Estratti Ta' Cistanche Deserticola Jistgħu Antagonizzaw l-Immunosenescence U Jestendu l-Ħajja f'Ġrieden Suxxettibbli għas-Senescence Aċċelerat Mouse 8 (SAM-P8)

Jekk jogħġbok ikkuntattjaoscar.xiao@wecistanche.comgħal aktar informazzjoni

Is-substrains 8 suxxettibbli għas-senescence aċċelerati tal-ġurdien (SAM-P8), aċċettati b'mod wiesa 'bħala mudell tal-annimali għall-istudju ta' drogi li qed jixjieħu u kontra t-tixjiħ, intużaw biex jeżaminaw l-effetti tas-supplimentazzjoni tad-dieta b'estratti ta 'Cistanche deserticola (ECD) li ntużaw b'mod estensiv f' mediċina tradizzjonali Ċiniża minħabba l-kapaċità perċepita tagħha li tippromwovi l-funzjoni immuni fl-anzjani. Ġrieden SAM-P8 maskili ta 'tmien xhur ġew ittrattati b'ECD b'amministrazzjonijiet orali ta' kuljum għal 4 ġimgħat. Ir-riżultati wrew li supplimenti tad-dieta ta 'l50 mg/kg u 450 mg/kg ta' ECD jistgħu jestendu l-ħajja mkejla mill-analiżi tas-sopravivenza Kaplan-Meier b'mod dipendenti fuq id-doża. Supplimentazzjoni tad-dieta ta 'ġrieden SAM-P8 għal 4 ġimgħat b'100,500 u 2500 mg/kg ta' ECD intweriet li tirriżulta f'żidiet sinifikanti kemm f'ċelluli T naive kif ukoll naturali killer fil-popolazzjonijiet taċ-ċelluli tad-demm u tal-milsa. B'kuntrast, iċ-ċelluli T tal-memorja periferali u ċ-ċitokin proinfjammatorju, IL-6 fis-serum, naqsu sostanzjalment fil-ġrieden li belgħu 100 u 500 mg/kg ta' ECD kuljum. Barra minn hekk, Sca-1 ċelluli pożittivi, il-proġenituri rikonoxxuti tanaive periferaliIċ-ċelloli T, ġew restawrati b'mod parallel. Ir-riżultati tagħna jipprovdu appoġġ sperimentali ċar għal studji ta 'osservazzjoni kliniċi li ilhom juru liCistanchedeserticola jippossjedi effetti sinifikanti fl-estensjoni tal-ħajja u jissuġġerixxi li dan jinkiseb billi antagonizzaimmunosenescence.

Jekk jogħġbok ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

1. Introduzzjoni

Cistanchedeserticola, wieħed mill-aktar popolari mediċini erbali tradizzjonali Ċiniżi / prodotti tas-saħħa, ġie deskritt f'numru ta 'farmakopeji veġetali Ċiniżi storiċi bħala li għandhom proprjetajiet antiaging. Konsegwentement, intuża ħafna fiċ-Ċina għat-trattament ta 'diversi disturbi relatati mal-età inklużi dimenzja senile, impotenza, infertilità, infezzjoni kronika, u disturbi ematopojetiċi fl-anzjani [1]. Approċċi kimiċi moderni ppermettew li żewġ tipi prinċipali ta 'komposti, phenylethanoid glycosides, u oligosaccharides, jiġu iżolati bħala l-ingredjenti attivi ewlenin ta' Cistanche deserticola [1]. Fl-aħħar għaxar snin, Cistanche deserticola u l-estratti tagħha ġew studjati b'mod intensiv u wrew li huma kapaċi jipproteġu n-newroni minn korriment ikkawżat minn newrotossini [2], li jinibixxu t-tetrachloride tal-karbonju indott.epatotossiċità[2], u jippromwovi l-irkupru taċ-ċelluli tal-mudullun minn ħsara mir-radjazzjoni indotta minn Co60 [3]. Intwera wkoll li għandu effetti anti-infjammatorji, antiossidanti u kontra t-tixjiħ [4]. Madankollu, jekk Cistanche deserticola tistax iżid il-ħajja u x'inhuma l-mekkaniżmi molekulari sottostanti [3] assoċjati mal-proprjetajiet kontra t-tixjiħ tagħha ma ġewx ittestjati b'mod rigoruż.

L-immunosenescence, jiġifieri, l-alterazzjoni tas-sistema immuni bl-età tifforma l-isfond li fuqu ġiet innutata żieda fis-suxxettibilità għal infezzjonijiet, kanċer, mard newrodeġenerattiv, u mard awtoimmuni fl-anzjani [5]. Interventi terapewtiċi, bħar-restrizzjoni kalorika [6] u s-supplimentazzjoni tal-vitamina E, ġew irrappurtati li huma effettivi biex idewmu l-progressjoni tal-immunosenescence u għalhekk inaqqsu l-morbidità ta’ xi mard relatat mal-età kif ukoll itawlu l-ħajja kemm tal-bnedmin kif ukoll tal-annimali gerriema. [7, 8]. Madankollu, studji f'dan il-qasam huma kkumplikati mill-fatt li t-tixjiħ huwa assoċjat mal-paradoss ta 'defiċjenza immuni simultanja u infjammazzjoni kronika [9]. Dan ifisser li l-istimulazzjoni sempliċi tal-proliferazzjoni tal-limfoċiti jew l-anti-infjammazzjoni ma tirrappreżentax interventi terapewtiċi ideali fit-trattament tat-tixjiħ u l-kundizzjonijiet relatati mal-età [10]. Konsegwentement fit-tfittxija għal interventi mediċi li kapaċi jipprevjenu jew itaffu kundizzjonijiet relatati mal-età inklużi infezzjonijiet, kanċer, mard awtoimmuni, aterosklerożi, u mard newrodeġenerattiv li huma kawżi ewlenin ta’ mewt u diżabilità, u tiswija ta’ difetti fis-sistema immuni għandhom ikunu akkumpanjati minn inibizzjoni ta’ reazzjonijiet infjammatorji. Il-ġurdien aċċelerat bis-senescence [11] huwa mudell tal-ġurdien inbred, derivat mir-razza AKR/J, li tintuża ħafna fi studji tat-tixjiħ. Is-substrain P8 (SAM-P8) ta 'dawn il-ġrieden għandu ħajja mqassra b'mod sinifikanti meta mqabbel mas-substrain R1 (SAM-R1), li juri wkoll proċess ta' tixjiħ aktar bil-mod [12]. B'mod parallel mat-tixjiħ prematur tagħhom, il-ġrieden SAM-P8 juru wkoll żieda fis-senescence newroloġika, immunosenescence, u relatati mal-età.ematopojetiċidefiċits li jimitaw mill-qrib il-karatteristiċi tipiċi tat-tixjiħ tal-bniedem [13, 14]. Analiżi tal-mekkaniżmi sottostanti responsabbli għall-proċess ta 'tixjiħ aċċellerat u disturbi relatati mal-età tindika li disfunzjoni mitokondrijali [15], stress ossidattiv, u żieda fir-rata ta' mutazzjoni tad-DNA somatika kollha jidhru li huma involuti [16, 17]. Din is-sistema tal-ġurdien, bl-isfond ġenetiku omoġenju tagħha, għalhekk, tipprovdi mudell sperimentali eċċellenti għall-istudju tat-terapewtiċi tat-tixjiħ u kontra t-tixjiħ [12]. Dan l-istudju ffoka fuq l-investigazzjoni dwar jekk estratti ta 'Cistanche deserticola humiex kapaċi jestendu l-ħajja tal-ġrieden SAM-P8 u jreġġgħu lura l-istatus ta' immunosenescence tagħhom.

Cistanche jista 'jtejjeb l-immunità u kontra l-għeja

2. Materjali u Metodi
2.1. Materjali. Frisk Cistanche deserticola YC MA inġabret minn diversi żoni fil-majjistral taċ-Ċina inklużi r-reġjuni awtonomi ta 'Xinjiang, Neimenggu, u Ningxia. Il-kampjuni użati biex jippreparaw l-estratti ġew awtentikati mill-Professur Pengfei Tu, speċjalista tal-farmakognożija fid-Dipartiment tal-Mediċini Naturali, l-Iskola tax-Xjenzi Farmaċewtiċi, l-Università ta 'Peking. Il-kampjun tal-vawċer ta' Cistanche deserticola (numru CD-2007-03-08) użat kien ġie depożitat fl-erbarju tal-Iskola tax-Xjenzi Farmaċewtiċi, l-Università ta' Peking, iċ-Ċina. 2.2. Preparazzjoni ta' Estratti ta' Cistanche deserticola (ECD) u Analiżi HPLC. Cistanche deserticola (2.0 kg) imnixxef bl-arja u mqatta' flieli) ġie trab u estratt darbtejn b'70 fil-mija etanol għal siegħa. Il-proporzjonijiet tal-pjanti/etanol użati kienu 1/6 (w/w) fl-ewwel estrazzjoni u 1/4 (w/w) fit-tieni. Iż-żewġ estratti ġew magħquda u ffiltrati qabel ma ġew ikkonċentrati għal densità relattiva ta' 1.10-1.15 taħt il-pressjoni mnaqqsa f'60∘ C. Dan il-konċentrat imbagħad ġie mnixxef bil-vakwu u t-trab li rriżulta kien l-estratt ta' Cistanche deserticola (ECD) użat matul dan l-istudju. Il-komponenti tal-ECD ġew analizzati bl-użu tal-HPLC kif deskritt qabel [1]. Fil-qosor, 100 mg ta' trab ECD ġie maħlul f'10.0 mL H2O u wara l-filtrazzjoni ġie injettat fl-HPLC. Analiżi HPLC saret fuq sistema ta 'kromatografija likwida Agilent 1100 (Agilent Co., USA) Il-fażi mobbli kienet tikkonsisti f'taħlita ta' metanol (A) u 0.10 fil-mija aċidu metanojku (B). Ġie impjegat programm ta' kromatografija gradjent; dan kien 26.5 fil-mija (A) u 73.5 fil-mija (B) f'0–7 min, 26.5– 29.5 fil-mija (A) u 73.5–70.5 (B) fi 8–10 min, u 29.5 fil-mija (A) u 70.5 fil-mija (B) ) f'20–27 min. Ir-rata tal-fluss inżammet kostanti f'1.0 mL/min, il-volum tal-injezzjoni kien 10 mL, u t-temperatura tal-kolonna nżammet f'25∘ C. Intuża detector UV f'330 nm biex jimmonitorja l-ħruġ tal-kolonna u jiġġenera kromatogrammi. Phenylethanoid glycosides u oligosaccharides ġew identifikati mill-ħinijiet ta 'żamma tagħhom u l-ispettri ta' assorbiment. Il-kwantifikazzjoni saret permezz ta 'kurvi ta' kalibrazzjoni standard esterni. Ir-rendiment ta 'estratti ta' Cistanche deserticola (ECD) kien ta 'madwar 3.33 fil-mija u l-kontenut tal-phenylethanoids kien 17.94 fil-mija. Acteoside u echinacoside kienu żewġ kostitwenti ewlenin f'din il-frazzjoni, bil-kontenut tagħhom ikun 3.80 fil-mija u 8.25 fil-mija, rispettivament. L-oligosaccharides jammontaw għal 82 fil-mija tal-ECD totali. Il-konċentrazzjonijiet tal-komponenti attivi ewlenin tal-ECD huma murija fit-Tabella 1. 2.3. Analiżi tal-Ħajja tal-Annimali. Ġrieden SAM-P8 maskili u SAM-R1 ta 'kontroll inxtraw miċ-Ċentru ta' Tgħammir u Riċerka tal-Annimali tal-Laboratorju taċ-Ċentru tax-Xjenza tas-Saħħa tal-Università ta 'Peking (Beijing, iċ-Ċina). Dan l-istudju ġie approvat mill-Kumitat tar-Riċerka dwar l-Annimali ta 'l-Università ta' Peking u sar skond il-linji gwida għall-Kura u l-Użu ta 'Annimali tal-Laboratorju fl-Università ta' Peking. In-numru taċ-ċertifikazzjoni ta' dawn il-ġrieden kien SCXK2001-2008. Il-ġrieden inżammu f'gaġeġ metaboliċi standard f'kundizzjonijiet ikkontrollati mill-ambjent (22 ± 2∘ C, umdità 45-60 fil-mija, u ċiklu ta 'dawl/dlam 12-il siegħa) u ppermettew aċċess liberu għall-ikel u l-ilma. Wara ġimgħatejn ta 'akklimazzjoni, l-annimali ġew maqsuma f'ħames gruppi: 3 gruppi ta' trattament ECD, grupp ta 'kontroll SAM-R1, u grupp ta' kontroll SAM-P8 mingħajr trattament. Id-dieta tal-gruppi ta 'trattament 3 kienet issupplimentata b'dieta mħallta

konċentrazzjonijiet differenti ta' ECD: rendiment ta' dożi medji baxxi (50 mg/kg), medji (150 mg/kg), u għoljin (45{0 mg/kg) ta' ECD kuljum. Is-SAM-R1 u SAM-P8 l-ebda gruppi ta 'kontroll ta' trattament ġew mitmugħa bl-istess dieta mingħajr ECD. Il-kejl tal-konsum tal-ikel tal-annimali kollha sar kull tlett ijiem matul l-esperiment. Il-pressjoni tad-demm u l-monitoraġġ tar-rata tal-qalb saru b'mod mhux invażiv kull tliet xhur għat-tul tal-esperiment biex jiġi ddeterminat l-istat tas-saħħa tal-ġrieden. It-tul tal-ħajja ta’ kull ġurdien ġie rreġistrat sal-mewt tal-annimali kollha. 2.4. Analiżi ta' Ċelloli T Naive, Ċelloli T tal-Memorja, Ċelloli NK, u Ċelloli Sca-1 Pożittivi f'Popolazzjonijiet Periferali ta' Demm u Ċelloli tal-Msa permezz ta' Ċitometrija tal-Fluss. Ġrieden SAM-P8 maskili ta 'tmien xhur u ġrieden SAM-R1 ta' kontroll ġew maqsuma f'5 gruppi: 3 gruppi ta 'trattament ECD ta' ġrieden SAM-P8, grupp ta 'kontroll SAM-P8 mingħajr trattament, u grupp ta' kontroll SAM-R1. Id-dieta tat-3 gruppi ta 'trattament kienet supplimentata b'gavage ta' kuljum ta 'ECD f'dożi ta' 100 mg/kg, 500 mg/kg, jew 2500 mg/kg. Wara 4 ġimgħat ta 'trattament, l-annimali ġew imwaħħla għal 12-il siegħa u mbagħad anestetizzati b'soluzzjoni tas-sodju tal-pentobarbital (50 mg/kg, injezzjoni peritoneali, ip), u d-demm inġabar u ttrattat b'antikoagulant, ċitrat tas-sodju (2 mg/mL). ). Il-limfoċiti tad-demm inġabru u ġew analizzati. Imbagħad il-ġrieden ġew swabbed b'75 fil-mija alkoħol u l-kavitajiet addominali nfetħu f'kabinett ultraclean (fume hood). Il-milsa nħaslu bil-PBS; imbagħad mitħun u ffiltrat b'passatur taċ-ċelluli (70 𝜇m).Is-sospensjoni li tirriżulta ta 'ċelluli tal-milsa ġiet maħsula u sospiża mill-ġdid f'mezz PRMI 1640 f'konċentrazzjoni ta' 2 × 106 /mL. Iċ-ċelloli tal-milsa minn kull ġurdien ġew alikkwotati f'6 tubi għall-analiżi taċ-ċitometrija tal-fluss. Il-konċentrazzjoni finali tas-sospensjoni taċ-ċelluli tal-milsa f'kull tubu kienet 2 × 105 /100 𝜇L. Limfoċiti tad-demm periferali u limfoċiti tal-milsa ġew inkubati separatament b'FITC-CD4, PerceCD3, Perce-CD8a, PC-CD28, PE-CD44, FITC-CD45RB, PE CD49b/roża, u FITC-ly-6A/E ( Sca-1) (kollha mixtrija minn BD Biosciences, San Diego, CA, USA) antikorpi monoklonali f'temperatura tal-kamra għal 30 min. Is-soluzzjoni lysing, li hija speċifikament maħsuba biex lysing ċelluli ħomor tad-demm waqt li tippreserva l-lewkoċiti, u b'hekk jiġu eliminati ċ-ċelloli li jinterferixxu għall-analiżi ċitometrika tal-fluss, ġiet inkubata bid-demm fid-dlam f'temperatura tal-kamra għal 5 min. Wara ċ-ċentrifugazzjoni f'500 × g għal 5 min, is-supernatant ġie dekantat. Imbagħad iċ-ċelluli pellet ġew maħsula 3 darbiet b'PBS, sospiżi mill-ġdid f'melħ imbuffer bil-fosfat tas-silġ (PBS, pH 7.4) li kien fih 0.01 fil-mija sodium azide, u soġġetti għal FCM analiżi. Is-sottopopolazzjonijiet tal-limfoċiti ġew analizzati permezz ta 'ċitometrija tal-fluss bl-użu ta' ċitometru tal-fluss FACS Calibur (BD Biosciences, San Diego, CA, USA) u softwer ta 'analiżi BD CellQuest. 2.5. Valutazzjoni tal-Vijabilità Ċellulari ta' Limfoċiti T Periferali minn Annexin V-FITC u PI Double Staining u Analiżi FACS. Wara supplimentazzjoni tad-dieta tal-ġrieden SAM P8 bi tliet dożi ta 'ECD għal 4 ġimgħat, l-annimali ġew imwaħħla għal 12-il siegħa u mbagħad anestetizzati, u nġabar u analizzat demm. Limfoċiti apoptotiċi u nekrotiċi vijabbli ġew ikkwantifikati bl-użu tal-kit Annexin V-FITC (Beijing Biosea Biotechnology Co., Ltd., Beijing, Ċina). Il-limfoċiti kienu soġġetti għal tbajja doppja b'isothiocyanate fluorescein konjugat ittikkettat annexin V (Annexin V-FITC) u propidium iodide (PI). Fil-qosor, is-sospensjonijiet tal-limfoċiti li fihom bejn wieħed u ieħor 106 ċelluli/mL ġew maħsula darbtejn b'PBS u sospiżi f'200 𝜇L ta' buffer li torbot (10 mM HEPES/NaOH, pH 7.4, 140 mM NaCl, 2.5 mM CaCl2), u 10 𝜇LTC ta' Annex 𝜇 ġie miżjud mas-sospensjoni taċ-ċelluli. Wara 15-il minuta ta 'inkubazzjoni fid-dlam f'temperatura tal-kamra, ġew miżjuda 300 𝜇L oħra ta' buffer li torbot u 5 𝜇L PI. Immedjatament wara inkubazzjoni oħra ta '5 minuti fid-dlam, il-kampjuni ta' limfoċiti mtebbgħin doppjament ġew analizzati bl-użu ta 'ċitometru tal-fluss, FACS Calibur (BD Biosciences, San Diego, CA, USA). 2.6. Determinazzjoni ta 'Ċitokini tal-Plażma permezz ta' Immunoassay Cytometric Bead Array (CBA). Il-livelli taċ-ċitokini fil-plażma ġew ikkwantifikati bl-użu ta' kit ta' analiżi ċitometriku ta' firxa ta' żibeġ (CBA) (BD Biosciences, San Diego, CA, USA) li kapaċi jindividwaw simultanjament IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL-6, IL{{96 }}, IL-10, GM-CSF, u IL-3 f'kampjun wieħed. Għalhekk, dan l-immunoassaġġ multiplexed ippermetta l-iskoperta ta’ ċitokini stimulanti immuni (IL-2), ċitokini proinfjammatorji (IFN-𝛾, TNF- 𝛼, u IL-6), ċitokini inibitorji infjammatorji (IL{{105} }}), u ċitokini ematopojetiċi (IL-3 u GM-CSF). Fil-qosor, 50 𝜇L ta’ plażma tħalltu ma’ 50 𝜇L ta’ żibeġ tal-qbid taċ-ċitokini konjugati bil-PE li kienu ġew miksija b’antikorpi tal-qbid speċifiċi għal IFN-𝛾, TNF-𝛼, IL-6, IL-2, IL -10, GM-CSF, u proteini IL-3. Wara sagħtejn ta' inkubazzjoni f'temperatura tal-kamra, il-kampjuni ġew maħsula f'melħ imbuffer bil-fosfat tas-silġ (PBS, pH 7.4) li kien fih 0.01 fil-mija ażide tas-sodju, imbagħad iffissati f'0.5 mL ta' 1 fil-mija paraformaldehyde f'PBS u miżmuma f'4∘ C f' id-dlam sa l-analiżi, u mbagħad analizzati miċ-ċitometru tal-fluss FACS Calibur (BD Biosciences, San Diego, CA, USA). 2.7. Analiżi Statistika. Id-dejta tintwera bħala valuri medji ± SD Il-paraguni bejn gruppi differenti saru b'ANOVA f'direzzjoni waħda b'test post hoc. Fl-istudju dwar il-ħajja, id-dejta għaddiet minn analiżi tas-sopravivenza Kaplan-Meier, li kienet tinkludi l-użu kemm tat-testijiet Log-rank (Mantel-Cox) kif ukoll Gehan-Breslow Wilcoxon. Analiżi statistika saret bl-użu tal-Pakkett Statistiku għax-Xjenzi Soċjali għall-Windows (SPSS, Chicago, IL) u valur 𝑃 ta 'inqas minn 0.05 kien ikkunsidrat bħala sinifikanti.

3. Riżultati
3.1. Analiżi ta 'Komponenti Attivi Potenzjali fl-Estratti ta' Cistanche deserticola (ECD). Kif muri fit-Tabella 1, ECD huwa magħmul prinċipalment minn żewġ tipi ta 'kompost, phenylethanoid glycosides, u oligosaccharides. Fil-phenylethanoid glycosides, l-echinacoside, acetonide, u 8-epiloganic acid ġew identifikati, filwaqt li fl-oligosaccharides, galactitol biss ġie identifikat.

Figura 1: L-effetti ta 'estratti ta' Cistanche deserticola (ECD) fuq il-ħajja tal-ġrieden SAM-P8. Ġrieden maskili ta’ tmien xhur aċċelerati bis-senescence/suxxettibbli 8 (SAM-P8) ġew maqsuma b’mod każwali f’4 gruppi (f’kull grupp, 𝑛 {{10}}): 3 gruppi ta’ trattament, u le -grupp ta 'kontroll tat-trattament. Is-substrain nonsenescent (SAM-R1) tal-ġrieden intuża bħala kontroll sperimentali. It-teħid tal-ikel tal-annimali kollha kien immonitorjat matul l-esperiment f'intervalli ta' 3-jum. It-3 gruppi ta' trattament ġew mitmugħa ad libitum fuq dieti supplimentati b'dożi baxxi (50 mg/kg), medji (150 mg/kg), u għoljin (450 mg/kg) ta' Cistanche deserticola estratt (ECD). Iż-żewġ gruppi ta 'annimali ta' kontroll ġew mitmugħa bl-istess dieta mingħajr suppliment tal-ECD. (a) Kurvi ta 'sopravivenza Kaplan-Meier ta' ġrieden SAM-P8 bid-dieta ECD jew kontroll tal-vettura. L-analiżi tas-sopravivenza Kaplan-Meier saret bl-użu tat-testijiet Log-rank (Mantel-Cox) u Gehan-Breslow-Wilcoxon. (b) Istogramma tal-medja tal-ħajja tal-gruppi ta' ġrieden. Il-vireg tal-iżball juru li d-devjazzjoni standard mill-medja u s-sinifikat statistiku twettqet bl-użu ta 'analiżi ANOVA segwita minn post hoc 𝑡-test. ###𝑃 < 0.001="" sam-p8="" kontra="" sam-r1;="" ∗∗𝑃="">< 0.01="" grupp="" ikkurat="" b'doża="" għolja="" kontra="" sam-p8;="" ∗𝑃="">< 0.05="" grupp="" ikkurat="" b'doża="" medja="" kontra="" sam-p8="" (f'kull="" grupp,="" 𝑛="">

3.2.L-Impatt tal-Estratti ta' Cistanche deserticola fuq il-Medju tal-Ħajja tal-Ġrieden SAM-P8. Għal dan u studji sussegwenti, ġrieden SAM-P8 maskili ta 'tmien xhur kienu maqsuma f'4 gruppi. Fosthom, grupp wieħed ta 'ġrieden ġew mitmugħa b'dieta normali mingħajr ECD, it-3 gruppi l-oħra belgħu separatament id-dieti li fihom proporzjonijiet differenti ta' ECD. Ġrieden mis-substrain SAM-R1, li għandhom proċess ta 'tixjiħ normali u tul ta' ħajja, intużaw bħala grupp ta 'kontroll fl-esperimenti kollha. Meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll SAM-R1, il-ħajja medja tal-ġrieden SAM-P8 tqassar b'mod sinifikanti (Figura 1(a); 𝑃 <0.001). għalkemm="" is-supplimentazzjoni="" tad-dieta="" bid-doża="" baxxa="" (50="" mg/kg)="" ta’="" ecd="" naqset="" milli="" tipproduċi="" żieda="" sinifikanti="" fil-ħajja="" tal-ġrieden="" sam-p8,="" fil-medja="" (150="" mg/kg)="" u="" għolja="" (450="" mg/ml)="" supplimentari="" dożi="" kien="" hemm="" żieda="" fil-ħajja="" dipendenti="" fuq="" id-doża="" (figuri="" 1(a)="" u="" 1(b);="" 𝑃="">< 0.05–0.01)="" li="" kienet="" ikkonfermata="" mill-analiżi="" tas-sopravivenza="" kaplan-meier,="" li="" kienet="" tinkludi="" l-użu="" kemm="" tal-log-rank="" (="" mantel-cox)="" u="" testijiet="" gehan-breslow-wilcoxon.="" 3.3.="" treġġigħ="" lura="" ta="" 'immunosenescence="" fil-ġrieden="" sam-p8="" minn="" estratti="" ta'="" cistanche="" deserticola="" (ecd).="" tnaqqis="" ta="" 'limfoċiti="" t="" periferali="" naive="" u="" żieda="" konkomitanti="" ta'="" limfoċiti="" t="" tal-memorja="" periferali="" huma="" karatteristiċi="" prominenti="" ta="" 'immunosenescence="" li="" huma="" meqjusa="" b'mod="" wiesa'="" bħala="" r-raġunijiet="" sottostanti="" ewlenin="" għal="" anormalitajiet="" immunoloġiċi="" relatati="" mal-età.="" din="" l-immunosenescence="" f'sam-p8="" relattiva="" għall-annimali="" sam-r1="" kienet="" evidenti="" b'mod="" ċar="" meta="" l-analiżi="" facs="" intużat="" biex="" jiġu="" enumerati="" (cd3="" plus="" cd44low="" cd45rbhigh)="" limfoċiti="" bħala="" indikatur="" ta="" 'ċelluli="" t="" naive="" u="" (cd3="" plus="" cd44high="" cd45brlow)="" limfoċiti="" bħala="" indikatur="" tal-memorja="" t="" ċelloli.="" għalhekk,="" kemm="" fid-demm="" periferali="" (figura="" 2)="" kif="" ukoll="" fiċ-ċelluli="" tal-milsa="" (figura="" 3)="" dehru="" popolazzjonijiet="" livelli="" mnaqqsa="" ta="" 'ċelluli="" t="" naive="" u="" livelli="" miżjuda="" ta'="" ċelluli="" t="" tal-memorja="" fil-ġrieden="" sam-p8.="" is-suppliment="" tad-dieta="" tal-ġrieden="" sam-p8="" bl-ecd="" instab="" li="" kien="" kapaċi="" jreġġa'="" lura="" dawn="" l-indikaturi="" ta="" 'immunosenescence="" b'mod="" dipendenti="" mid-doża="" kemm="" fil-popolazzjonijiet="" tad-demm="" periferali="" (figura="" 2)="" kif="" ukoll="" taċ-ċelluli="" tal-milsa="" (figura="" 3).="" bħala="" indikatur="" addizzjonali="" tat-treġġigħ="" lura="" ta="" 'immunosenescence="" permezz="" ta'="" supplimentazzjoni="" ecd="" tad-dieta,="" il-livell="" ta="" 'ċelluli="" naturali="" killer="" [18],="" markatur="" ċellulari="" ewlieni="" tas-sistema="" immuni="" intrinsika,="" ġie="" analizzat.="" dan="" wera="" li="" s-suppliment="" tad-dieta="" ecd="" irriżulta="" f'żieda="" dipendenti="" fuq="" id-doża="" fiċ-ċelluli="" nk="" (cd3="" flimkien="" ma="" 'cd49="" plus="" )="" kemm="" fil-popolazzjonijiet="" ta'="" limfoċiti="" tad-demm="" periferali="" (figura="" 4)="" kif="" ukoll="" taċ-ċelluli="" tal-milsa="" (figura="" 5).="" 3.4.="" estratti="" ta'="" cistanche="" deserticola="" isaħħu="" l-intensità="" relattiva="" tal-fluworexxenza="" taċ-ċelloli="" pożittivi="" sca-1="" fil-ġrieden="" sam-p8.="" l-antiġenu="" taċ-ċelloli="" staminali-1="" (sca-1)="" huwa="" wieħed="" mill-aktar="" bijomarkaturi="" prominenti="" taċ-ċelloli="" staminali="" ematopojetiċi="" (hsc)="" fil-popolazzjonijiet="" taċ-ċelloli="" tal-mudullun.="" iċ-ċelloli="" sca-1="" pożittivi="" jirrappreżentaw="" ukoll="" proġenituri="" limfoċiti="" li="" jkunu="" għadhom="" kif="" ġew="" esportati="" mill-mudullun="" fid-demm="" periferali="" fejn="">

4. Diskussjoni

Id-difiża immuni kontra mikro-organiżmi invażivi ġodda jew ċelluli tat-tumur endoġeni tiddependi fuq id-diversità tar-repertorju taċ-ċelluli T, li mbagħad jiddependi fuq il-ġenerazzjoni u l-manutenzjoni ta 'ċelluli T naive [19]. Matul il-proċess ta 'tixjiħ, id-diversità tar-repertorju taċ-ċelluli T intwera li tiċkien b'mod drammatiku minħabba t-tnaqqis progressiv ta' ċelluli T naive fil-pool ta 'riżerva periferali. Huwa dan in-nuqqas ta' ċelluli T inġenji li jirrispondu li kien maħsub li huwa responsabbli għas-suxxettibilità ta' anzjani għal infezzjoni, kanċer, u riżultati ħżiena wara t-tilqim [20]. Diversi interventi, inklużi restrizzjoni kalorika [7], eżerċizzju [21], u supplimentazzjoni ta 'vitamina E [8], kollha ntużaw biex jimlew b'suċċess iċ-ċelluli T naive u b'hekk jestendu l-ħajja u jnaqqsu l-bidu ta' infezzjoni u kanċer fost l-anzjani. F'dan l-istudju, wrejna li l-ECD huwa kapaċi jżid il-livell ta 'ċelluli T naive fil-pool periferali u kien hemm estensjoni konkomitanti tal-ħajja u tnaqqis fil-frekwenza tal-formazzjoni tat-tumur fil-ġrieden aċċelerati bis-senescence (grupp terapewtiku ECD versus SAM-P8, 0 kontra 1/6). Għalhekk, jidher raġonevoli li jiġi konkluż li l-kapaċità tal-ECD li ireġġa' lura t-tnaqqis dipendenti fuq l-età taċ-ċelluli T naive periferali tista' tikkontribwixxi għall-effetti magħrufa tagħha fit-tnaqqis tal-mard relatat mal-età li ġej minn osservazzjonijiet kliniċi fit-tul.

5. Materjali u Metodi

5.1. Materjali. Fir-rispons immuni normali, wara l-konteniment u l-eliminazzjoni ta 'antiġen barrani, il-biċċa l-kbira taċ-ċelluli T estiżi b'mod klonali jgħaddu minn apoptosi b'frazzjoni żgħira biss tinżamm bħala ċelluli T tal-memorja. Konsegwentement, bħala organiżmu immuni-kompetenti età, iċ-ċelluli T tal-memorja periferali jakkumulaw bħala riżultat ta 'ħajja ta' espożizzjoni għal antiġeni barranin li jikkonvertu ċelluli T naive f'ċelluli tal-memorja [22, 23]. Numru ta 'studji ssuġġerew li difetti ta' apoptożi tal-limfoċiti f'annimali anzjani u bnedmin jikkontribwixxu wkoll għat-tkabbir tal-kompartiment taċ-ċelluli T tal-memorja [24, 25]. Barra minn hekk, studju reċenti wera li abbundanza żejda ta 'ċelluli T tal-memorja periferali tista' tinibixxi l-proliferazzjoni omeostatika ta 'ċelluli T naive [26]. Dawn l-istudji reċenti ssuġġerew ukoll li ċ-ċelluli T tal-memorja jistgħu joħorġu livelli għoljin ta 'ċitokini proinfjammatorji li jistgħu jikkontribwixxu għal infjammazzjonijiet persistenti f'diversi tessuti ta' l-anzjani. Konsegwentement it-tnaqqis tal-livell ta 'ċelluli T tal-memorja għandu jkun ta' benefiċċju kemm għall-proliferazzjoni omeostatika ta 'ċelluli T naive kif ukoll biex itaffi l-istat infjammatorju żejjed li jidher f'organiżmi anzjani. F'dan l-istudju, suppliment tad-dieta b'ECD intwera li jista 'jnaqqas il-livell ta' ċelluli T tal-memorja periferali u jżid il-livelli ta 'ċelluli T naive. Barra minn hekk, is-supplimentazzjoni tal-ECD żiedet l-apoptosi f'popolazzjonijiet ta 'limfoċiti periferali, potenzjalment jagħmlu spazju għal limfoċiti naive ġodda. In-nekrożi fil-limfoċiti periferali, li hija prinċipalment indotta minn stress ossidattiv f'annimali senili, ġiet inibita wkoll. Teżisti evidenza estensiva li tindika li t-tixjiħ f'organiżmu mhux biss huwa kkaratterizzat minn defiċjenza immuni iżda wkoll minn żieda fl-infjammazzjoni kronika [27]. L-istatus proinfjammatorju huwa manifestat bl-aktar mod ċar f’livelli miżjuda ta’ ċitokini proinfjammatorji, inklużi IL-6, TNF- 𝛼, u IL{-1𝛽, fiċ-ċirkolazzjoni flimkien ma’ frekwenzi miżjuda ta’ mard infjammatorju kroniku assoċjat mat-tixjiħ bħal Il-marda ta 'Alzheimer, il-mard ta' Parkinson, u l-aterosklerożi. Waħda miċ-ċitokinesi infjammatorja l-aktar prominenti IL-6 u l-konċentrazzjoni fil-plażma tagħha tiżdied mat-tixjiħ u l-mard relatat mal-età [18, 28, 29] u studji epidemjoloġiċi jissuġġerixxu li IL-6 huwa bijomarkatur tajjeb tal-lonġevità peress li hija relatata mill-qrib mal-mortalità f'koorti ta' pazjenti anzjani [30, 31]. B'mod konsistenti ma' dan, għadd ta' interventi terapewtiċi li jnaqqsu l-konċentrazzjoni ta' IL-6 huma kapaċi jtaffu l-mard relatat mal-età [18]. F'dan l-isfond, kien sinifikanti li f'dan l-istudju s-supplimentazzjoni tad-dieta bl-ECD kienet kapaċi tnaqqas il-konċentrazzjonijiet periferali ta' IL-6, bl-implikazzjoni li dan l-effett jista' jikkontribwixxi għall-mekkaniżmi sottostanti tat-tnaqqis tal-frekwenza ta' mard relatat mal-età li inkisbu permezz tal-użu fit-tul tal-ECD fil-prattika klinika. Flimkien mal-bidliet fir-rispons immuni adattiv li jseħħ bl-età, hemm ukoll bidliet kbar fl-immunità intrinsika bħala età tal-organiżmu. Fost dawn, il-bidliet fiċ-ċelloli naturali killer [18], l-ewwel linja ta’ komponenti ċellulari li jipprovdu lisi ċitotossika diretta ta’ ċelluli tat-tumur u ċelluli infettati bil-virus, kienu estensivi peress li l-anzjani juru suxxettibilità akbar kemm għall-iżvilupp tat-tumur kif ukoll għall-infezzjonijiet tal-virus [1]. 32]. Dan l-istudju indika li ċ-ċelluli CD3 flimkien ma 'Ly49 flimkien ma' NK kienu preżenti f'livelli aktar baxxi b'mod sinifikanti fil-ġrieden SAM P8 senili meta mqabbla ma 'annimali ta' kontroll SAM-R1, li jista 'jkun fattur sottostanti ieħor li jikkunsidra ż-żieda fis-suxxettibilità tal-ġrieden anzjani għall-kanċer u l-infezzjoni tal-virus. Iż-żieda fil-livell ta 'ċelluli NK dehru f'dan l-istudju wara suppliment tad-dieta bl-ECD tista' għalhekk tkun ta 'benefiċċju għal organiżmi anzjani f'termini ta' reżistenza akbar għall-iżvilupp tat-tumur u l-infezzjoni tal-virus. Madankollu, huma meħtieġa aktar studji biex jiċċaraw ir-rwol tal-effett tal-ECD fuq iċ-ċelloli NK f'organiżmi anzjani. Bħala konklużjoni, dan l-istudju wera li t-trattament tas-substrain suxxettibbli tal-ġurdien aċċelerat għas-senescence, SAM P8, b'ECD jista 'jinduċi treġġigħ lura sinifikanti ta' alterazzjonijiet tal-immunosenescence relatati mal-età. Defiċjenzi kemm fil-popolazzjonijiet taċ-ċelluli periferali kif ukoll tal-milsa ta 'ċelluli T naive u ċelluli NK tnaqqsu, filwaqt li tnaqqsu wkoll il-livelli ta' ċelluli T tal-memorja żejda. Barra minn hekk, is-suppliment tad-dieta bl-ECD kien kapaċi jrażżan kemm in-nekrożi fil-limfoċiti periferali kif ukoll il-livelli taċ-ċitokin proinfjammatorju, IL-6. Fl-aħħarnett, minbarra li ġġib bidliet fis-sistema immuni senile, is-suppliment tad-dieta ECD tawwal b'mod sinifikanti l-ħajja tal-ġrieden SAM-P8 senili.

Referenzi
[1] Y. Jiang u P.-F. Tu, "Analiżi ta 'kostitwenti kimiċi fl-ispeċi Cistanche," Ġurnal tal-Kromatografija A, vol. 1216, Nru. 11, pp 1970–1979, 2009.
[2] Q. Xiong, K. Hase, Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba, u S. Kadota, "Hepatoprotective activity of phenylethanoids from Cistanche deserticola," Planta Medica, vol. 64, Nru. 2, pp. 120–125, 1998.
[3] "Immunoloġija u tixjiħ fl-Ewropa. Proċediment tat-2 Konferenza dwar il-Bijoloġija Bażika u l-Impatt Kliniku tal-Immunosenescence. Marzu 22-26, 2001, Cordoba, Spanja," Experimental Gerontology, vol. 37, Nru. 2-3, pp. 183–473, 2002.
[4] G.-D. Xuan u C.-Q. Liu, "Riċerka dwar l-effett tal-phenylethanoid glycosides (PEG) tal-Cistanche deserticola fuq l-anti-aging fil-ġrieden età indotti minn D-galactose," Ġurnal ta 'Materjali Mediċinali Ċiniżi, vol. 31, Nru. 9, pp. 1385–1388, 2008.
[5] D. Aw, AB Silva, u DB Palmer, "Immunosenescence: emerging challenges for an aging population," Immunology, vol. 120, Nru. 4, pp. 435–446, 2007.
[6] M. Alizadeh, H. Pohla, A. Rehbein, u G. Pawelec, "Kultura fit-tul ta 'limfoċiti T umani monoklonali: mudelli għal immunosenescence?" Mekkaniżmi ta' Tixjiħ u Żvilupp, vol. 83, Nru. 3, pp. 171–183, 1995.
[7] EH Greeley, E. Spitznagel, DF Lawler, RD Kealy, u M. Segre, "Modulation of canine immunosenescence by life-long caloric restriction," Immunoloġija Veterinarja u Immunopatoloġija, vol. 111, pp. 287–299, 2006.
[8] SN Meydani, SN Han, u D. Wu, "Vitamina E u rispons immuni fl-età: mekkaniżmi molekulari u implikazzjonijiet kliniċi," Immunological Reviews, vol. 205, pp. 269–284, 2005.
[9] SG Deeks, "HIV infection, inflammation, immunosenescence, and aging," Reviżjoni Annwali tal-Mediċina, vol. 62, pp. 141– 155, 2011.
[10] M. Capri, D. Monti, S. Salvioli et al., "Komplessità ta' strateġiji kontra l-immunosenescenza fil-bnedmin," Artificial Organs, vol. 30, Nru. 10, pp. 730–742, 2006.