Estratt tal-Fenugreek Etanoliku: Il-Mekkaniżmi Molekulari tiegħu Kontra x-Xjuħija tal-Ġilda U l-Funzjonijiet Mtejba Permezz tan-Nanokapsulazzjoni 2

Jekk jogħġbok ikkuntattjaoscar.xiao@wecistanche.comgħal aktar informazzjoni

2.5.Effett tal-LNF u l-Estratt tal-Fenugreek fuq il-Vijabilità taċ-Ċelloli u l-Produzzjoni tal-Kallaġen fiċ-Ċelloli tal-Fibroblast Dermali tal-Bniedem

Biex tiġi investigata ċ-ċitotossiċità ta' LNF fformulat, iċ-ċelloli ġew ittrattati b'estratti vojta, LNF, u fenugreek f'{{0}} ug/mL (dilwizzjoni doppja) għal 24 siegħa. Il-vijabbiltà taċ-ċelluli tkejlu bl-użu ta' assaġġ MTT. Kif muri fil-Figura 6a, il-vijabbiltà taċ-ċelluli naqset fiċ-ċelloli ttrattati bl-estratt, filwaqt li ma ġie osservat l-ebda effett fiċ-ċelloli vojta u ttrattati bl-LNF. Id-dejta indikat li LNF wera tossiċità aktar baxxa mill-estratt. Aħna investigajna aktar il-kapaċità ta 'LNF fuq l-induzzjoni tal-produzzjoni tal-kollaġen fiċ-ċelloli tal-fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem. Iċ-ċelloli ġew ittrattati b'7 ug/mL ta' estratt u 1{{20}}{0 ug/mL ta' LNF (7 ug/mL ta' ekwivalenza ta' estratt), flimkien ma' partiċelli vojta bħala kontroll, għal7 u 14-il jum. Kif muri fil-Figura 6b, għat-trattament b'LNF, l-ammont ta 'kollaġen imtebba' żdied bi 30 fil-mija u 50 fil-mija f'7 u 14-il jum, rispettivament, meta mqabbel mat-trattament tal-estratt. Barra minn hekk, fil-Figura 2a, l-LNF ifformulat saħħaħ l-attività anti-collagenase, peress li IC5o tnaqqas b'mod sinifikanti għal 0.21 ± 0.03 mg / mL meta mqabbel ma 'estratt tal-fenugreek (0.57±0.02mg / mL). Dawn ir-riżultati wrew li l-formulazzjoni ta 'LNF tista' ssaħħaħ induzzjoni tal-produzzjoni tal-kollaġen fiċ-ċelloli tal-fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem u ttejjeb l-attività anti-collagenase tal-estratt tal-fenugreek. Huwa possibbli li n-nano-formulazzjoni tal-estratt tal-fenugreek ittejjeb b'mod sinifikanti l-qawwa tagħha bħala ingredjent attiv fil-prodotti kontra t-tixjiħ.

2.6.Rwol ta' LNF Formulat fuq MMP1, MMP9, IL-6, u IL-8 Inibizzjoni wara Espożizzjoni UV

Imbagħad investigajna xi mekkaniżmi possibbli ta 'LNF fuq attività kontra t-tixjiħ. L-espożizzjoni UV hija waħda mir-regolaturi ewlenin tat-tixjiħ tal-ġilda, peress li ġie rrappurtat li jinduċi l-espressjoni ta 'ċerti membri tal-familja tal-matrix metalloproteinase (MP), li tikkawża kollass tal-kollaġen, inklużi MMP1, MMP3 u MMP9 [34,35] . Aħna osservajna li l-espożizzjoni UV kienet tossika ħafna għaċ-ċelluli tal-ġilda kkultivati ​​flimkien (Figura 7a) u tejbet il-produzzjoni ta 'ċitokini MMP1 u MMP9 (Figura 7b). Barra minn hekk, it-trattamenti tal-estratt tal-fenugreek u l-LNF ifformulat setgħu jnaqqsu b'mod sinifikanti s-sekrezzjonijiet. ta 'MMP1 u MP9 meta mqabbla ma' ċelloli ta 'kontroll wara irradjazzjoni UV. Dawn ir-riżultati kienu konsistenti mat-trattament ta 'rutin u resveratrol bħala kontroll ta' aġent kontra t-tixjiħ. Notevolment, it-tnaqqis tal-espressjonijiet MMP1 u MMP9 f'ċelloli ttrattati b'LNF kien ferm aktar baxx milli fit-trattament tal-estratt. Għalhekk, LNF jista 'jnaqqas is-sekrezzjonijiet ta' MPI u MMP9 mal-espożizzjoni UV, u sussegwentement jipprevjeni t-tixjiħ tal-ġilda kkaġunat bir-ritratti.

Jekk jogħġbok ikklikkja hawn biex tkun taf aktar

Barra minn hekk, l-espożizzjoni tal-UVR fuq il-ġilda tal-bniedem tista' wkoll timmedja l-induzzjoni ta' infjammazzjoni u attivazzjoni ta' ċitokini pro-infjammatorji, bħal TNF- u interleukins, inklużi IL-1, IL-2, IL{{4} },u IL-8 [36]. Imbagħad eżaminajna l-funzjoni ta 'LNF fuq l-inibizzjoni tal-produzzjoni ta' ċitokini infjammatorji stimulati mill-UV, inklużi IL-6 u IL-8. Fil-Figura 7c, osservajna li l-irradjazzjoni UV tejbet b'mod sinifikanti l-produzzjoni ta 'IL{{ 11}} u IL-8 ċitokini f'ċelloli tal-ġilda kkultivati ​​flimkien. Tnaqqis sinifikanti fl-espressjonijiet IL-6 u IL-8 kien osservat bit-trattament tal-estratt tal-fenugreek meta mqabbel mal-kontroll. Interessanti, it-trattament tal-estratt tal-fenugreek wera inibizzjonijiet ta' IL-6 u IL{-8 konsiderevolment ogħla meta mqabbla mar-rutin, fejn dawn l-attivitajiet inibitorji kienu simili għal gruppi ttrattati bir-resveratrol. Notevolment, l-espressjonijiet ta 'IL-6 u IL{-8 f'ċelluli ttrattati bl-LNF kienu inqas b'mod sinifikanti meta mqabbla mal-grupp tal-estratt tal-fenugreek wara espożizzjoni għall-UV. Flimkien, dawn ir-riżultati indikaw li LNF jista' potenzjalment jinibixxi l-produzzjoni ta' IL-6 u IL-8 medjata mill-UV, u sussegwentement jipprevjeni l-infjammazzjoni tal-ġilda fotostimulata u t-tixjiħ tal-ġilda.Bħala konsegwenza, dawn ir-riżultati jissuġġerixxu li l-estratt etanoliku tal-fenugreek u n-nano-formulazzjoni tiegħu jistgħu potenzjalment jintużaw bħala ingredjenti attivi għall-prevenzjoni tat-tixjiħ.

3. Diskussjoni

L-estratt tal-fenugreek intwera li jippossjedi attivitajiet antiossidanti, antiradikali u anti-infjammatorji f'diversi studji [29,37], għalkemm il-proprjetà tiegħu kontra t-tikmix għadha ma ġietx sfruttata. Din ir-riċerka kienet l-ewwel li identifikat attività kontra t-tixjiħ tal-estratt tal-fenugreek bl-użu ta 'assaġġ inibitorju ta' collagenase in vitro. Studji preċedenti ssuġġerew l-użu ta 'estratti tal-pjanti b'attività anti-collagenase bħala ingredjent attiv fi prodotti kożmeċewtiċi bħall-estratt tal-pomace tal-għeneb [38], estratt tat-tè aħdar [39] u estratt tal-faqqiegħ [40]. Barra minn hekk, l-effett tal-estratt tal-fenugreek fuq il-produzzjoni tal-kollaġen fiċ-ċelloli tal-fibroblast tal-ġilda tal-bniedem qatt ma ġie rrappurtat. Tamara et al. (2006) wera l-effett tal-flavonoids fuq is-sinteżi tal-kollaġen fil-fibroblasti umani bl-użu tar-rutin, bħala kompost attiv tal-estratt tal-fenugreek, li jgħin biex iżid il-kollaġen [41]. Dan l-istudju tal-fenugreek wera l-kapaċità promettenti tiegħu kontra t-tixjiħ u rrappreżenta r-rutina bħala markatur bijoloġiku.

Rutin (3),4',5.7-tetrahydroxy-flavone-3-rutinoside) intuża f'dan l-istudju peress li huwa flavonol glycoside li ġie rrappurtat f'diversi pjanti, inkluż Fagopyrum esculentum Moench, Ruta graveolens L, Sophora japonica L., Eucalyptus spp. [37l, u fenugreek[17]Rutin jippossjedi attivitajiet antiossidanti, ċitoprotettivi, antikarċinoġeniċi, newroprotettivi u kardjo-protettivi, u jipproponi l-applikatur tiegħu fil-prevenzjoni tat-tixjiħ u mard relatat mat-tixjiħ. Ir-riżultati tagħna wrew li l-estratt ippreparat wera ammont għoli ta 'kontenut ta' rutina, li bilkemm instab jew instab bħala komponent tal-estratt tal-fenugreek fi studji oħra. Ħafna studji oħra rrappurtaw trigonellina bħala kostitwent kimiku ewlieni tal-estratt tal-fenugreek [18,37,38,42-47].

Anke l-estratt tal-fenugreek jippossjedi attività potenzjali bħala aġent kontra t-tixjiħ. Il-kulur u l-istabbiltà tiegħu għadhom sfida għal din l-applikazzjoni. In-nanokapsulazzjoni ġiet irrappurtata bħala teknoloġija speċifika li hija kapaċi tistabbilizza, taħbi r-riħa, ittejjeb is-solubilità fl-ilma, tikkontrolla r-rilaxx ta 'komposti bijoloġiċi [48,49], u ttejjeb id-dehra fiżika ta' prodotti naturali. Liponiosome ġie applikat f'dan l-istudju minħabba l-proprjetajiet uniċi tiegħu, li huma komposti minn frazzjonijiet idrofiliċi u idrofobiċi, li jistgħu jinkapsulaw firxa wiesgħa ta 'sustanzi b'solubiltajiet differenti [50]. Aħna fformulajna liposomi inkapsulati tal-estratt tal-fenugreek (LNF), li huwa trasportatur ibridu li jinkludi karatteristiċi ta 'liposomi u niosomi. Il-komponenti ibridi tal-LNF żviluppati ġew ikkonfermati mit-temperatura tat-tidwib bl-użu ta 'DSC, li jirriflettu kemm il-karatteristiċi termali tal-liposomi kif ukoll tan-niosomi.

cistanche jista 'anti-aging

L-istratum corneum huwa saff ta 'barra tal-ġilda li jaħdem bħala barriera effettiva kontra sustanzi ta' ħsara billi jirrestrinġi t-trasport tagħhom madwar il-ġilda. Madankollu, ġie ppruvat li l-użu tan-nanocarriers itejjeb il-konsenja transdermali billi jsaħħaħ il-penetrazzjoni ta' drogi jew sustanzi minn dan l-ostaklu[51]. Biex tinvestiga l-qawwa tal-LNF fuq il-kunsinna transdermali, intużat il-penetrazzjoni tal-ġilda tal-ħnieżer ex vivo peress li l-karatteristiċi anatomiċi tagħha huma l-aktar simili għal dawk tal-ġilda umana, f'termini ta 'ħxuna tal-ġilda, struttura follikulari u densità tax-xagħar [52]. Ir-riżultati tagħna juru li l-permeabilità tal-LNF kienet akbar u aktar profonda mill-estratt tal-fenugreek u r-rutin, u l-profil ta 'rilaxx tal-LNF kellu rilaxx aktar bil-mod mill-estratt tal-fenugreek, li jissuġġerixxi li l-LNF ifformulat kien notevolment superjuri għal dawk tal-estratt fuq il-penetrazzjoni tal-ġilda. Barra minn hekk, l-LNF ifformulat saħħaħ l-attività kontra l-collagenase, peress li IC-A tnaqqset b'mod sinifikanti għal 0.205±0.03mg/mL meta mqabbel mal-fenugreek estratt (0.567±0.02 mg/mL). Dawn ir-riżultati wrew li l-formulazzjoni ta 'LNF tista' ssaħħaħ induzzjoni tal-produzzjoni tal-kollaġen fiċ-ċelloli tal-fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem u ttejjeb l-attività anti-collagenase tal-estratt tal-fenugreek. Nano-formulazzjoni tal-estratt tal-fenugreek potenzjalment tgħin ittejjeb il-qawwa tagħha billi tużaha bħala ingredjent attiv għall-prevenzjoni tat-tixjiħ.

L-espożizzjoni għar-radjazzjoni UV hija l-fattur ewlieni tat-tixjiħ estrinsiku tal-ġilda, magħruf bħala tixjiħ qabel matur jew fotoaging [53.54]. Ir-radjazzjoni tikkawża l-attivazzjoni ta 'riċetturi tal-wiċċ taċ-ċelluli ta' keratinoċiti u fibroblasti tal-ġilda, li twassal għal induzzjoni ta 'espressjonijiet tal-matriċi extraċellulari tal-ġilda, speċjalment il-familja tal-matrix metalloproteinases (MPs). Intwera li l-espożizzjoni kronika għal dożi baxxi ta' UVA tikkawża regolazzjoni 'l fuq tal-livelli ta' mRNA ta' collagenase-1 (MMP1), stromelysin-1 (MMP3), u gelatinase A (MMP2)[55]. Bħala konsegwenza, isseħħ id-degradazzjoni tal-fibri elastiċi tal-kollaġen tal-ġilda, kif ukoll għeluq ta 'sinteżi ġdida tal-kollaġen. Dan il-fenomenu jaffettwa l-integrità, l-elastiċità u l-istrutturi tal-ġilda, wara d-deregolamentazzjoni tal-funzjonijiet protettivi tal-ġilda, li jammontaw għall-formazzjoni tat-tikmix u sinjali tat-tixjiħ tal-ġilda [54,56]. Barra minn hekk, l-espożizzjoni tal-UVR fuq il-ġilda tal-bniedem timmedja espressjoni ta 'TNF-alfa, li hija regolatur importanti tal-kaskata infjammatorja fil-ġilda. L-irradjazzjoni UV tagħti bidu wkoll għall-attivazzjoni kemm ta' infjammazzjoni kif ukoll ta' sekrezzjonijiet ta' ċitokini pro-infjammatorji, bħal interleukin-2 (IL{-2) u interleukin{-6 (1L{-6) [36] . Bħala riżultat, dan ir-rispons infjammatorju indott mill-UVR għandu rwol importanti fuq l-induzzjoni ta 'ġilda maħruqa b'sinjali ta' ħmura, irritazzjoni u eritema [35.59].

Għalhekk, biex tiġi evitata l-kawża ta 'tixjiħ prematur, is-sejba ta' xi aġenti attivi ġodda b'dawn il-funzjonijiet preventivi tkun ideali. Ir-riżultati tagħna wrew li l-formulazzjoni ta 'LNF tista' ssaħħaħ induzzjoni tal-produzzjoni tal-kollaġen fiċ-ċelluli tal-fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem, tista 'tnaqqas is-sekrezzjonijiet ta' MP1, MP9, IL-6, u IL-8 mal-espożizzjoni UV, u tista ' ittejjeb l-attività anti-collagenase tal-estratt tal-fenugreek. Għalhekk, estratt tal-fenugreek etanoliku u n-nano-formulazzjoni tiegħu jistgħu jkunu ta 'użu potenzjali bħala ingredjent attiv ġdid fi prodotti kożmeċewtiċi u dik in-nanokapsulazzjoni hija kapaċi ttejjeb il-funzjoni u l-attività tal-estratt tal-fenugreek bħala aġent kontra t-tixjiħ. 4.Materjali u Metodi

4.1.Materjali tal-Pjanti u Reaġenti Kimiċi

Fenugreek seed powder was received from Herbal Acharn'sHome Co.,Ltd. (Bangkok, Thailand). Rutin trihydrate (>Purità ta' 98 fil-mija), buffer tat-tricine, collagenase minn clostridium histolyticum u FALGPA (N-[3(2-furyl) acryl)-Leu-Gly-Pro-Ala), aħmar dirett 80, picric acid, u dimethyl sulfoxide kienu mixtrija minn Sigma-Aldrich (St.Louis, MO, USA) Aċetonitrile, aċetat etiliku, etanol assolut, aċidu formiku, fosfat deidrat tas-sodju, fosfat idroġeniku disodju, aċidu idrokloriku u idrossidu tas-sodju nxtraw mingħand Carlo Erba (Emmendingen, il-Ġermanja). L-etanol ta 'grad kummerċjali nxtara minn Italmar Co., Ltd. (Bangkok, it-Tajlandja). Il-kolesterol inxtara minn Cosmeplus Co., Ltd. (Bangkok, it-Tajlandja). Propylene glycol u taħlita solubilizer inxtraw minn S.Tong Chemicals Co, Ltd. (Nonthaburi, it-Tajlandja). Sorbitan oleate inxtara minn Croda Co., Ltd. (Bangkok, it-Tajlandja). Il-fosfolipidi (Phospholipon 90G) inxtraw minn Cargill Siam Ltd. (Bangkok, it-Tajlandja). Tocopherol acetate inxtara minn Namsiang Co, Ltd. (Bangkok, it-Tajlandja). Il-preservattiv inxtara minn Forecus Co., Ltd. (Bangkok, it-Tajlandja). Il-paraformaldehyde inxtara minn Himadia Laboratories (Mumbai, l-Indja) u 3-(4,5-Dimethylthiazol{-2-yl){-2,5-diphenyltetrazolium bromide inxtara minn Calbiochem (Burlington, MA, l-Istati Uniti).

4.2.Estrazzjoni

Trab taż-żerriegħa tal-fenugreek (500 g) kien maċerat b'95 fil-mija etanol (1:5) għal 3 ijiem. L-estrazzjoni ġiet ripetuta tliet darbiet (3 × 2500 mL).Is-soluzzjoni tal-estratt kollu ġiet iffiltrata, bl-etanol evaporat taħt 100 mbar fi 40 grad bl-użu ta 'evaporatur li jdur (Heidolph, Schwabach, Ġermanja). L-estratt miksub kien il-pejst żejtni safrani-kannella b'rendiment ta '5 fil-mija (w/w) u nżamm f'4 gradi sakemm jintuża.

4.3. Validazzjoni UHPLC u Identifikazzjoni ta 'Rutin fl-Estratt tal-Fenugreek

It-triidrat tar-rutin, bħala markatur standard, intuża biex janalizza l-estratt tal-fenugreek. Il-metodu UHPLC ġie żviluppat u vvalidat f'termini ta' linearità, preċiżjoni, preċiżjoni, u sensittività[31,32] minn sistema Shimadzu LC-30 AD UHPLC li tinkludi detector ta' diode array SPD-M20A u autosampler SIL-30AC. Il-metodu uża kolonna SUPLECO Titan C18 (5 ċm × 2.1 mm, 1.9 um, SUPLECO, Burlington, VT, USA) fi 30 grad u skopra wavelength ta' 26{{ 19}} nm. Il-fażi mobbli ġiet adattata minn Kenny et al. [45]. Fil-qosor, 0.05 fil-mija v/v ta’ soluzzjoni ta’ aċidu formiku f’ilma ultrapur(A) u 0.05 fil-mija v/v ta’ aċidu formiku fl-aċetonitrile (B) ġew ippreparati bi fluss ta '0.25 mL/min fil-modalità gradjent: il-kundizzjoni tal-bidu kienet 10 fil-mija B for1.0 min, żdiedet għal 75 fil-mija B għal 3.5 min, naqset għal 10 fil-mija B għal 0.75 min, u miżmuma għal 0.25 min.

4.4. Collagenase Assay

Twettaq assaġġ tal-collagenase biex tiddetermina l-attività kontra l-collagenase [60]. Is-soluzzjoni tat-taħlita, li fiha 25 μL ta' 50 mM soluzzjoni buffer tat-tricine (pH7.5), 25 μL ta' 2 unitajiet/mL collagenase (clostridium histolyticum tip IA), u 25 μL tal-kampjun, ġiet ippreparata u inkubata f'temperatura tal-kamra għal 15 min. Biex tibda r-reazzjoni, ġew miżjuda 10 uL tas-sottostrat sintetiku u 2mM ta' N-[3-(2-Furyl) acryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA) fis-soluzzjoni tat-taħlita u inkubati għal 20 min. Il-bidla fl-assorbiment ta 'kull supernatant ġiet imkejla f'340 nm (qarrej tal-mikroplate Synergy H1) u l-valuri ICso ġew ikkalkulati billi tpinġi kurva ta' rigressjoni lineari li turi l-konċentrazzjonijiet tal-kampjun fuq l-assi x u l-inibizzjoni perċentwali fuq l-assi y. L-inibizzjoni perċentwali ġiet ikkalkulata bl-użu tal-ekwazzjoni li ġejja:

4.5.Kultura taċ-Ċelloli

Ċelloli tal-fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem inxtraw mill-Ġbir tal-Kultura tat-Tip Amerikan: ATCC (PCS-201-010) u keratinoċiti umani immortalizzati (HaCaT) inxtraw minn Cell Lines Service, il-Ġermanja (Kat. Nru 300493). Iċ-ċelloli ġew ikkultivati ​​fil-midja tal-Ajkla modifikata ta' Dulbecco (DMEM) (Gibco, UK) supplimentata b'10 fil-mija FBS (Gibco, UK), 1 fil-mija penicillin (100units/mL), u streptomycin (100 ug/mL) (Gibco, St. , MO, USA). Iċ-ċelloli ġew inkubati f'37 grad taħt ambjent ta 'dijossidu tal-karbonju ta' 5 fil-mija.

4.6. Kontenut tal-collagen u Picrosirius Red Staining

Iċ-ċelloli tal-fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem ġew miżrugħa b'2.5 × 104 ċelluli/bir fi pjanċi ta '48 bir u inkubati għal 24 siegħa. Iċ-ċelloli mbagħad ġew ittrattati b'diversi konċentrazzjonijiet ta' liponio-some mingħajr estratti (indikati bħala vojt), estratt tal-fenugreek li jinkapsula liponiosomi (LNF), u estratt tal-fenugreek għal 7 u 14-il jum, b'005 fil-mija DMSO użat bħala kontroll tal-vettura. Il-midja kienet mibdula kull jumejn. Iċ-ċelloli mbagħad ġew maħsula b'PBS u ffissati b'100 uL ta '4 fil-mija PFA għal 10 min. Iċ-ċelloli ġew maħsula bil-PBS (darbtejn) u mtebbgħin b'100 uL ta '0.1 fil-mija ta' 80 soluzzjonijiet ħomor diretti għal 10 min. Wara t-tebgħa, ġie miżjud 0.01NHCl f'70 fil-mija etanol biex taħsel iż-żebgħa żejda. Il-kollaġen imtebba' ġie maħlul b'10 uL ta' 0.5 N NaOH u l-assorbiment tkejjel f'540 nm bl-użu ta' qarrej tal-mikroplate (qarrej tal-mikroplate Synergy H1). Il-perċentwal tal-kontenut tal-kollaġen ġie kkalkulat bl-użu tal-ekwazzjoni li ġejja:

4.7.Assaġġ tal-Vijabilità taċ-Ċellula

Iċ-ċelloli tal-fibroblast tal-ġilda tal-bniedem ġew miżrugħa f'2 × 104 ċelluli/bir fi pjanċi ta '96 bir u inkubati għal 24 siegħa. Wara l-inkubazzjoni, konċentrazzjonijiet differenti (0-100 ug/mL) tal-liposomi mingħajr estratti (blank), LNF, u estratt tal-fenugreek ġew miżjuda u kkultivati ​​għal 24 siegħa. Imbagħad, 100 μL ta 'MTT (1 mg/mL) ġew miżjuda f'kull bir u inkubati għal 4 sigħat. DMSO ġie miżjud biex jinħall il-prodott formazan. L-assorbiment tkejjel f'570 nm bl-użu ta' microplate reader (Synergy Hl microplate reader). Il-perċentwal tal-vijabbiltà taċ-ċelluli ġie kkalkulat bl-użu tal-ekwazzjoni li ġejja:

4.8.Formulazzjoni tal-Liponosomi

Pre-emulsifikazzjoni wara l-omoġenizzazzjoni kienet impjegata għall-formulazzjoni tal-liposomi. Intużat taħlita ta 'fosfolipidi u emulsjonanti biex tifforma saff sferiku tal-lipidi u ntuża l-kolesterol biex itejjeb ir-riġidità tal-partiċelli [15]. Fil-qosor, il-leċitina tas-sojja, il-kolesterol u l-emulsjonant ġew imxerrda fi propylene glycol u msaħħna fi grad 70-80 (fażi taż-żejt), kif muri fit-Tabella 2. L-estratt tal-fenugreek ġie maħlul fi propylene glycol/ilma (fażi tal-ilma) u msaħħna f' l-istess banju bl-ilma. Is-soluzzjoni milwiema tal-estratt ġiet miżjuda kontinwament f'komponenti tal-lipidi u omoġenizzata f'8000-100 rpm għal 5-10 min billi tuża tħawwad b'veloċità għolja (Heidolph Silent Crusher M, Kenilworth, N, USA). It-taħlita tkessaħ għal 50 grad u tocopherol acetate ġie miżjud u omoġenizzat għal 10 min ieħor biex jinkiseb LNF. Il-morfoloġija ta 'LNF ġiet osservata permezz ta' mikroskopija elettronika ta 'trażmissjoni (TEM, JEOL, Peabody, MA, USA), bid-daqs idrodinamiku, l-indiċi tal-polidispersità Pdl, u l-potenzjal zeta investigati bl-użu ta' tifrix tad-dawl dinamiku (DLS, Nanosizer ZS, Malvern Instruments, Worcestershire, RENJU UNIT). Il-konferma tal-imġieba tat-tidwib tal-liposomi ġiet investigata bl-użu ta 'kalorimetrija ta' skannjar differenzjali (DSC, Mettler Toledo DSC1). Il-viskożità tal-kampjun kienet imkejla b'viskometru Brookfield diġitali (mudell HBDV-IIIU CP). Fil-qosor, intużaw 0.5g ta 'kampjuni u l-viskożità ġiet eżaminata bl-użu ta' magħżel CP-40, bil-veloċità kkontrollata f'0.5 rpm għal 20 min fit-temperatura ambjentali.

Biex tiġi evalwata l-istabbiltà ta 'LNF, il-partiċelli nżammu f'4 grad, 25 grad, u 40 grad għal 3 xhur, u l-bidliet fid-daqs tal-partiċelli u l-morfoloġija ġew eżaminati.

L-estratt tal-fenugreek ta 'inkapsulament ta' liposomi u noisome (LF u NF) ġew ifformulati bl-użu ta 'metodu simili bħal LNF. LF ġie ppreparat mingħajr iż-żieda ta 'sorbitan oleate fil-fażi taż-żejt, filwaqt li niosome (NF) kien ippreparat mingħajr iż-żieda tal-komponent fosfolipid. Il-karatterizzazzjonijiet fiżikokimiċi tagħhom ġew irrappurtati fit-Tabella supplimentari S1.

4.9.Perċentwali ta 'Effiċjenza ta' Inkapsulament u Tagħbija Bijoattiva

L-effiċjenza tal-inkapsulament (perċentwal EE) u t-tagħbija bijoattiva (perċentwal BL) ta 'LNF ġew ikkalkulati billi jiġi ddeterminat l-ammont ta' mediċina inkapsulata bl-użu ta 'teknika ta' ultrafiltrazzjoni. L-ammont ta 'rutin intuża bħala markatur standard. Wara li 20 mg/mL ta 'LNF ġie maħlul fl-ilma DI, ġie ċentrifugat fi 80,000 rpm għal 4 sigħat. Is-supernatant inġabar u mbagħad ir-rutina mhux inkapsulata ġiet evalwata bl-użu ta’ teknika ta’ kromatografija likwida ta’ prestazzjoni ultra-għolja (UHPLC)[61]. Il-perċentwali EE u l-perċentwali BL ġew ikkalkulati bl-ekwazzjonijiet li ġejjin:

4.10.Franz Diffusion Cell

Studju permeabbli in vitro ta '7mg/mL ta' estratt tal-fenugreek u LNF ġie investigat f'sistema ta 'ċelluli ta' diffużjoni Franz [62]. Il-membrana sintetika (Biomax 500 kDa ultrafiltration disc, Merck, MA, USA) tqiegħdet bejn donatur u kompartiment tar-riċettur. Saline buffer fosfat (PBS) b'pH ta '5.5 tħawwad f'50 rpm (37 grad) u użat bħala mezz ta' riċettur. L-estratt tal-fenugreek u l-LNF ġew applikati fuq il-membrana fl-għatu taċ-ċellula tad-donatur. Il-kampjuni ġew mifruxa mill-membrana u miġbura mill-kompartiment tar-riċettur f'0,2,4,6,8,12, u 24h.Ir-rutin permeated kumulattiv ġie evalwat u kkalkulat bit-teknika UHPLC.

4.11.Permeabilizzazzjoni tal-Ġilda tal-Ħnieżer

Il-permeazzjoni ta 'LNF permezz tal-ġilda tal-ħnieżer ġiet viżwalizzata b'mikroskopju tal-massa ta' immaġini (IMS, SHIMADZU, mudell: iMScopoe TRIO, Kyoto, Ġappun). Il-ġilda tal-ħnieżer inqatgħet f'1.5 × 1.5 cm2. Ir-rutin, l-estratt tal-fenugreek u l-LNF ġew applikati fuq il-ġilda tal-ħnieżer maqtugħa u maħżuna f'4 gradi għal 24 siegħa. Il-kampjuni nqatgħu bl-użu ta' kriostat, imqiegħda fuq slide tal-ħġieġ miksi bl-ossidu tal-landa tal-indju, u sprejjati b'sustanza ta' matriċi ta' 9-aminoacridine (9-AA). Il-kampjuni ġew maħżuna fi grad-20 qabel l-analiżi. Overlay ta 'l-immaġini ottiċi tar-rutin ġiet analizzata f'609.15 m/z.

4.12.Karatterizzazzjoni ta' Kalorimetri ta' Skennjar Differenzjali (DSC).

Twettqet analiżi tal-kalorimetrija tal-iskannjar differenzjali (DSC) biex jiġi ddeterminat il-punt tat-tidwib tal-LNF bl-użu ta 'kalorimetru tal-iskannjar differenzjali (DSC, Mettler Toledo DSC1)[63]. Wara użin preċiż, il-kampjuni tpoġġew f'twaġen tal-aluminju u ssiġillati b'għatu. Fil-proċess tal-iskannjar, rata ta 'tisħin ta' 10 gradi ġiet applikata fil-medda tat-temperatura minn 25 sa 350 grad taħt gass tan-nitroġenu mnaddaf f'40 mL/min. 4.13.Kostruzzjoni ta' Ċelloli tal-Ġilda Umani Ko-Kulturati

Iċ-ċelluli tal-fibroblasti tal-ġilda tal-bniedem ġew miżrugħa fi 8.5 × 104 ċelluli/bir f'inserzjonijiet ta 'kultura ta' 12-il tajjeb (Corning, Corning, NY, USA) u kkultivati ​​għal 24 siegħa. It-tieni u t-tielet saffi ta 'fibroblast dermali ġew miżjuda ripetutament fuq l-ewwel saff f'jiem konsekuttivi. Wara 24 siegħa taż-żieda tat-tielet saff, HaCaT imbagħad ġie miżrugħ fi 8.5 × 10 gradi ċelluli / sew fuq is-saffi tal-fibroblasti ffurmati u kkultivat għal 24 siegħa oħra, qabel l-esperiment.

4.14.Investigazzjoni tal-Vijabilità taċ-Ċelloli u s-Sekrezzjoni ta' MMPs wara Espożizzjoni għall-UV f'Ċelloli tal-ġilda Ko-Kulturati

Iċ-ċelluli tal-ġilda kokulturati tal-bniedem ġew ittrattati minn qabel b'7 ug/mL ta' estratt u 100 ug/mL ta' LNF (7 ug/mL ta' ekwivalenza ta' estratt), flimkien ma' 100 ug/mL ta' blank u 10 ug/mL ta' resveratrol bħala kontroll pożittiv , għal 24 siegħa. Iċ-ċelloli tal-ġilda kkultivati ​​flimkien inħaslu darbtejn b'PBS u ġew soġġetti għal 5J/cm2 ta 'UVA u 30mJ/cm2 ta' irradjazzjoni UVB (Solar Simulators, NY, USA). Wara l-irradjazzjoni UV, ċelluli tal-ġilda kkultivati ​​flimkien ġew inkubati aktar b'kampjuni ttestjati għal 24 siegħa. Is-supernatant imbagħad inġabar għal kwantifikazzjonijiet MMP1 u MP9. Il-livelli ta 'tnixxijiet MMP1 u MMP9 indotti mill-UV f'ċelloli tal-ġilda tal-bniedem ko-koltivati ​​ġew imkejla minn kits ta' analiżi immunosorbenti marbuta ma 'enżimi (MMP1: ab215083 u MMP9: ab100610, abcam, Cambridge, UK) skont protokolli tal-manifattura.

Il-vijabbiltà ta 'ċelluli tal-ġilda tal-bniedem ko-kultivati ​​wara l-espożizzjoni UV ġiet evalwata bl-użu ta' kit ta 'assaġġ tal-vijabbiltà taċ-ċelluli luminixxenti CellTiter-Glo (Promega, Madison, WI, USA). Wara 24 siegħa ta 'espożizzjoni UV, ċelluli tal-ġilda kkultivati ​​flimkien inħaslu darbtejn b'PBS u 100 μL ta' Glo Lysis Buffer (Promega, Madison, WI, USA) ġew miżjuda f'kull bir. Wara l-inkubazzjoni għal 10 min, ġew miżjuda 50 uL ta 'reaġent CellTiter-Glo u ġew inkubati f'temperatura tal-kamra għal 10 min. Is-sinjal luminexxenti mbagħad tkejjel bl-użu ta 'luminometru tal-mikroplate (SpectraMax L, Apparat Molekulari).

4.15.Analiżi Statistika

Ir-riżultati kienu rappreżentati bħala medja ± devjazzjoni standard (SD). Differenzi sinifikanti ġew analizzati permezz ta' test ta' Student jew analiżi tal-varjanza f'direzzjoni waħda jew f'żewġ direzzjonijiet (ANOVA) segwit mit-test post hoc ta' Tukey (GraphPad Prism 9), b'valuri p<0.05 considered="" statistically="">

5. Konklużjonijiet

B'mod kollettiv, din ir-riċerka pproduċiet żewġ suġġerimenti alternattivi. L-ewwelnett, ir-rutin ma kienx osservat biss f'termini ta 'protezzjoni mir-radjazzjoni ultravjola u sustanza antiossidativa iżda ntuża wkoll bħala markatur standard tal-marki tas-swaba' tal-kromatogramma u referenza ewlenija ta 'attività kontra t-tixjiħ mill-estratt tat-trab taż-żerriegħa tal-fenugreek. It-tieni nett, intwerew mekkaniżmi molekulari sottostanti estratt etanoliku kontra t-tixjiħ. L-estratt wera proprjetajiet bijoloġiċi ġodda, bħal attività kontra l-collagenase, li tinduċi l-produzzjoni tal-kollaġen, u jinibixxi d-degradazzjoni tal-kollaġen, li tirreferi għal aġent naturali kontra t-tixjiħ alternattiv potenzjali għal prodotti kontra t-tixjiħ. Tekniki ta 'inkapsulament jistgħu jintużaw biex jipproteġu l-komposti bijoattivi u l-proċessi ta' degradazzjoni kimiċi u fiżiċi, u jtawlu l-attività bijoloġika tagħhom sakemm jintużaw. Din it-teknika tnaqqas ukoll it-tossiċità tal-estratti tal-ħxejjex. F'dan l-istudju, il-liposomi fformulati huma stabbli ħafna u għandhom rilaxx fit-tul. Nano-formulazzjoni tista 'wkoll ittejjeb il-qawwa tal-estratt tal-fenugreek fuq proprjetajiet kontra t-tixjiħ. Fuq il-bażi ta 'dan l-istudju, nissuġġerixxu li LNF jista' potenzjalment jiġi applikat bħala ingredjent attiv promettenti fil-prevenzjoni tat-tixjiħ tal-ġilda.

Dan l-artikolu huwa estratt minn Pharmaceuticals 2022, 15, 254. https://doi.org/10.3390/ph15020254 https://www.mdpi.com/journal/pharmaceuticals