Effetti Ta' Cistanche Polysaccharides Fuq L-Imġieba Bijoloġika taċ-Ċellula tal-Kanċer tal-Pulmun A549
Sep 23, 2022
Astratt: Għan Biex jiġi investigat l-effett ta'Cistanche polysaccharidedwar l-imġieba bijoloġika taċ-ċellula tal-kanċer tal-pulmun A549. Metodi Iċ-ċelloli tal-kanċer tal-pulmun A549 ġew maqsuma fi grupp ta' kontroll,Cistanche polysaccharideGrupp 100, 200, 400 ng/mL, grupp si-NC, grupp si-LINC01410,Cistanche polysaccharide400 ng/mL flimkien ma' pcDNA,Cistanche polysaccharide400 ng/mL flimkien mal-grupp pcDNA- LINC01410. Ir-rata ta 'proliferazzjoni taċ-ċelluli A549 ġiet skoperta bil-metodu MTT, il-kapaċità tal-klonazzjoni taċ-ċelluli A549 ġiet skoperta permezz ta' analiżi tal-formazzjoni tal-kolonji, u 549 ċellula ġew skoperti permezz ta 'ċitometrija tal-fluss.
Ir-rata ta 'apoptosi taċ-ċelluli, il-metodu Transwell intuża biex jikxef il-kapaċità ta' migrazzjoni u invażjoni taċ-ċelloli A549, u l-metodu RT-qPCR intuża biex jinstab l-espressjoni ta 'LINC01410 mRNA fiċ-ċelloli A549.
Riżultati:Cistanche polysaccharidejista 'jinibixxi l-proliferazzjoni taċ-ċelluli A549, il-formazzjoni tal-kolonji, il-migrazzjoni, u l-kapaċità ta' invażjoni, l-espressjoni tal-mRNA LINC01410 (P<0.05), and="" promote="" cell="" apoptosis="" in="" a="" dose-dependent="" manner.="" after="" inhibiting="" the="" expression="" of="" linc01410,="" the="" growth,="" migration="" and="" invasion="" abilities="" of="" a549="" cells="" were="" inhibited=""><0.05). overexpression="" of="" linc01410="" could="" reverse="" the="" effects="" of="">Cistanche polysaccharidedwar il-proliferazzjoni, l-apoptożi, il-migrazzjoni u l-invażjoni taċ-ċelloli A549. Konklużjoni:Cistanche polysaccharidejista 'jinibixxi l-attività, il-formazzjoni ta' kloni, il-migrazzjoni u l-kapaċità ta 'invażjoni taċ-ċelloli tal-kanċer tal-pulmun u jippromwovi l-apoptosi taċ-ċelluli billi jnaqqas l-espressjoni ta' LINC01410.
Kliem ewlieni:Cistanche polysaccharide; ċellula tal-kanċer tal-pulmun A549; LINC01410; proliferazzjoni; apoptożi
Ikklikkja hawn biex tikseb Kampjun b'xejn ta' Cistanche għal
Il-kanċer tal-pulmun huwa t-tumur malinn bl-ewwel rata ta’ morbidità u mortalità f’pajjiżi. Il-metodi ta' trattament tal-kanċer tal-pulmun jinkludu tilqim, kirurġija u kimoterapija [1].
Studji wrew li l-mediċina tradizzjonali Ċiniża u l-komponenti tagħha għandhom vantaġġi kbar fit-trattament tal-kanċer tal-pulmun u jistgħu jtejbu l-effikaċja tal-kanċer tal-pulmun [2-3].Cistanchehuwa materjal mediċinali prezzjuż f'pajjiżi, u l-komponenti ewlenin tiegħu jinkludu phenethyl alcohol glycosides totali, polysaccharides, iridojdi, alkalojdi u lignans. Studji sabu dak it-totalphenylethyl glucosides ta' Cistanchejistatnaqqas il-ħsara fil-fwied fil-ġrieden li jġorru tumuri H22 u jinibixxu t-tkabbir tat-tumur[4]. Ergosteroside, l-ingredjent attiv ta 'Cistanche, jista' jinibixxi t-tkabbir tat-tumur u l-proliferazzjoni taċ-ċelluli tal-kanċer tal-kolorektum f'mudell ta 'xenograft ta' ġrieden nude, u jinduċi apoptożi [5].
Cistanche polysaccharidesjista' jinibixxi l-kanċer tal-pulmun ta' Lewis u ċ-ċelloli tas-sarkoma S180 billi jżid l-attivitajiet taċ-ċelloli naturali killer u l-interleukin 2 (IL-2).
Madankollu, il-funzjonijiet potenzjali, il-proċessi tal-bijoġenesi u l-mekkaniżmi sottostanti ta 'Cistanche polysaccharidesfil-kanċer tal-pulmun jibqgħu mhux ċari. Studji wrew li l-lncRNAs ħafna drabi huma deregolati fil-kanċer tal-pulmun u għandhom rwol importanti fl-okkorrenza, l-iżvilupp u t-trattament tal-kanċer tal-pulmun [7]. LINC01410 huwa espress ħafna fil-kanċer endometrijali u jaffettwa l-pronjosi ta 'pazjenti bil-kanċer endometrijali [8]; L-espressjoni żejda LINC01410 tippromwovi l-anġjoġenesi u l-metastasi tal-kanċer fl-istonku billi tinibixxi miR-532-5p [9]; Iċ-ċelloli papillari tal-kanċer tat-tirojde jipproliferaw, jemigraw u jinvadu [10-11], filwaqt li r-rwol ta 'LINC01410 fil-kanċer tal-pulmun mhuwiex ċar. L-iskop ta 'dan l-esperiment kien li jistudja l-effetti ta'Cistanche polysaccharidesu LINC01410 dwar il-fenotip malinn taċ-ċelloli tal-kanċer tal-pulmun, u jekk LINC01410 kienx involut fir-regolamentazzjoni ta 'Cistanche polysaccharidesdwar l-imġieba bijoloġika malinna taċ-ċelloli tal-kanċer tal-pulmun, sabiex tiġi pprovduta bażi għal aktar riċerka dwarCistanche polysaccharides.
Cistanche polysaccharides
Materjal ta 'polisakkaridi Cistanche fuq Studju tal-Kanċer tal-Kura
Iċ-ċelloli tal-kanċer tal-pulmun A549 inxtraw mill-American Type Culture Collection (ATCC).Cistanche polysaccharide(purità akbar minn jew ugwali għal 98 fil-mija, numru tal-prodott D3281) inxtara mingħandWecistanche Bio-Tech Biotechnology Co., Ltd. Serum bovin fetali nxtara minn Guangzhou Shuoheng Biotechnology Co., Ltd.;
Il-medju RPMI-1640 inxtara minn Hangzhou Qiannuo Biotechnology Co., Ltd.; MTT kit inxtara minn Shanghai Meixuan Biotechnology Co., Ltd.; Transwell chamber u Matrigel inxtraw minn Beijing Unicon Biotechnology Co., Ltd.; Il-kit tal-apoptożi nxtara minn PromoCell, Germany Company; Il-kit SYBRremix ExTaqTM inxtara minn Shanghai Shanran Biotechnology Co., Ltd.
2 metodi ta 'polisakkaridi Cistanche fuq Studju ta' Kura tal-Kanċer
2.1 Kultura taċ-ċelluli u raggruppament
Iċ-ċelloli A549 ġew ikkultivati f'medja RPMI-1640 li kien fih 10 fil-mija serum bovin tal-fetu f'inkubatur ta' 37 grad, 5 fil-mija CO2. Iċ-ċelloli fil-fażi tat-tkabbir logaritmiku ġew ittrattati bihomCistanche polysaccharidef'konċentrazzjonijiet tal-massa ta' 100, 200, u 400 ng/mL, rispettivament, u rreġistrati bħala l-Cistanche polysaccharide100, 200, u 400 ng/mL gruppi; iċ-ċelloli A549 li ma ġewx ittrattati b'Cistanche polysaccharide kienu l-grupp ta' kontroll. Iċ-ċelloli A549 ġew trasfettati b'si-NC jew si-LINC0141, rispettivament, indikati bħala grupp si-NC, grupp si-LINC01410; si-NC u si-LINC01410 ġew trasfettati f'ċelloli A549 u ttrattati b'400 ng/mLCistanche polysaccharide, indikat bħalaCistanche Polysaccharide400 ng/mL flimkien mal-grupp pcDNA,Cistanche polysaccharide400 ng/mL flimkien mal-grupp pcDNA-LINC01410.
2.2 Sejbien tal-metodu MTT
Rata ta' proliferazzjoni taċ-ċelluli A549 Iċ-ċelloli A549 ġew ittrattati bihomCistanche polysaccharidef'konċentrazzjonijiet ta 'massa ta' 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, u 400 ng/mL, rispettivament. Iġbor ċelluli A549 f'kull grupp u poġġihom fi 96-platt bir-bir, żid 20 μL ta' MTT ma' kull bir, kompli kultiva fl-inkubatur għal 4 sigħat, armi s-supernatant, żid 150 μL ta' DMSO ma' kull bir , u skopri d-dawl ta 'kull grupp ta' ċelloli f'wavelength ta '490 nm. Il-valuri tad-densità (OD) intużaw biex tiġi kkalkulata r-rata ta' proliferazzjoni taċ-ċelluli.
Kultivazzjoni Cistanche
2.3 Assaġġ tal-formazzjoni tal-kolonji
A549 cell cloning ability Collect A549 cells in each group, adjust the density to 1 × 105 /mL, and inoculate 100 μL per well in a 6-well plate, incubate in an incubator until visible cell clones appear, wash 2 times with PBS, 4 % paraformaldehyde was fixed for 20 min, stained with 1% crystal violet solution for 15 min, observed under a light microscope, and the number of colonies (>50 ċellula) ġiet irreġistrata.
2.4 Sejbien taċ-ċitometrija tal-fluss
Rata ta' apoptosi taċ-ċelluli A549 Ċelloli A549 f'kull grupp ġew miġbura u sospiżi mill-ġdid f'100 μL buffer salin buffered fosfat (1 × 106 / mL), u 1 mL ta 'sospensjoni taċ-ċelluli, 10 μL Annexin V-FITC u 5 μLPI ġew miżjuda mat-test tube , protett mid-dawl. Wara l-inkubazzjoni għal 30 min, iċ-ċelloli nġabru u ġew analizzati permezz ta 'ċitometrija tal-fluss.
apoptożi.
2.5 Sejbien bil-metodu Transwell
Migrazzjoni taċ-ċelluli A549 u kapaċità ta' invażjoni Is-sospensjonijiet taċ-ċelluli A549 (2×104/200 μL, medju mingħajr serum) ta' kull grupp kienu mifruxa b'mod uniformi fil-kamra ta' fuq tal-kamra Transwell, u 500 μL RPMI{{ 7}} medju li fih 10 fil-mija FBS ġie miżjud mal-kamra t'isfel. Iċ-ċelloli fil-kamra ta 'fuq tneħħew, u ċ-ċelloli fil-kamra t'isfel ġew iffissati b'4 fil-mija paraformaldehyde u mtebbgħin b'0.1 fil-mija vjola kristall. Iċ-ċelloli ġew osservati taħt mikroskopju tad-dawl, u 5 oqsma tal-vista ġew magħżula b'mod każwali għall-għadd. Fl-esperiment ta 'invażjoni taċ-ċelluli, Matrigel kien miksi minn qabel fuq il-kamra ta' fuq tal-kamra Transwell, u l-bqija tal-passi kienu l-istess bħal fl-esperiment tal-migrazzjoni.
2.6 Sejbien RT-qPCR
Espressjoni ta' LINC01410 mRNA fiċ-ċelloli A549 L-RNA totali ġie estratt miċ-ċelloli bl-użu ta' reaġent TRIzol, u cDNA ġie sintetizzat skont l-istruzzjonijiet tal-kit ta' traskrizzjoni inversa. Is-sistema ta 'reazzjoni kienet 2 μL ta' prodott ta 'traskrizzjoni b'lura, 10 μL SYBR Green Mix, 0.5 μL ta' primers 'il quddiem u reverse, u 7 μL ta' ilma sterili. Il-kundizzjonijiet ta 'reazzjoni kienu 95 grad għal 30 s, 60 grad għal 30 s, u 72 grad għal 30 s, għal total ta' 40 ċiklu; l-espressjoni relattiva ta 'LINC01410mRNA ġiet ikkalkulata bil-metodu 2-ΔΔCT b'GAPDH bħala referenza interna. Is-sekwenzi tal-primer huma LINC01410 quddiem 5'-TGACAAGAATGGCCCAAGC-3', reverse 5'-ACTGTGCACCTGTTACACCA-3'; referenza interna GAPDH quddiem 5'-TGTTGCCATCAATCACCCCTT-3', lura 5'-CTCCACGACGTACTC AGCG-3'.
2.7 Analiżi statistika
Intuża softwer SPSS 20.0 għall-ipproċessar, id-dejta tal-kejl ġiet espressa bħala (x±s), intuża t-test ta' kampjuni indipendenti għal tqabbil bejn żewġ gruppi, intużat analiżi one-way tal-varjanza għal tqabbil bejn multipli gruppi, u l-LSD-t test intuża għal tqabbil bejn il-gruppi. P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">
Trab ta 'l-Estratt ta' Cistanche
3 riżultati ta' Cistanche polysaccharides fuq Studju dwar it-Trattament tal-Kanċer
3.1 L-effett ta 'Cistanche polysaccharidefuq il-proliferazzjoni u l-apoptożi taċ-ċelloli A549 Meta mqabbla mal-grupp ta 'kontroll, ir-rata ta' proliferazzjoni taċ-ċelloli A549 f'kull grupp ta 'doża ta'Cistanche polysaccharideżdied (P<0.05), ic50="" was="" 319.8="" ng/ml,="" see="" table="" 1="" .="" compared="" with="" the="" control="" group,="" the="" proliferation="" rate="" of="" a549="" cells="" in="" the="" polysaccharide="" 100,="" 200,="" and="" 400="" ng/ml="" groups="" of="" cistanche="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05="" )="" ,="" the="" number="" of="" clones="" was="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05)="" ,="" and="" the="" apoptosis="" rate="" was="" increased="" (="" p="" <="" 0="" ).="" .05)="" ,="" in="" a="" dose-dependent="">
3.2 L-effett ta 'Cistanche polysaccharidedwar il-migrazzjoni u l-kapaċità ta 'invażjoni ta' ċelluli A549 Meta mqabbel mal-grupp ta 'kontroll, in-numru ta' ċelluli A549 f'kull grupp ta 'doża ta'Cistanche polysaccharidenaqas (P<0.05) in="" a="" dose-dependent="" manner,="" as="" shown="" in="" figure="" 2,="" table="">
3.3 L-effett ta 'Cistanche polysaccharidefuq l-espressjoni ta’ LINC01410 mRNA f’ċelloli A549 Meta mqabbel mal-grupp ta’ kontroll, l-espressjoni ta’ LINC01410 mRNA f’ċelloli A549 f’kull grupp ta’ doża ta’Cistanche polysaccharidenaqas (P＜0.05) b'mod dipendenti mid-doża.
