Differenzi fil-Kompożizzjoni U L-Effikaċja Mediċinali ta' Prodotti Nejjin U Inbid Prodotti Pproċessati bil-Fwar Minn Cistanches Herba

Astratt:

GħanBiex tqabbel il-bidliet fil-kompożizzjoni kimika u l-effikaċja mediċinali ta 'Roucongrong (Cistanches Herba) qabel u wara l-ipproċessar, sabiex jiġi ċċarat il-prinċipju ta' stewing bl-inbid.

Metodi LC-MS ġiet applikata biex tidentifika t-tipi ta 'kompożizzjoni kimika qabel u wara koncoction ta' Cistanches Herba, flimkien ma 'analiżi statistika multivarjata biex issib il-komponenti disparityin qabel u wara stewing bl-inbid. Id-differenza fl-effikaċja ġiet ippruvata mill-mudell tal-firien ta 'defiċjenza idroġenata ta' cortisonekidney yang.

RiżultatiB'kollox ġew identifikati 45 komponent kimiku minnCistanches Herba kampjuni; Il-komposti kkontribwew għad-differenzi bejnCistanches Herba u Cistanches Herba stewed bl-inbidhumaechinacoside, verbascoside, isoacteosideand tubuloside B; L-estratt totali ta ' phenylethanoid glycosides minn Cistanches Herba għandu effett aħjar fuq it-titjib tal-far modelwith kidney yang defiċjenza minn inbid stewed Cistanches Herba. Konklużjoni Il-kompożizzjoni ta 'Cistanche tinbidel wara li tkun stewed bl-inbid, u l-effett fuq id-defiċjenza ta' yang tal-kliewi ġie mtejjeb. L-ingredjenti tat-trasformazzjoni minn Cistanches Herbato inbid stewed Cistanches Herba jistgħu jkunu ingredjenti attivi li jsaħħu l-kliewi u jappoġġaw yang.

Kliem ewlieni: Cistanches Herba; inbid stewed Cistanches Herba;defiċjenza ta 'yang tal-kliewi;echinacoside;verbascoside; isoacteoside;tubuloside B

ĦXARA GĦALL-BEJGĦ TA' CISTANCHE TA' KWALITÀ GĦOLJA

Servizz ta' Appoġġ Ta Wecistanche

Email:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Huwa magħruf bħala "ġinseng" u huwa distribwit prinċipalment fil-Mongolja ta 'ġewwa, Ningxia (Azuqi), Gansu (Changma), Xinjiang u reġjuni oħra [1]. Cistanche huwa sħun fin-natura, ħelu u mielaħ fit-togħma, u jidħol fil-meridjani tal-kliewi u tal-musrana l-kbira. Għandu l-effetti li jsostni l-fwied u l-kliewi, jibbenefika l-essenza u d-demm, u xarrab l-imsaren u jtaffi l-istitikezza. Jista 'jintuża għal defiċjenza ta' yang tal-kliewi, impotenza u infertilità, uġigħ fil-qadd u l-irkopptejn, dgħjufija tal-muskoli u l-għadam, imsaren niexfa u stitikezza [2]. Ir-riċerka moderna turi li z-zkuk imlaħħam bil-weraq tal-iskala ta 'Cistanche fihom prinċipalment varjetà ta' komponenti kimiċi bħal phenylethanol glycosides, cyclopentane ether terpenes u l-glycosides tagħhom, lignans, zokkor, eċċ. [3], u għandhom effetti farmakoloġiċi multipli bħalma humakontra t-tixjiħ,antiossidant,kontra d-dimenzja,kontra l-għeja, u xarrab l-imsaren u ttaffi l-istitikezza [4].

Wara li jkun stewed bl-inbid, l-effett ta 'tonifikazzjoni tal-kliewi u yang li jsaħħaħ ta' Cistanche huwa msaħħaħ. Il-prinċipju tal-ipproċessar ma ġiex spjegat b'mod ċar. Fan Yanan et al. [5-7] studja l-effetti ta 'Cistanche fuq id-defekazzjoni tal-firien, il-funzjoni immuni, newrotrasmettituri enteriċi u espressjonijiet tal-ġeni relatati qabel u wara l-ipproċessar. Da et al. uża l-influwenza tal-phenylethanol glycosides qabel u wara l-ipproċessar biex jispjega l-prinċipju tal-ipproċessar tiegħu; Zhang Chao et al. [8] uża l-bidliet fil-kontenut tal-phenylethanol glycosides qabel u wara l-ipproċessar biex jispjega l-prinċipju tal-ipproċessar; Zhang Shuyun et al. [9] użaw il-bidliet fil-kontenut tal-betaine qabel u wara l-ipproċessar biex jispjegaw l-effett tal-ipproċessar fuq Cistanche. Il-letteratura eżistenti dwar l-ipproċessar ta 'Cistanche tiffoka prinċipalment fuq il-farmakoloġija, u r-riċerka dwar il-komponenti tiffoka wkoll fuq il-bidliet fil-kontenut ta' komponenti speċifiċi, nieqsa minn studju sistematiku tad-differenzi tal-komponenti. Dan l-esperiment uża teknoloġija tal-kromatografija likwida-spettrometrija tal-massa (LC-MS) flimkien ma 'analiżi statistika multivarjata biex jidentifika l-komponenti kimiċi f'Cistanche, biex isibu l-markaturi tad-differenza bejn Cistanche nejjin u prodotti stewed bl-inbid, u biex tistudja d-differenza fl-effikaċja ta' Cistanche nej u prodotti stewed bl-inbid permezz ta 'mudell ta' far ta 'defiċjenza ta' yang tal-kliewi indotta minn idrokortiżon, sabiex tispjega l-bażi materjali ta 'Cistanche fit-tonifikazzjoni tal-kliewi u l-promozzjoni tal-yangu l-prinċipju ta ' l-ipproċessar ta ' l-inbid stewed Cistanche.

ĦXARA GĦALL-BEJGĦ TA' CISTANCHE TA' KWALITÀ GĦOLJA

1 Materjali

1.1 Strumenti

Ultimate 3000 UPLC-LTQ Orbitrap XL kamp elettrostatiku tandem nassa tal-jone b'riżoluzzjoni għolja spettrometru tal-massa (Thermo Fisher Scientific, USA), Theraio Xcaliber workstation; BT125D 1/100000 bilanċ elettroniku (Sartorius Instrument System, il-Ġermanja); KQ500DE CNC cleaner ultrasoniku (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); XHF-D disperser b'veloċità għolja (Guangzhou Hu Ruiming Instrument Co., Ltd.); Multiskan FC microplate reader (Thermo Xjentifiku); Ċentrifuga ta' veloċità għolja HC-3518 (Anhui Zhongke Zhongjia Scientific Instrument Co., Ltd.); BW-YLS-1B reġistratur tal-attività volontarja tal-firien multifunzjonali (Shanghai Ruanlong Technology Development Co., Ltd.).

1.2 Drogi

Metanol ta' grad ta' spettrometrija tal-massa (Fisher); aċidu formiku ta 'grad ta' spettrometrija tal-massa (frazzjoni tal-massa 99%, Sigma Aldrich); ilma (ilma distillat Watsons); Pilloli Jinkui Shenqi (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd Pharmaceutical Factory, numru tal-lott 1701653); melħ tas-sodju tas-succinat tal-idrokortisone (Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., numru tal-lott 011705067); kit superoxide dismutase (SOD) (numru tal-lott 20170115) u kit malondialdehyde (MDA) (numru tal-lott 20170117) inxtraw minn Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; testosterone (T) u estradiol (E2) ġew determinati fiċ-Ċentru ta 'Spezzjoni tal-Kwalità ta' Qingdao Kechuang, u l-krejatinina (CREA) u n-nitroġenu ta 'l-urea fid-demm (BUN) ġew determinati fiċ-Ċentru ta' Analiżi u Ittestjar ta 'Inner Mongolia Medical University.

1.3 Annimali

100 firien SD maskili, li jiżnu 180-200 g, inxtraw minn Xinglong Experimental Animal Farm fid-Distrett ta 'Haidian, Beijing, numru tal-liċenzja: SCXK (Beijing) 2016-0003. Dan l-esperiment fuq l-annimali ġie approvat mill-Kumitat tal-Etika tal-Università tal-Mediċina Ċiniża ta' Beijing, numru tal-etika: BUCM-4-2022091301-3095.

1.4 Kampjuni

Sitt lottijiet ta 'Cistanche deserticola ġew identifikati bħala awtentiċi mill-Professur Li Xiangri tal-Iskola tal-Mediċina Ċiniża, l-Università ta' Beijing tal-Mediċina Ċiniża, u ġew derivati ​​minn zkuk imnixxfin imlaħħam bi weraq fuq skala ta 'Cistanche deserticola YC Ma, pjanta tal-familja Orobanchaceae. Informazzjoni dettaljata dwar il-kampjuni tidher fit-Tabella 1.

Tabella 1 Folja ta' informazzjoni ta' kampjuni ta' Cistanches Herba

2 Metodi

2.1 Preparazzjoni tal-kampjun

2.1.1 Preparazzjoni ta 'prodotti mhux ipproċessati Ħu Cistanche deserticola nadif, irattaha, aqta' f'biċċiet ħoxnin, u nixxef.

2.1.2 Preparazzjoni ta' prodotti stewed bl-inbid

Ħu 100 g ta 'flieli Cistanche deserticola, żid 30 mL inbid tar-ross, ħawwad sew, u stew sakemm l-inbid jiġi assorbit. Stewha fl-ilma għal 12-il siegħa, oħroġha u ħalliha tiksaħ ftit, u nixxef. Ara l-Figura 1 għal kampjuni ta' Cistanche deserticola nejjin u ta' Cistanche deserticola stewed bl-inbid.

2.2 Studju dwar id-differenza ta' komponenti ta' Cistanche deserticola qabel u wara l-istuffar fl-inbid

2.2.1 Preparazzjoni tas-soluzzjoni

Ħu madwar {{0}}.2 g ta' trab tal-kampjun niexef (mgħoddi minn għarbiel 65-malji), iżen b'mod preċiż, poġġi f'kunjett volumetriku kannella ta' 50 mL, żid 25 mL ta' 50% metanol soluzzjoni milwiema, issiġilla sewwa, iżen il-massa, xarrab għal 30 minuta, ittratta ultrasonikament għal 40 minuta (qawwa 250 W, frekwenza 35 kHz), kessaħ, iżen mill-ġdid, żid 50% soluzzjoni akwea tal-metanol biex tpatti għall-massa mitlufa, ħawwad sew, ħalli joqgħod, iffiltra s-supernatant minn membrana tal-filtru mikroporuża ta '0.22 μm, u poġġi l-filtrat fi flixkun tal-fażi likwida kannella biex tikseb is-soluzzjoni.

ĦXARA GĦALL-BEJGĦ TA' CISTANCHE TA' KWALITÀ GĦOLJA

2.2.2 Kundizzjonijiet kromatografiċi

Ilmijiet ACQUITY UPLCTM BEH C18 kolonna kromatografika (100 mm × 2.1 mm, 1.7 μm), temperatura tal-kolonna ta '35 grad; temperatura tal-kamra tal-kampjun ta '10 gradi, volum ta' injezzjoni tal-kampjun ta '3 μL, metanol (A)-0.1% soluzzjoni milwiema ta' aċidu formiku (B) bħala fażi mobbli, eluzzjoni tal-gradjent: 0-4 min, 10%{ {13}}% metanol; 4-18 min, 26%-40% metanol; 18-24 min, 40%-100% metanol; 24-28 min, 100% metanol. Ir-rata tal-fluss tal-volum kienet 0.3 mL/min, u l-wavelength ta 'skoperta kien 330 nm.

2.2.3 Kundizzjonijiet tal-ispettrometrija tal-massa

Intuża sors ta 'jonizzazzjoni elettrospray (ESI), skanjar tal-modalità tal-jone negattiv, temperatura kapillari kienet 350 grad, rata tal-fluss tal-volum tal-gass tal-għant kienet 30 arb, rata tal-fluss tal-volum tal-gass awżiljarju kienet 10 arb, vultaġġ tal-isprej kien 3

KV, il-vultaġġ kapillari kien -35 V, il-vultaġġ tal-lenti tat-tubu kien -110 V, il-firxa tal-iskannjar kienet m/z 100-1 000, is-sistema tal-ġbir tad-dejta kienet Xcalibur 2.1.

2.2.4 Analiżi tal-komponenti prinċipali (PCA)

Wara li tinkiseb il-matriċi bidimensjonali ta 'pari ta' data ta 'ħin ta' żamma tal-massa preċiża, il-pannell tal-istrumenti se juri l-informazzjoni kollha dwar il-ħin ta 'żamma preċiża awtomatikament importata, u l-metodu PCA tal-modulu tal-istatistika estiża se jintuża għall-analiżi.

2.2.5 Analiżi diskriminanti tal-inqas kwadri parzjali ortogonali (OPLS-DA) LCMS tgħaqqad is-separazzjoni għolja tal-kromatografija likwida mas-sensittività għolja tal-ispettrometrija tal-massa. Id-dejta miġbura hija pjuttost kbira, u analiżi statistika multivarjata hija meħtieġa biex tipproċessa d-dejta. OPLS-DA jaqsam id-dejta f'żewġ gruppi u juża mudell statistiku sorveljat biex jikseb numru kbir ta 'spettri ortogonalizzati, li juru b'mod ċar id-differenzi bejn iż-żewġ gruppi ta' kampjuni. Fil-format tal-figura addizzjonali S-Plot, kull punt jirrappreżenta par tad-dejta tal-ħin taż-żamma tal-massa preċiż, l-assi X jirrappreżenta l-varjabbli, iktar ma l-punt tad-dejta jkun 'il bogħod mill-punt żero, iktar ikun kbir il-kontribut tal-punt għad-differenza tal-kampjun ; l-assi Y jirrappreżenta l-korrelazzjoni bejn il-kampjuni fl-istess grupp ta 'kampjuni, aktar ma l-par tad-dejta tal-massa preċiża u l-ħin taż-żamma tkun 'il bogħod mill-punt żero, iktar tkun b'saħħitha l-korrelazzjoni. Għalhekk, il-pari tad-dejta tal-ħin taż-żamma preċiżi tal-massa fiż-żewġt itruf tal-kurva f'forma ta 'S jirrappreżentaw l-aktar joni karatteristiċi affidabbli minn kull grupp ta' kampjun.

ĦXARA GĦALL-BEJGĦ TA' CISTANCHE TA' KWALITÀ GĦOLJA

2.2.6 Analiżi tal-istruttura tal-ispettrometrija tal-massa

Wara li nkisbu l-joni karatteristiċi, il-kompożizzjoni tal-element u t-tqabbil tal-kompost saru billi kkalkolat il-massa molekulari relattiva preċiża u tgħaqqad id-database eżistenti u l-letteratura rilevanti biex jiġu identifikati l-komponenti differenzjali.

2.3 Studju dwar id-differenza fl-effikaċja qabel u wara l-istuffar bl-inbid

2.3.1 Preparazzjoni tal-estratt ta' Cistanche deserticola

Cistanche deserticola (numru tal-lott 160901) u t-trab ta 'Cistanche deserticola stewed inbid korrispondenti ġew estratti skond il-kundizzjonijiet taħt "2.2.1", iffiltrat wara trattament ultrasoniku, ripetut darbtejn, il-filtrat ġie kkombinat, ikkonċentrat permezz ta' distillazzjoni fil-vakwu, u ffriżar- imnixxef.

2.3.2 Raggruppament ta' esperimenti fuq l-annimali u amministrazzjoni tad-droga

Fig. 1 Cistanches Herba A u Cistanches Herba B stewed bl-inbid

(1) Raggruppament: Il-firien ingħataw aċċess liberu għall-ilma u d-dieta. Wara ġimgħa 1 ta 'tmigħ adattiv, kienu maqsuma b'mod każwali f'5 gruppi (Tabella 2), b'10 firien f'kull grupp, jiġifieri grupp normali, grupp mudell, grupp ta' Cistanche deserticola (PR) nej, grupp ta 'Cistanche deserticola (PW) stewed bl-inbid. , u kontroll pożittiv Jinkui Shenqi Pill group (JK). (2) Immudellar: Ħlief għall-grupp normali, l-erba 'gruppi l-oħra kollha ġew injettati b'injezzjoni ta' hydrocortisone sodium succinate im, b'doża ta '20 mg/kg, għal 14-il jum konsekuttiv. Il-grupp normali ġie injettat bl-istess doża ta 'salina normali. Il-kundizzjoni ġenerali tal-firien f'kull grupp ġiet osservata biex tiddetermina jekk wrewx sintomi bħal biża 'ta' kesħa, preferenza għas-sħana, riġlejn kesħin, awrina ċara u twila, dahar imdawwar u arched, xagħar matt u messy, u dipressjoni mentali. Fl-istess ħin, tkejlu l-piż tal-ġisem, in-numru ta 'attivitajiet spontanji, it-teħid tal-ikel, it-teħid tal-ilma, l-output tal-awrina u indikaturi oħra tal-firien f'kull grupp.

(3) Amministrazzjoni: Id-dożaġġ tal-firien ġie kkalkulat abbażi tad-dożaġġ kliniku ta 'Pilloli Jinkui Shenqi u Cistanche deserticola. Id-dożaġġ ta 'kull grupp ta' Cistanche deserticola kien 1.80 g/kg f'termini ta 'ammont ta' mediċina mhux ipproċessata. Id-dożaġġ speċifiku huwa muri fit-Tabella 2. Kull estratt ta 'Cistanche deserticola u Jinkui Shenqi Pills ġew ippreparati f'soluzzjonijiet ta' ċerta konċentrazzjoni b'ilma dejonizzat. Is-soluzzjoni ngħatat intragastrikament kuljum b'volum intragastriku ta' 10 mL/kg għal 30 jum konsekuttiv. Il-grupp normali u l-grupp mudell ġew amministrati intragastrikament b'volum ugwali ta 'ilma dejonizzat kuljum. Il-piż tal-ġisem kien imkejjel kull ġimgħa, u l-volum intragastriku ġie aġġustat skond il-piż tal-ġisem tal-firien. Wara l-amministrazzjoni, il-firien sawmu għal 12-il siegħa. Wara l-anestesija tal-pentobarbital, inġabar demm mill-aorta addominali għall-iskoperta tal-indiċi tas-serum. Il-kliewi, it-testikoli, l-epididimi, il-vesikuli seminali u l-prostata tneħħew għall-iskoperta tal-indiċi rilevanti.