Filwaqt li ma jidhirx li l-persentaġġ ta 'TEX jiżdied mas-severità tal-marda (Figura Supplimentari 6C), jew hekk kif l-annimali suxxettibbli għal lupus jixjieħu (6), in-numru totali ta' ċelluli T li jinfiltraw ma jiżdied mas-severità tal-marda f'dawn il-mudelli u pazjenti umani. Għalhekk, jista 'jkun hemm punt lil hinn minnu l-eżawriment jista'm'għadux jikkontrollaw il-marda. Ix-xogħol minn qabel issuġġerixxa li dawk il-pazjenti b'CD8 tad-demm periferali flimkien mal-firma TEX kienu inqas probabbli li flare meta mqabbla ma 'dawk li ma kellhomx din il-firma (52). Madankollu, dak li jseħħ fil-livell tal-organu fil-mira jibqa 'mistoqsija pendenti, u se jkun interessanti, f'xogħol futur, li jiġi ddeterminat jekk il-proporzjon ta' ċelloli eżawriti f'bijopsija jistax jiġi korrelatat mar-riżultati tal-mard.

Skont studji rilevanti, cistanche hija ħaxixa tradizzjonali Ċiniża li ilha tintuża għal sekli sħaħ biex tikkura diversi mard. Ġie ppruvat xjentifikament li jippossjedi proprjetajiet anti-infjammatorji, anti-aging, u antiossidanti. Studji wrew li cistanche hija ta 'benefiċċju għal pazjenti li jbatu minn mard tal-kliewi. L-ingredjenti attivi ta 'cistanche huma magħrufa li jnaqqsu l-infjammazzjoni, itejbu l-funzjoni tal-kliewi u jirrestawraw ċelluli tal-kliewi indeboliti. Għalhekk, l-integrazzjoni ta' cistanche fi pjan ta' trattament ta' mard tal-kliewi tista' toffri benefiċċji kbar lill-pazjenti fil-ġestjoni tal-kundizzjoni tagħhom. Cistanche jgħin biex inaqqas il-proteinurja, inaqqas il-livelli tal-BUN u tal-krejatinina, u jnaqqas ir-riskju ta 'aktar ħsara fil-kliewi. Barra minn hekk, cistanche tgħin ukoll biex tnaqqas il-livelli tal-kolesterol u tat-trigliċeridi li jistgħu jkunu perikolużi għal pazjenti li jbatu minn mard tal-kliewi.

Ikklikkja fuq is-Suppliment Cistanche Tubulosa

【Għal aktar informazzjoni: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Ikun importanti li jiġu identifikati l-mekkaniżmi li bihom kull wieħed minn dawn it-tipi u l-avvenimenti taċ-ċelluli potenzjalment ta 'ħsara huma inibiti mill-kliewi u kif terapiji eżistenti u ġodda jistgħu jaffettwawhom. Huwa ttamat li dan ix-xogħol se jippermetti lilna u lil oħrajn nimmiraw dawn il-popolazzjonijiet ta 'ċelluli T li jvarjaw b'mod aktar speċifiku, u b'hekk jinfetħu toroq terapewtiċi ġodda.

Metodi

Annimali. Ġrieden C57BL/6 inxtraw minn Jackson Laboratory. Ġrieden MRL/lpr inizjalment inkisbu minn Jackson Laboratory u nżammu fil-laboratorju tagħna. Ġrieden Fc R2B–/–.Yaa nkisbu minn Silvia Bolland (Istitut Nazzjonali ta 'Allerġija u Mard Infettiv, NIH, Rockville, Maryland, USA) u nżammu fil-laboratorju tagħna. Il-ġrieden kellhom età u l-proteinurja ġiet imkejla qabel is-sagrifiċċju, kif iddokumentat fit-Tabella Supplimentari 2.

Iżolament taċ-ċelluli T mill-kliewi u l-milsa. Iċ-ċelluli T ġew iżolati kif deskritt qabel (6). Fil-qosor, wara s-sagrifiċċju, tneħħew il-milsa, u l-annimali ġew imdewweb b'40 mL ta' HBSS sakemm seħħ it-tibjid sħiħ tal-fwied u l-kliewi. KITs ġew iżolati bl-użu tal-Octodissociator (Miltenyi Biotec) fil-preżenza ta '1600 Kunitz units/mL collagenase D (Roche Diagnostics) u 0.2 mg/mL DNAse IV (MilliporeSigma) għal 30 minuta f'37 grad. Twettqet liżi RBC, u ċ-ċelloli ġew iffiltrati permezz ta 'passatur taċ-ċelluli (100 μM najlon; Falcon, Corning). L-isplenoċiti ġew iżolati bl-użu ta 'dissoċjazzjoni mekkanika bejn 2 slides tal-ħġieġ matt u ffiltrati permezz ta' filtru tal-malji ta '70 μm wara liżi RBC.

Iċ-ċelloli kienu mtebbgħin kif deskritt qabel (6) bil-panel li ġej: anti-CD8 (Lyt-2/TIB{-105, Pac-Blue, prodott internament), anti-CD4 (GK{{9 }}.5, f'PE, mixtrija minn BioLegend), u anti-CD90.2 (Thy1.2/30H12, Al488, prodott internament) għal ġrieden MRL/lpr jew anti-CD90.2 (Thy1.2/30H12) , Al647, prodott internament) għal Fc R2B–/–.Yaa Ghost BV510 (Tonbo) intuża biex jeskludi ċelluli mejta. Għall-antikorpi kollha "in-house", il-kloni tal-hybridoma huma disponibbli kummerċjalment u l-antikorpi ġew ippurifikati kif deskritt (6).

Iċ-ċelloli T ġew magħżula bl-użu ta 'FACSAria (BD Biosciences). Wara l-għażla, iċ-ċelloli ġew maħsula darbtejn b'2 fil-mija BSA fil-PBS. Imbagħad ġew miżjuda reaġenti anti-CD45 HTO f'dilwizzjoni 1:50 għal kull wieħed mill-kampjuni magħżula. Anti-CD45 TotalSeq-A0096 30-F11 (BioLegend) intuża għall-koorti Main-Seq, u TotalSeq-C0096 30-F11 (BioLegend) intuża għaż-żewġ koorti TCR-Seq. Wara li ċ-ċelloli tat-tbajja 'HTO ġew maħsula darbtejn f'2 fil-mija BSA fil-PBS.

Preparazzjoni tal-librerija u RNA-Seq taċ-ċelluli T. Iċ-ċelloli ġew magħduda u mgħobbija fis-sistema 10x Genomics Chromium skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Ġew ġġenerati libreriji tal-espressjoni tal-ġeni, TCR, u hashtag/barcode tal-karatteristiċi tal-antikorpi, il-kwalità tagħhom ġiet evalwata permezz tal-Agilent TapeStation High Sensitivity D5000 Screentape, u l-ammonti tagħhom ġew kwantifikati bil-KAPA Library Quantification Kit for Illumina Platforms. Għall-koorti Main-Seq, intużat il-librerija 3PrimeV2; il-librerija tal-barcode tal-karatteristika ġiet ġġenerata skont il-protokoll taċ-Ċentru tal-Ġenoma ta 'New York (56). Għall-koorti TCR-Seq, il-libreriji 5PrimeV1 inkisbu minn 10x Genomics. Għall-hashtagging, segwejna l-istruzzjonijiet tal-"barcode tal-karatteristika" mill-manifattur. Il-libreriji ġew miġbura u sekwenzati fuq NovaSeq (Illumina Biosciences). Fajls FASTQ ġew iġġenerati u allinjati mal-ġenoma ta 'referenza tal-ġurdien mm10 ma' Cell Ranger 5.0.0 (10x Genomics) biex jipproduċu l-matriċi tal-għadd tal-ġeni taċ-ċelluli u taċ-ċelluli-antikorpi.

Ipproċessar tad-dejta scRNA-Seq. Id-dejta mhux ipproċessata 10x minn kull kampjun ġiet demultiplexed, u l-fajls FASTQ ġew ġġenerati bl-użu tal-pipeline "veloċi" ta' Cell Ranger (v5.0.0, 10 x Ġenomika). L-"għadd" ta' Cell Ranger intuża biex jallinja l-qari mal-ġenoma ta' referenza mm10, u t-traskrizzjoni tal-mRNA, u t-tabelli ta' kwantifikazzjoni tal-identifikatur molekulari uniku (UMI) HTO ġew iġġenerati. Il-fajls tal-matriċi tal-barcode mhux ipproċessati ġġenerati mill-pipeline Cell Ranger ġew utilizzati aktar għal analiżi downstream bl-użu tal-pakkett Seurat (v4.0.0) (12) f'R (v3.4.3).

Kontroll tal-kwalità inizjali u l-ipproċessar. Ċelloli li jesprimu inqas minn 200 ġene, jew b'aktar minn 10 fil-mija ta 'UMIs li mmappjati għad-DNA mitokondrijali, ġew iffiltrati. It-tabelli HTO ġew miżjuda mas-sett tad-dejta u nnormalizzati b'metodu ta 'proporzjon ta' log iċċentrat bl-użu tal-funzjoni "NormalizeData". L-għadd normalizzat ta' HTO intuża biex jiddetermina jekk kull żibeġ tal-ġel fl-emulsjoni kienx fih ċellula waħda bl-użu tal-funzjoni Seurat "MULTIseqDemux" u spezzjoni manwali taċ-ċelloli, fejn ċellula kienet ikkunsidrata singlet jekk l-espressjoni ta' HTO waħda kienet tammonta għal aktar minn 70 fil-mija tal-espressjoni HTO totali f'dik iċ-ċellula; inkella, iċ-ċellula kienet ikkunsidrata bħala doublet u mneħħija. Il-valuri tal-espressjoni tal-ġeni għal kull ċellula ġew log2 -normalizzati bl-użu tal-funzjoni "NormalizeData", fejn l-espressjoni ta' ġene ġiet normalizzata għall-espressjoni totali tal-ġeni kollha f'dik iċ-ċellula u skalat b'fattur ta' 10,{{8 }}. L-UMI, il-kontenut mitokondrijali, u l-punteġġi tal-ġene tal-emoglobulina u l-kontenut tal-ġene ribosomali ġew "regressed out" bl-użu tal-funzjoni "ScaleData" ta 'Seurat.

Tnaqqis tad-dimensjonijiet u raggruppament. Ġeni varjabbli ġew skoperti bl-użu tal-metodu "mean.var.plot" fil-funzjoni "FindVariableFeatures" b'cutoff default, li tikkalkula l-espressjoni medja u t-tixrid (log[varjanza/medja]) għal kull ġene, segwita billi tiġbor id-dejta f'20 bins ibbażati fuq l-espressjoni medja tagħhom. Ġeni varjabbli mbagħad ġew magħżula abbażi ta 'dispersjoni b'punteġġ z f'kull bin. Dawn il-ġeni varjabbli ntużaw għat-tnaqqis tad-dimensjonijiet ibbażati fuq l-analiżi tal-komponenti prinċipali (PCA) bl-użu tal-funzjoni "RunPCA". "ElbowPlot" intuża biex jivvaluta l-ewwel 50 komponent prinċipali, u l-komponenti prinċipali li ammontaw għall-akbar varjabbiltà fid-dejta ġew magħżula għal aktar tnaqqis dimensjonali UMAP u analiżi ta 'clustering.

Biex jiġu identifikati gruppi distinti ta 'ċelloli, twettqet raggruppament mhux sorveljat bl-użu tal-funzjoni "FindClusters", li tikkalkula l-eqreb ġirien k skond l-espressjoni tal-ġeni varjabbli fiċ-ċelloli kollha, u b'hekk tinbena graff kondiviż tal-ġar eqreb bl-użu tal-algoritmu Louvain. Biex nevitaw raggruppament żejjed, ittestjajna parametri ta' riżoluzzjoni ("res") differenti, li jvarjaw minn 0.1 sa 2 f'żidiet ta' 0}.1, u l-progressjoni tar-raggruppament ġiet ivvalutata u viżwalizzata bl-użu ta' "Cluster". " (v 0.4.3) (57). Ir-riżoluzzjoni ottima kienet iddeterminata bbażata fuq separazzjoni kontinwa qabel "over clustering" kif osservat mill-crossover dejjem jiżdied bejn clusters. Raggruppament b'riżoluzzjoni baxxa mbagħad ġie definit bħala l-analiżi taċ-ċelluli kollha fi ħdan koorti sħiħa, filwaqt li raggruppament b'riżoluzzjoni għolja ġie definit bħala raggruppament fuq sottopopolazzjoni magħżula minn qabel, jiġifieri, ċelloli CD4 plus , CD8 plus , jew Treg definiti qabel f'riżoluzzjoni baxxa tagħna. analiżi. Abbażi ta' dawn l-osservazzjonijiet għażilna r-riżoluzzjonijiet 0.9, 1.4, {{20}}.6, u 0.9, rispettivament, għal Main-Seq, CD4 plus , CD4 plus Treg sub, u CD8 plus minn koorti 1 u riżoluzzjoni 0.7 għal koorti magħquda CD8 flimkien ma 'ċelluli T. Raggruppamenti ta 'ċelluli ġew viżwalizzati bl-użu ta' plottijiet ta 'tnaqqis dimensjonali UMAP.

Il-funzjoni "FindAllMarkers" b'settings default ġiet utilizzata biex issib DEGs f'kull cluster, meta mqabbla mal-clusters l-oħra kollha, bl-użu tat-test Wilcoxon rank-sum b'ġeni misjuba f'minimu ta' 10 fil-mija taċ-ċelloli, minimu ta '0.25 bidla medja log darbiet, u minimu ta' 0.01 valur P aġġustat minn Bonferroni.

Analiżi tal-armonija. Għall-UMAP magħquda fil-Figura 8, it-3 koorti mmexxija b'mod indipendenti ġew magħquda bl-użu ta' Harmony (58) b'settings tal-parametri default.

Evalwazzjoni taċ-ċiklu taċ-ċelluli. Il-funzjoni "CellCycleScoring" f'Seurat ġiet utilizzata biex tikkalkula l-punteġġ tal-espressjoni tal-markatur tal-fażi G1, G2/M, u S f'kull ċellula bl-użu tal-istrateġija tal-punteġġ deskritta qabel (59). In-numru ta 'ċelluli determinati li huma fil-fażi G1, G2/M, jew S ġie kkalkulat fuq bażi ta' kull cluster, u d-devjazzjoni mid-distribuzzjoni ġenerali ġiet evalwata b'analiżi χ2.

GSEA u l-immappjar tal-espressjoni. Il-valuri P għal GSEA ġew determinati bl-użu tat-test Wilcoxon għal firem ta' sett ta' ġeni ppubblikati kif definit fit-Tabella Supplimentari 1. Bl-użu ta' "ggplot2" f'Seurat, il-valuri P –log10 ġew impinġi fuq l-UMAPs.

Analitika addizzjonali. Bar plots, dot plots, u PCA plots inbnew bl-użu ta 'ggplot2 f'R. Heatmaps ġew iġġenerati bl-użu tal-funzjoni "heatmap" f'R.

Analiżi tad-dejta TCR. Id-dejta tat-TCR ġiet ipproċessata bl-użu ta' cell ranger vdj b'referenza {{0}} refdata-cellranger-vdj-GRCm38-alts-ensembl-3.1.0 biex tgħaqqad it-TCR u l-ktajjen u tiddetermina l-klonotipi . Ċelloli b'1 TCR produttiv ( u ) inżammu għal aktar analiżi, filwaqt li ktajjen TCR mhux produttivi ġew esklużi. Iċ-ċelloli T klonali ġew definiti bħala ċelloli li jesprimu riċetturi TCR- u - kondiviżi b'sekwenzi CDR3 identiċi fil-livell tan-nukleotidi.

Analiżi psewdotime trajettorja. Analiżi tat-trajetorja bl-użu tal-għadd tal-ġeni pproċessati b'Seurat saret bl-użu ta' Monocle 3 (verżjoni 0.1.3) biex timmudella CD4 flimkien ma' differenzjazzjoni taċ-ċelluli T. Il-metodu ta 'inkorporazzjoni ta' graff invers DDRTree intuża biex inaqqas id-dimensjonalità, iċ-ċelloli ġew ordnati tul trajettorja bl-użu tal-funzjoni "orderCells", u t-trajettorja ġiet viżwalizzata fl-ispazju dimensjonali mnaqqas.

Biex timmudella CD8 flimkien ma 'differenzjazzjoni taċ-ċelluli T, użajna Slingshot b'"start. clubs" issettjat bħala cluster B6/naive. Iċ-ċelloli ġew ordnati minn pseudo time Slingshot u miġbura bħala raggruppamenti Seurat biex jipproġettaw it-trajettorja tal-cluster. Ir-riżultat tan-nisel tat-trajettorja Slingshot ġie plottjat fuq iċ-ċellula CD8 plus Seurat UMAP.

Analiżi tan-netwerk regolatorju tat-TF. Il-fluss tax-xogħol SCENIC v.1.1.2 ġie utilizzat f'R biex jidentifika regulons bl-użu tal-għadd u l-clusters ipproċessati minn Seurat skont studju preċedenti (60). Imbagħad inħolqu mapep tas-sħana kif deskritt hawn fuq.

Skor istoloġiku. Il-preparazzjoni tal-istoloġija tal-kliewi u l-punteġġ twettqu kif definit qabel (61).

Id-disponibbiltà tad-dejta u l-materjali. L-analiżi u l-viżwalizzazzjonijiet kollha saru f'R. Metodoloġija u analiżi speċifiċi bl-użu ta 'programmi Seurat ippubblikati huma dettaljati fit-taqsima Metodi. Id-dejta, il-metadejta, u l-outputs tal-analiżi bħall-identifikazzjoni tal-cluster huma depożitati fiċ-Ċentru Nazzjonali għall-Informazzjoni tal-Bijoteknoloġija tal-Gene Expression Omnibus (GSE197339).

Statistika. L-istatistika ġiet ikkalkulata f'R kif indikat f'taqsimiet speċifiċi għall-analiżi jew GraphPad Prism permezz ta' 1-mod ANOVA bit-test ta' Tukey għal paraguni multipli, 2-mod ANOVA b'miżuri ripetuti, jew analiżi χ2 kif definita fil-leġġendi tal-figura, bil-valuri P rappreżentati bħala *P < 0.05, **P < 0.{{10}}1, ***P < 0.001, ****P < 0.0001. P <0.05 kien ikkunsidrat statistikament sinifikanti.

Approvazzjoni ta' studju. Ix-xogħol kollu ġie approvat jew mill-Kumitat Istituzzjonali għall-Kura u l-Użu ta 'l-Annimali ta' l-Università ta 'Pittsburgh jew ta' Yale University.

Kontribuzzjonijiet tal-awtur

JST u MJS ikkonċepiw l-istudju. SS, MC, JST, u MJS żviluppaw metodoloġija. JST u SS ġew investigati. JST u SS dejta viżwalizzata. JST u MJS kisbu finanzjament. JST u MJS ipprovdew amministrazzjoni tal-proġett. JST u MJS ipprovdew superviżjoni. JST u MJS kitbu l-abbozz oriġinali. JST, MJS, SS, u MC rrevedew u editjaw l-abbozz.

Rikonoxximenti

Nixtiequ nirringrazzjaw lil Minjung Kim għall-isforzi bla heda tagħha fil-laboratorju, li ppermettiet li dan ix-xogħol jitwettaq, u nirrikonoxxu ħarsa kritika lejn il-proġett minn Kevin Nickerson, Rachael Gordon, u Peter Lipsky u reviżjoni kritika ta’ dan ix-xogħol minn Fadi Lakkis u Warren Shlomchik. Barra minn hekk, nixtiequ nirringrazzjaw lill-Università ta 'Pittsburgh Single Cell Core u speċifikament lil Tracy Tabib, li għenu fit-tlestija tal-preparazzjoni tal-librerija u t-teknoloġija 10x Genomics.

Il-finanzjament ġie pprovdut minn Lupus Research Alliance, Novel Research Grant (lil JST); NIH/Istitut Nazzjonali tal-Artrite u Mard Muskoloskeletali u tal-Ġilda għotja K08AR075056 (lil JST); u NIH/Istitut Nazzjonali ta 'Allerġija u Mard Infettiv għotja R01 AI137132 (lil MJS).

Indirizz korrispondenza lil:Jeremy S. Tilstra, 3500 Terrace Street, BST S705A, Pittsburgh, Pennsylvania 15261, USA. Telefon: 412.383.8861; Jew lil Mark J. Shlomchik, W1052 Biomedical Science Tower, 200 Lothrop Street, Pittsburgh, Pennsylvania 15261, USA. Telefon: 412.648.8771.

1. Hope HC, Salmond RJ. Timmira lejn il-mikroambjent tat-tumur u l-metaboliżmu taċ-ċelluli T għal immunoterapija effettiva tal-kanċer. Eur J Immunol. 2019;49(8):1147–1152.

2. Jiang Y, et al. Eżawriment taċ-ċelluli T fil-mikroambjent tat-tumur. Ċellula Mewt Dis. 2015;6:e1792.

3. Scharping NE, et al. L-istress mitokondrijali indott minn stimulazzjoni kontinwa taħt ipoksja jmexxi malajr l-eżawriment taċ-ċelluli T. Nat Immunol. 2021;22(2):205–215.

4. Clark MR, et al. Il-patoġenesi u l-implikazzjonijiet terapewtiċi ta 'infjammazzjoni tubulointerstizjali fin-nefrite tal-lupus umana. Semin Nephrol. 2015;35(5):455–464.

5. Hsieh C, et al. Tbassir tar-riżultati ta 'lupus nefrite b'infjammazzjoni tubulointerstizjali u ċikatriċi. Kura tal-Artrite Res (Hoboken). 2011;63(6):865–874.

6. Tilstra JS, et al. Iċ-ċelluli T li jinfiltraw mill-kliewi fin-nefrite tal-lupus tal-murine huma eżawriti metabolikament u funzjonalment. J Clin Invest. 2018;128(11):4884–4897.

7. Schmitz JE, et al. Kontroll tal-viremja fl-infezzjoni tal-virus tal-immunodefiċjenza simjana minn CD8 flimkien ma' limfoċiti. Xjenza. 1999;283(5403):857–860.

8. Paley MA, et al. Proġenitur u subsettijiet terminali ta 'ċelluli CD8 flimkien ma' T jikkooperaw biex ikun fihom infezzjoni virali kronika. Xjenza. 2012;338(6111):1220–1225.

9. Lanata CM, et al. Approċċ fenotipiku u ġenomika f'koorti multi-etnika għal sottotip ta' lupus erythematosus sistemiku. Nat Commun. 2019;10(1):3902.

10. Peterson KS, et al. Karatterizzazzjoni ta 'eteroġeneità fil-patoġenesi molekulari ta' lupus nefrite minn profili traskrizzjoni ta 'glomeruli maqbuda bil-laser. J Clin Invest. 2004;113(12):1722–1733.

11. Arazi A, et al. Il-pajsaġġ taċ-ċelluli immuni fil-kliewi ta 'pazjenti b'nefrite tal-lupus. Nat Immunol. 2019;20(7):902–914.

12. Butler A, et al. L-integrazzjoni tad-dejta transcriptomic b'ċellula waħda f'kundizzjonijiet, teknoloġiji u speċi differenti. Nat Biotechnol. 2018;36(5):411–420.

13. Hashimoto K, et al. Traskriptomika b'ċellula waħda tiżvela l-espansjoni taċ-ċelluli T ċitotossiċi CD4 f'supercentenarians. Proc Natl Acad Sci US A. 2019;116(48):24242–24251.

14. Singer M, et al. Modulu tal-ġene distint għal disfunzjoni mhux akkoppjat mill-attivazzjoni fiċ-ċelluli T li jinfiltraw it-tumur. Ċellula. 2016;166(6):1500–1511.

15. Stubbington MJ, et al. Atlas ta' traskritomi taċ-ċelluli T CD4( plus ) tal-ġrieden. Biol Dirett. 2015;10:14.

16. Tibbitt CA, et al. Is-sekwenzjar tal-RNA b'ċellula waħda tar-rispons taċ-ċellula T helper għad-dust mites tad-dar jiddefinixxi firma distinta tal-espressjoni tal-ġeni fiċ-ċelloli Th2 tal-passaġġ tal-arja. Immunità. 2019;51(1):169–184.

17. Mackay LK, et al. Il-mogħdija ta 'żvilupp għal CD103( plus )CD8 flimkien ma' ċelluli T tal-memorja residenti fit-tessuti tal-ġilda. Nat Immunol. 2013;14(12):1294–1301.

18. Chen PM, et al. L-ipoksja tat-tessut tal-kliewi tiddetta korriment medjat miċ-ċelluli T fin-nefrite tal-lupus murina. Sci Transl Med. 2020;12(538):eaay1620.

19. Aubert N, et al. Il-karatterizzazzjoni ta' meta-firma molekulari ta' ċelluli T regolatorja tidentifika l-ġene pro-enkephalin bħala markatur ġdid fil-ġrieden [preprint]. Imqiegħed fuq bioRxiv 6 ta' Marzu, 2020.

20. Martin MD, Badovinac VP. Id-definizzjoni taċ-ċellula T tal-memorja CD8. Quddiem Immunol. 2018;9:2692.

21. Willinger T, et al. Il-firem molekulari jiddistingwu l-memorja ċentrali tal-bniedem mis-sottosettijiet taċ-ċelluli T CD8 tal-memorja effettur. J Immunol. 2005;175(9):5895–5903.

22. Ahrends T, et al. L-għajnuna taċ-ċelluli CD4 flimkien ma 'T toħloq CD8 flimkien ma' ċelluli T tal-memorja b'kapaċitajiet ta 'tifkira innati u indipendenti mill-għajnuna. Nat Commun. 2019;10(1):5531.

23. Yusuf I, et al. Il-produzzjoni taċ-ċellula helper follikulari T taċ-ċentru ġerminali IL-4 tiddependi fuq ir-riċettur tal-molekula ta' attivazzjoni limfoċitika ta' sinjalazzjoni (CD150). J Immunol. 2010;185(1):190–202.

24. Luzina IG, et al. Formazzjoni spontanja ta 'ċentri ġerminali fil-ġrieden awtoimmuni. J Leukoc Biol. 2001;70(4):578–584.

25. Blaszczyk K, et al. Ir-rwol uniku ta 'STAT2 fit-traskrizzjoni u risponsi antivirali kostituttivi u indotti minn IFN. Fattur tat-Tkabbir taċ-Ċitokini Rev 2016;29:71–81.

26. Swarnalekha N, et al. Iċ-ċelloli helper residenti T jippromwovu reazzjonijiet umorali fil-pulmun. Sci Immunol. 2021;6(55):eabb6808.

27. Hayward SL, et al. L-indikazzjonijiet ambjentali jirregolaw ir-riprogrammazzjoni epiġenetika tal-memorja CD8 residenti fil-passaġġ tan-nifs flimkien ma 'ċelluli T. Nat Immunol. 2020;21(3):309–320.

28. Sacher AG, et al. CD4 ċitotossiċi flimkien ma 'ċelluli T fil-kanċer tal-bużżieqa tal-awrina-liċenzja ġdida biex joqtol. Ċellula tal-Kanċer. 2020;38(1):28–30.

29. Maehara T, et al. CD4 plus T limfoċiti ċitotossiċi jistgħu jinduċu apoptożi taċ-ċelluli endoteljali fl-isklerożi sistemika. J Clin Invest. 2020;130(5):2451–2464.

30. Miragaia RJ, et al. Traskriptomika ta 'ċellula waħda ta' ċelluli T regolatorji tiżvela trajettorji ta 'adattament tat-tessuti. Immunità. 2019;50(2):493–504.

31. Doering TA, et al. L-analiżi tan-netwerk turi ġeni konnessi ċentralment u mogħdijiet involuti fl-eżawriment taċ-ċelluli T CD8 flimkien mal-memorja. Immunità. 2012;37(6):1130–1144.

32. Li J, et al. Livelli għoljin ta 'djar jippromwovu l-eżawriment ta' ċelluli CD8 u T kontra t-tumur. Quddiem Immunol. 2018;9:2981.

33. Seo H, et al. Il-fatturi ta 'traskrizzjoni TOX u TOX2 jikkooperaw ma' fatturi ta 'traskrizzjoni NR4A biex jimponu eżawriment taċ-ċelluli T CD8 flimkien ma' T. Proc Natl Acad Sci US A. 2019;116(25):12410–12415.

34. Li H, et al. Ċelloli T CD8 li ma jiffunzjonawx jifformaw kompartiment proliferattiv, regolat b'mod dinamiku fi ħdan il-melanoma umana. Ċellula. 2020;181(3):747.

35. Celhar T, Fairhurst AM. L-immudellar kliniku ta 'lupus erythematosus sistemiku: xebh, differenzi u stejjer ta' suċċess. Rewmatoloġija (Oxford). 2017;56(suppl 1):i88–i99.

36. Massengill SF, et al. Nefrite SLE hija assoċjata ma 'espansjoni oligoklonali ta' ċelluli T intrarenali. Am J Kidney Dis. 1998;31(3):418–426.

37. Winchester R, et al. Karatteristiċi immunoloġiċi ta 'ċelluli T intrarenali: traffikar ta' CD8 estiża flimkien ma 'klonotipi tal-katina taċ-ċelluli T f'nefrite lupus progressiva. Artrite Rheum. 2012;64(5):1589–1600.

38. Murata H, et al. Repertorju tar-riċetturi taċ-ċelluli T taċ-ċelluli T fil-kliewi ta 'pazjenti b'nefrite tal-lupus. Artrite Rheum. 2002;46(8):2141–2147.

39. Yost KE, et al. Sostituzzjoni klonali ta' ċelluli T speċifiċi għat-tumur wara l-imblokk tal-PD-1. Nat Med. 2019;25(8):1251–1259.

40. Collier JL, et al. Truf mhux daqshekk opposti tal-ispettru: CD8 flimkien ma 'disfunzjoni taċ-ċelluli T tul infezzjoni kronika, kanċer, u awtoimmunità. Nat Immunol. 2021;22(7):809–819.

41. Chang A, et al. Aspetti ċellulari tal-patoġenesi tal-lupus nefrite. Curr Opin Rheumatol. 2021;33(2):197–204.

42. Kiner E, et al. Il-fenotipi taċ-ċelluli CD4 u T tal-musrana huma continuum iffurmat minn mikrobi, mhux minn arketipi TH. Nat Immunol. 2021;22(2):216–228.

43. Peine M, et al. T-bet( plus )GATA-3( plus ) ċelluli ibridi Th1/Th2 iqumu in vivo, jistgħu jiżviluppaw direttament minn prekursuri naive, u jillimitaw l-infjammazzjoni immunopatoloġika. PLoS Biol. 2013;11(8):e1001633.

44. Huang S. Ċelloli T-helper ibridi: jistabbilizzaw iċ-ċentru moderat f'sistema polarizzata. PLoS Biol. 2013;11(8):e1001632.

45. Scharping NE, et al. Il-mikroambjent tat-tumur jirreprimi l-bijoġenesi mitokondrijali taċ-ċelluli T biex imexxi insuffiċjenza u disfunzjoni metabolika taċ-ċelluli T intratumorali. Immunità. 2016;45(3):701–703.

46. ​​Scharping NE, et al. L-istress mitokondrijali indott minn stimulazzjoni kontinwa taħt ipoksja jmexxi malajr l-eżawriment taċ-ċelluli T. Nat Immunol. 2021;22(2):205–215.

47. Acharya N, et al. Is-sinjalar tal-glukokortikojdi endoġenu jirregola d-differenzjazzjoni taċ-ċelluli T CD8 flimkien ma 'l-iżvilupp ta' disfunzjoni fil-mikroambjent tat-tumur. Immunità. 2020;53(3):658–671.

48. Mohan C, et al. Dissezzjoni ġenetika tal-patoġenesi tal-lupus: riċetta għal awtoantikorpi nekrofiliċi. J Clin Invest. 1999;103(12):1685–1695.

49. Hedrich CM, et al. Il-modulatur tal-element ta 'rispons cAMP jikkontrolla l-espressjoni ta' IL2 u IL17A waqt l-impenn tan-nisel CD4 u d-distribuzzjoni tas-sottosett fil-lupus. Proc Natl Acad Sci US A. 2012;109(41):16606–16611.

50. ElTanbouly MA, et al. VISTA huwa regolatur tal-punt ta' kontroll għal quiescence naïve taċ-ċelluli T u tolleranza periferali. Xjenza. 2020;367(6475):eaay0524.

51. Zarour HM. It-treġġigħ lura tad-disfunzjoni taċ-ċelluli T u l-eżawriment fil-kanċer. Clin Cancer Res. 2016;22(8):1856–1864.

52. McKinney EF, et al. Eżawriment taċ-ċelluli T, ko-stimulazzjoni u riżultat kliniku fl-awtoimmunità u l-infezzjoni. Natura. 2015;523(7562):612–616.

53. Maxwell R, et al. Impatt kuntrastanti tal-kortikosterojdi fuq l-effikaċja tal-immunoterapija kontra l-PD-1 għal istoloġiji tat-tumur li jinsabu ġewwa jew barra s-sistema nervuża ċentrali. Onkoimmunoloġija. 2018;7(12):e1500108.

54. Flint TR, et al. IL-6 ikkawżat mit-tumur jipprogramma mill-ġdid il-metaboliżmu tal-ospitanti biex irażżan l-immunità kontra t-tumur. Cell Metab. 2016;24(5):672–684.

55. Hanoteau A, et al. It-trattament ta 'cyclophosphamide jirregola l-bilanċ taċ-ċelluli T funzjonali/eżawriti speċifiċi għat-tumur CD8 flimkien ma' ċelluli T. Onkoimmunoloġija. 2017;6(8):e1318234.

56. Stoeckius M, et al. Cell Hashing b'antikorpi bil-barcode jippermetti multiplexing u skoperta doppja għal ġenomika b'ċellula waħda. Ġenoma Biol. 2018;19(1):224.

57. Zappia L, Oshlack A. Clustering trees: a viżwalizzazzjoni għall-evalwazzjoni ta 'clusterings f'riżoluzzjonijiet multipli. Gigascience. 2018;7(7):giy083.

58. Korsunsky I, et al. Integrazzjoni veloċi, sensittiva u preċiża ta' data ta' ċellula waħda ma' Harmony. Metodi Nat. 2019;16(12):1289–1296.

59. Tirosh I, et al. Dissezzjoni tal-ekosistema multiċellulari ta 'melanoma metastatika minn RNA-seq ta' ċellula waħda. Xjenza. 2016;352(6282):189–196.

60. Aibar S, et al. XENIKA: inferenza u raggruppament tan-netwerk regolatorju b'ċellula waħda. Metodi Nat. 2017;14(11):1083–1086.

61. Tilstra JS, et al. L-espressjoni TLR9 intrinsika taċ-ċellula B hija protettiva fil-lupus murini. J Clin Invest. 2020;130(6):3172–3187.

【Għal aktar informazzjoni: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】