Determinazzjoni Ta 'Ħames Komponenti f'Rehmannia Glutinosa U Stabbiliment Ta' Marki tas-Swaba' HPLC

Astratt:Il-metodu tad-determinazzjoni tal-kontenut ta 'ħames komponenti fiRehmannia glutinosa, jiġifieri,rehmannoside D, leonurin,echinacoside,cistancheside Auverbascoside, ġie stabbilit, u l-marki tas-swaba 'kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja (HPLC) ta 'Rehmannia glutinosa ġiet stabbilita biex tipprovdi bażi xjentifika għall-kontroll tal-kwalità ta' Rehmannia glutinosa. Intużat il-kolonna Shiseido CAPCELL PAK C18, b'soluzzjoni ta' aċetonitrile-0.1% ta' aċidu formiku bħala l-fażi mobbli, elużjoni tal-gradjent, temperatura tal-kolonna ta' 30 grad, determinazzjoni ta' wavelength varjabbli, u rata ta' fluss ta' 1.0 mL/min. Il-marki tas-swaba' HPLC ta' Rehmannia glutinosa ġiet analizzata mill-"Sistema ta' Evalwazzjoni ta' Xebh tal-Marki tas-Swaba' Kromatografika tal-Mediċina Ċiniża (2012 Edition)" software to evaluate its quality consistency. The results showed that according to the established content determination method, the five components had a good linear relationship within their respective concentration ranges (R2>{{0}}.999 0), l-RSD tat-test ta' preċiżjoni, test ta' ripetibbiltà u test ta' stabbiltà kien 0.12%~1.58%, u r-rata medja ta' rkupru tal-kampjun kienet 96.5% ~ 98.6%; il-marki tas-swaba' Rehmannia glutinosa HPLC stabbilita identifikat 23 quċċata komuni, u x-xebh bejn il-kampjun Rehmannia glutinosa u l-marki tas-swaba 'kontroll kien 0.904 ~ 0.950. Ir-riżultati jissuġġerixxu li l-metodu ta 'determinazzjoni tal-kontenut stabbilit u l-marki tas-swaba' HPLC huma adattati għall-evalwazzjoni tal-kwalità ta' Rehmannia glutinosa u l-identifikazzjoni ta 'Rehmannia glutinosa nej u Rehmannia glutinosa imsajjar, bi preċiżjoni għolja u riproduċibbiltà tajba, u jistgħu jipprovdu appoġġ tekniku għall-kontroll tal-kwalità ta' Materjali mediċinali Rehmannia glutinosa.

Kliem ewlieni:Rehmannia glutinosa; determinazzjoni tal-kontenut; marki tas-swaba'; evalwazzjoni tal-kwalità

CISTANCHE ĠDIDA BIL-ĦAXUEXECHINACOSIDE,CISTANCHESIDE AUVERBASCOSIDE

Rehmannia glutinosahuwa t-tuberu tal-għeruq frisk jew imnixxef tal-pjanta Scrophulariaceae Rehmannia glutinosa Libosch. Minħabba metodi ta' pproċessar differenti, hija prinċipalment maqsuma f'rehmannia friska, rehmannia nejja u rehmannia imsajra [1-2]. L-oqsma ewlenin tal-produzzjoni huma Henan, Shanxi, Shaanxi, eċċ art. Fost dawn, rehmannia glutinosa mhux ipproċessat għandu l-effetti li jneħħi s-sħana u li jkessaħ id-demm, li jalimenta l-yin u jippromwovi l-produzzjoni tal-fluwidu, u jintuża prinċipalment biex jikkura s-sħana fid-demm, tossini sħun u spots, eċċ.; rehmannia glutinosa imsajjar għandu l-effetti li jsostni d-demm u l-yin, jimlew l-essenza u jimlew il-mudullun, u jintuża prinċipalment biex jikkura defiċjenza tad-demm, klorożi, eċċ Palpitazzjonijiet, irrekwitezza, eċċ.[1-2]. It-tnejn għandhom proprjetajiet u togħmiet differenti, iżda t-tnejn jappartjenu għall-meridjani tal-fwied u tal-kliewi. Rehmannia glutinosa fih komponenti kimiċi kumplessi, prinċipalment inklużi iridojdi, iononi, phenylethanol glycosides, flavonoids, eċċ. [3-5].

Wara li Rehmannia glutinosa tiġi pproċessata b'metodi ta' pproċessar differenti, it-tipi, il-kontenuti u l-proporzjonijiet ta' komponenti kimiċi f'kull prodott ipproċessat ivarjaw ħafna, li jirriżultaw f'differenzi sinifikanti fl-attività farmakoloġika tiegħu [6-10]. skond

Studji relatati[11-12] juru li fil-proċess ta' Rehmannia glutinosa li tinbidel minn "nej" għal "imsajjar", il-kontenut ta' komponenti kimiċi bħal catalpol, motherwort, stachyose, u aċidi amminiċi kollha naqsu b'mod sinifikanti, u l-kontenuti ta 'fruttożju, 5-hydroxymethylfurfural, eċċ. Il-kontenuti ta' , isorebascoside, eċċ żdiedu b'mod sinifikanti. Fil-preżent, il-kontroll tal-kwalità tar-rehmannia glutinosa nej u msajjar juża prinċipalment il-kontenut ta 'catalpol u rehmanniaside D bħala indikaturi ta' evalwazzjoni. L-indikaturi tas-sistema ta 'evalwazzjoni huma relattivament uniċi, li jagħmilha diffiċli biex tiġi kkontrollata b'mod komprensiv il-kwalità ta' rehmannia glutinosa. Barra minn hekk, studji wrew li l-kontenut ta 'rehmannia glutinosa D jinbidel qabel u wara l-ipproċessar. Huwa żgħir u għandu speċifiċità fqira fil-karatterizzazzjoni tal-bidliet fil-kompożizzjoni wara l-ipproċessar u l-grad ta 'proċessar [12-13].

Għalhekk, sabiex tiġi evalwata l-kwalità ta 'Rehmannia glutinosa b'mod aktar komprensiv, dan l-istudju stabbilixxa r-relazzjoni bejn rehmanniaside D u Yimu f'Rehmannia glutinosa.

Metodi ta 'determinazzjoni għall-kontenut ta' ħames komponenti komuni, inklużi glucoside, echinaceaside, cistancheoside A, u verbascoside, u stabbilixxa marka tas-swaba 'HPLC ta' Rehmannia glutinosa biex janalizza l-kontenut tal-komponenti ewlenin f'Rehmannia glutinosa minn żoni ta 'produzzjoni differenti u qabel u wara l-ipproċessar, sabiex tiġi pprovduta informazzjoni għall-kontroll tal-kwalità ta’ Rehmannia glutinosa. Appoġġ tekniku.

Strumenti, reaġenti u drogi tat-test

Agilent 1260 kromatografu likwidu ta' prestazzjoni għolja (id-ditekter huwa firxa tad-dijodi); bilanċ analitiku elettroniku ta' medda varjabbli (METTLER TOLEDO); cleaner ultrasoniku diġitali (Shanghai Ultrasonic Instrument Factory, KH-500DE). Il-metanol (Sinopharm Group) huwa grad analitiku; acetonitrile (Merck) huwa grad kromatografiku; l-ilma huwa ilma bbottiljat Watsons. Sustanza ta' referenza Rehmannia glutinosa D (numru tal-lott RFSD8401909016, purità 98.0%), sustanza ta' referenza tal-leonurus glycoside (numru tal-lott RFS-Y22002208010, purità 98.0%), u sustanza ta' referenza cistancheside A (lott numru RFS-R05002009014, purità 96.0%) kienu kollha mixtrija minn Chengdu Ruifensidedan Biotechnology Co., Ltd.; Is-sustanza ta' referenza tal-echinacoside (numru tal-lott 111670-201907, purità 91.8%) u s-sustanza ta' referenza verbascoside (numru tal-lott 11530-201914, purità 95.2%) kollha nxtraw mill-Istituti tal-Ispezzjoni tal-Ikel u tad-Droga taċ-Ċina. Kampjuni ta 'Rehmannia (SX1 ~ SX4, HN1 u HN2) inġabru minn żoni ta' produzzjoni differenti (ara Tabella 1), li minnhom SX4 u HN2 ġew steamed minn SX1 u HN1 rispettivament, u SX2 u SX3 inġabru mill-istess żona ta 'produzzjoni. Il-kampjuni kollha ġew identifikati bħala awtentiċi minn Song Pingshun, prattikant ewlieni tal-mediċina Ċiniża tal-Istitut Provinċjali tal-Kontroll tad-Droga ta 'Gansu.

Tabella 1 Informazzjoni ta 'kampjuni ta' Semen Rehmanniae

2.1 Kundizzjonijiet kromatografiċi

Intużat il-kolonna Shiseido CAPCELL PAK C18 (250.0 mm × 4.6 mm, 5 μm), l-acetonitrile intuża bħala fażi mobbli A, u ntużat soluzzjoni ta' aċidu formiku 0.1% bħala fażi mobbli B . Il-kundizzjonijiet ta' elużjoni tal-gradjent kienu: 0-3 min, 1%A; 3-9 min, 1%A→5%A; 9-24 min, 5%A→35%A; 24-35 min, 35%A→65%A; 35-40 min, 65%A→90%A. Sejbien ta' wavelength varjabbli (0-24 min, 203 nm; 24-40 min, 330 nm). Il-volum tal-injezzjoni kien ta '15 μL tas-soluzzjoni ta' referenza u 20 μL tas-soluzzjoni tal-kampjun.

2.2 Preparazzjoni tas-soluzzjoni

2.2.1 Preparazzjoni tas-soluzzjoni ta' referenza

Ħu ammonti xierqa tal-ħames sustanzi ta' referenza ta' hawn fuq, żid 70% metanol biex tħejji soluzzjoni ta' referenza mħallta b'konċentrazzjoni tal-massa ta' 0.4 mg/mL.

2.2.2 Preparazzjoni tas-soluzzjoni tat-test

Iżen madwar 1.0 g ta 'trab Rehmannia (mgħoddi mill-għarbiel Nru 2), iżen preċiż, poġġi f'kunjett koniku b'tapp, żid b'mod preċiż 25 mL ta' 70% metanol, issiġilla, iżen, ittratta ultrasonikament (qawwa 300 W, frekwenza 50 kHz) għal 30 min, ħalliha tiksaħ għat-temperatura tal-kamra, iżen mill-ġdid, żid il-massa mitlufa b'70% metanol, iffiltra, u ħu l-filtrat biex tikseb.

2.3 Investigazzjoni metodoloġika

2.3.1 Investigazzjoni tal-ispeċifiċità

Ħu s-soluzzjoni ta' referenza mħallta taħt "2.2.1" u s-soluzzjoni tat-test (kampjun SX1) taħt "2.2.2", u injetta u kejjel skond il-kundizzjonijiet kromatografiċi taħt "2.1". Ir-riżultati juru li l-kromatogramma tal-kampjun Rehmannia tippreżenta quċċata kromatografika bl-istess ħin ta 'żamma bħall-istandards ta' referenza ta 'Rehmannia glutinosa D, Leonurin, Echinacoside, Cistanche deserticola A, u Verbascoside (ara Figura 1), li jindika li dan il-metodu għandu qawwa qawwija. l-ispeċifiċità.

2.3.2 Investigazzjoni tar-relazzjoni lineari

Żid 70% metanol mas-soluzzjoni ta 'referenza mħallta, iddilwa 5 darbiet, 10 darbiet, 25 darba, 50 darba, 100 darba, u 250 darba rispettivament, u injetta u kejjel skond il-kundizzjonijiet kromatografiċi taħt "2.1". Il-kurvi standard ġew imfassla bil-konċentrazzjoni tal-massa ta 'kull referenza bħala l-assi orizzontali (x) u l-erja tal-quċċata kromatografika korrispondenti bħala l-assi vertikali (y). Ir-riżultati huma murija fit-Tabella 2, li tindika li kull komponent għandu relazzjoni lineari tajba fil-medda ta 'konċentrazzjoni tal-massa korrispondenti.

1.rehmannioside D; 2. leonuride; 3. echinacoside; 4. castanoside A;5. acteoside

Figura 1 Kromatogrammi tal-investigazzjoni tal-ispeċifiċità

Tabella 2 Relazzjoni lineari ta' 5 komponenti f'Semen Rehmanniae

2.3.3 Investigazzjoni ta' preċiżjoni

Ħu s-soluzzjoni tat-test (kampjun SX1) taħt "2.2.2", u wettaq it-test tal-injezzjoni skont il-kundizzjonijiet kromatografiċi taħt "2.1". Injetta l-kampjun 6 darbiet kontinwament, irreġistra l-ogħla erja ta 'kull komponent, u kkalkula l-ogħla erja RSD ta' rehmannia glutinosa D, motherwort glycoside, echinacea glycoside, cistanche glycoside A, u verbascoside fil-kampjun tat-test li jkun 0. 46%, 0.12%, 0.85%, 0.48%, u 0.82%, rispettivament, li jindikaw li l-istrument għandu preċiżjoni tajba.

2.3.4 Studju tar-Ripetibbiltà

Sitt kampjuni tal-istess kampjun tal-għerq Rehmannia (SX1) ġew ippreparati b'mod parallel skont il-metodu f'"2.2.2" u ġew injettati u determinati skont il-kundizzjonijiet kromatografiċi f'"2.1". L-RSDs tal-kontenuti ta 'rehmannia root glycoside D, motherwort glycoside, echinacea glycoside, cistanche glycoside A u verbascoside fis-sitt kampjuni kienu 0.46%, 0.69%, 1.42%, {{ 12}}.48% u 1.58%, rispettivament, li jindika li l-metodu għandu ripetibbiltà tajba.

2.3.5 Studju ta' Stabbiltà

Ħu s-soluzzjoni tat-test (kampjun SX1) taħt "2.2.2" u injetta u kejjel skond il-kundizzjonijiet kromatografiċi taħt "2.1" fi 0 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, 1{{ 15}} h, 12 h, 18 h, u 24 h, rispettivament. L-RSD tal-ogħla żoni ta' rehmannia glutinosa D, motherwort glycoside, echinacoside, cistanche glycoside A, u verbascoside kienu 0.94%, 1.04%, 0.73% , 0.83%, u 0.71%, rispettivament, li jindikaw li s-soluzzjoni tat-test għandha stabbiltà tajba fi żmien 24 siegħa.

2.3.6 Rata ta' rkupru tal-kampjun

{{0}}.5 g ta' kampjun ta' għerq Rehmannia (SX1) b'kontenut magħruf ta' 5 komponenti ġew miżun b'mod preċiż fi flixkun koniku b'tapp, u ġew miżjuda 6 porzjonijiet paralleli, u ġew miżjuda 5 soluzzjonijiet ta' referenza ta' ċerti konċentrazzjonijiet rispettivament. Il-kampjuni ġew ippreparati skond il-metodu taħt "2.2.2", u l-kampjuni ġew injettati u mkejla skond il-kondizzjonijiet kromatografiċi taħt "2.1". Ir-rata ta 'rkupru ġiet ikkalkulata, u r-riżultati huma murija fit-Tabella 3. Ir-rata medja ta' rkupru tal-kampjun ta 'kull komponent kienet 96.5% ~ 98.6%, u l-RSD kien 0.73% ~ 1.52%, li jindika li l-metodu għandu preċiżjoni tajba.