Applikazzjonijiet Kliniċi Kurrenti Ta 'In Vivo Gene Therapy B'AAVs Parti 5

Konsiderazzjonijiet Sistemiċi dwar is-Sigurtà tal-AAV

Kien hemm tħassib minimu ta' sigurtà għal żmien qasir mill-amministrazzjoni sistemika ta' AAV fil-medda ta' 120-darbiet ta' dożi tal-vector (5 1012 sa 6 1013 mg/kg) użati fi provi dwar l-emofilja (Tabelli 1 u 2).

L-amministrazzjoni tal-AAV (adeno-associated virus) hija teknoloġija li bħalissa tintuża ħafna fil-qasam tat-terapija tal-ġeni. F'dawn l-aħħar snin, aktar u aktar studji kkonfermaw li l-amministrazzjoni tal-AAV tista 'wkoll ittejjeb il-memorja sa ċertu punt.

L-essenza tal-amministrazzjoni tal-AAV hija li tintroduċi ġeni b'effetti terapewtiċi jew ta 'titjib fiċ-ċelloli umani biex jinkiseb it-trattament ta' ċertu marda jew sintomu. Fl-istudju tal-memorja, ix-xjentisti se jesploraw l-introduzzjoni ta 'ġeni relatati mal-memorja fil-imħuħ tal-ġrieden u jsibu li dawn il-ġrieden jistgħu juru memorja aħjar.

Speċifikament, l-effett tat-titjib tal-memorja miġjub mill-amministrazzjoni tal-AAV huwa rifless prinċipalment f'żewġ aspetti. L-ewwel, xi ġeni jistgħu jsaħħu l-konnessjoni bejn in-newroni, u b'hekk isaħħu l-iskambju ta 'informazzjoni bejn in-newroni, u jagħmlu l-formazzjoni tal-memorja aktar stabbli u affidabbli. It-tieni, xi ġeni jistgħu jippromwovu l-proliferazzjoni u d-divrenzjar taċ-ċelloli staminali newrali, u b'hekk jiffurmaw aktar newroni ġodda fil-moħħ, u jagħmlu r-riżerva tal-memorja tal-moħħ aktar sinjuri.

Fil-qosor, ir-relazzjoni bejn l-amministrazzjoni tal-AAV u l-memorja hija pożittiva. Għalkemm it-teknoloġija tat-terapija tal-ġeni għadha ma ġietx użata ħafna, ir-riċerka xjentifika relatata wriet il-potenzjal kbir tagħha u l-prospetti ta 'żvilupp għalina. Fil-futur, bl-avvanz kontinwu tat-teknoloġija u l-approfondiment tar-riċerka, nemmnu li din it-teknoloġija se tagħti kontribut aktar pożittiv għas-saħħa u l-benessri tal-bniedem. Wieħed jista 'jara li għandna bżonn intejbu l-memorja, u Cistanche jista' jtejjeb b'mod sinifikanti l-memorja minħabba li għandu effetti antiossidanti, anti-infjammatorji u kontra t-tixjiħ, li jistgħu jgħinu jnaqqsu l-ossidazzjoni u r-reazzjonijiet infjammatorji fil-moħħ, u b'hekk jipproteġu s-saħħa tal- sistema nervuża. Barra minn hekk, Cistanche jista 'wkoll jippromwovi t-tkabbir u t-tiswija taċ-ċelloli tan-nervituri, u b'hekk itejjeb il-konnettività u l-funzjoni tan-netwerks newrali. Dawn l-effetti jistgħu jgħinu biex itejbu l-memorja, il-ħila tat-tagħlim, u l-veloċità tal-ħsieb, u jistgħu wkoll jipprevjenu l-okkorrenza ta 'disfunzjoni konjittiva u mard newrodeġenerattiv.

Ikklikkja Kun af biex ittejjeb il-memorja għal żmien qasir

Madwar 5 individwi fi 3 provi esperjenzaw reazzjonijiet ta' infużjoni ta' vettur awtolimitati f'dożi ta' 2 10126 1013 mg/kg, ikkaratterizzati minn deni, mijalġija, u/jew pressjoni baxxa, li jidhru konsistenti ma' rispons immuni innat.

141,150,152 Ħjiel ta’ tossiċitajiet li jillimitaw id-doża ta’ infużjoni sistemika ta’ AAV huma sostnuti minn provi kliniċi ta’ osservazzjonijiet innonemofilija li jinkludu: approvazzjoni ta’ Zolgensma (1 1014 mg/kg) bi twissija ta’ sigurtà f’kaxxa ta’ epatotossiċità wara l-infużjoni, attivazzjoni suspettata ta’ provi f’DMD (5 10133 1014 mg/kg) b'ċitopenji u tossiċità tal-kliewi li jirriżultaw, u 3 imwiet fil-koorti ta' 3 1014-vg/kg ta' prova XLMTM fl-ambjent tal-progressjoni tal-marda tal-fwied u biljari pre-eżistenti,46 ġimgħa wara l-infużjoni tal-vettur.

13,176,177 Analiżi komposta ta’ dawn l-osservazzjonijiet għadha għaddejja u rilevanti għax-xogħol AAV sistemiku kollu u tinkludi differenzi potenzjali inerenti bejn serotipi AAV li jikkonċernaw risponsi immuni. Minħabba li s-serotipi AAV kollha jittrasduċu l-epatoċiti, il-kunsiderazzjonijiet ta’ sigurtà fit-tul iffokaw prinċipalment fuq ir-riskju ta’ inserzjoni ta’ mutaġeni, riskju ta’ inserzjoni ta’ epatotossiċità. li jirriżulta f'karċinoma epatoċellulari (HCC).

Billi d-dejta preklinika li hija predominantement mhux integrazzjoni, tissuġġerixxi avvenimenti ta’ integrazzjoni tal-AAV li jseħħu b’mod dipendenti mid-doża bi preferenza għall-integrazzjoni f’siti ta’ traskrizzjoni attiva, promoturi speċifiċi għat-tessuti huma protettivi kontra l-onkoġenesi. doża tal-vettur b'promotur speċifiku għall-epatoċiti biex jitnaqqas ir-riskju ta' ġenotossiċità.

Hemophilia is a provocative model to study AAV-related HCC genotoxicity because 90% of severe hemophilia patients >35 sena kkuntrattaw virus jatroġeniku tal-epatite Ċ (HCV), fattur ta' riskju stabbilit għall-iżvilupp tal-HCC.

181–185 Id-dejta ta' segwitu ta' 15-sena ppubblikata reċentement ta' 4 suġġetti HB ma appoġġjat l-ebda evidenza ta' epatotossiċità jew tossiċitajiet oħra fit-tul; madankollu, il-konklużjonijiet kienu limitati min-nuqqas ta' persistenza kkonfermata ta' transġene f'epatoċiti trasdotti.186

FVIII/FIX Transgene Sigurtà: Trombożi u Allo-inibitoryAntibody Formazzjoni Riskju

Il-provi kliniċi HA kollha jużaw transġene FVIII (BDD-FVIII) imħassar mid-dominju B, li jżomm il-funzjoni prokoagulanti sħiħa filwaqt li jissodisfa r-restrizzjonijiet tal-ippakkjar AAV (4.7 kb) u jtejjeb l-espressjoni.

187–189 Kważi l-provi kollha tal-HA jużaw linker standard ta’ katina tqila u ħafifa tad-dominju FVIII B, FVIII-SQ.190 Prova waħda qed tuża BDD-FVIII alternattiva, FVIII-V3, fejn ġew miżjuda 6 siti addizzjonali ta’ glycosylation N-linked ma’ il-linker SQ biex itejbu l-espressjoni.154,191HB provi universalment adattati l-FIX-Padova (FIX-R338L) transġene, li joffri 8-darbiet aktar attività speċifika relattiva għal wildtype FIX.

192,193 Minħabba l-inċidenzi magħrufa ta 'antikorpi allo-inibitorji, "inibituri," formazzjoni f'HA severa (30%) u HB (5%) u l-użu ta' transġeni varjanti FVIII-SQ u FIX-R338L jqajmu t-tħassib teoretiku ta 'rispons immuni għall- proteina derivata minn transġene.

194,195 Konsistenti ma '2 deċennji ta' esperjenza b'rFVIII-SQERT, li juru l-ebda riskju ta 'inibitur miżjud, l-ebda suġġett ta' terapija tal-ġeni HA ma żviluppaw inibitur. jiffunzjonaw varjanti FVIII (reveduti f'Samelson-Jones u Arruda199)u jistgħu bl-istess mod ikunu sikuri b'benefiċċju terapewtiku mtejjeb.

Madankollu, il-kriterji ta' reġistrazzjoni tal-prova jeħtieġu espożizzjoni sinifikanti għal proteini FVIII/FIX minn qabel u jeskludu pazjenti bi storja ta' inibituri. Bħala tali, id-dejta disponibbli dwar it-terapija tal-ġeni tirrifletti l-pazjenti li huma l-inqas probabbli li jiżviluppaw inibitur. Madankollu, ir-riskju baxx ta 'formazzjoni ta' inibitur wara terapija tal-ġeni huwa appoġġjat aktar minn dejta tal-ġrieden u tal-klieb li turi l-kapaċità tat-trasferiment tal-ġeni dirett lejn l-epatoċiti biex jinduċi tolleranza FVIII, FIX, jew FIX-R338L.200-203

Dawn is-suċċessi prekliniċi jappoġġaw investigazzjoni futura tat-trasferiment tal-ġeni għall-induzzjoni tat-tolleranza, li hija partikolarment rilevanti għal pazjenti HA b'inibituri204 u disturbi oħra (eż., il-marda Pompe; riveduta f'Doerfler et al.205).

Rigward ir-riskju protrombotiku, id-dejta bijokimika disponibbli tissuġġerixxi FIX-R338L huwa attivat u inattivat b'mod analogu għal wild-typeFIX u mhux inerentiment protrombotiku.193

Barra minn hekk, data tal-ġrieden wriet avvenimenti trombotiċi f'FIX-R338L u FIX tat-tip selvaġġ korrelatati ma' FIX supraterapewtiku: C u ma kinux speċifiċi għal FIX-R338L.201

Studji epidemjoloġiċi ddeskrivew li FIX suprafiżjoloġiku: C huwa trombożi tal-vini ta' fattur ta' riskju modest u indipendenti (odds ratio [OR] 1.84.0) relattiv għal FVIII suprafiżjoloġiku (OR8.821.3).206–208 Provi multipli FIX-R338L. miksub FIX: C fil-medda ta 'emofilja normali jew ħafifa mingħajr tħassib dwar is-sigurtà.

Dejta reċenti, prova waħda FIX-R338L irrapporta trombożi f'suġġett li kiseb FIX: C > 200% tan-normal (b'assaġġ f'stadju wieħed [OSA]) b'komorbiditajiet protrombotiċi li potenzjalment jikkontribwixxu multipli, inklużi, obeżità, insuffiċjenza tal-kliewi, u waqfien riċenti ta' antikoagulant orali dirett145 (stat protrombotiku ta' rebound suspettat209).

Madankollu, din l-osservazzjoni, flimkien ma 'dejta epidemjoloġika magħrufa dwar l-attività tal-fattur u t-trombożi, tenfasizza l-importanza li tinżamm l-espressjoni f'tieqa terapewtika, b'mod partikolari fl-istabbiliment ta' komorbiditajiet protrombotiċi.

Mistoqsijiet dwar l-Effikaċja ta' Terapija tal-Ġene HA u HB

Epidemiological data may guide target therapeutic FVIII/FIX expression. Potentially targeting FVIII/FIX: C, >10%–150% tat-trasferiment normali ta’ wara l-ġene huwa sostnut kemm minn riskji protrombotiċi imsemmija hawn fuq assoċjati ma’ FVIII/FIX suprafiżjoloġiċi: C206–208 u dejta tal-istorja naturali HA disponibbli li turi li FVIII: C ta’R12% tan-normal (mill-OSA) huwa adegwat biex jipprevjeni fsada spontanja tal-ġogi.210

Importanti, iż-żewġ prodotti transġene, FVIII-SQ u FIX-R338L, juru kejl tal-attività varjabbli f'OSAversus chromogenic assay (CSA) determinanti tal-attività tal-fatturi li huma riproduċibbli matul il-provi. jissuġġerixxi li d-diskrepanzi tat-test huma relatati mal-bijokimika FIX-R338L.192,201,211,212

Il-fehim ta' liema assaġġ jipprevedi l-aħjar in vivo funzjoni emostatika ta' FVIII/FIX-R338Li derivat mill-epatoċiti huwa rilevanti biex jiggwida l-ġestjoni klinika minħabba li FVIII sostnut: C/FIX: C, skont l-assaġġ użat, jaqsam il-limiti kliniċi ta' emofilja ħafifa/moderata,152,155 normali FVIII:C/FIX: C (Harringtonet al., 2020, WFH Virtual Summit, konferenza),145,146 u supraterapewtiku FVIII:C/FIX: C (Harrington et al., 2020, WFH Virtual Summit, konferenza).145

Id-dejta preliminari tal-antiġen FVIII tikkorrelata ma' FVIII determinat mill-CSA: C,153 filwaqt li d-dejta fenotipika preliminari li tappoġġja FVIII: C determinata mill-OSA tikkorrelata mal-funzjoni in vivo tal-FVIII derivat mill-epatoċiti,152 tissuġġerixxi li l-FVIII derivat mill-epatoċiti jista' jiġi kkonvertit aktar faċilment mill-cofactors tiegħu.

Kejl preċiż tal-funzjoni emostatika transġene huwa meħtieġ biex tiddeskrivi firxa tollerata ta 'espressjoni terapewtika FVIII/FIX. Konsistenti ma' rapporti f'mudell ta 'ġrieden kimeriku ta' epatoċiti umani li juru differenza sa 7-darbiet fit-trasduzzjoni bejn ġrieden, 213 HA multipli u HB provi wrew varjabilità R10-darbiet f'FVIII:C/FIX:C bl-istess vettur u doża (Harrington et al., 2020, WFH Virtual Summit, konferenza).145,149,150,153

Parti minn din il-varjabbiltà tista' tiġi spjegata, parzjalment, minn rispons immuni ċellulari ipotetizzat għal peptidi tal-kapsid ippreżentati minn epatoċiti trasdotti li jistgħu jirriżultaw f'espressjoni mnaqqsa jew telf ta' transġeni, u b'hekk tillimita l-effikaċja.214

Barra minn hekk, il-motifi CpG tal-vettur jistgħu potenzjalment ikunu stimulanti immuni u jikkontribwixxu għal rispons tal-kapsid;215 tabilħaqq, l-arrikkiment tal-cassette CpG ġie implikat fit-telf tal-espressjoni transġene minkejja l-intervent ta 'sterojdi fi provi 3 HB.140,143,216.

B'mod aktar wiesa', il-passi multipli mill-infużjoni tal-vettur għall-espressjoni transġene (revedut f'Li u Samulski217) b'potenzjal ta' akkumpanjament għall-varjabbiltà x'aktarx ifisser li jkun meħtieġ li tittollera firxa ta 'espressjoni transġene terapewtika, għalkemm nisperaw inqas minn 10-darbiet.

Fl-aħħar nett, filwaqt li mhix definita, id-durabilità tal-espressjoni transġene fi provi kliniċi HA/HB tista 'tinforma ġeneterapiji oħra diretti mill-epatoċiti AAV. Dejta klinika mill-ewwel prova AAV sistemika b'suċċess, imwettqa f'HB, 163,164 osservazzjonijiet mera f'HA tal-klieb u HBdata wara t-trasferiment tal-ġeni medjat mill-AAV, li turi espressjoni durabbli 8 snin wara t-trasferiment tal-ġeni.139,164,218,219

B'kuntrast, l-ewwel prova ta' suċċess tat-terapija tal-ġeni HA irrapporta tnaqqis fl-espressjoni fis-snin 14 wara l-vettur,151 b'tali mod li ppublikat 3-sena FVIII: C naqas b'35%-80% tal-valuri tas-sena 1 f'6 minn 7 suġġetti fis-6 {{ 10}}vg/kgcohort, id-doża liċenzjata antiċipata.

Riċentement, prova HA oħra wriet espressjoni FVIII stabbli u dejjiema għal 23.3 snin f'5 suġġetti (5 10111 1012 vg/kg koorti), li tappoġġja l-potenzjal għal espressjoni FVIII derivata mill-epatoċiti stabbli u durabbli.152

Ġew ġġenerati diversi ipoteżijiet biex potenzjalment jispjegaw it-tnaqqis fl-espressjoni FVIII osservat fl-ewwel prova HA150 li jinkludu: rispons tal-proteina mhux mitwija FVIII (UPR) irrapportat f'sistemi ta' espressjoni eterologu b'dejta kuntrastanti f'mudelli ta' ġrieden HA wara t-trasferiment tal-ġeni FVIII medjat mill-AAV220-222 jew Proprjetajiet speċifiċi għall-vettur (eż., pjattaforma tal-manifattura, daqs tal-cassette, doża, kapsid, eċċ.).

Notevolment, fl-ewwel prova HA b'suċċess, is-suġġett uniku b'espressjoni sostnuta fit-3 sena kellu FVIII: C 100% tan-normal, filwaqt li FVIII: C fost is-suġġetti li tilfu l-espressjoni bdew jew qasmu fil-medda HA ħafifa u moderata, 150,151 valuri li kienu stabbli u durabbli fi prova oħra.152 Għalkemm preliminaryand mhux definittiva, din id-dejta tissuġġerixxi li t-tnaqqis osservat ta 'FVIII: C jew espressjoni stabbli ma jkunx dipendenti fuq l-espressjoni FVIII, li jagħmel FVIII UPR ħati predominanti improbabbli għal telf ta' espressjoni. Is-suċċess fit-terapija tal-ġeni HA huwa reċenti, u l-osservazzjoni kontinwa se tinforma l-aspettattivi tad-durabilità ta 'FVIII.

Id-durabilità tal-espressjoni hija partikolarment rilevanti meta jitqies li s-suġġetti kollha jiżviluppaw b'mod universali AAV NAbs b'titer għoli wara infużjoni sistemika ta' vettur AAV, li x'aktarx tipprekludi amministrazzjoni ripetuta tal-istess serotip AAV.

Billi l-maġġoranza tad-dejta li tappoġġja l-NAb ta’ titer għoli tipprekludi l-effikaċja sistemika tal-AAV, sponsor irrapporta espressjoni ta’ transġene li tista’ tinkixef wara AAV5vector sistemiku f’NHPs jew bnedmin li huma pożittivi għall-AAV5 NAb.148,223

Żewġ provi li għaddejjin, li jistgħu jipprovdu għarfien addizzjonali, jirreġistraw suġġetti pożittivi għal Nab (ClinicalTrials.gov: NCT03520712 uNCT03569891). Madankollu, il-lonġevità tal-immunità umorali tal-AAV hija sostnuta minn segwitu ta' 15-sena tal-ewwel prova AAV sistemika, li turi AAVNAbs persistenti, multi-serotipi, trans-reattivi għas-serotip tal-vettur infuż u l-oħrajn kollha ttestjati.186

Din id-dejta hija konsistenti ma’ osservazzjonijiet fil-bnedmin wara espożizzjoni ambjentali AAV u infużjoni sistemika ta’ vettur AAV f’mudelli ta’ annimali li wrew NAbs persistenti, multi-serotip, cross-reactive.224–228

B'mod kollettiv, id-dejta disponibbli tissuġġerixxi li bil-metodi attwali, infużjoni ta 'vettur AAV ta' darba fil-ħajja hija kemm l-għan tat-terapija kif ukoll obbligatorja minħabba l-formazzjoni ta 'NAb.

Fil-qosor, tliet deċennji ta 'investigazzjoni rfinaw il-ġeneterapija AAV għall-emofilja biex jiksbu suċċess ripetut ta' prova tal-kunċett u ddeskrivew mistoqsijiet pendenti meħtieġa biex tmexxi t-terapija tal-ġeni 'l quddiem.

Attività eċċezzjonali fit-terapija tal-ġeni tal-emofilja tagħti ottimiżmu konsiderevoli li tweġibiet se jiġu identifikati għall-isforzi progress eqreb lejn l-għan aħħari li tinkiseb b'mod sikur u affidabbli espressjoni terapewtika FVIII/FIX dejjiema u stabbli kapaċi ttejjeb il-fenotip tal-emofilja.

LSDs: Ħarsa ġenerali dwar it-terapija tal-ġeni klinika

LSDs huma grupp ta 'disturbi metaboliċi li jintirtu li huma kkaratterizzati mill-akkumulazzjoni ta' makromolekuli ġewwa liżosomi. Kollettivament, LSDs huma disturbi relattivament komuni (1:5,000 sa 1:5,500), għalkemm individwalment rari.229–231

L-LSDs jaffettwaw sistemi ta' organi multipli iżda għandhom sistema waħda li tippredomina, bħal kardjomijopatija ipertrofika f'pazjenti bil-marda ta' Pompe infantili, defiċits tas-CNS fi tfal b'CNL2, jew epatosplenomegalija fi tfal bil-marda ta' Gaucher tat-tip I.230.

Minħabba l-eteroġeneità klinika tagħhom, is-sejba ta' trattamenti effettivi kienet sfida bl-unika terapija approvata, ERT, li ħolqot kumplikazzjonijiet sekondarji minn sopravivenza miżjuda.232

Hekk kif il-prevalenza ta’ dawn id-disturbi tiżdied bil-miġja ta’ screening tat-twelid, interventi terapewtiċi ġodda, bħas-sostituzzjoni tal-ġeni, se jsiru kritiċi biex jindirizzaw il-manifestazzjonijiet kollha ta’ LSDs.230,233,234.

F'din it-taqsima, niddiskutu l-progress li sar fl-iżvilupp ta 'terapiji ta' sostituzzjoni tal-ġeni għal xi wħud mill-LSDs l-aktar komuni: marda ta 'Pompe, marda ta' Gaucher, marda ta 'Fabry, marda ta' mucopolysaccharidoses (MPS), u neuronal ceroid lipofuscinoses (NCLs) (Tabella 1) .

For more information:1950477648nn@gmail.com