L-esplorazzjoni tal-effetti terapewtiċi u l-mekkaniżmu tad-decoction Yishen Tonglong fuq l-iperplażja beninna tal-prostata fil-firien permezz tal-mogħdija tas-sinjalar IL-6/STAT3

 

Astratt

Għan:Biex tinvestiga, permezz tal-interleukin (IL) -6/transducer tas-sinjal u attivatur tat-traskrizzjoni (STAT)3 mogħdija ta 'sinjalazzjoni, l-effetti ta' titjib u l-mekkaniżmu ta 'Yiqi Wenshen Tonglong Decoction (imqassar hawn bħala Yishen Tonglong Decoction) fuq iperplażja beninna tal-prostata (BPH) fil-firien.

Metodi:Firien maskili Sprague-Dawley (SD) ġew kastrati u mbagħad injettati taħt il-ġilda b'propionate ta 'testosterone biex jiġi stabbilit mudell ta' BPH. Il-firien ġew assenjati b'mod każwali lill-gruppi li ġejjin (n=12/grupp): mudell; Yishen Tonglong Decoction gruppi ta 'doża baxxa u għolja (15 u 30 g/kg); Grupp attivatur STAT3 (Colivelin, 1 mg/kg); u grupp kombinat ta 'doża għolja Yishen Tonglong Decoction (30 g/kg) + Colivelin (1 mg/kg). 12-il firien SD maskili addizzjonali servew bħala grupp imħaddem b'mod falz. Wara trattamenti speċifiċi għall-grupp b'Yishen Tonglong Decoction u/jew Colivelin, ivvalutajna l-indiċi tal-prostata (PI) u l-proporzjon estradiol (E2)/testosterone (T); evalwat l-istomorfoloġija tal-prostata u l-fibrożi b'ematossilin-eosina (HE) u t-tbajja tat-trikromju ta' Masson; espressjoni ta' Ki-67 imkejla bl-immunoistokimika; livelli kwantifikati ta' IL-6 u IL-1 fit-tessut tal-prostata u fis-serum permezz ta' ELISA; u skopra proteini relatati mal-passaġġ tal-collagen I/III u IL-6/STAT3 permezz ta' Western blotting.

Riżultati:Meta mqabbel ma 'sham, il-grupp mudell wera iperplażja u fibrożi tal-prostata mmarkata, b'żidiet sinifikanti fil-PI, densità ottika Ki-67, tessut/serum IL-6 u IL-1, kollaġen I/III, IL-6 proteina, u p-STAT3/STAT3, flimkien ma' tnaqqis sinifikanti fl-E2/T (kollha P). Kontra l-grupp mudell, kemm dożi baxxi kif ukoll għoljin ta 'Yishen Tonglong Decoction ttaffi l-iperplażja u l-fibrożi, PI mnaqqsa, Ki-67, IL-6, IL-1 , collagen I/III, IL-6 proteina, u p-STAT3/STAT3, u żiedu E2/T (kollha P < 0.05). Id-decoction b'doża għolja tat titjib akbar mid-doża baxxa (P <0.05). Colivelin waħdu aggrava l-iperplażja u l-fibrożi u kompla żied il-PI, Ki-67, IL-6, IL-1, collagen I/III, IL-6, u p-STAT3/STAT3 filwaqt li naqas E2/T (P < 0.05). L-għoti flimkien ta 'Colivelin attenwat il-benefiċċji tad-decoction b'doża għolja, u marret għall-agħar b'mod sinifikanti l-indiċi kollha ta' hawn fuq meta mqabbla ma 'decoction b'doża għolja waħdu (P <0.05).

Konklużjoni:Yishen Tonglong Decoction itaffu l-infjammazzjoni u jtejjeb il-patoloġija tal-BPH fil-firien, tal-inqas parzjalment billi jrażżan l-attivazzjoni tal-mogħdija tas-sinjalar IL-6/STAT3.

Kliem ewlieni:IL-6/STAT3 sinjalar; Decoction Yishen Tonglong; iperplażja beninna tal-prostata; ħwawar għall-fejqan tal-problemi tal-prostatite

 

Herb Cistanche Supplimenti

 

 

 

Aktar dettalji ta 'ħaxix tcm ġdid għas-saħħa tal-prostata

 

 

 

Introduzzjoni

L-iperplażja beninna tal-prostata (BPH) hija kundizzjoni komuni ostruttiva tal-passaġġ urinarju t'isfel f'irġiel ta' età medja u anzjani, ikkaratterizzata minn proliferazzjoni epiteljali u stromali u tkabbir tal-prostata, li twassal għal eżitazzjoni urinarja, frekwenza u urġenza li jfixklu b'mod sinifikanti l-kwalità tal-ħajja [1,2]. L-infjammazzjoni hija mutur ewlieni tal-patoġenesi tal-BPH; jippromwovi l-proliferazzjoni tal-muskoli lixxi epiteljali u stromali u remodeling fibrotic. Strateġiji anti-infettivi u anti-infjammatorji huma għalhekk effettivi għall-prevenzjoni u l-ġestjoni tal-BPH [3,4].

IL-6 hija ċitokina proinfjammatorja plejotropika espressa b'mod wiesa 'fiċ-ċelloli tat-tessuti. Jattiva STAT3 biex iqanqal programmi infjammatorji [5]. L-inibizzjoni tal-attivazzjoni IL-6/STAT3 tnaqqas il-medjaturi proinfjammatorji downstream, tinterrompi kaskati infjammatorji, inaqqas l-infiltrazzjoni immuni u l-fibrożi assoċjati mal-ipertrofija, u fl-aħħar inaqqas il-progressjoni tal-BPH [6,7]. Għalhekk, IL-6/STAT3 hija mira terapewtika razzjonali fil-BPH.

Yishen Tonglong Decoction hija formula veġetali Ċiniża klassika b'funzjonijiet tradizzjonali ta 'nutrizzjoni Yin u appoġġ Yang, tonifying Qi u Kidney, u jippromwovu ċ-ċirkolazzjoni tad-demm b'eżenzjoni mill-umdità. Klinikament, huwa użat għad-disurja minħabba sħana niedja u stasis tad-demm b'defiċjenza ta 'Kidney Qi, u ġie rrappurtat li jnaqqas l-infjammazzjoni tal-prostata u bidliet iperplastiku fil-BPH [8]. Lil hinn mill-BPH, jinibixxi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli tal-kanċer tal-prostata tal-bniedem, jippromwovi l-apoptożi, u jrażżan l-invażjoni u l-migrazzjoni [9]. Il-farmakoloġija tan-netwerk u d-docking molekulari jissuġġerixxu miri ewlenin rilevanti għall-modulazzjoni tal-mard tal-prostata jinkludu AKT1, IL-6, u VEGFA, fost oħrajn [10]. Ibbażat fuq din ir-raġuni teoretika u evidenza preċedenti, aħna ipoteżijna li Yishen Tonglong Decoction itejjeb il-BPH permezz tat-trażżin tas-sinjalar IL-6/STAT3. Aħna ttestjajna din l-ipoteżi f'mudell tal-far BPH.

Materjali u Metodi

Annimali

Firien SD maskili, grad SPF, 200-230 g, 6-7 ġimgħat, inkisbu minn Daoke Pharmaceutical Technology (Guangdong) Co., Ltd. (SCXK [Yue] 2022-0060). Il-firien kienu miżmuma f'Inqas minn jew ugwali għal 4 għal kull gaġġa taħt ċikli ta 'dawl/dlam ta' 12-il siegħa, umdità 50-60%, u 23-25 ​​grad.

 

Reaġenti u Strumenti

 

Yishen Tonglong Decoction ħwawar mhux raffinati: Anemarrhena asphodeloides (Zhi Mu), Phellodendron chinense (Huang Bai), Cinnamomum cassia (Rou Gui), għerq ippreparat Rehmannia glutinosa (Shu Di Huang), Cornus officinalis (Shan Zhu Yu), Dioscorea opposita (Shan Zhu Yu), (Shan Zhu Yu), Dioscorea opposita (Shan Pasufiu Yao), (F suffruti co) Dan Pi), Achyranthes bidentata (Niu Xi), Aconitum carmichaeli għeruq laterali pproċessati (Fu Zi), Sparganium stoloniferum (San Leng), Curcuma zedoaria (E Zhu), Prunus persica żerriegħa (Tao Ren), Vaccaria segetalis żerriegħa (Wang Bu Liu Xing), AlismaZ plantae-aquaetica. Miġbur minn Beijing Tongrentang (Anguo) Chinese Herbal Slices Co., Ltd.

Colivelin (HY-P1061), MCE (USA).

Propionate tat-testosterone (purità 98%, T7260); Kitts ELISA għall-firien IL-1 (SEKR-0002), E2 (SEKR-0107), T (SEKSM-0003), Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.

Kit tat-tbajja' HE (ab245880), anti-p-STAT3 (ab76315), kit Masson (ab150669), anti-STAT3 (ab68153), anti-collagen I (ab270993), anti-Ki-67 (ab16667), anti-collagen III (ab1849993), anti-kollaġen III (ab1849993), anti-HP2599961 sekondarja kontra l-fenek (ab205722), far IL-6 ELISA (ab234570), Abcam (USA).

Anti--actin (AF5003), Beyotime (Shanghai).

Mikrotomu tal-paraffin HS-2205 (Olabao, Jinan), mikroskopju KP-PH100S (Shenzhen KEPUS), qarrej tal-mikroplate UMR-9600 (Hangzhou Youmi), PowerPac Basic 1645050 u provvisti ta 'enerġija PROTEAN (Bio-Rad, USA).

Mudell u Raggruppament tal-BPH

Il-firien ġew anestetizzati bis-sodium pentobarbital (45 mg/kg, 3% w/v, intraperitoneali), it-testikoli esternalizzati u tneħħew kirurġikament. Wara 3 ijiem ta 'rkupru, il-firien irċevew injezzjonijiet taħt il-ġilda kuljum ta' testosterone propionate (5 mg/kg fiż-żejt taż-żebbuġa) għal 21 jum. It-tkabbir gross u l-iperplażja istopatoloġika kkonfermaw is-suċċess tal-immudellar tal-BPH [11]. Il-firien tal-fart għaddew minn inċiżjoni skrotali mingħajr orkidektomija u rċevew żejt taż-żebbuġa tal-vettura.

 

Preparazzjoni u Amministrazzjoni

Preskrizzjoni waħda ta 'Yishen Tonglong Decoction kien fiha: Zhi Mu, Huang Bai, Shan Zhu Yu, Shan Yao, Fu Ling, Mu Dan Pi, Wang Bu Liu Xing, Ze Xie (kull 15 g); Niu Xi, Shu Di Huang, Tao Ren (kull 20 g); Fu Zi, San Leng, E Zhu, Rou Gui (kull 10 g). Il-ħxejjex aromatiċi ġew decocted darbtejn bl-ilma, filtrati kkombinati u kkonċentrati għal 1.5 jew 3.0 g/mL. Colivelin ġie maħlul fis-salina għal 0.1 mg/mL.

Gruppi ta 'decoction b'doża baxxa u għolja: gavage 15 jew 30 g/kg (10 mL/kg f'1.5 jew 3.0 g/mL), flimkien ma' salina intraperitoneali (10 mL/kg).

Grupp Colivelin: gavage saline (10 mL/kg) flimkien ma' Colivelin intraperitoneali 1 mg/kg (10 mL/kg ta' 0.1 mg/mL).

Doża għolja + Grupp Colivelin: gavage 30 g/kg decoction flimkien ma Colivelin 1 mg/kg ip

Gruppi ta' simulazzjoni u mudelli: gavage saline u ip saline (10 mL/kg).
It-trattamenti kollha kienu darba kuljum għal 21 jum.

 

Indiċi tal-Prostata u E2/T; Ġbir tal-Kampjuni

Erbgħa u għoxrin siegħa wara t-trattament finali, il-firien ġew anestetizzati (kif hawn fuq). Il-massa tal-ġisem u l-piż imxarrab tal-prostata ġew irreġistrati biex jiġi kkalkulat PI=piż imxarrab tal-prostata/massa tal-ġisem. Inġabar demm aortiku addominali, ċentrifugat (2000 rpm, 15 min) biex jinkiseb serum. E2 u T ġew imkejla b'ELISA u E2/T ikkalkulat; serum li kien fadal kien maħżun f'-80 grad. Madwar 0.7 g ta 'tessut tal-prostata kien snap-ffriżat f'nitroġenu likwidu għall-analiżi tal-proteini; il-bqija kien iffissat, deidratat, inkorporat fil-paraffin, u sezzjonat f'~5 μm.

HE u Masson's Staining

Id-deparaffinizzazzjoni fil-xylene u l-etanoli gradati (100%, 90%, 80%, 75%) kienet segwita minn idratazzjoni. It-taqsimiet ġew imtebba’ b’kits ta’ HE u Masson skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur (3 slides kull wieħed), imbagħad maħsula, deidratati, imnaddaf, u mmuntati għall-mikroskopija.

 

Immunoistokimika għall-Proliferazzjoni taċ-Ċelloli

Wara deparaffinizzazzjoni/idratazzjoni, is-sezzjonijiet ġew ittrattati bi 3% H2O2, imblukkati bis-serum tal-mogħoż, u inkubati matul il-lejl b'anti-Ki-67 (1:150). L-iskoperta użat kit SP b'kromoġenu DAB. L-immaġini ġew akkwistati u d-densità ottika Ki-67 kkwantifikata minn ImageJ.

 

ELISA għal IL-6 u IL-1 fil-Prostata u fis-Serum

It-tessut tal-prostata iffriżat kien ikkapuljat, omoġenizzat fil-buffer RIPA, u ċentrifugat (3000 rpm, 20 min) biex jinkisbu lisati totali tal-proteini. Il-konċentrazzjonijiet tal-proteini ġew determinati b'BCA. Alikwoti (0.2 mL) ta' lisat tat-tessuti u serum imdewweb ġew analizzati għal IL-6 u IL-1 permezz ta' ELISA.

Western Blot għal Proteini tal-Pathway ta' Collagen I/III u IL-6/STAT3
Kampjuni żnaturati (100 grad) ġew separati minn SDS-PAGE u trasferiti għan-nitrocellulose. Il-membrani tqassmu skont il-piż molekulari għal kollaġen I, kollaġen III, -actin, IL-6, STAT3 u p-STAT3. Wara 3% imblukkar tal-BSA, ġew applikati antikorpi primarji, segwiti minn antikorp sekondarju konjugat bl-HRP. Il-meded ġew viżwalizzati b'kimiluminixxenza u kkwantifikati b'ImageJ.

 

Statistika

Id-dejta ġiet analizzata bl-użu ta' SPSS 26.0 b'testijiet ANOVA one-way u SNK-q post hoc.

 

Riżultati

 

Suċċess tal-immudellar tal-BPH: Meta mqabbel ma 'sham, il-grupp mudell wera żidiet ovvji fid-daqs tal-prostata u iperplażja istoloġika u fibrożi. PI, Ki-67 densità ottika, prostata/serum IL-6 u IL-1, collagen I/III, IL-6, u p-STAT3/STAT3 kienu kollha elevati b'mod sinifikanti, filwaqt li E2/T tnaqqset (P <0.05).

Effetti terapewtiċi ta 'Yishen Tonglong Decoction: Kemm dożi ta' 15 u 30 g/kg mitigaw it-tkabbir tal-prostata u l-fibrożi. Dawn it-trattamenti naqqsu b'mod sinifikanti PI, Ki-67, IL-6, IL-1, collagen I/III, IL-6 protein, u p-STAT3/STAT3, u żiedu E2/T (P <0.05). Id-doża għolja pproduċiet effetti superjuri għad-doża baxxa (P < 0.05).

Effetti tal-attivazzjoni STAT3: Colivelin aggrava l-iperplażja u l-fibrożi tal-prostata u żiedet aktar il-markaturi infjammatorji u fibrotiċi filwaqt li naqas E2/T kontra l-mudell (P <0.05).

Antagoniżmu minn Colivelin: Ko-trattament b'Colivelin dgħajjef il-benefiċċji tad-decoction b'doża għolja, għolla l-indiċi infjammatorji/fibrotiċi u naqqas E2/T meta mqabbel ma 'decoction b'doża għolja waħdu (P <0.05).

 

Diskussjoni

Raġunament mekkanistiku: L-assi IL-6/STAT3 huwa passaġġ infjammatorju ċentrali implikat fir-rimodelazzjoni tat-tessut tal-prostata. L-irbit ta 'IL-6 jattiva s-sinjalar JAK/STAT3, imexxi t-traskrizzjoni ta' ġeni proinfjammatorji u profibrotiċi, irawwem proliferazzjoni epiteljali/stromali, infiltrazzjoni ta 'ċelluli immuni, u depożizzjoni ta' matriċi extraċellulari. Is-sejbiet tagħna - titjib bil-formula tal-ħxejjex u d-deterjorazzjoni b'attivatur STAT3 - jappoġġjaw rabta mekkanistika kawżali li biha Yishen Tonglong Decoction itaffi l-BPH billi tnaqqas l-attivazzjoni ta 'IL-6/STAT3.

 

Perspettiva tal-formula tal-ħxejjex (ħwawar għall-fejqan tal-problemi tal-prostatite): Il-ħwawar komponenti jipprovdu azzjonijiet komplementari rilevanti għall-BPH u infjammazzjoni bħal prostatite:

Tneħħija tas-sħana niedja u anti-infjammatorji: Zhi Mu (Anemarrhena), Huang Bai (Phellodendron), Mu Dan Pi (qoxra Paeonia), Ze Xie (Alisma).

Tonifikazzjoni Qi/kliewi u modulazzjoni endokrinali: Shu Di Huang (Rehmannia), Shan Zhu Yu (Cornus), Shan Yao (Dioscorea), Fu Ling (Poria).

Attivazzjoni tad-demm u potenzjal antifibrotiku: San Leng (Sparganium), E Zhu (Zedoary), Tao Ren (qalba tal-ħawħ), Wang Bu Liu Xing (Vaccaria).

Tisħin Yang u titjib tal-mikroċirkolazzjoni: Rou Gui (Kannella), Fu Zi (Aconite, ipproċessat).

Appoġġ ta 'tendon/għadam u ċirkolazzjoni pelvika: Niu Xi (Achyranthes).

Din is-sinerġija tista' tnaqqas b'mod kollettiv iċ-ċitokini infjammatorji (IL-6, IL-1), il-proliferazzjoni (Ki-67), u l-fibrożi (kollaġen I/III), konsistenti mat-trażżin tas-sinjalar IL-6/STAT3 osservat f'Western blots. Iż-żieda fl-E2/T tissuġġerixxi bilanċ mill-ġdid parzjali tal-ambjent tas-sess-sterojdi, li jista 'jinfluwenza wkoll id-dinamika tat-tkabbir tal-prostata.

Traduzzjoni klinika u limitazzjonijiet: Filwaqt li din id-dejta preklinika hija promettenti għal BPH u potenzjalment għal infjammazzjoni bħal prostatite, l-estrapolazzjoni għall-bnedmin teħtieġ kawtela. Il-konverżjoni tad-doża, il-kontroll tal-kwalità ta' preparazzjonijiet b'ħafna ħxejjex, u l-interazzjonijiet bejn il-ħxejjex u d-droga jeħtieġu aktar studju. Madankollu, l-evidenza ċċentrata fuq il-mogħdija (benefiċċju b'decoction, ħsara bl-attivazzjoni STAT3, u qari tal-mogħdija) ssaħħaħ il-pedament teoretiku għall-esplorazzjoni klinika ta 'dan l-approċċ ibbażat fuq il-ħxejjex għall-fejqan tal-problemi tal-prostatite u l-BPH.

 

Konklużjoni

Yishen Tonglong Decoction itaffi l-iperplażja u l-fibrożi tal-prostata fil-firien BPH billi jinibixxi l-attivazzjoni ta 'IL-6/STAT3 u jnaqqas is-sinjalar infjammatorju u profibrotiku, b'effikaċja dipendenti fuq id-doża. Dawn is-sejbiet jipprovdu appoġġ mekkanistiku għall-użu tradizzjonali tiegħu u raġuni moderna bbażata fuq il-mogħdija għal aktar żvilupp bħala terapija bbażata fuq il-ħxejjex għall-BPH u kundizzjonijiet relatati mal-prostatite.

 

Referenzi

[1–13] Kif ikkwotat fit-test oriġinali.