Determinazzjoni ta 'Echinacoside fl-Estratt ta' l-Ilma Ta 'Cistanche Herba Permezz ta' HPLC

Astratt:

Għan Ġie stabbilit metodu HPLC għall-determinazzjoni ta' echinacosidefil-estratt ta' l-ilma ta' Cistancheherba.

Metodi Echinacoside ġie determinat mill-HPLC. Is-separazzjoni saret fuq il-kolonna Inertsil ODS-SP C18 b'fażi mobbli li tikkonsisti f'aċetonitrile(A) u 0.4% soluzzjoni ta' aċidu fosforiku (B), b'eluzzjoni gradjent. Il-wavelength ta 'detezzjoni ġie stabbilit għal 333 nm, u t-temperatura tal-kolonna kienet 30 grad. Ir-rata tal-fluss kienet 1.0 mL·min-1 u l-volum tal-injezzjoni kien 10 μL. Riżultati Ir-relazzjoni lineari ta' echinacoside fil-medda ta' konċentrazzjoni ta' 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 kienet tajba (r=0.999 8). L-irkupri kienu 94.59%-105.31% (RSD= 2.93%,n=9). Il-kontenut ta 'echinacoside fl-estratti ta' l-ilma ta 'Cistanche herba kien 15.527,7.347,12.267 mg·g-1. Konklużjoni Il-metodu HPLC stabbilit b'ripetibbiltà tajba huwa preċiż, sempliċi u fattibbli. Huwa adattat għad-determinazzjoni ta 'echinacoside fl-estratt ta' l-ilma ta 'Cistanche herba.

Kliem ewlieni:HPLC;estratt ta 'l-ilma ta' Cistanche herba; echinacoside; determinazzjoni tal-kontenut

Cistanche deserticola hija mediċina tonika tradizzjonali Ċiniża użata komunement fil-prattika klinika u hija magħrufa bħala "ġinseng tad-deżert" [1]. Iċ-Cistanche deserticola rreġistrata fl-edizzjoni tal-2015 tal-Farmakopea Ċiniża hija z-zokk imnixxef imlaħħam bi weraq bil-qoxra ta 'Cistanche deserticola YC Ma jew Cistanche tubulosa (Schenk) Wight. Huwa sħun, ħelu u mielaħ, u jirritorna lejn il-meridjani tal-kliewi u tal-musrana l-kbira. Għandu l-effetti li jsostni l-yang tal-kliewi, jimla l-essenza u d-demm, u jidrat l-imsaren u lassattivi [2]. "Materia Medica ta 'Shen Nong," tgħid li tista' "tonifika n-nofs, ssostni l-ħames organi interni, issaħħaħ yin u ssostni l-essenza". Cistanche deserticola fih prinċipalment phenylethanoid glycosides, iridoids u l-glycosides tagħhom, lignans u glycosides tagħhom, polysaccharides, komposti esteri u alkalojdi tagħhom [3]. Phenylethanol glycosides huma l-ingredjenti attivi ewlenin ta 'Cistanche deserticola. Fosthom, echinacoside u verbascoside huma elenkati f'Cistanche deserticola fil-Farmakopea Ċiniża.

Komponenti indikattivi għall-identifikazzjoni u d-determinazzjoni tal-kontenut. Studji farmakoloġiċi [4] juru li Cistanche deserticola għandha diversi effetti farmakoloġiċi bħal lassattiv, protezzjoni tal-fwied, kontra l-osteoporożi, antiossidanti, anti-aging, u kontra l-għeja. L-estratt milwiema ta 'Cistanche deserticola jista' jippromwovi l-espressjoni tal-ġene tal-proteina morfoġenetika tal-għadam 2 f'osteoblasts tal-firien, fosfatażi tal-aċidu reżistenti għat-tartrat, osteocalcin fis-serum ta 'ġrieden ovariectomized, u Smad1, ġeni mad5, fattur tat-tkabbir tat-trasformazzjoni- , eċċ fil-mudullun. , għandu effetti kontra l-osteoporożi [5-6].

Echinacea tista' tippromwovi l-proliferazzjoni ta' osteoblasti u tippromwovi d-differenzjazzjoni ta' ċelloli staminali mesenkimali tal-mudullun kkultivati ​​in vitro f'osteoblasti [7-9]. F'dawn l-aħħar snin, kien hemm ħafna rapporti ta 'riċerka dwar id-determinazzjoni tal-kontenut ta' echinacoside u verbascoside fl-estratt ta 'l-etanol ta' Cistanche deserticola u l-preparazzjonijiet komposti tiegħu [10-12], iżda hemm ftit rapporti dwar id-determinazzjoni tal-kontenut ta 'komponenti ta' indiċi f'Cistanche deserticola estratt milwiema. F'dan l-istudju, intużat kromatografija likwida ta 'prestazzjoni għolja (HPLC) biex tiddetermina l-kontenut ta' echinaceaside fl-estratt milwiema ta 'Cistanche deserticola.

1 materjal

1.1 Strumenti

LC-20AT kromatografija likwida ta' prestazzjoni għolja, SPD-20A detector, SIL-20A autosampler, CTO-10Forn tal-kolonna ASvp, workstation ta' kromatografija likwida ta' soluzzjoni LC, Shimadzu Corporation of Ġappun; MES125P-OCE-DU bilanċ analitiku elettroniku, Sartorius Company, il-Ġermanja; SHZ-D (Ⅲ) pompa tal-vakwu multi-purpose ta ' l-ilma li jiċċirkola, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.; RC2B SO25 sistema ta 'ċirkolazzjoni li jkessaħ l-evaporatur li jdur, evaporatur li jdur RV 10 D S96, Kumpanija IKA, il-Ġermanja; DK-S26

Banju ta 'l-ilma b'temperatura kostanti elettrika, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.; Magna ta 'l-ilma ultrapur tas-serje UPR, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 Materjali u reaġenti mediċinali

Materjal mediċinali ta 'Cistanche deserticola inxtara minn Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Pieces Co., Ltd., numru tal-lott: 1801001, 1806001, 181001. Tu Xingming, l-ispiżjar ewlieni tradizzjonali Ċiniż fit-Tielet Sptar Affiljat ta' Guangzhou University of Chinese Medicine, identifikaha bħala iz-zokk imnixxef imlaħħam bil-weraq bil-qoxra ta 'Cistanche deserticola YCMa. Il-kampjun jinħażen fil-Kamra tal-Ittestjar tad-Droga tat-Tielet Sptar Affiljat tal-Università ta 'Guangzhou tal-Mediċina Ċiniża; Sustanza ta' referenza Echinacea Glycoside, kontenut 89.7%, Istitut taċ-Ċina għall-Kontroll tal-Ikel u tad-Droga, numru tal-lott: 111670-

201706; acetonitrile huwa kromatografikament pur (Merck, il-Ġermanja); metanol u aċidu fosforiku huma analitikament pur (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); l-ilma huwa ilma ultrapur.

2 Metodi u riżultati

2.1 Preparazzjoni ta' estratt ta' l-ilma ta' Cistanche deserticola

Ħu t-trab oħxon ta 'materjal mediċinali Cistanche deserticola, żid 10 darba l-ammont ta' ilma distillat, saħħan u rifluss għall-estrazzjoni darbtejn, siegħa kull darba, iffiltra, għaqqad il-filtrat, u kkonċentra l-filtrat b'evaporatur li jdur għal kontenut ta 'droga mhux raffinat ta' 0.100 g·mL-1, u aħżinha f'4 gradi għal użu aktar tard.

2.2 Kundizzjonijiet kromatografiċi u adattabilità tas-sistema

Kolonna kromatografika: Kolonna Inertsil ODS SP C18 (150 mm × 4.6 mm, 5 μm); fażi mobbli: acetonitrile (A)-0.4% soluzzjoni ta 'aċidu fosforiku (B), elużjoni tal-gradjent: 0 ~ 5 min, 17%

A; 5 ~ 25 min, 20% A; 25 ~ 30 min, 17% A; tul ta 'mewġ ta' skoperta: 333 nm; temperatura tal-kolonna: 30 grad; rata tal-fluss: 1.0 mL·min-1;

Volum ta 'injezzjoni: 10 μL. Taħt dawn il-kundizzjonijiet kromatografiċi, is-separazzjoni bejn l-echinacoside u l-qċaċet tal-komponenti ħdejn hija akbar minn 1.5, u n-numru ta 'pjanċi teoretiċi bbażati fuq il-quċċata tal-echinaceaside m'għandux ikun inqas minn 4,000. Il-kromatogramma tidher fil-Figura 1.

2.3 Preparazzjoni tas-soluzzjoni

2.3.1 Soluzzjoni tas-sustanza ta’ referenza Iżen ammont xieraq ta’ sustanza ta’ referenza echinacoside, iżenha b’mod preċiż, poġġiha f’kunjett volumetriku ta’ 10 mL, żid metanol biex tħollha, u pprepara soluzzjoni ta’ sustanza ta’ referenza li jkun fiha 898.794 ug ta’ echinaceaside kull ml, 4 gradi Ħlief għal użu aktar tard.

2.3.2 Soluzzjoni tat-test

Kejjel b'mod preċiż 2.0 mL ta' estratt milwiema ta' Cistanche deserticola, evapora sa nixfa f'banju ta' l-ilma, żid metanol biex jinħall, iddilwixxi sal-volum fi flixkun volumetriku ta' 10 mL, ħawwad sew, u ffiltra b' membrana mikroporuża ta '0.22 μm biex tikseb.

2.4 Investigazzjoni tar-relazzjoni lineari

Kejjel preċiż {{0}}.25, 0.5{0, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 mL tas-soluzzjoni ta' referenza taħt il-punt 2.3.1, poġġiha f'kunjett volumetriku ta' 5 mL, żid metanol biex tlaħħaq sal-volum, u ħawwad sew biex tikseb konċentrazzjoni gradjent ta' 44.{{17} }, 89.879 4. 179.758 8, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·mL{-1 soluzzjoni ta’ referenza, iffiltrata minn membrana mikroporuża ta’ 0.22 μm. Kejjel skond il-kondizzjonijiet kromatografiċi taħt 2.2, u rrekordja l-erja tal-quċċata. Wettaq rigressjoni lineari bil-konċentrazzjoni tal-massa tas-sustanza ta' referenza bħala l-axxissa (X, ug·mL-1) u ż-żona tal-quċċata bħala l-ordinata (Y), u tinkiseb l-ekwazzjoni tar-rigressjoni: Y=13 185 .0X-32 273.0, r=0.999 8. Ir-riżultati juru li l-echinacea għandha relazzjoni lineari tajba fil-medda ta' konċentrazzjoni ta' 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1.

2.5 Test ta 'preċiżjoni

Ħu 539.276 4 ug ·mL- 1 soluzzjoni ta' referenza, injetta u kejjel 6 darbiet kontinwament skont il-kundizzjonijiet kromatografiċi taħt 2.2, u rrekordja ż-żona tal-quċċata. Ir-riżultati wrew li l-RSD taż-żona tal-quċċata tal-echinacoside kien 1.81%, li jindika preċiżjoni tajba tal-istrument.

2.6 Test ta' stabbiltà

Kejjel b'mod preċiż 2.0 mL ta' estratt milwiema ta' Cistanche deserticola, evapora sa nixfa f'banju ta' l-ilma, żid metanol biex jinħall, iddilwixxi fi flixkun volumetriku ta' 10 mL, ħawwad sew, iffiltra b'{{ 7}}.22 μm membrana mikroporuża, segwi l-kundizzjonijiet kromatografiċi taħt punt 2.2, u poġġi f'0 u 2 rispettivament. , 4, 8, 12, kejl ta 'injezzjoni ta' 24 siegħa, irreġistra l-erja tal-quċċata. Ir-riżultati wrew li l-RSD taż-żona tal-quċċata tal-echinacoside kien 1.16%, li jindika li s-soluzzjoni tat-test kellha stabbiltà tajba fi żmien 24 siegħa.

2.7 Test tar-ripetibbiltà

Kejjel preċiżament 2.0 mL ta' estratt ta' ilma Cistanche deserticola u ipprepara 6 soluzzjonijiet tat-test b'mod parallel skond il-metodu taħt 2.3.2. Injetta kampjuni għall-kejl skond il-kondizzjonijiet kromatografiċi taħt 2.2 u rrekordja l-erja tal-quċċata. Ir-riżultati wrew li l-RSD tal-echinacosidekonċentrazzjoni tal-massa kienet 1.28%, li jindika ripetibbiltà tajba tal-metodu.

2.8 Test tal-irkupru tal-kampjun

Kejjel b'mod preċiż 9 porzjonijiet ta' 1.0 mL ta' estratt ta' ilma Cistanche deserticola, żid 0.8, 1.0, u 1.2 mL ta' soluzzjoni ta' referenza (1.552 mg·mL{{11) }}) rispettivament, evapora sa nixfa f'banju ta' l-ilma, żid metanol biex jinħall, u aġġusta għal flixkun volumetriku ta' 10 mL; Ħawwad sew u ffiltra minn membrana mikroporuża ta '0.22 μm biex tipprepara soluzzjonijiet tat-test ta' konċentrazzjoni għolja, medja u baxxa. Ipprepara 3 kopji ta' kull konċentrazzjoni b'mod parallel. Kejjel skond il-kondizzjonijiet kromatografiċi taħt 2.2. Irreġistra l-ogħla erja u kkalkula l-irkupru tal-kampjun. Rata. Ir-riżultati huma murija fit-Tabella 1.

2.9 Determinazzjoni tal-kontenut tal-kampjun

Kejjel b'mod preċiż 3 porzjonijiet ta' 2.0 mL ta' estratt milwiema ta' Cistanche deserticola, evapora sa nixfa f'banju ta' l-ilma, żid metanol biex jinħall, iddilwixxi fi flixkun volumetriku ta' 10 mL, ħawwad sew, iffiltra b' membrana mikroporuża ta' 0.22 μm, u kejjel skond il-kondizzjonijiet kromatografiċi taħt 2.2. Irreġistra ż-żona tal-quċċata u kkalkula l-kontenut tal-echinaceaside. Ir-riżultati huma murija fit-Tabella 2.

Tabella 1 Riżultati tat-testijiet ta 'rkupru ta' echinacoside

Tabella 2 Riżultati tad-determinazzjoni tal-kontenut ta 'echinacoside fl-estratt ta' l-ilma ta 'Cistanche herba