 1 wara l-operazzjoni fil-gruppi Norm-EVs u Hypo-EVs, rispettivament. L-istess volum ta 'PBS ġie amministrat permezz ta' injezzjoni tal-vina tad-denb fil-grupp PBS. Il-ġrieden inqatlu f'D 2, D 7, u D 14 wara l-operazzjoni (Fig. 1a).

5. Internalizzazzjoni tal-MSC‑EVs

Biex tivverifika jekk EVs jistgħux jiġu internalizzati minn kliewi feruti. Tbajja fluworexxenti Dil (Yeasen) saret biex ittikketta l-EVs. Te Norm-EVs jew Hypo-EVs (200 ug) li ġew maħlula f'100 μL ta 'PBS ġew inkubati b'4 μM ta' Dil f'37 grad għal siegħa. Iż-żebgħat mhux marbuta mbagħad tneħħew bl-użu ta 'kolonna spin exosome (Invitrogen). Id-Di/Norm-EVs u Dil/Hypo-EVs ġew sospiżi fil-PBS għal użu sussegwenti. Dil/Norm-EVs jew Dil/HypoEVs(100 ug) ġew injettati ġol-vini fi ġrieden mudell ta’ iskemija-riperfużjoni (I/R) permezz tal-vina tad-denb immedjatament wara l-kirurġija u fuq D 1 wara l-operazzjoni kif imsemmi hawn fuq. Fil-jiem 1, 3, 5, u 7, il-ġrieden ġew immaġini immedjatament bl-użu Living Image Software 4.4 (PerkinElmer). Barra minn hekk, il-kliewi nġabru u ġew osservati fuq sistema ta 'immaġni ottika fuq D 7. Is-sinjali kollha tal-immaġini tal-bijoluminixxenza (BLI) ġew imkejla bir-radjanza medja mir-reġjuni ta' interess (ROIs).

6. mikroskopju elettroniku tat-trażmissjoni (TEM)

Total ta '1 mm3 ta' tessut tal-kliewi ġie ffissat f'2.5 fil-mija glutaraldehyde (pH 7.4) f'4 gradi għal 24 siegħa. Imbagħad, it-tessut ġie ffissat b'1 fil-mija aċidu osmju għal 2-3 sigħat, deidratat bl-aċetun u l-etanol, u inkorporat b'reżina epoxy. Wara dan, intuża ultramicrotome biex jipprepara sezzjonijiet ultrathin bi ħxuna ta '60 nm, li mbagħad ġew imtebba 'bi 3 fil-mija uranyl acetate u ċomb citrate. Fl-aħħarnett, is-sezzjoni ġiet osservata taħt TEM (il-Ġappun).

7. Analiżi tal-funzjoni renali

Inġabar kampjun tad-demm mill-vina tad-denb fuq D 3, u l-livelli ta 'nitroġenu urea fid-demm (BUN) fil-ġrieden ġew ittestjati bl-użu ta' kit xieraq (Bioassay).

8. Valutazzjoni tal-istopatoloġija renali

It-tessuti tal-kliewi ġew iffissati f'formalin 10 fil-mija għal 48 siegħa, inkorporati fil-paraffin, sezzjoni bi ħxuna ta '3 μm, imtebbgħin b'reaġenti tat-tbajja 'Masson bi protokoll standard, u osservati bl-użu ta' mikroskopju (Olympus, Tokyo, Ġappun). Il-perċentwal taż-żona ta 'depożizzjoni tal-kollaġen ġie kkalkulat bl-użu ta' softwer ImageJ. Kien hemm mill-inqas 10 oqsma każwali li ma jikkoinċidux għal kull annimal għall-punteġġ.

9. Immunoistokimika

Is-sezzjonijiet tal-kliewi inkorporati fil-paraffin ġew ittrattati minn qabel bl-użu ta 'rkupru ta' antiġen medjat bis-sħana b'buffer ta 'ċitrat tas-sodju (pH 6, soluzzjoni ta' rkupru ta 'epitopi 1) għal 20 min, segwit minn inkubazzjoni b'antikorpi primarji matul il-lejl f'4 gradi. Is-sezzjonijiet imbagħad ġew inkubati b'antikorp sekondarju bijotinilat, u 3,3'-diaminobenzidine (DAB) intuża bħala l-kromoġenu. Is-sezzjonijiet imbagħad ġew counterstained b'ematossilin u osservati b'mikroskopju ottiku. L-antikorpi primarji użati kienu kif ġej: CPT1A (ab128568, Abcam), u Vimentin (ab92547, Abcam).

10. Immunofluworexxenza

Ċelloli jew tessut ġew permeabilizzati bi 0.2 fil-mija Triton X-100 għal 5 min, imblukkati bis-serum tan-nagħaġ għal 30 min, u inkubati b'-actin tal-muskoli lixx (-SMA, 1:200, 55135, Proteintech) jew antikorp kollaġen I (1:100, ab270993, Abcam) għal 16-18-il siegħa f'4 gradi, segwit minn inkubazzjoni b'antikorp sekondarju Cy3-konjugat (aħmar) f'temperatura ambjentali għal siegħa. Nuklei kienu counterstained b'DAPI. Tbajja fluworexxenti tas-sezzjonijiet tat-tessuti kienet immaġinata minn mikroskopija fluworexxenti konfokali.

11. Western blotting analiżi

Il-kliewi, iċ-ċelluli, jew il-gerbub EVs ġew lysed fil-liżi buffer RadioImmune Precipitation Assay (RIPA) li fih phenylmethylsulphonyl fluoride (PMSF), u s-sospensjoni supernatant miksuba wara ċ-ċentrifugazzjoni ġiet imkejla bl-użu ta 'kit ta' analiżi tal-proteina BCA (Thermo Fisher Scientific). Kampjuni ta 'proteini ta' l-istess kwalità (20 ug / korsija) ġew miżjuda ma '10 fil-mija jew 12 fil-mija sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel (SDS-PAGE) u mbagħad ittrasferiti mill-ġels SDS-PAGE għall-membrani. Il-membrana ġiet imblukkata għal sagħtejn f'temperatura tal-kamra b'soluzzjoni ta 'kaseina 1X u mbagħad inkubata b'antikorpi primarji f'4 gradi kontra l-proteini li ġejjin: -SMA (ab7817, Abcam), vimentin (ab92547, Abcam), glyceraldehyde 3- phosphate dehydrogenase (GAPDH, 60004-1- Ig, Proteintech), actin ({20536-1-AP, Proteintech), PGC1 (ab191838, Abcam), CPT1A (ab128568, Abcam), succinate dehydrogenase complex tal-ħadid sulfur subunità B (SDHB , 10620-1-AP, Proteintech), subunità IV ta' cytochrome c oxidase (COXIV, ab202554, Abcam), u ATPB ({17247-1-AP, Proteintech). Il-membrana mbagħad ġiet inkubata bl-antikorp sekondarju korrispondenti għal 1.5 sigħat f'temperatura tal-kamra u maħsula tliet darbiet. L-immaġini ġew analizzati bl-użu ta 'softwer ImageJ.

12. Reazzjoni kwantitattiva fil-katina tal-polimerażi f'ħin reali (RT-qPCR)

L-ewwel, l-RNA ġie estratt miċ-ċelloli lysed jew tessut tal-kliewi bl-użu ta 'reaġent Trizol (Invitrogen), u mbagħad l-RNA ġie sintetizzat għal cDNA skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur bl-użu tal-kit ReverTra Ace qPCR RT (Toyobo). Reazzjoni kwantitattiva tal-katina tal-polimerażi f'ħin reali saret bl-użu ta 'SYBR Select Master Mix (Life Technologies) u sistema ta' skoperta RT-qPCR (ABI). Il-primers għall-ġeni li ġejjin ġew sintetizzati: PPAR quddiem TTTGCCAAGGCTATCCCAGG, reverse GTCACAGAACGGCTTCCTCA,

PGC1 bil-quddiem AATGCAGCGGTCTTAGCACT, bil-maqlub CTGAGCAGGGACGTCTTTGT, ACOX2 TCATCCAACGTGACCCAGTG, bil-maqlub CAG CAAGGACTCTGTCAGCA, CPT2 bil-quddiem CATCGT ACCCACCATGCACT, bil-maqlub CTCCTTCCCAATGCC GTTCT, 18S AGCTATCATGACCCAGTG bil-maqlub, u bil-maqlub tal-espressjoni, 18S AGCTATCAATCTACGG, kull ġene fil-mira kien normalizzat mill-ġene 18S u kkalkulat mill-2−ΔΔCT metodu.

13. Kejl tal-potenzjal tal-membrana mitokondrijali

Il-potenzjal tal-membrana mitokondrijali (MMP) ġie skopert bl-użu ta' JC-1 (Beyotime). L-ewwel, is-soluzzjoni tax-xogħol tat-tbajja' ta' JC-1 inkisbet billi żżid 8 mL ilma ultrapur għal kull 50 μL ta' JC-1 (200X), li kien imħawwad b'mod vjolenti biex jinħall għal kollox, u mbagħad 2 mL ta' JC{{ Ġie miżjud 7}} buffer tat-tbajja' (5X). It-tieni, ċelluli fi pjanċa b'sitt pori ġew maħsula darbtejn f'PBS, u mbagħad 1 mL ta' soluzzjoni ta' ħidma tat-tbajja' JC-1 ġiet miżjuda u tħallew għal 20 min f'temperatura ta' 37 grad C. Fl-aħħarnett, iċ-ċelloli ġew maħsula bil-PBS għal darb'oħra , u ġew miżjuda 2 mL tas-soluzzjoni tal-kultura taċ-ċelluli. Immaġini viżwalizzati ġew akkwistati permezz ta 'mikroskopija fluworexxenti.

Kapsuli Cistanche

14. Sejbien ta 'speċi ta' ossiġnu reattiv mitokondrijali (ROS).

Il-ġenerazzjoni ta 'ROS mitokondrijali kienet imkejla b'mikroskopija fluworexxenti bl-użu ta' Mito-SOX Red (Thermo Fisher Scientific). Soluzzjoni tax-xogħol tar-reaġent MitoSOX (2.0 mL, 5 μM) ġiet miżjuda biex tkopri ċ-ċelloli fil-pjanċi ta 'sitt pori, segwit minn tbajja' b'MitoSOX Red għal 10 min f'37 grad. Imbagħad, iċ-ċelloli ġew maħsula bil-PBS tliet darbiet, u l-immaġini viżwalizzati ġew akkwistati bl-użu ta 'mikroskopija fluworexxenti.

15. Sejbien ATP

Il-produzzjoni tal-ATP ġiet iddeterminata permezz tal-Enhanced ATP Assay Kit (Beyotime, iċ-Ċina, Cat. Nru: S0027) skont il-protokoll tal-manifattur.

16. Analiżi statistika

Il-kwantifikazzjoni u l-graffs ġew analizzati bl-użu ta 'GraphPad Prism 7 (La Jolla, CA, USA) u ppreżentati bħala medja ± żball standard tal-medja. Id-differenzi bejn il-gruppi multipli ġew analizzati bl-użu ta 'analiżi tal-varjanza (ANOVA), u s-sinifikat statistiku ġie stabbilit għal P <0.05.

Diskussjoni

F'dan l-istudju, iffukajna fuq il-FAO fil-fibrożi renali, u identifikajna enzimi metaboliċi (CPT1A) u regolaturi tat-traskrizzjoni (PGC1, PPAR) tal-FAO, li indikaw li Hypo-EVs jistgħu jreġġgħu lura d-disturb tal-metaboliżmu tal-aċidu xaħmi fil-kliewi fibrotiċi ikkawżat minn I /R. Barra minn hekk, sibna li l-Hypo-EVs jeżerċitaw effett profond fuq il-FAO medjat minn CPT1A, li huwa parzjalment attribwit għar-regolamentazzjoni tal-omeostasi mitokondrijali.

F'dawn l-aħħar snin, numru dejjem jikber ta 'studji rrappurtaw l-effett protettiv tal-kliewi ta' mudelli in vivo ta' MSC-EVs ta 'CKD u ammont żgħir ta' dejta disponibbli wriet li EVs kienu superjuri jew ugwalment effettivi fir-rinoprotezzjoni meta mqabbla mal-MSC ġenitur tagħhom [43] . It-trattament ta' MSC-EVs f'CKD jinsab fil-bidu tiegħu, u l-mekkaniżmu kumpless ma ġiex muri għal kollox. L-AKI huwa wieħed mill-fatturi ewlenin tas-CKD, li jwassal għal mard renali fl-aħħar stadju [44], u l-ħsara renali I/R hija fattur ewlieni għall-AKI, għalhekk aħna nagħżlu mudell ta’ fibrożi indotta minn I/R biex niskopru mekkaniżmu molekulari potenzjali li kif l-MSC-EVs jipprevjeni l-fibrożi renali.

Ir-rendiment baxx ta 'MSC-EVs huwa fattur li jillimita għall-produzzjoni fuq skala kbira ta' terapiji mingħajr ċelluli. Għalhekk, ġew studjati diversi approċċi potenzjali biex tiżdied ir-rendiment tal-EVs, inkluż l-ottimizzazzjoni tal-kundizzjonijiet tal-kultura MSC, scaffolds tridimensjonali bbażati fuq matriċi extraċellulari, u r-regolamentazzjoni tal-bijoġenesi tal-EVs [10]. Fosthom, il-kondizzjonament iposiku ta 'MSC huwa metodu validu biex iżid l-effett tat-trattament EV f'diversi mard, bħall-fejqan tal-ksur tal-għadam [30], il-fejqan tal-feriti dijabetiċi [29] u t-tiswija mijokardijaka [45]. L-istudju tagħna jipprovdi evidenza għall-azzjoni mtejba bl-ipoksja tal-EVs imnixxija minn MSC. Barra minn hekk, nuru wkoll li l-EVs derivati ​​minn MSC ipoxiċi prekondizzjonati għandhom effett akbar kontra l-fibrożi u protettiv renali minn Norm-EVs f'CKD indotti minn I/R. Id-dejta dwar il-miRNAs f'Hypo-EVs meta mqabbla ma' Norm-EVs ġiet irrappurtata tajjeb. Bosta studji rrappurtaw li l-kontenut ta 'miRNA kien responsabbli għall-effetti ta' benefiċċju ta 'Hypo-EVs f'ħafna mard [30, 46]. Meta mqabbel ma 'Norm-EVs, 215 miRNAs ġew regolati 'l fuq u 369 miRNAs downregolati f'Hypo-EVs derivati ​​minn xaħmi, li prinċipalment jirregolaw il-metaboliżmu taċ-ċelluli, id-divrenzjar u l-funzjoni TGF [29]. Madankollu, il-mekkaniżmu li bih Hypo-EVs jirregolaw il-funzjoni tal-metaboliżmu għadu mhux mifhum f'CKD. Korp kbir ta 'letteratura tindika li l-FAO hija mnaqqsa fil-fibrożi tal-kliewi u tikkontribwixxi għall-patoġenesi tagħha [47]. B'mod konsistenti mar-rapporti, l-istudju tagħna wera li l-espressjoni tal-ġeni ta 'enzimi metaboliċi ewlenin relatati mal-FAO (CPT1A, CPT2, u ACOX2) u l-fatturi regolatorji ta' traskrizzjoni FAO (PPAR u PGC1) naqsu b'mod notevoli fil-fibrożi renali indotta minn I / R.

Barra minn hekk, ir-restawr tal-metaboliżmu tal-lipidi huwa strateġija potenzjali għat-trattament tal-fibrożi renali [48]. L-espressjoni żejda ta 'CPT1A fit-tubuli tal-kliewi hija kontributur sinifikanti għall-kisba tal-funzjoni fil-FAO u tirriżulta fil-protezzjoni tal-funzjoni renali u l-fibrożi billi tipprevjeni disfunzjoni mitokondrijali, differenzjazzjoni TEC, u infjammazzjoni f'mudelli ta' annimali CKD [21]. Id-dejta tagħna wriet li l-Hypo-EVs jistgħu jreġġgħu lura l-FAO bil-ħsara fil-fibrożi indotta mill-I/R, li tissuġġerixxi li l-effetti terapewtiċi tal-Hypo-EVs fil-fibrożi renali huma parzjalment ir-riżultat tar-restawr tal-FAO.

Indeboliment fis-sinjalar tal-PPAR renali naqqas l-attività tal-mogħdija tal-FAO u aggrava l-iżvilupp tal-fibrożi renali [49]. L-amministrazzjoni ta 'fenofibrate, agonist ta' PPAR, irrestawra d-difett ta 'ossidazzjoni tax-xaħam u fibrożi tubulointerstizjali f'CKD [50, 51]. PGC-1 huwa koattivatur tal-PPAR fil-kontroll traskrizzjoni tal-kapaċità mitokondrijali tal-FAO [39]. Aħna investigajna jekk HypoEVs jistgħux iżidu s-sinjalar PPAR u jirrestawraw il-FAO f'korriment I/R. Ir-riżultati tagħna wrew li ma kien hemm l-ebda differenzi ovvji fl-espressjoni ta 'PGC-1 u PPARa bejn Norm-EVs u Hypo-EVs. Għalhekk, għandu jkun hemm fatturi oħra li jippromwovu l-okkorrenza ta 'dan il-proċess. Il-mitokondrija huma l-qawwa għall-FAO biex tiġġenera l-enerġija għaċ-ċellula [52]. Disfunzjoni mitokondrijali hija kritika fil-patoġenesi tal-fibrożi tal-kliewi [53]. Ir-restawr tal-omeostasi mitokondrijali ħareġ bħala strateġija terapewtika promettenti biex tevita ħsara fil-kliewi u tħaffef it-tiswija tal-kliewi [25]. Studji reċenti indikaw li l-MSC-EVs għandhom effett protettiv fuq il-ħsara mitokondrijali kkawżata minn AKI, li jipproteġi t-TECs kontra l-insult billi jnaqqas il-frammentazzjoni mitokondrijali, jinnormalizza l-potenzjal tal-membrana mitokondrijali, u jreġġa' lura t-tħassir tal-mtDNA u d-difetti mitokondrijali OXPHOS [26, 27]. Ir-riżultati tagħna wrew li t-trattament Hypo-EVs irkupra bidla anormali fil-morfoloġija mitokondrijali, żiedet il-massa mitokondrijali, u tejbet il-funzjoni mitokondrijali fil-kliewi fibrotiċi. Is-sejbiet tagħna jindikaw li l-effetti ta 'Hypo-EVs fuq il-FAO jistgħu jinkisbu billi tirregola l-omeostażi mitokondrijali.

Hemm xi limitazzjonijiet fl-istudju tagħna. Pereżempju, id-dejta tagħna turi li Hypo-EVs għandhom effetti antifibrotiċi aħjar fil-ġrieden ta 'korriment I/R minn Norm-EVs. Madankollu, aħna ma ddeterminajnax l-espressjoni differenzjali tal-kontenut bejn Norm-EVs u Hypo-EVs u lanqas ma evalwajna l-mod speċifiku li bih Hypo-EVs jaffettwaw l-omeostasi mitokondrijali f'dan l-istudju.

Il-benefiċċji Cistanche

Konklużjonijiet

Fil-qosor, id-dejta tagħna tindika li l-Hypo-EVs jinibixxu b'mod sinifikanti l-fibrożi renali billi jirrestawraw il-FAO medjata minn CPT1A, u dawn l-effetti jistgħu jinkisbu billi tirregola l-omeostażi mitokondrijali. Is-sejbiet tagħna jipprovdu aktar appoġġ mekkaniku għall-iżvilupp ta 'terapija mingħajr ċelluli għall-fibrożi renali.

Referenzi

1. Kalantar-Zadeh K, Jafar TH, Nitsch D, Neuen BL, Perkovic V. Mard kroniku tal-kliewi. Lancet. 2021;398(10302):786–802.

2. Xie Y, Bowe B, Mokdad AH, Xian H, Yan Y, Li T, Maddukuri G, Tsai CY, Floyd T, Al-Aly Z. Analiżi tal-istudju Globali tal-Piż tal-Mard jenfasizza l-globali, reġjonali u nazzjonali xejriet tal-epidemjoloġija tal-mard kroniku tal-kliewi mill-1990 sal-2016. Kidney Int. 2018;94(3):567–81.

3. Ronco C, Bellomo R, Kellum JA. Korriment akut tal-kliewi. Lancet. 2019;394(10212):1949–64.

4. Zheng Z, Li C, Shao G, Li J, Xu K, Zhao Z, Zhang Z, Liu J, Wu H. Hippo-YAP/ MCP-1 tiswija maladattiva tubulari medjata tippromwovi infjammazzjoni fl-irkupru fallut renali wara AKI iskemiku. Ċellula Mewt Dis. 2021;12(8):754.

5. Yan H, Xu J, Xu Z, Yang B, Luo P, He Q. Definizzjoni ta 'miri terapewtiċi għall-fibrożi renali: sfruttament tal-bijoloġija tal-patoġenesi. Biomed Pharmacother. 2021;143:112115.

6. Shi Z, Wang Q, Zhang Y, Jiang D. Vesicles extraċellulari prodotti minn ċelluli staminali mesenchymal tal-mudullun attenwaw il-fibrożi renali, parzjalment billi jinibixxu l-mogħdija RhoA/ROCK, f'mudell ta 'far UUO. Stem Cell Res Ther. 2020;11(1):253.

7. Kholia S, Herrera Sanchez MB, Cedrino M, Papadimitriou E, Tapparo M, Deregibus MC, Bruno S, Antico F, Brizzi MF, Quesenberry PJ, Camussi G. Vesicles extraċellulari derivati ​​minn ċelluli staminali mesenkimali jtejbu l-ħsara fil-kliewi f'aċidu aristolokiku nephistolochic . Front Cell Dev Biol. 2020;8:188.

8. Birtwistle L, Chen XM, Pollock C. Vesikli extraċellulari derivati ​​minn ċelluli staminali mesenkimali għas-salvataġġ ta 'korriment renali. Int J Mol Sci. 2021;22(12):6596.

9. Huang Y, Yang L. Ċelloli staminali Mesenchymal u vesicles extraċellulari fit-terapija kontra mard tal-kliewi. Stem Cell Res Ther. 2021;12(1):219.

10. Phan J, Kumar P, Hao D, Gao K, Farmer D, Wang A. Inġinerija taċ-ċelloli staminali mesenkimali biex itejbu l-effikaċja u r-rendiment exosome tagħhom għal terapija mingħajr ċelluli. J Vesiċi Extracell. 2018;7(1):1522236.

11. Bister N, Pistono C, Huremagic B, Jolkkonen J, Giugno R, Malm T. Hypoxia u vesicles extraċellulari: reviżjoni dwar metodi, merkanzija vesikulari u funzjonijiet. J Vesiċi Extracell. 2020;10(1): e12002.

12. Yang Y, Lee EH, Yang Z. Ipoksja kkundizzjonata ċelluli staminali mesenchymal fl-applikazzjoni ta 'riġenerazzjoni tat-tessuti. Tissue Eng Parti B Rev 2021.

13. Ishiuchi N, Nakashima A, Doi S, Yoshida K, Maeda S, Kanai R, Yamada Y, Ike T, Doi T, Kato Y, Masaki T. Ċelloli staminali mesenkimali prekundizzjonati minn ipoksja jipprevjenu fibrożi renali u infjammazzjoni fl-iskemija-riperfużjoni firien. Stem Cell Res Ther. 2020;11(1):130.

14. Panizo S, Martinez-Arias L, Alonso-Montes C, Cannata P, Martin-Carro B, Fernandez-Martin JL, Naves-Diaz M, Carrillo-Lopez N, Cannata-Andia JB. Fibrożi f'mard kroniku tal-kliewi: patoġenesi u konsegwenzi. Int J Mol Sci. 2021;22(1):408.

15. Humphreys BD. Mekkaniżmi ta' fibrożi renali. Annu Rev Physiol. 2018;80:309–26.

16. Nastase MV, Zeng-Brouwers J, Wygrecka M, Schaefer L. Targeting tal-fibrożi renali: mekkaniżmi u sistemi ta 'konsenja tad-droga. Adv Drug Deliv Rev 2018;129:295–307.

17. Zhao X, Kwan JYY, Yip K, Liu PP, Liu FF. Timmira għal disregolazzjoni metabolika għat-terapija tal-fibrożi. Nat Rev Drug Discov. 2020;19(1):57–75.

18. Qi R, Yang C. Ċelloli epiteljali tubulari renali: il-medjatur traskurat tal-fibrożi tubulointerstizjali wara l-korriment. Ċellula Mewt Dis. 2018;9(11):1126.

19. Gewin LS. Fibrożi renali: il-primat tat-tubuli prossimali. Matriċi Biol. 2018;68:248–62.

20. Kang HM, Ahn SH, Choi P, Ko YA, Han SH, Chinga F, Park AS, Tao J, Sharma K, Pullman J, Bottinger EP, Goldberg IJ, Susztak K. Ossidazzjoni difettuża tal-aċidu xaħmi fiċ-ċelloli epiteljali tubulari renali għandu rwol ewlieni fl-iżvilupp tal-fibrożi tal-kliewi. Nat Med. 2015;21(1):37–46.

21. Miguel V, Tituana J, Herrero JI, Herrero L, Serra D, Cuevas P, Barbas C, Puyol DR, Marquez-Exposito L, Ruiz-Ortega M, Castillo C, Sheng X, Susztak K, Ruiz-Canela M, Salas-Salvado J, Gonzalez MAM, Ortega S, Ramos R, Lamas S. Espressjoni żejda tat-tubuli renali Cpt1a tipproteġi mill-fibrożi tal-kliewi billi tirrestawra l-omeostażi mitokondrijali. J Clin Invest. 2021;131(5):e140695.

22. Luo Z, Wang Y, Xue M, Xia F, Zhu L, Li Y, Jia D, Chen S, Xu G, Lei Y. Astragaloside IV itejjeb il-metaboliżmu tax-xaħam fil-fwied tal-ġrieden li qed jixjieħu billi jimmiraw l-attività mitokondrijali. J Cell Mol Med. 2021;25(18):8863–76.

23. Bhargava P, Schnellmann RG. Energetika mitokondrijali fil-kliewi. Nat Rev Nephrol. 2017;13(10):629–46.

24. Jiang M, Bai M, Lei J, Xie Y, Xu S, Jia Z, Zhang A. Disfunzjoni mitokondrijali u t-tranżizzjoni AKI-to-CKD. Am J Physiol Renal Physiol. 2020;319(6): F1105–16.

25. Tang C, Cai J, Yin XM, Weinberg JM, Venkatachalam MA, Dong Z. Kontroll tal-kwalità mitokondrijali f'korriment u tiswija tal-kliewi. Nat Rev Nephrol. 2021;17(5):299–318.

26. Zhao M, Liu S, Wang C, Wang Y, Wan M, Liu F, Gong M, Yuan Y, Chen Y, Cheng J, Lu Y, Liu J. Vesiċelli extraċellulari derivati ​​minn ċelluli staminali mesenkimali jtaffu l-ħsara u l-infjammazzjoni mitokondrijali billi jistabbilizza d-DNA mitokondrijali. ACS Nano. 2021;15(1):1519–38.

27. Cao H, Cheng Y, Gao H, Zhuang J, Zhang W, Bian Q, Wang F, Du Y, Li Z, Kong D, Ding D, Wang Y. Traċċar in vivo ta 'vesicles extraċellulari derivati ​​minn ċelloli staminali mesenkimali titjib Funzjoni mitokondrijali f'korriment ta' iskemija-riperfużjoni tal-kliewi. ACS Nano. 2020;14(4):4014–26.

28. Gu D, Zou X, Ju G, Zhang G, Bao E, Zhu Y. Ċelloli stromali mesenkimali derivati ​​vesicles extraċellulari jtejbu l-ħsara akuta ta 'iskemija-riperfużjoni tal-kliewi bl-inibizzjoni tal-fissjoni mitokondrijali permezz ta' miR -30. Ċelloli Stem Int. 2016;2016:2093940.

29. Wang J, Wu H, Peng Y, Zhao Y, Qin Y, Zhang Y, Xiao Z. Exosomes derivati ​​minn ċelluli staminali adipożi Hypoxia jippromwovu fejqan ta 'kwalità għolja ta' ferita dijabetika tinvolvi attivazzjoni ta 'mogħdijiet PI3K/Akt. J Nanobijoteknoloġija. 2021;19(1):202.

30. Liu W, Li L, Rong Y, Qian D, Chen J, Zhou Z, Luo Y, Jiang D, Cheng L, Zhao S, Kong F, Wang J, Zhou Z, Xu T, Gong F, Huang Y, Gu C, Zhao X, Bai J, Wang F, Zhao W, Zhang L, Li X, Yin G, Fan J, Cai W. Exosomes hypoxic mesenchymal staminali derivati ​​minn ċelluli staminali jippromwovu l-fejqan tal-ksur tal-għadam bit-trasferiment ta 'miR {{2} }. Acta Biomater. 2020;103:196–212.

31. Rong Y, Zhang J, Jiang D, Ji C, Liu W, Wang J, Ge X, Tang P, Yu S, Cui W, Cai W. Trattament minn qabel iposiku ta 'vesikoli żgħar extraċellulari jimmedja t-tiswija tal-qarquċa fl-osteoartrite billi jagħti miR { {1}}a-5p. Acta Biomater. 2021;122:325–42.

32. Yang C, Chen Z, Yu H, Liu X. Inibizzjoni ta 'Disruptor ta' Silenzju Telomeriku 1- Bħall-Iskemija Renali Imtaffija u Fibrożi Indotta minn Korriment ta 'Riperfużjoni billi Imblokka Stress Ossidattiv Medjat minn PI3K/AKT. Drug Des Devel Ther. 2019;13:4375–87.

33. Qian Y, Qian C, Xie K, Fan Q, Yan Y, Lu R, Wang L, Zhang M, Wang Q, Mou S, Dai H, Ni Z, Pang H, Gu L. Is-sinjalar tar-riċettur P2X7 jippromwovi l-infjammazzjoni fi ċelluli parenkimali tal-kliewi li jsofru minn korriment iskemija-riperfużjoni. Ċellula Mewt Dis. 2021;12(1):132.

34. Hu MC, Shi M, Gillings N, Flores B, Takahashi M, Kuro OM, Moe OW. Alpha-Klotho rikombinanti jista' jkun profilattiku u terapewtiku għall-progressjoni akuta għal kronika tal-mard tal-kliewi u kardjomijopatija uremika. Kidney Int. 2017;91(5):1104–14.

35. Dubois V, Eeckhoute J, Lefebvre P, Staels B. Kontribuzzjonijiet distinti iżda komplementari tal-isotipi PPAR għall-omeostażi tal-enerġija. J Clin Investig. 2017;127(4):1202–14.

36. Desvergne B, Wahli W. Riċetturi attivati ​​mill-proliferaturi tal-peroxisome: kontroll nukleari tal-metaboliżmu. Endocr Rev 1999;20(5):649–88.

37. Libby AE, Jones B, Lopez-Santiago I, Rowland E, Levi M. Riċetturi nukleari fil-kliewi waqt is-saħħa u l-mard. Mol Aspetti Med. 2021;78:100935.

38. Bougarne N, Weyers B, Desmet SJ, Deckers J, Ray DW, Staels B, De Bosscher K. Azzjonijiet molekulari ta 'PPARalpha fil-metaboliżmu tal-lipidi u l-infjammazzjoni. Endocr Rev 2018;39(5):760–802.

39. Vega RB, Huss JM, Kelly DP. Il-koattivatur PGC-1 jikkoopera mar-riċettur alpha attivat mill-proliferatur tal-peroxisome fil-kontroll traskrizzjoni tal-ġeni nukleari li jikkodifikaw l-enzimi ta' ossidazzjoni tal-aċidu xaħmi mitokondrijali. Mol Cell Biol. 2000;20(5):1868–76.

40. Li SY, Susztak K. Ir-rwol tar-riċettur gamma attivat mill-proliferatur tal-peroxisome 1alpha (PGC-1alpha) fil-mard tal-kliewi. Semin Nephrol. 2018;38(2):121–6.

41. Fransen M, Lismont C, Walton P. Il-konnessjoni peroxisome-mitokondrija: Kif u għaliex? Int J Mol Sci. 2017;18(6):1126.

42. Aparicio-Trejo OE, Avila-Rojas SH, Tapia E, Rojas-Morales P, Leon-Contreras JC, Martinez-Klimova E, Hernandez-Pando R, Sanchez-Lozada LG, PedrazaChaverri J. Indeboliment kroniku tal-bijoenerġija mitokondrijali u beta -ossidazzjoni tippromwovi transizzjoni sperimentali AKI-to-CKD indotta mill-aċidu foliku. Free Radic Biol Med. 2020;154:18–32.

43. Eirin A, Lerman LO. Vesicles extraċellulari derivati ​​minn ċelloli staminali/stromali mesenkimali għal mard kroniku tal-kliewi: Għadna hemm? Pressjoni għolja. 2021;78(2):261–9.

44. Kurzhagen JT, Dellepiane S, Cantaluppi V, Rabb H. AKI: fattur ta 'riskju dejjem aktar rikonoxxut għall-iżvilupp u l-progressjoni tas-CKD. J Nephrol. 2020;33(6):1171–87.

45. Zhu J, Lu K, Zhang N, Zhao Y, Ma Q, Shen J, Lin Y, Xiang P, Tang Y, Hu X, Chen J, Zhu W, Webster KA, Wang J, Yu H. Funzjonijiet riparattivi mijokardijaċi ta' eżosomi minn ċelloli staminali mesenkimali huma msaħħa permezz ta' trattament ta' ipoksja taċ-ċelloli permezz tat-trasferiment ta' microRNA-210 b'mod dipendenti fuq nSMase2-. Ċelloli Artif Nanomed Biotechnol. 2018;46(8):1659–70.

46. ​​Zhu LP, Tian T, Wang JY, He JN, Chen T, Pan M, Xu L, Zhang HX, Qiu XT, Li CC, Wang KK, Shen H, Zhang GG, Bai YP. Eżosomi derivati ​​minn ċelluli staminali mesenkimali kkaġunati mill-ipoksja jiffaċilitaw it-tiswija tal-qalb permezz tal-prevenzjoni medjata minn miR-125b tal-mewt taċ-ċelluli fl-infart mijokardijaku. Teranostiċi. 2018;8(22):6163–77.

47. Xie YH, Xiao Y, Huang Q, Hu XF, Gong ZC, Du J. Rwol tal-mogħdija CTRP6/AMPK fil-fibrożi tal-kliewi permezz tal-promozzjoni tal-ossidazzjoni tal-aċidu xaħmi. Eur J Pharmacol. 2021;892:173755.

48. Chen YY, Chen XG, Zhang S. Drogabilità tal-modulazzjoni tal-metaboliżmu tal-lipidi kontra fibrożi renali. Acta Pharmacol Sin. 2021.

49. Chung KW, Lee EK, Lee MK, Oh GT, Yu BP, Chung HY. Indeboliment ta 'PPARalpha u l-mogħdija ta' ossidazzjoni tal-aċidu xaħmi jaggrava l-fibrożi renali waqt ix-xjuħija. J Am Soc Nephrol. 2018;29(4):1223–37.

50. Han SH, Malaga-Dieguez L, Chinga F, Kang HM, Tao J, Reidy K, Susztak K. It-tħassir ta 'Lkb1 fiċ-ċelloli epiteljali tubulari renali jwassal għal CKD billi tbiddel il-metaboliżmu. J Am Soc Nephrol. 2016;27(2):439–53.

51. Jao TM, Nangaku M, Wu CH, Sugahara M, Saito H, Maekawa H, Ishimoto Y, Aoe M, Inoue T, Tanaka T, Staels B, Mori K, Inagi R. ATF6alpha downregulation ta 'PPARalpha tippromwovi tubulointerstizjali indotta minn lipotossiċità fibrożi. Kidney Int. 2019;95(3):577–89.

52. Spinelli JB, Haigis MC. Il-kontribuzzjonijiet multidimensjonali tal-mitokondrija għall-metaboliżmu ċellulari. Nat Cell Biol. 2018;20(7):745–54.

53. Chung KW, Dhillon P, Huang S, Sheng X, Shrestha R, Qiu C, Kaufman BA, Park J, Pei L, Baur J, Palmer M, Susztak K. Il-ħsara mitokondrijali u l-attivazzjoni tal-mogħdija STING iwasslu għal infjammazzjoni renali u fibrożi. Cell Metab. 2019;30(4):784–99.

Zhumei Gao1,2, Chuyue Zhang1,3, Fei Peng1, Qianqian Chen1, Yinghua Zhao4, Liangmei Chen5, Xu Wang1 u Xiangmei Chen1,2

1 Dipartiment tan-Nefroloġija, l-Ewwel Ċentru Mediku tal-Isptar Ġenerali Ċiniż PLA, Istitut Nefroloġija tal-Armata ta 'Liberazzjoni tal-Poplu Ċiniż, Laboratorju Ewlenin tal-Istat tal-Mard tal-Kliewi, Ċentru Nazzjonali ta' Riċerka Klinika għall-Mard tal-Kliewi, Laboratorju Ewlenin ta 'Beijing tar-Riċerka dwar il-Mard tal-Kliewi, Beijing, iċ-Ċina.

2 Dipartiment tan-Nefropatija, It-Tieni Sptar tal-Università ta 'Jilin, Changchun, iċ-Ċina.

3 Istitut tar-Riċerka tal-Kliewi, Ċentru Nazzjonali ta 'Riċerka Klinika għall-Ġerjatrija u Diviżjoni tan-Nefroloġija, Isptar taċ-Ċina tal-Punent tal-Università ta' Sichuan, Chengdu, iċ-Ċina.

4 Skola tal-Mediċina Klinika, Tsinghua University, Beijing, iċ-Ċina.

5 Dipartiment tan-Nefroloġija, L-Ewwel Sptar Affiljat tal-Università ta 'Jinan, Guangzhou, iċ-Ċina.