Echinacoside Ittejjeb il-Ħsara Dijabetika tal-Fwied

Kuntatt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Luo Yang, Xiang Zhang, Min Liao, Yarong Hao *

ASTRATT

Għanijiet:Echinacoside (ECH) huwa kompost naturali estratt miż-zokk tal-pjanta Cistanche deserticola, għandu proprjetajiet bijoloġiċi sinifikanti, inklużi proprjetajiet antiossidanti, anti-infjammatorji, newroprotettivi, kontra t-tumur, epatoprotettivi u immunomodulatorji. F'dan l-istudju, għandna l-għan li nesploraw l-effetti protettivi u l-mekkaniżmi ta 'ECH fuq ħsara fil-fwied dijabetiku fil-ġrieden DB/DB.

Metodi ewlenin:B'mod ġenerali, 6-ġrieden DB/DB ta' ġimgħa (n=20) ġew allokati b'mod każwali għal 2 gruppi: grupp mudell dijabetiku (grupp DB/DB, amministrazzjoni intragastrika ta' salina normali, n=10 ) u grupp ittrattat bl-ECH (DB/DB flimkien mal-grupp ECH, n=10). Barra minn hekk, il-grupp ta' kontroll normali kien jinkludi ġrieden 6-db/m ta' ġimgħa (grupp db/m, amministrazzjoni intragastrika salina normali, n=10). ECH ingħata darba kuljum għal 10 ġimgħat. Il-piż u l-glukożju fid-demm waqt is-sawm (FBG) tkejlu kull darbtejn fil-ġimgħa. It-tbajja 'HE u t-tbajja taż-Żejt O ntużaw biex jevalwaw il-bidliet patoloġiċi fit-tessut tal-fwied u l-akkumulazzjoni tal-lipidi rispettivament. Tbajja ta 'immunofluworexxenza, Western blot, u analiżi RT-PCR intużaw biex jiskopru l-espressjoni ta' komponenti tal-assi tas-sinjalar AMPK/SIRT1.

Sejbiet ewlenin:Ir-riżultati wrew li l-amministrazzjoni ta 'echinacoside għal ġimgħa 10 tista' ttejjeb b'mod sinifikanti l-ħsara fil-fwied u r-reżistenza għall-insulina fil-ġrieden DB/DB (p <0.01). ukoll,="" it-trattament="" ta="" 'echinacoside="" għen="" biex="" inaqqas="" il-lipidi="" fid-demm="" u="" l-glukożju="" fid-demm="" (p=""><0.01). barra="" minn="" hekk,="" sinjalazzjoni="" ampk/sirt1="" attivata="" bl-ech,="" riċettur="" attivat="" mill-proliferatur="" tal-peroxisome="" ko-attivatur="" gamma="" 1="" alpha="" (pgc-1),="" riċettur="" attivat="" mill-proliferatur-="" (ppar),="" carnitine="" palmitoyltransferase-1a="" (cpt1a)="" fil-ġrieden="" db/db="" (p=""><>

Sinifikat:L-effett ta 'ECH jista' jiġi suscitat mill-attivazzjoni tal-mogħdija AMPK/SIRT1 tal-fwied u l-fatturi downstream tagħha biex itejbu l-adipożita, ir-reżistenza għall-insulina, u d-dislipidemija.

cistanche reddittitjiebadiposità, reżistenza għall-insulina, u dislipidemija.

1. Introduzzjoni

Id-dijabete mellitus tat-Tip 2 (T2DM) hija marda metabolika kronika u theddida serja għas-saħħa fiżika u mentali tal-bniedem. Jista 'jikkawża ħsara lill-organi multipli, inkluża ħsara fil-fwied. Il-mard tal-fwied xaħmi mhux alkoħoliku (NAFLD) huwa l-aktar ħsara komuni fil-fwied [1,2]. Akkumulazzjoni eċċessiva ta 'lipidi fl-epatoċiti tfixkel il-proċess metaboliku u tikkawża infjammazzjoni, fibrożi tal-fwied, u anke kanċer tal-fwied [3,4]. Il-patoġenesi tal-marda għadha mhux ċara. Għalkemm hemm prevalenza għolja ta' kumplikazzjonijiet tal-fwied klinikament sinifikanti f'pazjenti b'T2DM, ħafna drabi dawn jiġu injorati fl-ambjent tat-trattament. L-aġenti użati bħalissa għall-kura tad-dijabete jinkludu metformin, sulfonylureas, thiazolidinedione (TZDs), u inibituri dipeptidyl peptidase-4 (DPP-4). Madankollu, ħafna minn dawn l-aġenti jikkawżaw disfunzjoni tal-fwied u mhumiex rakkomandati f'pazjenti b'insuffiċjenza tal-fwied, li jimplika l-ħtieġa li jiġu investigati aġenti b'effiċjenza terapewtika u profil baxx ta 'avvenimenti avversi. Studji wrew proprjetajiet antiossidanti, anti-infjammatorji, anti-tumur, epatoprotettivi u immunomodulatorji ta 'echinacoside (ECH), il-komponent ewlieni ta' Cistanche deserticola [5]. Barra minn hekk, il-mogħdija tal-proteina kinażi attivata bl-AMP (AMPK) ġiet rikonoxxuta bħala l-iswiċċ ewlieni tal-metaboliżmu tal-enerġija ċellulari assoċjat mar-regolazzjoni tal-lipidi fil-fwied u mira terapewtika għal NAFLD. L-AMPK isaħħaħ l-attività regolatorja tas-sajlenser tal-proteina-1(SIRT1) tal-mammiferi billi żżid il-livelli ċellulari NAD plus, li tirriżulta fid-deacetylation u l-modulazzjoni tal-attività tal-miri SIRT1 downstream li jinkludu r-riċettur-coactivator 1 attivat mill-proliferatur tal-peroxisome (PGC{ {20}} ) [6]. Minħabba ħafna funzjonijiet pożittivi kemm fil-marda tal-fwied xaħmi alkoħoliku (AFLD) u NAFLD, SIRT1 ġie studjat b'mod wiesa 'fost il-familja SIRT. Il-proteina hija regolatur ewlieni tal-metaboliżmu tal-lipidi u l-glukosju u tista 'ttejjeb is-sensittività għall-insulina tal-fwied u tessuti oħra u tnaqqas l-isteatożi epatika [7]. PPAR- jappartjeni għall-PPARs, sottofamilja ta 'riċetturi ta' l-ormoni nukleari, PPAR- itejjeb il-metaboliżmu tal-lipidi permezz ta 'beta-ossidazzjoni ta' aċidu xaħmi mitokondrijali u perossidasi, medjat permezz ta 'CPT1A. Il-ġrieden Db/DB huma ġrieden dijabetiċi tat-tip 2 obeżi spontanji. Hekk kif dawn il-ġrieden jikbru, jista 'jkun hemm manifestazzjoni gradwali ta' kundizzjonijiet dijabetiċi bħal bulimja, obeżità, ipergliċemija ovvja, iperlipidemija, u reżistenza għall-insulina [8]. Il-patoġenesi hija simili għal dik osservata f'pazjenti b'T2DM. Dan l-istudju ipotesizza l-effett terapewtiku tal-ECH fuq il-korriment tal-fwied ikkaġunat minn T2DM u l-medjazzjoni ta 'dan l-effett permezz tal-attivazzjoni tal-mogħdija AMPK/SIRT1 u l-effettituri downstream tagħha. Il-ġrieden DB/DB intużaw bħala l-mudell ta 'ħsara fil-fwied T2DM, u ECH ġie amministrat intragastrikament.

2. Materjali u metodi

2.1. Annimali esperimentali

Il-fwied tal-ġrieden DB/DB dijabetiċi tat-tip 2 kien ikkunsidrat bħala l-mudell għal korriment spontanju tal-fwied T2DM, ġrieden db/m intużaw bħala l-grupp ta 'kontroll, u ġrieden dijabetiċi db/db intużaw bħala l-grupp mudell u grupp ittrattat ECH (irġiel , 6 ġimgħat, grad SPF) b'10 ġrieden f'kull grupp. Il-ġrieden kollha nxtraw mill-Università ta 'Nanjing (Istitut tal-Bijomediċina ta' Nanjing, iċ-Ċina; Nru taċ-Ċertifikat tal-produzzjoni tal-annimali: SCKK (Su) 2015-0001). L-annimali (n=5 għal kull gaġġa) kienu miżmuma fil-Kamra tal-Annimali tal-Laboratorju Ċentrali tal-Isptar Renmin tal-Università ta 'Wuhan (SPF) taħt kundizzjonijiet standard ta' temperatura (22 ◦C ± 2 ◦C), umdità relattiva (60 fil-mija) , u ċiklu ta 'dawl/dlam (12 h/12 ​​h), b'aċċess ad libitum għall-ilma tax-xorb u l-għalf matul il-perjodu sperimentali ta' 10 ġimgħat. L-esperimenti twettqu skont il-linji gwida tal-etika tal-annimali sperimentali rakkomandati mill-Isptar Renmin tal-Università ta 'Wuhan.

2.2. Strumenti u reaġenti ewlenin

Miter tal-glukożju fid-demm OneTouch Ultra u strixxi tat-test tal-glukożju fid-demm (LifeScan Inc., Johnson & Johnson); antikorp monoklonali anti-bniedem tal-fenek SIRT-1 (#9475; Kumpanija CST tal-Istati Uniti); AMPK (Ab80039), p-AMPK (Ab23875), PGC-1 (Ab54481), PPAR- (Ab8934), u GAPDH (Ab37168; kollha minn Abcam Company); CPT1A (15184-1-AP; Wuhan Sanying Biotechnology Co., Ltd); Kit ta 'skoperta ta' konċentrazzjoni ta 'proteina BCA (Biyuntian Biotechnology Co., Ltd.); Kit ta 'preparazzjoni tal-ġel SDS-PAGE (Google Biotechnology Co., Ltd.); u kit ta 'traskrizzjoni inversa RT-PCR (Takara, Ġappun) intużaw għall-esperimenti.

2.3. Raggruppament u amministrazzjoni ta' annimali

Qabel ma beda l-esperiment, {{0}}ġrieden ta' ġimgħa ġew imqiegħda fil-kwarantina għal ġimgħa u mitmugħa b'mod adattiv għal ġimgħa. Ġrieden Db/DB ġew numerati b'mod każwali u allokati jew lill-grupp tal-mudell dijabetiku (grupp db/db, n=10) jew grupp ittrattat b'echinacoside (db/db flimkien mal-grupp ECH, n =10), u Ġrieden 10 db/m ġew allokati għall-grupp ta 'kontroll normali (grupp DB/ m, n=10). Fl-età ta '8 ġimgħat, il-ġrieden tal-grupp ta' kontroll normali u mudell dijabetiku ġew amministrati intragastrikament salina normali (0.05 mL/10 g), u l-ġrieden tal-grupp ittrattati bl-ECH ġew amministrati intragastrikament 300 mg/kg/d ECH. Matul dan il-perjodu, il-ġrieden tħallew aċċess ad libitum għall-ikel u l-ilma għal 10 ġimgħat.

2.4. Kundizzjoni ġenerali u glucose fid-demm waqt is-sawm

Il-kundizzjonijiet tas-saħħa, it-teħid ta 'ikel u ilma tax-xorb, u t-tleqqija tal-kisja ġew osservati matul l-esperiment. Mill-ewwel ġimgħa tal-esperiment, il-piż tal-ġisem tal-ġrieden kien imkejjel kull ġimagħtejn. Kampjuni tad-demm biex jiġu ttestjati għall-glukożju fid-demm sawm inkisbu mill-vina tad-denb. Wara t-trattament ta' 10-ġimgħa ECH, sar it-test orali ta' tolleranza għall-glukożju (OGTT). Wara sawm matul il-lejl, il-ġrieden ingħataw glukożju (2 g/kg piż tal-ġisem), u l-konċentrazzjonijiet tal-glukożju fid-demm ġew evalwati qabel (0 min.) u 15, 30, 60, u 120 min wara amministrazzjoni tal-glukosju. L-erja taħt il-kurva (AUC) ġiet iddeterminata bl-użu ta' GraphPad Prism 7.0.

2.5. Ġbir tal-kampjuni

Wara 10 ġimgħat ta 'intervent, l-ikel iżda mhux l-ilma inżamm għal 12-il siegħa, l-annimali ġew anestetizzati biex jiksbu kampjuni tad-demm mill-plexus retro-orbitali. Is-serum mid-demm miġbur ġie separat malajr u maħżun f'-80 ◦C għad-determinazzjoni tal-indiċi bijokimiku. Wara li nkisbu kampjuni tad-demm, il-ġrieden inqatlu u mxerrda b'salina normali. Il-fwied ġie mqassam u miżun. L-indiċi tal-fwied (LI) ġie kkalkulat bl-użu tal-formula li ġejja: LI=[piż tal-fwied (g)/piż tal-ġisem (g)] × 100 fil-mija. Parti mit-tessut frisk tal-fwied inżammet għal analiżi patoloġika, u l-bqija tat-tessut tal-fwied tqiegħed f'nitroġenu likwidu għal siegħa u mbagħad maħżun f'-80 ◦C għal sejbien ta 'proteini ta' segwitu u reazzjoni kwantitattiva fil-katina tal-polimerażi f'ħin reali ( PCR).

esperjenza cistancheestratt

2.6. Eżami istopatoloġiku tal-fwied

It-tessut frisk tal-fwied ġie sseparat malajr, u sezzjoni ġiet iffissata f'4 fil-mija paraformaldehyde għal 24 siegħa, segwit minn deidratazzjoni u inkorporazzjoni fil-paraffin. Is-sezzjonijiet ġew dewaxed bil-xylene u reidratati permezz ta 'gradjent etanol fl-ilma. In-nukleu u ċ-ċitoplasma kienu mtebbgħin b'ematossilina u eosina (HE) u ssiġillati b'gomma newtrali wara d-deidrazzjoni. Parti oħra tat-tessut użat flieli inkorporati tal-kompost tat-temperatura tal-qtugħ ottimali (OTC) għat-tbajja 'Oil Red-O.

2.7. Sejbien ta 'indiċi bijokimiċi ta' serum u tessut tal-fwied

Kampjuni tas-serum intbagħtu lid-Dipartiment tal-Laboratorju tal-Isptar Renmin tal-Università ta 'Wuhan għal analiżi bijokimika awtomatizzata. L-indiċi tal-lipidi tad-demm kienu jinkludu trigliċeridi (TG), kolesterol totali (TC), kolesterol ta 'lipoproteini ta' densità għolja (HDL-C), kolesterol ta 'lipoproteini ta' densità baxxa (LDL-C). L-indiċi tal-funzjoni tal-fwied kienu jinkludu glutamic pyruvic transaminase (ALT) u glutamic oxaloacetic transaminase (AST). Il-livelli ta 'l-insulina tas-sawm (FINS) ġew determinati bl-użu tal-kit ELISA (Meimian Biological Inc. China). Inbniet kurva standard ibbażata fuq il-konċentrazzjoni u d-densità ottika (OD) tal-kampjun standard; il-konċentrazzjoni tal-kampjun imbagħad ġiet ikkalkulata mill-kurva standard. Fl-aħħarnett, l-indiċi tas-sensittività għall-insulina (ISI) u l-indiċi tar-reżistenza għall-insulina (HOMA-IR) ġew ikkalkulati kif ġej: ISI=1/(FPG × FINS); HOMA-IR=FPG × FINS/22.5.

2.8. AMPK, p-AMPK, SIRT-1, PGC-1 , PPAR- , u espressjonijiet CPT1A fit-tessut tal-fwied ġew skoperti bl-użu tal-western blot

It-tessut tal-fwied iffriżat kien imqatta 'f'sezzjonijiet. Għall-estrazzjoni totali tal-proteini, 1 mL RIPA lysate ġie miżjud ma 'sezzjoni ta' 50 g u sottomess għal ċentrifugazzjoni fi 13,000 rpm f'4 ◦C għal 5 min, segwit minn ġabra tas-supernatant. Il-konċentrazzjoni tal-proteina ġiet iddeterminata bl-użu tal-kit tad-determinazzjoni tal-konċentrazzjoni tal-proteina BCA. Madwar 40 ug ta 'proteina ttieħdu kampjuni minn kull grupp u ttrasferiti għall-membrana tal-polyvinylidene fluoride (PVDF). Il-membrani ġew ittikkettati bl-antikorpi sekondarji indikati f'temperatura tal-kamra għal siegħa u żviluppati. Il-valuri tal-griż ta 'kull faxxa ta' proteini ġew analizzati, u GAPDH intuża bħala referenza interna għal analiżi semi-kwantitattiva.

2.9. Espressjonijiet p-AMPK u SIRT1 fit-tessut tal-fwied ġew skoperti permezz ta’ tbajja’ ta’ immunofluworexxenza

It-tessuti tal-fwied ġew iffissati f'4 fil-mija paraformaldehyde, inkorporati fil-paraffin, u mbagħad qasmu f'biċċiet tal-fwied 10-μm ħoxnin. Żid 3 fil-mija BSA għal 30 min. Inkuba slides b'antikorp primarju matul il-lejl f'4 ◦C. Għatti tessut oġġettiv b'antikorp sekondarju, inkuba f'temperatura tal-kamra għal 50 minuta f'kundizzjoni skura. Imbagħad inkuba b'soluzzjoni DAPI f'temperatura tal-kamra għal 10 min, miżmuma f'post mudlam. Żid reaġent tat-tifi tal-fluworexxenza spontanju biex inkuba għal 5 min. Sejbien tal-mikroskopija u jiġbru immaġini bil-Mikroskopija Fluworexxenti.

2.10. L-espressjonijiet ta' mRNA SIRT-1, PGC-1, PPAR- , u CPT1A fit-tessut tal-fwied ġew skoperti permezz ta' RT-PCR

Intuża madwar 100 mg tat-tessut tal-fwied maħżun f'-80 ◦C minn kull grupp. L-RNA totali ġie estratt bl-użu tal-kit Trizol; il-metodu ta 'assorbiment ultravjola (UV) intuża biex jiddetermina l-kwalità ta' l-RNA, u dan l-RNA mbagħad ġie traskritt b'lura f'cDNA. Il-qPCR aħdar SYBR tħaddem fuq is-Sistema ta 'Sejbien ta' PCR Real-Time Touch Bio-Rad CFX96 (Laboratorji Bio-Rad, Hercules, CA, USA). Is-sekwenzi primer ta' SIRT-1, PGC-1, PPAR-, u CPT1A ġew iddisinjati mis-softwer Primer Premier5.0 u sintetizzati minn Wuhan Seville Biotechnology Co., Ltd., bil-ġene housekeeper GAPDH li jservi bħala r-referenza interna. Il-kundizzjonijiet ta 'amplifikazzjoni kienu kif ġej: denaturazzjoni minn qabel f'95 ◦C, denaturazzjoni f'95 ◦C, u ittemprar f'60 ◦C (30 s), b'total ta' 40 ċiklu. Fl-aħħar tar-reazzjoni, l-ispeċifiċità tal-amplifikazzjoni tal-PCR ġiet iddeterminata permezz ta 'analiżi tal-kurva ta' dissoluzzjoni, inqara l-valur Ct, u l-espressjoni relattiva tal-mRNA tal-ġene fil-mira ġiet ikkalkulata bil-metodu 2-ΔΔCt. Is-sekwenzi tal-primer huma murija fit-Tabella 1.

2.11. Metodi statistiċi

Is-softwer statistiku SPSS22.0 intuża għall-ipproċessar tad-dejta u l-analiżi statistika u GraphPad Prism7.0 għat-tpinġija. Id-dejta normalment distribwita hija ppreżentata bħala medja ± devjazzjoni standard (varjanza x ± s). Tqabbil f'pari fost il-gruppi sar permezz ta' analiżi tal-varjanza b'fattur wieħed. Is-sinifikat tad-differenzi bejn il-gruppi ġiet identifikata jew bit-Test tad-Differenzi L-Inqas Sinifikanti (LSD) (omoġeneità tal-varjanzi) jew bit-test t ta' Dunnett (mhux omoġenju) għal paraguni multipli. Jekk id-dejta ma kinitx konformi mad-distribuzzjoni normali, intużaw id-differenza medjan u kwartili, kif ukoll it-test mhux parametriku (test Kruskal-Wallis). Valur AP ta'<0.05 was="" considered="" statistically="">

benefiċċji maskili cistanchegħalkliewi

3. Riżultati

3.1. L-ECH itejjeb il-kundizzjoni tas-saħħa ġenerali u l-LI tal-ġrieden db/db

Matul l-esperiment, il-ġrieden tal-grupp db/m kienu b'saħħithom u attivi u wrew tleqqija tal-kisja. Il-ġrieden tal-grupp db/db wrew konsum eċċessiv ta 'ilma u għalf, obeżità, letarġija u crouching, u xagħar mhux maħdum u skur. Meta mqabbel mal-ġrieden tal-grupp db/db, il-ġrieden tal-grupp db/db flimkien mal-ECH wrew kundizzjonijiet imtejba fl-istudji kollha. Barra minn hekk, l-indiċi tal-piż tal-ġisem u tal-fwied tagħhom kien inqas minn dak tal-ġrieden tal-grupp tal-mudell tad-dijabete (P <0.05) (tabella="">

Tabella 1 Primers PCR kwantitattivi tal-fluworexxenza RT.

Tabella 2 Il-piż tal-ġisem, il-piż imxarrab tal-fwied u l-indiċi tal-fwied fil-ġrieden ta 'kull grupp.

3.2. L-ECH inaqqas il-glukożju fid-demm waqt is-sawm u r-reżistenza għall-insulina u jżid it-tolleranza tal-glukożju u s-sensittività għall-insulina fil-ġrieden db/db

Hekk kif l-esperiment mexa 'l quddiem, meta mqabbel mal-grupp db/m, il-glukożju fid-demm sawm fil-grupp db/db żdied b'mod sinifikanti (P< 0.01)="" (fig.="" 1a).="" in="" contrast,="" blood="" glucose="" decreased,="" and="" glucose="" tolerance="" and="" insulin="" sensitivity="" improved="" in="" the="" db/db="" +="" ech="" group="" (p="">< 0.01)="" (fig.="" 1b,="">

3.3. L-ECH ittejjeb id-disturb strutturali tal-fwied u ttaffi l-bidliet patoloġiċi bħall-akkumulazzjoni tal-lipidi fil-ġrieden db/db

It-tbajja 'HE wriet li d-daqs u l-morfoloġija tal-epatoċiti fil-grupp db/m kienu normali, u l-istrutturi tal-lobuli tal-fwied u s-sinusojdi kienu ċari. Kien hemm deġenerazzjoni estensiva tal-epatoċiti fil-grupp db/db, żieda fil-volum tal-epatoċiti, daqs nukleari li jvarja, nekrożi taċ-ċelluli fokali, u infiltrazzjoni taċ-ċelluli infjammatorji fiż-żona tal-portal. Fil-grupp ta 'db/db flimkien ma' ECH, kien hemm tnaqqis sinifikanti fil-qtar tal-lipidi u ċelluli infjammatorji, il-ħsara taċ-ċelluli nekrotiċi ġiet imtaffa (Fig. 2A). Analiżi mikroskopika tat-tessut tal-fwied tat-tbajja' taż-żejt aħmar O żvelat arranġament pulit ta 'ċelloli, mingħajr qtar tal-lipidi jew bidliet patoloġiċi, fil-grupp db/m. Fil-grupp db/db, iċ-ċelloli kellhom arranġament diżordinat, u numru kbir ta 'partiċelli tax-xaħam ta' daqsijiet differenti kienu preżenti fiċ-ċitoplasma. Meta mqabbel mal-grupp db/db, in-numru ta 'qtar tal-lipidi fil-grupp db/db flimkien ma' ECH kien aktar baxx b'mod sinifikanti, li jissuġġerixxi l-effett protettiv possibbli ta 'ECH fuq il-fwied (Fig. 2B, C).

Fig. 1. ECH tejbet it-tolleranza tal-glukożju u r-reżistenza għall-insulina attenwata tal-ġrieden db/db.

3.4. L-ECH itejjeb il-metaboliżmu tal-lipidi u l-funzjoni tal-fwied fil-ġrieden db/db

Meta mqabbel mal-grupp db/m, il-livelli tal-lipidi fid-demm ta' TC, TG, u LDL żdiedu b'mod sinifikanti, u l-HDL naqas b'mod sinifikanti fil-grupp db/db (P <{{0}}.{{4} }1).="" madankollu,="" il-livelli="" ta'="" tc,="" tg,="" u="" ldl="" naqsu,="" u="" l-livell="" ta'="" hdl="" żdied="" fil-grupp="" db/db="" flimkien="" ma'="" ech="" meta="" mqabbel="" mal-grupp="" db/db="" (p="">< 0.05,="" p="">< 0.01)="" (fig.="" 3a).="" meta="" mqabbla="" mal-grupp="" db/m,="" il-livelli="" alt="" u="" ast="" żdiedu="" b'mod="" sinifikanti="" fil-grupp="" db/db="" (p=""><0.05, p=""><0.01). il-livelli="" ast="" u="" alt="" kienu="" aktar="" baxxi="" b'mod="" sinifikanti="" fil-grupp="" db/db="" flimkien="" ma'="" ech="" milli="" fil-grupp="" db/db="" (p=""><0.05, p=""><0.01) (fig.="" 3b,="">

Fig. 2. Disturb strutturali tat-tessut tal-fwied attenwat bl-ECH u akkumulazzjoni tal-lipidi fil-ġrieden b'NAFLD.

3.5. L-effett ta 'ECH fuq l-attivazzjoni tal-passaġġ AMPK/SIRT1 fi ġrieden ta' gruppi differenti

Skont ir-riżultati tal-western blot, meta mqabbla mal-grupp db/m, il-livelli tal-proteini p-AMPK/AMPK, SIRT1, PGC-1, PPAR-, u CPT1A fit-tessut tal-fwied kienu aktar baxxi b'mod sinifikanti fil-grupp db/db ( P < 0.01).="" madankollu,="" il-livelli="" ta="" 'proteina="" kienu="" ogħla="" b'mod="" sinifikanti="" fil-grupp="" db/db="" flimkien="" ma'="" ech="" milli="" fil-grupp="" db/db="" (p=""><0.01) (fig.="" 4a,="" b).="" barra="" minn="" hekk,="" tbajja="" immunofluworexxenti="" wera="" li="" l-espressjoni="" ta="" 'p-ampk="" u="" sirt1="" instab="" ovvjament="" fit-tessut="" tal-fwied="" ta'="" ġrieden="" ittrattati="" bl-ech="" minn="" grupp="" db/db="" (fig.="">

3.6. Effett ta 'echinacoside fuq l-espressjoni ta' mRNA tal-mogħdija SIRT1 fil-fwied ta 'ġrieden ta' gruppi differenti

Skont ir-riżultati tal-RT-PCR, il-livelli SIRT1, PGC-1, PPAR- u CPT1A naqsu b'mod sinifikanti fil-grupp db/db meta mqabbel mal-grupp db/m. Madankollu, dawn il-livelli żdiedu b'mod sinifikanti fil-grupp db/db flimkien mal-ECH meta mqabbel mal-grupp db/db (Fig. 5).

Fig. 3. L-indiċi relatati mas-serum fil-ġrieden ta 'kull grupp.

4. Diskussjoni

Id-dijabete hija tħassib mediku ewlieni fid-dinja, u n-numru ta’ nies bid-dijabete huwa mistenni li jiżdied għal madwar 592 miljun sal-2035 [9]. Ir-rata ta 'prevalenza tad-dijabete, prinċipalment T2DM, fiċ-Ċina, turi tendenza li qed tiżdied b'mod sinifikanti [10,11]. Hemm relazzjoni kumplessa bejn T2DM u mard tal-fwied, u NAFLD, ikkaratterizzat minn depożizzjoni eċċessiva ta 'xaħam fil-fwied, hija l-aktar korriment komuni tal-fwied ikkawżat minn T2DM u l-aktar mard kroniku tal-fwied frekwenti fid-dinja [12,13]. Ir-riċerka tal-ittestjar ġenetiku kliniku tissuġġerixxi li l-ġene assoċjat ma 'T2DM huwa assoċjat ma' żieda fil-BMI, iperkolesterolemija, u HDL-C imnaqqas, li jagħtu riskju ogħla ta 'NAFLD [14]. NAFLD hija relatata mill-qrib mar-reżistenza għall-insulina u d-dislipidemija u għalhekk hija prevalenti ħafna f'pazjenti b'T2DM u/jew obeżità. Għalkemm bosta fatturi metaboliċi jidhru li huma relatati mal-iżvilupp tan-NAFLD, il-patoġenesi tagħha għadha fil-biċċa l-kbira mhux ċara u kumplessa [15]. Cistanche deserticola hija pjanta parassitika perenni li tikber fuq l-għeruq tal-pjanti li jiffissaw ir-ramel. Skont il-Farmakopea Ċiniża, Cistanche deserticola tintuża bħala mediċina tradizzjonali biex tikkura mard tal-kliewi u infertilità [16,17]. F'dawn l-aħħar snin, studji kkonfermaw li Cistanche deserticola jista 'jinibixxi b'mod sinifikanti ż-żieda tal-livelli ta' glukożju fid-demm sawm u postprandjali fil-ġrieden dijabetiċi, itejjeb ir-reżistenza għall-insulina u d-dislipidemija, u jgħin fit-telf tal-piż [18]. Bħala l-komponent ewlieni ta 'Cistanche deserticola, ECH huwa mistenni li jikkontribwixxi aktar għat-titjib tal-ħsara fil-fwied assoċjata mad-DM. Ir-riżultati sperimentali tagħna wrew li l-obeżità u d-dijabete jistgħu jikkawżaw ħsara fil-fwied fil-ġrieden, ikkaratterizzati minn żidiet sinifikanti fil-livelli ta 'ALT u AST fis-serum u bidliet istopatoloġiċi tipiċi. L-ECH naqqas b'mod sinifikanti l-LI u l-glukożju fid-demm, naqas il-livelli ta 'TC, TG, u LDL żiedu l-livelli ta' HDL u tejbet is-sensittività għall-insulina. Eżami istopatoloġiku żvela deġenerazzjoni mnaqqsa ta 'steatosis tal-epatoċiti u infiltrazzjoni taċ-ċelluli infjammatorji fil-ġrieden ittrattati bl-ECH, li jikkonferma li l-aġent jista' jtejjeb il-ħsara fil-fwied f'ġrieden obeżi u dijabetiċi.

AMPK hija proteina kinase konservata ħafna distribwita b'mod wiesa 'f'organiżmi u tissejjaħ riċettur tal-metaboliżmu tal-enerġija. Għandu rwol biex itaffi l-istress ossidattiv, l-infjammazzjoni, il-proliferazzjoni u l-apoptożi [19]. L-attivazzjoni tal-enzima minn attivaturi indiretti tiġbed l-attenzjoni xjentifika biex tikkura d-dijabete, l-obeżità, il-kanċer, u disturbi metaboliċi oħra relatati [20,21]. Jista 'jirregola l-metaboliżmu tal-lipidi permezz ta' diversi approċċi, bħall-inibizzjoni tas-sintesi tal-aċidu xaħmi u t-trigliċeridi, l-inibizzjoni tas-sintesi tal-kolesterol, u l-promozzjoni tal-ossidazzjoni u d-dekompożizzjoni tal-aċidu xaħmi [22]. Fil-fwied, AMPK jirregola l-metaboliżmu tal-lipidi permezz ta 'fosforilazzjoni.

Meta l-proporzjon intraċellulari AMP-to-ATP jiżdied, l-AMPK jiġi attivat, iżid il-p-AMPK/AMPK u r-regolazzjoni 'l fuq tal-espressjoni ta' SIRT1 billi żżid il-livelli ċellulari NAD plus [23,24]. SIRT1, deacetylase dipendenti fuq NAD, reċentement intwera li huwa relatat mal-patofiżjoloġija NAFLD [25]. L-enzima hija involuta f'diversi proċessi fiżjoloġiċi ċellulari, bħall-omeostażi tal-lipidi u l-glukożju u s-sensittività għall-insulina, u hija regolatur ewlieni tal-metaboliżmu [26]. Pazjenti obeżi, speċjalment dawk b'reżistenza għall-insulina, dijabete, u NAFLD, għandhom livelli aktar baxxi ta 'SIRT1 [27,28]. Price et al. eżaminaw ir-rwol ta 'SIRT1 fil-prevenzjoni ta' steatosis epatika u sabu li l-espressjoni ta 'SIRT1 hija mnaqqsa f'pazjenti b'NAFLD [29]. Studji oħra wrew li knockout speċifiku għall-epatoċiti ta 'SIRT1 jista' jnaqqas l-ossidazzjoni tal-aċidu xaħmi u jinduċi steatosis u infjammazzjoni fil-fwied, filwaqt li l-espressjoni żejda ta 'SIRT1 tista' ttejjeb il-metaboliżmu tal-lipidi permezz tal-passaġġ PGC-1 [30]. SIRT1 jirregola l-attività tal-PGC-1, u t-tnejn li huma huma kruċjali biex tinżamm l-omeostasi tal-enerġija ċellulari. Għalhekk, SIRT1 u l-fatturi downstream PGC-1 jistgħu jkunu l-mira ewlenija ta' ħsara fil-fwied. Il-koattivatur tal-PGC huwa proteina li tista' tingħaqad ma' fatturi ta' traskrizzjoni jew riċetturi nukleari biex iżżid l-attività tat-traskrizzjoni [31]. Ħafna mill-fatturi ta 'traskrizzjoni jeħtieġu koattivaturi, speċjalment PPAR-, prinċipalment f'tessuti ossidizzati bħall-fwied, il-mijokardju u l-muskolu skeletriku. Jista 'jattiva t-traskrizzjoni tal-ġeni li tippromwovi t-trasport u l-ossidazzjoni tal-aċidu xaħmi, il-produzzjoni tal-ketoni u l-glukoneġenesi [32,33]. CPT1A hija enzima ewlenija li tillimita r-rata fl-ossidazzjoni tal-aċidu xaħmi. L-espressjoni tagħha hija rregolata minn mekkaniżmi ta 'traskrizzjoni kumplessi, li jinvolvu diversi fatturi ta' traskrizzjoni u koattivaturi, inklużi SIRT1, PGC-1, u PPAR [34]. F'dan l-istudju, sibna li taħt il-konċentrazzjoni għolja ta 'glukożju fid-demm fil-grupp db/db, l-akkumulazzjoni tal-lipidi fl-epatoċiti żdiedet bir-regolazzjoni 'l isfel ta' fatturi downstream tal-espressjoni tal-mogħdija tas-sinjalar AMPK/SIRT1; fil-grupp ittrattat bl-ECH, l-espressjonijiet p AMPK/AMPK, SIRT1 u PGC-1 żdiedu b'mod sinifikanti, u l-espressjonijiet tal-fatturi downstream PPAR u CPT1A żdiedu b'mod sinifikanti, li jindika li l-assi tas-sinjal AMPK/SIRT1 u l-fatturi downstream tiegħu għandhom rwol ta 'benefiċċju fit-trattament tal-korriment tal-fwied dijabetiku (Fig. 6). Madankollu, id-dejta pprovduta hawn kienet ibbażata fuq esperimenti in vivo; għalhekk, huma meħtieġa studji in-vitro addizzjonali biex jikkonfermaw l-impatt tal-ECH fuq il-mogħdijiet tas-sinjalar AMPK/SIRT1 u l-proteini effetturi.

B'mod ġenerali, ECH jista 'jirregola l-glukożju fid-demm u l-metaboliżmu tal-lipidi billi jirregola l-espressjoni ta' AMPK/SIRT1 u l-fatturi downstream tiegħu, u b'hekk itejjeb il-ħsara fil-fwied dijabetiku.

ECH cistanchejistajirregola l-glukożju fid-demmumetaboliżmu tal-lipidi.

Għal aktar informazzjoni, jekk jogħġbok ikklikkja hawn.